PRCTICA DE BIOLOGA N 2 Tcnicas de Observacin en el Microscopio Introduccin Objetivos Recursos Procedimientos Marco Terico Observaciones en la Prctica Autoevaluacin Introduccin

roduccin La necesidad del uso de microscopios ms potentes y un manejo adecuado de los mismos, se ven inefectivos si a ello no se acompaa una tcnica adecuada de preparacin de placas y un correcto enfoque El uso del Microscopio se ha generalizado tanto, son tantas las ciencias a las que es menester, que su uso mismo en la actualidad no es tan simple, incluso solamente hablando del microscopio ptico; y es por razn de que la inmensa cantidad de objetos y mltiples sustancias a investigarse, requieren de un procesamiento adecuado y propio para su mejor enfoque y visualizacin. Es por ello que se quiere impartir al estudiante, en est prctica, algunas nociones de las principales tcnicas de las que se sirve el laboratorio para el mejor enfoque y visualizacin de los diferentes elementos a investigar. Objetivos Identificar algunos de las principales tcnicas en enfoque u observacin. Discernir cual es la tcnica ms adecuada para la observacin de diferentes objetos. Recursos Humanos Grupo de estudiantes Ayudante de ctedra Materiales Microscopio Compuesto de Luz Laminas cubreobjetos y portaobjetos Fijador para el cabello Aceite de inmersin (cedro) Objetos para la observacin (Papel cuadriculado, Cabello, Ptalo de un flor, placas preparadas) Procedimientos

 Exposicin terica: brevemente se hablar y abordara temas como los objetivos de la prctica, materiales necesarios, los procedimientos, algunas definiciones, tipos de tcnicas. Observacin del ptalo de una rosa o un cabello por el mtodo en fresco. Para ello colocamos el objeto a investigarse en el portaobjetos, lo cubrimos con el cubreobjetos, y procedemos a la observacin del mismo con los objetivos de 4x, 10x y 40x. Visualizacin del ptalo de una rosa o un cabello por la tcnica de fijacin. El ptalo de la rosa utilizado en la anterior visualizacin, la presionamos contra el portaobjetos con nuestro dedo ndice (fijacin mecnica) y en la placa con el cabello rociamos un poco de spray para el cabello, quedando as fijadas los objetos en las placas y procedemos a observar con los objetivos de 4x, 10x y 40x. Las placas fijadas o teidas enfquelas por inmersin. Sobre las placas ya preparadas colocamos una gota del aceite de cedro, y las observamos al microscopio con el objetivo de 100x o de inmersin. Marco Terico Definicin Entendemos como tcnicas de observacin en Microscopa a todas aquellas formas, maneras o mtodos utilizados para lograr la mxima visualizacin del objeto a investigarse, mediante el adecuado tratamiento o procesamiento del mismo. Como se ve es un concepto muy general, y esto se debe a que muchas maneras o incluso circunstancias pueden colaborar en este objetivo, esto a su vez ha determinado que las tcnicas de microscopa resulten innumerables. Clasificacin El hecho anteriormente mencionado, ha impedido tener una clasificacin precisa y absoluta de las tcnicas de microscopa o de observacin de placas, sin embargo, hemos tratado de resumirlas, con ciertos condicionamientos, en las siguientes formas: Tcnica de Observacin en Fresco Son todas aquellas formas o mtodos de observacin, mediante los cuales los objetos a investigarse, no sufren cambios o alteraciones en cuanto a su forma, estructura o composicin qumica o sentido de vitalidad de los mismos; para ello los objetos debern ser observados tal como existen o mximo inmersos en un medio similar, como el caso de las soluciones fisiolgicas. Solo as podrn ser estudiados en su real y verdadera naturaleza. Estos mtodos no suelen dar sin embargo la mxima visualizacin del objeto. Su uso se recomienda para el estudio de parsitos en heces, de secreciones corporales, etc. Tcnica de Observacin por Fijacin Se denomina as todas aquellas formas en las que los elementos a estudiarse quedan fijados o impresos en el portaobjetos, detenindose todos los procesos vitales. Estas tcnicas necesariamente cambian o alteran en alguna medida la estructura, forma o composicin qumica de los objetos de estudio; su importancia radica en el hecho de que en esta forma pueden preservarse a travs del tiempo, los elementos en la forma que ya fueron fijados. Los mtodos de fijacin son mltiples, pero se les puede dividir en mtodos fsicos y mtodos qumicos: Fijacin por mtodos fsicos La fijacin del objeto se realiza utilizando mecanismos fsicos, como son el calor, la congelacin, la desecacin, la presin mecnica, etc. Sobre sta ltima forma, vale la pena indicar, que aunque es un mtodo 2

