Les Bases de la Chromatographie en phase Gazeuse

X. Fernandez Laboratoire de Chimie des Molcules Bioactives et des Armes, UMR 6001 Universit de Nice Sophia Antipolis / CNRS, Parc Valrose, 06108 Nice cedex 2 Xavier.Fernandez@unice.fr

HISTORIQUE
1952 : Naissance officielle de la Chromatographie gaz-liquide (Martin et James) : analyse directe dacides gras libres 1957 : Invention des colonnes capillaires (Golay) 1958 : Invention du Dtecteur Ionisation de Flamme (FID) 1960 : Invention du Dtecteur Capture dElectron (ECD) 1975 : Emploi trs limit de la GC, rserve lanalyse de mlanges complexes de composs peu polaires (coupes ptrolires, HE)

Historique

DEFINITION

P. Arpino, A. Prevot, J. Serpiner, J. Tranchant, A. Vergnol, P. Witier, Manuel pratique de Chromatographie en phase gazeuse, 4me Edition, Masson, Paris, 1995.

La chromatographie en phase gazeuse est une mthode danalyse par sparation qui sapplique aux composs gazeux ou susceptibles dtre vaporiss par chauffage sans dcomposition

Domaine dapplication : analyse des composs organiques

Dfinition

La Chromatographie en phase Gazeuse : gnralits

Rle : sparer les constituants dun mlange Chromatographie en phase Gazeuse (GC) : rserve lanalyse de composs volatils et thermiquement stables GC : 3 modules Un injecteur Une colonne (gnralement capillaire) dans un four Un dtecteur Plusieurs types de dtecteurs, mais le spectromtre de masse prend de plus en plus dimportance
Gnralits

Schma dun chromatographe en phase gazeuse

Bouteille de gaz sous pression

manomtre

injecteur Dtecteur

Valve PC colonne fours

Filtres

Schma

FONCTIONNEMENT
Cur du chromatographe : la colonne Tube plus ou moins permable aux gaz qui renferme une substance active, solide ou liquide : la phase stationnaire La colonne est balaye en permanence par le gaz vecteur Processus discontinue Phase stationnaire : liquide solvant ou solide adsorbant Dispose dans la colonne de deux faons diffrentes qui caractrisent les colonnes remplies des colonnes capillaires

Fonctionnement

FONCTIONNEMENT
Chromatographe Gaz-Liquide : La phase stationnaire est un liquide non volatil ou peu volatil possdant des proprits de solvant vis--vis des composs sparer

Technique la plus employe

On les nomme ainsi des soluts

Chromatographie Gaz-Solide : La phase stationnaire est un solide adsorbant (silices, alumines, zeolites, polymre)

Fonctionnement

FONCTIONNEMENT
Molcule danalyte

phase mobile phase stationnaire

phase mobile phase stationnaire phase mobile phase stationnaire

phase mobile phase stationnaire

Fonctionnement

FONCTIONNEMENT
Solubilit dans la Phase stationnaire (SP) SP Liquide Analyte Volatilit Pas dinteraction avec La Phase Mobile (MP) MP Gaz Deux grands critres pour la sparation : - Volatilit - Polarit

Comptitions : Solubilit dans la SP vs. Volatilit

Fonctionnement

Effet de la temprature

La solubilit dun gaz dans un liquide diminue lorsque la temprature augmente.

Les analytes sont donc moins retenus lorsque la temprature croit

Tous les composs ne sont pas affects de la mme faon

Fonctionnement

Les grandeurs chromatographiques

Les grandeurs chromatographiques

Le processus de partage

gaz vecteur phase stationnaire liquide

concentration d ' analyte dans la phase stationnaire concentration d ' analyte dans le gaz de porteur

=K

Les grandeurs chromatographiques

Forme idale dun signal

Les conditions idales sont rares, les pics sont donc souvent dforms

100.0 % 88.2 %

Yo

60.7 % 50.0 %

wi = 2 wh = 2.355 3 4 5 X wb = 4 +X

32.4 % 13.4 % 4.4 %

Les grandeurs chromatographiques

Le temps de rtention
Temps qui scoule entre linjection du solut et lapparition du sommet du pic (suppos symtrique) tR
signal (pic) analyte

tM
debut

signal (pic) air

[temps, t]

tR = temps de rtention de danalyte = temps de la rtention total tM = temps de rtention de lair (analyte non retenu)

