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Faculdade Novaunesc Curso de Bacharelado em Enfermagem Disciplina: Microbiolgia Professor: Dr. Diego Sousa Campelo

Jos de Arimatea Maciel dos Anjos.

RELATORIOS DE PRTICAS DO LABORATRIO DE MICROBIOLGIA SOBRE OS TEMAS: COLORAO DE GRAM SEMEIO E MEIOS DE CULTURA.

Teresina PI 2013 Colorao de Gram

Introduo:

A colorao de Gram um mtodo de colorao de bactrias desenvolvido pelo mdico dinamarqus Hans Christian Joachim Gram, e que consiste no tratamento sucessivo de um esfregao bacteriano, fixado pelo calor, com o reagente cristal violeta, lugol, lcool-acetona e fucsina bsica. Essa tcnica permite a separao de amostras bacterianas em Gram-positivas e Gram-negativas e a determinao da morfologia e do tamanho das amostras analisadas. A colorao de Gram um dos mais importantes mtodos de colorao utilizados em laboratrios de microbiologia e de anlises clnicas, sendo quase sempre o primeiro passo para a caracterizao de amostras de bactrias. A tcnica tem importncia clnica uma vez que muitas das bactrias associadas a infeces so prontamente observadas e caracterizadas como Gram-positivas ou Gram-negativas em esfregaos de pus ou de fluidos orgnicos. Essa informao permite ao clnico monitorar a infeco at que dados de cultura estejam disponveis. possvel a anlise de vrios esfregaos por lmina, o que facilita a comparao de espcimes clnicos. As lminas podem ser montadas de forma permanente e preservadas como documentao para estudos relacionados.. Objetivo Confeccionar uma lmina e utilizar a tcnica de gram para o estudo e visualizao da morfologia das bactrias ao microscpio ptico durante as aulas prticas no laboratrio de Microbiologia a serem vista pelo os dicentes no decorrer das aulas prticas. Materiais 1. Lamina; 2. Soluo salina; 3. Ala bacteriolgica; 4. Bico de Bunsen; 5. Colnia de bactrias; 6. Cristal Violeta, Lugol, lcool-acetona, Fucsina;

7. Papel filtro; 8. Microscpico. Mtodos 1. Sobre a lmina de vidro, colocou-se uma gota de soluo salina. Com a ala bacteriolgica tocar levemente na superfcie da colnia e emulsionar o material na gota de soluo salina (caso o microrganismo seja fornecido em soluo, colocar uma gota na lmina). Deixar secar. 2. Passou-se o esfregao na chama do bico de Bunsen trs vezes a fim de fixar o material. 3. Posteriormente cobriu-se o esfregao seco com violeta de genciana (cristal violeta) e deixar por um minuto. 4. Lavou-se com gua corrente. 5. Esgotou-se a lmina, e a cobriu com soluo de lugol e deixar por um minuto. 6. Esgota-se a lmina e, mantendo a mesma inclinada, pingou-se gotas de lcool-acetona at que no se desprenda mais corante da preparao. 7. Lavou-se com gua corrente. 8. Cobriu-se a lmina com soluo de fucsina e deixar por trinta segundos. 9. Lavou-se a lmina e a cobriu com papel filtro para a secagem da lmina. 10. Em seguida examinou-se ao microscpio com a objetiva de imerso. Resultados: Gram (+) coram de roxo, gram (-) coram de rosa.

Concluso:

O mtodo da colorao de Gram baseado na capacidade das paredes celulares de bactrias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com lcool-acetona enquanto que as paredes celulares de bactrias Gram-negativas no o fazem. Resumindo, as bactrias Gram positivas coram-se de roxo e as Gram negativas coram-se de vermelho. Esta tcnica de colorao permite ento a distino entre bactrias com parede celular mais ou menos rica em peptidoglicanos. De referir que embora uma bactria Gram negativa nunca possa corar positivamente pelo Gram, uma bactria estruturalmente Gram positiva pode corar negativamente se a sua parede de peptidoglicano for destruda ou danificada (ex. envelhecimento celular ou aco de lisozimas).

