0.

CITOGENTICA

1. Qu es la citogentica?
La citogentica nace cuando se descubre que la informacin gentica est en los cromosomas. Hay muchas definiciones de cromosoma, pero lo importante es que cromosoma es siempre, est o no compactado.

Teora cromosmica de la Herencia (Sutton y Boveri 1902)

Principios: 1.- LOS CROMOSOMAS ESTN REPRESENTADOS UNA VEZ EN LOS GAMETOS, DOS VECES EN LOS CIGOTOS. En los gametos hay la mitad de cromosomas que en los cigotos. Son los portadores de los factores mendelianos (A: padre ; a: madre). 2.- LOS CROMOSOMAS RETIENEN SU INDIVIDUALIDAD ESTRUCTURAL EN LOS ORGANISMOS. Uno hereda A o a, no una mezcla de los dos (no se rompen). 3.- LOS CROMOSOMAS SEGREGAN DURANTE LA MEIOSIS. A un polo van unos cromosomas y sus homlogos al otro polo. 4.- CADA CROMOSOMA TIENE UNA FUNCIN ESPECFICA. Por ejemplo un cigoto con un cromosoma menos no va a ninguna parte. Si falla algo no se produce un individuo normal. De esto derivaron Predicciones: 1.- LOS GENES ESTN EN LOS CROMOSOMAS (Bridges, 1916: herencia ligada al sexo) 2.- LOS GENES ESTN ORDENADOS LINEALMENTE EN LOS CROMOSOMAS (Sturtevant, 1913: primer mapa). Unos detrs de otros. 3.-LOS QUIASMAS REPRESENTAN FENMENOS DE INTERCAMBIO ENTRE CROMOSOMAS HOMLOGOS (Stern y Craighton en Drosophila; Mc Clintock en maz, 1931: segregacin de marcadores cromosmicos). Luego, eso da lugar a la recombinacin, aunque entonces no lo saban. Estos cromosomas no se corresponden con los parentales por lo que ha habido recombinacin.

-1-

ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL CROMOSOMA EUCARIOTA

1.ORGANIZACIN DEL MATERIAL HEREDITARIO EN EUCARIOTAS

2. EL CROMOSOMA EUCARITICO
El centrmero define los brazos cromosmicos.

Las dos cromtidas son idnticas (hermanas) al proceder del proceso de replicacin.

Genticamente 1 cromosoma es 1 cromtida.

DNA histonas Cromosoma protenas No histonas RNA (p.e: regin centromrica) Es tan importante la replicacin de las protenas como la del propio DNA.

3. EL DNA EN EL CROMOSOMA EUCARITICO

CAPACIDAD CODIFICANTE La mayora del DNA no es codificante, entendiendo que no da lugar a una unidad transcripcional y no lleva a cabo un mRNA. Los genes (secuencias codificantes) se pueden distinguir en: Secuencias nicas: aparecen en el genoma una nica vez. Estos genes suelen estar rodeados por grandes fragmentos de DNA que no codifican. Adems estos genes tienen intrones que en tamao son mucho ms grandes que los exones.

10

20

30

40

50

60

kb

Familias multignicas: son genes nicos (verde) pero con una funcin muy similar y con una secuencia parecida. Estos genes surgen por duplicacin y divergencia. -2-

Pueden aparecer pseudogenes (naranja) en las familias, son secuencias que no codifican pero que ocupan sitios concretos.

Secuencias repetidas: se repiten en el genoma uno detrs de otro, por ejemplo la familia de histonas que aparece repetida miles de veces con una posicin concreta en el genoma.

H 1

H 4

H2 B

H 3

H2 A

SECUENCIAS REPETIDAS No confundir con genes repetidos. Existe un amplio porcentaje de secuencias relacionadas con la transposicin. Deteccin de secuencias repetidas en un genoma: Curvas Cot ([ ] x t): Se purifica el DNA con calor y luego con fro. Representan la desnaturalizacin y renaturalizacin de los cidos nucleicos. Nos muestra que existen cosas que renaturalizan muy rpido por lo que suponemos que hay algo muy parecido y en mucha cantidad, lo cual lleva a hablar de secuencias repetidas. Por el % de renaturalizacin podemos saber cuantas veces esta repetida una secuencia. La secuencia que renaturaliza ms tarde es la secuencia -3-

nica. Con esto no podemos saber cuntas secuencias hay repetidas, ni si son distintas o no. DNA satlite: podemos separar el DNA por su densidad de flotacin (por ultracentrifugacin), la densidad de flotacin con mucha proporcin de G-C tiene mayor densidad por lo que se queda ms abajo (banda principal) pero aparece otra banda ms arriba, separada del resto correspondiente al DNA satlite que tiene un mayor contenido en A-T (menor densidad). Con esto slo se puede saber en qu bases est enriquecida esa secuencia. No todo lo repetido tiene que ser DNA satlite!! Para saber dnde estn, hay que clonar, secuenciar y FISH, con: Digestin con endonucleasas de restriccin: si en un genoma tenemos una secuencia repetida una detrs de otra y en esa secuencia hay varias dianas de restriccin produciendo tantos fragmentos como dianas aparecen, lo que produce que en la electroforesis aparezca lo que se conoce como SMEAR (churretn = banda gorda) y bandas concretas ms pequeas (especficas para una diana). Por ejemplo, cuando se repiten en tndem da una banda. Pero que las bandas indiquen que son del mismo tamao no significa que sean iguales, por lo que hay que comprobarlo con: Hibridacin in situ: con anticuerpos (hoy da fluorescente= FISH). Para comprobar si la secuencia est dispersa por el cromosoma o est compactada. Con esto se estableci que estn la heterocromatina de la regin centromrica, pero hoy se sabe que eso no es del todo cierto. Distribucin en los genomas: consiguieron romper la banda principal y distribuir todas las secuencias de un genoma en porciones que llamaron: componentes H (pesados) y componentes L (ligeros). Viendo que la mayora de los genes se acumulan en los componentes pesados (con ms G-C). Esto llev al trmino de: ISOCORAS Caracterizacin - a partir de DNA genmico purificado. (slo DNA de la banda principal) - fragmentacin en 30 100 kb y ultracentrifugacin. Se rompe la banda principal diferencindose componentes pesados y ligeros. - obtencin de componentes H (pesados) y L (ligeros). Los ligeros tienen un contenido en GC menor del 40%, mientras que los pesados tienen mas del 52% Definicin Son fragmentos de DNA por encima de las 200 kb cuyas secuencias coinciden en el contenido (riqueza) en pares de bases GC. Incidencia Los genomas de vertebrados de sangre caliente contienen isocoras de componentes H y L; los de los vertebrados de sangre fra slo contienen isocoras de componentes L.

-4-

El genoma de los seres humanos es ms pesado que el de los sapos; el genoma de los humanos y de los sapos, en trminos generales es muy parecido solo que los humanos usan secuencias ms pesadas que los de sangre fra. El genoma est distribuido en compartimentos ms o menos homogneos con un contenido parecido en GC. Aumentar el % de GC, en la evolucin, es mejor por el aumento de la termo estabilidad del DNA (esto es una teora de unos cogida un poco con alfileres haciendo referencia a eso de que para separar GC tienen que romperse 3 puentes de H, mientras que para separar AT solo se rompen 2. Conclusiones generales (confirmadas): 1.- los genes de copia nica estn en componentes H o L (nunca en los dos) Por lo que estn imbuidos en una regin concreta 2.- las familias multignicas estn en un slo componente H o L 3.- un componente H o L se localiza en distintos cromosomas No tenemos cromosomas H o L, todos tienen cosas H y cosas L 4.- distintos componentes H o L se localizan en un mismo cromosoma 5.- los componentes H se asocian con las bandas R (mayor % de GC) 6.- los componentes L se asocian con las bandas G (mayor % de AT) Se supone que hemos evolucionado a tener ms GC porque tienen 3 enlaces y son ms estables, por lo que nos hacen ser ms termoestables. Nuestra organizacin interna de cromosomas es diferente a la de otros mamferos. SECUENCIAS ESENCIALES ( imprescindibles) ARS (ORFs = Orgenes de replicacin) CEN (secuencias de los centrmeros que hacen que funcionen) TEL (definen el principio y el final de un cromosoma) Estas secuencias se vieron en levaduras, que tenan plsmidos naturales pero que segregaban muy mal, pero se replicaban muy bien, por lo que tenan ARS, pero segregaban mal porque le faltaban un punto de orientacin (centrmero) por lo que caracterizaban cada uno de los centrmeros de la Scharomices cerevisiae para aislar la secuencia mnima para obtener un centrmero funcional (ARS).

-5-

Por lo que vieron que aquellos plsmidos que aparte del ORF posean secuencias CEN segregaban mejor. Tambin pensaron que exista algo que impeda que el ADN se destruyera por nucleadas por los extremos libres, por lo que usando un protozoo que son capaces de generar fragmentos extracromosmicos (sistema de ampliacin natural) trabajaron con estos fragmentos hasta que sacaron las primeras secuencias telomricas, comprobando que estas protegen los extremos con secuencias especficas y aumentan la viabilidad del cromosoma. As en trminos finales, a los plsmidos naturales de levadura, les linealizaron, les pusieron centrmeros y telmeros. A partir de este momento se abri el campo de CROMOSOMAS ARTIFICIALES

4. LAS PROTENAS EN EL CROMOSOMA

Intervienen en la estructuracin de los cromosomas HISTONAS Son pocas (cinco tipos conocidos), presentes de una manera muy importante asociadas a los cromosomas (una gran cantidad). Codificadas por una serie de genes mltiplemente representados en el genoma. Son muy pequeas pero la H1 es cerca del doble de tamao de las dems. En el extremo amino tienen una serie de aminocidos bsicos (carga neta positiva) Se conoce muy bien su funcin: componentes de la estructura mas bsica de organizacin del DNA y cuatro de ellas forman el nucleosoma H1 est en un nivel de organizacin de la cromatina Se encuentran enormemente conservadas en la evolucin La funcin que desempean se ha mantenido a lo largo de la evolucin. Adems de la estructura qumica predeterminada, las histonas, tambin estn expuestas a ciertas modificaciones qumicas: Habitualmente se acumulan en los extremos aminos (con aa bsicos). Pueden ser reversibles o irreversibles (marcar las protenas) Estas modificaciones con generalmente: Metilaciones Acetilaciones Fosforilaciones A veces algunas relacionadas con la replicacin o transcripcin. Ejemplo: Acetilacin: si se aade un grupo acetilo se quita una carga positiva. Esto influye en -6-

que halla transcripcin en una zona determinada o no: CODIGO DE LAS HISTONAS: es el complejo de ADN-sustancias qumicas el que nos indica el estado de un fragmento de DNA en un momento determinado y esto influir en la capacidad o no de ese fragmento para replicarse o transcribirse. Las modificaciones qumicas post-traduccin dictan el estado de la cromatina en relacin con la replicacin, la transcripcin y la condensacin NO HISTONAS Toda una coleccin de protenas con distintas funciones, que se pueden observar cuando se quitan las histonas. Tambin tienen relacin con la propia estructura de la protena y con la relajacin de ese DNA. No en todos los DNAs de distintos tejidos celulares es igual Protenas no histnicas estructurales: del scaffold (estructura interna de la cromatina) y las SARs (regiones asociadas a Scaffold) organizan la cromatina en interfase en forma de bucle. especficas del centrmero y del cinetocoro (solo se forma en divisin) especficas del telmero complejos de condensacin complejos de cohesin: mantienen asociadas las cromtidas Estas regiones son esenciales para que un cromosoma sea un cromosoma. Tienen sentido dentro de la funcin de un cromosoma. Protenas reguladoras Factores de Transcripcin y Replicacin.

5. DE LA CROMATINA AL CROMOSOMA METAFSICO 1.Organizacin de la cromatina en interfase

* Crick: Cromosoma es un paquete necesario solo para que la mitosis tenga un orden Estructuracin: la mayor parte del tiempo es una fibra de cromatina (DNA+ protenas) que luego sufre un proceso de condensacin en el momento de la divisin celular. Nucleosomas: constituido por octmeros (4 pares de histonas) rodeado todo por una secuencia de DNA de 200 pb. Las colas de las histonas cargadas positivamente no son las que interactan directamente con el DNA. Hay que tener en cuenta que la secuencia va cambiando y hay repeticiones y que el nucleosoma se monta y se desmonta para replicar, transcribir, etc De la interfase a la metafase Los cromosomas de forma natural viven en forma de fibra de 30 nm (en condiciones fisiolgicas, sin replicar). Cada cierto nmero de pares de bases, -7-

determinadas protenas (en regiones asociadas a scaffold = SARs) dan lugar a una conformacin en bucle establecindose como una grapa.

El paso de 10 nm a 30 nm se ha producido por la incorporacin de la H1 requerida siempre! Los cromosomas son un conjunto de bucles que se forman a partir de las protenas especficas del SARs, como la Topoisomerasa II. El DNA son secuencias ricas en A-T. Esta organizacin se ha relacionado con la formacin de replicones en el DNA. ADN Linker: trozo de DNA entre nucleosomas y es muy variable entre los distintos tejidos. Hay zonas en las que no hay nucleosomas. Modificaciones: antes o despus de un proceso replicativo son las que marcan la zona donde se unen los nucleosomas. En las zonas de promotores es el sitio tpico donde NO hay estructura de cromosomas. Es decir, los nucleosomas en los distintos tejidos NO SIEMPRE SE FORMAN EN LAS MISMAS ZONAS. Fibra de 10 nm: se forma cuando hay transcripcin o replicacin, pero no es lo natural. Territorios cromosmicos:! dentro de un ncleo en interfase los cromosomas ocupan un sitio determinado (se conoce gracias a tcnicas de hibridacin in situ) Podemos tener el ADN de un cromosoma en un tubo, as con los dems. Cambiando distintos fluorocromos y preparaciones de estos, se pueden decir los distintos cromosomas dentro del ncleo, visto gracias a un microscopio de fluorescencia (CROMOSOMAS ESPECTRALES, SKY): 3D FISH ( cariotipos espectrales) en fibroblastos humanos: Los 3-D FISH caracterizan cada cromosoma de manera diferente de modo que se forma como un mapa, pero no se sabe por qu. Se sabe que las secuencias que luego aparecen en zonas donde casi no hay genes primero aparecen cerca de la envoltura nuclear y las que aparecen en zonas de genes, aparecen primero en el interior. Cuando hay transcripcin se puede ver cmo se mueven esas zonas separndose del resto de la masa de DNA a la zona donde se encuentra el aparataje enzimtico para la transcripcin (factoras). En el centro del ncleo tenemos por lo tanto, aunque se tiene que confirmar esta teora, las factoras de transcripcin. Ej: Localizacin de secuencia Alu (verde) en cromosomas (A) y en ncleos interfsicos de fibroblastos (B,D,E) y linfocito (C) . Las secuencias Alu se localizan preferentemente en las bandas R de los cromosomas. Cuando miramos ncleos en interfase, las secuencias Alu, y por lo tanto las zonas donde abundan los genes, abundan en la regin central del ncleo. -8-

2. Organizacin de la cromatina en metafase

De la replicacin a la condensacin: Para que pueda producirse la divisin tiene que producirse un proceso de empaquetamiento: -las cromtidas hermanas fruto de la replicacin permanecen asociadas por cohesinas - las condensinas promueven grados mayores de empaquetamiento no uniforme (distinto en heterocromatina, bandas G y bandas R) -son elsticos los cromosomas?: la titina. La titina est en los msculos, pero se vio que haba en los cromosomas una protena contrctil, al condensar el DNA tenemos que acercar cosas, pero la titina est poco estudiada en este contexto y ha creado cierta controversia. Scaffold de protenas no histnicas: Es la estructura que queda del cromosoma si le quitas las histonas. En la foto, lo gris es DNA y lo negro es el scaffold de protenas. La conclusin, a la luz de la foto, es que el DNA que est interaccionando con las histonas se relaja y tambin aparece como un esqueleto de protenas no histnicas. Se vio que el DNA tena una estructura en bucle, con lo cual el cromosoma se arma gracias a una estructura a la cual se unen los bucles de DNA. Midieron los bucles y aproximadamente llevan 100.000 pb El anlisis qumico del scaffold responde a dos tipos de protenas principalmente: SC1: que es en realidad la Topoisomerasa II, lo que se comprob gracias a la inmunolocalizacin de topo II, por la distribucin recuerda la situacin del scaffold. Se sabe que forma como grapas que enganchan a los bucles de DNA. SC2: una condensina. Modelo de bucles radiales y giros helicoidales: En mamferos se ha visto que se forman primero los bucles y luego estos giran sobre s mismos en hlice. En plantas, puesto que tienen 1000 veces ms DNA tiene que compactar an ms, pero slo se sabe de momento, que tienen Topo II y condensinas.

Patrn de bandas G y R: En cromosomas de mamferos hay zonas ms condensadas (G) y menos condensadas (R). Se pens que haba bucles de DNA, por lo que tieron el DNA de tres formas diferentes: YOYO: con un fluorocromo (YOYO) que tie todo el bucle YOYO/MG: aadieron verde de metilo (MG) antes de teir con YOYO, el MG siente afinidad por AT, por lo que el principio del bucle donde se sitan las SARs (bandas negras), y el YOYO slo tie el final del bucle porque MG le impide entrar en la base. -9-

 Damnomicina: especfica de bases A-T, por lo que se tie slo la base del bucle (bandas blancas). Al observar los distintos resultados vemos que: 1. con el YOYO se ve la tensin distribuida ms o menos homogneamente. 2. con el YOYO/MG vemos las bandas R (en negro) 3. con la damnomicina se observan las bandas G Q (en blanco)

En cromosomas de mamferos esta organizacin de bandas implica un empaquetamiento distinto, segn: - Bandas R: rosetas, una sobre otra - Bandas G Q: lo anterior gira y se enrolla an ms Esto est relacionado con las regiones donde abundan los genes (isocoras) que corresponden a bandas R y las que no. En las bandas G se acumulan muchos bucles (esto se corresponde muy bien para humanos pero para otros modelos no vale, como por ejemplo plantas). Las bandas R por lo tanto solo tendran una distribucin de bucles radiales. En los centrmeros se acumulan regiones de heterocromatina por lo que en estas zonas se supone que existe un nivel de organizacin diferente puesto que por ejemplo el ancho del centrmero es claramente ms estrecho que el resto del cromosoma.

Complejos de condensinas: estructura molecular. Intervienen un par de protenas del grupo de las SMCs, que tienen dominios de unin a DNA (SMC II y IV en complejos de condensinas y SMC I y III en complejos de cohesin) y otras protenas pudiendo formar complejos de hasta cinco polipptidos. Son capaces de interaccionar con el DNA y moverlo porque a mitad de protena presentan una especie de bisagra, cuando se cierra es porque va interaccionando (a nivel de SARs) con el DNA y lo va moviendo. Si no tenemos condensinas los cromosomas no se condensan. El mecanismo de condensacin est muy conservado entre distintas especies, aunque las protenas que participan no sean exactamente iguales Hay dos complejos de condensacin, I y II, distribuidos de forma diferente a lo largo del cromosoma.

6. DIFERENCIACIN LINEAL DE CROMOSOMAS

Bandas C, G Q y R En ratn: En el ao 72 se utilizaron agentes ms duros (bases o sales alcalinas y calor) contra los cromosomas, se tean, pero se observaba que, en general, aparecan teidos muy pobremente, excepto en regiones donde apareca un teido ms intenso. - 10 -

Donde aparecan estas regiones ms intensas se dedujo que el cromosoma est ms protegido de las agresiones de agentes o del calor (bandas C) por lo que las regiones ms teidas eran los centrmeros, es decir, se corresponde con la heterocromatina, que en ratones se corresponde con los centrmeros. Las zonas que se tien se corresponden con secuencias de DNA repetidas, aunque en muchos organismos no es slo la banda centromrica.

