3 C

PROCESAR TCNOCAS BACTERIOLGICAS BSICAS

Karla Gonzlez Gonzlez

2011
Procesar tcnicas bacteriolgicas bsicas

Catedrtico: QFB Carmen Aydee Velasco

CBTis 108 MANUAL II

PROCESAR TCNICAS BACTERIOLGICAS BSICAS

1ra UNIDAD
TCNICAS BACTERIOLGICAS BSICAS 1.1 Esterilizar material y medios de cultivo 1.2 Preparar los diferentes medios de cultivo para el aislamiento de las bacterias

2da UNIDAD
APLICAR LOS MTODOS DE TINCIN 2.1 Identificar las diferentes tinciones que sirven para aislar microorganismos bacterianos

3ra UNIDAD
DETERMINAR TCNICAS PARA IDENTIFICAR COCOS Y BACILOS GRAM (+) DE INTERES MDICO 3.1 Aplicar las tcnicas de aislamiento de gram positivos 3.2 Realizar las tcnicas de identificacin de gram negativos 3.3 Realizar las tcnicas de identificacin de bacilos gram positivos 3.4 Realizar las tcnicas de identificacin de bacilos gram negativos 3.5 Realizar las tcnicas de susceptibilidad bacteriana

TEORA
BACTERIA
Clula unicelular que es considerado un microorganismo patgeno y que est formado pr una capa llamada mucopeptidos, stas contienen lpidos, pptidos. La bacteria est compuesta por ADN DNA que pueden ser destruidos por medicamentos bactericidas (destruccin total).

TIPOS DE BACTERIAS:
Flora normal comensal Patgenas

BACTERIOSTTICO: Inhibe a la bacteria

MEDIOS DE CULTIVO
Lugar idneo que cuenta con los suficientes nutrientes para que el microorganismo (bacterias, hongos, etc.) se desarrollen.

NOTAS *EN LOS MEDIOS DE CULTIVOS LOS CALDOS NO TIENEN AGAR *DOSIFICAR VOLTEAR A LA CAJA PETRI

OBTENCIN DE MUESTRAS BIOLGICAS

Asepsia absoluta, de acuerdo a la limpieza Lugar y momento preciso (por lo regular en la maana) Cantidad de muestra suficiente Calidad de la muestra

CLASIFICACIN:
Segn la posibilidad de que las muestras clnicas para el cultivo bacteriolgico, estn contaminadas con la flora normal se pueden dividir en 3 reas. Hay distintos procedimientos en caso para los patgenos.

MUESTRA DE REAS PROFUNDAS Y CERRADAS DEL CUERPO (DIRECTAS):

La muestra recogida contendr solo el germen patgeno. Debe atravesarse la piel para llegar al patgeno utilizando medios quirrgicos por aspiracin con aguja. Asepsia previa (Ej. Sangre).

CARACTERISTICAS/MORFOLOGA MACROSCOPICA DE UNA CEPA Color *Pigmentacin Forma *Hemolisis Tamao *Olor (a veces) Aspecto *Consistencia

NOTAS *LA TOMA DE MUESTRA DEBE REALIZAR EN UN LUGAR ADECUADO. *SE PUEDE DIAGNOSTICAR MACROSCOPICAMENTE. *ENTRE ESPECIES ES IMPOSIBLE IDENTIFICAR CON TINCIN DE GRAM, EN ESTE CASO SERIA SOLO CON PRUEBAS DIFERENCIALES. *SI SE TRATA DE GENERO SI SE PUEDE IDENTIFICAR CON TINCIN DE GRAM. *CEPA CONCENTRACIN DE MICROORGANISMOS (LO QUE CRECE EN EL MEDIO). *PIGMENTACIN MS QUE NADA EN HONGOS

COCOS GRAM POSITIVOS FAMILIAS:

Micrococcaceae Streptococcaceae

ASPECTO MORFO-TINTORIAL:
-Estreptococos Cocos gram positivos con agrupacin en cadena. -Estafilococos Cocos gram positivos con agrupacin en racimos.

