UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS DPTO ACADEMICO DE MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGA

EVALUACION DE LA CALIDAD DEL AGUA DE CONSUMO HUMANO EN EL ASENTAMIENDO HUMANO 12 DE OCTUBRE CHICLAYO (MAYO JULIO 2012)
MICROBIOLOGA ACUTICA AUTORES: Cruz Silva Ronald Arturo. Delgado Quiroz Wilder Ronald. Del Maestro Morales Magali Cecilia. Guzmn campos Juana Maritza ASESOR (a):

Msc. FRANCIA ARANA OLGA

Lambayeque, Junio 2012

1. Titulo del proyecto: EVALUACION DE LA CALIDAD DEL AGUA DE CONSUMO HUMANO EN EL ASENTAMIENDO HUMANO 12 DE OCTUBRE - CHICLAYO (MAYO JULIO 2012) 2. Personal investigador: 2.1 Autores: Cruz Silva Ronald Arturo. Delgado Quiroz Wilder Ronald. Del Maestro Morales Magali Cecilia. Guzmn campos Juana Maritza

2.2 Asesora: Dra. Olga Francia Arana

3. Carrera Profesional/Especialidad Biologa/ microbiologa parasitologa

RESUMEN El consumo de agua potable contaminada con microorganismos

patgenos puede ocasionar enfermedades de origen entrico. El objetivo de este trabajo fue determinar y conocer, mediante mtodo de anlisis, la presencia de microorganismos indicadores de calidad sanitaria, tales como coliformes totales y coliformes fecales, en el Asentamiento Humano 12 de Octubre- Chiclayo. Para ello se recolectaron 5 muestras de agua potable de diferentes sitios del Asentamiento Humano tomadas por sorteo entre 60 familias. Para la identificacin microbiolgica se emplearon el mtodo El mtodo a emplear es el de COLIMETRIA TECNICA DE TUBOS MLTIPLES para indicadores de contaminacin fecal: Coliformes totales y Coliformes fecales. Los resultados obtenidos se ha encontrado coliformes totales por encima de los valores permitidos, pero no se ha encontrado coliformes fecales, lo que indica que se debe tener cuidado por parte de la poblacin para depositar su. En las 5 muestras presentaron recuentos mayores de 2 fc/ml para coliformes. Ninguna muestra present coliformes fecales. En conclusin, el mtodo sigue siendo de eleccin para el anlisis de agua potable. Los resultados de la calidad de agua potable presentaron recuentos microbiolgicos fuera de especificaciones, segn las recomendaciones de las normas respectivas, por lo que su consumo puede representar un riesgo para la salud del consumidor.

INTRODUCCION

A los coliformes se les designa en un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia relevante como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos. Descubierta por el bacterilogo alemn Theodor von Escherich en 1860. Von Escherich la bautiz como bacterium coli ("bacteria del intestino", del griego , kolon, "intestino"). Con posterioridad, la microbiologa sistemtica nombrara el gnero Escherichia en honor a su descubridor. El grupo coliforme agrupa a todas las bacterias entricas que se caracterizan por tener las siguientes propiedades bioqumicas: 1. 2. 3. 4. 5. Ser aerobias o anaerobias facultativas; Ser bacilos Gram negativos; Ser oxidasa negativos No ser esporgenas; Fermentar la lactosa a 35 C en 48 horas, produciendo lctico y gas. cido

Tradicionalmente se los ha considerado como indicadores de contaminacin fecal en el control de calidad del agua destinada al consumo humano en razn de que, en los medios acuticos, los coliformes son ms resistentes que las bacterias patgenas intestinales y porque su origen es principalmente fecal. Por tanto, su ausencia indica que el agua es bacteriolgicamente segura. Asimismo, su nmero en el agua es proporcional al grado de contaminacin fecal; mientras ms coliformes se aslan del agua, mayor es la gravedad de la descarga de heces. Los coliformes son una familia de bacterias que se encuentran comnmente en las plantas, el suelo y los animales, incluyendo a los humanos. En general, las bacterias coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo. Por su amplia diversidad el grupo coliformes ha sido divido en dos grupos: coliformes totales y coliformes fecales.

Los coliformes totales son bacterias de morfologa bacilar, Gram (-), aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativas, no esporgenas y capaces de fermentar la lactosa con produccin de cido y gas a 37 C en un tiempo mximo de 48 horas.

