DETERMINACIN DE CAFENA EN UNA BEBIDA ENERGIZANTE (MONSTER ENERGY) POR CROMATOGRAFIA HPLC

RESUMEN El presente laboratorio tiene como objetivo principal determinar la concentracin de cafena en una bebida energizante (MONSTER ENERGY) mediante el rea de la seal cromatografca. Para ello se realiz una curva de calibracin inyectando en el HPLC muestras de cafena de concentraciones conocidas PALABRAS CLAVES: concentracin. cromatografa HPLC, cafena, rea,

ABSTRACT: This lab's main objective is to determine the concentration of caffeine in an energy drink (MONSTER ENERGY) by chromatographic signal area. This was achieved by injecting a calibration curve in the HPLC samples of known concentrations of caffeine

KEYWORDS: HPLC, caffeine, area, concentration

INTRODUCCION El HPLC (HIGH PERFORMANCE LIQUID CROMATOGRAPHY) o Cromatografa liquida de alta resolucin, es una tcnica cromatogrfica usada para separar componentes usando una variedad de interacciones qumicas entre el analito y la columna cromatogrfica. Bsicamente es un sistema compuesto de un reservorio de fase mvil, bomba, inyector, columna de separacin y detector. El analito se pasa a travs de una columna de la fase estacionaria bombeando la fase mvil liquida con alta presin. La muestra se introduce en pequeos volmenes a la corriente de la fase mvil y all se retarda por medio de interacciones qumicas con la fase estacionaria mientras atraviesa la columna. El retardo se conoce como tiempo de retencin, nico para analito. Depende de la naturaleza del analito, de la fase estacionaria y de la composicin de la fase mvil. Los solutos ms

comunes usados en la fase mvil son combinaciones de agua purificada con lquidos orgnicos, los ms comunes son Metanol y Acetonitrilo, tambin suelen usarse sales y bufferes para contribuir a la separacin de componentes. Tambin se usa el cido Trifluoroacetico para actuar como formador de pares inicos. Estas combinaciones introducen el concepto de gradiente de elucin. Consiste en la variacin de la composicin de la fase mvil, para adaptarse a los diferentes analitos y conseguir mejores resultados. El gradiente separa la matriz del analito en funcin de la afinidad del analito por la composicin de la fase mvil. Cada analito tiene un gradiente de elucin ptimo para obtener la mxima separacin de picos en el detector. [1] Se consideran dentro del grupo de productos estimulantes o fruitivos principalmente a aquellos tales como el caf, el t, el cacao, sus derivados y la yerba mate, incluyndose tambin a otros como el guaran y la cola, actualmente estn comercializndose las llamadas bebidas energizantes. Estos productos con excepcin del cacao y sus derivados no tienen valor alimenticio y se consumen slo por las propiedades de ser bebidas estimulantes y en algunos casos refrescantes. Poseen ciertas caractersticas en comn, son productos naturales (sin considerar las bebidas energizantes) que han sido tratados por calor para adquirir aromas caractersticos y contienen alcaloides tales como cafena (1,3,7-trimetilxantina) y teobromina (3,7-dimetilxantina). El contenido de cafena es utilizado para evaluar la calidad de productos tales como caf, t, cacao.

Estructura qumica de la cafena (1,3,7-trimetilxantina) La cafena estimula el sistema nervioso central y el msculo cardaco y relaja el msculo liso, especialmente la fibra muscular bronquial, y acta sobre el rin causando diuresis. La cafena tambin provoca un ligero aumento de la tasa del metabolismo basal e incrementa la capacidad para el esfuerzo muscular. Ejerce un efecto fortalecedor y estimulante sobre diversas funciones como la resistencia fsica, el trabajo individual o el manejo de equipos cuando estas funciones se

ven disminuidas por efecto de la fatiga. La dosis considerada como teraputica de cafena para un adulto es de aproximadamente 180 mg. La cafena se ha asociado con la hiperactividad en nios causada por el consumo de bebidas que la contienen. Para determinar el contenido de cafena existen procedimientos clsicos que por lo general se basan en una extraccin seguida de la determinacin de nitrgeno por Kjeldahl; tambin es posible realizar la medida espectrofotomtrica UV. Los mtodos modernos se basan en separaciones cromatogrficas entre los que tiene especial relevancia la cromatografa lquida de alta performance (HPLC). [2] . METODOLOGIA En la parte experimental se utiliz distintas soluciones a diferentes concentraciones (0, 10, 20, 30, 40, 50 y 100 ppm) de cafena y luego se inyectaron en el HPLC para obtener la curva de calibracin absoluta. Inicialmente se tomaron 3ml de la muestra, seguidamente se agita constantemente hasta desgasificar. Luego se completa a volumen de 25ml con una solucin de 80: 20; (Agua HPLC y etanol). Seguidamente, se lleva al ultrasonido durante 15 minutos. Posteriormente se inyecta la fase mvil al cromatografa para evitar interferencias y finalmente se toma una alcuota de 15 L de muestra y se inyecta al cromatografa HPLC

RESULTADOS Y ANALISIS En primera instancia, se procede a realizar la curva de calibracin para lo cual se tienen en cuenta las concentraciones patrn Tabla N01: Datos curva de calibracin patrn cafena concentra cin ppm 0 10 20 30 40 50 100 rea 0 591990 641765 930582 1135890 1405082 2927006

Grafica N01: Curva de calibracin patrn cafena

Una vez realizada la curva de calibracin de la cafena, se reemplaza el rea obtenida en la muestra (