En humanos: Haciendo una tincin con un fluorocromo que interacciona directamente con el DNA (la quinacrina que tiene afinidad por pares G-C) se obtuvieron regiones intensamente teidas, las denominadas bandas Q (ricas en G-C). Atacaron los cromosomas con una proteasa (tripsina) y despus se ti con giemnsa se vieron zonas ms teidas que otras: patrn de bandas G (ricas en A-T). Se consigui diferenciar zonas muy concretas que permiten identificar los cromosomas gracias al patrn de bandas G. Las bandas que se complementaban con las anteriores, es decir, aparecan tiendo de forma complementaria, se denominaron bandas R (de reverse en ingls). Caractersticas moleculares de las bandas G y R BANDAS G ricas en AT pocos genes

!
replicacin tarda isocoras ligeras

BANDAS R

ricas en GC

muchos genes replicacin temprana isocoras pesadas

En todos los organismos (menos mamferos) no excluye que haya distintas isocoras, ricas en secuencias AT, ricas en secuencias AG pero no se diferencian genticamente por un patrn tan claro como en mamferos. A partir de las bandas G podemos establecer un mapa, desde el punto de vista morfolgico, de los cromosomas, que puede servir para comparar genomas de distintas especies. Tincin fluorocromos (DAPI y cromomicina A3) Cariotipo haploide de ratn tras tincin con cromomicina A3/ distamicina A que resulta en un patrn de bandas R (izquierda) y bandas G teidas con Giemsa (derecha) DAPI: teimos DNA, tiene afinidad por zonas ricas en AT por lo que podemos distinguir estas regiones (bandas G) Cromomicina A3: reconoce regiones GC (bandas R) a veces ponemos antes de teir distamicina (antibitico) que se une a las regiones AT

- 11 -

Digestin con enzimas de restriccin (E.R.) directamente sobre cromosomas: Tenemos un DNA rico en secuencias repetidas, si en la secuencia repetida tenemos una diana de restriccin aparecer una banda en el cromosoma. Si dejamos las enzimas de restriccin en el cromosoma, y luego lavamos el cromosoma, y despus lo teimos, se teir todo el cromosoma menos donde se han digerido las secuencias repetidas. Y si las secuencias repetidas no tienen dianas de restriccin vemos una banda mas potente porque all no ha cortado nada la enzima porque no hay dianas. Puede haber isoesquizmeros, que son E.R. que tienen la misma diana pero cortan o no segn ciertas caractersticas, como por ejemplo, que est metilada (ms especficas). Reproduccin in situ de secuencias: Tenemos cromosomas y los ponemos en contacto con una maquinaria que reproduce las secuencias (nucletidos, polimerasa) Ejemplo NICK TRANSLATION: se hacen cortes en una banda y con una exonucleasa 5- 3 quitamos la banda del nick y con la polimerasa rellenamos el hueco con nt marcados para luego visualizarlo. Lo que se reproduce antes en humanos son las bandas R porque son las ms accesibles y por lo tanto donde se une mejor la polimerasa. Hibridacin de cidos nucleicos (FISH) Se hace southern con cromosomas, se les desnaturaliza con calor y se aade una sonda marcada. La informacin depende de la sonda que usemos. Inmuno deteccin de protenas Funciona como el Western-blot, se utilizan anticuerpos, que se pegan a las protenas especficas y se pueden ver las secuencias requeridas. Tenemos que tener cuidado de no degradar las protenas que son mas sensibles que el DNA. Painting de cromosomas y cariotipo espectral (SKY) Se colorean artificialmente los cromosomas de distintos colores y se colocan como en un cariotipo para verlos todos a la vez. Hoy en da se utilizan estas y otras tcnicas para ver las variaciones tanto cuantitativas como cualitativas a nivel de: genomas completos cromosomas completos secuencias repetidas secuencias nicas nucletidos Diferencias cualitativas: zoo-FISH comprobar la presencia y localizacin de una, varias o todas las secuencias en especies relacionadas. Se cogen 2 DNA de individuos distintos y se utiliza uno como sonda enfrentndolo al otro de modo que irn juntndose las zonas Hibridacin de genoma humano y de complementarias, ms probablemente en zonas con muchas repeticiones mono verde en cromosomas humanos (ej mono verde) - 12 -

Painting: primero seleccionas los cromosomas por tamao por citometra de flujo y los vas purificando. Luego al pintarlos podrs ver donde se sita cada uno preferentemente cromosomas metafsicos slo uno o unos pocos cromosomas todos de golpe: SKY (spectral karyotype) detecta: - variantes numricas (aneuploidas) - alguna variante estructural (translocacin) - distribucin de secuencias entre especies

Se pueden mezclar colores = Multiplex FISH, lo que permite finalmente obtener el cariotipo espectral (SKY), haciendo muchas mezclas de colores (usando varios fluorocromos) de modo que haya uno para cada cromosoma. Para ello se quitan las secuencias repetidas porque pueden ser comunes entre especies, por lo que no se tie el centrmero. Lo que nosotros vemos directamente es la b, luego c y d se obtienen por ordenador. Cdigo de barras cromosmico: Se hace con fragmentos de cromosomas y nos permiten diferenciar y ver donde se localizan grandes fragmentos de DNA que has clonado. Se colocan todas las secuencias en el cromosoma con el ordenador y luego se comparan para extraer informacin x ej sobre la estructura (para ver inversiones)... Se venden sondas para detectar zonas concretas como telmeros, centrmero, etc. Idiogramas: comparacin de genomas Se hace un dibujo del cariotipo slo con un homlogo y se ponen de color las secuencias compartidas y en negro las repetidas (que no cuentan). Ejemplo: tomando como referencia secuencias marcadas del genoma de ratn, se pueden observar que compartimos una gran cantidad de homologas con ellos. Secuencias repetidas en humanos: DNA satlite mltiples familias de DNA repetido en tndem algunas especficas de cromosomas determinados (satlites clsicos), otras comunes a todos los cromosomas (alfoides) se ven en metafase, pero tambin en interfase permiten distinguir variaciones de presencia/ausencia; los cambios cuantitativos se leen peor la combinacin de sondas de satlites clsicos y alfoides permite detectar diferencias en todo el cariotipo

- 13 -

Diferencias cuantitativas: La CGH (Hibridacin Genmica Comparativa) permite poner de manifiesto diferencias en el tamao (numero de copias) de una determinada secuencia de secuencias repetida se marcan uno o unos pocos cromosomas si no bloqueamos las secuencias repetidas, hibridamos todo el genoma (WCGH) y podemos poner de manifiesto diferencias en el tamao (numero de copias) de una determinada familia de secuencias repetidas W-CGH: se usa todo el DNA de un individuo. Se marcan dos sondas de distintos colores y se hibridan ambas. Es una hibridacin in situ con distintos colores, dos genomas a comparar y se mezclan ambos. Cuando las dos regiones son iguales ambas se hibridan y darn lugar a un color poco diferenciado (cuando estn en iguales proporciones). Sin embargo, si hay ms de uno se ver ms ese color. Ejemplo: color verde: tendrn igual posibilidad para hibridarse con este: SE OBSERVA COLOR VERDE Si ocurre lo contrario, por ejemplo otro genoma con mayor igualdad o parecido con un cromosoma de otro individuo que est marcado con rojo: se observar color ROJO Es utilizado para observar polimorfismos en la poblacin, por ejemplo en la figura, el cromosoma 9 est en chicos y chicas.

Enzimas de restriccin: Se basa en que las zonas que no cortan las E.R. se ven ms marcadas Tienes que discriminar entre dos individuos, ejemplo: transplante de mdula, para observar cmo est esa mdula viendo la proporcin de clulas buenas con las cancerosas. Con la utilizacin de estos marcadores se puede ver que el nmero de clulas estn recuperndose y cuales no: PARA VER SI HAY RECAIDAS En la figura, han cortado en 3 y 9 (ms marcadas) Tambin para observar secuencias repetidas. Nucletidos: rolling circle amplification

Determinar la presencia de una secuencia normal o alterada por el cambio de un slo nucletido (mutacin puntual).

- 14 -

FISH: tipos de sondas y utilidad Hibridacin en fibra: no se sacan cromosomas si no que lo que se analiza son las fibras de cromatina. Sirve para saber donde est localizada cada cosa y hacer MAPAS CROMOSOMICOS Microarrays: sirve para detectar SNPs (modificaciones de un solo nucletido).

2. cromosomas y funcin gentica

7. LA HETEROCROMATINA
Es la porcin de la cromatina que muestra un estado alocclico, que se mantiene condensada. El resto de la cromatina no hace esto, hablamos de la eucromatina. Fraccin de la cromatina que mantiene un estado de condensacin permanente a lo largo del ciclo de divisin celular. Se considera Heterocromatina a una gran zona del genoma que en general no tiene funcin (pero en particular sabemos que s la tiene)

DNA eucariotas: Genes funcionales de copia nica. DNA de secuencia repetida Secuencias funcionales Secuencias de funcin conocida Transposones, retrotransposones, microsatlites - 15 -

Heterocromatina centromrica DNA separador Si estudiamos loas curvas Cot (de renaturalizacin), las zonas de heterocromatina tienen el valor Cot ms bajo y es aproximadamente un 25% de DNA humano (el DNA altamente repetido ocupa un 25% del genoma).

1929: Hertz: describe e introduce el termino heterocromatina (lo descubri en saltamontes) 1959:Cooper: la heterocromatina y eucromatina difieren en su conformacin biofsica y en la expresin de su informacin pero es la estructura bsica de organizacin. 1961: Lyon: relacin heterocromatinizacin con actividades gnicas en relacin con cromosomas sexuales 1959: Lima-De-Fana: replicacin tarda del DNA heterocromtico (lo descubri en saltamontes) 1971: Frenster: no existe sntesis de DNA o es muy baja en las zonas de heterocromatina 1969: Pardue: hibridacin in situ con secuencias de DNA especificas (primero en hacer hibridacin in situ) 1970: Summer: visualiza en cromosomas la heterocromatina constitutiva Invento las bandas C aprovechando los experimentos de Pardue de DNA (giemnsa)+ sonda Invento las bandas G,R Actualmente el proyecto HUGO lo incluye en DNA basura. Caractersticas bsicas de la heterocromatina: Heteropicnosis: capacidad de tincin diferente al resto de la cromatina Alocclica: comportamiento fuera de lo normal. Se replica y compacta de forma distinta al resto del ciclo celular. Las secuencias de DNA de la heterocromatina son inactivas debido a: Estn reprimidas independientemente de que contengan DNA codificante. Estn formadas por DNA incapaz de transcribir. Tipos de heterocromatina: 1. heterocromatina condensada tejido-especfica. 2. heterocromatinizacin facultativa 3. heterocromatinizacin constitutiva. Terminologa: Cromatina: complejo DNA/protenas que configuran los cromosomas - 16 -

Eucromatina: fraccin de la cromatina que se condensa y descondensa a lo largo del ciclo de divisin celular. Presenta tincin tenue. Heterocromatina constitutiva: fraccin de la cromatina que presenta una alta condensacin en todas las fases del ciclo de divisin y en todas las clulas. Heterocromatina facultativa: presenta condensacin diferenciando tejido o momento

Heterocromatina condensada tejido-especfica:

La morfologa nuclear es distinta. Por ejemplo, en E. plorans la cromatina en diplotene es distinta a la de las espermtidas. A este cambio se le llama heterocromatinizacin. El silenciamiento de genes siempre pasa por heterocromatinizacin. La heterocromatinizacin especfica de tejido puede ser un proceso reversible. En las clulas madre, si se diferencia la heterocromatina no puede desdiferenciarse, pero esto no ocurre en plantas porque son totipotentes y la heterocromatina que se diferencia puede desdiferenciarse. Los linfocitos pueden desdiferenciarse, aparecen en su ncleo zonas ms compactadas (heterocromatina), pero pueden desdiferenciarse con un compuesto llamado fitohemaglutinina produciendo cambios morfolgicos en el ncleo, se sintetizan RNAs que no estaban sintetizados y la clula se divide.

Heterocromatinizacin facultativa
Heterocromatinizacin de segmentos cromosmicos o cromosomas completos inactivos que se condensan e inactivan en etapas tempranas del desarrollo y permanecen inactivos durante muchas generaciones celulares. Suelen relacionarse con los cromosomas sexuales Sistemas muy presentes en el control de determinismo del sexo en insectos. Sistemas de determinismo cromosmico mltiple (X1X2/Y) Relacionados con procesos de imprinting cromosmico. El caso ms tpico es el de los cromosomas sexuales, las hembras humanas heterocromatinizan uno de sus cromosomas X. Otro ejemplo es el sistema de determinismo del sexo de los coccidos (Lecanoides, Comstockiella y Diaspidos) El control del sexo viene determinado por la heterocromatinizacin de todo el genoma parental del macho. En hembras no se heterocromatiniza ninguno de los dos. As se determina el sexo, por lo que mucho DNA basura no puede ser Pero cargar con un genoma heterocromatnico es un lastre, as que tiende a eliminarse a lo largo del desarrollo. Lecanoides: son los ms antiguos, la mitad de su genoma (el que proviene del padre) est heterocromatinizado, no se produce apareamiento entre homlogos. En Mitosis no pasa nada, pero en Meiosis, en machos en Profase, como unos estn heterocromatinizados y otros no, no se aparean y en Anafase I se produce una segregacin mittica en vez de meitica. Despus, la segunda divisin tiene que ser reduccional, por lo que en Anafase II co-orienta los cromosomas del padre a un polo y los que proceden de la madre al otro, y slo las clulas que tienen cromosomas de la hembra sern viables para formar gametos. Y dependiendo de lo que ocurra en la fecundacin podrn heterocromatinizarse de nuevo o no para dar lugar a machos o hembras.

- 17 -

Comstockiella: un poco ms evolucionados. En Mitosis se han eliminado algunos cromosomas heterocromatinizados (la mitad de los que procedan del macho). Luego, en Meiosis ocurre como en lecanoides pero con menos cromosomas heterocromatinizados, con lo cual existe menos probabilidad de equivocarse.

Diaspidos: antes de entrar en Meiosis (excepto en clulas somticas), es decir, en Mitosis, eliminan directamente todos los cromosomas procedentes del padre. El genoma macho que se heterocromatiniz podra dar un macho si hay factores citoplasmticos que lo determinen.

Esto hace que produzcan menos gametos, pero an as les va bien evolutivamente La determinacin del sexo en Drosophila no depende de la heterocromatinizacin, si no de la proporcin de cromosomas sexuales, respecto de los autosomas, si la prop orcin es o5 tenemos machos, si la proporcin es 1 tenemos hembras. Si nos dan nmeros intermedios se da lo que se llama el intersexo. Si X/A > 1 Hembra Si X/A = 0,5 Macho En insectos se encuentra algn cromosoma de ms, heterocromatinizan el cromosoma de ms y da lugar a individuos normales. Heterocromatinizacin en mamferos: Mamferos placentados (Euterios): tienen un cromosoma X reprimido, transcripcionalmente casi inactivo, suele ocurrir al azar en las primeras etapas del desarrollo LUEGO NO! No todo el cromosoma X es inactivo, existen genes activos en el segmento de apareamiento con el cromosoma Y.

- 18 -

Ms frecuentemente aparecen fenotipos anormales en el X (X extras) como por ejemplo XO/XXX/XXY. Trisomas de cromosomas sexuales se dan con bastante frecuencia porque tiene alta capacidad de heterocromatinizar y poca informacin gentica. La probabilidad de una trisoma autosmica y sexual es la misma pero las Trisomas autosmicas estn muy seleccionadas y no llegan a trmino. Compensacin de dosis: Se heterocromatiniza un cromosoma X en machos para que ms o menos tenga la misma cantidad que los machos. No es universal, ocurre en mamferos pero no en aves (ZW hembras/ ZZ macho) En mamferos tenemos el corpsculo de Barr, en el que encontramos un cromosoma X heterocromatinizado que aparece slo en hembras. Esto es porque todos los X se inactivan al azar. Un centro de inactivacin del corpsculo. La heterocromatinizacin ocurre desde un centro. As se origin el Sistema NEO-XY, por la fusin de un autosoma y un cromosoma sexual se form un nuevo cromosoma (neo-X) y el antiguo que queda es el neo-Y. As surgi nuestro Y Puede aparecer Mosaicismo: hembras heterocigotas que muestran un patrn de expresin en mosaico de cada uno de sus alelos porque heterocromatinizan por ejemplo el color de la piel. Ejemplo: gen de ausencia de glndulas sudorparas en mujeres, gato color calic (tres colores)

Ejemplos de mosaicismo ligados al cromosoma X en machos: X inactivos: alta metilacin en citosina-guanina por lo que son sensibles a 5-azacitidina. Histonas metiladas. X activos: sensibles a DNA-asa porque no esta tan compactado. Metatheria (marsupiales): ms eficiente. El cromosoma X parental se inactiva No origina un cromocentro en interfase. El nivel de inactivacin vara entre tejidos.

Prototheria (monotremas): Cromosomas sexuales mnimamente diferenciados o determinacin cromosmica del sexo mltiple. La inactivacin parece que implica regiones cromosmicas diferenciadas donde se ha visto que existen procesos de asincrona en la replicacin que al fin y al cabo evitan el apareamiento. En general, en mamferos, se podra asumir que la heterocromatinizacin del cromosoma X es un proceso epigentico y que sigue un modelo de inactivacin del cromosoma paterno, incompleta y especfica de tejido. En la evolucin, se sigue una tendencia a la supresin de entrecruzamiento entre los cromosomas sexuales. Genticas: seleccin de genes supresores de la recombinacin. - 19 -

 Estructurales: cromosomas sexuales pero con tiempos de replicacin (ofidios). Incidencia de inversiones. En el caso de los insectos (estudiado en saltamontes) el determinismo del sexo es XO en machos y XX en hembras, pero la presencia de un cromosoma extra implica que son capaces de heterocromatinizarlo. Con cierta frecuencia se puede dar la fusin del cromosoma X con un autosoma dando lugar a un sistema llamado NeoX/Y, la primera consecuencia es una supresin de la recombinacin, el cromosoma X es capaz de transmitir al autosoma con el que se ha fusionado la capacidad de heterocromatinizarse.