nuevo, ha sido utilizado especialmente en Citogentica, en el estudio de la mitosis y meiosis, desplazando en este campo a los procesos histolgicos de parafina; consiste simplemente en la presin, que puede ser digital, sobre el objeto colocado en el portaobjetos. Fijacin por mtodos qumicos En este caso la fijacin se realiza aprovechado la naturaleza de ciertas sustancias qumicas, que tienen la propiedad de fijar o impregnar las sustancias o elementos, as como de paralizar los procesos metablicos celulares; entre estas sustancias tenemos: el aceite de carmn, el xilol, el formol, el alcohol, algunos cidos y lcalis, etc. Vale la pena mencionar aqu el fijador de cabello en spray, que aunque contiene algunos de los elementos o sustancias ya mencionadas, se usa como fijador popular, especialmente en la preparacin de placas para el estudio del Papanicolau, en la deteccin precoz del cncer cervical. Se han elaborado programas en este sentido, teniendo en cuenta la facilidad de preparacin de placas con este tipo de fijacin, que podra ser realizado por la misma paciente. Tcnica de Observacin por Tincin Son todas aquellas formas de observacin, por las cuales los objetos a estudiarse son teidos o coloreados. Su uso es preponderante con aquellos objetos o materiales traslcidos, como lo son en su mayora las clulas y sus protoplasmas. La coloracin puede ser simple o compleja. Coloracin Simple Es aquella en donde se utiliza un solo tipo de colorante Coloracin Compleja Aquella donde se utiliza ms de un colorante, debiendo estos ser aplicados siguiendo un proceso ordenado y riguroso; generalmente est tcnica va acompaada de los procesos de fijacin. Como ejemplo tenemos la tincin de Wrigth, Gramm, Baar, Ziel Nelzen, etc. Colorante Son sustancias qumicas, generalmente del grupo de las sales, en donde una de sus partes, la cida o la bsica, posee propiedades cromticas y la otra no. Atendindose a esta propiedad los colorantes se clasifican en: cidos, bsicos y neutros. Los primeros tendrn afinidad por las sustancias bsicas, los segundos por las sustancias cidas, y los terceros tendrn una afinidad indiferente. Tcnica de Observacin por Inmersin Es una tcnica de observacin que no compete a la preparacin misma de la placa, sino a la correccin de un problema de difraccin de la luz en el microscopio. Para ello se utiliza en aceite de cedro o de inmersin, una gota del cual debe ir colocado entre el objeto y el objetivo de 100x, necesitando estos, estar en contacto directo. Funcin del aceite de inmersin Sabemos que el aire tiene tambin un ndice de difraccin de la luz aunque no muy considerable. En el microscopio, la luz que sale de la fuente y atraviesa el condensador, llega al objeto al cual debe iluminarlo a trasluz, para luego recorrer una columna de aire hasta llegar al lente objetivo. Este ltimo tiene un ndice de 3

difraccin de la luz equivalente a 1.1515, muy superior al de la columna de aire, lo cual produce una alteracin en la visualizacin del objeto. El aceite de cedro que tiene un ndice muy parecido al del objetivo, es colocado desplazando a la columna de aire y resolviendo este problema en forma aceptable. Slo debe usarse, sin embargo, con el objetivo de inmersin. Tcnicas Combinadas En realidad, a este grupo pertenecen la mayora de las tcnicas utilizadas en microscopa, y resultan de la combinacin de dos o ms tcnicas de las ya mencionadas, especialmente fijacin y tincin. Tcnicas Especiales Como se haba dicho al comienzo, existen innumerables tcnicas en microscopa, y muchas de ellas no se las ha podido clasificar dentro de ninguno de los grupos mencionados anteriormente, por lo que los hemos llamado tcnicas especiales, que aunque no son muy numerosas, algunas de ellas son muy importantes como es el caso de las tcnicas histolgicas de cortes en parafina. Observaciones de la Prctica Grafique lo observado en el microscopio con la tcnica de observacin en fresco Grafique lo observado en el microscopio con la tcnica de observacin por fijacin Grafique lo observado en el microscopio con la tcnica de observacin por inmersin Autoevaluacin Sobre las tcnicas de observacin en microscopia por fijacin. Seale lo incorrecto: Las hay de tipo fsico y qumico. Las hay de tipo simple y complejo. Se pueden utilizar en combinacin con la tcnica de tincin. Se le utiliza para la toma de muestra para el Papanicolau. Todos. Ninguno. Diga un ejemplo de cada una de las siguientes tcnicas de observacin en microscopia: Observacin en Fresco __________________________________ Observacin por Fijacin __________________________________ Observacin por Tincin __________________________________ Tcnicas Combinadas __________________________________ Tcnicas Especiales __________________________________ Qu tcnica utilizara para la observacin de parsitos en heces? Observacin en fresco. Observacin por fijacin qumica. Observacin por tincin simple. Una tcnica especial. Todas. Ninguna. En la tincin de Gramm, utilizada para visualizar bacterias, se combina dos tcnicas. Seale el literal 4

correcto: Fijacin y observacin en fresco. Observacin en fresco y tincin. Fijacin y tincin. No es combinada, es una tcnica especial. Todas. Ninguna. 100x Objeto: _____________________ 40x 10x Objeto: _____________________ 10x Objeto: _____________________ 40x 40x 10x Objeto: _____________________ 10x Objeto: _____________________ 40x