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MEMBRANAS BIOLOGICAS
MEMBRANAS BIOLOGICAS
MEMBRANAS BIOLOGICAS
MEMBRANAS BIOLOGICAS
MEMBRANAS BIOLOGICAS
Bacterias Gram negativas
MEMBRANAS BIOLOGICAS
MEMBRANAS BIOLOGICAS
MEMBRANAS BIOLOGICAS
MEMBRANAS BIOLOGICAS
fosfolpidos
ceramida
colesterol
MEMBRANAS BIOLOGICAS
ganglisidos
MEMBRANAS BIOLOGICAS
MEMBRANAS BIOLOGICAS
-Propiedades dinmicas
-difusion lateral - formas de medirla
MEMBRANAS:
Letra mayscula para determinar el tipo de red:
TIPOS DE FASES
Subndices
Nomenclatura
I: topologa L = lamelar
normal ( aceite en agua)
MEMBRANAS:
Fase cristalina: orden a largo y corto alcance
en tres dimensiones
TIPOS DE FASES
en conformacin lquida, expansin del rea interfacial por molcula ( aprox 15-30%) y rpida difusin lateral de las molculas (D trans 10-11 m2 sec-1).
MEMBRANAS:
TIPOS DE FASES
MEMBRANAS:
3 Tipos principales
TRANSICIONES DE FASES
MEMBRANAS:
TRANSICIONES DE FASES
Variables termodinmicas intensivas que pueden inducir cambios de fase: temperatura y presin Condiciones biolgicas: temperatura y presin constantes Otros factores que pueden inducir cambios de fase: cambios en la hidratacin cambios en el pH cambios en la concentracin de sales campos elctricos composicin qumica
MEMBRANAS:
TRANSICIONES DE FASES
Efecto de la estructura qumica: Cadena hidrocarbonada La temperatura de transicin Tt aumenta monotnicamente con el aumento en la longitud
El incremento para las diacil.fosfoetanolaminas es:
de la cadena debido a que las entalpas y entropas de la transicin Ht St aumentan con cada grupo CH2 adicional.
Uniones de tipo eter entre la cadena y la cabeza polar aumentan la temperatura de transicin
entre 1-5 0 C , inducen la formacin de fases gel interdigitadas
MEMBRANAS:
Cabezas polares
Son importantes:
TRANSICIONES DE FASES
la polaridad la carga electrosttica el volmen de la cabeza polar las interacciones entre cabezas Ej. fosfatidiletanolaminas pueden formar puentes de hidrgeno entre ellas, lo que aumenta la temperatura de transicin
Efectos del soluto Los iones presentes en la solucin interaccionan con los lpidos cargados reduciendo
las repulsiones electrostticas El efecto del pH es complejo: el pK de los grupos ionizables en la superficie puede diferir hasta en 3 unidades de pH con respecto al pK de los grupos en solucin el cambio en la ionizacin de los grupos afecta tanto a las interacciones electrostticas como al estado de hidratacin la formacin de puentes de hidrgeno entre las cabezas tambin es sensible al pH
MEMBRANAS:
TRANSICIONES DE FASES
Efecto del colesterol: Difumina la transicin gel-fluido: fluidiza la fase gel y ordena la fase fluida Solventes no polares Se distribuyen preferentemente en el interior hidrofbico Facilitan la formacin de fases invertidas
Ej.: alcanos, gases inertes, compuestos aromticos, anestsicos, algunos pptidos
MEMBRANAS:
TRANSICIONES DE FASES
MEMBRANAS:
TRANSICIONES DE FASES
MEMBRANAS:
DIAGRAMAS DE FASES
MEMBRANAS
Importancia biolgica de los dominios: La presencia de dominios: contraresta la cooperatividad de los lpidos y permite
acomodar asimetras y zonas especializadas
fracciones de membrana resistentes a la extraccin con detergentes y enriquecidas en colesterol y esfingomielina. Tamao alrededor de 50 nm. Enriquecidos en algunos tipos de protenas (caveolina, por ejemplo)
interacciones entre protenas interacciones de las protenas de membrana con protenas del citoesqueleto composicin lipdica de la membrana ....
