VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS

VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS, FISICOQUMICOS Y MICROBIOLGICOS
Licda. Lucrecia Arriola

Guatemala, 11 de septiembre de 2012
VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS I. GENERALIDADES
2 2
OBJETIVOS DEL CURSO

y 1. Intentamos contestar las siguientes preguntas:
Qu Q es validar? lid ? Por qu valido? Para qu valido? Cundo valido? Cmo mo val valido? do? y 2. Conocer la diferencia entre Validacin y Verificacin y 3. 3 Conocer C l los requisitos de d l las normas internacionales sobre la validacin de mtodos
VALIDACIN??
LA VALIDACIN DE MTODOS
Por qu es necesaria la validacin analtica?
Cul es el propsito de la validacin analtica?
Qu es validacin de mtodos analticos?

y Validacin:
Confirmacin mediante el suministro de evidencia objetiva de que se han cumplido los requisitos para una utilizacin o aplicacin especfica p prevista. p de un procedimiento analtico: Procedimiento para establecer pruebas documentales que demuestren cientficamente que un mtodo analtico tiene las caractersticas de desempeo que son adecuadas para cumplir los requerimientos de las aplicaciones analticas pretendidas pretendidas.
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y Validacin
Qu es validacin de mtodos analticos?

y Es realizar un conjunto de pruebas de manera de:
a) Comprobar varios aspectos del comportamiento del mtodo. b) E Establecer bl que sirve i para el l fin fi previsto. i
y La L
validacin lid i i li implica l la d demostracin t i d de l la determinacin de las fuentes de variabilidad y del error sistemtico y al azar de un procedimiento, procedimiento no slo dentro de la calibracin sino en el anlisis de muestras reales.
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Qu es verificacin de mtodos?
y Verificacin:
Confirmacin mediante la aportacin de evidencia objetiva de que se han cumplido los requisitos especificados.
y Indicar el proceso que lleva a cabo el
laboratorio con el fin de demostrar su capacidad para ejecutar correctamente un mtodo normalizado cuando lo realiza exactamente como est descrito d i en la l norma.
Para qu valido un mtodo analtico?

Para cumplir con requisitos de las normas internacionales: a) BPM (Industria Farmacutica) ) Norma m ISO 17025 ( (Acreditacin b) de Laboratorios de Ensayo y de Calibracin) c) ) Norma N ISO 15189 (Acreditacin (A dit i de Lab. Clnicos) d) Organismos Internacionales como FAO, USP y otras farmacopeas, OMS, ICH (Conferencia Internacional Tripartita sobre Armonizacin)
Licda. Lucrecia Arriola 9
Para qu valido un mtodo analtico? Para emitir resultados exactos y precisos que sean reproducibles precisos, para generar p g la confianza en nuestros clientes.
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Cules son los tipos p de mtodos?