Les grandeurs chromatographiques

Le temps de rtention

Le temps de rtention dpend :

du couple analyte / phase stationnaire de limportance des volumes morts de la colonne de la masse de la phase liquide stationnaire dans la colonne de la temprature dans la colonne

Il est indpendant de :
de la quantit injecte si elle demeure faible de la nature et de labondance des autres composs

Les grandeurs chromatographiques

Le temps de rtention rduit

tR = temps dans la phase stationnaire = temps de la rtention rduit

tR tR
peak analyte

tR = tR t M

tM
debut peak air

[temps, t ]

Il tient compte du temps (tM) mit pour parcourir les vides ou interstices de la colonne (balayage de linjecteur, du dtecteur, des tuyaux)

Les grandeurs chromatographiques

Le volume de rtention (VR)

Egalement nomm volume dlution Volume de phase mobile ncessaire llution de lanalyte. Sur le chromatogramme, il correspond au volume de phase mobile coul entre linjection et le sommet du pic Dpend du dbit D de la phase mobile

VR = tR D

Volume mort (VM) : volume de la phase mobile de la colonne Calcul laide dun compos non retenu par la phase stationnaire

VM = tM D
Les grandeurs chromatographiques

Le facteur de rtention k (ou de capacit k)

Correspond au rapport entre la masse de compos dans la phase mobile sur la masse de compos dans la phase stationnaire Rend compte de la rtention des analytes

k = (tR tM) / tM

ou

tR = tM (1 + k)

Plus k est grand, plus le compos sera retenu longtemps dans la colonne

Les grandeurs chromatographiques

Rtention relative r, Facteur de slectivit

tR (2)

tR (1)

debut

peak air

tR (2)

[temps, t ]

k 2 K2 = = tR k1 K1 (1)
Facteur de slectivit:

Rtention relative:

r=

tR (i ) tR ( ref )

tR (2) tR (1)

Les grandeurs chromatographiques

Epaisseur du film df et rapport de phases

e dc

= V

VS

rapport du volume de la phase mobile sur la phase stationnaire

= dc 4 d f
VS dc e rapport des phases VG volume de la phase gazeuse (= phase mobile) volume de la phase stationnaire Diamtre lintrieur de la capilliare = 2r (rayon paisseur du film

Le volume de la phase mobile est gal Vg= 2r2L (L : longueur de la colonne) Le volume de la phase stationnaire est gal au volume de la couronne d'paisseur e soit Vs = 2 rLe.
Les grandeurs chromatographiques

Epaisseur du film df et rapport de phases

On obtient donc pour le rapport de phase :

Ce qui conduit :

Cela dmontre que : Pour analyser correctement un compos volatil, il faut augmenter k, donc diminuer le diamtre de la colonne et/ou augmenter lpaisseur du film De mme, pour analyser un compos peu volatil, il faut diminuer k donc augmenter le diamtre et diminuer lpaisseur du film

Les grandeurs chromatographiques

Epaisseur du film df et rapport de phases

Ce qui conduit :

Cela permet de dduire que le temps danalyse augmente si : le diamtre intrieur de la colonne diminue lpaisseur du film de la phase stationnaire augmente Si il ny a pas daffinit entre lanalyte et la phase stationnaire donc k = 0, on tr = tm (cas de lair ou du mthane)

Les grandeurs chromatographiques

Rapport de phases
Applications des rapports des phases diffrents

Rapport des Phases

Substance en phase gazeuse, trs volatile, bas poids molculaire typique pour les applications CG pour les substances volatiles grand poids molculaire, peu volatile

< 100 100 - 500 > 500

des colonnes capilliares

dc [mm] 0,10 0,18 0,25 0,32 0,53 paisseur du film df [mm] 0,1 250 450 625 800 1325 0,3 83 150 208 267 442 90 125 160 255 62 80 132 27 44 16 27 0,5 1,0 3,0 5,0

