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Resumen
El objetivo de este trabajo, fue evaluar el comportamiento de la concentracin de polifenoles, como marcador qumico de la calidad de las tabletas de Tamarindus indica L, al ser sometidas a condiciones aceleradas de temperatura, humedad e iluminacin. Se realiz la determinacin de polifenoles por el mtodo de Folin Ciocalteau. Se sometieron las tabletas a diferentes valores de humedad relativa utilizando el mtodo de las sales saturadas, y se evalu la influencia de la luz, sometiendo las tabletas a condiciones de luz y oscuridad. Se encontr que las temperaturas 30 y 40 C no afectan significativamente el contenido de polifenoles en las tabletas; que el contenido de humedad en el equilibrio, es una funcin polinomial de grado tres de la humedad relativa del medio, y que la concentracin de polifenoles disminuye por el efecto de la luz. Se concluy que, las condiciones adecuadas para el envase y conservacin de las tabletas de tamarindo son: envase de PVC de alta densidad con tapa inviolable, en lugar seco y fresco, y al abrigo de la luz. Palabras clave: tamarindo, estabilidad acelerada, tabletas, polifenoles, Folin Ciocalteau. z
Abstract
The aim of this work, it was to evaluate the behavior of the polyphenols concentration, as quality chemical marker of the Tamarindus indica L tablets, in stress conditions of temperature, humidity and illumination. Polyphenols content was quantified, using the spectrophotometric method of Folin Ciocalteau. Tablets were treated at different condition of relative humidity, using the saturated salts method, and the influence of light was evaluated, placed the tablets to conditions of total illumination and completely darkness. It was found that the temperatures of 30 and 40 C dont affect the polyphenoles content in the tablets, that the equilibrium moisture content, is a three degree polinomial function of the relative humidity, and that the polyphenoles concentration decrease as consecuense of effect of light. The appropriate conditions for the package and conservation of the tamarind tablets are: packing in high-density PVC flask with inviolable closure, in dry and fresh place, and protected from light. Keywords: tamarind, stability stress testing, tablets, polyphenoles, Folin Ciocalteau.
Introduccin
El tamarindo (Tamarindus indica L) es una planta medicinal que ha sido utilizada a lo largo de los siglos en muchos pases del mundo. En Cuba es la planta que ms utiliza la poblacin para el tratamiento de los trastornos hepticos. Es un rbol de mediano tamao, que pertenece a la familia Caesalpinaceae. Las hojas son ricas en protenas, cidos grasos, carbohidratos, polifenoles,
aceites esenciales y elementos minerales como magnesio, hierro, cobre, cinc y selenio. Los flavonoides ms abundantes en esta parte de la planta son la orientina, isoorientina, vitexina y la isovitexina. Contienen adems otras sustancias como apigenina, cido ferlico y cido cafeico /1, 2/. Las hojas, consumidas como decoccin, son la parte que ms utiliza la poblacin, y se ha comprobado que tienen actividad hepatoprotectora /3/, antioxidante /4/ y antimicrobiana /5/ asociada
a la presencia de compuestos polihidroxilados, la mayora de ellos polifenoles y flavonoides. En el mercado de fitofrmacos y apifrmacos cubano, predominan las preparaciones lquidas y las semislidas, y solo un por ciento muy bajo (menor del 3 %) son preparaciones slidas /6/. El principal problema para el uso y preparacin de las formas farmacuticas con extractos lquidos obtenidos a partir de plantas medicinales, es la estabilidad, ya que los mismos tienen una composicin muy compleja y son, generalmente, sensibles a los cambios de temperatura, sufren reacciones fotolticas y se oxidan con facilidad. En este sentido, las preparaciones slidas, obtenidas por tcnicas de secado o por la micropulverizacin de las partes tiles de las plantas, ofrecen mayores ventajas. Entre las principales ventajas de las formas slidas estn su bajo costo, facilidad de almacenamiento, alta concentracin de principio activo y una mayor estabilidad de las sustancias activas /7, 8/. Por las razones mencionadas arriba, en este trabajo se evala la influencia de la temperatura, la humedad y la luz, en la concentracin de polifenoles, como ingrediente activo de un novedoso comprimido con potencialidad antioxidante y hepatoprotectora, obtenido a partir de extracto blando de la especie Tamarindus indica L., como mtodo para evaluar la estabilidad del principio activo de estas tabletas en condiciones ambientales aceleradas. z Materiales
totales del extracto blando, y aproximadamente 3,45 % de polifenoles. Una vez obtenidas las tabletas, se envasaron en frascos de cloruro de polivinilo (PVC) de alta densidad con tapa inviolable, y se almacenaron en lugar seco y fresco.
