PRACTICA N 4 ANALISIS MICROBIOLOGICO DE BACTERIAS, HONGOS Y ACTINOS, EN DILUCIONES DE AGUA Y SUELO ASOCIADAS A DOS CULTIVOS DE FRESA JESUS IGNACIO

HERRERA MARTINEZ VI SEMESTRE DE INGENIERA AGRONMICA UNIVERSIDAD DE CUNDINAMARCA EXTENSIN FACATATIV 3 DE MAYO 2013 MICROBIOLOIGIA OBJETIVO GENERAL Analizar el tipo de microorganismos, asociados a dos mx de suelo y agua, de dos cultivos de fresa diferentes. Hacer conteo de bacterias, hongos y actinomicetos. RESUMEN Las bacterias y hongos, hacen parte del agua y suelo que nos rodea, inclusive en los diferentes cultivos comerciales del mundo, algunas bacterias y hongos, pueden ser benficas, como perjudiciales para suelo y agua de diferentes cultivos, es por eso que es indispensable hacer un anlisis microbiolgico y determinar qu clase de bacterias y hongos, rodean y afectan diferentes cultivos, en este caso se realiza el anlisis a dos muestras diferentes de agua y suelo asociadas a cultivos de fresa, por medio de diluciones seriadas. Hongos del suelo. Son varios los hongos que afectan a la planta desde su sistema radical o zona cortical del

cuello, entre stos se tiene Fusarium sp., Pytophtora sp., Rhizoctonia sp., Rhizopus sp., Pythium sp., Cladosporium sp., Alternaria sp. y Penicillium sp. En caso de no practicarse una fumigacin previa al suelo, el cultivo se expone en gran medida al ataque de estos hongos parsitos, pudiendo llegar a ser dramticas las consecuencias. Bacterias (Xanthomas fragariae). Ataca principalmente a la hoja, dando lugar a manchas aceitosas que se van uniendo y progresando a zonas necrticas. Se ve favorecida por temperaturas diurnas de alrededor de 20 C y elevada humedad ambiental. PALABRAS CLAVE Bacterias Hongos Suelo Sistema radical Humedad Diluciones seriadas INTRODUCCION Enfermedades producidas por virus, hongos o bacterias, limitan el rendimiento del cultivo de fresa y afectan la calidad del fruto (Universidad De Los Andes 1982; American Phytopathological Society 1984; Bradbury 1986, FUSAGRI 1988; Renauldy Morales 1975).

Suelo: La influencia del suelo, su estructura fsica y contenido qumico es una de las bases para el desarrollo del fresn. ste prefiere suelos equilibrados, ricos en materia orgnica, aireados, bien drenados, pero con cierta capacidad de retencin de agua. El equilibrio qumico de los elementos nutritivos se considera ms favorable que una riqueza elevada de los mismos. Niveles bajos de patgenos son igualmente indispensables para el cultivo. Agua de riego: La fresa es un cultivo muy exigente tanto en las cantidades de agua, muy repartidas y suficientes a lo largo del cultivo, como en la calidad que presente sta. El cultivo se resiente, disminuyendo su rendimiento, con concentraciones de sales en el agua superiores a 0,8 mmhos.cm. PROCEDIMIENTOS

ya se encontraban preparados, para las muestras de suelo, usamos PDA y para las muestras de agua play couft.

Foto tomada por el autor

Posteriormente pesamos 10 gramos de suelo de cada una de las mx y los agregamos a 90 ml de agua, en un Erlenmeyer. Luego agitamos la solucin, hasta que el suelo se mezcle con el agua, y sacamos con una jeringa nueva 1 ml de la solucin, el cual aadimos a un tubo de ensayo que contiene 9 ml de agua, posteriormente con una nueva jeringa, sacamos 1 ml del tubo de ensayo No 1 y lo aadimos en el tubo No 2, el cual tiene 9 ml de agua, as sucesivamente hasta llegar a 10^7, de cada solucin se saca 1 ml de la mx, con una nueva jeringa, las cuales desechamos, esto se llama diluciones seriadas nicamente guardamos de 10^4, hasta 10^6. Luego en la cmara de flujo laminar, agregamos el medio de cultivo, en 10 cajas de Petri, dejando 3 para cada una de las muestras de 10^4, hasta 10^6, con una nueva jeringa, hacemos una siembra directa, sacando 1 ml de la mezcla del erlenmeyer y aadindolo directamente al medio cultivo.

Foto tomada por el autor

Para la realizacin de esta prctica de laboratorio, previamente fueron desinfectadas y esterilizadas en el autoclave 40 cajas de Petri, envueltas en papel craft, 28 tubos de ensayo y 4 Erlenmeyer, fueron usadas un total de 36 jeringas nuevas, para hacer las disoluciones, los medios de cultivo

El medio usado es PDA.

microorganismos sembrados, esto afecto de manera directa los resultados. Resultados Observacin y conteo de las UFC Muestra 1 de agua cultivo de fresa

http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/un idades/documen/uni_02/58/texthtml/cap805.htm

Para la muestra No 2 de suelo realizamos el mismo procedimiento.