1.Mtodos Normalizados: Mtodo analtico desarrollado por un organismo de normalizacin li i u otro t organismo is reconocido cuyos mtodos son generalmente aceptados por el sector tcnico correspondiente. (Ref. ILAC-G18). NOTA: El desarrollo del mtodo incluye la etapa de su validacin.
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2. Mtodos No Normalizados: Mtodo analtico desarrollado por un tercero o que ha sido adaptado por el laboratorio a partir de un mtodo normalizado. (Ref. ILACG18). G18) NOTA: El desarrollo del mtodo, as como su adaptacin, d i incluyen i l l la etapa de su validacin.
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3. Mtodos Desarrollados p por el Laboratorio: Mtodo analtico que no se encuentra en normas u otras colecciones de mtodos, ni en publicaciones de terceros, habiendo sido desarrollado por el propio laboratorio. laboratorio NOTA: El desarrollo del mtodo incluye la etapa de su validacin. validacin
Qu mtodos se validan?
1. Los Mtodos No Normalizados. 2. Los Mtodos diseados por el Laboratorio. 3.Los Mtodos Normalizados que han sido modificados por el Laboratorio o utilizados fuera del alcance previsto.
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Qu mtodos se validan?
La val validacin dac n de los mtodos de ensayo debe debe: Reflejar las condiciones reales de ensayo. L La extensin xt si de d la l validacin lid i necesaria s i depender d p d del mtodo y su aplicacin. L La debe d b realizar li p s n l calificado personal lifi d para p esa s actividad. En todos t d s los l s casos c s s un parmetro p rm tr para p r la l validacin v lid cin de ensayos es la descripcin del mtodo de ensayo.
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Qu mtodos se verifican?
1.Los Mtodos Normalizados. 2. Los Mtodos Oficiales. 3 Los Mtodos de Org. 3. Org Nacionales o Internacionales Reconocidos.
Es recomendable d bl la l utilizacin tili i de d mtodos t d s normalizados li d s cuando stos estn disponibles y sean apropiados. laboratorio l b t i d b debe confirmar fi m que puede d aplicar li correctamente los mtodos normalizados antes de las pruebas o calibraciones. Si el mtodo normalizado cambia, p la confirmacin se repetir ". USP
"El
Cmo se dividen los mtodos segn el RTCA 11 03 39: 06 ? RTCA. 11.03.39:

1.
C Categora I
2 Categora II 2. 3 Categora III 3. 4. . Categora g IV V 5. Mtodos Microbiolgicos

Qu procedimientos analticos se validan 03 39: 06 ? segn el RTCA RTCA. 11 11.03.39:

Se deben validar los siguientes g procedimientos analticos p qumicos, fsicos y microbiolgicos: Categora I: pruebas cuantitativas del contenido del principio activo, son procedimientos d qumicos o microbiolgicos que miden el analito presente en una muestra determinada. m m
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Categora II: pruebas para la determinacin del contenido de impurezas o de valores lmites para el control de impurezas. Pueden ser pruebas cuantitativas o una prueba cualitativa para determinar si la impureza p est presente en la muestra por encima o por debajo de un valor l lmite l it especificado. ifi d

Las categoras I y II miden con exactitud caractersticas de pureza de la muestra. parmetros de validacin requeridos por prueba b cuantitativa tit ti son diferentes dif t a los l d de prueba cualitativa de cumplimiento de lmite. las Los una una
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Qu procedimientos analticos se validan segn el RTCA. 11.03.39: 06 ?

Categora III: son pruebas fisicoqumicas que miden caractersticas propias del desempeo del medicamento, por ejemplo la prueba de disolucin. Las caractersticas de la validacin son diferentes a las de l otras las t pruebas, b aunque las l pueden d incluir. i l i
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Categora IV: pruebas de identificacin. Aquellas que se realizan li para asegurar s l identidad la id tid d de d un analito lit en una muestra. Esto normalmente se realiza por comparacin de una p propiedad p de la muestra, contra la de un estndar de referencia, por ejemplo espectros, comportamiento cromatogrfico, reactividad qumica y pruebas microcristalinas. microcristalinas
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Pruebas microbiolgicas microbiolgicas: aquellas que se realizan para asegurar la calidad microbiana del medicamento.
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Cmo seleccionar e implementar un mtodo analtico nuevo?

1. De preferencia, que sea un mtodo normalizado n rmalizad de versin reciente. reciente 2. Que el mtodo sea apropiado para el tipo de muestra a analizar. analizar 3. Determinar si el Laboratorio cuenta con personal capacitado para el anlisis a realizar. 4 Determinar si el Laboratorio cuenta 4. con las instalaciones y condiciones ambientales requeridas para el anlisis. lisis

