DETERMINACIN DE SULFATO POR EL MTODO TURBIDIMTRICO EN AGUAS Y AGUAS RESIDUALES.

VALIDACIN DEL MTODO

I. Aguilera Rodrguez*, R. M. Prez Silva*, A. Maran Reyes**

"

*Centro de Estudios de Biotecnologa Industrial, Universidad de Oriente**Facultad de Ciencias Naturales, Universidad de Oriente

z Resumen La validacin de mtodos de ensayos constituye una premisa para la realizacin de servicios cientficos tcnicos y una garanta de la calidad de los resultados por brindar. El objetivo de un anlisis qumico es generar resultados correctos y confiables, y uno de los aspectos ms importantes para conseguir este propsito es la validacin de ensayos. En el presente trabajo se realiza la validacin de la determinacin de sulfatos por el mtodo turbidimtrico, mediante la determinacin de los parmetros: linealidad, exactitud, lmites de deteccin y de determinacin. Durante el estudio, se utiliza un patrn de referencia interno; se realizan ensayos de recuperacin de muestras, y se comparan los resultados obtenidos en muestras residuales industriales con los reportados por un laboratorio de referencia a travs de pruebas de hiptesis, prueba de Fisher y test de Student, demostrndose que no existen diferencias significativas para un 95 % de confiabilidad entre los mismos. Palabra clave: validacin de mtodos analticos, sulfato, mtodo turbidimtrico. z Abstract The validation of analytical methods assays constitutes a premise for the realization of services scientific technicians and a guarantee of the quality of the results to propose. The objective of the chemical analysis is to generate correct results and one of the most important aspects to get correct results is to validate the analytic method that will use. In the present work it is carried out the validation of the determination of the ions sulfate, by the turbidimetric methods for that which the following parameters are calculated: linearity, precision, detection and determination limits. During of the study, is utilize one internal reference patterns, is realize assay of recovered of samples and the results obtained is compare with the results obtained for the residual industrial samples study object in reference laboratory, though hypothesis tests, Fisher tests and Student test, being demonstrated that do not exist significant differences for 95 % of dependability among the same ones. Key words: validation of analytical methods, sulfate, turbidimetric methods. z

Introduccin

no es deseable un exceso de los mismos en las aguas de consumo. El contenido de sulfatos en las aguas naturales es muy variable, y puede ir desde muy pocos miligramos por litros, hasta cientos de miligramos por litros. Por esto, la norma cubana para agua potable /1/, establece como valor orientador de calidad 200 mg/L, y como lmite mximo tolerable 400 mg/L (concentracin mxima admisible).

Los sulfatos pueden tener su origen en que las aguas atraviesen terrenos ricos en yesos, o a la contaminacin con aguas residuales industriales. El contenido de este no suele presentar problemas de potabilidad para las aguas de consumo, pero, contenidos superiores a 300 mg/L pueden causar trastornos gastrointestinales en los nios. Se sabe que los sulfatos de sodio y magnesio tienen accin laxante, por lo que

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La determinacin de la concentracin de sulfatos puede hacerse por diferentes mtodos. Se puede citar la prueba rpida de sulfatos, /2,3/ el mtodo gravimtrico mediante precipitacin con cloruro de bario, el cual es muy preciso y aplicable a concentraciones superiores a 10 mg/L, y el mtodo volumtrico, cuyo principio consiste en la determinacin de los iones sulfatos mediante una valoracin por retroceso en presencia de sulfato de bario y en medio alcohlico con la sal disdica de la EDTA. Este mtodo es aplicable a la determinacin de sulfatos en concentracin inferior a 100 mg/L /4/. El mtodo nefelomtrico se recomienda, preferentemente, para la determinacin de sulfatos en aguas con contenidos superiores a 60 mg/L. El ion sulfato (SO42-) precipita, en un medio de cido actico, con in Ba2+, de modo que forma cristales de sulfato de bario (BaSO4), los que deben mantenerse en suspensin durante un perodo de tiempo que resulte suficiente para medir la absorbancia que la misma produzca. El contenido de SO4= de cada muestra se obtiene a partir de la curva de calibracin previamente obtenida. Este mtodo no es recomendable para aguas con color, materias en suspensin o con elevado contenido en materias orgnicas, ya que interfieren en la determinacin, pudiendo ser eliminadas por filtracin o centrifugacin. La interferencia del color puede soslayarse utilizando la muestra coloreada como testigo, a la que se le adiciona reactivo de la disolucin precipitante de bario, o empleando como instrumento de medida un nefelmetro de doble posicin de cubeta, con lo que elimina la influencia del color /5/. El Grupo Analtico CEBI-DQ de la Facultad de Ciencias Naturales de la Universidad de Oriente, tiene entre sus misiones, la determinacin de parmetros ambientales en aguas y aguas residuales. Teniendo en cuenta la existencia en la regin de industrias que realizan el vertido de sus residuales con cantidades considerables de sulfato, se propuso la bsqueda de un mtodo sencillo y rpido para la determinacin de este parmetro, el mtodo turbidimtrico, basado sobre la medida de la turbidez

