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PRCTICA 13
COLORACIN DE LOS TEJIDOS
OBJETIVO.
Obtener las preparaciones de tejidos coloreadas para ser observadas al M/O.
MATERIAL:
PROCEDIMIENTO:
1. Desparafinar y rehidratar las preparaciones:
a. 3 baos de Isoparafina .5 min
b. Alcohol de 1003 min
c. Alcohol de 96 3 min
d. Alcohol de 80 3 min
e. Alcohol de 70 3 min
f. Agua destilada 3- 5 min
2. Coloracin.
Seguir los protocolos de cada tincin
3. Deshidratar.
o Alcohol 70 ................................................. 3 min.
o Alcohol 80 ................................................. 3 min.
o Alcohol 96 ................................................. 3 min.
o Alcohol 100 ............................................... 3 min.
Aclarar.
o Isoparafina ................................................... 5 min.
o Isoparafina ................................................... 5 min.
o Isoparafina ................................................... 5 min.
4. Montaje.
Una vez terminado Recoger todo y mantener limpio
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1 LACAS DE HEMATOXILINA:
La hematoxilina es un colorante natural que se extrae de un rbol hematoxylon
campechianum (palo de Campeche o palo azul de Centroamrica).
Para que la hematoxilina pueda ser empleada como colorante en histotecnologa,
ha de ser oxidada previamente a hematena. Puede ser provocado espontneamente en
contacto con el oxgeno atmosfrico o ser inducido de forma artificial con el uso de
agentes oxidantes qumicos. Lo que se conoce como maduracin de la hematoxilina.
Como regla general para la preparacin de las lacas de hematoxilina, se debe
tener en cuenta que todos los componentes de la frmula han de agregarse en el
orden establecido y deben estar totalmente disueltos antes de aadir el siguiente.
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Procedimiento tcnico:
Preparacin de la solucin de hematoxilina de Mayer:
Hematoxilina..1 g
Agua destilada1000 ml
Disolver la hematoxilina en el agua destilada.
Aadir:
Yodato sdico..0,2 g
Aadir y disolver mediante un agitador magntico (no calentar):
Alumbre potsico o amnico50 g
cido ctrico1 g
Hidrato de cloral50 g
Filtrar.
Observaciones:
El color final de la solucin es rojo violceo.
Almacenar en frasco bien cerrado.
Tiempo medio de tincin alrededor de 10 minutos (coloracin progresiva).
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El tiempo de tincin con la solucin de trabajo de Weigert es de 10 minutos.
Si la coloracin se prolonga durante ms de 30 minutos siempre ocurre tincin
excesiva que impide visualizar a distribucin de la cromatina. Los ncleos se
colorean con una fuerte tonalidad negroazulada.
2 CARMN.
Colorante natural de color rojo prpura que se extrae de cochinillas hembras
machacadas y secas por calor.
Para la coloracin nuclear el carmn se utiliza en forma da carmalumbre que tie
aproximadamente las mismas estructuras que las lacas de hematena.
3 FUCSINAS.
Son derivadas del triaminofenilmetano.
Se usan poco como colorantes nucleares, pero son muy empleadas para teir
materiales extracelulares en los mtodos de coloracin tricrmica del tejido conjuntivo
y en algunas tcnicas histoqumicas par glucoprotenas (mtodo del cido peridico de
Schiff) y ADN (mtodo de Feulgen) as como para determinadas cpsulas bacterianas
(tcnica de Ziehl_Neelsen para bacilos cido-alcohol resistentes)
Las bases simples de las que se derivan los distintos tipos de fucsina son incoloras y
reciben el nombre de rosanilinas.
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4 SAFRANINA.
La safranina es una sustancia de carcter bsico derivada de las azinas que
constituye un excelente colorante de la cromatina a la que tie de color rojo brillante,
por tanto, es de eleccin en la coloracin especfica de los cromosomas. El agente de
eleccin para este caso son los lquidos que contienen cromo o tetrxido de osmio.
5 EOSINA.
Colorantes citoplasmticos: la eosina Y contiene 4 grupos de bromo y la eosina
B dos tomos de bromo.
Se emplean en solucin acuosa y alcohlica, aunque son ms solubles en agua, pero
la adicin de etanol a las disoluciones de trabajo retarda el proceso de diferenciacin del
colorantes y lo hace, por tanto, menos dificultosos.