5. Descripcin del procedimiento incluyendo el alcance del mtodo (aplicabilidad, tipo), tipo de compuestos y de matriz.
6. Detalle de reactivos, estndares de referencia que se utiliza. 7. Lista de equipos y requisitos de funcionamiento y rendimiento. 8. Definir los parmetros del mtodo. 9. Detalle de condiciones e i l t i del d l mtodo, t d incluyendo i l d implementacin la preparacin de la muestra.
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10. Definir los estadsticos representativos. procedimientos y clculos
11. Definir los procedimientos para 11 el control de calidad en la rutina. 12. Definir los grficos representativos, cromatogramas, espectros y curvas de calibracin. 13. Definir los criterios de aceptacin / rechazo de los datos. 14. Consideraciones de seguridad.
Etapas para desarrollar sarro ar un mtodo m to o analtico ana t co
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Qu requisitos debo cubrir antes de validar q un mtodo analtico?
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Qu son los parmetros del desempeo del mtodo analtico

Son las S l s propiedades, i d d s caractersticas t sti s o capacidades id d s cuantificables del mtodo que indican su grado de calidad; cal dad; incluyen ncluyen exact exactitud, tud, efecto matr matricial, c al, repetibilidad, precisin intermedia, reproducibilidad, especificidad, lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, tifi i li linealidad, lid d rango, sensibilidad, ibilid d robustez, fortaleza y otras caractersticas relacionadas con los resultados obtenidos por el mtodo.
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Qu parmetros del desempeo se determinan en cada mtodo analtico?

Parmetros de los procedimientos analticos fisicoq g g ICH. qumicos y p potencia microbiolgica, segn
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Segn la USP 34:
31 31

Parmetros de desempeo de los procedimientos g microbiolgicos
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Extensin de la Validacin
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Qu son los parmetros del desempeo del mtodo t d analtico lti

Son las S l s propiedades, i d d s caractersticas t sti s o capacidades id d s cuantificables del mtodo que indican su grado de calidad; cal dad; incluyen ncluyen exact exactitud, tud, efecto matr matricial, c al, repetibilidad, precisin intermedia, reproducibilidad, especificidad, lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, tifi i li linealidad, lid d rango, sensibilidad, ibilid d robustez, fortaleza y otras caractersticas relacionadas con los resultados obtenidos por el mtodo.
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EXACTITUD DE LOS RESULTADOS ANALTICOS

y EXACTITUD: Proximidad P ximid d de d la l concordancia n d n i entre nt
el resultado de una medicin y un valor verdadero del mensurando m u
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Estimacin de la Exactitud
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1. Agregando cantidad conocida del estndar al producto
a. Determinar por duplicado el contenido promedio del analito en la muestra con el mtodo a validar. b Enriquecer las muestras con estndar: para b. preparar las soluciones, se mantiene constante c nstant la a cant cantidad a de mu muestra stra t tomada ma a y se agregan cantidades variables del estndar.
Agregando cantidad conocida del estndar al producto
c.
L exactitud es evaluada utilizando un m La mnimo m de nueve determinaciones, tres concentraciones y tres determinaciones de cada concentracin. (por ejemplo: concentraciones de 80%, 80% 100% y 120% de la concentracin normal de trabajo del mtodo; o 100%, 125% y 150% cuando no se puede reproducir la matriz d l analito) del li )
d. Calcular el % de Recuperacin con la frmula:

% Rec.= (valor encontrado / valor verdadero o de referencia) * 100%
y
Criterio de Aceptacin y Documentacin: El porcentaje de recuperacin puede estar entre 90 y 110% del valor terico. Una recomendacin +/ 4 veces la desviacin estndar es usar +/relativa. Para Disolucin: 97% - 103% Para Muestras biolgicas: 15% del valor verdadero
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y
p Criterio de Aceptacin y Documentacin: Para Trazas: Menor a 100 ppb: 60% - 110% de recuperacin Mayor a 100 ppb: 80% - 110% de recuperacin Menos de 1 ppb: 70% - 120% de recuperacin p
Para cada muestra, reportar el valor terico, el valor del ensayo y el porcentaje de recuperacin. Calcular el promedio, la desviacin di l desviacin d i i estndar, t d d i i estndar t d relativa (coeficiente de variacin) y el porcentaje de recuperacin para todas las muestras. Llevar un registro de los resultados en una hoja de datos.
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2. Comparando los resultados de un estndar o Material de Referencia Certificado
y
Determinar por duplicado el valor promedio del estndar o material de referencia certificado por el mtodo a validar. lid C Comparar el l resultado lt d obtenido bt id con el l valor l declarado. Tomar en cuenta la disponibilidad y estabilidad del estndar o MRC, as como la incertidumbre que tenga el valor verdadero. La exactitud es evaluada utilizando un mnimo de 30 determinaciones: 5 concentraciones y 6 determinaciones concentracin de cada concentracin.
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2. Comparando los resultados de un estndar o Material de Referencia Certificado
y
Criterio de Aceptacin y Documentacin: El porcentaje de recuperacin puede estar entre 98 y 102% del valor terico o 2% de error relativo. Se calcula con la siguiente frmula: % Rec.= (valor encontrado / valor verdadero o de referencia) * 100%
Para cada muestra, reportar el valor terico, el valor del ensayo y el porcentaje de recuperacin. Calcular el recuperacin promedio, la desviacin estndar, desviacin estndar relativa (coeficiente de variacin) y el porcentaje de recuperacin para todas las muestras. Llevar un registro de l s resultados s lt d s en n una n hoja h j de d datos. d t s los
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3. Comparando los resultados con un mtodo oficial con exactitud exact tud b en definida def n da bien
y
La muestra debe ser analizada utilizando el mtodo a validar y un segundo mtodo bien caracterizado, caracterizado el cual debe tener una exactitud bien definida y establecida. Se analizan 6 muestras por duplicado a la concentracin normal de trabajo por ambos mtodos.
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3. Comparando los resultados con un mtodo oficial con exactitud bien definida
y
Criterio de Aceptacin y Documentacin: Se lleva a cabo un anlisis de varianza, del porcentaje de recuperacin o del error relativo en porcentaje, para determinar si hay o no diferencia significativa entre la exactitud de los mtodos comparados. p Para cada muestra, reportar el valor terico, el valor del ensayo y el porcentaje de recuperacin. Calcular el promedio, la desviacin di l desviacin d i i estndar, d d i i estndar d relativa (coeficiente de variacin) y el porcentaje de recuperacin para todas las muestras. Llevar un registro de los resultados en una hoja de datos.
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PRECISIN DE LOS RESULTADOS ANALTICOS

y PRECISIN: Es el grado de concordancia entre
los resultados independientes de una medicin, medicin obtenidos en condiciones estipuladas, ya sea de repetibilidad p o de reproducibilidad p y depende p de la distribucin de los resultados sin estar relacionada con el valor verdadero.
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PRECISIN DE LOS RESULTADOS ANALTICOS