Clculos: Teniendo en cuenta la curva de calibracin y la lectura de la dilucion correspondiente de la muestra, el resultado final se expresa en g de cafena por 100 g de producto, segn la legislacin vigente. A=axc+b Ecuacin de la curva de calibracin A = rea c = concentracin de cafena de la solucin inyectada (mg/l) a = pendiente de la curva de calibracin b = ordenada al origen de la curva de calibracin

Despejando tenemos que:

Por lo tanto:

25, 84 ppm

=3,10 ppm cafena

Por ende:

V = volumen final de la solucin f = factor correccin de volumen de acuerdo a las diluciones realizadas m = masa o volumen inicial del producto analizado (segn Tabla

Este estudio describe la cuantificacin de cafena presente en la bebida energizante MONSTER ENERGY de 473 ml de contenido; analizado por HPLC. La longitud de UV-Vis se fij a 254 nm para cafena. Bajo las condiciones de HPLC utilizadas obtuvo un tiempo de retencin para la cafena de 0,5341 min. La identificacin de los picos de cafena se logr por comparacin de tiempos de retencin con patrones cafena.

El anlisis por HPLC es muy usado y ampliamente respaldado, de modo que entrega valores slidos y confiables, por lo cual los errores estn directamente relacionados con la manipulacin, preparacin e inyeccin de las muestras, debido a esto es que para entregar un anlisis optimo es que se deben realizar varias inyecciones de las muestras y obtener valores de un mismo rango para asegurar un resultado reproducible. La concentracin de cafena en la bebida energizante fue determinada con base a las diluciones realizadas para preparar patrones y utilizando la curva de calibracin 2 estndar de cafena (r = 0.9972, grafica 1).

CONCLUSIONES: Las bebida energizante tambin contienen otras sustancias estimulantes como guaran. Los efectos del guaran son similares a los de la cafena, pero su duracin es mayor debido a su contenido de taninos y saponinas. Adems, estas bebidas contienen carnitina, la cual se afirma que ayuda a quemar grasa y a levantar el nimo. Sin embargo, no hay suficiente evidencia para respaldarlo. [3] La cantidad de cafena que contiene el envase de la bebida energizante no es excesiva; el problema es que hay otros ingredientes que potencializan su accin, ya sea aumentando su cantidad o prolongando sus efectos. El consumo de este tipo de bebidas debe ser moderado y nicamente en los casos necesarios. No se deben tomar como refresco debido a los efectos nocivos que pudieran tener en tu salud. Segn un estudio publicado en la revista Clinical Pediatric Emergency Medicine en marzo del 2008, se ha reportado un caso de infarto al corazn debido al consumo excesivo de cafena. En casos ms leves, los efectos secundarios de estas bebidas son: [3]

Nusea Irritabilidad Palpitaciones Insomnio

Sueo interrumpido Irritacin del esfago y/o estmago Cambios en la presin arterial Hipertermia (mucho calor) Taquicardia (palpitaciones rpidas del corazn)

El consumo exagerado de bebidas energticas es daino para la salud. Teniendo en cuenta que la cafena produce efectos txicos a partir de los 240 miligramos, deber evaluarse la ingesta de sta considerando el contenido en el resto de los alimentos. Por ejemplo una persona que consume en el da: 1 taza de caf (150 mg.) + una lata de bebida cola (35 mg.) + una tableta de chocolate (30 mg.) + una taza de t (30 mg.). El resultado de esta suma es 245 mg., por tanto se pasara el lmite de consumo y no se podran consumir bebidas energizantes. [4] El contenido de alguno de estos productos puede producir absorcin ineficiente de los fluidos y nutrientes desde el intestino, con la posibilidad de producir distress gastrointestinal. . [4] Con respecto a la composicin nutricional no vara demasiado entre las distintas bebidas energizantes existentes en el mercado. [4] Comparando con segn los requisitos fisicoqumicos de las bebidas energizantes para consumo humano segn la resolucin 4150 de 2009 se obtiene que el contenido permitido es de 32 mg [5]

La cuantificacin de cafena en la bebida energizante fue posible determinarla en las condiciones probadas, en tiempos cortos, con una buena resolucin, precisin y exactitud. El HPLC es uno de los mtodos analticos ms usados en la industria farmacutica por lo que el uso y manejo de los estudiantes les abre

BIBLIOGRAFIA [1] GMEZ-ULLATE; SERRANO LVAREZ. Cromatografa principios y aplicaciones [En lnea]:

http://es.scribd.com/doc/11642417/Cromatografia-Fundamentos-yAplicaciones

[2] Departamento de Qumica Orgnica-Area Bromatologa Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de BuenosAaires Trabajos prcticos-laboratorio [En linea]: http://www.qo.fcen.uba.ar/Cursos/TecnoIII/guia.pdf

[3] Lo que debes saber de las bebidas energizantes [En linea]: http://www.midieta.com/es/las-dietas/lo-que-debes-saber-de-lasbebidas-energizantes

[4] Bebidas energizantes: beneficio o perjuicio [En linea]: http://www.alimentacion.org.ar/index.php? option=com_content&view=article&id=1247:bebidas-energizantes-beneficio-operjucio&catid=41:salud-nutricional&Itemid=60 [5] RESOLUCIN 4150 DE 2009 [En lnea]: http://www.invima.gov.co/Invima/normatividad/docs_alimentos/RESOLUCION %204150%20DE%202009.pdf