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Procedimento Operacional Padro PROTENA C REATIVA (PCR)

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PCR-PP
FUNDAMENTO O teste baseia-se na aglutinao das partculas de ltex sensibilizadas com anticorpos anti- PCR humana (antgeno), quando misturadas com soro de pacientes contendo uma concentrao de Protena C Reativa (PCR) igual ou superior a 6mg/L. APLICAO CLNICA A Protena C-Reativa (PCR) uma protena de fase aguda, cujos nveis sricos aumentam acentuadamente logo aps ocorrer uma agresso ao organismo. De uma maneira geral, empregada como marcador de processos infecciosos ou inflamatrios. Valores bastante altos so encontrados nos diversos processos infecciosos e inflamatrios, na artrite reumatide, poliartrite, vasculite sistmica, polimialgia reumtica, infarto do miocrdio, intervenes cirrgicas e nos processos neoplsicos. AMOSTRA Preparo do Paciente Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas. Amostras utilizadas Soro. Estabilidade e armazenamento da amostra No soro, o analito estvel por 7 dias entre 2-8C. Volume ideal utilizado para anlise (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise). Volume mnimo utilizado para anlise (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise). Critrios para rejeio da amostra No usar amostra hemolisada ou lipmica. Fazer referncia ao manual ou POP de coleta, separao e distribuio de material. REAGENTE UTILIZADO PCR PP CAT. 456 PCR PP CAT. 456K MS 80022230111 MS 80022230126

GOLD ANALISA DIAGNSTICA LTDA CNPJ 03.142.794/0001-16 Av. Nossa Senhora de Ftima, 2363 Belo Horizonte MG Brasil Farmacutico Responsvel: Homero Jackson de Jesus Lopes CRF MG - 2010 Componentes do kit Conservar entre 2-8C. 1- Ltex PCR- Contm suspenso de partculas de ltex sensibilizadas com anticorpos anti-PCR humana e azida sdica 14,6 mmol/L. No congelar. P- Controle Positivo - Soro humano contendo mais de 6 mg/L de PCR. N- Controle Negativo - Soro animal contendo menos de 6mg/L de PCR. MATERIAIS AUXILIARES Placa de reao e palitos (PCR PP Cat. 456). Estabilidade Os reagentes so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo e na caixa quando conservados na temperatura recomendada, bem vedados e se evite a contaminao durante o uso. Precaues e Cuidados Especiais 1- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostra biolgica. 2- Recomendamos o uso das Boas Prticas de Laboratrios Clnicos para a execuo do teste. 3- De acordo com as instrues de biossegurana todas as amostras devem ser manuseadas como materiais potencialmente infectantes.

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4- O Ltex PCR contm azida sdica como conservante. Evitar contato com os olhos, pele e mucosa. No aspirar ou ingerir. Embora, o reagente contenha azida sdica todo cuidado deve ser tomado para evitar contaminao bacteriana. 5- Todos os reagentes derivados de sangue humano foram testados para anticorpos anti-HCV, antiHIV e antgeno HbsAg e apresentaram resultados negativos. No entanto, devem ser tratados com precauo como potencialmente infectantes. Manusear e descartar segundo as normas de biossegurana. 6- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues normativas locais, estaduais e federais de preservao do meio ambiente. EQUIPAMENTOS Procedimento Tcnico Manual NaCl 0,9 g%; Agitador mecnico rotatrio de velocidade regulvel a 100 rpm; Controles positivo e negativo e materiais auxiliares (ver nota a seguir); Tubos e pipetas; Cronmetro. Nota O produto Cat. 456K contm somente o reagente Ltex PCR . Os controles positivo e negativo e os materiais auxiliares fazem parte somente da apresentao do produto PCR PP Cat. 456. Para utilizao dos controles, adquirir o produto completo PCR- PP- Cat. 456. Interferncias A lipemia (triglicrides at 500 mg/dL), a hemlise ( hemoglobina at 500 mg/dL) e a bilirrubina at 15mg/dL no interferem. Os fatores reumatides acima de 25 UI/mL e alguns medicamentos e substncias podem interferir. PROCEDIMENTO Mtodo Qualitativo NOTAS 1- A sensibilidade do ensaio diminui em temperaturas baixas. Recomenda-se trabalhar acima de 10C. 2- Atrasos nas leituras podem ocasionar uma super valorizao da taxa de Protena C Reativa (PCR) 3- A intensidade da aglutinao no indicativa da concentrao de PCR nas amostras analisadas. 4- Reaes falso-negativas podem ocorrer quando a concentrao de PCR no soro estiver muito elevada (Efeito Prozona). Nesses casos, recomenda-se repetir o teste usando um volume de amostra de 10 L. 5- importante ensaiar os Controles P e N em cada srie de amostras testes para melhor interpretao da leitura dos ensaios e distino de uma possvel granulosidade do reativo da verdadeira aglutinao da reao. 6- A placa de reao dever ser lavada logo aps o uso com bastante gua deionizada. Se isto no for feito imediatamente, usar na lavagem gua com detergente neutro e enxaguar varias vezes com gua deionizada. Secar a placa de reao antes de usar novamente. Resduos de detergentes podem provocar resultados falsamente positivos. Tcnica de Anlise 1 60 testes 1- Antes da realizao do teste, deixar os reagentes e amostras atingirem a temperatura ambiente. 2- Em uma rea da placa de reao, pipetar 50 L de soro a ser analisada. 3- Em outras reas, colocar uma gota dos controles P e N. 4- Homogeneizar o ltex PCR (antgeno) com suavidade antes do ensaio. Adicionar em cada rea, uma gota de Ltex PCR prxima aos soros. 5- Misturar com ajuda de um palito descartvel, procurando estender a mistura por toda superfcie interior da rea. Empregar palitos distintos para cada amostra. 6- Agitar a placa a 100 r.p.m durante 2 minutos ou inclina-lo para frente e para trs, com movimentos oscilatrios em planos diferentes, por 2 minutos. Imediatamente aps, verificar a presena ou no de aglutinao macroscpica, comparando o resultado da amostra com os padres obtidos com os controles.