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La adicin de 0,5 ml de cido actico glacial a cada 100 ml de solucin refuerza
la tonalidad roja del tejido a colorear.
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Hematoxilina-Eosina.
PROCEDIMIENTO.
1. Isoparafina.............................................................5 min.
2. Isoparafina.............................................................5 min.
3. Isoparafina.............................................................5 min.
4. Alcohol 100 .........................................................3 min.
5. Alcohol 96 ...........................................................3 min.
6. Alcohol 80 ...........................................................3 min.
7. Alcohol 70 ...........................................................3 min.
8. Agua (d) ................................................................3-5 min.
9. Hematoxilina de Harris (comercial o prepararla).. 1 min.
10.Agua corriente .......................................................2 min.
11.Alcohol cido 1%.................................................1 min.
12.Agua corriente .......................................................5min.
13.Eosina alcohlica ..................................................unos segundos
14.Alcohol 70 ...........................................................unos segundos
15.Alcohol 70 ...........................................................3 min.
16.Alcohol 80 ...........................................................3 min.
17.Alcohol 96 ...........................................................3 min.
18.Alcohol 100 .........................................................3 min.
19.Isoparafina.............................................................5 min.
20.Isoparafina.............................................................5 min.
21.Isoparafina.............................................................5 min.
RESULTADOS.
Ncleos teidos de color azul-violceo oscuro.
Citoplasma teido de color rojo-rosceo.
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Tincin de PAS.
PROCEDIMIENTO:
1. Isoparafina.............................................................5 min.
2. Isoparafina.............................................................5 min.
3. Isoparafina.............................................................5 min.
4. Alcohol 100 .........................................................3 min.
5. Alcohol 96 ...........................................................3 min.
6. Alcohol 80 ...........................................................3 min.
7. Agua destilada .......................................................3-5 min.
8. cido Peridico 0,5% ...........................................5-10 min.
9. Lavado en agua destilada ......................................Lavar.
10.Reactivo de Schiff .................................................15-30 min.
11.3x Bao Sulfuroso.................................................2 min.
12.Agua corriente .......................................................5 min.
13.Hematoxilina de Harris .........................................30-60 seg.
14.Agua corriente .......................................................5 min.
15.Alcohol 80 ...........................................................3 min.
16.Alcohol 96 ...........................................................3 min.
17.Alcohol 100 .........................................................3 min.
18.Isoparafina.............................................................5 min.
19.Isoparafina.............................................................5 min.
5.2.1 RESULTADOS.
Ncleos teidos de color azul.
Sustancias PAS+ teidas de color magenta o rojo oscuro (fucsina).
5.2.2 Compuestos PAS+.
Polisacridos simples.
Mucopolisacridos neutros.
Mucoprotenas.
Glucoprotenas de suero, membrana basal y fibras de reticulina.
Glucolpidos como ganglisidos y cerebrsidos.
Algunos pigmentos como el pigmento ceroide y ciertas lipofucsinas
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Tincin de la Orcena.
Es un mtodo empleado para la coloracin de las fibras elsticas del tejido
conjuntivo. Este mtodo utiliza un colorante natural, la orcena, que se fija, aunque sin
especificidad absoluta sobre las fibras elsticas. La ventaja de este mtodo es su
simplicidad y rapidez.
Colorante especfico: Sol. Alcohlica de Orcena.
Colorante citoplasmtico: Picrocarmn de ndigo.
RESULTADOS.
Fibras y membranas elsticas: color pardo negruzco.
Citoplasma y otras estructuras: verde amarillento.
2. Lquido de dilucin.
Amoniaco ...................................................................................... 2vol
Alcohol metlico absoluto.............................................................. 3vol
3. Lquido de diferenciacin.
Alcohol metlico absoluto.............................................................. 20ml
Alcohol etlico absoluto ................................................................. 40ml
Agua destilada
50ml
6. Procedimiento.
1. Desparafinar, colodionar e hidratar.
2. Colorear con hematoxilina de Weighert 15 minutos hemalumbre 3 min.
3. Lavar con agua destilada.
4. Carmn de Best 20 a 30 min.
5. Lavar en solucin 3 hasta que salga todo el rojo.
6. Deshidratar con alcohol absoluto (prolongado).
7. Aclarar y montar.
De esta manera obtendremos un ncleo teido de color azul/negro y el glucgeno de
color rojo.
Mavi Agudo Escudero
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