UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGA

LABORATORIO DE BIOLOGA MOLECULAR DE LA CLULA II Grupo 5173 Profesora: Patricia Cano Snchez

Reporte de prctica 5: FERMENTACIN DE LA GLUCOSA POR LA LEVADURA DE PANIFICACIN

Equipo # 2: Garca Hernndez Vctor Fragoso Huerta Csar Prez Miranda Javier Torres Trejo Alberto Zepeda Ruiz Gabriela

Introduccin. Las clulas obtienen energa a travs de la oxidacin de la glucosa. Existen dos vas diferentes para la oxidacin de la glucosa: fermentacin y cadena respiratoria, ambos procesos inician con la gluclisis, donde una molcula de glucosa se convierte en dos molculas de piruvato. La fermentacin ocurre en ausencia de oxigeno y existen dos tipos de fermentacin que se caracterizan por los productos finales del proceso, la fermentacin alcohlica produce etanol y la fermentacin lctica produce cido lctico, ambas a partir de acetaldehdo y ambas liberan CO2. (Alberts, 2002).

Saccharomyces cerevisiae es un hongo unicelular aerobio facultativo que es ligeramente ms complejo que las bacterias y comparte con ellas
muchas de sus ventajas metablicas. Es utilizado por la ciencia como modelo eucarionte debido a su rpido crecimiento y dado que ha sido ampliamente estudiado, se conoce bastante sobre este microrganismo; es capaz de reproducirse asexualmente por gemacin y sexualmente por conjugacin de clulas. Tambin tiene un papel muy importante en la industria alimenticia ya que se utiliza en la fabricacin de pan y bebidas alcohlicas como el vino y la cerveza, entre muchas otras utilidades. En la prctica se estudiar el proceso de fermentacin de etanol llevado a cabo por la levadura de panificacin Saccharomyces cerevisiae, la cual realiza la fermentacin de glucosa a etanol en condiciones anaerobias, produciendo C Hiptesis. Si el proceso de fermentacin de Saccharomyces cerevisiae, tiene como producto final el C y el etanol (en la de tipo alcohlica), entonces es posible cuantificar el C por medio de su capturacin e identificar la presencia de etanol si se le hace reaccionar con una sustancia especfica. Objetivo. Cuantificar el C producido en la fermentacin alcohlica en levaduras. (Nelson, 2008).

Determinar la presencia de etanol como producto final de la fermentacin alcohlica. Mtodo. Se pes 1 g de levadura y se disolvi en 10 ml de glucosa al 5% en buffer de acetato, evitando la entrada de aire. Se adicion 1 ml de 2,6 diclorofenolindofenol sdico (DCPIP). Se tom inmediatamente 3 ml de la suspensin con una jeringa de 20 ml y se coloc la aguja en parafina para evitar la entrada de oxgeno. A intervalos de 10 minutos, se anot la distancia recorrida por el mbolo de la jeringa y el cambio de color de la suspensin, las mediciones de intervalos se llevaron a cabo por un perodo de 1 hora (6 mediciones en total). Al inicio, la levadura consume el poco oxgeno disponible mediante la oxidacin aerbica de la glucosa, por lo que la produccin de C El color DCPIP indica los cambios redox en el interior de la jeringa: DCPIP (azul) +
DCPIPH (rosa) + DCPIPH (rosa)

no es inmediata.

DCPIPH2 (incoloro)

Resultados. Tabla 1. Medicin de distancia del mbolo por un tiempo de 1 hora. Tiempo transcurrido (m) Distancia recorrida del mbolo (mL)/ cantidad total de levadura y C 10 20 30 40 50 60 0.5 ml / 3.5 ml 1.5ml / 5 ml 2.5 ml / 7.5 ml 3.5 ml / 11 ml 2 ml / 13 ml 2 ml / 15 ml

Figura 1. Cantidad de C

producido por la levadura en funcin del tiempo

Figura 2. Tubo problema y tubo control despus de la prueba de determinacin de etanol.