Hay 3 niveles para determinar la Precisin del Mtodo: 1.REPETIBILIDAD: Coincidencia entre los resultados de mediciones di i sucesivas i realizadas li d en las l mismas i condiciones de medicin. 2.REPRODUCIBILIDAD: Coincidencia entre los resultados de mediciones realizadas en diferentes condiciones de medicin en un mismo laboratorio o entre 2 laboratorios. laboratorios 3.PRECISIN INTERMEDIA: Medida de la precisin de los resultados de un mtodo en condiciones diferentes d analista, de li t d da, equipo i y lote l t de d reactivos, ti d t dentro del mismo laboratorio. No es necesario determinar precisin intermedia, p , cuando se ha determinado reproducibilidad.
PRECISIN- REPETIBILIDAD
Para determinar la precisin entre ensayos o repetibilidad, se trabaja con submuestras de una muestra homognea, bajo las mismas condiciones medicin: el mismo procedimiento de medicin, el mismo observador, observador el mismo instrumento de medicin, medicin en un perodo corto de tiempo. Hay 2 formas de determinarla:
1. Hacer un mnimo de 9 determinaciones: 3 rplicas a 3 concentraciones diferentes o 9 determinaciones al 100% de la concentracin normal de trabajo. 2. hacer un mnimo de 6 determinaciones a una concentracin que corresponda con la de la muestra problema. 47 Licda. Lucrecia Arriola
PRECISIN- REPETIBILIDAD
Criterio de Aceptacin y Documentacin: Se establece de acuerdo a un valor mximo aceptable para el parmetro escog escogido, do, segn el tipo de anlisis y su propsito especfico. Registrar los resultados en el formato de datos, as como los clculos de la media y los parmetros de dispersin escogidos: s, s SDR, SDR CV o intervalo de confianza.
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PRECISIN INTERMEDIA
Se determina realizando un mnimo de seis determinaciones al 100% de la concentracin esperada. (Diferentes das, analistas y equipo). Criterio de Aceptacin p y Documentacin: RSD < 2,0% para macrocomponentes RSD < 10,0% para componentes menores RSD < 3,0% 3 0% para mtodos t d empleados l d en disolucin di l i RSD < 10% para muestras biolgicas Registrar los resultados, as como los clculos de la media, la desviacin estndar, la desviacin estndar relativa (coeficiente de variacin) y el intervalo de confianza. confianza
PRECISIN- REPRODUCIBILIDAD
Se determina realizando un mnimo de seis determinaciones al 100% de la concentracin esperada. ( (Se realiza li l las d determinaciones i i analizando li d en diferentes dif das, por diferente analista, horas del da, equipos). Criterio de Aceptacin y Documentacin: Se espera una variabilidad mayor, que para el caso de la repetibilidad. Registrar los resultados, as como los clculos de la media, la desviacin estndar, la desviacin estndar relativa (coeficiente de variacin) y el intervalo de confianza. No se realiza precisin intermedia cuando se estima la reproducibilidad. d ibilid d
ERROR EN LOS RESULTADOS ANALTICOS

y ERROR: Resultado de una medicin menos un
valor verdadero del mensurando.
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Determinacin de Exactitud y de Precisin del mtodo analtico

y La
norma ISO- 5725 nos describe las cons derac ones que se deben tomar en cuenta para consideraciones determinar la exactitud y la precisin de una medicin: 9 Contar con un mtodo establecido. 9 El nmero de factores que cambiarn en la d t min in determinacin. 9 El alcance de medicin. 9 El nmero de puntos a realizar. realizar 9 La disponibilidad de los materiales y quipos. 9 El nmero de repeticiones repeticiones. 9 Cronograma para realizar las mediciones.
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ESPECIFICIDAD
Es la habilidad que muestra un mtodo para distinguir entre un analito e impurezas conocidas, conocidas precursores sintticos, metabolitos, o productos de degradacin. Esta se muestra en su resolucin hacia estos componentes. y Documentacin Imprimir cromatogramas o datos que muestren la resolucin de un mtodo. y Criterio de Aceptacin Los componentes contaminantes no deben interferir con el anlisis del analito en cuestin. cuestin .
LMITE DE DETECCIN
Determinar la menor concentracin a la que se detecte el analito en la matriz de la muestra. y Documentacin D t i Imprimir el cromatograma o registrar la menor concentracin detectable en una hoja de registro. y Criterio de Aceptacin y un lmite de deteccin mnimo. Sin embargo, g p para No hay mtodos cromatogrficos el lmite superior suele ser un valor de al menos tres veces la lnea base (o nivel de ruido) Para otros instrumentos puede ser el lmite de ruido). operacin del instrumento, segn lo haya establecido el fabricante. Canadian Health Protection Branch (CHPB) establece una razn de 3:1 entre la seal y el ruido.
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LMITE DE DETECCIN
Para Mtodos No Instrumentales:
y Se preparan 10 blancos independientes y 10 blancos
enriquecidos a la concentracin ms baja aceptada. Una vez preparadas las soluciones, soluciones se llevan a cabo las mediciones de cada una y posteriormente se calcula la desviacin estndar de cada g grupo p de datos. deteccin:
y Con estos datos se puede calcular el lmite de
LD = Valor promedio del blanco + 3S