MORFOLOGA MACROSCOPICA COLONIAL/CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS:

Color: Gris, blanco, amarillo, etc. Tamao: Pequeo, mediano, grande. Aspecto: Vellosa, aterciopelado, liso, rugoso Consistencia: Dura, semidura, suave, mucoide, chiclosa, butirosa (mantequilla, betn). Forma: Redondas, ovales, estrelladas. Olor* Hemolisis: Alfa (color verde), Beta (color blanco).

ESTREPTOCOCOS
Su familia est clasificada en 3 gneros -Aerococcus -Streptococcus -Enterococcus

FISIOLOGA Y ESTRUCTURA:
Cocos gram positivos Hemolticos o no hemolticos Anaerobios facultativos Catalasa negativos Carbohidratos grupo especfico

NOTAS *ESTREPTOCOCO SIEMPRE SER BETA HEMOLTICO. *SI LA BACTERIA CRECE EN LAS ESTRIAS LA MUESTRA ES POSITIVA SI DICHO MICROORGANISMO ES PATGENO.

ESTRUCTURA TPICA DE UNA BACTERIA:

Monotricas Un flagelo Atricas Sin flagelo Peritricas En todo el cuerpo tiene flagelos Lofotricas Flagelos solo de un lado

MORFOLOGA Y AGRUPACIN:
-Coco -Bacilo -Bacilo/espora -Coma -Espiral Su reproduccin es por fisin binaria.

GRUPOS DE BACTERIAS:
Gram positivas adquieren un color azul o violeta (tincin gram) Gram negativas adquieren un color rosado o rojo (tincin gram) Acido-alcohol resistente solo para bacilos de la tuberculosis (tincin de Ziehl)

EUBACTERIAS GRAM POSITIVAS:

PARED CELULAR: -Presentan una pared celular gruesa de peptodoglicano. -Contiene cidos teicoicos y lipoteicoicos.

EUBACTERIAS GRAM NEGATIVAS:

PARED CELULAR: -El espacio periplasmico permite que se tia dejando entrar al cristal violeta y el alcohol acetona.

BACTERIAS CIDO-ALCOHOL RESISTENTES (BAAR):

-Son resistentes porque contienen cidos miclicos. -Se tien con fucsina bsica y fenol, calor y contraste con azul de metileno. -Las BAAR cido se aprecian de color rojo mientras que el fondo se tie de azul. NOTAS *ESCHERICHIA COLI BACILO GRAM NEGATIVA *STREPTOCOCCUS AUREUS COCO GRAM POSITIVO

PARTES DE LA BACTERIA
CPSULA Cubierta de grosor variable Formada por polisacridos y poliprotenas Estructura flexible o rgida FLEGELOS Compuestos por fibras helicoidales de flagelina Anclados a la pared celular FIMBRIAS Se relacionan con la fijacin a ciertas superficies y la formacin de biopelculas PILI Son semejantes a las fimbrias, pero ms largos y escasos Participa en la conjugacin

Las bacterias poseen la propiedad de fijar ciertas sustancias colorantes, de tal manera que cuando stas se tien, pueden observarse estructuras

Qu es un frotis?
No es otra cosa que el extendido de una suspensin bacteriana, de tal manera que se forme una pelcula uniforme y fina en el tercio medio de la placa (portaobjetos).

COLORANTE
Sustancia que se usa para teir bacterias. TINCIN GRAM -Mordiente: Fija la capa de colorante primario -Alcohol acetona: Decolorante TINCIN BAAR -Fucsina fenicada: Colorante -Emisin de vapores: Mordiente NOTAS *LOS FLAGELOS HACEN MS PATGENAS A LAS BACTERIAS, MIENTRAS MS FLAGELOS, MAYOR ES SU PATOGENIA.