Les grandeurs chromatographiques

La capacit K
KC = Ci ( S ) Ci ( G ) = k

k = Wi ( S ) Wi (G )

= VG VS
Ci ( S ) Ci (G ) Wi(S)

Wi(G
VS VG k KC

concentration de la substance i dans la phase stationnaire concentration de la substance i dans la phase gazeuse quantit de la substance i dans la phase stationnaire quantit de la substance i dans la phase gazeuse volume de la phase stationnaire volume de la phase gazeuse rapport des quantits rapport des phases Coefficient de partage

Les grandeurs chromatographiques

La capacit des colonnes capillaires

Spcification* Microbore Minibore Narrow bore Wide bore Megabore

dc [mm] 0,10 0,18 0,25 0,32 0,53

N/m 7000 5000 3500 3000 1500

capacit [ng] < 20 20 100 100 500 500 1000 1000 5000

* adapt de J&W Scientific

Les grandeurs chromatographiques

Thorie des plateaux

Plus utilise, mais certaines grandeurs qui en dcoulent le sont encore Modlisation de la chromatographie selon laquelle chaque solut se dplace progressivement en une suite dtapes distinctes la colonne de longueur L est alors dcoupe en N petits disques fictifs de mme hauteur H pour chacun dentre eux la concentration en analyte dans la phase stationnaire est en quilibre avec sa concentration dans la phase mobile A chaque nouvel quilibre, lanalyte a progress dun petit disque supplmentaire appel plateau thorique On dfinit ainsi la hauteur quivalente en plateaux thorique HEPT ou H : H = L /N
Les grandeurs chromatographiques

Dtermination du nombre de plateaux

Nombre de plateau N

Nombre de plateau effectif Neff

N = 5.545 t

( R wh )2

= 5.545 t w 2 eff R h N = 16 t w 2 eff R b

wb : largeur

2 N = 16 t w R b
wh : largeur mi-hauteur

Les grandeurs chromatographiques

Rsolution
Grandeur numrique caractrisant laptitude du systme sparer deux composs Calcule selon :
wh : largeur mi-hauteur wb : largeur

R = 2 (tR2 tR1) / (wb2 + wb1) R = 1,177 (tR2 tR1) / (wh2 + wh1)

La sparation est considre comme bonne (retour la ligne de base) si :

R > 1,5

Les grandeurs chromatographiques

Facteur dasymtrie T (Tailing)

x a + xb T= 2 xa
0,8 < T < 1,2

Les grandeurs chromatographiques

Equation de Van Deemter

Etablie pour les colonnes remplies Equation mathmatique qui relie la HEPT la vitesse moyenne dcoulement de la phase mobile dans la colonne selon :

H = A + (B/) + (C.)
H C

La courbe hyperbolique passe par un minimum correspondant au dbit optimal les coefficients A, caractrisent divers physico-chimiques B et C paramtres

A B Zone optimale de

Les grandeurs chromatographiques

Equation de Van Deemter : les coefficients

A : terme de remplissage (colonnes remplies) Caractrise lcoulement de la phase mobile le long de la phase stationnaire (dpend de la taille des particules, de leur rpartition) B : terme de diffusion Traduit la tendance des molcules danalytes se disperser, cest--dire diffuser dans toutes les directions C : terme de transfert de masse Traduit la rsistance des analytes se rpartir lquilibre entre les deux phases (plus le dbit augmente plus lquilibre est difficile atteindre)

Les grandeurs chromatographiques

La sparation en fonction de la vlocit du gaz vecteur

quation de Golay : dans le cas des colonnes, il ny a pas dcoulement, le terme A et donc nul

Cu

Hmin

Bu

B H = + Cu u

uopt

Les grandeurs chromatographiques

La sparation en fonction de la vlocit du gaz vecteur

HEPT Azote

Hlium

Hydrogne

H min

U opt.

