Crisanto Roldn Sabino Biotecnologa 4 Prctica III

-Microbiologa General-

Microscopia: Observacin
Objetivos Poner en prctica el conocimiento terico que corresponde a la manipulacin del microscopio. Observar los diversos microorganismos, presentes en muestras diferentes de diversos medios. Introduccin El microscopio, como instrumento de observacin desde su aparicin en el mundo; ha resultado ser un importante auxiliar para los progresos cientficos que ha generado la investigacin a travs de la historia. La disponibilidad actual de diferentes instrumentos ha crecido y esto debido al fundamento desarrollado para realizar observaciones que generan diferentes imgenes para la observacin del analista. Microscopio ptico de campo claro, de barrido, electrnicos por citar unos ejemplos de esta herramienta cientfica. Desarrollo De una muestra de agua previamente recolectada tome con una pequea cantidad. Sobre un portaobjeto limpio y seco coloque en el centro una gotita o dos. Coloque un cubreobjetos sobre la muestra depositada en el portaobjeto. Enseguida lleve el material para observar a la platina (el revolver deber de estar en la posicin que permita al objetivo de: vista panormica 10x en posicin hacia la platina). Proceda a enfocar la muestra a observar empleando el objetivo de 10x para esto: o Llevar la platina hasta el tope con los tornillos macromtrico haciendo girar estos hacia enfrente (vista del analista.) o Enseguida, con el tornillo micromtrico girando hacia en frente o atrs segn se requiera buscar la nitidez necesaria para una buena observacin de la muestra, (los oculares deber de estar a la distancia correcta que hay entre los ojos del analista, se deber de observar un solo campo). Segn la magnificencia en la que desee ver puede cambiar a los objetivos de 20x, 50x y 100x y, apoyndose de la cremalleras localice el campo que desee observar; cremallera de mayor tamao: adelante hacia atrs, izquierda derecha; (movimiento de la platina -campo de observacin-).

Resultados (Observaciones) Muestra 1 Agua de garrafn, bebible; de uso domstico.

Protozoarios

Protozoarios

Bacterias

Contraste de Fases (100x) Muestra 2 Agua de arroyo, en vas de contaminacin.

Contraste de Fases (100x)

Contraste de Fases (100x)

Contraste de Fases (100x)

Campo claro (100x)

Se realiz la observacin en fresco de la muestra visualizndose presencia de microorganismos en las dos muestras observadas as como tambin la presencia de materia orgnica y minerales. Los microorganismos observados presentaron caractersticas diversas; morfologa, ausencia y/o presencia de movimiento; segn la caracterstica de los mismos y la muestra observada. Para la muestra 1 las observaciones fueron: protozoarios con movimientos y estticos, se logr visualizar el ncleo de estos con el objetivo de 100x (acetite de inmersin). En la muestra 2 se encontr la presencia de bacterias individuales y agrupadas y protozoarios. Conclusin Segn la naturaleza de la muestra de agua y su grado de purificacin as como procedencia y el tipo de medio al que ha sido expuesto fueron los tipos de microorganismos y materia orgnica e inorgnica que se observ, tambin quedo demostrado el hecho de que la herramienta de contraste de faces permite la observacin de los microorganismos con una mayor nitidez, por otra parte el campo claro no permiti visualizar algn espcimen o elemento inerte debido a que las clulas microbianas presente en cierta preparacin son muy pequeas, absorben muy poca luz, se observan transparentes y es difcil de analizarlas. Bibliografa Ensayo de Microscopia, Vladimir Snchez Lpez. Universidad del Papaloapan. Campus Tuxtepec. http://www.educar.org/inventos/elmicroscopio.asp

Crisanto Roldn Sabino Biotecnologa 4 Prctica II

-Microbiologa General-

Microscopia: instrumentos pticos de observacin

Objetivo Conocer las partes de los instrumentos pticos usados para la observacin en la microbiologa. Introduccin El ser humano posee el sentido de la vista desarrollado. Sin embargo, no se pueden ver a simple vista cosas que midan menos de una dcima de milmetro. Y muchos de los avances en qumica, biologa y medicina no se hubieran logrado si antes no se hubiera inventado el microscopio. El holands Antonie van Leeuwenhoek (1632-1723), perfeccion el microscopio usando lentes pequeas, potentes, de calidad, y su artefacto era de menor tamao. Alrededor del 1676 logr observar la cantidad de microorganismos que contena el agua estancada. Tambin descubri los espermatozoides del semen humano; y ms adelante, en 1683, las bacterias. Durante las siguientes dcadas los microscopios fueron creciendo en precisin y complejidad y fueron la base de numerosos adelantos cientficos. Conocimiento previo Clasificacin de los instrumentos pticos de observacin en microbiologa. Microscopio estereoscpico: la importancia de este microscopio radica en que permite al analista realizar observaciones que requieren poco aumento. Microscopio simple: microscopio que utiliza una sola lente de observacin. Microscopio compuesto: microscopio que tiene ms de dos lentes pticas para las cuales se han desarrollado accesorios con las que se pueden realizar diferentes tcnicas de observacin, destacan: o Microscopia de campo claro o Microscopia de campo oscuro o Microscopia de contrate de faces o Microscopia de fluorescencia o Contraste interferencial

Microscopio electrnico: el microscopio electrnico es un dispositivo que utiliza un haz de

electrones dirigidos hacia una muestra a analizar y produciendo una imagen en una pantalla sensible a los electrones. o Microscopio electrnico de transmisin

o Microscopio electrnico de barrido Desarrollo El profesor a cargo de la prctica describir cada una de las partes del microscopio as mismo caractersticas especiales y consideraciones necesarias que se tomaran en cuenta para cada uno de los instrumentos cuando se haga uso de estos, los alumnos debern de participar si tienen conocimiento previo de la prctica y aclarar sus dudas con preguntas claras objetivas si as lo requieren. Resultado

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
7 7

Oculares Objetivo Fuente de iluminacin Regulador de luz Tornillo macromtrico Botn de encendido y Apagado Tenazas de sujecin

Imagen 1Microscopio compuesto marca

Leica DM300

Imagen 2 Microscopio Estereoscpico marca Motic DM-39C-N9GO

17

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12.