Heterocromatina constitutiva:
Fraccin de la cromatina que se presenta condensada a lo largo del ciclo de divisin y est presente en todas y cada una de las clulas de un organismo. Excepcin: Parascaris es un gusano con pocos cromosomas, lo que ocurre es que tiene bloques de heterocromatina, pero en su fase juvenil slo vemos algunas clulas con esos bloques, las que corresponden al tejido germinal, es decir, las que van a formar la gnada, por lo que el dogma anterior slo se cumple a veces. Esto puede ser porque la heterocromatina constitutiva sea un componente necesario para empaquetar de modo efectivo la heterocromatina en espermatozoides,, generando cierto nivel de roturas del DNA soportable. Esto demuestra la alta capacidad que tienen los espermatozoides de recibir e integrar trozos de DNA con extremos cohesivos En humanos los bloques de heterocromatina se corresponden con centrmeros, posiciones pericntricas y el cromosoma Y. Esto se detecta mediante la desnaturalizacin y desproteinizacin de Bandas C, de modo que las zonas oscuras son las positivas para heterocromatina constitutiva

La mayora est en el Centrmero, por lo que se dice que est formada por: Regin pericentromrica: adyacente a los cinetocoros Regin paracentromrica: no conectada con los cinetocoros Si se tiende a tener heterocromatina en las partes dstales todos los cromosomas tienden a presentarlos. Los bloques de heterocromatina tienden a tener una homogeneidad de posicin en todos los cromosomas. Se usa para las sondas que detectan cromosmicas (dinero!) enfermedades

Composicin y caractersticas del DNA de la heterocromatina constitutiva: a) DNA satlite b) DNA satlite repetido - 20 -

c) Asociados a bandas C Pero existen DNAs crpticos, en los cuales el DNA satlite queda dentro de la distribucin general de la proporcin GC/AT. Y en ratn hay zonas por medio que corresponden a la banda principal, que no estn repetidas y se sugiere que pueden proceder de elementos mviles. La heterocromatina constitutiva tiene protenas propias que sirven para co-localizarlas con el DNA, entre otras cosas, pero es muy difcil. Destaca la HP1 Patrones de replicacin: La heterocromatina, en general, tiene replicacin tarda, pero no todo el DNA de replicacin tarda es heterocromatina. Hay variantes de replicacin temprana en serpientes por ejemplo. s

Los tiempos de replicacin de la heterocromatina suelen ser ms cortos que los de la eucromatina (tanto tarda como temprana) La heterocromatina constitutiva es muy heterognea y muy polimrfica, pueden interferir en el apareamiento y en la recombinacin. Tiene carcter equilocal: determinadas familias que albergan zonas de heterocromatina que estn localizadas en zonas del cromosoma equivalentes (incluso entre cromosomas no homlogos). En los humanos aparece en todos en la regin centromrica (excepto en el cromosoma Y). Segn donde se site la heterocromatina puede afectar a los quiasmas, porque donde se establece no hay recombinacin. Esto no pasa en humanos ya que las zonas con tendencia a recombinar son las de los extremos. La heterocromatina constitutiva puede localizarse en una FISH con la misma intensidad en Metafase que en Interfase. Sin embargo, con una sonda del cromosoma completo lo veramos mal, todo esparcido en Interfase. Las familias que se encuentran en zonas concretas, etc, provocan una cantidad de polimorfismos tal que dos gemelos no tendran exactamente lo mismo. Modelos de organizacin de la heterocromatina: Es muy difcil distinguir la heterocromatina constitutiva de la especfica de tejido. El modelo de compactacin se basa en las protenas HP1 que hacen a la zona de cromatina a la que se unen, inactiva, dejando residuos de metilacin y acetilacin. Hay unas protenas que compactan an ms la cromatina, posibilitando el acercamiento de otras cadenas de DNA, y se cree que permiten el paso a eucromatina. Hay una lnea celular que tiene varios cromosomas X que se detectan por el nivel de metilacin. - 21 -

8. REPLICACIN CROMOSMICA Ciclo celular

Periodo S: La parte del ciclo celular donde se produce la sntesis de DNA (replicacin) Caractersticas de la replicacin: 1. 2. 3. 4. Semiconservativa completa: de tlomero a tlomero fidedigna (la misma informacin que haba antes de la replicacin. En Eucariotas: ocurre en el Periodo S del ciclo celular, se activa en varios orgenes (ms en las primeras etapas del desarrollo) y a distintos tiempos estableciendo zonas de replicacin temprana y tarda.

Tambin modificaciones que determinan la funcin de la clula que se divide Tambin codificacin de sistemas de reparacin para corregir errores. En humanos: lo que se va a reproducir en el periodo S es una fibra de cromatina, es decir, hay nucleosomas, protenas no histnicas, etc. Los nucleosomas se tienen que reproducir como estn, con metilaciones, acetilaciones, etc., que estaban en esas histonas. Esto suelen hacerlo las mismas protenas que introducen los grupos en las histonas y son tan importantes como la polimerasa. ARS: Secuencias de Replicacin Autnoma. ORC: Complejo de la Regin del Origen de la replicacin. Donde se acumulan todos los factores para que esto funcione. Como los ORIs son muchos, siempre se codifican los distintos orgenes de replicacin, depende del tejido donde se de. El nmero de ORI en distintos tejidos puede ser muy diferente. Replicacin bidireccional: ambas direcciones en una horquilla. Cuando horquillas contiguas se encuentran, el resultado es que una se tendr que separar, por lo que en ese sitio se producen concatenaciones (las hebras se enganchan, una enlazada por encima de la otra), al menos temporalmente, luego todo esto se resuelve por la TOPO II.

Telmero
Como en cada horquilla hay una cadena continua y otra retrasada (discontinua), cuando llega al final de la cadena no se puede formar el primer en la cadena discontinua por lo que tenemos una cadena ms corta. Segn esto tenderan a circularizar, pero interviene la telomerasa que sintetiza ms nucletidos de los necesarios y coloca esta cola en la zona donde se encontraba el hueco (en la cadena donde se quedaba ms corta) Estructura del telmero: modelo del t-loop, d-loop Se forma un bucle (t-loop) en el telmero y otro dentro de l (dloop), que permite cerrar los extremos de los cromosomas y as las dos cadenas no quedan libres. - 22 -

Acompaando a las secuencias tpicamente telomricas (TTAGGG no en todas las sps) producidas por la telomerasa, se encuentra tambin un complejo de protenas denominadas SHELTERINAS (se pegan a la secuencia de DNA de los telmeros). Son protenas no histnicas esenciales para la estructura cromosmica Las fibras tienen que replicarse tanto cuantitativamente como cualitativamente igual que estaban, aunque hay veces que no tiene porque ser as. Tambin otros factores que sirven para conservar en las nuevas cadenas las marcas de metilacin existentes en la parental. Cuando se reproducen cromosomas eucariotas se estn reproduciendo fibras de cromatina. Se tiene que separar nucleosomas del ADN para que acte la DNA polimerasa. En cada horquilla, las histonas nuevas tienen que recuperar las antiguas marcas para que se queden igual que las histonas de antes de la replicacin (maduracin de histonas) Adems en la maduracin tambin se produce un reajuste de los nucleosomas de forma fsica y tambin el anterior mencionado reajuste qumico.

Maduracin de la fibra de cromatina

No es igual en todos los organismos ni si quiera en todas las partes del cromosoma. Hay que tener en cuenta dos factores: Nucleosomas nuevos: Por un lado va el tetrmero H3-H4 y por otros los dmeros H2A y H2B, pero tambin se separan los dmeros H3 y H4 (no se sabe con total certeza). Puede pasar que se construya otra vez slo con las histonas viejas, o que se mezclen estas con las nuevas o que sean totalmente nuevos. Para distinguirlos hay marcas que reconocen dos protenas: el reader y el writter A nivel de modificaciones histnicas el nivel ms importante es de las H3 y H4, pero tambin ocurre a nivel H2A y H2B Reparto de los nucleosomas: entre las dos fibras (futuras cromtidas hermanas). Tipos: - Al azar - Semiconservativa: uno viejo y otro nuevo. - Alternativa: de uno ms que de otro Segn se van generando nuevos octmeros hay un control de las modificaciones que determina que estos se dispongan o no en fase lo cual va a suponer una diferente organizacin de la cromatina en cada caso. Esto hace que todos nuestros cromosomas no sean iguales en todas nuestras clulas (visto purificando con nucleasa en tejidos distintos salan distancias distintas a los tpicos 200 pb.

Replicacin cromosmica
Experimento Tylor (1957) Demostr que la replicacin era semiconservativa, para eso uso Timidina Tritiada para marcar el DNA. Trabaj con plantas, en el agua que pusieron a la semilla de haba aadieron la timidina tritiada y recuperaban los cromosomas en metafase de la raz. Distinguan si haba pasado una ronda de replicacin o varias usando Colchicina para parar la divisin celular, haciendo que no segreguen los cromosomas por lo que en la segunda ronda de divisin celular tendremos el doble de cromosomas. Dejaron un tiempo en cultivo con timidina tritiada (1er caso) y luego pasaron a un medio limpio para que se incorporasen nucletidos normales (2 caso). - 23 -

En cromosomas que solo haban hecho una ronda de replicacin (1er caso) vieron que ambas cromtidas tenan radioactividad pero aquellos que llevaban dos rondas de replicacin y por tanto el doble de cromosomas (2 caso) nicamente presentaban timidina tritiada en una de las cromtidas por lo que dedujeron que era semiconservativa. Hoy en da se utiliza la 5BrdUridina y se detecta con fluorescencia, apareciendo una cromtida ms intensa y la otra menos. Estima de la cronologa de la de replicacin con microarrays En una coleccin de clulas se separan las que estn replicando x citometra de flujo por ejemplo y se prueban sus secuencias en un microarray (G1=rojo ; S=verde. Amarillo=compiten). Como lo verde son las que estn replicando podemos distinguir las de replicacin temprana y tarda A y B: separacin de las muestras con citofotometra de flujo. G1: clulas sin replicar; S: clulas en replicacin

C: marcaje del DNA utilizado como sonda

D: resultado de la hibridacin en un miocroarray. La intensidad de uno u otro fluorocromo se relaciona con el momento del periodo S en que se replica un fragmento del genoma (ms verde: temprano; menos verde: tardo).

A nivel cromosmico existen por tanto Patrones de replicacin: separacin de regiones de replicacin temprana y tarda. Se ve marcando dos dUTP de distinto color y echando uno despus que otro se ve si se incorpora a la replicacin tarda. De aqu se dedujo: - Bandas R (blancas): replicacin temprana - Bandas G (negras): replicacin tarda

Reparacin
Se producen intercambios entre cromtidas hermanas (SCE): los mecanismos de reparacin necesitan un molde para reparar el DNA, pero si hay una rotura de doble banda, si tenemos la replicacin terminada y se estn formando las cromtidas hermanas, son idnticas y por lo tanto existe un molde, lo que conduce a un proceso de recombinacin y de intercambio de informacin entre cromtidas hermanas. Se ven ms fuertemente teidas donde hay SCE.

- 24 -

9. TRANSCRIPCIN

Que la cromatina sea funcional o no depende de si se transcribe o no, que sea competente o no competente depende de si se transcribe o no en un tejido concreto y que sea activa o no depende de si se transcribe en un momento determinado o no.

Sensibilidad e hipersensibilidad a la DNAasa

Cada uno de estos tipos de cromatina tiene una organizacin distinta, lo que se vio con los experimentos con DNAasa. La DNAasa corta donde puede, donde est accesible el DNA, purificndose el DNA y luego aadimos sondas, se corre en un gel e hibridamos con la sonda para buscar el gen de inters. Si aparece una banda, el DNA no se ha digerido (la DNAasa no ha podido entrar), si no aparece una banda, el DNA si se ha digerido. La DNAasa digiere DNA transcripcionalmente activo. En experimentos de in situ nick translation podemos ver el estado de la cromatina en los cromosomas. La DNA polimerasa trabaja donde hay un nick y reproduce ese trozo (que identificamos con una sonda). Como resultado, en humanos, se observ un patrn de bandas R. Las regiones en las que se acumulan los genes, incluso en un cromosoma en su mximo grado de empaquetamiento, presentan una organizacin distinta: en las bandas R tenemos rosetas de bucles, mientras que en las bandas G estas giran sobre s mismas generando un nivel mayor de condensacin. Si este experimento lo realizamos en distintos organismos nos encontraramos algo parecido, tambin hay distribucin desigual de los genes y regiones ms sensibles a DNAasa. Localizacin de fibras compactas en la heterocromatina centromrica y en bandas G de cromosomas humanos Con el DNA de las fibras compactas, cuando se toma el DNA de esas fibras con cromatina compacta y se hibrida con una sonda de humanos, se consigue un patrn de bandas G (B). Si se hace la misma hibridacin pero sin impedir con antelacin la hibridacin de secuencias Cot se ve que - 25 -

hibrida mucho ms en la regin centromrica que en el resto del cromosoma (A). Las secuencias Cot son una familia de secuencias muy muy repetidas. Localizacin de fibras abiertas en las regiones densas en genes (bandas R) de cromosomas humanos Efectivamente, el patrn coincide con el de bandas R. La organizacin interna, incluso en un cromosoma en metafase, se corresponde con un patrn de disponibilidad de la fibra de DNA (diferenciacin entre regiones que albergan genes y las que no) esta organizacin se mantiene desde la interfase hasta la metafase, y as se hereda!.
+ Cot1: se impide la hibridacin de las secuencias Cot1 (repetidas)

La transcripcin se ha estudiado principalmente en dos tipos de Open: cromosomas fibras abiertas ; Bulk: especiales: todas las fibras

Cromosomas politnicos
Los cromosomas politnicos estn compuestos por muchas fibras, son tpicos pero no exclusivos de las glndulas salivares de los dpteros. Estos cromosomas, en interfase parecen muy lejos, y son el resultado de que, en contra de lo normal, los cromosomas han entrado en replicacin y de forma natural no han entrado posteriormente en divisin (endorreplicacin). Lo que ocurre, es que, en un N, se replica y de forma normal se condensan y se dividen, pero aqu ni se separan, ni se dividen. Entran en un segundo ciclo de replicacin y ah vamos mutando cromtidas hermanas. Las fibras que se producen en la replicacin, en lugar de separarse, se quedan pegadas unas a otras, as hasta 1024!. Las zonas ms condensadas y menos se mantienen en el mismo sitio en las fibras, por lo que al haber tantas se amplifican y podemos verlas muy bien. Esto permiti descubrir que haba un patrn establecido ya en interfase y descubrir mutaciones (delecin, inversin) En el caso de Drosophila adems hay mas curiosidades aparte de que se formen 1024 fibras en 10 rondas de replicacin, se produce otro fenmeno: adems de las fibras que unen cromosomas, tambin hay asociacin entre cromosomas homlogos, por lo tanto, hay unidas ms de 2000 fibras. Como las 2000 y pico fibras estn perfectamente alineadas ocurre que cualquier cosa, (ej: que haya mayor o menor condensacin del material) se hace muy evidente. Adems todas las regiones centromricas de los 4 cromosomas que tiene Drosophila se unen en un punto llamado cromocentro. Tambin hay PUFFs: en determinadas regiones aparecen zonas ms abultadas que representan zonas de transcripcionalmente activas. Se ven con tcnicas que localizan el RNA (marcando con Uridina Tritiada) o con anticuerpos contra factores de transcripcin. - 26 -

Las regiones abultadas se forman porque ah los bucles estn mucho mas abiertos.

Cromosomas plumulados:
Se pueden ver al microscopio ptico en contraste de fase, por lo que se puede trabajar con clulas in vivo, son menos conocidos que los politnicos. Han sido aislados de ovocitos de anfibios, la ovogonia entra en meiosis y se mete en metafase, mientras no se divide en la primera divisin meitica (ovocito primario) cuando se divide en la segunda (ovocito secundario). Lo que nosotros vemos en un ovocito primario en metafase I, por lo tanto los cromosomas pueden estar de muchas maneras porque la profase I es muy larga. Vemos un diplotene con quiasmas. Se pueden ver en estos cromosomas bucles abiertos de cromatina (lo que seran los pelillos) que indican que en ese momento est habiendo una intensa transcripcin, este hecho fue el que confirm del todo la existencia de los bucles en un cromosoma. Por ello, se han usado para el estudio de la transcripcin porque se trascriben para dejar comida molecular al renacuajo. El estudio detenido de este tipo de cromosomas permiti entender la capacidad transcripcional de los bucles: en un bucle puede haber una nica unidad transcripcional, varias en el mismo sentido, o varias en sentido opuesto.

10. DETERMINACIN CROMOSMICA DEL SEXO Cromosomas sexuales

1.- QU SON? - incidencia en la naturaleza - tipos de determinacin cromosmica del sexo 2.- CMO SE HACEN? - origen y evolucin de la diferenciacin cromosmica - compensacin de dosis gnica 3.- QU TIENEN DENTRO? - control gentico de la diferenciacin sexual: modelos 1. QU SON? Los cromosomas estn relacionados con la determinacin del sexo y se basa en la teora cromosmica de la herencia.

- 27 -

Cuando se miraban cariotipos de hembras de una especie determinada se encontraban que cada cromosoma tena su homlogo, mientras que en machos todos los homlogos eran parecidos menos dos cromosomas muy distintos. La primera especie donde se comprob esto era en un saltamontes, donde curiosamente, tenan un numero impar de cromosomas, por lo tanto no es que haya dos distintos si no uno y se le llamo X porque era una incgnita. Esta fue la primera intuicin que se tuvo de que la determinacin del sexo tena que ver con los cromosomas. En unos organismos donde se encontraron dos cromosomas distintos, al otro, lo llamaron Y. Como estaban relacionados con el sexo, porque slo aparecan en machos o hembras (la pareja cromosmica), se les llam cromosomas sexuales. Mirando muchos organismos se vio que no en todos se da la regla de machos XY y hembras XX. Por tanto ni todo el sexo se explica con los cromosomas sexuales ni todos los cromosomas sexuales hablan de sexo. El hecho de que tengamos organismos XX y XY y unos de ellos sean parejas absolutamente homlogas (hembras) da lugar a que se produzcan gametos iguales, todos con cromosomas X (en condiciones normales) por lo que se les llama homogamticos. En machos, que generalmente tienen XY producen gametos distintos por lo que se llama sexo heterogamtico. XX X (Homogamtico) XY X/Y (Heterogamtico) No en todos los casos ocurre que XX sean las hembras, y XY son los machos, hay casos (lepidpteros, aves) en los que las hembras son las heterogamticas y los machos los homogamticos. No en todos los organismos se puede distinguir a los dos sexos por sus cromosomas y esto tiene mucho que ver con la determinacin del sexo Hay organismos en los que hay factores ambientales para ser machos o hembras (ej: reptiles: que un reptil sea macho o hembra depende de la temperatura de incubacin del huevo) Adems de los factores ambientales, los grupos que podemos distinguir por los cromosomas sexuales son distintos: SIMPLES: XX / XY: mamferos, Drosophila ZW / ZZ: aves, reptiles XX / X0: ortpteros X0 / XY: algunos ratones XO X/O XY X/Y DERIVADOS: - 28 Slo XO y XY (se descarta la mitad de la descendencia)

HAPLO-DIPLOIDA: himenpteros. Uno de los sexos tiene la mitad de cromosomas que el otro (generalmente machos). Cuando la reina es fecundada salen himenpteros hembras (diploides) y cuando no se fecundan salen machos (haploides). La hembra es diploide y el macho haploide y la hembra puede generar o no individuos diploides. Hay un gen relacionado con esto, pero Por qu los diploides son hembras y los haploides machos? Pues tiene que ver con el gen determinante del sexo complementario, gen csd Los diploides pueden ser machos (son homocigotos en el gen csd) pero se mueren, y slo sobreviven las hembras porque son heterocigotas para ese gen (obreras). NEO- XY (sistema XX/XY): algunas especies de saltamontes. Proceden de sistemas sencillos. Se ha incorporado un cromosoma de sexo, el Y. el truco de los sistemas mltiples es que evolutivamente vamos mejorando con ms cromosomas (esto surge de un sistema (XX/XO). Cuando es XX/XO, por alguna razn, puede haber un intercambio entre cromosomas no homlogos y como resultado tenemos lo que se llama una fusin cntrica, se da entre el cromosoma X y un autosoma.

Gametos

A A

Neo X neo Y

El resultado de esto es que segregan juntos y esto se transmite a la descendencia y podemos mantener personas as en la evolucin. Este proceso se denomina establecimiento de polimorfismos en el que tenemos tres tipos de hembras y dos tipos de machos, durante un tiempo en la evolucin convivirn las dos formas: XX/XO XX/XY

Los heterocigotos sern viables si los dos trozos de autosoma migran a distinto polo, sino no. Si estos nuevos individuos tienen xito evolutivo o hay deriva gnica (que se aslan) en efecto fundador al final se implantar el sistema XX/XO por el XX/XY. El autosoma que se va a hacer Y no lo tendr nunca una hembra.