producida por la reaccin de precipitacin del ion sulfato, con una sal brica en medio cido a una longitud de onda de 450 nm. Para conseguir que el sulfato de bario se mantenga en suspensin, se utiliza una disolucin acondicionadora que contiene glicerina y alcohol, de forma que se modifica la viscosidad de la muestra, permitiendo as una turbidez estable en un perodo de tiempo suficiente para medir la turbidez /6/. Por tal motivo, el objetivo del siguiente trabajo es realizar la validacin de este mtodo en las condiciones actuales del laboratorio analtico del Grupo CEBI-DQ. z

Materiales y mtodos

Las determinaciones se realizaron en el espectrofotmetro Gnesis-10 UV-visible. Toda la cristalera y el equipamiento utilizado en el anlisis fueron verificados y calibrados por la Oficina Territorial de Normalizacin de la provincia Santiago de Cuba. Los reactivos empleados fueron calidad puro para anlisis. z Mtodo

de anlisis

La determinacin de la concentracin de sulfato en las muestras se realiz mediante el mtodo turbidimtrico /6/. El protocolo a seguir para la determinacin de iones sulfato en disolucin, requiere de una curva de calibracin en el intervalo de 20,0-100,0 mgL-1 de sulfato, preparadas a partir de una disolucin patrn interno de sulfato de sodio (1 000 mgL-1). Las muestras se filtran a travs de papel para precipitados finos, evitando as, la interferencia en la determinacin de cualquier componente que se encuentre en suspensin. Los patrones y muestras se llevan a un volumen final de 10 mL, en matraces aforados, con agua destilada. El contenido de cada matraz se deposit en tubos de ensayos de 30 mL de capacidad, para facilitar la agitacin. Se aadi 1 mL de disolucin tampn (45 mL de agua destilada, 4,5 mL de HCl concentrado, 15 mL de etanol absoluto, 7,5 mL de trietilenglicol y 11,25 g de NaCl), se agit y se adicion una punta de esptula de BaCl2. La mezcla resultante fue agitada durante un minuto en vortex (Haildolph REAX2000) y se dej reposar otro minuto.

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La determinacin fue realizada en el espectrofotmetro UV-Visible Genesys 10 a D.O450nm

Parmetros determinados para la validacin del mtodo

Los parmetros de calidad del ensayo utilizados fueron evaluados segn NC "Gua para la validacin de ensayos qumicos" y los reportados segn /7-9/, los cuales se relacionan a continuacin: Linealidad: De la solucin patrn de referencia interno de sulfato de sodio de concentracin 1 000 mg/L se toman las alcuotas correspondientes para obtener concentraciones de 20, 40, 60, 80, 100 mg/L, y se realiza el procedimiento segn PNO para un tamao de muestra 10 (n= 10). Precisin: Se determina mediante el clculo de las desviaciones estndar y tpica relativa, de los resultados obtenidos del anlisis de las muestras a tres niveles de concentracin para n= 10. Exactitud o veracidad: Se evala mediante un ensayo de recuperacin para n= 10, y se realiza la determinacin del analito a una muestra de concentracin conocida, a la que se le ha adicionado una cantidad de patrn interno que debe corresponder con la cantidad del analito presente en la muestra. Limite de deteccin: Se evala como tres veces la desviacin estndar de veinte muestras blanco. Limite de cuantificacin: Se determina como diez veces la desviacin estndar de veinte muestras blanco.

Procesamiento estadstico: Se realizaron prueba de hiptesis, test de Student para comparacin de medias, y prueba de Fischer para comparacin de varianzas; adems, se evalu la regresin y la correlacin lineal mediante el programa STARGAPHICTM. z

Resultados y discusin

El protocolo que hay que seguir para la realizacin de la determinacin de iones sulfato en disolucin, requiere de una disolucin acondicionadora que contiene glicerina y alcohol de forma que se modifica la viscosidad de la muestra, permitiendo as una turbidez estable en un perodo de tiempo suficiente para medir la misma. Teniendo en cuenta, la no disponibilidad de glicerina en los laboratorios del Grupo CEBI-DQ y la existencia de cantidades apreciables de trietilenglicol, se procedi a realizar una comparacin de los resultados obtenidos en los ensayos, utilizando disolucin acondicionadora con glicerina (buffer1) y trietilenglicol (buffer2), observndose que se cumple la hiptesis de igualdad tanto de medias como de varianzas, por lo que los resultados obtenidos con una u otra disolucin, no difieren significativamente, para un 95 % de confiabilidad, demostrando que los ensayos de determinacin de sulfato por el mtodo turbidimtrico pueden ser realizado con cualquiera de los buffer (tabla 1).

