Protenas 1 PROTEINAS CLASIFICACION DE LAS PROTEINAS Las protenas son polmeros lineales de -aminocidos con amplia variabilidad estructural

y funciones biolgicas muy diversas. La veriedad de protenas es elevadsima, y para su clasificacin se puede recurrir a criterios fsicos, qumicos, estructurales o funcionales. El criterio fsico ms utilizado es la solubilidad. As se distinguen (1) las albminas (protenas que son solubles en agua o en disoluciones salinas diludas), (2) las globulinas (que requieren concentraciones salinas ms elevadas para permanecer en disolucin), (3) las prolaminas (solubles en alcohol), (4) las glutelinas (slo se disuelven en disoluciones cidas o bsicas), y (5) las escleroprotenas (son insolubles en la gran mayora de los disolventes). Desde un punto de vista qumico, existen dos grandes grupos de protenas: (1) las protenas simples, formadas exclusivamente por -aminocidos, y (2) las protenas conjugadas, que contienen adems una proporcin significativa de otros componentes. La fraccin no aminoacdica se llama grupo prosttico, y puede ser un azcar, un lpido, un cido nucleico o una sustancia inorgnica. La protena en ausencia de su grupo prosttico se llama apoprotena, y en presencia de l se llama holoprotena. As, holoprotena = apoprotena + grupo prosttico. Son protenas conjugadas la hemoglobina, la mioglobina, los citocromos, etc. En cuanto a su forma molecular, las protenas son globulares cuando la cadena polipeptdica aparece enrollada sobre s misma dando lugar a una estructura ms o menos esfrica y compacta. Cuando hay una dimensin que predomina sobre las dems, se dice que la protena es fibrosa. Las protenas fibrosas, por lo general, tienen funciones estructurales. Algunas protenas constan de una sola cadena polipeptdica, y se llaman protenas monomricas, mientras que otras constan de varias cadenas polipeptdicas, y se llaman protenas oligomricas. Las distintas cadenas polipeptdicas que componen una protena oligomrica se llaman subunidades, y pueden ser iguales o distintas entre s. Dada la gran variedad de estructuras a que puede dar lugar una secuencia aperidica de 20 -aminocidos distintos es difcil hacer una clasificacin ms descriptiva o conceptual. Sin embargo, los criterios que hemos descrito son muy tiles desde el punto de vista prctico, y nos permiten definir al colgeno como una protena simple, fibrosa y oligomrica, y al citocromo c como una protena conjugada, globular y monomrica. Protenas 2 FUNCIONES BIOLOGICAS DE LAS PROTEINAS La gran hetereogeneidad estructural de las protenas les permite cumplir mltiples funciones en el ser vivo. As como los polisacridos se reducen a ser sustancias de reserva o molculas estructurales, las protenas, adems de abarcar estas funciones, asumen otras muy variadas. Describir las funciones de las protenas equivale a describir en trminos moleculares todos los fenmenos biolgicos. La gran mayora de las reacciones metablicas tienen lugar gracias a la presencia de un catalizador de naturaleza proteica especfico para cada reaccin. Estos biocatalizadores de naturaleza proteica reciben el nombre de enzimas. La gran mayora de las protenas son enzimas. Las estructuras encargadas del reconocimiento de seales qumicas de cualquier tipo son protenas. As, los receptores hormonales y los receptores de neurotransmisores son estructuras proteicas, que por lo general, interaccionan con sus ligandos por complementariedad entre sus estructuras. Muchos de estos ligandos (hormonas y

neurotransmisores) son, a su vez, de naturaleza proteica. En los seres vivos son esenciales los fenmenos de transporte, bien para llevar una molcula hidrofbica a travs de un medio acuoso (transporte de oxgeno o lpidos a travs de la sangre) o bien para transportar molculas polares a travs de barreras hidrofbicas (transporte a travs de la membrana plasmtica). Los transportadores biolgicos son siempre protenas. Hay protenas cuya principal funcin es estructural. Las clulas poseen un citoesqueleto de naturaleza proteica que constituye un armazn alrededor del cual se organizan todos sus componentes, y que dirige fenmenos tan