Resultados e Tratamento de resultados I. Perfil da cultura de S.

cerevisae

1. Crescimento da cultura O estudo do crescimento da cultura de S. cerevisae foi feito por turbidimetria ao longo de 24 horas de incubao

0.8 ln (Absorvncia) 0.6 0.4 0.2 0 -0.2 0

Curva de crescimento da S. cerevisae

200

400

600

800 Tempo (min.)

1000

1200

1400

1600

A curva de crescimento de uma cultura de microrganismos divide-se em quatro fases: fase lag, fase onde no h variao significativa de populao microbiana no inculo, fase log, onde as clulas esto totalmente adaptadas ao meio e h um crescimento exponencial de microrganismos, fase estacionria, nesta fase no h variao do nmero de clulas, o nmero de clulas que se dividem equivalente ao nmero de clulas que morrem e, por ltimo, a fase de declnio, onde o nmero de clulas comea a decrescer acentuadamente. Por turbidimetria medida a absorvncia (a 600nm) que varia ao longo do tempo proporcionalmente concentrao de clulas existentes (lei de Lambert Beer).
0.7 0.6 0.5 Absorvncia 0.4 0.3 0.2 0.1 0 -0.1 0 100 200 300 Tempo (s) 400 500 600 y = 0.0014x - 0.1067 R = 0.9992

Fase log da curva de crescimento

Pela seguinte recta possvel saber a taxa especfica de crescimento do microrganismo () que de 0,0014 s-1, o nmero de geraes (n) durante o perodo de tempo da fase log (420 s) foi de 0,8483 e o tempo de gerao de 495,105 s.

2. Quantificao de glucose A quantificao da glucose necessria para estudar se h ou no consumo de substrato na cultura ao longo do tempo. Construiu-se uma curva de calibrao, a comprimento de onde de 540nm, com a qual se calculou a concentrao de cada uma das amostras.

Por interpolao grfica obteve-se as seguintes concentraes de glucose por anlise da soluo incubada ao longo de 24 horas. Tempo (min.) 0 30 60 120 210 360 480 1440 Absorvncia (540nm) 0,234 0,221 0,182 0,152 0,122 0,075 0,051 0,034 [glucoseamostra] / mg L-1 1085 890 740 590 355 235 150

A partir do quadro seguinte contruiu-se uma curva de consumo de glucose correspondete fase log de crescimento.

Para uma melhor percepo do que ocorre ao longo da fase log de crescimento concentrao de glucose construiu-se o grfico 6 para comparao dessas duas curvas

Determinao de biomassa (por peso seco

Foram pesados cinco micro tubos com o sedimento da centrifugao de 1,5 mL de cultura com 3,5 h de incubao, para determinar o peso seco de biomassa produzida durante esse tempo. Micro tubos 81 82 83 84 85 Mdia Peso da amostra (g) 0,0019 0,0016 0,0011 0,0018 0,0009 0,00146

II.

Actividade enzimtica

Malato desidrogenase A malato desidrogenase participa no ciclo do cido ctrico e catalisa a reaco oxaloacetato malato acoplada oxidao de NADH a NAD+ . Para estudar esta enzima leu-se, a 340 nm, a quantidade de NADH existente na suspenso. .

Pelas curvas de reaco da malato desidrogenase foi possvel calcular a sua actividade enzimtica (E/U L-1).

Tempo (h) 0 0,5 2 3

A/t (s-1) 0,0012 0,0010 0,0008 0,0007

A/t (min.-1) 0,072 0,060 0,048 0,042

E /U L-1 115,76 96,46 77,17 67,52

Utilizao de substrato - Glucose Construiu-se uma curva de calibrao com padres de glucose para a determinao da concentrao das solues amostra.

Por interpolao grfica obteve-se as seguintes concentraes de glucose:

Tempo (h) 0 0,5 2 3

[Glucose]/ mg L 11,8 114,47 11,63 17,97

-1

Biomassa Pesaram-se quatro micro tubos com o sedimento da centrifugao de 1,5 mL de cultura das suspenses de 0h e 3h de incubao, dois micro tubos para cada para determinar a diferena de biomassa produzida para se calcular o rendimento o rendimento celular.

Tempo (h) 0 3

Micro tubos 25 26 27 28

Amostra (g) 0,0046 0,0032 0,0072 0,0072

Mdia (da massa das amostras (g)) 0,0039 0,0072

[biomassa]/ g L

-1

2,6 4,8

Clculo do rendimento celular: y x/s =(Xf-Xi)/(Si-Sf), onde y x/s=0,0228 gx/gs.