- 29 -

MLTIPLES: arcnidos y el ornitorrinco. Varias parejas de cromosomas sexuales implicados Ocurren cuando lo anterior se repite muchas veces. Cuando se aisl el cariotipo de Ornitorrinco se vio que haba varios cromosomas Y, esto, debido a la segregacin al azar, puede provocar gametos defectuosos. El ornitorrinco tambin es un XO especial, tiene como 26 parejas de cromosomas y 10 de ellos estn implicados en la determinacin del sexo. Hay muchos, y segn su segregacin los llamamos X1.X5 Y1..Y5 No es que X1 Y1 segreguen como homlogos entre s, si no que esto obedece a un sistema complicado, es como que un autosoma comienza a segregar como sexual, como en el caso del saltamontes. Adems intercambian informacin por translocaciones recprocas (excepto E1 y E10) generando multivalentes. En el sistema de translocaciones hay siempre un sistema especializado: a un polo un nmero determinado de cromosomas y al otro lado los otros. En esos gametos tienen que ir los cromosomas necesarios para que el gameto sea viable. Los cromosomas sexuales desde el 1 al 10 segregan de forma conjunta, todos a la vez y unidos entre si. Tienen zonas homologas con los otros cromosomas (X1 segrega respecto de Y1) Esto se mantiene solo si hay translocacin, si hay quiasmas. Tambin, slo se mantiene si segrega uno a un lado y otro al otro. Esto sera el caso de la primera divisin meitica. Si van todos juntos a un polo y los otros al otro polo el gameto ser equilibrado. Si un autosoma se incorpora a esta secuencia de cromosomas pues pasa a ser cromosoma sexual. Lo mejor es que segreguen en zig-zag (uno arriba, uno abajo), pero esto no ocurre en la hembra que es homogamticaLas hembras son X1X1 X2X2 X3X3 y los machos son X1Y1 X2Y2 X3Y3 2.- CMO SE HACEN? Origen y evolucin de la diferenciacin cromosmica Suponemos que nos encontramos con especies que funcionan con reproduccin sexual y tenemos bien definidos machos y hembras. Es ms difcil de lo que parece porque supone un gasto energtico.

1) Una pareja de autosomas con locus/ loci para la determinacin del sexo Vamos a pensar que hay un gen, un locus que determina el sexo: M da masculinidad. Slo mm da hembra. Los MM son letales - 30 -

Proto - X m M
Habr ms machos que hembras? genotipos MM Mm mm fenotipos letal? macho hembra

Proto Y

M>m

La respuesta es no, porque se asume que el dominante homocigoto para M es algo letal: las mutaciones dominantes en homocigosis en su mayora son letales. Asumiendo esto ya tenemos claro porque dos heterocigotos no se juntan, porque daran un mayor nmero de descendencia inviable MM. Con el cruce Mm x mm no dar individuos letales. Esto se transforma en que el cromosoma que lleva el alelo dominante (Y) y el que lleva el recesivo (X) El segundo paso que damos es que debe ocurrir una restriccin de la recombinacin entre los cromosomas en un segmento que incluya los loci de determinacin del sexo. Por tanto un segmento donde est el locus del sexo no va a recombinar nunca jams. 2) Cmo se logra esto?: restriccin de la recombinacin en un segmento cromosmico que incluya a los loci del sexo: Hay dos formas con las que evitamos la recombinacin: heterocromatina (epigentica) e inversin: cuando tienen un heterocigoto para la inversin (un cromosoma con inversin y otro sin inversin) lo que ocurre es que si hay recombinacin dentro del sitio donde est la inversin, que puede ocurrir, el gameto ser inviable porque o le faltarn o le sobrarn (ir cargado de duplicaciones o deleciones) cosas al cromosoma. De manera que una inversin, que es una cosa comn, obliga a que no haya recombinacin en un sitio clave que tiene el locus que determina el sexo. La zona que no recombina porque est invertida en el segmento diferencial y el otro fragmento que no pasa nada es el segmento pseudoautosmico: puede recombinar porque son homlogos. 3) Qu consecuencia tiene no recombinar? En el futuro, en el cromosoma Y comienzan a acumularse mutaciones en el segmento diferencial, porque todo muta, pero en ese fragmento como no recombina, si hay una mutacin ah se va a quedar, por lo que pasa a la siguiente generacin. Lo que se pone en el X no pasa nada porque en hembras recombina entre los cromosomas X como cualquier otro cromosoma y en machos recombina con el fragmento pseudoautosmico del y, pero el segmento diferencial del Y ah se queda. - 31 -

Cualquier cosa que le ocurra ah se queda y si se propicia una acumulacin en deterioro de esa regin por eso, aunque en un principio era una regin absolutamente homloga con el X ahora ya no lo es, pueden ser incluso modificaciones letales. Funciona aqu lo que se llama el trinquete de Mller, como una carraca, gira y gira pero slo en una direccin, no vuelve hacia atrs. Una vez que tienes una mutacin en un Y, al paso de cierto tiempo no habr ningn Y sin mutacin porque ninguno ha podido volver hacia atrs. Se van sumando alteraciones: un deterioro continuo del cromosoma Y 4) Compensacin de dosis en los genes del segmento diferencial que estarn dos veces en las hembras (XX) y una vez en los machos (XY) Se produce en ese momento otro fenmeno: cuando son zonas del cromosoma Y que en un principio eran genes nuevos y que en el X estn perfectas, conduce a que los machos (XY) tienen un cromosoma bueno y otro muy malo. Como no todo lo que esta escrito en el X esta relacionado con el sexo, hay que inventarse un sistema en el que machos y hembras tengan.. Hay muchas alternativas: en mamferos las hembras inactivan uno de sus cromosomas X, pero tanto el X de las hembras, como el X de los machos funcionan el doble comparndolo con cualquier autosoma (que tiene dos genes por cada homologo) A lo largo de la evolucin, secuencias autosmicas que en un caso pueden estar en autosomas, pero en otros organismos estn en los cromosomas sexuales: X Y

1 3

1 2
X Y

12

3
X Y

Diferencia entre que se incorporen al X o al Y y al segmento de apareamiento o no.

Si caen en la zona de homologa se compartirn entre los cromosomas sexuales, pero si no cae en la zona de homologa pues no se compartirn. En marsupiales, en general, hay dos cromosomas sexuales (X e Y) que no comparten nada, no hay segmentos autosmicos que compartan, lo que les hace muy interesantes. 1,2 y 3 en marsupiales estn en cromosomas distintos. En humanos 1 y 2 se han unido a X e Y haciendo que ya tengan algo en comn y puedan aparear en meiosis. Ms o menos la mitad de todas las secuencias son exclusivas del Y donde no hay informacin gentica. En la otra mitad del Y: 30 Mb son secuencias repetidas de no homologa y 3Mb con homologa con el X - 32 -

(secuencia PAR).Por estas regiones se produce la recombinacin, segregan y se comunican nuestros cromosomas sexuales. 3.- QU TIENEN DENTRO? Control gentico de la diferenciacin sexual: modelos En mamferos se ha dicho que el Y es fuerte, tiene algo, que cuando esta presente, el individuo se desarrolla como macho.
XXY Y fuerte mamferos Y dbil Drosophila macho X0 hembra

hembra

macho

En Drosophila, que la determinacin sexual es igual que en humanos, ocurre lo contrario XXY (hembras) y XO (machos), es decir, que su cromosoma Y pinta poco, por eso se habla de Y dbil. Lo que se vio que tena el Y en mamferos es el sex reversal Y (SRY), Sry es una secuencia de pequeo tamao es el determinante de la masculinidad, cuando est presente esta secuencia, se desarrolla como macho. Podemos tener XX, pero si est presente esta secuencia se desarrollar como macho. Si hay una recombinacin errnea pueden poner el gen Sry en el X dando mujeres con genes de hombre y viceversa. Esto no es as siempre, en Drosophila acta la secuencia XA, se cuentan el nmero de cromosomas X con respecto al nmero de complementos autosmicos. Cuando X/A=1 se enciende un gen que se llama SXL (sex lethal), si este sxl no se enciende no hay diferenciacin hacia hembra, y si se enciende se desarrollan machos. Si X/A es distinto de 1 (XO o XY) sxl no se enciende y no se desencadenan los procesos que dan lugar a hembras si no a machos. El tercer modelo mejor estudiado es el de C. Elegans, que es parecido a Drosophila, funciona la seal X/A: si es 05 (XO) hay un gen llamado xol que se enciende y se diferencia a macho (xol= letalidad en XO cuando es mutante) Si X/A es 1 (XX) se desarrolla como hermafrodita porque el gen xol no se enciende. En las aves, el sexo heterogamtico es el de las hembras y es ZW. El Z es un cromosoma ms o menos grande y el W es pequeo. Sabemos que hay un gen DMRT1 que esta en el Z en las hembras slo hay uno (ZW) y en los machos 2 (ZZ). Como el Sry pero para hembras.
ORGANISMO mosca XX / XY gusano XX / XO Si seal X:A = 0,5 Xol-1 ON: diferenciacin a machos hipotranscripcin de XX de hembras, para igualar la TC del XX frente al XO mamfero XX / XY Si Sry ON: diferenciacin a machos Inactivacin de un X en las hembras, e hipertranscripcin del X en los dos sexos

Si seal X:A = 1 GENES Y SEXO Sxl ON: diferenciacin a hembra Hipertranscripcin COMPENSACIN del X de machos, DE DOSIS para compensar que la hembra tiene 2.

- 33 -

3. bases de la continuidad y la transmisin de la informacin gentica

11. MITOSIS Ciclo celular: Ciclinas y Cdks

La mitosis, como proceso de reproduccin celular, para que vale la mitosis?: renovacin celular, crecimiento, reproduccin. La mitosis no lo usan todos los organismos de la misma manera, los unicelulares y los asexuales se reproducen por mitosis (p.e: levaduras y son eucariotas!!) La mitosis vale para distintas cosas entre las que tenemos reproduccin, crecimiento o renovacin. Se saba que dentro del ncleo hay una toma de decisin para duplicar el material gentico que ocurra en el periodo S. Hoy en da se conoce que bsicamente la decisin de que las clulas en interfase entren en divisin est relacionada con dos tipos e protenas: cdks y ciclinas que colaboran entre s haciendo posible el progreso del ciclo. Estas dos protenas antes se llamaron factor promotor de la maduracin o de la mitosis (MPF)

Pero hoy se sabe que hay una red muy compleja de interacciones entre un montn de protenas de las cuales 11 son componentes esenciales sin los cuales el ciclo no avanzara. Las ciclinas son protenas que se muestran en un tipo celular proliferante en distintas etapas del ciclo celular, se vea que crecan brutalmente en G1 y G2 y caan en mitosis. Sabemos que hay muchos tipos cuanto mas complejo es el organismo y siempre funcionan acoplndose a cdks. Las cdks fosforilan otras protenas, pero para estar actuando necesitan, entre otras cosas, estar unidas a las ciclinas. Se ha visto que las fosforilaciones de estas cdks tambin estn relacionadas con la evolucin de las cdks. Hay momentos a lo largo del ciclo celular crticos, por ejemplo cuando se inicia el periodo S siempre se dividir porque en S, se duplica el material gentico y entonces generamos una clula - 34 -

con el doble de informacin y as no se puede vivir, es un punto de no retorno. Recordamos que hay clulas que de manera controlada no se dividen despus de duplicar el material gentico (glndulas salivares). Para entender el ciclo celular se consigui estudiar hbridos de clulas que entraban en divisin con clulas que no entraban en divisin.

Lo que se vea es que adems de los cromosomas de una clula que estn ms condensados, los de la otra clula, que estn recin replicados estn ya condensndose (no es lo normal en estado G2) gracias a la ayuda de las condensinas que agrupan los bucles de la fibra de 30nm llegando a condensar 2 metros de DNA en una clula de 4 o 5 m!! Si est en fase S a la vez se provoca la condensacin antes de la divisin provocando roturas. Esto quiere decir que algo tienen las clulas en divisin que no tienen las otras que induce a la condensacin. De ah sali lo del factor promotor de la mitosis (MPF)

Ciclo celular: fases

Interfase
La interfase tpica se divide en tres fases:

G1: Esta fase tiene lugar desde que la clula nace hasta que inicia la etapa S. Tiene lugar la sntesis de ARNm con la consiguiente produccin de protenas. S: Replicacin del ADN nuclear y sntesis de ARNm e histonas G2: Sntesis de protenas (las que constituirn los microtbulos del haz mittico).

Durante toda la interfase la clula crece, al producir protenas y orgnulos citoplsmicos, preparndose as para entrar en mitosis.

Mitosis
Profase Es la fase ms larga de la mitosis. Se produce en ella la condensacin del material gentico (ADN, que en interfase existe en forma de cromatina), para formar unas estructuras altamente organizadas, los cromosomas. Como el material gentico se ha duplicado previamente durante la fase S, los - 35 -

cromosomas replicados estn formados por dos cromtidas, unidas a travs del centrmero por molculas de cohesinas. Adems, durante esta fase se inicia la formacin del huso mittico bipolar. Uno de los hechos ms tempranos de la profase en las clulas animales es la duplicacin del centriolo; los dos centriolos hijos migran entonces hacia extremos opuestos de la clula. Los centriolos actan como centros organizadores de microtbulos, controlando la formacin de unas estructuras fibrosas, los microtbulos, mediante la polimerizacin de tubulina soluble. De esta forma, el huso de una clula mittica tiene dos polos de los que emanan microtbulos. En la profase tarda desaparece el nuclolo y se desorganiza la envoltura nuclear. Prometafase: Despus de la condensacin, las cdks fosforilan especficamente las laminas y eso hace que la envoltura nuclear desaparezca. As los cromosomas que haban comenzado el proceso de condensacin, se ven rodeados del huso acromtico. El huso est formado por dos semi-husos que se forman a partir de centriolos (en animales) o no (plantas). Son microtbulos (verde) que nacen a partir del COM (centro organizador de microtbulos). Esos microtbulos invaden el espacio de los cromosomas (azul), interaccionan con ellos. El cinetocoro (rojo) es una estructura de protenas que se forma especficamente en la divisin y se localiza al lado del centrmero. Los cinetocoros capturan los microtbulos. Los microtbulos en metafase nacen desde los extremos negativos y en el extremo positivo se va aadiendo tisulina. Cuando un microtbulo toca el cinetocoro la fase de renovacin disminuye en ese microtbulo. Cada cromosoma ensambla dos cinetocoros hermanos sobre el centrmero, uno en cada cromtida. Un cinetocoro es una estructura proteica compleja a la que se anclan los microtbulos. Aunque la estructura y la funcin del cinetocoro no se conocen completamente, contiene varios motores moleculares, entre otros componentes. Cuando un microtbulo se ancla a un cinetocoro, los motores se activan, utilizando energa de la hidrlisis del ATP para "ascender" por el microtbulo hacia el centrosoma de origen. Esta actividad motora, acoplada con la polimerizacin/despolimerizacin de los microtbulos, proporciona la fuerza de empuje necesaria para separar ms adelante las dos cromtidas de los cromosomas. Los microtbulos tocan algn cinetocoro y comienzan a hacer movimientos de vaivn por esta inestabilidad dinmica. Se producen movimientos en el cromosoma por las fuerzas P/AP (polares/anti polares) La prometafase es muy importante porque el huso interacciona con los microtbulos para dirigirlos a la mitad de la clula y formar la placa de metafase. Esto es necesario porque si no se puede entrar en anafase porque est el cromosoma sin alinear y no hay seguridad de que el cromosoma segregue correctamente. - 36 -

Para que ocurra esto, los cromosomas tienen que estar bien orientados: dos cinetocoros y cada uno asociado con un microtbulos distinto. Pueden ocurrir otras cosas: mismo cinetocoro en contacto con microtbulos de distintos polos, en este caso no hay tensin. La tensin lo notan y la comunican los cromosomas cuando estn bien colocados, con microtbulos de de polos opuestos. Notan tensin porque las cromtidas hermanas estn unidas por la cohesina.

Hoy da se sabe que hay kinasas llamadas AURORA A y AURORA B que detectan la falta de tensin y desestabiliza la falta de tensin (esto forma parte del check point de la metafase) Por tanto en condiciones normales una clula no se va a dividir a menos que los cromosomas estn todos orientados en la placa ecuatorial.

Metafase: A medida que los microtbulos encuentran y se anclan a los cinetocoros durante la prometafase, los centrmeros de los cromosomas se congregan en la "placa metafsica" o "plano ecuatorial", una lnea imaginaria que es equidistante de los dos centrosomas que se encuentran en los dos polos del huso. Este alineamiento equilibrado en la lnea media del huso se debe a las fuerzas iguales y opuestas que se generan por los cinetocoros hermanos. El nombre "metafase" proviene del griego que significa "despus". Los cromosomas son conducidos a la placa ecuatorial mediante un movimiento de polo a polo llamado congression, en el que participan dos familias de protenas: quinesinas y dinenas. Esto es fundamental, porque si no se colocan en la placa el reparto del material no ser correcto Desde el momento en los que los cromosomas replican, las dos cromtidas hermanas aparecen asociadas. Esto tiene que ver con las cohesinas o complejos de cohesin. Son complejos parecidos a las condensitas por que mantienen los SMC 1-3. Forman un anillo que agarra los dos bucles de cromtidas hermanas distintas. Dado que una separacin cromosmica correcta requiere que cada cinetocoro est asociado a un conjunto de microtbulos (que forman las fibras cinetocricas), los cinetocoros que no estn anclados generan una seal para evitar la progresin prematura hacia anafase antes de que todos los cromosomas estn correctamente anclados y alineados en la placa metafsica. Esta seal activa el checkpoint de mitosis y est constituida por dos familias de protenas: Bub-1 y Mad-2, que se encienden (porque las vemos por inmunodeteccin) cuando un cromosoma no est en placa, parando la divisin, mientras que si todo est normal estn inactivas.