MEMBRANAS DE BACTERIAS
Peptodoglicano Lpidos ms lipopolisacarido Porinas Micolato Acyl lipid

GRAM POSITIVAS - Peptodoglicano GRAM NEGATIVAS - Porinas - Lpidos ms lipopolisacridos - Peptodoglicano MICOBACTERIAS - Micolato - Lipido acetyl - LAM - Arabinogalactano - Porinas - Peptodoglicano

COCOS
Diplococo (Neisseria) Cadena (Estreptococos) Tetrada (Sarcina)

Racimos (Estafilococos)

AERMONAS Tiene ms olongaciones. BRANCHAMELLA SPP Diplococos gram negativos

BORTADELLA BRONCHISEPTICA Lofotricas

ESTREPTOCOCO MUTANS
Causante de la caries

ESTREPTOCOCO GRUPO A BETA HEMOLITICO

Faringoamigdalitis Glomerulonefritis (rin) Fiebre reumtica (corazn)

ESTREPTOCOCO BETA HEMOLTICO GRUPO A

En agar sangre: Colonias grises Contagio: Gotas de flush (saliva en besos, estornudos) Glomerulonefritis: Dolor de cintura Edema (piernas hinchadas) Toma de muestra: Orina Fiebre reumtica: Dolor de huesos Fatiga Toma de muestra: Sangre Antiestreptolicina

TCNICAS DE IDENTIFICACIN PARA BUSCAR EL DIAGNSTICO

-Colocar taxo (discos impregnados de sustancias o medicamentos) -Pasadas las 24 hrs de incubacin a 37 C si alrededor de dicho disco aparece un halo (la eliminacin del estreptococo) significa que es sensible a la bacitracina lo que significa que ese estreptococo no pertenece al grupo A.

GRUPO B
Fiebre puerperal (de puerperio despus de parto/tener hijos) Problemas cardiacos (bebs) Toma de muestra: Parte de la vagina No tiene hemolisis

NOTAS *NOVOBIOCINAPARA ESTAFILOCOCOS *BACITRACINAPARA ESTREPTOCOCOS GRUPO A *PRUEBA DE CAMP ESTREPTOCOCO GRUPO B

REPASO ESTREPTOCOCOS
INFECCIONES -Garganta -Rin (Glomerulonefritis) -Anomalas cardiohepticas -Funiculitis (nacidos) -Piel -Vas urinarias -Fiebre puerperal -Corazn (Fiebre reumtica) -Erisipela (manchas rojas) Coco Gram positivo Agrupado en cadenas Grupo A: Bacitracina Grupo B: CAMP Grupo C Grupo D: Tolerancia NaCl 6.5%

S. Aureus Produce betalisina Hemolisis B Estreptococo Factor CAMP Ampla la hemolisis (punta de flecha)

CAMP POSITIVO: Es S. Agalactiaefiebre puerperal Problemas cardiacos (nios), abortos.

REPASO ESTAFILOCOCOS
Cocos Gram positivos Agrupacin en racimos

NOTAS *ESTAFILOCOCO MS PATGENO: S. AUREUS *S. GRUPO A SOLO PUEDE SER DETECTADO POR TORRENTE SANGUNEO *S. AUREUS: NOVOBIOCINA, FERMENTACIN EN MANITOL, CATALASA +, COAGULASA *MACCONKEY COCOS GRAM *CATALASA = (+) ESTAFILOCOCOS Y NEISSERIA *OXIDASA = (+) NEISSERIA *BACITRACINA = (+) ESTREPTOCOCO *NOVOBIOCINA = (+) ESTAFILOCOCO (-) ESTREPTOCOCOS

ESTREPTOCOCOS CADENAS GRAM +

Tcnicas de identificacin Del microorganismo patgeno En el paciente Caractersticas micro Caractersticas macro Tincin gram