LMITE DE CUANTIFICACIN
Determinar la menor concentracin en la que un anal to en la matr z/muestra puede ser determ nada analito matriz/muestra determinada con la exactitud y precisin requeridas para el mtodo en particular. Este valor puede ser la menor concentracin t i en la l curva del d l patrn. t
y Documentacin y Imprimir el cromatograma o anotar el dato de la
j de menor concentracin cuantificable en la hoja datos. Proveer datos que demuestren exactitud y precisin requeridas en el criterio de aceptacin.
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LMITE DE CUANTIFICACIN
y Criterio de Aceptacin
El lmite de cuantificacin para mtodos cromatogrficos es la concentracin que proporciona una razn seal a ruido con una relacin de 10 a 1 y que es menor o igual a ruido, 10% de la precisin, o una relacin de 20 a 1 y es menor o igual a 5% de la precisin. En el lmite de cuantificacin, se deben cumplir los criterios de aceptacin de exactitud y linealidad. CHPB establece que el de bl l lmite l i d cuantificacin ifi i es el l mejor j estimado de una concentracin baja, que derive en una desviacin estndar relativa de aproximadamente 10%, p , en, al menos, seis rplicas.
LINEALIDAD
Capacidad de un mtodo analtico para generar resultados directamente proporcionales a la concentracin del analito o valor del parmetro de la muestra, muestra dentro de un rango.
y Hay H 2 formas f d determinar de d t i l linealidad la li lid d:
1. Preparar soluciones patrn de por lo menos cinco diferentes concentraciones del estndar, que estn distribuidas regularmente y que cubran del 80%-120% o 50%-150%, 5 5 , del intervalo nt r a o de tra trabajo ajo esperado, sp ra o, con diluciones a partir de una misma solucin madre y analizando en duplicado para cada dilucin, o realizando por duplicado la solucin madre y analizando 1 vez cada dilucin.
LINEALIDAD
2)Usar seis rplicas por concentracin. Analizar las soluciones conforme el mtodo en cuestin.
y Criterio de Aceptacin y Documentacin:
La curva de L d calibracin lib i se grafica fi colocando l d l las concentraciones de las soluciones en el eje horizontal (x) y las respuestas p del instrumento en el eje j vertical (y), esta relacin debe ser lineal con un coeficiente de determinacin (r2) de por lo menos 0.98. (Es preferible 0 99) 0.99). Los valores deben caer dentro de una zona horizontal angosta, los que queden fuera no son aceptables para ser incluidos en el intervalo normal de t b j trabajo. En donde:
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LINEALIDAD
y CV menor o igual a 2.0% (desviacin estndar relativa o y
y y
coeficiente de variacin) r mayor o igual a 0.99 (el coeficiente de correlacin es una medida del grado de asociacin entre las mediciones y la concentracin del analito) r2 mayor o igual a 0.98 (el coeficiente de determinacin mide la exactitud con la que se ajusta la curva de regresin a los valores experimentales de y) b aproximadamente igual a 0 (intercepto de la lnea) m igual a la sensibilidad del sistema (pendiente de la lnea)
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Evaluacin de la Linealidad
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Evaluacin de la Linealidad
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RANGO O INTERVALO
Intervalo entre la concentracin mxima y mnima de anal to en la cual se puede determinar determ nar al analito anal to con analito un nivel adecuado de precisin, exactitud y linealidad utilizando el mtodo en cuestin.
y a)
Procedimiento:
V ifi l mtodo t d analtico lti proporciona i y Verificar que el
linealidad, precisin y exactitud aceptables cuando se aplica a muestras que contienen el analito en los extremos y dentro del intervalo.
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RANGO O INTERVALO
y Deben considerarse los rangos especificados mnimos
que se indican nd can a cont nuac n continuacin: concentracin de prueba
y Valoracin de macrocomponentes 80-120% de la y Uniformidad de contenido y Prueba de disolucin
70-130% o el i t l ms apropiado i d segn l M f intervalo la Monografa. del intervalo especificado. 20% p por encima 50%- 120% LC o 50%
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y Cuantificacin de impurezas
RANGO O INTERVALO
Criterio de Aceptacin y Documentacin:
y Determinar que los niveles de precisin, exactitud y
linealidad de las mediciones utilizando el mtodo a validar, en el rango de las concentraciones del analito cumple con su respectivo criterio de aceptacin.
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VALIDACIN DE MTODOS MICROBIOLGICOS
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Validar mtodos microbiolgicos requiere: 1. Comparar con un MTODO DE REFERENCIA. 2. Usar cepas de referencia y cepas de referencia certificadas.(Material de referencia). 3. LA EVALUACIN SISTEMTICA DE FACTORES. 4 Ensayos Interlaboratorios. 4. Interlaboratorios 5. La estimacin de la incertidumbre.
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Lmite de deteccin El nmero ms bajo de microorganismos que pueden ser detectados, pero en nmeros que no pueden ser estimados exactamente. Lmite de cuantificacin Aplicado a pruebas microbiolgicas cuantitativas. El nmero ms bajo de microorganismos, microorganismos dentro de una variabilidad definida, que pueden ser contados bajo las condiciones experimentales del mtodo bajo evaluacin.