Las bacterias coliformes de origen fecal se incluyen dentro de las bacterias entricas o "enterobacterias" y se caracterizan por habitar el tracto gastrointestinal del hombre y otros animales. Este grupo incluye los gneros: Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter. Las heces pueden ser vehculos de transmisin de otras bacterias coliformes que son patgenas como Salmonella y Shigella, algunas de cuyas especies causan infecciones intestinales como la fiebre tifoidea y la disentera bacilar.

Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaz de fermentar la lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales. Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estn formados por Escherichia Coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. stos ltimos se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminacin fecal.

Su presencia se interpreta como una indicacin de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua se halla exenta de organismos productores de enfermedades.

Uno de los principales requisitos para que el agua sea apta para consumo es que est libre de bacterias patgenas para el hombre. Generalmente, los anlisis de rutina no estn dirigidos a la bsqueda directa de microorganismos causantes de enfermedades que se transmiten a travs del agua (ej: fiebre tifoidea, clera, etc.).

Por lo general la colimetra busca detectar la presencia de microorganismos caractersticos del intestino de mamferos. La presencia de stos indicara contaminacin fecal en las fuentes de agua utilizadas. Asimismo se utiliza como indicador de contaminacin el recuento de bacterias totales. En un primer ensayo se busca detectar la presencia de bacterias coliformes totales, basndose en la capacidad de dichos organismos de fermentar lactosa con la produccin de cido y gas. Se considera indicador positivo la produccin de gas, dado que otros microorganismos (no coliformes) son capaces de producir acidez y no gas.

Un segundo paso consiste en la diferenciacin entre las bacterias coliformes de origen fecal y no fecal. El primer grupo est representado por E. coli fecal cuyo hbitat es el intestino humano y el de otros animales. El segundo grupo, antiguamente llamado IAC, est representado por bacterias cuyo origen es el suelo y la vegetacin (Escherichia sp., Enterobacter, Citrobacter y Klebsiella). Finalmente, la cuantificacin se hace por el mtodo del nmero ms probable, que es un mtodo estadstico basado en la teora de las probabilidades de Poisson. Para ello se tiene en cuenta el nmero de porciones de la muestra que se siembra en el medio original de crecimiento y el nmero de dichas porciones que contienen coliformes.

I.

OBJETIVOS Determinar la contaminacin fecal de la muestra a tratar mediante la tcnica de los tubos mltiples (Nmero ms probable) Conocer y aplicar la tcnica del Nmero Ms Probable (NMP) para la numeracin de coliformes totales y fecales.

II.

ANTECEDENTES

Segn la clasificacin de Clark y Pagel los gneros Escherichia, Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter pertenecientes a la familia de las enterobacterias. Sin embargo, hay autores que discrepan de esta clasificacin como Lecrerc y Mossel [7] que incluyen Serratia y Buttiauxella.

Flanagan ha resumido la interpretacin de la presencia de E. coli como sigue: "Cuando los E. coli estn presentes en un gran nmero, la interpretacin es que ha tenido lugar una polucin fuerte y/o reciente por desechos animales o humanos. Si el nmero de E. coli es pequeo indica que la polucin, del mismo tipo, es menos reciente o menos importante. Si se detectan coliformes pero no E. coli seala que la polucin es reciente pero de origen no fecal o de origen fecal pero lejana, de modo que los coliformes intestinales no han sobrevivido".

E. coli patgenos, de los cuales existen muchos serotipos diferentes capaces de causar gastroenteritis en humanos y animales, siendo stas especialmente serias en recin nacidos y nios de edad inferior a 5 aos. Pese a que se considera que los E. coli patgenos representan menos del 1% del total de coliformes presentes en el agua contaminada, basta con 100 organismos para causar una enfermedad.

En 1904, Eijkman

propuso que la produccin de gas a partir de

glucosa a 46 C podra ser un buen mtodo para la determinacin de coliformes de origen fecal. Una modificacin de este mtodo sirve para definir las bacterias coliformes fecales termotolerantes, dentro de los coliformes termotolerantes aparte de la E. coli, se pueden encontrar, entre otros menos frecuentes, Citrobacter freundii y Klebsiella pneumoniae.

Bray public en 1.945 el primer estudio epidemiolgico sobre la presencia de cepas de E. coli en 42 de los 44 recin nacidos con diarrea que estaban ingresados en un hospital londinense, se han descrito muchos episodios de trastornos debidos a la contaminacin producida por esta bacteria.