Preparao de Meio de Cultura gar Simples

Objetivo: A prtica ter como objetivo a preparao do meio de cultura, para futuras anlises de microrganismos presentes em amostra de gua e/ou alimentos. Os microrganismos se desenvolvem na superfcie dos meios slidos formando colnias. Tambm tm emprego na conservao de cultivos por um tempo mais ou menos longo, pois o acesso lento aos elementos nutritivos limita a reproduo. A funo do gar simples, deixar o meio de cultura slido para isolamento e separao de culturas.J que o desenvolvimento de microganismo em meios de cultura est relacionado a fatores muito importante como: Disponibilidade de nutrientes apropriados; Necessidade ou no de oxigenao (AERAO), Necessidade de um certo grau de temperatura adquada; Mturao do PH apropriado; Incubao e temperatura adquada; Utilizao de tcnicas asspticas para evitar contaminao do meio quando,Os meios de cultura,por definio destinam se ao cutivo artifical dos microganismo, e podem de uma maneira geral ser classificada de acordo com suas caracteristicas e apresentao.

Metodologia

De incio, fez-se o clculo da quantidade para pesagem do meio gar.

39g __________ 1000ml x __________ 150ml

39 * 150 x = ____________ 1000

x = 5,85g Com o auxlio da balana analtica, pesou-se 5,85g de gar simples. Utilizando um becker, colocou-se essa quantidade juntamente com 150ml de gua destilada. O becker com a soluo foi levado at o agitador para total homogeneizao, utilizando a barra magntica, mais conhecida como peixinho.Em seguida, fez-se a transferncia da soluo para um erlenmeyer, que logo em seguida, foi devidamente isolado com papel alumnio.Feita a identificao com etiqueta, colocou-se o erlenmeyer na autoclve para esterilizao mido, que geralmente feita por 15 minutos uma temperatura de 121C. Esse procedimento feito para garantir a ausncia de outros microrganismos no meio, exceto os desejveis.Neste casso o uso de autoclve o meio correto para destruio de outros microorganismoe de todos os poros a autoclve. Desenvolvimento da prtica:

Para o desenvolvimento da prtica foram utilizados maeriais dentro do laborotrio como: Placa com gar Simples Placa de gar sangue Tubos de caldo simples Swabas estrieis Bico de busen lcool iodado e algodo Estantes de arame

Execuo: N a execuo importante indentificar placas de gar simples, deixando- a exposta ao ar por 30 minuto Fechar a placa e incubar temperatura de 35C por 24 horas. Aps foi utilizadas manobras asspticas, coletar a especime de vrios locais do corpo, como ouvido, garganta, nariz, e pele ambienta, utilizando o swab esteril que foi fornecido pelo instrutor. Em seguida fazemos o esgotamento do material coletado na extremidade do meio de cultura que foi flanboiado pela ala de platina e foi esperado o seu esfriamento depois dmos prosegimento com o repique por esgotamento por todas a superfcie de meio slodo. Aps o semeio que na prtica seguinte foi observado o crescimento das colnias crescidas isoladamente aps ter passada por uma temperatura de 35C. Concluso:

. Noentanto existem bactrias que no exigem aerobiase total e o caso dos Estreptococos e Gonococos.Isso facilmente obtido, utilizando-se o mtodo de vala, que consiste em se levar as placas incubao em uma jarra ou recpiente fechado, dentro do qual se acende uma vela para provocar o consumo de oxignio com consequnte a do gs aumento da concentrao do gs carbonico.

Concluo ento, que os meios de cultura so uma associao equilibrada de agentes qumicos e fsicoso que permitem o cultivo de microrganismos fora de seu habitat natural.E que a principal condio de incubao a temperatura em que o microorganismo se que no exigem desenvolve, levando em considerao o tipo de bactria suspeita, assim como o material clinico utilizado