importantes como el transporte intracelular o la divisin celular. En los tejidos de sostn (conjuntivo, seo, cartilaginoso) de los vertebrados, las fibras de colgeno son las encargadas de conferir resistencia mecnica tanto a la traccin como a la compresin La propiedad fundamental de los mecanismos de defensa es la de discriminar lo propio de lo extrao. As, tanto en los sistemas de restriccin bacteriana como en las defensas de los vertebrados superiores (sistema inmunitario), las protenas juegan un papel fundamental. En bacterias, las llamadas endonucleasas de restriccin se encargan de identificar y destruir molculas de DNA que no identifica como propias, y en los vertebrados superiores, las immunoglobulinas reconocen molculas extraas y se unen a ellas para facilitar su destruccin por las clulas del sistema immunitario. Todas las funciones de motilidad de los seres vivos estn relacionadas con las protenas. As, la contraccin del msculo resulta de la interaccin entre dos protenas, la actina y la miosina. El movimiento de la clula mediante cilios y flagelos est relacionado con las protenas que forman los microtbulos. Los fenmenos de transduccin (cambio en la naturaleza fsico-qumica de seales) estn mediados por protenas. As, la rodopsina de la retina convierte (o mejor Protenas 3 dicho, transduce) un fotn luminoso (una seal fsica) en un impulso nervioso (una seal elctrica), y un receptor hormonal convierte una seal qumica (una hormona) en una serie de modificaciones en el estado funcional de la clula. No se debe olvidar que muchas protenas ejercen a la vez ms de una de las funciones enumeradas: Las protenas de membrana tienen tanto funcin estructural como enzimtica; la ferritina es una protena que transporta y, a la vez, almacena el hierro; la miosina interviene en la contraccin muscular, pero tambin funciona como un enzima capaz de hidrolizar el ATP, y as se podran poner muchos ejemplos ms. ESTRUCTURA DE LAS PROTEINAS Clsicamente, se distinguen cinco niveles de estructuracin en las protenas, que se denominan estructura primaria, secundaria, terciaria, cuaternaria y quinaria (Figura 1). La estructura primaria viene determinada por la secuencia de AA en la cadena proteica, es decir, el nmero de AA presentes y el orden en que estn enlazados. Las posibilidades de estructuracin a nivel primario son prcticamente ilimitadas. Como en casi todas las protenas existen 20 AA diferentes, el nmero de estructuras posibles viene dado por las variaciones con repeticin de 20 elementos tomados de n en n, siendo n el nmero de AA que componen la molcula proteica, que generalmente oscila entre 80 y 300. La secuencia lineal de AA puede adoptar multiples conformaciones en el espacio. La conformacin espacial de una protena se analiza en trminos de estructura secundaria y terciaria. La estructura secundaria es el plegamiento que la cadena polipeptdica experimenta gracias al establecimiento de puentes de hidrgeno entre los tomos que forman el enlace peptdico. Con o sin estructura secundaria, la protena presenta un plegamiento tridimensional que adopta una forma determinada en el espacio, que constituye la estructura terciaria, concepto equiparable al de conformacin absoluta

en otras molculas. La estructura terciaria de una protena es nica y siempre la misma en igualdad de condiciones, y es la responsable directa de sus propiedades biolgicas, ya que es la disposicin espacial de los distintos grupos funcionales la que determina su interaccin con los diversos ligandos. Por ltimo, varias molculas con secuencia y conformacin establecidas pueden asociarse, originando estructuras de orden superior. Cuando se asocian varias cadenas polipeptdicas (iguales o distintas) para formar una unidad funcional, se habla de estructura cuaternaria, y si se asocian protenas con otra clase de biomolculas para formar asociaciones supramacromoleculares (ribosomas, nucleosomas, virus, membranas, etc), se habla de estructura quinaria. Los enlaces que determinan la estructura primaria son covalentes (enlace amida o enlace peptdico), mientras que la mayora de los enlaces que determinan la