Cultivos de referencia Termino colectivo para la cepa de referencia y los stocks de referencia. Material de referencia Material suficientemente homogneo y estable en relacin a una o ms propiedades especificadas, el cual ha sido establecido como idneo para el uso previsto, en un proceso de medicin.
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Sensibilidad La fraccin del nmero total de cultivos positivos o colonias correctamente asignadas en una presunta inspeccin (7). Especificidad (selectividad) La habilidad del mtodo para detectar el rango requerido de microorganismos que podran estar presentes en la muestra.
70

Los mtodos de ensayos estandarizados consideran validados. Sin embargo, el mtodo ensayo especfico para ser utilizado por determinado laboratorio para el anlisis de producto especfico necesita mostrar que adecuado para su uso en la recuperacin bacterias, levaduras y mohos en la presencia producto especfico. especfico se de un un es de del
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El laboratorio debe demostrar que los criterios de desempeo del mtodo de ensayo estndar pueden ser satisfechos por el laboratorio antes de introducir el ensayo con propsitos de rutina (mtodo de verificacin) y que el mtodo de ensayo especfico para el producto especfico es adecuado (adecuacin del mtodo de ensayo incluyendo controles positivos y negativos). negativos)
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Los mtodos de ensayo no basados en compendios u otras referencias reconocidas deben ser validados antes de su uso. La validacin debe incluir, cuando sea apropiado, determinacin de la exactitud, precisin, especificidad, lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, linealidad y robustez. Potenciales efectos inhibitorios de la muestra deben ser tomados en cuenta al ensayar los diferentes tipos de muestra Los resultados deben ser evaluados con muestra. mtodos de estadstica apropiados, como se describe en las farmacopeas nacionales, nacionales regionales o internacionales.

Control de calidad interna El laboratorio debe contar con un sistema de aseguramiento de calidad interna o control de calidad (por ejemplo: manejo de desviaciones, uso de muestras adicionadas, rplicas de ensayos, participacin en ensayos de aptitud) para asegurar la consistencia de resultados rutinarios y su conformidad de acuerdo a un criterio establecido. establecido
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Control de calidad interna La validacin de mtodos microbiolgicos se realiza especialmente utilizando los resultados del control interno de la calidad, se estima la repetibilidad y la reproducibilidad.
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Validar mtodos microbiolgicos requiere: 1. Comparar con un MTODO DE REFERENCIA. 2. Usar cepas de referencia y cepas de referencia certificadas.(Material de referencia). 3. LA EVALUACIN SISTEMTICA DE FACTORES. 4 Ensayos Interlaboratorios. 4. Interlaboratorios 5. La estimacin de la incertidumbre.
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Definiciones y Frmulas usadas en la Validacin de Mtodos