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Tcnica de Anlise 2 120 testes 1- Antes da realizao do teste, deixar os reagentes e amostras atingirem a temperatura ambiente. 2- Em uma rea da placa de reao, pipetar 25 L de soro a ser analisada. 3- Em outras reas, pipetar 25 L dos controles P e N. 4- Homogeneizar o ltex PCR (antgeno) com suavidade antes do ensaio. Pipetar em cada rea, 25 L de Ltex PCR prximo aos soros. 5- Misturar com ajuda de um palito descartvel, procurando estender a mistura por toda superfcie interior da rea. Empregar palitos distintos para cada amostra. 6- Agitar a placa a 100 r.p.m durante 2 minutos ou inclina-lo para frente e para trs, com movimentos oscilatrios em planos diferentes, por 2 minutos. Imediatamente aps, verificar a presena ou no de aglutinao macroscpica, comparando o resultado da amostra com os padres obtidos com os controles. LEITURA DA REAO Examinar macroscopicamente a presena ou ausncia de aglutinao logo aps os 2 minutos (Nota 2). RESULTADOS Negativo Ausncia de aglutinao indicando um teor de PCR inferior a 6 mg/dL. A suspenso homognea semelhante ao padro obtido com o Controle Negativo. Positivo Presena de aglutinao indicando um teor de PCR igual ou superior a 6mg/dL. Visualiza-se uma aglutinao macroscpica que varia desde a mg/dL. Visualiza-se uma aglutinao macroscpica que varia desde a formao de grumos finos at grumos grosseiros (Nota 3 e 4). Ateno: Todo teste positivo dever ser titulado utilizando o Mtodo Semi-Quantitativo. MTODO SEMI-QUANTITATIVO Tcnica de Anlise 1 Tcnica 1- Tomar 6 tubos 12 x 75 e colocar 0,2 mL de NaCI 0,9 g% em cada tubo. Adicionar ao primeiro tubo, 0,2 mL da amostra, que apresentou teste qualitativo positivo. Misturar, transferir 0,2 mL do 1 para o 2 tubo, misturar, transferir 0,2 mL do 2 tubo para o 3 tubo e assim sucessivamente at o 6 tubo. As diluies obtidas so 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32 e 1/64, respectivamente. 2- Nas reas da placa, colocar 50 L de cada diluio da amostra, previamente preparada como em 1. 3- Homogeneizar o Ltex-PCR (Antgeno) com suavidade antes do ensaio. Adicionar a cada crculo contendo as diluies da amostra, uma gota do Ltex-PCR. 4- Misturar com ajuda de um palito descartvel, procurando estender a mistura por toda a superfcie interior do crculo. Empregar palitos distintos para cada diluio. 5- Agitar a placa a 100 rpm durante 2 minutos (Nota 2) ou inclinar a lmina para frente e para trs, com movimentos oscilatrios em planos diferentes, por 2 minutos e imediatamente verificar a presena ou no de aglutinao macroscpica. 6- Se a aglutinao estiver presente at 1/64, continuar as diluies a partir do 6 tubo e prosseguir com o teste. Tcnica de Anlise 2 1- Diluir os soros de acordo com o item 1 da Tcnica de Anlise 1. 2- Nas reas da placa, pipetar 25 L de cada diluio da amostra. 3- Homogeneizar o ltex PCR (Antgeno) com suavidade antes do ensaio. Adicionar a cada rea contendo as diluies da amostra, 25 L do ltex PCR. 4- Misturar com ajuda de um palito descartvel, procurando estender a mistura por toda a superfcie interior da rea. Empregar palitos distintos para cada diluio. 5- Agitar a placa a 100 r.p.m durante 2 minutos ou inclina-lo para frente e para trs, com movimentos oscilatrios em planos diferentes, por 2 minutos. Imediatamente aps, verificar a presena ou no de aglutinao macroscpica. 6- Se a aglutinao estiver presente at 1/64, continuar as diluies a partir do 6 tubo e prosseguir com o teste. LEITURA DA REAO