Bacitracina

CAMP

Tolerancia NaCl

NEGATIVA

CATALASA

POSITIVA

Estreptococo

Estafilococo

Neisseria

Racimos gram +

Diplococos gram

Oxidasa positiva Coagulasa Ferm. Manitol Novobiocina

PRCTICA No. 2

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVO: Aprender a preparar medios de cultivo para un exudado farngeo FUNDAMENTO: Un medio de cultivo consiste en un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir (bajo condiciones favorables de pH y temperatura) el crecimiento de virus, microorganismos, clulas o incluso pequeas plantas. Segn qu se quiera hacer crecer, el medio requerir unas u otras condiciones. RESULTADO: Clculos de Estafilococos 110 149grs 1L. (1000ml) 25gr 165ml

Clculos agar sangre 40grs de agar sangre 6.6grs de agar sangre OBSERVACIONES:

1000ml De agua destilada 165ml de agua destilada

DISCUSIONES: Se sellaron las cajas petri antes de que el agar se solidificara y se envolvieron las cajas una por una. CONCLUSIN: Al realizar esta prctica se aprendi a preparar medios de cultivo, tanto las reglas que se deben seguir como el cuidado que se debe tener.

PRCTICA No. 3

TOMA DE MUESTRA

OBJETIVO: Optimizar la recoleccin transporte y conservacin de las muestras microbiolgicas reseando el material necesario y la tcnica de obtencin. FUNDAMENTO: La toma de muestra es el conjunto de procedimientos destinados a obtener una parte representativa cuantitativamente a partir de un todo, en nuestro caso, el paciente, el medio ambiente, etc. RESULTADO: 1.- Abrir el abatelenguas y colocarlo en la lengua de tal manera que sta baje. 2.- Con el hisopo tomar la muestra de los dos pilares tonsilares (amgdalas). 3.- Descargar el hisopo en el medio y quemarlo en el mechero. 4.- Se realiza una estra cruzada y en el agar sangre se pica con la misma asa para crear un ambiente anaerobio para el microorganismo. Crecimiento Bacteriano a las 24 horas de incubacin AGAR ESTAFILOCOCOS 110: AGAR SANGRE: - 2 Colonias - 5 Colonias - Tamao mediano - Tamao grande - Color crema / beige - Color gris - Forma redonda - Forma redonda - Aspecto liso OBSERVACIONES:

DISCUSIONES: Se colocaron las tapas sobre la mesa. CONCLUSIN: Al realizar esta prctica se aprendi la importancia que tiene la esterilizacin en este tipo de trabajos.

PRCTICA No. 14

ANTIBIOGRAMA

OBJETIVO: Identificar los antibiticos que causan susceptibilidad antimicrobiana. FUNDAMENTO: El antibiograma es la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la sensibilidad de una colonia bacteriana a un antibitico o grupo de antibiticos. RESULTADO: Procedimiento 1.-Esterilizar 2.-Sembrar en agar Mueller Hinton con hisopo una cepa del microorganismo en estra masiva (cantidad exacta del microorganismo.) 3.-Colocar el antibiograma en medio del agar 4.-Incubar 37C / 24 hrs *Para saber la cantidad exacta que se pondr del microorganismo en el medio, se coloca en un tubo de 13x100 5ml de agua destilada (csp) y 5ml de McFarland en otro tubo (patrn), agregando cepa por cepa en el primer tubo hasta que ste tenga la misma turbiedad que nuestro tubo patrn. OBSERVACIONES:

DISCUSIONES: No se esteriliz de manera correcta. CONCLUSIN: El antibiograma es una parte muy importante dentro del diagnostico pues sin ste dicho diagnostico no se podra llevar acabo. En esta prctica se aprendi a sembrarse el antibiograma.