- 37 -

Anafase: Cuando todos los cromosomas estn correctamente anclados a los microtbulos del huso y alineados en la placa metafsica, la clula procede a entrar en anafase (del griego que significa "arriba", "contra", "atrs" o "re-"). Entonces tienen lugar dos sucesos. Primero, las protenas que mantenan unidas ambas cromtidas hermanas (las cohesinas), son cortadas, lo que permite la separacin de las cromtidas. Estas cromtidas hermanas, que ahora son cromosomas hermanos diferentes, son separados por los microtbulos anclados a sus microtbulos al desensamblarse, dirigindose hacia los centrosomas respectivos. A continuacin, los microtbulos no asociados a cinetocoros se alargan, empujando a los centrosomas (y al conjunto de cromosomas que tienen asociados) hacia los extremos opuestos de la clula. Este movimiento parece estar generado por el rpido ensamblaje de los microtbulos. Estos dos estadios se denominan a veces Anafase temprana (A) y Anafase tarda (B). La Anafase temprana viene definida por la separacin de cromtidas hermanas, mientras que la tarda por la elongacin de los microtbulos que produce la separacin de los centrosomas. Al final de la Anafase, la clula ha conseguido separar dos juegos idnticos de material gentico en dos grupos definidos, cada uno alrededor de un centrosoma. Telofase: La Telofase (del griego , que significa "final") es la reversin de los procesos que tuvieron lugar durante Profase y Prometafase. Durante la Telofase, los microtbulos no unidos a cinetocoros continan alargndose, estirando an ms la clula. Los cromosomas hermanos se encuentran cada uno asociado a uno se los polos. La membrana nuclear se reforma alrededor de ambos grupos cromosmicos, utilizando fragmentos de la membrana nuclear de la clula original. Ambos juegos de cromosomas, ahora formando dos nuevos ncleos, se descondensan de nuevo en cromatina. La cariocinesis ha terminado, pero la divisin celular an no est completa. Citocinesis La citocinesis es un proceso independiente, que se inicia simultneamente a la Telofase. Tcnicamente no es parte de la mitosis, sino un proceso aparte, necesario para completar la divisin celular. En las clulas animales, se genera un surco de escisin (cleavage furrow) que contiene un anillo contrctil de actina en el lugar donde estuvo la placa metafsica, estrangulando el citoplasma y aislando as los dos nuevos ncleos en dos clulas hijas. Tanto en clulas animales como en plantas, la divisin celular est dirigida por vesculas derivadas del aparato de Golgi, que se mueven a lo largo de los microtbulos hasta la zona ecuatorial de la clula. En plantas esta estructura coalesce en una placa celular en el centro del fragmoplasto y se desarrolla generando una pared celular que separa los dos ncleos. El fragmoplasto es una estructura de microtbulos tpica de plantas superiores, mientras que algunas algas utilizan un vector de microtbulos denominado ficoplasto durante la citocinesis. Al final del proceso, cada clula hija tiene una copia completa del genoma de la clula original. El final de la Citocinesis marca el final de la fase M. Es necesario que los cromosomas estn en la placa, porque si no, no se puede entrar en Anafase porque est el cromosoma sin alinear y no hay seguridad de que el cromosoma segregue correctamente. Para que ocurra esto, los cromosomas tienen que estar bien orientados: dos cinetocoros y cada uno asociado con un microtbulos distinto. Pueden ocurrir otras cosas: mismo cinetocoro en contacto con microtbulos de distintos polos, en este caso no hay tensin. - 38 -

Secuencias centromricas y cinetocoros:

Se saba que los cromosomas de levadura (S.cerevisiae) se mueven slo con un microtbulo que interacciona con los centrmeros. Se intuy que estas zonas estaban conservadas en la evolucin. Pero no, hay diferencias por tanto con el telmero, que est conservado evolutivamente. En el centrmero las secuencias de distintos organismos son distintas y de hecho no se conocen muchas, porque otras muchas son secuencias repetidas. Lo que s ocurre es que se conocen protenas que interaccionan con centrmero y definen la estructura y funcin del cinetocoro y estas protenas s estn conservadas en la evolucin (los centrmeros no). Esto apunta a que la secuencia del centrmero no es importante mientras que la estructura le tiene que permitir interaccionar con el cinetocoro. Tienen secuencias distintas pero son estructuralmente iguales, por ejemplo, protenas cono CENP-A-J que interacciona con el centrmero, se ha visto que esta protena esta en todos los organismos: animales y vegetales. Destacan:

Todas las protenas CENP forman parte de la regin centromrica. La CENP-A se ha descrito a partir de humanos y gracias a la existencia de enfermedades autosmicas como por ejemplo CREST (parecida a la esclerosis). Estas son las que estn ms conservadas, pero luego actan muchas ms. Por tanto la estructuracin de la cromatina del centrmero ya es distinta al resto del cromosoma. Hay una variacin tremenda en el tamao que ocupa el centrmero, desde 120 pb de S.cerevisiae a miles de pb en otros tipos de levaduras y 4 millones de pb en humanos. Esto depende de la cantidad de secuencias repetidas Los neocentrmeros: cuando se habl de los satlites en la secuencia centromrica hacamos referencia a los neocentrmeros. Son regiones cromosmicas en cualquier cromosoma que en un momento determinado pueden actuar como centrmero. Son regiones que normalmente no son centrmeros pero que en determinados momentos actan como tal. En esta situacin el cromosoma tendr poca estabilizacin y al segregar pueden romper los cromosomas. Hay regiones que son capaces de generar un cinetocoro y por tanto un centrmero funcional. Por tanto Qu es un centrmero? Para un mismo genoma hay determinadas secuencias que segn las circunstancias son o no centrmeros, por tanto no es tan importante la secuencia. Pero se previ que el satlite es la secuencia real del centrmero: influye mucho ms. Papel de CENP-A, la H3 centromrica: si por cualquier circunstancia en una regin hay CENP-A en vez de H3, esa regin puede funcionar como centrmero. - 39 -

Aurora B controla que la orientacin sea correcta, que haya tensin. Con todo esto se ha podido deducir la posible estructura en 3-D del centrmero de humanos:

El modelo del bucle centromrico propone que las cromtidas se unen por anillos de cohesin y se genera un bucle dentro de la cromtida donde interaccionan los microtbulos. Pero, no todos los cromosomas son iguales, hay dos tipos de cromosomas: Cromosomas monocntricos: son los nuestros y de otros organismos. Se reconoce un centrmero con un cinetocoro. Segregan en forma de V Cromosomas holocntricos: no tienen un cinetocoro si no que a lo largo de toda la cromtida producen interacciones con los microtbulos del huso. Las protenas cinetocricas aparecen en toda la longitud del cromosoma. A lo largo del cromosoma tendrn secuencias donde se unen estas protenas, no todo el cromosoma es centrmero. Estn tanto en plantas como en animales (chinches). Estructuralmente se han hallado tambin otro tipo de cromosomas: Trilaminares: el que tenemos nosotras, Drosophila esta denominacin viene por lo que se observa al microscopio electrnico en un cromosoma en metafase. El cinetocoro (lo que pintamos como una bolita) en realidad son dos placas densas y los microtbulos se unen a ellas, la tercera lamina seria el espacio en blanco que hay entre las dos placas. - 40 -

Esfricos: hay otros organismos que tienen los cinetocoros como esferas, que es lo que se ve al microscopio electrnico.

**LA BELLEZA DE LO DIFERENTE: SP CON CROMOSOMAS HOLOCNTRICOS (J.Rufas)

En microscopa electrnica se puede distinguir perfectamente la zona de constriccin primaria o centrmero. Este sirve para interaccionar con los microtbulos del huso estabilizndolos para luego poder segregar. Adems, es responsable de la cohesividad de las cromtidas hermanas. En mamferos hay distintos dominios en la regin del centrmero: -Cinetocrico: placa a la que se unen directamente los microtbulos. Puede dividirse a su vez en: Lmina externa, Lmina media y Lmina interna. -Central interno -Apareamiento: donde se unen las dos cromtidas. En algunas plantas e insectos, se puede ver una especie de pelotilla (ball) situada en una especie de copa que constituye el lugar de interaccin de los microtbulos. Estos son los cromosomas esfricos. Los cromosomas que se mueven como si los microtbulos tiraran de todo el cromosoma son los cromosomas holocntricos. Esto implica que no presentan un centrmero, sino que las fibras cromosmicas se organizan a lo largo de toda la cromtida, es decir, en Anafase migran las cromtidas paralelas!. Adems, en meiosis se produce una restriccin de la actividad cintica a los extremos, y los fragmentos cromosmicos obtenidos por rayos X presentan un comportamiento de segregacin normal. El centrmero puede estar distribuido por todo el cromosoma de varias maneras: -Policntrico: en muchos puntos (plantas) -Holocntrico: en todo el cromosoma (trilaminar) -Escalera: en todo el cromosoma como una escalera. En la estructura trilaminar slo se detecta DNA en la lmina interna, en las otras slo hay protenas. La composicin de las protenas en estos cinetocoros se ha mantenido evolutivamente. Los cromosomas holocntricos en Metafase aparecen como pegados en dos placas que se mueven como un todo y que estaban pegadas por cohesinas hasta llegar a la Metafase (galleta oreo) **

El papel de la Shugosina: Cuando ya estn todos los cromosomas en placa empieza la Anafase entra en funcionamiento el complejo promotor de la anafase APC: permite la segregacin de las cromtidas hermanas a polos opuestos. Para que esto ocurra tiene q individualizar las cromtidas y separarlas. Pero las cromtidas hermanas estaban unidas desde la replicacin. Primero por concatenacin que se elimina con la topo II (que forma parte del scafold). A la vez que se forman las cromtidas se incorpora el anillo del complejo de cohesin. Este anillo mantiene unidas las cromtidas, se condensa y entran juntas en metafase.

- 41 -

Cuando se empez a estudiar esto de la cohesin, se vio que durante la condensacin y hasta llegar a metafase estos complejos de cohesin que estn por todo el cromosoma son eliminados por AURORA B y polokinasa (los eliminan de los brazos). Luego en el paso a la Anafase hay que romper esa unin para que puedan segregar, pero no se eliminarn los complejos de cohesin de los centrmeros. Por qu no son degradados los complejos de unin de los centrmeros por AURORA B y polokinasa? Porque la Shugosina protege los centrmeros. Son protenas que especficamente se colocan en la regin centromrica y que impiden que se degraden los complejos de cohesin en los centrmeros. Cuando entramos en anafase, el APC hace que la shugoshina salga del cromosoma y permite que la securina y la separasa acten para que se puedan separar completamente los cromosomas. Al ubiquitinar la securina esta se degrada dejando libre a la separasa que acta sobre la shugosina y los complejos de cohesin a nivel del cinetocoro (rompiendo los complejos de cohesina). Tras esto, suponiendo que ya estn separadas las cromtidas hermanas, estos segregan porque hay microtbulos que tiran de ellas hacia los polos opuestos, mediante: -degradacin de microtbulos a nivel del cinetocoro (extremo positivo) y en los polos (extremos negativos) -intervencin de dineinas y kinesinas Telofase: cuando se forma de nuevo el ncleo, los cromosomas se deben relajar para emigrar a un territorio cromosmico. En una clula en mitosis se pueden medir dos cosas: valor C y nivel de poliploida. Valor C: se refiere a clulas haploides y sin replicar, es decir los gametos pero las hembras tienen clulas haploides y sin replicar? El segundo corpsculo polar cuando se fecunda. Sin embargo, los machos si generan esos gametos, por eso se miden en hembras, no en machos. 1c: valor de una clula haploide y sin replicar, de un individuo diploide Cualquier clula neutra sin replicar es 2c porque son diploides. Despus de la replicacin son 4c y despus de dividirse vuelven a ser 2c. Por tanto la lnea somtica se mueve entre 2c y 4c. Poliploida: la cantidad de complementos cromosmicos que tenemos siempre es 2, estn o no replicados siempre tenemos cromosomas de mama y cromosomas de papa.

- 42 -

12. MEIOSIS
Es una divisin compleja con dos procesos de divisin cromosmica donde slo la primera tiene replicacin. Valor C: como resultado, en la fase S premeitica, se produce 2c a 4c que se mantiene como 4c hasta la ANFASE I Como no hay replicacin, las clulas se dividen y pasa de 2c a c, son los futuros gametos. Nivel de poliploida: es diploide hasta la anafase I, pero en la segunda divisin se haploide y se mantiene ah hasta que luego separamos cromtidas hermanas, nos queda un cromosoma. Esas cromtidas no son exactamente iguales a las que heredamos, si no que es una mezcla de los parentales.

Fases de la Meiosis
Meiosis I
Profase I La profase I de la primera divisin meitica es la etapa ms compleja del proceso y a su vez se divide en 5 subetapas, que son: Leptotene La primera etapa de Profase I es la etapa del leptotene, durante la cual los cromosomas individuales comienzan a condensar en filamentos largos dentro del ncleo. Cada cromosoma tiene un elemento axial, un armazn proteico que lo recorre a lo largo, y por el cual se ancla a la envuelta nuclear. A lo largo de los cromosomas van apareciendo unos pequeos engrosamientos denominados crommeros. Zigotene Los cromosomas homlogos comienzan a acercarse hasta quedar apareados en toda su longitud. Esto se conoce como sinapsis (unin) y el complejo resultante se conoce como bivalente o ttrada (nombre que prefieren los citogenetistas), donde los cromosomas homlogos (paternos y materno) se aparean, asocindose as cromtidas homlogas. Producto de la sinapsis, se forma una estructura observable slo con el microscopio electrnico, llamada complejo sinaptonmico, unas estructuras, generalmente esfricas, aunque en algunas especies pueden ser alargadas. La disposicin de los crommeros a lo largo del cromosoma parece estar determinado genticamente. Tal es as que incluso se utiliza la disposicin de estos crommeros para poder distinguir cada cromosoma durante la Profase I meitica. Adems el eje proteico central pasa a formar los elementos laterales del complejo sinaptonmico, una estructura proteica con forma de escalera formada por dos elementos laterales y uno central que se van cerrando a modo de cremallera y que garantiza el perfecto apareamiento entre homlogos. En el apareamiento entre homlogos tambin est implicada la secuencia de genes de cada cromosoma, lo cual evita el apareamiento entre cromosomas no homlogos. Adems durante el zigoteno concluye la replicacin del ADN (2% restante) que recibe el nombre de zig-ADN. Paquitene Una vez que los cromosomas homlogos estn perfectamente apareados formando estructuras que se denominan bivalentes se produce el fenmeno de entrecruzamiento (crossing-over) en el cual las cromtidas homlogas no hermanas intercambian material gentico. La recombinacin gentica - 43

resultante hace aumentar en gran medida la variacin gentica entre la descendencia de progenitores que se reproducen por va sexual. La recombinacin gentica est mediada por la aparicin entre los dos homlogos de una estructura proteica de 90 nm de dimetro llamada ndulo de recombinacin. En l se encuentran las enzimas que medan en el proceso de recombinacin. Durante esta fase se produce una pequea sntesis de ADN, que probablemente est relacionada con fenmenos de reparacin de ADN ligados al proceso de recombinacin. Diplotene Los cromosomas continan condensndose hasta que se pueden comenzar a observar las dos cromtidas de cada cromosoma. Adems en este momento se pueden observar los lugares del cromosoma donde se ha producido la recombinacin. Estas estructuras en forma de X reciben el nombre quiasmas. Cada quiasma se origina en un sitio de entrecruzamiento, lugar en el que anteriormente se rompieron dos cromtidas homlogas que intercambiaron material gentico y se reunieron. En este punto la meiosis puede sufrir una pausa, como ocurre en el caso de la formacin de los vulos humanos. As, la lnea germinal de los vulos humanos sufre esta pausa hacia el sptimo mes del desarrollo embrionario y su proceso de meiosis no continuar hasta alcanzar la madurez sexual. A este estado de latencia se le denomina dictiotena. Diacinesis Esta etapa apenas se distingue del diplotene. Podemos observar los cromosomas algo ms condensados y los quiasmas. El final de la Diacinesis y, por tanto de la Profase I meitica viene marcado por la rotura de la membrana nuclear. Durante toda la Profase I continu la sntesis de ARN en el ncleo. Al final de la diacinesis cesa la sntesis de ARN y desaparece el nuclolo. Prometafase I La membrana nuclear desaparece. Un cinetocoro se forma por cada cromosoma, no uno por cada cromtida, y los cromosomas adosados a fibras del huso comienzan a moverse. Algunas veces las ttradas son visibles al microscopio. Las cromtidas hermanas continan estrechamente alineadas en toda su longitud, pero los cromosomas homlogos ya no lo estn y su centrmeros y cinetocoros encuentran separados entre s. Metafase I Los cromosomas homlogos se alinean en el plano de ecuatorial. La orientacin es al azar, con cada homlogo paterno en un lado. Esto quiere decir que hay un 50% de posibilidad de que las clulas hijas reciban el homlogo del padre o de la madre por cada cromosoma. Los microtbulos del huso de cada centrolo se unen a sus respectivos cinetocoros. Anafase I Los quiasmas se separan. Los microtbulos del huso se acortan en la regin del cinetocoro, con lo que se consigue remolcar los cromosomas homlogos a lados opuestos de la clula, junto con la ayuda de protenas motoras. Ya que cada cromosoma homlogo tiene slo un cinetocoro, se forma un juego haploide (n) en cada lado. En la reparticin de cromosomas homlogos, para cada par, el cromosoma materno se dirige a un polo y el paterno al contrario. Por tanto el nmero de cromosomas maternos y paternos que haya a cada polo vara al azar en cada meiosis. Por ejemplo, para el caso de una especie 2n = 4 puede ocurrir que un polo tenga dos cromosomas maternos y el otro los dos paternos; o bien que cada polo tenga uno materno y otro paterno. - 44

Telofase I Cada clula hija ahora tiene la mitad del nmero de cromosomas pero cada cromosoma consiste en un par de cromtidas. Los microtbulos que componen la red del huso mittico desaparece, y una membrana nuclear nueva rodea cada sistema haploide. Los cromosomas se desenrollan nuevamente dentro de la cromatina. Ocurre la citocinesis (proceso paralelo en el que se separa la membrana celular en las clulas animales o la formacin de esta en las clulas vegetales, finalizando con la creacin de dos clulas hijas). Despus suele ocurrir la intercinesis, parecido a una segunda interfase, pero no es una interfase verdadera, ya que no ocurre ninguna rplica del ADN. Este proceso es breve en todos los organismos, pero en algunos generalmente no ocurre.

Meiosis II
Profase II
Profase Temprana II Comienza a desaparecer la envoltura nuclear y el nucleolo. Se hacen evidentes largos cuerpos filamentosos de cromatina, y comienzan a condensarse como cromosomas visibles Profase Tarda II Los cromosomas continan acortndose y engrosndose. Se forma el huso entre los centrolos, que se han desplazado a los polos de la clula

Metafase II Las fibras del huso se unen a los cinetocoros de los cromosomas. stos ltimos se alinean a lo largo del plano ecuatorial de la clula. La primera y segunda Metafase pueden distinguirse con facilidad. En la Metafase I las cromtidas se disponen en haces de cuatro (ttrada) y en la Metafase II lo hacen en grupos de dos (como en la Metafase mittica). Esto no es siempre tan evidente en las clulas vivas. Anafase II Las cromtidas se separan en sus centrmeros, y un juego de cromosomas se desplaza hacia cada polo. Durante la Anafase II las cromtidas, unidas a fibras del huso en sus cinetocoros, se separan y se desplazan a polos opuestos, como lo hacen en la anafase mittica. Como en la mitosis, cada cromtida se denomina ahora cromosoma. Telofase II En la Telofase II hay un miembro de cada par homologo en cada polo. Cada uno es un cromosoma no duplicado. Se reensamblan las envolturas nucleares, desaparece el huso acromtico, los cromosomas se alargan en forma gradual para formar hilos de cromatina, y ocurre la citocinesis. Los acontecimientos de la Profase se invierten al formarse de nuevo los nucleolos, y la divisin celular se completa cuando la citocinesis ha producidos dos clulas hijas. Las dos divisiones sucesivas producen cuatro ncleos haploides, cada uno con un cromosoma de cada tipo. Cada clula resultante haploide tiene una combinacin de genes distinta. Esta variacin gentica tiene dos fuentes: 1 Durante la meiosis, los cromosomas maternos y paternos se barajan, de modo que cada uno de cada par se distribuye al azar en los polos de la Anafase I. 2 - se intercambian segmentos de ADN entre los homlogos paternos y maternos durante el entrecruzamiento.

