Vous êtes sur la page 1sur 13

Esterilizacin > Generalidades

Esterilizacin: eliminacin o muerte de todos los microorganismos que contiene un objeto o sustancia, y que encuentran acondicionados de tal forma que no pueden contaminarse nuevamente.

Sanitizante: agente que disminuye la carga microbiana total a un nivel el cual es seguro para la salud de la po Slo es aplicable sobre objetos inanimados.

Desinfectante: agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas tales como habitacione Antisptico: agente que controla y reduce la presencia de microorganismos potencialmente patgenos sobre mucosas (slo pueden aplicarse externamente sobre seres vivos).

Agentes antibacterianos esterilizantes y/o desinfectantes


1. Provocan prdida de la viabilidad en los microorganismos

Fsicos (calor, radiaciones) Qumicos (xido de etileno, formaldehdo, agentes oxidantes, soluciones antispticas.)

2.

Provocan una separacin de los microorganismos de la sustancia lquida

Filtracin (se eliminan los microorganismos presentes en un fluido).

Esterilizacin > Agentes fsicos


Calor

Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidativos irrever los microorganismos. La efectividad del calor como mtodo de esterilizacin depende de:

Temperatura Tiempo de exposicin

Calor Hmedo

El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben principalme

dos razones:

El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas (DNA, RNA, protenas, etc) son producidas por reacciones que eliminan agua. Por lo tanto, reacciones inversas podran daar a la clula a caus produccin de productos txicos. Adems, las estructuras secundarias y terciarias de las protenas se estabiliza mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y rotos por el agua a al temperaturas.

El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Por lo que, los materiales hmedos conducen el calor mucho ms rpidamente que los materiales secos debido a la energa lib durante la condensacin.

El autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y solucio no formen emulsiones con el agua y que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 C. Una tempe de 121 C (una atmsfera de sobrepresin) con un tiempo de exposicin mayor a 15 minutos sirve para des organismos formadores de esporas.

Presin [atm]

Temperatura [C] Descarga completa del aire 109 115 121 126 130 133 Descarga de 2/3 del aire 100 109 115 121 126 130 Descarga de 1/2 del aire 90 100 109 115 121 126 Sin descarga del aire 72 90 100 109 115 121

1/3 2/3 1 4/3 5/3 2

Influencia de la descarga incompleta de aire en la temperatura del autoclave

Ventajas

Rpido calentamiento y penetracin Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo No deja residuos txicos Hay un bajo deterioro del material expuesto Econmico

Desventajas

No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos

Calor Seco

El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fusin de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a microorganismos que estn en contacto con stos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente pene lentamente que el vapor de agua en materiales porosos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lp requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es baja. Esto se d que las protenas se estabilizan mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que son ms difcil romper por el calor seco.

La estufa de esterilizacin es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco. Se re mayor temperatura y tiempo de exposicin que el autoclave. La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, m que a 160C se requieren al menos 2 horas de exposicin. Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodn no pueden ser esterilizados a ms de 160C. Ventajas

No es corrosivo para metales e instrumentos. Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.

Desventajas

Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.

Existen otras formas de eliminar microorganismos por calor seco. La incineracin se utiliza para destruir m descartable contaminado. La accin directa de la llama elimina a los microorganismos cuando se lleva al material de metal como ansas, lancetas, agujas de diseccin.

Radiaciones Su accin depende de:



Tipo de radiacin Tiempo de exposicin Dosis

Ionizantes

Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipd componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos.

Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como je descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos.

No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los componen

Ultravioletas

Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos debido a que forman dmeros de pirimidinas ady que inducen errores en la duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las clulas. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.

Esterilizacin > Agentes qumicos

Dentro de los compuestos qumicos podemos encontrar agentes esterilizantes, desinfectantes y antispticos La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actan.