Vitesse linaire moyenne

Les grandeurs chromatographiques

Le choix du gaz vecteur

Pas dinteraction avec la phase mobile le choix du gaz vecteur ne modifie pas : le coefficient de partage K le facteur de rtention k la slectivit Mais la diffrence de viscosit des gaz modifie le coefficient de diffusion Dm lefficacit (largeur des pics) N

Le gaz vecteur

Le gaz vecteur
Rduction de la pression

p = pi po
pi p Pression a lentre de la colonne Rduction de la pression [g cm-1 s-2 = bar] Viscosit [g cm-1 s-1 = Poise] Vlocit linaire moyenne [cm s-1] p0 L B0

p =

L
Bo

Pression a la sortie de la colonne Longueur de colonne [cm] Permabilit spcifique [cm2]

Permabilit des colonnes

Colonne remplie
2 Bo d p / 103

d p = Diamtre des grains [cm]

dc = Diamtre de la capillaire [cm]

Colonnes capillaires

Bo d c2 / 32

Le gaz vecteur

Le gaz vecteur : dtermination de la vlocit linaire moyenne

u = L / tM

Fo uo = ( dc / 2) 2
3 ( pi / po ) 2 1 j= 2 ( pi / po ) 3 1

u = uo j

L tM u0 F0 j

Longueur de la colonne Temps de lair Vlocit linaire du gaz vecteur a la sortie de la colonne [cm/s] Vlocit volumineuse a la sortie de la colonne [cm3/s] Facteur de la correction pour la compression

Le gaz vecteur

Le gaz vecteur : Viscosit et exemple

Table: Viscosit des gazes vecteurs [Poise]. 100 C Hydrogne H2 Hlium H Azote N2 103 229 208 200 C 121 270 246 300 C 138 307 280

Exemple dun calcul de la pression a lentre de la colonne capillaire 25 m x 0,32 mm colonne capillaire, 100 C, gaz vecteur:He, vlocit linaire moyenne dsir = 35 cm/s.

32 L p = u 2 dc
Le gaz vecteur

dc = =

u =

L =

0.032 [cm] 229 10-6 [Poise] 25 102 [cm] 35 [cm s-1]

Rsultat: p = 0.63 [bar] = 63 [kPa]

Linjecteur
Zone chauffe o l chantillon est introduit en solution laide dune seringue, puis vaporis et mlang au gaz vecteur GC/MS : gaz vecteur, lhlium car les ions He+ rsultant de lionisation ninterfrent pas avec ceux de lanalyte en raison de leur faible rapport m/z La viscosit varie avec la temprature la plupart des injecteurs sont aujourdhui quips dun rgulateur lectronique de dbit Deux grandes familles dinjecteurs : Injecteurs fuite Injecteurs sans fuite
Linjecteur

Linjecteur split/splitless
Seringe

Septum

crou perc purge septum 1 4 mL/min

Gaz vecteur Fuite (division) 10 100 mL/min Insert Bloc chauffant 180-400 C Ferrule, crou Colonne

Linjecteur

La gomtrie du liner
Injection avec division

Linjecteur

La gomtrie du liner
Injection sans division

Linjecteur

Linjection : volume de vapeur

Vaporisation : expansion du gaz

1 L de liquide

100-1000 L de gaz

Linjecteur

Linjection : volume de vapeur

VD = nRT P
VD Vi Pi d

n = Vi d MG

273 + Ti Pa VD = Vi [d / MG ] 22.4 103 273 Pa + Pi

Volume de vapeur [mL] la temprature Ti et pression Pi Volume dchantillon liquide [mL = 103 L] Ti Temprature dinjecteur [C] Pression du gaz porteur dans linjecteur [kPa] Pa Pression atmosphrique [kPa], Densit du solvant (g/mL) MG Masse molaire du solvant Table: Volumes de vapeur des solvants courants. Bp MG d (20 C) Solvant [ C] [g/mol] [g/mL] Dichloromthane 40 84,9 1,336 Actone 56 58,1 0,791 Mthanol 65 32,0 0,793 n-Hexane 69 86,2 0,660 thylactate 77 88,1 0,901 thanol 78 46,1 0,789 Tolune 111 92,1 0,867 Eau 100 18,0 0,998