- 45 -

Procesos
1.Sinapsis: hace referencia a que durante la meiosis los cromosomas homlogos estn relacionados ntimamente. Se han creado complejos sinaptonmicos en la evolucin, aunque no todos los organismos tienen este complejo. - apareamiento, alineamiento y sinapsis - sinapsis para recombinar o recombinar para sinapsis? - el complejo sinaptonmico imprescindible? La recombinacin comienza antes de de la sinapsis. 2.Recombinacin: tiene que ocurrir, es tpica de meiosis permite el intercambio de informacin entre cromosomas homlogos. Este mecanismo explica porqu hay reproduccin sexual. - modelos moleculares - ndulos de recombinacin - quiasmas 3.Segregacin: es la separacin de cromosomas que estn en un mismo ncleo. No hay nada que garantice que a un polo vayan los cromosomas de un parental o de otro, lo cual genera mucha variabilidad. -primera y segunda divisin - la cohesin en dos fases - la shugoshina y la monopolina - cambio en la estructura cromosmica

- 46 -

1.Sinapsis
Contacto fsico de los cromosomas homlogos que tiene lugar cuando una clula de lnea germinal decide entrar en meiosis (decisin que no esta bien estudiada aunque est muy determinada). En Profase I ocurren ms cosas que en la Profase II de mitosis donde slo ocurre la condensacin. En hembras todo este procedimiento se produce en el embrin y no llega a terminar la Profase I y se queda detenido hasta que al cabo de ciertos aos se vuelve a disparar el proceso. Lo que hacen en Profase I es buscarse, encontrarse y quedar ntimamente asociados. Esto es un proceso exquisito en el reconocimiento especfico de quin es homlogo de quin. Hay distintos grados de asociacin fsica: -alineamiento: comprobacin de que los homlogos se aproximan lo suficiente (en Profase I). -apareamiento: los homlogos estn muy prximos y se empiezan a reconocer. -sinapsis: cuando estn ntimamente asociados. Formacin de bivalentes. Cada uno de estos procesos se pueden interrumpir y eso nos hace pensar que son fases importantes e independientes. Cmo se reconocen los homlogos? Cuando tenemos, por ejemplo, un cinetocoro de un heterocigoto con translocacin, el fragmento que han intercambiado puede ser grande, pequeo cuando llega la meiosis, y esto se tiene que reconocer. Para ello, se reconocen los homlogos aunque las secuencias estn localizadas en el mismo cromosoma. Se sabe que los microtbulos mueven los cromosomas, pero no se sabe qu es lo que determina que una divisin sea mittica o meitica. Si se reconoce las zonas homologas, se van a unir, pero hay zonas en nuestros cromosomas que puedan causar problemas? Esas zonas son las secuencias repetidas, los centrmeros. El reconocimiento: se produce un proceso de apareamiento pairing y es tpico de organismos sin complejo sinaptonmico: los homlogos estn asociados y ya est. *Pairing (asociacin de homlogos sin SC) con DSB (Double Strand Breaks) sin DSB por: - somatic pairing (apareamiento somtico) - pairing centres (centros de apareamiento) - heterocromatina - telmeros: formacin del bouquet - 47 -

Esta asociacin se puede producir por roturas en el DNA en doble cadena (DSB) o sin roturas: por ejemplo el somatic pairing (apareamiento somtico tpico de Drosophila) otro ejemplo sin DSB son los centros de apareamiento (pairing centres) y otro ejemplo son las zonas heterocromticas. Localizacin de los telmeros en la profase-I de centeno: formacin del bouquet Hibridacin de secuencias telomricas (en verde) sobre profases meiticas: los extremos cromosmicos se mueven hasta configurar un bouquet al cabo de ocho horas En algunos casos otro ejemplo de la configuracin en bouquet en la que los telmeros se recogen todos juntos. Se centran en una posicin muy concreta todos los telmeros. Es un sistema de aproximacin de cromosomas. La protena SUN se estudia en este proceso. Es una protena de la envoltura que parece que participa en la formacin del bouquet en los organismos que lo tienen. Con rotura de doble cadena, nada mas comenzar la meiosis hay roturas con el fin de iniciar la recombinacin, pero por otro lado ese mismo proceso propicia el contacto entre cromtidas de un cromosoma homologo para asociarse. Por tanto no hay una respuesta universal en cuanto a la asociacin, no en todos los organismos se asocian los homlogos de la misma manera. En cualquier caso, una vez que los homlogos se han aproximado, se genera una estructura tpica de meiosis, el complejo sinaptonmico, aunque no est en todos los organismos si es fundamental para la recombinacin pero esta muy generalizado.

*****MEIOSIS SEGN LOS MARSUPIALES (Jess Page Utrilla) La meiosis es una divisin celular especial donde ocurren dos rondas de divisin pero slo una de duplicacin del material gentico. Se produce una reduccin del nmero cromosmico que ocurre durante la primera divisin de la meiosis. En la Primera divisin hay: Profase: se produce el paradigma meitico: apareamiento y sinapsis, recombinacin y segregacin: -apareamiento y sinapsis: los homlogos se juntan y se asocian ntimamente. Esta estructura se estabiliza por una estructura proteica llamada complejo sinaptonmico. Est formado por estructuras distintas, elementos asociados por el elemento central: - Elemento lateral: formado por SYCP3. Se forma en Leptotene. - Elemento central: formado por SCPY1. Se forma en Cigotene, cuando comienzan a buscarse los homlogos. En Paquitene ya estn los cromosomas en toda su longitud con el complejo sinaptonmico. Aqu ocurren tambin los fenmenos de recombinacin, que son a la vez que los fenmenos de sinapsis. - 48 -

Los quiasmas se ven en diplotene y son los encargados de mantener la unin entre los homlogos cuando desaparece el complejo sinaptonmico. Segunda divisin (reduccional): Entre metafase I y anafase I se separan los homlogos (con las cromtidas sin asociarse). Si no hay recombinacin, los cromosomas se separan, ya que los quiasmas son el nico punto de contacto cuando se elimina el complejo sinaptonmico. Es fundamental que haya recombinacin que la segregacin sea correcta. Pero, Qu ocurre con los cromosomas sexuales en meiosis? Tienen distintos tipos de genes, por lo que la mayor parte de estos cromosomas sexuales no presentan homologa entre s, salvo la regin pseudoautosmica o PAR. Como no son homlogos en su mayora, gran parte no se relacionan entre s, pero la regin PAR entra dentro de las normas de segregacin de todos los dems: se forman quiasmas y los cromosomas se segregaran cada uno a un punto. Esto es lo que pasa en los mamferos euterios, aunque no ocurre lo mismo en mamferos marsupiales: Cuando se miraron los cromosomas sexuales de estos animales se vio que no tienen ninguna regin de homologa. Se planteaba que se reconoceran se alguna manera pero no existe recombinacin ni quiasmas. Por lo que estos cromosomas deban de aparecer sueltos cuando tuvieran que segregar, por lo que tendrn un 50% de probabilidad de segregar de manera errnea Lo que se observ es que en paquitene los cromosomas sexuales aparecan juntos. De los procesos que ocurren en profese I, se dieron cuenta que s se asociaban, entonces Qu es lo que mantiene a los cromosomas asociados? Los cromosomas sexuales estn asociados entre s en la periferia del ncleo en profase I. A esa zona del ncleo se le llam placa densa, sobre ella estaban los elementos axiales de los cromosomas sexuales y eso los mantiene asociados en la primera divisin. Localizaron las protenas SYCP3 (elemento lateral) que aparecan tambin aqu. La placa densa era una modificacin de los elementos laterales para mantenerlos cromosomas sexuales unidos. Por tanto cada cromosoma sexual forma un elemento lateral y esas protenas se recolocan sobre la envoltura nuclear formando un disco sobre el cual se quedan los extremos de los cromosomas sexuales. Pero lo que se vio es que no se separaban y estaban asociados en metafase I, justo antes de segregar. Y adems luego en Anafase I segregaban antes que cualquier otro cromosoma y lo hacan correctamente. Cmo se asocian en metafase? Por qu segregan tempranamente? Cuando termina la Profase y se deshace la envoltura, los cromosomas sexuales estn asociados por restos de la placa densa, que cada vez es menor pero que permanece asociada a los extremos. En etapas ms avanzadas de la Metafase I el cromosoma X y el Y han perdido el contacto aunque ambos mantienen un elemento lateral y el resto de la placa densa queda asociado al X. - 49 -

En Anafase I, cuando los autosomas comienzan a segregar, el X y el Y ya van un poco avanzados debido a la tensin de la metafase. Se intent buscar la SYCP1 (del complejo central) en estos cromosomas que deba no aparecer porque no haba asociacin entre cromosomas sexuales. Sin embargo, cuando se estudi la Metafase I apareca esta protena asociada a los cromosomas sexuales, se corresponda en morfologa, tamao y localizacin celular con la regin de la placa densa. En Profase I se vio que no incorpora esta protena, pero en etapas ms avanzadas de la divisin, como en metafase, ya aparece. Se forma algo parecido al complejo sinaptonmico que llamaron lmina plegada. La placa densa se pliega sobre s misma y forma una estructura igual a la del complejo sinaptonmico que se une a los cromosomas sexuales. Ese plegamiento ayuda a hacer la estructura ms estable y a evitar que los extremos se separen, an cuando no hay envoltura nuclear hasta orientase hacia polos opuestos. Tambin permite que se produzca la tensin bipolar en los microtbulos y la rotura de las cohesinas necesarias para que los cromosomas sexuales segreguen con antelacin. Esto descarta la Recombinacin como algo imprescindible!!. Se producir esto en todos los marsupiales? Estudiando distintas especies llegaron a la conclusin de que s. Y en todos los mamferos? Al estudiar otros mamferos como en el jerbo, se vio que en ellos tambin apareca igual que en marsupiales. Pero no tienen nada parecido a la placa densa, sino que la protena SYCP3 aparece formando una estructura similar a la placa densa, y realiza las modificaciones del complejo lateral necesarias para que luego se orienten y segreguen correctamente. Por tanto en estas especies tambin hay una modificacin del complejo sinaptonmico, pero distinta que en marsupiales, ya que en estas especies los cromosomas sexuales estn retrasados en la segregacin. Esta estructura parece ser ms fuerte aqu en marsupiales porque retrasa la segregacin. Como la meiosis es fundamental para la reproduccin sexual cada especie ha inventado opciones para que esto funcione. Y lo fundamental es la SEGREGACIN!!.******* *Complejo sinaptonmico Lo que primero se inicia son los procesos de recombinacin que ayudan al apareamiento de homlogos dando lugar posteriormente a la formacin del complejo sinaptonmico una vez que los cromosomas estn cerca y se hayan unido las protenas del elemento central y a los elementos transversos que mantienen unidos a los cromosomas homlogos. Su formacin determina el inicio de la Cigotene La disposicin de la cromatina en la formacin del complejo es en forma de bucles metafsicos. Al producirse la recombinacin da lugar a la formacin de puentes de cromatina entre las cromtidas hermanas facilitando la incorporacin de las protenas del complejo sinaptonmico. Los elementos laterales se unen al cromosoma a lo largo de toda su longitud y se unen al elemento central gracias a los elementos transversos, dando lugar al modelo cremallera (Figura) Los elementos laterales se colocan en las bases de los bucles de la cromatina.

- 50 -

Placas de asociacin: son una modificacin del complejo sinaptonmico en la zona de los telmeros y sirven para unir los cromosomas a la membrana nuclear. Se asocian a la cromatina y a la envoltura nuclear (bouquet). Hay dos protenas fundamentales en el Complejo sinaptonmico: Elementos laterales: SYCP3 Elemento central: SYCP1 (elementos transversos)

En Cigotene hay mucho verde porque hay mucho SYCP3 y algo rojo o amarillo de la interaccin con SYCP1. Luego en diplotene desaparece el complejo sinaptonmico (cuando ya han recombinado los homlogos) y los cromosomas quedan unidos por los quiasmas (verde), salvo algunas zonas (rojizo). Pero no en todos los organismos es igual:

COMPLEJO SINAPTONMICO S S NO NO

RECOMBINACIN

QUIN?

S NO S NO

muchos hembras de Bombyx mori Schizosaccharomyces pombe machos de Drosophila

Pero el hecho de que en organismos complejos siempre aparezca sugiere que debi surgir para asegurar la estabilidad de los bivalentes.

2.Recombinacin:
Cuando los cromosomas estn ya asociados practican sexo molecular (recombinan). *DSBR (Double Strand Break Repair): Supone una rotura de doble cadena gracias a la Spo11, muy conservada en la evolucin. Luego otras protenas las separan generando cadena sencilla. El intercambio se produce entre cromosomas homlogos. Al formarse los intermedios de Holliday hay dos maneras de resolverlos:

- 51 -

Al intercambiar segmentos puede pasar que no estn bien apareadas unas miles de bases, se puede tomar como molde para la reparacin cualquiera de las cadenas pudiendo dar lugar a fenmenos de conversin gnica. *ECD (Early Crossover Decisin): si hacemos intermedio de Holliday siempre da lugar al intercambio cromosmico. Tambin se puede originar la conversin gnica al intentar reparar la mezcla de las dos cromtidas (azul y naranja)

El caso es que al final se generan cromosomas con informacin distinta a la que hemos heredado. - 52 -

*Ndulos de recombinacin: se vieron como una mancha sobre el complejo sinaptonmico, siempre en mismo nmero en Paquitene. Son sitios donde se encuentran las protenas implicadas en recombinacin y donde se est dando la recombinacin. Hay muchos que se van resolviendo (tempranos, maquinaria de recombinacin) hasta que en Paquitene tarda vemos slo unos pocos (considerados fenmenos de conversin gnica). Al comprobar que aparecan cerca de los quiasmas los relacionaron con la recombinacin. Hoy sabemos que estn implicados en la busca de homlogos y forman heteroduplex transitorios que no tienen por qu dar lugar despus a fenmenos de intercambio de informacin. Contienen la protena MLH1 relacionada con procesos tardos de recombinacin, implicada en resolver el intermedio de Holliday. Se reconocen por inmunodeteccin en distintas fases del proceso.

*Quiasmas Los quiasmas representan fenmenos de recombinacin (sitios de intercambio de informacin entre homlogos) En Diplotene desaparece el complejo, y se ven los quiasmas (se pueden contar y saber donde estn). Pero, si desaparece el complejo, por qu no se separan las cromtidas? Porque estn unidas durante toda la Profase I por los complejos de cohesin, manteniendo as el bivalente. Esto demuestra la importancia de que tenga que formarse al menos un quiasma entre homlogos para mantener la estructura del bivalente y asegurar la correcta segregacin Los quiasmas nos permiten localizar las zonas donde ha habido recombinacin. Pero, no hay quiasmas al azar, sino que aparecen en zonas concretas y nmero concreto, por lo que tiene que haber fenmenos de control gentico relacionados con los hot spots (puntos con alta probabilidad de recombinacin), lo que no implica que no puedan aparecer en otro sitio. La interferencia (ms de 2 puntos de recombinacin) tambin es poco probable. Normalmente se produce al menos un quiasma porque as despus de que desaparezca el complejo los cromosomas homlogos pueden seguir asociados hasta que toque divisin porque aunque se produzca intercambio, Marcaje con BrdU y Giemsa.

Se distinguen las 2 cromtidas

- 53 -

los complejos de cohesin mantienen unidas las cromtidas hermanas por lo que al darse el quiasma quedan unidas los cromosomas homlogos. El numero de quiasmas a veces viene determinado por el sexo (por ejemplo en Drosophila en machos no hay quiasmas)

3.Segregacin:
Antes de meternos en segregacin hay dos conceptos importantes: *Asinapsis: no hay sinapsis, los cromosomas no se relacionan ntimamente. *Desinapsis: los homlogos a pesar de aparearse y reconocerse y por tanto tener sinapsis por toda su longitud, supera la paquitene, en diplotene los cromosomas estn sueltos unos de otros. *Sinapsis: cuando estn totalmente asociados los homlogos. Ya estamos terminando ms o menos la Profase I. Los cromosomas estn bastante condensados y se desencadena todo el funcionamiento de cdks y ciclinas (entre las cosas que se fosforilan tenemos las protenas de la envoltura nuclear) y nos metemos en Prometafase I: Fuera del ncleo, durante todo ese tiempo, los microtbulos han formado el huso, conformado igual que en mitosis. Ahora, en Prometafase I, estas estructuras interaccionan con el cromosoma bivalente (sin alcanzar el mximo grado de compactacin) en la zona de los dos cinetocoros unidos, que funcionan como uno slo y los mueven hacia un polo y hacia el otro. Esto es gracias a la monopolina que hace que durante este periodo cada cinetocoro hermano funcione asociado al otro hermano como si fueran una sola unidad, y ambos estn orientados hacia el mismo polo. La primera diferencia con la mitosis es que estamos hablando de dos cromosomas asociados para funcionar, y no de cromosomas sueltos. Y que cada cinetocoro hermano est orientado a polos opuestos. En Metafase I las cromtidas se mantienen unidas por las cohesinas y mantienen la estructura del Scafold. Las zonas donde se enlazan los bucles estn lateralizadas, por lo que el Scafold queda en mitad de las dos cromtidas y se abre precisamente por la zona del quiasma. Como al menos en un sitio el cromosoma ha recibido una parte del homologo, la cohesin de cromtidas hermanas explica que en metafase I estn unidos los homlogos. Desde el punto de vista estructural, en metafase I, hay que destacar que NO se diferencian los cinetocoros hermanos. Se pueden ver con una tcnica de teido con nitrato de plata: se ven los cinetocoros hermanos como una bolita (Figura). Se ve tambin un acumulo de protenas en meiosis en el scaffold: eje que con nitrato de plata se tie diferencialmente. Este eje en meiosis no se ve dentro de cada cromtida como se vea en mitosis. En mitosis lo que se ve, es que la zona del eje (donde estn los SARS) est en una zona central del cromosoma que deja aun lado y a otro la cromatina, es decir, el cromosoma est lateralizado. Slo se ve doble en unas zonas donde hay quiasmas. - 54 -

Esa disposicin permite suponer que la organizacin de la cromatina durante la primera divisin es siempre lateralizada. En Anafase I, donde se reestructuran los cromosomas, se ve el scaffold, uno por cromtida, como en mitosis (cuando segregan) y la cromatina pasa a disponerse en forma radial. Otra cosa que se ve, es que en Anafase I las cromtidas hermanas se separan. Dejan de estar asociadas en casi toda su longitud excepto en los centrmeros, porque sino migraran como cromtidas independientes, y no como hermanas. Esto est controlado por la Shugosina que lo mantiene hasta que llegue la segunda divisin mittica (por eso divisin reduccional, en mitosis justo desaparece cuando hay que dividir al cromosoma) Una vez que tenemos los cromosomas en polos opuestos, ya hemos terminado la primera divisin meitica. A partir de aqu todo se dispara. El material se vuelve a dividir sin que se de replicacin. Se organiza un nuevo huso en cada clula y esta vez lo que se encuentra es la mitad de los cromosomas slo asociados por el centrmero, que es lo que se rompe eliminando la Shugosina y por la accin de la Separasa se separan finalmente cromtidas hermanas en anafase II. El resultado final son clulas que sern gametos.