conformacin (estructuras secundaria y terciaria) y la asociacin (estructura cuaternaria y quinaria) son de tipo no covalente. Protenas 4 ESTRUCTURA PRIMARIA La secuencia de una protena viene determinada por el tipo de AA que contiene y el orden en que estn ensamblados (Figura 2). Los enlaces que participan en la estructura primaria de una protena son covalentes: son los enlaces peptdicos. El enlace peptdico (Figura 3) es un enlace amida que se forma entre el grupo carboxilo de una AA con el grupo amino de otro, con eliminacin de una molcula de agua. Independientemente de la longitud de la cadena polipeptdica, siempre hay un extremo amino terminal y un extremo carboxilo terminal que permanecen intactos. Por convencin, la secuencia de una protena se lee siempre a partir de su extremo amino. Como consecuencia del establecimiento de enlaces peptdicos entre los distintos AA que forman la protena se origina una cadena principal o "esqueleto" a partir del cual emergen las cadenas laterales de los AA (Figura 4). Los tomos que componen la cadena principal de la protena son el N del grupo amino (condensado con el AA precedente), el C (a partir del cual emerge la cadena lateral) y el C del grupo carboxilo (que se condensa con el AA siguiente). Por lo tanto, la unidad repetitiva bsica que aparece en la cadena principal de una protena es: ( -NH-C-CO-) Como la estructura primaria es la que determina los niveles superiores de organizacin, el conocimiento de la secuencia de AA es del mayor inters para el estudio de la estructura y funcin de una protena. Clsicamente, la secuenciacin de una protena se realizaba mediante mtodos qumicos (que se estudiarn ms adelante). Hoy en da, los avances de la Biologa Molecular permiten conocer la secuencia de un gen mucho antes de que se haya podido purificar la protena que codifica. El anlisis de la secuencia del DNA permite secuenciar una protena sin que se haya purificado previamente, ya que cada grupo de tres bases de la secuencia del DNA especifican un aminocido. El Cdigo Gentico establece la relacin entre cada grupo de tres nucletidos (codn) y el AA que codifica (Figura 5). El Cdigo Gentico es de validez universal, ya que es el mismo para todos los seres vivos. La comparacin de la estructura primaria de una misma protena en especies diversas tiene un enorme inters desde los puntos de vista funcional y filogentico. Cuanto ms alejadas estn las especies analizadas en el rbol filogentico, ms diferencias se podrn observar en la estructura primaria de protenas anlogas. Sin embargo, a menudo se encuentra que el mismo aminocido aparece siempre en idntica posicin en todas las especies estudiadas. Estos AA reciben el nombre de AA invariantes o AA conservados, y suelen ser indispensables para la funcin y estructura correcta de la protena. Cualquier mutacin en estas posiciones es letal para el organismo, y por tanto hay una fortsima seleccin en contra.

Protenas 5 ESTRUCTURA SECUNDARIA A primera vista podra pensarse en las protenas como polmeros lineales de AA unidos entre s por medio del enlace peptdicos. Sin embargo, la posibilidad de establecer puentes de hidrgeno entre los grupos -CO- y -NH- del enlace peptdico (el primero como aceptor, y el segundo como dador) permite adoptar conformaciones de menor energa libre, y por tanto, ms estables. As, se pueden distinguir varios tipos de conformaciones que determinan la estructura secundaria de una protena: 1.- CONFORMACION AL AZAR: En algunas protenas, o en ciertas regiones de la misma, no existen interacciones de suficiente consideracin como para que se pueda distinguir un nivel de organizacin superior a la estructura primaria. En estos casos se habla de conformacin al azar. 2.