Discusin. Para la cuantificacin de C , debemos mencionar la importancia de la solucin glucosada y el compuesto DCPIP. La solucin de glucosa evidentemente representa la fuente de energa que utilizara la levadura para oxidarla y, dado que se indujo un medio anaerobio, llevar a cabo la produccin de C . El DCPIP, por su parte, funciona como cofactor redox para producir etanol. Sabemos que naturalmente en la clula, la produccin de etanol a partir de acetaldehdo se da por la reduccin de este ltimo y dicha reduccin se da gracias al cofactor redox NA prueba realizada, DCPIP toma el papel del NA . En la y con esto es posible producir etanol. Al adicionar el DCPIP a la disolucin de levadura con

glucosa, el compuesto se torn incoloro de forma inmediata, con lo que es posible decir que ste se redujo por completo desde el inicio de la prueba, por esto no se observaron cambios de color durante los seis registros realizados durante una hora. Sabemos que la levadura utilizada realiza la oxidacin aerbica de glucosa cuando hay oxgeno disponible, lo que tambin implica que no se produce C sino hasta que comienza la fermentacin anaerobia. Al inicio de la prueba haba (aunque en una cantidad muy pequea) oxgeno fue de casi cero mililitros al inicio porque primero se consumi el poco con el paso del tiempo (fig. 1.). Tambin podemos ver disponible en el medio, por lo que podemos ver que la produccin de C

oxgeno presente y despus comenz el proceso anaerobio e increment la produccin de C

que en los primeros 40 minutos, la cantidad de producido por la levadura incrementaba, y en los ltimos 20 minutos de registro, hubo un decremento y estabilidad en la produccin, lo que se explicamos con el hecho de que el recurso energtico que estaba siendo utilizado (glucosa), obviamente se iba agotando al paso del tiempo, lo que comenz a limitar y regular el proceso de fermentacin y, en consecuencia, la cantidad producida de C . En cuanto a la prueba de determinacin de etanol, se tuvieron dos tubos; uno es el tubo control al que se le adicion etanol para poder comparar el color y olor de la reaccin que ste tendra con la disolucin sulfocrmica. El tubo problema contena la suspensin de levadura extrada despus de la prueba de cuantificacin de C . Si el tubo problema contena etanol producido por la levadura, entonces deba reaccionar con el cido sulfocrmico de igual manera que el tubo control. La prueba fue positiva para el tubo problema dado que se present un color verdoso y olor a frutas propio del acetaldehdo (fig. 2.). Lo que sucede con la reaccin es que el etanol se oxida, dado que, en la solucin sulfocrmica, el cromo tiene una gran actividad oxidante. As, el etanol pierde dos tomos de hidrgeno, los cuales son donados al cido sulfocrmico y, al final, el etanol oxidado se convierte en acetaldehdo. sta reaccin produce un color verde y si no hay etanol en el medio, la reaccin no se lleva a cabo y no se presenta la coloracin mencionada ni el olor del acetaldehdo.

Conclusin. Con base en el anlisis se concluye que la levadura en medio anaerobio induce a la fermentacin, cuyos productos finales son el etanol y el dixido de carbono. Despus de las dos pruebas realizadas en la prctica, fue posible determinar la produccin de C como consecuencia del proceso fermentativo. La cantidad producida en una hora fue de 15 ml en total. A su vez, se concluy que s hubo produccin de etanol, al observar una coloracin verde y percibir el aroma del acetaldehdo resultante de la oxidacin de dicho etanol. Dicho esto, es posible afirmar que se cumplieron los dos objetivos iniciales de la prctica, as como la hiptesis planteada para la misma.

Referencias. Alberts, et al., Biologa molecular de la clula, tercera edicin, Ediciones omega, 2002. pg. 729.
http://www.nature.com/scitable/topicpage/yeast-fermentation-and-the-making-of-beer-14, Yeast, fermentation and the making of beer and wine. By: Luisa Alba, Claudia Segal-Kischinevsky, (Facultad de Ciencias, Universidad Nacional Autnoma de Mxico) 2010, Nature Education. Nelson D.L y Cox M.M. Lehninger Principles of Biochemistry, quinta edicin, W. H. Freeman and Company, NY, 2008. pp 232 y 549.