- 55 -

Significado de la meiosis.
Produccin de progenie genticamente viable: adems de la recombinacin que da lugar a la variabilidad, hay que mirarlo a nivel cromosmico. Lo primero que ocurre es que en la primera divisin los homlogos migran a polos opuestos, por lo que slo puedes tener A o a. Y esto no es dirigido, sino al azar (se mezclan los de mama y los de papa) pudiendo obtener un montn de combinaciones posibles, por lo que es muy poco probable que llegue la misma informacin, creando as la variabilidad. Segregacin de diferencias no allicas de cromosomas no homlogos, de un individuo salen cuatro posibilidades. AA aa y BB bb da lugar a AB/ ab Ab/aB Por tanto esto da una gran riqueza en la primera segregacin, lo cual explica que, porque en machos de Drosophila no haya recombinacin, no pasa nada porque simplemente con la segregacin ya se crean muchas variantes. Recombinacin de diferencias no allicas de cromosomas homlogos, lo que se entrega a la siguiente generacin. Es informacin mezclada. Aqu no se forman alelos nuevos (eso se crea por mutacin) esto son variantes allicas. - 56 -

Mecanismo reparador: reparacin por recombinacin. El hecho de que est implcita la recombinacin hace pensar que en inicios la meiosis estuviera relacionada con la recombinacin. Tiene dos consecuencias: - Los fallos de doble cadena cuando estn en cromosomas de lnea germinal es muy chungo, por eso es muy importante poder repararlos. -Cuando tenemos una mutacin letal en homocigosis, si recombina genera un heterocigoto permitiendo la viabilidad del gameto. En algn momento dos clulas haploides juntan su material gentico. Su manera de resolver esto y de volver a tener un slo cromosoma y en generar unas clulas haploides (gametos). Esto ocurre hasta que en poliploida comienzan a vivir mejor porque en haploida cada cosa que le pasa puede ser mortal. En diploides siempre tienen una alternativa normal aunque la otra se dae. Por eso se puede explicar porque se ha duplicado la informacin en la evolucin. De hecho la recombinacin es un buen truco para resolver daos letales, eliminan cosas letales ponindolos en un mismo cromosoma y si de verdad eso es un problema, ese gameto no seguir adelante (seleccin).

Cromosomas B
Al observar algunos organismos se vean cromosomas de ms que no aparecan normalmente y que no se parecan al resto, los cromosomas B. Un cromosoma B es un cromosoma supernumerario, dispensable (no es prescindible para la fertilidad y supervivencia del individuo), que NO recombina con los cromosomas A y que sigue su propia va evolutiva (le pueden pasar cosas que en otros no perduraran).

Generan polimorfismo cromosmico porque unos individuos los tienen y otros no. Qu son los cromosomas B? estn descritos en ms de 1300 especies de plantas y 500 de animales adems de algunos hongos. El nmero de cromosomas B en un individuo no suele superar 2, pero hay casos de plantas con ms Bs que As (por ejemplo la planta del maz que tiene 34 Bs)

- 57 -

Que tengan dos cromosomas B como mximo en la mayora de especies puede ser debido a que un nmero mayor de cromosomas B compromete la viabilidad del individuo. Qu hacen? En la mayora de casos no producen efectos notables sobre el fenotipo, lo que no implica que no se transcriban. Un buen numero de ejemplos siguen una herencia no mendeliana (mecanismos de acumulacin, no segregan adecuadamente) Los cromosomas B pueden acumularse al sufrir fenmenos de no disyuncin en la primera y/o segunda divisin meitica o tambin (en el caso de algunas plantas) en las mitosis postmeiticas. Los cromosomas B pueden incluirse preferentemente en los gametos (y en particular va femenina) y provocar un aumento de su presencia en las poblaciones. Los cromosomas pueden sufrir procesos de no disyuncin (no se separan las cromtidas hermanas). No siguen herencia mendeliana:
Si fuera mendeliana deberan llevar el 50% un B

P 0B x 1B

1B x 0B

F1: 25% 2B - 75% 0B

100% 2B

No-Disyuncin va hembra. Slo el ovocito con los cromosomas B ser fecundado. Sale eso porque el cromosoma B se coloca siempre en la viable. Esto produce la acumulacin de los cromosomas B

El hijo tiene ms cromosomas B que el parental pero el 75% no tiene B lo cual puede mantener cierto equilibrio en la poblacin de cromosomas B. Si en un individuo hay ms de un B, puede haber recombinacin o no, y pueden segregar bien o no. Aparte del a segregacin, tambin es importante que las clulas que llevan cromosomas B tienen ms probabilidad de ser fecundadas. En plantas el cromosoma B se comporta bien durante la meiosis pero en las divisiones mitticas posteriores a la meiosis es donde no segrega correctamente colocndose en el ncleo que al final va a comportarse como gameto masculino. De dnde vienen los cromosomas B? una posibilidad es que sean resultado de cambios cromosmicos, de mutaciones en los cromosomas A. Por ejemplo, una fusin cntrica, que se origina a partir de cromosomas telocntricos o casi telocntricos, dando lugar a un nuevo cromosoma, que en la mayora de los casos, ese cromosoma se pierde por que es incapaz de transmitirse. Puede ocurrir un fenmeno de no disyuncin tambin para originar dos cromosomas, es decir uno de ms, una trisoma. Para que estos dos cromosomas (el de la fusin y el de la trisoma) sean cromosomas B les tienen que pasar ms cosas. Tambin puede ocurrir por cruces entre distintas especies pero relacionadas que incorporen cromosomas B de una de las especies, porque se ha visto que a veces pueden hibridar. - 58 -

Para que teniendo un cromosoma de ms se convierta en un cromosoma B, deben ocurrir en la evolucin distintas cosas: Inactivar cualquier secuencia que pueda alterar el valor adaptativo (desarrollo o fertilidad) del portador, si no se inactiva, el individuo que lleva esa otra copia, deja menos descendencia y no se mantiene en la poblacin con ese futuro cromosoma B. Que se inhiban los contactos con los cromosomas A (cualquier tipo de homologa que los haga recombinar), porque si no, los tres cromosomas podran intercambiar material en meiosis. Cuando estos contactos dejan de existir el B sufre su propia va evolutiva. Por tanto si a ese cromosoma le pasa algo (mutacin) pasar inadvertida y se ir acumulando, cosa que normalmente estara prohibida en los A, en un B no pasa nada. Cuando tu miras un cromosoma B, ves que no se parece en nada a los A. Los cromosomas B que llevan modelos no mendelianos se prevea que ese comportamiento lo tienen que poseer secuencias que lo indican. El comportamiento lo lleva escrito. Se sabe que tienen secuencias que indican comportamiento no mendeliano porque han quitado fragmentos de cromosomas que cuando estn se comportan de forma no mendeliana y si los quitan se comportan de forma mendeliana. Cmo es su progresin evolutiva? Se ha llegado a dos grandes modelos excluyentes pero pueden ocurrir las dos cosas en cromosomas distintos: considerarlos parsitos: los B mantienen un equilibrio de las poblaciones (por mecanismos de no disyuncin) entre los que no son viables y los que salen de la no disyuncin. No hacen nada malo, pero se aprovechan de la maquinaria celular para replicarse (slo necesitan comida molecular!). No se eliminan ni son muchos porque se mantienen en equilibrio. En principio cualquier B tienen un comportamiento parsito que asegure su perpetuacin, porque si se dividiera de modo mendeliano acabara desapareciendo. darles carcter hetertico: es decir, que los individuos que llevan cromosoma B en un bajo nmero, tienen un efecto positivo en la evolucin (dejan ms descendencia) con respecto a los que no tienen B, por eso se explica que haya Bs en la evolucin, pero Qu es ese efecto positivo? Es muy complicado de demostrar, pero se han visto cosas en plantas que ha llevado a pensar esto. En este caso no hara falta un mecanismo de acumulacin para mantener la poblacin. Estudiando cada caso, el efecto sobre el valor adaptativo (positivo, negativo, neutro) del portador, y la tasa de transmisin (mas de 05(hay ms B), 05(segregacin mendeliana) o menos de 05(tiene problemas de prdidas de cromosomas B)) se puede estudiar el comportamiento:

- 59 -

categora

efecto sobre el valor adaptativo del portador negativo negativo negativo neutro neutro neutro positivo positivo positivo

tasa transmisin > 0,5 = 0,5 < 0,5 > 0,5 = 0,5 < 0,5 > 0,5 = 0,5 < 0,5

de

resultado neto

significado evolutivo parsito ---------------parsito atenuado casi neutro --------mutualismo mutualismo mutualismo

1 2 3 4 5 6 7 8 9

polimorfismo desaparicin desaparicin polimorfismo desaparicin desaparicin polimorfismo polimorfismo polimorfismo

Tabla: Si el efecto sobre el valor adaptativo es negativo y la tasa de transmisin es mendeliana o menos de o 5, el futuro de la poblacin es que no se pude mantener. Si el valor adaptativo es negativo pero es mayor de 05 mantiene el pol imorfismo. Este es el ejemplo ms clsico de un parsito. Si el valor adaptativo es positivo (los individuos con B dejan mas descendencia) en todos los casos, el resultado es positivo, es el modelo tpico de hetertico. Si el valor adaptativo es neutro, no hace nada el cromosoma B (en nmeros bajos de cromosoma B) si tiene una menor facilidad de transmisin (menor de 05) = desaparicin. Si es mayor de 05 = polimorfismo (permanece por acumulacin). Si tiene comportamiento mendeliano se produce la desaparicin. Esto es lo que pasa a uno de los ejemplos de polimorfismo de cromosomas B en saltamontes a lo largo de toda la distribucin por la pennsula, se comprueba que el B es el ms tpico que tiene este comportamiento.

El significado evolutivo es que es difcil de mantener, pero es ms difcil explicar como ha llegado a tener esas proporciones tan elevadas en la actualidad. Cmo se explica entonces el ltimo caso? Lo explica un modelo, para que un B se instaure en una poblacin, tiene que tener, primero un modelo de acumulacin, una herencia no mendeliana, luego si es hetertico, mejor. Despus ocurre que tienen un comportamiento mendeliano y si esto es as, esta condicionado a desaparecer, por eso se dice que estos cromosomas tienen un significado casi neutro. Durante unas cuantas generaciones hay una pelea entre los alelos que favorecen la transmisin no mendeliana y los que favorecen la mendeliana. La interaccin con el control gentico de la clula provoca esa pelea hasta que al final son seleccionados en contra los no mendelianos. Cuando se le apaga el gen de la segregacin no mendeliana, se comporta bien y va desapareciendo. El truco es que como el B est sometido a cambios, puede surgir una alteracin que causa que el B que estaba condenado a la extincin, vuelva al inicio. Se lleg a la conclusin porque en este saltamontes hay como 50 cromosomas B distintos y son de distintas formas y con distintas bandas. De esos 50 tipos, hay unos que se comportan bien y otros que no, son variantes de ese que se comporta bien (el B1) Se demostr que llevando individuos con B que estaban con comportamiento mendeliano en un lugar, a otro lugar con individuos con cromosomas B aprovecha y comienza a comportarse mal para meterse en la poblacin.

- 60 -

MUTACIN CROMOSMICA
Hay que entender las reordenaciones cromosmicas desde el contexto de la meiosis, pudiendo calcular la implicacin que una reordenacin puede tener en la descendencia, que es lo importante. La meiosis genera el concepto biolgico de diploidizacin, lo cual es un hito evolutivo porque logra el equilibrio perfecto entre el genoma y la transmisin de este. Genera un equilibrio de fuerzas mecnico, porque se generan bivalentes que se reparten perfectamente. La meiosis mantiene el nmero cromosmico de la especia, genera variabilidad gentica (por combinacin y barajamiento de los cromosomas de cada padre) y acta como filtro de las mutaciones, ya que, mutaciones somticas no tienen mucha relevancia, pero mutaciones que pasen el proceso meitico y se estabilicen en la siguiente generacin hay muy pocas. Es importante para predecir cmo va a afectar la mutacin de un individuo a su generacin.

4. CAMBIOS EN LA ESTRUCTURA DE LOS CROMOSOMAS

La constitucin cromosmica de las clulas de una especie es siempre la misma hasta que deja de serlo. Las Variaciones Estructurales son el cambio en la disposicin lineal de los genes en un cromosoma, implican perdida, ganancia o reordenacin (Mller 1929). Pueden ser: deleciones (perdidas), duplicaciones (ganancia), inversiones (reordenacin), todas estas modificaciones afectan a un solo cromosoma, mientras que las translocaciones (reordenaciones) afectan o dos o ms cromosomas. El problema est en meiosis porque aunque la informacin gentica sigue siendo la misma, el apareamiento entre homlogos se ve afectado, y con ello la meiosis.

13. DELECIONES Y DUPLICACIONES

DELECIONES Variacin estructural que implica la prdida de un segmento (y su informacin gentica). No es lo mismo que deficiencia!! Se originan por recombinacin desigual en zonas del DNA con secuencias altamente repetidas. Tambin puede ocurrir por los saltos de los elementos mviles y las secuencias repetidas. IDENTIFICACIN GENTICA DE LAS DELECIONES -INCAPACIDAD DE RETROMUTAR (porque se pierde). Si t sabes que tiene que mutar pero no lo hace es una delecin. -AUSENCIA DE RECOMBINACIN entre los loci afectados -MODIFICACIN FENOTPICA (manifestacin de recesivos, tienes Aa pero te aparece aa, pues la A se ha perdido) -VARIACIN DE LA FRECUENCIA ESPERADA EN LNEA GERMINAL TCNICAS ACTUALES: -IDENTIFICACIN CITOLGICA (Paquitene, politnicos), deteccin de los bucles de No apareamiento. -CGH (Hibridacin de dos genomas completos). Se hace mediante la extraccin de ADN genmico, se marca cada ADN del individuo diferente con un color diferente, se hibridan sobre un cromosoma, donde a un hibridado los ADN de los dos - 61 -

individuos aparece en amarillo y las regiones que no comparten aparecen de un color pudiendo identificar duplicaciones o deleciones. -SECUENCIACIN -GENMICA COMPARATIVA (muy fiable pero complicada) Factores que determinan la gravedad de las deleciones : la regin en la que se produce la delecin por problemas en meiosis, la presencia de la mutacin en homocigosis o heterocigosis o tambin depende el nivel de poliploida de la especie (2n, 4n). En general son poco viables Posibles consecuencias : prdida o ganancia de funcin o manifestacin de recesivos. Las deleciones suelen estar relacionadas con cncer. Grandes deleciones de la historia: Mutacin Notch: mutacin en el cromosoma X de Drosophila, produce escotaduras en el ala, es letal en hemicigosis (se mueren los machos, y las hembras heterocigticas muestran el fenotipo de las alas) Sndrome del grito de gato (cromosoma corto del cromosoma 5) Prader Willi (cromosoma 15) obesidad, retraso mental Retinoblastoma (del 13q14) Leucemia Mieloide crnica (brazo coto 22)

DUPLICACIONES Pueden afectar a una base, un gen, parte de un gen, una regin cromosmica, un cromosoma, varios o incluso todo el genoma. Las duplicaciones aparecen por numerosos procesos entre los que encontramos la recombinacin desigual que es muy activa en secuencias altamente repetidas, el intercambio entre cromtidas hermanas que sigue el mismo proceso, el intercambio desigual durante la replicacin de cromosomas circulares (bacterias).

- 62 -

Hay duplicaciones de una base (indels) que pueden desplazar el marco de lectura (alta incidencia de codones de STOP) (X-frgil, sndrome de Hangtinton). Duplicacin de medio gen, las haptoglobinas: Las haptoglobinas tipo IF y tipo IS estn codificadas por el mismo gen, pero difieren de un aminocido, mientras que la heptaglobina de tipo II tiene un nmero muy diferente de aminocidos, al analizar los aminocidos vemos que ha ocurrido una suma parcial de IF y IS, es decir, una recombinacin desigual. Lo singular es que solo se ha duplicado parte de un gen Las duplicaciones de una regin, tenemos como ejemplo el locus BAR: Una mosca normal en el cromosoma X en la banda 16 A esta en forma diploide (dos dosis) si aparece una duplicacin se reduce el nmero de facetas en el ojo. Si tenemos una fenotipo BAR y realizamos un cruzamiento desigual el efecto BAR se multiplica en un cromosoma y en el otro desaparece (importante en meiosis). El ojo BAR depende del nmero de genes y de la posicin allicas que ocurre en el genoma (no es lo mismo 3-1 que 2-2 aunque el nmero de duplicaciones sea el mismo) Ciclo puente-rotura-fusin: Duplicaciones en tndem invertidas observadas por Brbara Mac Clinkton demostrando que los telmeros eran esenciales para la estabilidad de los cromosomas. Tenemos dos cromosomas (uno normal y otro con duplicaciones en tndem invertido) en meiosis pueden aparear o puede que ocurra que a la hora de recombinar el duplicado se doble y al recombinar da lugar a una cromtida con dos centrmeros, en anafase I y forma el puente, al tirar los microtbulos se rompe pudiendo dar lugar a un gameto con consecuencias duplicadas pero sin telomero, este gameto cuando fertiliza en estado de proncleo tiende a reparar los daos, cuando replica, al no tener telomero, se unen las cromtidas hermanas (o se fusionan cromosomas) formando intercambios de - 63 -

tipo U dando lugar a un puente de nuevo, que se romper y se volver a fusionar (por eso es un ciclo puente-rotura-fusin). Otra posibilidad es que recombina la cromtida con sus propias duplicaciones, pero en este caso forman los puentes en anafase II. ADN SATELITE EN HUMANOS Localizados en las regiones centromricas y en la regin perifrica del cromosoma Y, de origen heterocromtico agrupado en familias (clsico, y ). Clsicos: satlite 1 (25 pb) satlite 2 (5pb) y satlite 3, todos ellos estn muy repetidos y mutados por todas partes. Tienen, adems, una estructura jerarquizada.

Satlites : formado por 171 pb, se van repitiendo en todos los cromosomas, se forman gracias a una estructura interna perfectamente jerarquizada y ordenada. La jerarquizacin implica que al cortarlo con una enzima o con otras diferentes, se cortaran por sitios distintos pero que siempre van a tener la misma longitud de corte, por lo que implica que esas duplicaciones fueron duplicadas a su vez en grandes fragmentos.
12/Mayo/2009

Los satlites son heterocromatina por lo que aparece compactado durante casi toda la interfase, pudiendo observa que regiones discretas de heterocromatina. Los monos tambin tienen estos satlites pero no tienen nada que ver con los nuestros debido a que hace mucho que nos separamos en la lnea evolutiva. Los satlites se van pareciendo cada vez mas en cromosomas homlogos y diferencindose en cromosomas homlogos. Existen sondas de satlites que hibridan con mas de un cromosoma por lo que no sirve para identificarlos, por eso se recurre a los satlites clsicos que si permiten diferenciar los cromosomas. La ventaja de ser heterocromtico y discreto nos permite realizar un diagnostico prenatal, pero el embrin que presenta anomalas cromosomitas pueden resolverlos por sistemas apoptticos que funcionan muy bien en embriones. - 64 -

14. INVERSIONES
Variacin estructural en la que un segmento cambia de sentido dentro del propio cromosoma (y por tanto la ordenacin de sus loci)

Necesita dos roturas en el ADN y un giro de 180 en sentido perpendicular Comportamiento citolgico: Pueden dar lugar a problemas en la lnea germinal. El paso por la meiosis (no presentan problemas en mitosis) pero las inversiones pericntricas pueden cambiar la morfologa de los cromosomas, pero todo depende de la inversion. Tipos de inversiones -Simples (un solo segmento invertido) paracntricas (el segmento invertido no incluye el centrmero) pericntricas (el segmento invertido incluye el centrmero)

-Complejas (se invierten simultneamente varios segmentos de un mismo cromosoma) independientes: A`BCDE`FGHACBDEGFH en tndem: A`BCD`EFGHADCBFEGH incluidas: A`BCDEFGHAGF`EDCBHAGFCDEBH solapantes: A`BCDEFGHAD`CBEFGHADFEBCGH

Inversion paracntrica: (1 sobrecruzamiento)

No implica el centrmero, para aparearse forma un bucle, si ocurre un sobrecruzamiento en el bucle, puede suceder que en un cromosoma queden los dos centrmeros y otro cromosoma no tenga centrmeros. Los cromosomas que tienen los dos centrmeros tendrn una cromtida normal y otra con una perdida de informacin. Con lo cual, al final tenemos una perdida de candidatos para la descendencia, pero si uno de esos gametos lleva la inversion podr insertarse en la evolucin.