- HELICE : Cuando la cadena principal de un polipptido se pliega en el espacio en forma de helicoide dextrgiro se adopta una conformacin denominada hlice . Esta estructura es peridica y en ella cada enlace peptdico puede establecer dos puentes de hidrgeno (Figura 6). Un puente de hidrgeno se forma entre el grupo -NH- del enlace peptdico del AA en posicin n y el grupo -CO- del enlace peptdico del AA situado en posicin n-4. El otro puente de hidrgeno se forma entre el grupo -CO- del enlace peptdico del AA en posicin n y el grupo -NH- del enlace peptdico del AA situado en posicin n+4. Cada vuelta de la hlice implica 3,6 AA, con una translacin media por residuo de 0,15 nm, lo que indica que la hlice tiene un paso de rosca de 0,54 nm (Figura 7). Dicho con otras palabras, una vuelta completa de la hlice representa una distancia de 0,54 nm y contiene 3,6 residuos de AA. Las cadenas laterales de los AA se sitan en la parte externa del helicoide, lo que evita problemas de impedimentos estricos (Figura 8). En consecuencia, esta estructura puede albergar a cualquier AA, a excepcin de la prolina, cuyo C no tiene libertad de giro, por estar integrado en un heterociclo. Por este motivo, la prolina suele determinar una interrupcin en la conformacin en hlice (Figura 9). Los AA muy polares (Lys, Glu) tambin desestabilizan la hlice porque los enlaces de hidrgeno pierden importancia frente a las interacciones electrostticas de atraccin o repulsin. Por este motivo, la estructura en hlice es la que predomina a valores de pH en los que los grupos ionizables no estn cargados. En caso contrario, adoptan la conformacin al azar. 3.- HOJA : Cuando la cadena principal de un polipptido se estira al mximo que permiten sus enlaces covalentes se adopta una configuracin espacial denominada estructura (Figura 10). Las estructuras de distintas cadenas polipeptdicas o bien las estructuras de distintas zonas de una misma cadena polipeptdica pueden interaccionar entre s mediante puentes de hidrgeno, dando lugar a estructuras laminares llamadas por su forma hojas plegadas u hojas . Cuando las estructuras tienen el mismo sentido NC, la hoja plegada resultante es paralela, y si las estructuras tienen sentidos opuestos, la hoja plegada resultante es antiparalela (Figura 11). Esta conformacin es tpica de protenas fibrosas como la fibrona de la seda o las -queratinas de las plumas de ave, pero tambin aparece en protenas globlulares como las inmunoglobulinas. Protenas 6 4.- GIROS : Secuencias de la cadena polipeptdica con estructura o a menudo estn conectadas entre s por medio de los llamados giros (Figura 12). Son secuencias cortas, con una conformacin caracterstica que impone un brusco giro de 180o a la cadena principal de un polipptido. AA como Asn, Gly y Pro, que se acomodan mal en estructuras de tipo o , aparecen con frecuencia en este tipo de estructura. La conformacin de los giros est estabilizada por medio de puentes de hidrgeno entre los residuos 1 y 4 (Figura 12). 5.- CONFORMACION DEL COLAGENO: El colgeno es una imporante protena

fibrosa, con funcin estructural. Presenta una secuencia tpica compuesta por la repeticin peridica de grupos de tres AA. El primer AA de cada grupo es Gly, y los otros dos son Pro (o hidroxiprolina) y un AA cualquiera. La frecuencia peridica de la Pro condiciona el enrollamiento peculiar del colgeno en forma de hlice levgira. La glicina, sin cadena lateral, permite la aproximacin entre distintas hlices, de forma que tres hlices levgiras se asocian para formar un helicoide dextrgiro. El tercer AA refuerza la estructura mediante enlaces covalentes intercatenarios (Figura 13). 6.- ESTRUCTURAS SUPERSECUNDARIAS: En protenas con estructura terciaria globular es frecuente encontrar combinaciones de estructuras al azar, y , con una disposicin caracterstica que es igual en distintas protenas. Estas combinaciones de elementos de estructura secundaria que se repiten en distintos tipos de protenas reciben el nombre de estructuras supersecundarias. Una de las ms notables es el meandro , formado por varias hojas antiparalelas conectadas por segmentos con conformacin al azar. La unidad consiste en varias estructuras paralelas y yuxtapuestas, conectadas por un segmento al azar o en hlice . La estructura de Rossman consta de hlices y hojas en disposicn paralela y alternante (Figura 14). ESTRUCTURA TERCIARIA Se llama estructura terciaria a la disposicin tridimensional de todos los tomos que componen la protena. Se trata de un concepto anlogo