Concentracin: vara con el tipo de agente y de microorganismo, pues una misma concentracin del agente p producir un efecto diferente en distintos microorganismos. Tiempo: los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma forma, por lo que no todos los microorganismos mueren al mismo tiempo.

pH: afecta tanto a los microorganismos como a los agentes qumicos. El aumento de pH por encima de 7 increm carga negativa de los microorganismos afectando la concentracin del agente sobre la clula. El pH determina de disociacin y la efectividad del agente qumico, pues a menor disociacin mayor permeabilidad y mayor efec

Alcoholes Iodo Antispticos Agentes catinicos, aninicos y anfteros Organo Mercuriales Colorantes Cloro y Compuestos clorados Aldehdos Desinfectantes y/o Esterilizantes Oxido de Etileno Compuestos Fenlicos Acidos y Alcalis

Antispticos
Alcoholes Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan protenas celulares. Desorganizan estructura fosfolipdica.

No destruyen esporas y tienen una accin germicida lenta. Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto n mayor que los de cadena larga. Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los ms utilizados son el etanol e isoproplico.

Iodo Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de protenas y cidos nucleicos. Inactiva protenas enzimas por oxidacin de los grupos -SH a S-S, pudiendo atacar tambin grupos amino, indoles, etc.

Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo: yodo molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcoh aunque es irritante. Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600 ppm de iodo libre.

Agentes inicos y anfteros

Son sustancias que lesionan la membrana celular debido a que desordenan la disposicin de las protenas y fosfolpidos, por lo que se liberan metabolitos desde la clula, se interfiere con el metabolismo energtico y transporte activo.

No son esporicidas ni tubercolicidas an en altas concentraciones. Sus principales ventajas se hallan en que inodoros, no tien, no son corrosivos de metales, estables, no txicos y baratos.

Catinicos: Sales de amonio cuaternarias. Tienen mayor actividad a pH alcalino y los Gram + son ms suscep Aninicos: Jabones y cidos grasos. Tienen mayor actividad a pH cido y son eficaces contra Gram +. Anfteros: Actan como catinicos o aninicos segn el pH.

Organo Mercuriales

Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las protenas, inactivando enzimas. Dentro d mercuriales orgnicos se encuentran el metafen y el mertiolate.

Perxido de Hidrgeno Es un antisptico dbil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres.

Actualmente, el perxido de hidrgeno gaseoso se est utilizando como desinfectante de superficies o descontaminante de gabinetes biolgicos debido a que no posee las propiedades txicas y cancerigenas del etileno y formaldehdo.

Colorantes

Interfieren en la sntesis de cidos nucleicos y protenas (acridina) o interfieren en la sntesis de la pared ce (derivados del trifenilmetano). La acridina se inserta entre dos bases sucesivas del DNA separndolas fsic Esto provoca errores en la duplicacin del DNA. Los derivados del trifenilmetano (violeta de genciana, ver malaquita y verde brillante) bloquean la conversin del cido UDP-acetilmurmico en UDP-acetilmuramil

R = HSO4- Verde Brillante R = Cl- Verde de Malaquita

Violeta de Genciana

Desinfectantes y/o Esterilizantes


Cloro

El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actan sobre protenas y cidos nucleicos microorganismos. Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, indoles y al hidroxifenol de la tirosina.

El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio (agua lavandina), que es activo todas las bacterias, incluyendo esporas, y adems es efectivo en un amplio rango de temperaturas.

La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al cido hipocloroso (HClO) y al Cl2 que se forma el hipoclorito es diluido en agua. La actividad germicida del ion hipocloroso es muy reducida debido a que carga no puede penetrar fcilmente en la clula a travs de la membrana citoplamtica. En cambio, el cido hipocloroso es neutro y penetra fcilmente en la clula, mientras que el Cl2 ingresa como gas.

El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones concentradas (50-100 g/l de Cloro activo), a pH alcal envases oscuros que favorecen su estabilidad, pero es inactivo como desinfectante. A causa de sto, es que utilizarse soluciones diluidas en agua corriente (que tiene un pH ligeramente cido), con el objeto de obten hipocloroso. Generalmente, se utilizan soluciones con una concentracin del 0.1-0.5% de Cloro activo.

Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica, pues puede haber en el medio sustancias ca reaccionar con los compuestos clorados que disminuyan la concentracin efectiva de stos.