Foto tomada por el autor

Para las mx de agua se realiza exactamente el mismo procedimiento, pero en esta, se usa como medio de cultivo, play couft, se hacen las disoluciones para cada una de las mx, desde 10^1, hasta 10^7. Posteriormente se aade el medio de cultivo a 10 cajas de Petri, en la cual se hacen 3 rplicas, de la mx de 10^4, 3 rplicas de la mx 10^5 y 3 rplicas de la mx 10^6. Mas una siembra directa, el medio de cultivo ms la mx se mueve en forma circular, para esparcir por todo el medio la mx Lo mismo para la mx 2 de agua. Dejamos las mx, por 48 horas en la incubadora y luego se meten a la nevera, para el posterior conteo. En este paso se observ un gran error, las cajas de Petri, las dejaron guardadas en forma vertical, lo cual movi los medios de cultivo y los

Siembra directa 10^4 Replica 1 18 UFC 9 UFC 0 Replica 2 6 UFC 27 UFC 101 UFC Incontables 7 UFC Replica 3 18 UFC 10^ 5 Incontables Replica 1 5 UFC 0 Replica 2 3 UFC 7 UFC 4 UFC Replica 3 8 UFC 37 UFC 3 UFC 10^6 Replica 1 8 UFC 19 UFC 1 UFC Replica 2 12 UFC 7 UFC 6 UFC Incontables Replica 3 5 UFC 0 Cuando analizo mx de agua y suelo, lo que se quiere observar es la densidad poblacional, cantidad de organismos y cual prevalece. (Hongos, bacterias y actinomicetos) Muestra 2 de agua de cultivo de fresa Hongos INCON bacterias TABLES

Hongos INCON

bacterias TABLES

levaduras 0

Siembra directa 10^4 Replica 1 Replica 2 Replica 3 10^ 5 Replica 1 Replica 2 Replica 3 10^6 Replica 1 Replica 2 Replica 3

levaduras 0

2 UFC 1 UFC 2 UFC 9 UFC 0 1 UFC 3 UFC

Incontables Incontables

1 UFC 0

10 UFC 1 UFC 4 UFC

11 UFC 1 UFC Incontables 15 UFC

Incontables

4 UFC

22 UFC

El resto de soluciones de 10^6, no se tomaron en cuenta, ya que hubo un error al marcar las cajas de Petri y se obtuvieron 5 de 10^5 y tan solo 1 de 10^6. Muestra 1 de suelo de cultivo de fresa Hongos INCON bacterias TABLES levaduras 0

ni bacterias, esto es debido al halo de inhibicin, que este presenta. Si en un suelo tenemos presencia de actinomicetos o estreptomices , es bueno por que ayudan a dar estructura al suelo, adems de controlar crecimiento debido a su halo de inhibicin, aqu podemos estar en un caso de un posible biocontrolador para hongos y bacterias, tocara hacer pruebas ms profundas, para observar su comportamiento. Como podemos observar, lo esperado era que entre > nivel de concentracin de la solucin, se vieran menos microorganismos, porque la mezcla est ms disuelta, no se asemejan con los datos reales, por algunos errores cometidos al momento de la siembra, lo ya mencionado anteriormente que dejaron las cajas de Petri de forma vertical, entre otros. Para hallar el tipo de diversidad que se encuentra en cada mx de suelo y agua asociados a cultivos de fresa, se cuenta el No de UFC y se multiplica por el factor de dilucin que estoy observando. Hongos, bacterias y levaduras se cuentan por separado. Las podemos diferenciar por su color, las UFC color crema, o naranja son levaduras, las UFC color blanco son bacterias y los hongos se reconocen por los micelios. Si en nuestro suelo, prevalecen las bacterias es muy bueno, porque estas intervienen en los ciclos biogeoqumicos y algunas son promotoras de crecimiento vegetal, otras bacterias ayudan con control biolgico, inhibiendo germinacin de esporas y crecimiento del micelio.

Siembra directa 10^4 Replica 1 4 UFC 3 UFC 9 UFC Replica 2 13 UFC 4 UFC 3 UFC 3 UFC Replica 3 6 UFC 2 UFC 10^ 5 Incontables 0 Replica 1 3 UFC Incontables 0 Replica 2 1 UFC Incontables 3 UFC Replica 3 3 UFC 10^6 Incontables 1 UFC Replica 1 3 UFC Incontables 0 Replica 2 1 UFC Incontables 0 Replica 3 6 UFC Muestra 2 de suelo de cultivo de fresa