al de configuracin absoluta en molculas pequeas. Para las protenas que constan de una sola cadena polipeptdica (carecen de estructura cuaternaria), la estructura terciaria es la mxima informacin estructural que se puede obtener (Figura 15). La estructura terciaria es una disposicin precisa y nica en el espacio, y que surge a medida que se sintetiza la protena. En otras palabras, la estructura terciaria est determinada por la secuencia de AA (estructura primaria). Las fuerzas que estabilizan la estructura terciaria de una protena globular se establecen entre las distintas cadenas laterales de los AA que la componen. Los enlaces propios de la estructura terciaria globular pueden ser de dos tipos: covalentes y no covalentes. Los enlaces covalentes pueden deberse a (1) la formacin de un puente disulfuro entre dos cadenas laterales de Cys, o a (2) la formacin de un enlace amida (-CO-NH-) entre las cadenas laterales de la Lys y un AA dicarboxlico (Glu o Asp). Protenas 7 Los enlaces no covalentes pueden ser de cuatro tipos: (1) fuerzas electrostticas entre cadenas laterales ionizadas, con cargas de signo opuesto, (2) puentes de hidrgeno, entre las cadenas laterales de AA polares (3) interacciones hidrofbicas entre cadenas laterales apolares y (4) fuerzas de polaridad debidas a interacciones dipolo-dipolo. No todas estas interacciones contribuyen por igual al mantenimiento de la estructura terciaria. Obviamente, el enlace que aporta ms estabilidad es el de tipo covalente, y entre los no covalentes, las interacciones ms importantes son las de tipo hidrofbico, ya que exigen una gran proximidad entre los grupo apolares de los AA. Se distinguen dos tipos de estructura terciaria: la de tipo fibroso y la de tipo globular. En las protenas con estructura terciaria de tipo fibroso (como pueden ser el colgeno, la queratina del cabello o la fibrona de la seda), una de las dimensiones es mucho mayor que las otras dos. En este caso, los elementos de estructura secundaria (hlices u hojas ) pueden mantener su ordenamiento sin recurrir a grandes modificaciones, tan slo introduciendo ligeras torsiones longitudinales, como en las hebras de una cuerda. En las protenas con estructura terciaria de tipo globular, ms frecuentes, la cadena polipeptdica sufre un nuevo plegamiento, en el que no existe una dimensin que predomine sobre las dems, y su forma es aproximadamente esfrica. En este tipo de estructuras se suceden regiones con estructuras al azar, hlice hoja ,

acodamientos y estructuras supersecundarias. Como resultado de estas interacciones, las molculas con estructura terciaria globular suelen contener un interior compacto de carcter hidrofbico, con las cadenas laterales ms polares orientadas hacia la superficie, interaccionando con el agua y permitiendo que la protena permanezca en disolucin. Recientemente, se han descrito regiones diferenciadas dentro de la estructura terciaria de las protenas globulares. Estas regiones, que constituyen un nivel estructural intermedio entre las estructuras secundaria y terciaria reciben el nombre de dominios. Los dominios (Figura 16) son unidades de plegamiento, y tambin la unidad de desnaturalizacin de las protenas globulares. Parece ser que a medida que se sintetizan las cadenas polipeptdicas, los distintos dominios se pliegan por separado, y es la asociacin de los distintos dominios la que origina la estructura terciaria. La desnaturalizacin consiste en la prdida total o parcial de los niveles de estructuracin superiores al primario. Esta prdida puede ser reversible o irreversible. ESTRUCTURA CUATERNARIA Cuando una protena consta de ms de una cadena polipeptdica, es decir, cuando se trata de una protena oligomrica, decimos que tiene estructura cuaternaria. La estructura cuaternaria debe considerar: (1) el nmero y la naturaleza de las distintas subunidades o monmeros que integran el oligmero y (2) la forma en que se asocian en el espacio para dar lugar al oligmero. Protenas 8 En protenas con estructura terciaria de tipo fibroso, la estructura cuaternaria resulta de la asociacin de varias hebras para formar una