13.

Imagen 3 Microscopio Electrnico marca Olympus CX41

Oculares Tubo porta ocular Tubo Alojamiento para prismas de objetivo en corredera Revolver portaobjetivos con objetivos Platina para portaobjetos con soporte para muestras Iluminacin Interruptor de conexin/desconexin Ajuste de altura del condensador Enfoque aproximado y de precisin Mando coaxial para desplazar la platina en X,Y Panel frontal con teclas de cambio de objetivo y tecla toggle Tecla de funcin laterales para cambiar entre dos aumentos de objetivos o para interconectar los aumentos (mayor/menor). Lado izquierdo del estativo anlogo

La diferencia entre el microscopio simple y el microscopio compuesto es el nmero de oculares; 1 y 2 respectivamente. Conclusin Los instrumentos pticos de observacin permiten visualizar un mundo aparentemente invisible para el ser humano y sea la clase de estos y la herramienta para el apoyo en observaciones sern las

caractersticas y magnificencia de las imgenes que se apreciaran. Qued claro que el fundamento de la iluminacin y los factores empleados para hacerlo incidir en la muestra, est directamente relacionado con las caractersticas de las observaciones. Bibliografa Ensayo de Microscopia, Vladimir Snchez Lpez. Universidad del Papaloapan. Campus Tuxtepec. http://www.olympuslatinoamerica.com/spanish/seg/seg_product_detail_esp.asp?g=716&s=11&c=53& d=2 http://www.leica-icrosystems.com/fileadmin/downloads/Leica%20DM100/Brochures/Leica_DM100DM300_Brochure_ES.pdf http://www.todomicroscopios.com/20034-microscopio-digital-motic-dm-39c-n9go-a.html http://www.tiposdemicroscopio.com/ http://ingeniatic.euitt.upm.es/index.php/tecnologias/item/520-microscopio-electr%C3%B3nico

Crisanto Roldn Sabino Biotecnologa 4 Prctica I

-Microbiologa General-

Esterilizacin
Objetivo Llevar a la prctica los pasos necesarios para esterilizar; empleando la olla de presin. Introduccin Existen diferentes procesos fsicos, mecnicos, qumicos que permiten la destruccin o eliminacin completa de toda forma de vida microbiana, (esterilizacin). En principio la humedad generada dentro de equipos como una olla de presin a la autoclave genera el efecto esterilizante al inhibir la funcin metablica de los microorganismos como resultado de procesos coagulantes para molculas proteicas. Desarrollo Coloque una parrilla sobre la mesa de trabajo, cercana a una fuente de gas.1 Debajo de la parrilla deber colocar mechero bunsen (recomendable dos), que permite una mejor distribucin de calor para la olla.1 Llene de agua la olla de presin hasta antes de la marca generada por la parrilla que se incluye dentro de la olla. Enseguida deber de colocar el material de desecho que desee esterilizar; (materia orgnica-medios de cultivo, sustratos-, material de laboratorio), que debern antes de ser envuelto en papel destreza de manera adecuada. Ahora suba la olla de presin a la parrilla, conecte los mecheros y habra la fuente de gas, enseguida.2 Cierre la olla de presin (deber de embonar correctamente, para evitar algn accidente posterior), retire la espita para que se genere el purgado del aire frio dentro de la olla; una vez que la salida de nicamente de vapor tape con la espita. Espere hasta que se alcance una temperatura interna de 120C 122 C a partir de esta temperatura tome el tiempo y espere por 10 15 minutos para una correcta esterilizacin3,4. Si rebasa la temperatura adecuad, cuidadosamente retire la espita (la presin generada dentro de la olla puede generar algn accidente) deje salir el aire hmedo, esto deber de producir un descenso en la temperatura si se ha rebasado el limite deseado. Cuando se llegue al tiempo necesario puede apagar los mecheros, esperar a que la olla enfre y finalmente desechar el material esterilizado. Resultado La prctica se desarroll sin contratiempos los materiales que se introdujeron a la olla se visualizaron de un aspecto diferente a los que tenan originalmente aparentaron caractersticas de coccin (material

orgnico) por otro lado el plstico (cajas Petri, y bolsas de polietileno-bolsas de compras comunes-) terminaron de aspecto rugoso, irreconocibles de su estado original.

3 Observaciones de la prctica

Para esta prctica se utiliz bolsa de polietileno como sustituyente del papel destraza para envolver y separar los materiales que se esterilizaron. Conclusin El aire hmedo generado durante el calentamiento de agua en la olla de presin, esteriliza los materiales que se pretenden. Se produce un olor que genera la coccin de un alimento esto debido a las altas temperaturas que se generaron dentro de la olla, un sistema en el que se basa la olla exprs usado en la cocina con fines para la misma. Bibliografa http://www.biologia.edu.ar/microind/esterilizaci%C3%B3n.htm#M%C3%A9todos%20de%20esteriliz aci%C3%B3n http://www.euroresidentes.com/Alimentos/diccionario_gastronomico/esterilizar.htm