1. Desviacin Estndar 1 Es la medida de cmo se dispersan los valores alrededor de la media en la distribucin de valores. Se calcula con la frmula:
s=
1 ( xi - x n - 1 i=0
i= n
En donde: n es el nmero de valores


2. DESVIACIN ESTNDAR DE LA REPETIBILIDAD 2 Es la desviacin estndar de los resultados de los anlisis obtenidos bajo condiciones de repetibilidad.
sI =
1 N k
(n
i =1
1) s i
2
En donde n es el nmero de valores N es el nmero de repeticiones k es el factor de cobertura, se utilizar k = 2, con un nivel i ld de confianza fi d del l 95% 2 s i es el cuadrado de la desviacin estndar

3 DESVIACIN ESTNDAR DE LA REPRODUCIBILIDAD (total) 3.
La desviacin estndar de los resultados de anlisis obtenidos bajo condiciones de reproducibilidad.
s=
En donde N k
(N k ) s
+ (k 1) s N 1
2 I
2 Z
si
es el nmero de repeticiones es el factor de cobertura, se utilizar k = 2, con un nivel de confianza del 95% es el cuadrado de la desviacin estndar es el cuadrado de la desviacin estndar entre las repeticiones o series
2 sZ
79

4 DESVIACIN ESTNDAR RELATIVA (RSD) 4.
Es la comparacin de la desviacin estndar con respecto a la media, generalmente se expresa en % y se denomina como Coeficiente de Variacin Se calcula con la siguiente frmula: Variacin.
s CV = 100 % x
En donde
es la desviacin estndar es el promedio de las mediciones
x
80

5 PRECISIN INTERMEDIA 5.
Medida de la precisin de los resultados de un mtodo de ensayo en condiciones diferentes de analista, da, equipo y lote de reactivos, dentro del mismo laboratorio con la misma muestra homognea homognea.
1 k 2 sZ = ni ( xi x ) k 1 i =1
En donde n k es el nmero de valores es el factor de cobertura, se utilizar k = 2, con un nivel de confianza del 95% es la l d desviacin i i estndar t d entre t l las repeticiones ti i o series i es el promedio de las mediciones
81
sZ
Protocolo de Validacin
82
Componentes de la Calidad de los anlisis
83
MUCHAS GRACIAS
84 84

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Por qu es necesaria la validacin analtica?

Cul es el propsito de la validacin analtica?

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Qu es validacin de mtodos analticos?

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Qu es validacin de mtodos analticos?

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y Indicar el proceso que lleva a cabo el

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Para qu valido un mtodo analtico?

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Cules son los tipos p de mtodos?

Cules son los tipos p de mtodos?

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Cules son los tipos p de mtodos?

Licda. Lucrecia Arriola

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Cmo se dividen los mtodos segn el RTCA 11 03 39: 06 ? RTCA. 11.03.39:

2 Categora II 2. 3 Categora III 3. 4. . Categora g IV V 5. Mtodos Microbiolgicos

Qu procedimientos analticos se validan 03 39: 06 ? segn el RTCA RTCA. 11 11.03.39:

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Qu procedimientos analticos se validan 03 39: 06 ? segn el RTCA RTCA. 11 11.03.39:

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Qu procedimientos analticos se validan segn el RTCA. 11.03.39: 06 ?

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Cmo seleccionar e implementar un mtodo analtico nuevo?

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Cmo seleccionar e implementar un mtodo analtico nuevo?

Etapas para desarrollar sarro ar un mtodo m to o analtico ana t co

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Qu requisitos debo cubrir antes de validar q un mtodo analtico?

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Qu son los parmetros del desempeo del mtodo analtico

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Qu parmetros del desempeo se determinan en cada mtodo analtico?

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Qu son los parmetros del desempeo del mtodo t d analtico lti

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EXACTITUD DE LOS RESULTADOS ANALTICOS

el resultado de una medicin y un valor verdadero del mensurando m u

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d. Calcular el % de Recuperacin con la frmula:

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