fibra o soga. La miosina o la tropomiosina constan de dos hebras con estructura de hlice enrolladas en una fibra levgira. La -queratina del cabello y el fibringeno de la sangre presentan tres hebras en cada fibra levgira (Figura 17). El colgeno consta de tres hebras helicoidales levgiras que forman una fibra dextrgira (Figura 13). La -queratina (fibrona) de la seda presenta varias hebras con estructura de hoja orientadas de forma antiparalela (Figura 18). Cuando varias protenas con estructura terciaria de tipo globular se asocian para formar una estructura de tipo cuaternario, los monmeros pueden ser exactamente iguales (como en el caso de la fosfoglucoisomerasa o de la hexoquinasa) o muy parecidos (como en el caso de la lactato deshidrogenasa). Tambin puede ocurrir que los monmeros tengan una misma funcin aunque estructuralmente sean distintos (como en el caso de la hemoglobina), o que los monmeros sean estructural y funcionalmente distintos, que una vez asociados forman una unidad funcional. Este es el caso de la aspartato transcarbamilasa, un enzima alostrico donde existen unas subunidades con actividad cataltica y otras con actividad reguladora (Figura 19). Las fuerzas que mantienen unidas las distintas cadenas polipeptdicas son, en lneas generales, las mismas que estabilizan la estructura terciaria. Las ms abundantes son las interacciones dbiles (hidrofbicas, polares, electrostticas y puentes de hidrgeno), aunque en algunos casos, como en las inmunoglobulinas, la estructura cuaternaria se mantiene mediante puentes disulfuro. El ensamblaje de los monmeros se realiza de forma espontnea, lo que indica que el oligmero presenta un mnimo de energa libre con respecto a los monmeros. La estructura cuaternaria modula la actividad biolgica de la protena y la separacin de las subunidades a menudo conduce a la prdida de funcionalidad. ASOCIACIONES SUPRAMOLECULARES En muchos casos, las protenas se agrupan bien entre s, bien con otros grupos de biomolculas para formar estructuras de orden superior y que tienen un carcter permanente. Este nivel de asociacin recibe el nombre de estructura quinaria. As, las protenas y -tubulina forman unos filamentos huecos enormemente largos llamados

microtbulos, cuya funcin es fundamentalmente estructural, ya que forman parte del citoesqueleto de las clulas. La fibrina es otra protena que forma una asociacin supramolecular. Los monmeros de fibrina se unen mediante enlaces covalentes para formar la malla tridimensional caracterstica del trombo o cogulo sanguneo. En otros casos, las protenas se unen a otras biomolculas para formar asociaciones supramoleculares. As, cuando se unen con azcares se forman los proteoglicanos y los peptidoglicanos, cuando se unen con lpidos forman las membranas biolgicas y cuando se unen con cidos nucleicos forman ribosomas, nucleosomas o virus. Protenas 9 PROPIEDADES DE LAS PROTEINAS Desde el punto de vista bioqumico, las propiedades de las protenas son: (1) la posibilidad de precipitacin selectiva (reversible o irreversible) por medio de diversos procedimientos, (2) la capacidad amortiguadora y (3) las propiedades osmticas. 1.- PRECIPITACION SELECTIVA El agua es el disolvente biolgico por excelencia. En disolucin acuosa, los residuos hidrofbicos de las protenas se acumulan en el interior de la estructura, mientras que en la superficie aparecen diversos grupos con carga elctrica, en funcin del pH del medio. En torno a los grupos cargados, los dipolos del agua se orientan conforme a la carga elctrica de cada grupo, de tal manera que la protena presenta una capa de solvatacin formada por el agua de hidratacin, que es el agua retenida por las cargas elctricas de la superficie de las protenas. Los AA polares sin carga tambin se disponen en la superficie, donde interaccionan con el agua mediante puentes de hidrgeno. Cualquier factor que modifique la interaccin de la protena con el disolvente disminuir su estabilidad en disolucin y provocar la precipitacin. As, la desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralizacin de las cargas elctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrgeno facilitar la agregacin intermolecular y provocar la precipitacin. La precipitacin suele ser consecuencia del fenmeno llamado desnaturalizacin. Se llama desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptdica reducida a un polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija (Figura 20). Cuando la protena no ha sufrido ningn cambio en su interaccin con el disolvente, se dice que presenta una estructura nativa. Cualquier alteracin de la estructura nativa que modifique su interaccin con el disolvente y que provoque su precipitacin dar lugar a una estructura desnaturalizada. En una protena cualquiera, la estructura nativa y la desnaturalizada tan slo tienen en comn la estructura primaria, es decir, la secuencia de AA que la componen. Los dems niveles de organizacin estructural desaparecen en la estructura desnaturalizada. La desnaturalizacin provoca diversos efectos en la protena: (1) una drstica disminucin de su solubilidad, ya que los residuos hidrofbicos del interior aparecen en la superficie; (2) cambios en las propiedades hidrodinmicas de la protena: aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusin y (3) prdida de las propiedades biolgicas. Una protena desnaturalizada cuenta nicamente con su estructura primaria. Por este motivo, en muchos casos, la desnaturalizacin es reversible, ya que es la estructura primaria la que contiene la informacin necesaria y suficiente para adoptar niveles superiores de estructuracin. Esta propiedad es de gran utilidad durante los procesos de Protenas 10 aislamiento y purificacin de protenas, ya que no todas la protenas reaccionan de igual forma ante un cambio en el medio donde se encuentra disuelta.

En algunos casos, la desnaturalizacin conduce a la prdida total de la solubilidad, con lo que la protena precipita. La formacin de agregados fuertemente hidrofbicos impide su renaturalizacin, y hacen que el proceso sea irreversible. Los agentes que provocan la desnaturalizacin de una protena se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes fsicos (calor) y qumicos (detergentes, disolventes orgnicos, pH, fuerza inica). Como en algunos casos el fenmeno de la desnaturalizacin es reversible, es posible precipitar protenas de manera selectiva mediante cambios en (1) la polaridad del disolvente, (2) la fuerza inica, (3) el pH o (4) la temperatura. La polaridad del disolvente disminuye cuando se le aaden sustancias menos polares que el agua como el etanol o la acetona. Con ello disminuye el grado de hidratacin de los grupos inicos superficiales de la molcula proteica, provocando la agregacin y precipitacin. Los disolventes orgnicos interaccionan con el interior hidrofbico de las protenas y desorganizan la estructura terciaria, provocando su desnaturalizacin y precipitacin. La accin de los detergentes es similar a la de los disolventes orgnicos. Un aumento de la fuerza inica del medio (por adicin de sulfato amnico, urea o hidrocloruro de guanidinio, por ejemplo) tambin provoca una disminucin en el grado de hidratacin de los grupos inicos superficiales de la protena, ya que estos solutos (1) compiten por el agua y (2) rompen los puentes de hidrgeno o las interacciones electrostticas, de forma que las molculas proteicas se agregan y precipitan. En muchos casos, la precipitacin provocada por el aumento de la fuerza inica es reversible. Mediante una simple dilisis se puede eliminar el exceso de soluto y recuperar tanto la estructura como la funcin original. A veces es una disminucin en la fuerza inica la que provoca la precipitacin. As, las protenas que se disuelven en medios salinos pueden desnaturalizarse al dializarlas frente a agua destilada, y se renaturalizan cuando se restaura la fuerza inica original. Los iones H+ y OH- del agua provocan efectos parecidos, pero adems de afectar a la envoltura acuosa de las protenas tambin afectan a la carga elctrica de los grupos cidos y bsicos de las cadenas laterales de los aminocidos. Esta alteracin de la carga superficial de las protenas elimina las interacciones electrostticas que estabilizan la estructura