Hongos bacterias levaduras Siembra Incontable 5 UFC 0 directa 10^4 Replica 1 2 UFC 5 UFC 0 Replica 2 6 UFC 3 UFC 8 UFC Replica 3 5 UFC 20 UFC 8 UFC 10^ 5 Incontables Replica 1 3 UFC 2 UFC Replica 2 Replica 3 2 UFC 4 UFC 0 10^6 Replica 1 4 UFC 27 UFC 0 Incontables Replica 2 3 UFC 0 Incontables Replica 3 0 1 La caja de Petri de la rplica 2 de la solucin 10^5 se rompi la rplica 1 de 10^6 tiene la presencia de un actinomiceto, y podemos observar a su alrededor que no hay crecimiento de hongos,

Para determinar si el agente es un biocontrolador se realizan pruebas de antibiograma Resultados al multiplicar el nmero de microorganismos observados, por el factor de dilucin realizados Mx 1 de agua hongos 10^4 Replica 1 Replica 2 Replica 3 10^5 Replica 1 Replica 2 Replica 3 10^6 Replica 1 Replica 2 Replica 3 18*10^4= 180000 6*10^4= 60000 18*10^4= 180000 5*10^5= 500000 3*10^5= 300000 8*10^5= 800000 8*10^6= 8000000
12*10^6= 12000000

3 10^5 Replica 1 Replica 2 Replica 3 10^6 Replica 1 total

20000

10000

40000

9*10^5= 900000 0

11*10^4= 1100000 1*10^5= 100000 15*10^5= 1500000

Incontables

bacterias

levaduras

1*10^5= 100000

Incontables

9*10^4= 0 90000 27*10^4= 101*10^4= 270000 1010000 Incontables 7*10^4= 70000 0 7*10^5= 700000
Incontables

3*10^6= 3000000

4*10^6= 400000

22*10^6= 22000000

Mx 1 de suelo hongos 10^4 Replica 1 Replica 2 Replica 3 10^5 Replica 1 Replica 2 Replica 3 10^6 Replica 1 Replica 2 Replica 3 total 4*10^4= 40000 13*10^4= 130000 6*10^4= 60000 3*10^5= 300000 1*10^5= 100000 3*10^5= 300000 3*10^6= 3000000
1*10^6= 1000000

4*10^5= 400000

bacterias 3*10^4= 30000 4*10^4= 40000 3*10^4= 30000

Incontables Incontables Incontables

levaduras 9*10^4= 90000 3*10^4= 30000 2*10^4= 20000 0 0 3*10^5= 300000 1*10^6= 1000000 0 0

37*10^5= 3*10^5= 3700000 300000

19*10^6= 19000000

7*10^6= 7000000
Incontables

5*10^6= 5000000

1*10^6= 1000000 6*10^6= 6000000 0

total Mx 2 de agua hongos 10^4 Replica 1 Replica 2 Replica 2*10^4= 20000 1*10^4= 10000 2*10^4=
Incontables

bacterias

levaduras

Incontables Incontables Incontables

10*10^4= 100000 1*10^4=1 0000 4*10^4=

Incontables

6*10^6= 6000000

1*10^4=

Mx 2 de suelo hongos 10^4 Replica 1 Replica 2 Replica 3 10^5 Replica 1 Replica 2 Replica 3 10^6 Replica 1 Replica 2 Replica 3 total 2*10^4= 20000 6*10^4= 60000 18*10^4= 180000 5*10^5= 500000 bacterias 5*10^4= 50000 3*10^4= 30000
Incontables

levaduras 0 8*10^4= 80000 7*10^4= 70000 8*10^5= 800000

Rta/ es buena porque ayuda a dar estructura al suelo y adems nos sirve como biocontrolador, por el halo de inhibicin. Bibliografa http://www.infoagro.com/frutas/frutas_trad icionales/fresas.htm http://www.agriculturacanaria.com/fresa.ht m http://cenida.una.edu.ni/Tesis/tnh10g633d. pdf http://sian.inia.gob.ve/repositorio/revistas_t ec/inia_divulga/numero%203/guevara_y.pdf http://itzamna.bnct.ipn.mx/dspace/bitstrea m/123456789/10613/1/215.pdf http://articulos.infojardin.com/huerto/cultiv o-fresa-freson-fresas-fresones.htm http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/ microbiologia/unidades/documen/uni_02/58 /texthtml/cap805.htm Libro biologa de los microorganismos Brock edicin 12

20*10^5= 2000000

2*10^5= 200000 4*10^6= 4000000

3*10^6= 3000000

4*10^5= 400000

27*10^6= 0 27000000 Incontables 0

Incontables

1*10^6=
1000000

Preguntas complementarias 1 Si prevalecen los hongos en el suelo que sucede? Rta/ es un suelo que necesita tratamiento de inmediato, ya que cualquier tipo de cultivo all sembrado seria susceptible al ataque de estos patgenos. 2 la mx del suelo de que parte fue tomada? Rta/ esta mx fue tomada del suelo rizosferico, que es un dimetro de 20 cm alrededor de la planta 3 Por qu la presencia de actinomicetos es buena en una muestra?