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Examinar macroscopicamente a presena ou ausncia de aglutinao logo aps os 2 minutos. Ser considerado como ttulo da reao, a maior diluio que apresentou resultado positivo. RESULTADOS Multiplicar a taxa de sensibilidade do teste (6 mg/L) pelo ttulo da maior diluio que apresentou resultado positivo. SENSIBILIDADE O sistema PCR-PP apresenta uma sensibilidade de 6 mg/L. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Teste Negativo Expressar o resultado como menor 6 mg/L. Teste Positivo Expressar o resultado em mg/L. mg/L = sensibilidade x recproca do ttulo encontrado no Mtodo Semi-Quantitativo. CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e nmero de catlogo. Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados. Controle Interno Descrever a calibrao peridica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits. Citar a utilizao de soros controles (nvel normal cdigo --------- e patolgico cdigo -------) nas anlises realizadas juntamente com a freqncia da utilizao dos mesmos. Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e reagentes. Citar POP para controle interno. Controle Externo Descrever os procedimentos utilizados nas avaliaes de qualidade feitas por programas de comparao entre laboratrios ou outros controles de qualidade : PNCQ-SBAC e/ou PELM-SBPC Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo Definir como os dados de controle so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. VALORES DE REFERNCIA PCR menor que 6mg/L. SIGNIFICADO CLNICO A Protena C-Reativa (PCR) uma protena de fase aguda, cujos nveis aumentam desde 0,07 mg/L at 150 mg/L dentro dos cinco primeiros dias de um processo inflamatrio. Por outro lado sua vida mdia suficientemente curta, permitindo que os nveis caiam rapidamente quando o processo inflamatrio diminui. As protenas da fase aguda so especialmente valiosas na determinao da atividade da enfermidade assim como no prosseguimento da resposta frente ao tratamento. Assim, os nveis elevados de PCR tm valor diagnstico para a confirmao e prosseguimento dos processos reumticos como artrite reumatide, poliartrite, vasculite sistmica, polimialgia reumtica. Alm disso, possvel realizar um diagnstico diferencial nos processos com sintomas similares, porm que originam respostas bastante diferentes sob o ponto de vista das protenas da fase aguda. Por exemplo, os nveis de PCR na doena de Crohn so significativamente menores que no processo de colite ulcerosa, para uma mesma intensidade inflamatria. Isso tambm ocorre quando se comparam os nveis de PCR de pacientes com lpus eritematoso sistmico com os de pacientes com artrite reumatide. Outros processos em que se obtm uma ativao das protenas da fase aguda so todos aqueles em que ocorre dano tissular ou infeco. Isto especialmente til no acompanhamento ps-operatrio do paciente, j que permite avaliar tanto a recuperao do mesmo, como detectar de forma prematura uma possvel infeco. LIMITAES DO MTODO

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Os resultados devero ser usados em conjunto com informaes disponveis da avaliao clnica e outros procedimentos diagnsticos. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1- Amos R S et al. Br Med J 1977; 1: 195-197. 2- Kidmark C O. Scand J Clin Lab Invest 1972; 29: 407-411. 3- Pepys M B et al. Lancet 1981; 1: 653-660. 4- Pepys M B et al. Adv Immunol 1983; 34: 141-149. 5- Singer J M et a. Am J Med 1956; 888-892. 6- Tillet W S et al. J Exp Med 1930; 52: 561-570. 7- PCR-PP, Instrues de Uso, Gold Analisa Diagnstica.

Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razo: Nmero Cpias

Assinatura

Data ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___

Destino
Reviso 02/11 Liberado Fernanda