MEMBRANAS:
y muy complejos
COEXISTENCIA DE FASES
MEMBRANAS:
COEXISTENCIA DE FASES
Formas de estudiar y/o visualizar los dominios lpdicos: Calorimetra: permite medir cantidades termodinmicas Mtodos espectroscpicos: fluorescencia, resonancia magntica nuclear,
resonancia de spin electrnico
MEMBRANAS:
COEXISTENCIA DE FASES
Microscopa de fluorescencia
MEMBRANAS:
Microscopa electrnica
COEXISTENCIA DE FASES
MEMBRANAS:
COEXISTENCIA DE FASES
1.- Movimientos conformacionales de las cadenas 2.- Difusin rotacional de las molculas de lpidos 3.- Difusin lateral 4.- Movimiento de las cabezas 5.-Vibraciones fuera del plano del centro de masa de los lpidos 6.- Ondulaciones colectivas de la bicapa
TIEMPO
Se pueden estudiar por mtodos espectroscpicos: resonancia magntica nuclear ( 10-5 s 10 4 s) resonancia de spin electrnico ( 10-8 s 10 7s) fluorescencia ( 10 9 s )
Vibraciones fuera del plano del centro de masa de los lpidos Ondulaciones colectivas de la bicapa ESPACIO micras
TIEMPO
segundos
protenas
Procesos de agregacin de protenas Procesos de sealizacin Procesos que dependen de la interaccin entre protenas de membrana
Difusin en medios no homogneos Se puede estudiar en 2 tipos de sistemas: Membranas con lpidos y protenas Membranas con distintos lpidos segregados en fases Aparece una nueva variable: la conectividad lateral entre las fases
Se marca una protena o un lpido con partculas de oro coloidal y se sigue su movimiento con un microscopio ptico. Tamao de las partculas de oro: 40 nm El movimiento se sigue durante 2-10 segundos registrando la posicin cada 100 microsegundos - 1 segundo
http://www.biophysics.org/btol/
BTOL VOLUMES Bioenergetics Channels, Receptors & Transporters Computational Biology & Theory Electrophysiology Intermolecular Forces Membranes Muscle & Cell Contractility Nucleic Acids Proteins Supramolecular Assemblies NMR Separations & Hydrodynamics Sequence Analysis Single Molecule Techniques Spectroscopy Thermodynamics Becoming a Biophysicist Teaching Biophysics - BJ articles BJ Supplements/Computer Programs
http://www.ldb.chemistry.ohio-state.edu/
LIPIDAT Lipid Phases and Phase Transitions Database LIPIDAG Lipid Miscibility/Phase Diagram Database Lipid Molecular Structures Database LMSD Other sites An extensive listing of related websites and databases Miscellaneous CMC Database, Crystallization Screens Database,
SISTEMAS MODELO
Sistemas modelo para el estudio de membranas biolgicas:
Permiten estudiar interacciones lpido-lpido, interacciones lpido-protena, formacin de dominios, ...)
LIPOSOMAS
LIPOSOMAS
Preparacin de proteoliposomas
MONOCAPAS
Que son ? Como se caracterizan? Para que se usan?
MONOCAPAS
Permiten organizar molculas individuales en estructuras ordenadas Se empezaron a estudiar sistemticamente hace 70 aos
"Today...1 propose to tell you of a real twodimensional world in which phenomena occur that are analogous to those described in 'Flatland.' I plan to tell you about the behavior o molecules and atoms that are held at the surface of solids and liquids." - l. Langmuir, Science 1936,84,379.