TABLA 1. RESULTADO DE COMPARAR LAS DOS SOLUCIONES BUFFER CON SOLUCIN PATRN INTERNO DE C=25mg/L

Prueba de Fisher: F = 1,0262

p = 0,9698 p > 0,05 se cumple H0 : 1= 2.

Prueba de Student: t = 0,5262 p = 0,5650 p > 0,05 se cumple H0 : 1= 2 Buffer 1 utiliza glicerina como estabilizador de partcula Buffer 2 utiliza trietilenglicol como estabilizador de partcula

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Para la evaluacin de la linealidad del mtodo, se aplic el anlisis de la regresin lineal, con el objetivo de obtener la recta de mejor ajuste Y = 0,002 8X. Los coeficientes de regresin y de correlacin lineal obtenidos (r= 0,993 3 y r2= 0,989 7), muestran una alta correspondencia entre la concentracin y la seal analtica del mtodo para las determinaciones realizadas, con un 95 % de confiabilidad. Partiendo de los resultados obtenidos anteriormente, se procedi a la evaluacin de la

precisin y exactitud en la determinacin de sulfato, con solucin patrn interno de sulfato de sodio en tres niveles de concentracin. Los mismos muestran, que existe una buena precisin y exactitud, pues los valores de los coeficientes de variacin (CV) estn por debajo del 10 % y no se detectan diferencias significativas entre los valores de concentraciones obtenidas y las reportadas para el patrn de referencia interno a un 95 % de confiabilidad de la media, al ser en todos los casos el valor de p menor que 0,05 (tabla 2).

TABLA 2. EVALUACIN DE LA PRECISIN EN LA DETERMINACIN TURBIDIMTRICA DE SULFATO CON SOLUCIN PATRN INTERNO DE SULFATO DE SODIO

Posteriormente, se procedi a la evaluacin de los lmites de determinacin y de cuantificacin para lo cual se realizaron determinaciones a veinte muestras blanco (tabla 3).
TABLA 3. DETERMINACIN DE LOS LMITE DE DETECCIN Y DE CUANTIFICACIN

de las muestras, demostraron la exactitud del mtodo, pues los recobrados alcanzados oscilan entre 98,8102,0 %. Cuando se realiza el test de Student con datos pareados comparando las medias de recobrado para cada residual con respecto al 100 % (recobrado terico), no se presentaron diferencias estadsticamente significativas para un 95 % de confiabilidad de las medias, evidenciando la exactitud del mtodo para este sustrato. En la validacin del mtodo turbidimtrico para la determinacin de sulfato, se realiz un ensayo interlaboratorio, segn /10/ en el que intervinieron el laboratorio analtico del Grupo CEBI-DQ y un laboratorio de referencia acreditado. Si se comparan los resultados obtenidos en el laboratorio analtico del Grupo CEBI-DQ, utilizando el mtodo turbidimtrico con los reportados por el laboratorio de referencia (mtodo gravimtrico), se puede plantear que se cumple la hiptesis de igualdad, tanto de medias como de varianzas, ya que los resultados obtenidos por ambos laboratorios no difieren significativamente para un 95 % de confiabilidad.

A partir de los resultados mostrados (tabla 3), queda establecido que el mtodo puede emplearse en muestras cuya concentracin de sulfato se encuentre por encima de 2,14 mg/L y cuantifica con exactitud a un 95 % de confiabilidad para muestras cuya concentracin sea igual o mayor a 7,15 mg/L. La tabla 4 muestra los resultados obtenidos en el anlisis de muestras de aguas residuales industriales; de los mismos, se obtuvo que el coeficiente de variacin no excede del 4 % evidenciando la precisin del mtodo, y los resultados del ensayo de recuperacin

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TABLA 4. DETERMINACIN DE LA PRECISIN Y LA EXACTITUD EN MUESTRAS DE AGUAS RESIDUALES INDUSTRIALES

CR1: Concentracin terica del residual 1 (mg/L) CR2: Concentracin terica del residual 2 (mg/L) A: cantidad de analito adicionada B: cantidad recuperada R: % de muestra recuperada Los resultados son la media de diez determinaciones.
TABLA 5. RESULTADOS DE LA COMPARACIN ESTADSTICA ENTRE LOS ANLISIS REALIZADOS EN EL LABORATORIO ANALTICO CEBI-DQ CON LOS OBTENIDOS EN EL LABORATORIO DE REFERENCIA

En todos los casos se cumple p> 0,05; luego A= B y A= B.

Bibliografa

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