y mtodos
Influencia de la humedad a 25 C
Para la realizacin de este estudio, se utiliz el mtodo de las sales saturadas de Callagan /13/. La obtencin de las isotermas se realiz a 25 C de temperatura, para ello se utiliz una estufa refrigerada (MK-325, Suiza). Se colocaron muestras de tabletas con una humedad residual de 2,21 %, en placas de Petri de 15 cm de dimetro, y estas se colocaron en desecadoras preparadas a 0, 32, 57, 74.3, 84,3 y 100 % de humedad relativa. Durante los primeros diez das, se determin diariamente la humedad residual en una balanza gravimtrica (Sartorius, SA 325, Alemania), posteriormente se realiz la medicin cada cinco das, por espacio de veinte das.
Resultados y discusin
Influencia de la temperatura
La figura 1 muestra el comportamiento de la concentracin de polifenoles en las tabletas sometidas al estudio. A lo largo de los tres meses la concentracin de polifenoles, disminuy en 1,17 % a 30 C y en 1,36 % a 40 C, pero la diferencia no fue estadsticamente significativa (ttest= -0,563 1, pvalor=0,583 691). En ambos tratamientos, las concentraciones de polifenoles se mantienen por encima de 98 %, lo que resulta un buen indicador de la estabilidad qumica de las tabletas a estos valores de temperatura. No se observ durante el estudio ningn signo de oscurecimiento de las tabletas, que es el primer indicio de degradacin por oxidacin de los polifenoles en los extractos de tamarindo, por lo que esta disminucin en ambos casos, puede estar relacionada con un ligero aumento de la humedad residual de las tabletas, y no con un proceso degradativo. Sin embargo, teniendo en cuenta las condiciones climticas de la provincia Santiago de Cuba, que la temperatura ambiental promedio puede ser superior a los 32 C casi el ao entero, y que la concentracin de polifenoles en la tableta es baja (3,45 mg aproximadamente) se sugiere almacenar estas tabletas en un lugar fresco, (temperaturas entre 25-30 C).
Influencia de la luz
Se prepararon dos desecadoras con humedad relativa 0 % (slica gel recin activada a 105 C por tres horas) y se expusieron tabletas envasadas en frascos transparentes y de color mbar con tapas esmeriladas y frascos de PVC de alta densidad con tapa inviolable, a la accin de la luz y en la oscuridad /14/. La temperatura promedio a lo largo del estudio se mantuvo entre 30 y 33 C. La iluminacin de la desecadora seleccionada se realiz durante 24 horas diarias, todo el tiempo del estudio, utilizando una lmpara fluorescente (Phillips, TL-D, 18W, Holanda). Se determin la concentracin de polifenoles cada siete das. Se realiz el anlisis por triplicado y se report la media y la desviacin estndar.
Efecto de la humedad
Muchos compuestos son sensibles a la presencia de humedad y al vapor de agua, de manera que cuando se exponen a un ambiente hmedo pueden
retener agua, ya sea a nivel superficial o incluso dentro de su masa. La humedad puede causar o acelerar reacciones degradativas, fundamentalmente la hidrlisis /12/.
Fig. 2 Absorcin de humedad por las tabletas de tamarindo a 25 C de temperatura a diferentes valores de humedad relativa.
En la figura 2 se muestran las isotermas de absorcin de las tabletas de tamarindo a diferentes valores de humedad relativa a 25 C. En todos los casos, el contenido de humedad en el equilibrio se alcanz a los 5 das de exposicin a la humedad. La humedad residual a 0 % de humedad relativa no se modific durante el tiempo de estudio, elemento que indica que, un lugar seco, es la condicin ms adecuada para la conservacin de las tabletas. Este elemento aparece reportado con frecuencia en la literatura especializada /15,16/, ya que al ser privados los principios activos (extractos lquidos) del medio del cual fueron extrados de la planta, los hace altamente higroscpicos. Se observ un ligero oscurecimiento de las tabletas, caracterstico
de procesos oxidativos de los polifenoles del tamarindo. El valor del contenido de humedad en el equilibrio (EMC), en cada valor de humedad relativa (HR), se utiliz para correlacionar la capacidad de absorcin de humedad de las tabletas. El EMC aumenta siguiendo una funcin polinomial de grado tres (figura 3), que puede ser utilizada para hacer predicciones, con R 2 ajustado igual a 0,987 4, Q 2 igual a 0,883 8 y con ausencia de correlacin residual (estadstico de Durvin Watson no significativo). A continuacin se presenta la expresin del modelo ajustado: EMC = 2,689 4 + 0,176 8 HR - 0,003 7 HR2 + 0,000 03 HR3
Fig. 3 Comportamiento de la humedad residual de las tabletas de tamarindo en relacin con contenido de humedad a 25 C. La lnea slida indica la funcin polinomial ajustada.