En los ltimos aos 15 se ha reactivado el inters en ellas: Como sistemas modelo de superficies biolgicas Para preparacin de pelculas orgnicas de inters en electrnica molecular Es un rea de trabajo muy interdisciplinar
MONOCAPAS
Balanza de Langmuir
MONOCAPAS
1= presin lateral ( N/m) Es una variable termodinmica que refleja el cambio en la energa libre de la superficie cuando se aumenta el rea ( julios m-2) Para medir la presin lateral de una monocapa En la interfase agua- aire se utiliza siempre como referencia la energa superficial del agua: 0 = 73 mJ m-2 = 0 - 1
MONOCAPAS
Diagrama de fases
MONOCAPAS
MONOCAPAS
Formas de caracterizarlas:
Termodinmicamente: Hay que asumir que el sistema est en equilibrio.....( que no hay evaporacin, que la solubilidad de los lpidos en la subfase es despreciable....) Mediante las isotermas presin/rea Compresibilidad isotrmica Expansividad trmica
MONOCAPAS
Microscopa de fluorescencia Elipsometra Microscopa de ngulo de Brewster Dispersin de luz Difraccin de rayos X Espectroscopa de infrarojo
MONOCAPAS
Caracterizacin estructural Microscopa de fluorescencia
La enzima ataca fundamentalmente las zonas entre dominios Se forman dominios de protena Recompresin induce nuevamente la formacin de dominios slidos
BICAPAS ANCLADAS
Permiten utilizar distintas tcnicas para su:
caracterizacin estructural, caracterizacin de propiedades mecnicas seguir procesos dinmicos estudiar interacciones
Desarrollo de biosensores
la interfaz entre los sistemas biolgicos y los sistemas de deteccin electrnicos u optoelectrnicos requiere de inmovilizacin protenas, membranas, protenas de membrana, DNA o incluso clulas completas
BICAPAS ANCLADAS
Son de especial inters las que permiten caracterizar la superficie sumergida en solucin
Microscopa de fluorescencia de molculas individuales Microscopas de campo cercano estudios estructurales propiedades mecnicas protenas Microbalanza de cuarzo y resonancia de plasmn superficial cuantificacin de interacciones entre ligandos solubles y ligandos anclados a una superficie Tcnicas electroqumicas
BICAPAS ANCLADAS
Preparacin de bicapas ancladas: Transferencia de monocapas a un sustrato slido Fusin de vesculas sobre un sustrato Fusin de vesculas sobre un sustrato recubierto de un polmero espaciador
BICAPAS ANCLADAS
Pelculas de Langmuir- Blodgett
BICAPAS ANCLADAS
Incorporacin de bicapas lipdicas sobre superficies slidas
E.Sackmann and M.Tanaka; Supported membranes on soft polymer cushions: fabrication, characterization and applications. Trends in Biotechnology, 2000, 18, 58-64 J.Wong; J.Majewski; M.Seitz; C.Park; J.Israelachvili; G.Smith, Polymer-cushioned bilayers. I. A structural study of various preparation methods using neutron reflectometry. Biophys.J. 1999, 77, 1445-1447.
BICAPAS ANCLADAS
Incorporacin de bicapas lipdicas con patrones laterales
Steven Boxer Molecular transport and organization in supported lipid membranes Current Opinion in Chemical Biology, 2000, 4: 704-709
SURFACTANTE PULMONAR
Monocapa que recubre los alveolos pulmonares Es una mezcla de lpidos y protenas que reduce la tensin en la interfase aire-alveolo Previene el colapso de los alveolos Su ausencia o disfuncin provoca disfuncin respiratoria
SURFACTANTE PULMONAR
SURFACTANTE PULMONAR
PROPIEDADES MECNICAS
Una superficie blanda se dobla Dos mdulos elasto-mecnicos:
stretching Shearing(nulo si la superficie es fluida) bending
bending modulus k
Energa por unidad de rea para producir una curvatura H Energa por unidad de rea para deformar DA Relacin entre mdulos siendo dL el espesor de la superficie
PROPIEDADES MECNICAS
Longitud de persistencia: escala espacial en la que la superficie es plana
k
Se puede medir observando fluctuaciones
PROPIEDADES MECNICAS
Energa total en equilibrio en funcion de parmetros geomtricos ( A y V) parmetros del material, radio preferente R0 y diferencial de rea DA
PROPIEDADES MECNICAS
PROPIEDADES MECNICAS
Forma de los eritrocitos depende de la composicin lipdica, presin osmtica, pH, nivel de ATP, ) Forma depende del citoesqueleto y la membrana Prediccin de la forma posible considerando tambin las propiedades elsticas del citoesqueleto