PRCTICA No. 14 (PARTE 2)

SUCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA

OBJETIVO: Identificar los antibiticos que causan susceptibilidad antimicrobiana. FUNDAMENTO: Los mtodos de susceptibilidad antimicrobiana o antibiogramas son mtodos in vitro que determinan las susceptibilidades de los microorganismos a una variedad de agentes antimicrobianos, bajo condiciones de laboratorio especficas y estandarizadas. RESULTADO: RESISTENTE: Tetraciclina (14mm) Dicloxacilina Penicilina (14mm) Ampicilina (24mm) Eritromicina SENSIBLE: Gentamicina (21mm) Lovofloxacina (22mm) Cefalotina Cefepime Cefuroxima Cefotaxima Trimetroprim Sulfametaxazol OBSERVACIONES:

DISCUSIONES: No se entendi muy bien el procedimiento para leer el antibiograma. CONCLUSIN: Est prctica fue muy importante pues en sta se aprendi a llevar acabo la susceptibilidad antimicrobiana.

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLGICO industrial y de servicios 108 CBtis 108

REPORTE

Nombre del paciente: Belen Montserrat Lpez Prez Edad: 17 Exudado farngeo Se aisl: Neisseria Catarrhalis Antibiograma: -Sensible a... Gentamicina Lovofloxacina Cefalotina Cefepime Cefuroxima Cefotaxima Trimetroprim Sulfametaxazol -Resistente a Tetraciclina Dicloxacilina Penicilina Ampicilina Eritromicina

CONCLUSIN La bacteriologa es el estudio de las bacterias y de cada una de las enfermedades que estn causan; en este manual se present cada una de las investigaciones sobre stas, incluyendo su morfologa, la manera de teirlas, preparaciones en fresco, fijas, los medios de cultivo y sus ingredientes para que cada uno de los microorganismos sea capaz de desarrollarse dentro de un ambiente adecuado con los nutrientes adecuados, entre otras. La realizacin de las prcticas ha contribuido tambin de manera muy importante para identificar y resaltar los puntos que hay que cubrir y considerar para llevar acabo la implementacin exitosa en el rea de trabajo. Dentro de los puntos considerados con mayor importancia es la de detectar cuales son la necesidades y/o problemas reales de los pacientes, tanto la confianza como la exactitud en los diagnsticos involucrando de esta manera a la tica. Sin ms prembulos est materia, la de procesar tcnicas bacteriolgicas bsicas, cumpli su objetivo, en lo personal al ir recorriendo el camino de lo que son y cuales son algunas de las bacterias, fue ms fcil ir percatando cosas que se ignoraban a las cuales no se les prestaba la suficiente importancia, o se tomaban con simpleza (una enfermedad causada por estreptococos por ejemplo). Por lo consiguiente como tcnicos laboratoristas, el estar informados es indispensable pues la informacin es uno de los recursos ms importantes que nosotros podemos tener. Hay muchas cosas ms que se pueden explicar aqu, pero en conclusin ya todo lo relevante se ha dicho. Si llevamos acabo esos puntos, nos mantenemos al tanto y seguimos dentro del mundo de este mundo, Las bacterias podremos conseguir y desarrollar nuestras habilidades dentro de nuestra rea, as como una experiencia adquirida y una prctica mejorada.

AGRADECIMIENTO
A principio de curso todo era un tiempo de revuelo, de cambios, de cdigos, tcnicas de estudio y de aprendizaje. Eso generaba cierta confusin y momentos desafiantes. Pero hoy terminamos nuestra segunda etapa. Ha sido un ao y medio compartindonos parte de sus conocimientos, gracias qumica por acompaarnos en este transcurso y por ser la nica que ha tratado de inducirnos al verdadero mundo clnico, por apoyarnos acadmicamente tanto como persona, por dedicarnos el detallado tiempo para explicar cada una de nuestras dudas y ensearnos como lo ha hecho Marcando as la diferencia, dndonos un ejemplo de respeto y admiracin. De esta manera me he interesado mucho por los anlisis clnico y eso tambin es agradecindoselo a usted. Gracias de nuevo y que Diosito la bendiga.