La OMS dio las recomendaciones para la calidad bacteriolgica de aguas potables en 1993, estas directrices se enmarcan dentro de nuevos criterios de contaminacin, segn los cuales los organismos coliformes se analizan solo como sealizadores de la eficacia del tratamiento y la integridad del sistema de distribucin no como indicadores de la presencia de patgenos, mientras que los organismos coliformes termotolerantes, en este caso los E. coli se analizan como indicadores de polucin fecal.

III.

MATERIALES Y METODOS

3. 1.MATERIALES 3.1.2 Material biolgico

TIPO DE ANLISIS: MUESTRA: PROCEDENCIA: TEMPERATURA Y pH: Microbiolgico Agua de pileta y casa asentamiento humano 12 de octubre - Chiclayo 27 C / neutro

DESCRIPCIN DE LA MUESTRA: Color: Olor: Turbidez: Sedimento: incoloro inodoro transparente no presento

3.1.3 Material de laboratorio 5 tubos de dilucin 10 con caldo Lauril sulfato triptosa doble

concentrado con campana de Durham. tubos de dilucin, con caldo Lauril sulfato triptosa

concentracin simple con campana de Durham. Diluyente: Solucin salina fisiolgica estril Pipetas: 1 ml., 5 ml. y 10 ml. Confirmacin: Los tubos gas (+) sembrar en placas con agar ENDO. Para coliformes termotolerantes: Sembrar de los tubos gas (+) en tubos con medio EC. con campana de Durham.

3.1.4) POBLACION Y MUESTRA DE ESTUDIO La poblacin objeto de estudio est constituido el agua que consumen 60 familias que viven en el asentamiento humano 12 de octubre Chiclayo, considerando una muestra de 4 familias y la pileta de la cual se colecta el agua.

3.2. METODOS MTODO DE LOS TUBOS MLTIPLES- TECNICA DEL NUMERO MAS PROBABLE (NMP)

Es la determinacin del nmero de coliformes mediante siembra de distintos volmenes del agua a analizar en series de tubos con caldo lactosado y resiembra en medios de cultivo selectivos incubando a temperaturas adecuadas. El procedimiento comprende las pruebas: presuntiva, de confirmacin de coliformes totales y de confirmacin de coliformes fecales. 3.2.1. PROCEDIMIENTO Preparacin de la muestra Consiste en agitar la muestra de arriba hacia abajo de 20 a 25 veces, en ningn momento se debe dejar reposar la muestra.

Coliformes totales
Siembra Sembrar 10 ml de la muestra en los la seria 1 de 5 tubos que contienen caldo doble concentrado. Se recomienda soltar el inoculo en el fondo del tubo Luego tomar 1 ml de la muestra y agregar en los en la serie 2 de 5 tubos con caldo de concentracin simple. Nuevamente tomar 0.1 ml de la muestra y agregarle la serie 3 de 5 tubos con caldo de concentracin simple.

 Incubar a 35-37 C por 24 48 horas Evaluar Si se observa turbidez y produccin de gas: La prueba se considera positiva, debiendo anotar el nmero de tubos positivos para posteriormente hacer el clculo del NMP. Anota los tubos gas(+) y se codifica Confirma coliformes totales En placas de agar ENDO, se siembra por agotamiento y estra, cada tubo gas (+) Se incuba a 35C por 24h Se evalan las placas Se confirma el nuevo cdigo con el crecimiento de las colonias rojas brillantes. Comparar cdigos con la tabla de NMP y anotar resultados NMP/ml nmero de coliformes totales

Coliformes Termotolerantes Utilizar los tubos con gas (+) de la prueba de coliformes totales o De cada tubo tomar 1-2 asadas (asa en anillo con 3mm de dimetro) y llevar al tubo que contenga Caldo EC Incubar a 44.5 C por 24 48 h Observar la presencia de gas Realizar lectura y anotar el cdigo del resultado NMP /ml numero de coliformes termoestables

Se puede hacer una identificacin de las colonias de las placas ENDO, haciendo luego pruebas bioqumicas como IMVIC para identificacin COLIFORMES.

ORGANIGRAMA DE FLUJO PARA COLIFORMES TOTALES - NMP

ORGANIGRAMA DE FLUJO PARA COLIFORMES FECALES (TERMOTOLERANTES) - NMP

Colimetra

Prueba Presuntiva
Inoculacin en caldo lactosado No produccin de gas

Produccin de gas +

Fin de la prueba

Prueba Confirmativa
Resiembra a partir de los tubos positivos caldo lactosado Siembra de muestras + en ENDO Colonias pequeas, con centro oscuro y bril o metlico +

O Siembra en tubos con Caldo Brila

Produccin de gas +

Terminacin de la prueba
Colonias ms tpicas de siembra por estra ENDO Coloracin de Gram: Bacilos Gram(-) no Mara Cecilia Arango Jaramillo esporulados

IV.