(2 sobrecruzamientos) Inversin paracntrica Si se dan en el bucle, dar lugar a dos cromosomas normales y dos invertidos pero son gametos viables. As que da la impresin de no lo pasan muy mal las inversiones en meiosis. - 65 -

Inversiones pericntricas: El centrmero como esta incluido en la inversion forma parte del bucle. Paso de la meiosis por la inversion: Depende de: -tipo de inversin (para- o pericntricas) -tamao de la inversin (las pequeas no afectan) -posicin del sobrecruzamiento (dentro o fuera del bucle; complementarios o recprocos) -nmero de sobrecruzamientos

Inversiones y evolucin -Inversiones: supresoras de la recombinacin: -Impedimentos estructurales: no aparean (salvo bucle) -Si aparean y recombinan (1) en el bucle obtenemos el gameto normal y el invertido (...) SUPERGENES: Un grupo de de genes ligados que son (o tienden a ser) transmitidos como una unidad hereditaria, y que por tanto se mantienen juntos sobre un cromosoma Darlington y Mather, 1949 CROMOSOMA 3 DE Drosophila pseudoobscura y D. persimilis Costa Oeste de Amrica de Alaska a Guatemala; distribucin discontinua Cruces: descendencia homocigota estructural: salvajes descendencia heterocigota estructural: presencia de mutacin Tendencia a mostrar inversiones paracntricas: producen gametos viables normales e invertidos, beneficioso para la especie cuando los genes incluidos en la zona de la inversin se han coadaptado en una combinacin ptima: supergenes MAYOR VALOR ADAPTATIVO DE LOS HETEROCIGOTOS ESTRUCTURALES PARA LA INVERSIN

- 66 -

-Hembras inseminadas de una poblacin natural: descendencia en equilibrio Hardy-Weinberg en laboratorio.

-Machos adultos de la misma poblacin: cruzndolos con hembras de genotipo conocido, la frecuencia de machos capturados mostraba mayor proporcin de heterocigotos. En la poblacin natural, mayor nmero de heterocigotos Estructurales: mayor valor adaptativo. SISTEMA EVOLUTIVO DE LAS INVERSIONES -Supresin de la recombinacin (en los supergenes) -Aumento de la frecuencia de heterocigotos estructurales: normal-invertido -Generacin de homocigotos estructurales Y empezaran a recombinar entre s los individuos homocigotos...

15. TRANSLOCACIONES
Cambio estructural en el que un segmento cromosmico cambia su posicin relativa dentro del genoma y modifica los grupos de ligamiento y a la hora de reconocer homlogos se cambian los patrones de recombinacin. El inters principal de esto es ser capaces de reconocer una de estas variaciones y predecir que va a ocurrir en meiosis va a transmitir esa mutacin a la descendencia? Si se llegar a establecer podramos estar hablando de un proceso de evolucin. Tipos: -Translocaciones simples: roturas y fusiones -Translocaciones complejas: varios cromosomas implicados/ transl. mltiple -Fusiones robertsoniananas: varia en nmero cromosmico, pero no el nmero de los brazos, son translocaciones de brazo completo, normalmente dos cromosomas acrocntricos se fusionan y dan lugar a uno metacntrico. Generando trivalentes con tres centrmero pudindose romper el cromosoma metacntrico. Translocaciones simples Un cromosoma enva informacin a un cromosoma no homologo y este a su vez cede informacin al primero. Al aparearse cromosomas translocados forman tetravalente que ahora tienen que separar los centrmeros, tendremos centrmeros adyacentes y, mientras que otros estn en posicin alterna. Solo la orientacin de centrmeros alternados nos van a dar gametos equilibrados.

- 67 -

Adyacente 1: centrmeros no homlogos viajan al mismo polo, presentan duplicaciones para algunos genes y otros genes no aparecen. Adyacente 2: centrmeros homlogos viajan al mismo polo, presentaran duplicaciones para los genes que participan en la translocacin y tambin presentan deficiencias. Alternadas: centrmeros alterados coorientan y van al mismo polo nos van a dar gametos equilibrados sin duplicaciones ni deficiencias. Para que se de el tetravalente tiene que haber quiasmas, entonces todo lo anterior se cumple si no hay recombinacin en la zona intersticial (del centrmero al punto de rotura) en ese caso ni los gametos alternados son equilibrados. Si hay dos quiasmas no pasa nada porque haya un quiasma en la zona intersticial, por lo que no solo depende del lugar sino tambin del nmero de combinaciones que se producen. Factores que influyen en la separacin del tetravalente

(Todos los factores tienden a buscar la simetra del tetravalente) 1. La longitud de los cromosomas que participan en el intercambio, lo ideal sera que tuvieran tamaos parecidos debido a que se aumenta la estabilidad del tetravalente. 2. Posicin del punto de rotura, que estn cerca o lejos del centrmero. 3. Nmero y posicin de quiasmas, lo ms estable son cuatro quiasmas para que se cierre el anillo. 4. tipo de cromosoma que participa en el intercambio (metacntrico- acrocntrico) los dos del mismo tipo mejor. 5. posicin relativa de los centrmeros en el anillo tetravalente, si hay cuatro quiasmas lo ideal sera que todos fueran equidistantes del centrmero.

- 68 -

Las metodologas que se usan para identificar translocaciones suelen ser identificacin por bandas G en hospitales, y solo en casos especficos se realizara un sky o un cromosome painting entre un par de cromosomas Las translocaciones se suelen aceptar bastante bien en le genoma, a no ser que afecte a genes importantes.

Sintena Nace de la capacidad de disear en humanos sondas que impliquen regiones genmicas, con lo cual pintamos el cromosoma de colores (cdigo de barras del cromosoma cromosome code bar) Si en las translocaciones reciprocas participan ms de dos cromosomas, la resolucin del hexavalente, por ejemplo, y las pautas de estabilidad son las mismas que con el tetravalente. Con lo cual si las translocaciones son alternas son estables y si son adyacentes habr duplicaciones o deleciones, adems tambin se cumplen las 5 normas que hemos nombrado antes. Sistema de translocaciones mltiples

Las translocaciones mltiples implica la translocacin del 1 al 2, del 2 al 3, del 3 al 4. Todos los cromosomas tienen un fragmento que nos les pertenece. Aparendose el 1 con el 2, el 2 con el 3. Que da lugar a cadenas o anillos cerrados de cromosomas unos detrs de otros. Para sobrevivir se tiene que garantizar una segregacin alternada. Fusiones Robertsonianas De todos los sistemas de translocaciones, las mas efectivas son estas ya que las regiones que participan normalmente son regiones de heterocromatina constitutiva, por eso es sencillo que se produzcan,

- 69 -

Una tendencia que se observa es que los cromosomas que tienen genes de rRNA (que son muchos) lo que ocurre es que los cromosomas que participan tienen que portar del rRNA y son acrocntricos (se q esta frase no tiene ningn tipo de sentido pero no es que se explicara mejor en clase) tienden a fusionarse formando un cromosoma metacntrico. El resultado en un clula hija es el mismo. Pueden existir individuos (si se pasa la meiosis) cromosomas metacntricos y acrocntricos, lo mejor para pasar la meiosis es que los cromosomas que se van a fusionar sean del mismo tamao. Cuando se cuela esta interaccin por meiosis, ese gameto puede mutar con uno normal o mutar con otro mutado. En general solo en segregaciones alternadas se origina un zigoto normal.

5. VARIACIONES CROMOSOMICAS NUMRICAS

Variacin en el nmero de cromosomas del genoma.

16. HAPLOIDIA
El trmino haploide se aplica a toda clula, tejido u organismo que posee una constitucin cromosmica igual a la de los gametos de la especie. Un individuo haploide tiene la mitad de los cromosomas que los normales de su especie, slo tiene un complemento cromosmico completo y su contenido en ADN es igual al valor-C de la especie a la que pertenece. En la meiosis todos los cromosomas estarn en forma de univalentes y la inmensa mayora de sus gametos seran inviables. Al microscopio electrnico slo veramos elementos laterales simples. La condicin de haploida no es muy daina, se pueden formar individuos aunque no sean completamente normales. Se hace generalmente en plantas (Arabidopsis), pero lo intentaron en Xenopus tropicalis, irradiando los espermatozoides, cargndose todo el ADN, y luego fertilizando los huevos de la hembra que desarrolla los haploides parcialmente viables (foto). Tambin puedes hacer individuos diploides mediante choque trmico que luego pasarn a ser individuos haploides. Se puede hacer inhibiendo uno de los ciclos de divisin con colchicina y rescatndolo justo en esa fase. Tipos de haploides: Haploide dismico; tienen una copia de cada cromosoma excepto de uno que tiene dos copias Haploide de adicin: tienen un cromosoma de otra especie Haploide nulismico: falta un cromosoma, en plantas, pero es difcil. Esto hace pensar que la informacin gentica de ese cromosoma puede estar en otro y que por tanto muchas de las plantas que se reconocen como diploides realmente son poliploides. Haploide de sustitucin: sustitucin de un cromosoma por otro de otra especie. Aplicaciones: produccin de homocigotos en plantas, se usa mucho, hacemos un haploide (como se ha dicho antes) y luego duplicamos el genoma (diploidizamos) obteniendo un homocigoto. - 70 -

El hombre ha utilizado los haploides en su beneficio, sobretodo en la mejora de plantas. Si se logra duplicar un haploide tendramos un individuo totalmente homocigtico para todos los genes. Este hecho tiene una gran importancia en la mejora, ya que para obtener lneas isognicas u homocigticas a partir de un hbrido lleva mucho tiempo y trabajo, mientras que por duplicacin de un haploide se puede ahorrar tiempo y esfuerzo.

17. ANEUPLOIDIA
Condicin gentica en la cual en el genoma falta o sobra algn cromosoma. Tipos:

Dentro de las series haploides destaca el caso de Datura stramonium (alucingenos). Fue el primer organismo en que se caracteriz una copia extra para cada cromosoma. Daba distintos tipos de fruto segn el par de cromosomas que tenga la trisoma. Cada trismico puede generar ms o menos gametos viables segn lo que pueda hacer en meiosis. Se forma un trismico primario, pero la meiosis le va mal y hace cosas raras como la aparicin de trismicos secundarios, derivados de estos pero aberrantes. Los trismicos producen demasiados problemas en meiosis por lo que no llegan a implantarse en la meiosis. Es muy difcil formar un trivalente que est equilibrado, adems el trivalente suele retrasarse en el proceso de divisin celular por lo que la citocinesis no ocurre y no da lugar a los gametos. A la hora de aparearse puede formase un trivalente separando dos cromosomas a un polo y otro a otro en Anafase I, mientras que si slo aparean dos cromosomas formando un bivalente, y el otro est sin aparear, ocurrir que este, en Anafase I, separar las cromtidas y en Anafase II separar los brazos rompiendo el cromosoma y dar lugar a dos cromosomas acrocntricos (misdivision). Cuando estos cromosomas acrocntricos sin telmeros replican, forman los trismicos secudarios llamados isocromosomas que suelen tener aspecto circular porque puede recombinar con sigo mismo formando un anillo. Unas trisomas tienen mayor tendencia a formar estos trismicos secundarios que otras. En humanos: Existen mayoritariamente trisomas en cromosomas sexuales, a pesar de que todos los cromosomas tienen las mismas probabilidades. Es decir, los procesos de no disyuncin ocurren ms en cromosomas sexuales porque son ms soportables para el genoma (por ej, los dos X se van a un polo). Esto es - 71 -

porque existen sistemas que pueden silenciar parte de la informacin, un cromosoma silenciado no causa tanto ruido como un cromosoma somtico que no se pueda silenciar, aunque suelen ser estriles. Esto ocurre porque en la meiosis los cromosomas sexuales se saltan la condicin de diploida, lo cual acarrea problemas, y adems aunque saltando esto y llegando a formarse los gametos tienen mayor capacidad de controlar su informacin gentica por heterocromatinizacin aunque no lo consiga del todo, pero es viable. En el caso de autosomas, no se conoce ningn individuo adulto con una trisoma por ej en el cromosoma 1, esto es porque aunque pasen la barrera de la meiosis, luego no pueden silenciarlo. Localizar genes: Hasta los 90 se ha utilizado esto para localizar genes. Tengo plantas monosmicas, nulismicas o lo que sea, y otras normales. Cruzo el mutante recesivo que quiero localizar con toda la serie nulismica (nulismico para el 1, para el 2), entonces obtendr siempre que enfrente mi mutacin a la condicin normal enmascaro el efecto de la mutacin (B normal contra b mutada, la b no se manifiesta), y como s que el nulismico que veo era el 6, quiere decir que la mutacin est en el 6. Toda la F1 ser igual, menos las descendencias del cruzamiento con el nulismico del cromosoma donde est la mutacin que darn frecuencias distintas. Los individuos normales siempre van a ser dismicos porque enfrentan el B normal al b pequeo. Si usas 6 cromosomas uno siempre tendr una respuesta diferente que es donde est la mutacin. Fenmeno de no disyuncin:

Puede ocurrir en Meiosis I, cuando se separan los cromosomas, o en Meiosis II cuando se separan las cromtidas. Esto puede ocurrir y transmitirse, o puede ocurrir en la lnea somtica donde generar un mosaico con las consecuencias genticas asociadas al tejido que sea. Mtodo de estudio: - 72 -

Se hace mediante DGP (Diagnstico Gentico Pre-implantacional) que es una tcnica muy invasiva en la que se coge un embrin, se le quita una clula y se analiza para ver si tiene cromosomas extra. Pero tiene problemas por el mosaicismo, porque se coge slo una clula, no todo, por lo que aunque parezca normal puede no serlo, porque la tasa de mosaicismo que puede soportar un embrin es bastante alta. Pero esto nos ha permitido ver la incidencia real de las anomalas (en un estudio realizado, de 700 embriones slo 100 eran normales). Tambin se pueden detectar cromosomas anormales mediante fotos realizadas usando sondas en las que se ve si falta o hay algn cromosoma de ms. Los efectos fenotpicos en general van asociados a la letalidad, o son efectos deletreos.

18. POLIPLOIDIA
Poliploida: variacin o cambio en el nmero cromosmico que involucran dotaciones completas de cromosomas (euploida). La poliploida supone un incremento del nmero de cromosomas caracterstico del complemento diploide. La no disyuncin de todos cromosomas en la meiosis de individuos 2n lleva a la aparicin de individuos (4n). Los Poliploides permanecen aislados reproductivamente de la especie durante mucho tiempo, por ejemplo, un rbol puede vivir muchos aos hasta que otro se hace poliploide y se puede cruzar con l, en el caso de las plantas, aguantan menos tiempo. Si se cruzase con un diploide dara un Triploide que es muy inestable (es como un trismico a lo bestia). Pero si s muchas plantas poliploidizan a la vez se pueden reproducir rpido y generar una nueva especie, por lo que es el mecanismo ms rpido conocido de especiacin. Todos derivan de grupos que inicialmente fueron diploides. Por su origen los poliploides pueden ser: AUTOPOLIPLOIDES: derivados de un slo diploide por multiplicacin de sus cromosomas AA----AAAA (generar un tetravalente). Estas plantas presentarn una tendencia a diploidizarse. ALOPOLIPLOIDES derivados de un hbrido entre dos diploides de dos especies distintas (aunque relacionadas) AABB---ABAABB. Esto no sirve para nada y no se poliploidiza, porque no aparean en meiosis, salvo que dupliquen su material y puedan funcionar como un diploide. Tipos de Autopoliploides: Triploide: Los triploides son individuos que poseen tres juegos completos de cromosomas (3n). Ej: bananas, sanda, manzana. Pueden surgir por diversos medios. ORIGEN: Gametos diploides (tambin llamados "gametos no reducidos") que pueden ser fecundados por gametos haploides de la misma especie, dando lugar a un autotriploide (3n). INTERESANTES POR SER INFERTILES (por eso la semilla pequeita del pltano), porque cuando tienes 3 copias es casi imposible que segreguen de forma normal Tetraploides: Individuo que posee cuatro juegos de cromosomas (4n). Se forma cuando se unen dos gametos diploides de la misma especie. La duplicacin se lleva a cabo con compuestos qumicos, como el alcaloide llamado colchicina. Ejemplos: variedades de manzana, cerezas, peras, zarzamoras y algunos trigos. Importancia econmica de la tetraploida: Frutos ms grandes para su comercializacin. Hexaploides, Octaploides. Autotetraploides: Individuos que poseen cuatro juegos de cromosomas homlogos (4n). AAAA. Son relativamente estables. Alotetraploides: Individuos que poseen cuatro juegos de cromosomas no homlogos (4n). AABB. Por lo general son frtiles, se forman al unirse dos gametos diploides de dos especies diferentes o dos - 73 -

gametos haploides seguidos de una polipolidizacin. Triticale; este cereal es un hbrido alotetraploide de trigo (Triticumsativum) y centeno (Secalecereale). Son muy rentables porque crean mucha variabilidad En mamferos, a nivel somtico se dispara el checkpoint del p53 cuando hay poliploidizacin, lo que lleva a la apoptosis o si no se produce cncer. Con una lnea dismica (tener Aa en un individuo), lo mximo que puedes conseguir es tener 1 individuo AA, 1 individuo aa y 2 heterocigotos (Aa), es decir, la proporcin de heterocigotos es 1/1 (hay tantos heterocigotos como homocigotos). Si la lnea es tetrasmica te salen 2 individuos homocigotos (o con AAAA aaaa) y 4 AAAa, 3AAaa, 4Aaaa, es decir, un homocigoto por cada 7 heterocigotos. Por eso son tan buenos, porque la cantidad de heterocigotos que generas es ms grande

Al tratar los callos con colchicina, que inhibe el movimiento de las cromtidas a los polos no se establecen las corrientes citoplsmicas que determina la formacin de la membrana celular que se formar entre las dos clulas hijas; por tanto la mitosis que se produce bajo la influencia de la colchicina se denomina c-mitosis dando lugar a la duplicacin del complemento cromosmico completo En la fusin de protoplastos se produce la fusin de las membranas de dos o ms clulas dando lugar a un hbrido somtico Los gametos no reducidos o gametos 2n son producto de una anormal orientacin paralela del huso acromtico durante anafase II o una citokinesis prematura en la segunda divisin Consecuencias fenotpicas del aumento del nivel de ploida - Aumento del tamao celular - Ciclos de crecimiento ms largos - Aumento del tamao de rganos - Menor nmero de clulas - 74 -

- Menor contenido de materia seca - Menor fertilidad Uso de la poliploidizacin en la mejora Objetivo: nivel de ploida ptimo - Aumento del rendimiento - Aumento de la calidad nutritiva - Aumento del tamao de los rganos Mayor probabilidad si: - El rgano cosechado no es semilla - El nivel de ploida de partida es bajo - Algamas (recombinacin posterior) - Ciclos de seleccin cortos Objetivo: nivel de ploida impar - Esterilidad: frutos sin semilla (banana, sanda)

- 75 -

Alopoliploides Hbridos interespecficos (entre especies distintas). Especies organizadas en complejos poliploides. Entre los ejemplos ms tpicos estn el trigo, avena, el algodn y el tabaco, tanto de modo natural como generadas por el ser humano.

Transgnesis dirigida de una especie a otra Puede hacerse metiendo un solo gen o metiendo todo el cromosoma entero. Ejemplo:

- 76 -

Se poliploidiza

(el hexaploide), Queremos qui tar los amarillos

Para que se inserte el gen

Tambin interesan plantas con menor nivel del ploida, para luego recuperarlo:

- 77 -

- 78 -

- 79 -