Aldehdos

Son agentes alquilantes que actan sobre protenas, lo que provoca modificacin irreversible de enzimas e inhibicin de la actividad enzimtica (Adicin nucleoflica de grupos -NH2 y -SH). Se utilizan como desin y esterilizantes. Destruyen esporas.

El glutaraldehdo es el nico esterilizante efectivo en fro. El formaldehdo como gas se utiliza para descon edificios, ambientes, etc. El formaldehdo gaseoso se obtiene por calentamiento del paraformaldehdo (OH (CH2O)n-H), lo que produce las despolimerizacin de este compuesto y la liberacin de formaldehdo. El formaldehdo tiene la desventaja de ser muy irritante y perder actividad en ambientes refrigerados.

Compuestos Fenlicos

Son desinfectantes que provocan lesiones en la membrana citoplasmtica porque desordenan la disposicin protenas y fosfolpidos. Esto causa filtracin de compuestos celulares, inactivacin de enzimas y lisis. El fenol no es usado a menudo como desinfectante por su olor desagradable, por ser muy irritante y por el que queda luego de tratar las superficies.

Los derivados del fenol ms utilizados son el hexaclorofeno (compuesto difenlico) y los cresoles (alquil fe Estos son muy efectivos a bajas concentraciones contra formas vegetativas de bacterias. No son efectivos c esporas.

Oxido de Etileno

Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carbox amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc.

Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Sirve para esterilizar m termosensibles como el descartable y plstico, equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, etc. Es m peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems cancerigeno.

Esterilizacin > Filtracin

Se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro depender del uso va a someter la muestra. Hay que tener en cuenta que los filtros que se utilizan generalmente en los laborat retienen virus ni micoplasmas, estos ltimos estn en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que utilice. Existen tres tipos bsicos de filtros:

Filtros profundos o Filtros de profundidad: consisten de un material fibroso o granular prensado, pleg activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la retencin de las partculas se pr una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la matriz.

Membranas filtrantes: tienen una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en la matriz del filtro debido a efe electrostticos.

Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): son pelculas muy delgadas de policarbonato que son p por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy regulares qu atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un mayor al del poro.

La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para esterilizar aceites, al tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, med cultivos celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas.

Esterilizacin > Controles en esterilizacin

Controles de Esterilizacin

Controles fisico-qumicos Controles biolgicos Transferencia a medios de cultivo

Monitorean el proceso de esterili

Controles de Esterilidad

Test de promocin del crecimiento Test de bacteriostsis Filtracin por membranas

Monitorean el material esteriliz

Controles de Esterilizacin

Son controles que se realizan sobre el mtodo de esterilizacin. Monitorean o controlan si el proceso de est

funciona correctamente.

Controles Biolgicos Utiliza indicadores biolgicos como controles del proceso de esterilizacin. Estos indicadores son preparac estandarizadas de microorganismos relativamente resistentes al mtodo de esterilizacin que se emplea. Lo indicadores se procesan en forma conjunta con el material a esterilizar y el nmero de microorganismos pr el indicador es mayor que el que se encuentra en el material.

Una vez concluido el proceso de esterilizacin los indicadores son inoculados en medios de cultivo adecua incubados durante un determinado perodo de tiempo. Si el proceso de esterilizacin fue correctamente em funciona bien no debe observarse desarrollo del indicador incubado.

Controles fisicoqumicos

Termocuplas: son mtodos directos que registran la temperatura a la que se desarrolla la esterilizacin. Sustancias de punto de fusin conocido: se utilizan en autoclaves generalmente, son sustancias con un pu similar al de la temperatura de esterilizacin del proceso. Estas sustancias estn mezcladas con un colorante y indican si se alcanz la temperatura ptima de esterilizacin y el tiempo que se mantuvo.

Controles de Esterilidad

Permite controlar en forma probabilstica si el material qued completamente esterilizado pues se testea un representativo de todo el material.

Transferencia Directa a Medios de Cultivo Se transfiere una parte de la muestra a medios de cultivos apropiados que permitan el crecimiento de cualq contaminante.

Tioglicolato para anaerobios y aerobios (37C) Tripticasa-Soja para aerobios (25C)

Las muestras representativas se incuban en estos medios durante un perodo de 14 das, al cabo del cual no observar ningn tipo de crecimiento.