RESULTADOS Coliformes Totales: En los tubos con caldo lauril sulfato triptosa doble concentrado hubo produccin turbidez y tambin de gas.

Prueba Confirmativa (Agar ENDO).

Lectura:

En las placas no se observo las colonias rojas con brillo metlico que son las caractersticas para determinar coliformes.

Coliformes termotolerantes:
De los tubos positivos en la prueba presuntiva se sembr en CALDO E.C

Lectura: Grupo 1 C T CTT 1 0 0 0 0 0 Grupo 2 CT CTT 5 0 3 1 0 0 Grupo 3 CT CTT 0 0 0 0 0 0 Grupo 4 CT CTT 2 0 1 0 0 0 Grupo 5 CT CTT 0 0 0 0 0 0

Dilucin doble 10ml Dilucin 1ml Dilucin 0.1ml

GRUPO 1 GRUPO 2 GRUPO 3 GRUPO 4 GRUPO 5

NMP 2 ufc/100ml 109 ufc/100ml 2 ufc/100ml 7 ufc/100ml 2 ufc/100ml

TABLA 01 ndice de NMP y limites de confianza 95% para diversas combinaciones de resultados positivos y negativos cuando se utilizan cinco alcuotas de 10mL, cinco alcuotas de 1mL, y cinco alcuotas de 0.1mL. Nmeros de tubos positivos del total de 5 tubos de 10mL
0 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 4 4 4 4

ndice de NMP por

Limites de confianza 95% Inferior

<0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 <0.5 1 1 2 2 3 1 2 2 4 4 5 5 3 5 5 7 9 7 9 9

5 tubos de 5 tubos de 100mL 1mL

0 1 2 0 0 1 1 2 0 0 1 1 2 3 0 0 1 1 2 2 3 0 0 1 1 1 2 2 3 0 0 1 0 1 0 0 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 1 0 0 1 0 1 2 0 1 0

Superior
7 7 11 7 11 11 15 15 13 17 17 21 21 28 19 25 25 34 34 46 46 31 46 46 63 78 67 78 80

0.1mL
0 2 2 4 2 4 4 6 6 5 7 7 9 9 12 8 11 11 14 14 17 17 13 17 17 21 26 22 26 27

4 4 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5

3 4 0 0 0 1 1 1 2 2 2 3 3 3 3 4 4 4 4 4 5 5 5 5 5

1 0 0 1 2 0 1 2 0 1 2 0 1 2 3 0 1 2 3 4 0 1 2 3 4

33 34 23 31 43 33 46 63 49 70 94 79 109 141 175 130 172 221 178 345 240 348 542 918 1609

11 12 7 11 15 11 16 21 17 23 28 25 31 37 44 35 43 57 90 120 68 120 180 300 640

93 93 70 89 114 93 120 150 130 170 220 190 250 340 500 300 490 700 850 1000 750 1000 1400 3200 5800

En la tabla se puede apreciar los resultados de los grupos de practica realizada, en el grupo numero 5, no hubo presencia de gas, ya que esta agua era de la pileta de donde recolectan su agua la poblacin del 12 de octubre Chiclayo. En cambio en los dems grupos estn dentro del rango permitido,

exceptuando el grupo 2 que tenia, los valores de sus resultados por encima de lo permitido para coliformes totales, pero no detectndose coliformes fecales.

V.

CONCLUSIONES

El lmite permitido es hasta entre 50-500 UFC/ml segn la norma de

aguas peruana, en cambio que la OMS solo permite 1 UFC /ml, as tenemos que la muestra analizada se obtuvo como recuento de coliformes < 2 UFC/ml, por lo tanto esto nos indica que esta agua no esta apta para el consumo, ya que no se encuentra dentro de los parmetros permitidos por la OMS.

En una muestra se ha encontrado coliformes totales por encima de

los valores permitidos, pero no se ha encontrado coliformes fecales, lo que indica que se debe tener cuidado por parte de la poblacin para depositar su agua.

VI.

BIBLIOGRAFIA

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Propuesta de Directiva del Consejo relativa a la calidad de las aguas destinadas al consumo humano. Diario Oficial de las Comunidades Europeas. (95/C 131/03) de 30 de Mayo de 1.995.

Microbiologa de las aguas. Rheinheimer, G. Editorial Acribia S.

A. Zaragoza. 1.987.