Influencia de la luz
El test Anova aplicado mostr que existen diferencias significativas entre las medias de los seis grupos (tratamientos) estudiados (F-test = 17,52; pvalor= 0,000 0). El test de rangos mltiples de Duncan
mostr, que solo la media del contenido de polifenoles en las tabletas envasadas en frasco de vidrio transparente, expuestas a la luz, fue diferente del resto de los grupos, que resultaron homogneos. La figura 4 muestra el comportamiento del contenido de polifenoles en las tabletas para los seis
tratamientos aplicados. El decrecimiento del contenido de polifenoles en las tabletas que fueron expuestas a la luz fue de 24,59 %, hecho que comprueba la fotosensibilidad de las tabletas, en especial del contenido del principio activo de la misma.
Se pudo constatar que el contenido de polifenoles en las tabletas envasadas en frasco de PVC, expuestas a la luz, no sufri cambios a lo largo del estudio; se sugiere que sea este el envase final para las tabletas.
La figura 5 muestra el comportamiento del contenido de polifenoles en relacin con el tiempo, cuando las tabletas se exponen a la luz en frasco transparente. Este comportamiento se ajust a una funcin lineal (F= 155,53; p-valor = 0,000 0) que puede explicar el 96,28 % de la variabilidad de polifenoles por el efecto de la luz (R2 ajustado= 0,962 8), con una bondad de prediccin (Q2) igual a 83,89 %.
El test de DW fue no significativo, (p-valor= 0,291 2). La ecuacin matemtica del modelo ajustado es: % CP = 98,372 9 - 0,419 307 t donde CP es el contenido de polifenoles, y t es el tiempo expresado en das.
Conclusiones
Estos resultados sugieren que la ausencia de luz, y el frasco de PVC de alta densidad son las condiciones que brindan mayor proteccin para mantener la estabilidad de las tabletas de tamarindo frente a la accin de la luz.
http://
2 ESCALONA, A. J. et al. "Chemical Constituents of Tamarindus indica L. leaves", Revista Cubana de Qumica, vol. XXIII (3) pgs. 65-71, 2010. 3 _____, M. A. DAHESA, M. L. BOIZZAN. "Evaluacin preclnica del efecto hepatoprotector de extractos flavonlicos de las hojas de Tamarindus indica L." Etnomedicine, 1, 1995, pgs. 147-156. 4 JOUYEX, M, F. MORTIMER, J. FLEURENTIN. "Screening of Antiradical, anTilipoperoxidant and Hepatoprotective Effects of Nine Plants Extracts Used in Caribbean Folk Medicine. Phytotherapy Research. 9: 228-230, 1995. 5 ESCALONA-ARRANZ, J. C. et al. Evaluation of the Antimicrobial Activity of Extracts from Tamarindus indica L. Leaves. Pharmacognosy Magazine. 6(23), 2010, pgs. 242-247. 6 MINSAP. Formulario Nacional de Fitofrmacos y Apifrmacos. ECIMED. La Habana. Cuba. 2010. 7 SOUZA CRF. "Comparative Study of the Production. of Dried Extract of Bauhinia forficata Link by the Spray Dryer and the Spouted Bed Processes" (Disertacin), USP. Brazil. 2003, pg. 180. 8 _____, OLIVEIRA, W. P. Spouted Bed Drying of Bauhinia forficata Link Extract: The Effects of Feed Atomizer Position and Operating Conditions on Equipment Performance and Product Properties, Braz. J. Chem. Eng . 22, 2005, (2), pg. 239.
Las condiciones de almacenamiento ms adecuadas para mantener la estabilidad de las tabletas de tamarindo son: frasco de PVC de alta densidad con tapa inviolable, en lugar seco, fresco y al abrigo de la luz. Se encontraron relaciones estadsticas significativas que describen la variabilidad de la concentracin de polifenoles en las tabletas de tamarindo, causadas por exposiciones prolongadas a diferentes valores de humedad relativa y a la luz.
Bibliografa
1 DEHESA, M. A., O. JUREGUI, S. CAIGUERAL, "Estudio por HPLC-MS/MS de compuestos fenlicos presentes en las hojas de Tamarindus indica L. "Rev. de