Puede ocurrir que la muestra no se encuentre estril pero que no se produzca crecimiento durante la incuba algn motivo inherente al medio o a la muestra, por ejemplo presencia de algn inhibidor, etc.

Test de Promocin del Crecimiento Es un testigo del control de esterilidad. Son testigos que se utilizan para los medios de crecimiento del cont estos medios tienen capacidad de promover el crecimiento. Para estos testigos se utilizan microorganismos exigencias nutricionales. Los medios deben ser inoculados con un bajo nmero de microorganismos, se inc durante 7 das, al cabo de los que se debe observar un abundante crecimiento.

Test de Bacteriostasis Es un control que se realiza para determinar si la muestra supuestamente estril no posee propiedades bacte De esta forma se previenen falsos negativos pues no se produce crecimiento habiendo en la muestra microo viables. Para este test se toman los medios de cultivo con microorganismos de ensayo y se siembran en las

testear. Se incuban durante 7 das. Si se produce crecimiento esto indica que el material no contena inhibid

Filtracin por Membranas Se utiliza para determinar la esterilidad de medios de cultivo, soluciones de antibiticos, etc.

Se filtran los medios y se procesa el filtro como en un control de esterilidad para determinar si hay microor presentes.

Esterilizacin > Concepto estadstico

Cuando una poblacin bacteriana es sometida a un proceso de esterilizacin que le provoca la prdida de la viabilidad, se observa una disminucin progresiva en el nmero de microorganismos sobrevivientes en fun tiempo de exposicin al agente esterilizante. La muerte microbiana sigue un comportamiento de tipo expon por lo que se hace asinttico y nunca se llega a un nmero de microorganismos igual a cero. N = N0 . e - Kt

Donde N es el nmero de microorganismos viables, N0 es el nmero de microorganismos viables iniciales, tasa de muerte (min-1) y t es el tiempo de exposicin al agente. El coeficiente k es funcin de las condicio esterilizacin (temperatura, tenor de humedad, concentracin del agente qumico) y de la resistencia del microorganismo al proceso de esterilizacin. Si esta ecuacin se transforma a base 10 resulta: N = N0 . 10 - t / D

En donde D (min) se denomina Tiempo de reduccin decimal, esto es el tiempo requerido para reducir la poblacin microbiana un 90% o un orden de magnitud. El valor de D se deduce cuando t=D y por lo tanto N0. Comparando las ecuaciones anteriores se llega a que: D = ln 10 / K = 2.303 / K

Esto significa que D est inversamente relacionado con k. Entonces, menores valores de D significan una m tasa de muerte o una muerte ms rpida.

Graficando el logartmo del nmero de microorganismos sobrevivientes en funcin del tiempo de exposici determinado agente esterilizante se obtiene una recta. La pendiente est dada por -1/D y la ordenada al orig log N0. Por lo explicado anteriormente, la pendiente de la recta est determinada por las condiciones de esterilizacin y de la resistencia del microorganismo.

Cuando el log del nmero de sobrevivientes es menor a cero se habla de probabilidad de sobrevivenci lo tanto cuando el valor de la probabilidad sea -1 significa que hay 0.1 microorganismos viables por unidad correctamente expresado una unidad contaminada por cada 10 unidades idnticas procesadas.

Un producto se considera estril cuando la probabilidad de encontrar unidades contaminadas es meno a 10-6, esto es una unidad contaminada cada milln de unidades idnticas procesadas.

A mayor nmero de microorganismos y/o resistencia de la poblacin se necesitar mayor tiempo de esteril o lo que es lo mismo mayor tiempo para alcanzar la probabilidad de sobrevivencia.

Durante el proceso de esterilizacin por calor debe tenerse en cuenta que el tiempo de esterilizacin comie cuando se ha alcanzado la temperatura ptima en el interior del aparato (autoclave o estufa) y que generalm contenido de un autoclave puede requerir tiempos ms largos para alcanzar la temperatura de esterilizacin

BIBLIOGRAFA

http://www.microbiologia.com.ar/