terciaria y a menudo provoca su precipitacin. La solubilidad de una protena es mnima en su punto isoelctrico, ya que su carga neta es cero y desaparece cualquier fuerza de repulsin electrosttica que pudiera dificultar la formacin de agregados. Cuando la temperatura es elevada aumenta la energa cintica de las molculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las protenas, y se desnaturalizan. Asmismo, un aumento de la temperatura destruye las interacciones dbiles y desorganiza Protenas 11 la estructura de la protena, de forma que el interior hidrofbico interacciona con el medio acuoso y se produce la agregacin y precipitacin de la protena desnaturalizada. 2.- CAPACIDAD AMORTIGUADORA Esta propiedad se debe a la existencia de (1) los grupos ionizables de las cadenas laterales de los aminocidos Asp, Glu, Lys, Arg, His, Tyr, Cys; y (2) a la existencia de los grupos COOH y NH2 terminales. Por este motivo, las protenas poseen un considerable poder amortiguador en una amplia zona de pH. Aunque cada AA tiene unos grupos ionizables con unas constantes de ionizacin (pKa) caractersticas, el valor de dichas constantes puede verse ligeramente modificado por el entorno proteico. El grupo imidazol del AA histidina es el principal responsable del poder amortiguador de las protenas a pH fisiolgico, ya que su pKa est prximo a 7. Cuando el pH es bajo, los grupos ionizables estn protonados, y la carga neta de la protena es de signo positivo. Cuando el pH es alto, los grupos ionizables estn

desprotonados, y la carga neta es de signo negativo. Entre ambas zonas, habr un pH en el cual la carga neta de la protena es nula. Es el pH isoelctrico o punto isoelctrico, y es caracterstico de cada protena. A valores de pH por debajo del pH isoelctrico la carga neta de la protena es positiva, y a valores de pH por encima del pH isoelctrico, la carga neta de la protena es negativa. La mayora de las protenas intracelulares tienen carga negativa, ya que su pH isoelctrico es menor que el pH fisiolgico (que est proximo a 7). Se llaman protenas cidas a aquellas que tienen un punto isoelctrico bajo (como la pepsina), y protenas bsicas a las que tienen un punto isoelctrico alto (como las histonas). 3.- PROPIEDADES OSMOTICAS Como todo soluto molecular o inico, las protenas ejercen un efecto osmtico cuando existen barreras que limitan su libre difusin. Si tenemos dos compartimentos acuosos separados por una membrana semipermeable y uno de estos compartimentos contiene protenas, stas tienden a captar agua del compartimento vecino. Este efecto osmtico es proporcional al nmero de partculas dispersas. El valor de la presin osmtica se puede calcular mediante la frmula de Van't Hoff ( = mRT). En el caso de las protenas, el efecto osmtico se ve amplificado por otros dos factores. Por un lado, el agua de hidratacin que forma la envoltura acuosa de las protenas contribuye a la presin osmtica. Por otro lado, las protenas se comportan como polianiones, cuyas cargas estn neutralizadas por iones Cl-, Na+ o K+. Las membranas biolgicas son algo permeables a estos iones, con lo cual su concentracin a ambos lados de la membrana se equilibra. Sin embargo, la existencia de protenas en slo uno de los compartimentos provoca la retencin permanente de iones difusibles en ese lado de la membrana (efecto Donnan), lo que incrementa el efecto osmtico (Figura 21). Protenas 12 Se denomina presin coloidosmtica o presin onctica al efecto osmtico conjunto de las protenas y que es el resultado de: (1) la presin osmtica (que slo depende del nmero de partculas), (2) la presin provocada por el agua de hidratacin, y (3) la presin provocada por el exceso de iones debido al efecto Donnan. La mayor parte del agua en el sistema circulatorio est retenida por el efecto osmtico de las protenas del plasma. Cuando por cualquier circunstancia patolgica disminuye la concentracin de protenas en el plasma, el agua puede fluir libremente hacia los tejidos, provocando un edema.}

Tema 3. Protenas: composicin y estructura

Bioqumica Estructural y Metablica

Jess Navas

Mndez

Gen ancestral Especiacin Genes ortlogos