L vapeur par 1 L solvant Ti = 200 C et Pi = 100 kPa 307 265 483 149 199 334 184 1081

Linjecteur

Injecteurs fuite
le mode dinjection le plus rpandu est linjection en split ou injection avec division de flux . Une lectrovanne permet de rgler le dbit de fuite Inconvnient du mode split : Discriminations lorsque la solution analyser contient des composs dont les volatilits sont htrognes. Les composs les plus lgers ont tendance schapper par la fuite, les plus lourds mal vaporiss peuvent rester dans linjecteur Autre injecteur : injecteur aiguille de verre ou injecteur de Ross

Linjecteur

Injecteurs sans fuite (1/2)

Introduction des analytes dilus Llectrovanne est ferme pendant les quelques dizaines de secondes qui suivent linjection. Elle est ensuite ouverte pour purger linjecteur dventuels rsidus La temprature est choisie de sorte que le solvant est les soluts soient instantanment vaporiss lentre de la colonne Pendant linjection, la temprature du four est infrieure de 20 30 C la temprature dbullition du solvant afin de condenser ce dernier en tte de colonne et de piger les molcules analyser

Linjecteur

Injecteurs sans fuite (2/2)

Plus performante que le splitless en terme de rptabilit et de sensibilit, linjection on column consiste introduire directement lanalyte en solution dans la colonne ou prcolonne. Injection dun volume bien plus important (10 L) Injection le plus souvent froid : introduction ltat liquide en tte de colonne Si lintroduction se faisait chaud, lexpansion brutale du volume de la solution injecte entranerait dans la colonne une surpression telle que le gaz refluerait vers linjecteur

Linjecteur

Le four et la colonne capillaire

Le four contient llment cl de la sparation chromatographique : la colonne De nos jours, on utilise presque exclusivement des colonnes capillaires La phase stationnaire est caractrise par les fonctions chimiques greffes sur la silice Choix de la phase stationnaire selon le mlange analyser Pour les mlanges mixtes, on privilgie le choix dune colonne peu polaire

Le four et la colonne

Les colonnes

Les colonnes
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Les colonnes
PLOT: Porous Layer Open Tubular

OT:

Open Tubular Column

WCOT: Wall Coated Open Tubular COT: Capillary Open Tubular Classical Open Tubular Golay: du nom de leur inventeur synonymes

SCOT: Support Coated Open Tubular

Les colonnes

Les colonnes
Par rapport aux colonnes remplies, les colonnes capillaires prsentent une volution spectaculaire. Les facteurs les plus importants qui ont contribu leur dveloppement sont : l'utilisation du tube en silice fondue les nouvelles mthodes de silanisation pour la dsactivation, le greffage et la rticulation de films de phase stationnaire . Cela a conduit : une sensibilit et une reproductibilit plus grandes une permabilit jusqu' 400 fois plus grande, celle-ci permet l'utilisation de colonnes beaucoup plus longues sans perte de charge excessive La pression l'entre est sensiblement la mme qu' la sortie de la colonne.
Les colonnes

Les colonnes
Cela a conduit (suite) : La pression l'entre est sensiblement la mme qu' la sortie de la colonne. La vitesse optimale du gaz vecteur qui correspond au minimum de la HEPT peut tre maintenue sur toute la longueur de la colonne. Le rapport de phase de 2 100 fois plus lev: les temps de rtention sont largement rduits le terme A de l'quation de Van Deemter n'existe pas (il est li la dispersion de la dure des trajets des soluts en raison du contournement des grains de remplissage). La courbe du diagramme de la HEPT en fonction de la vitesse du gaz vecteur est abaisse.

Les colonnes

Les colonnes
Ncessit de dsactiver la colonne avant le greffage. Cela vite dadsorber les soluts (ponts hydrognes entre les fonctions silanols et les soluts Le greffage covalent de la phase stationnaire la paroi du tube et la rticulation de cette dernire ont pour effet d'augmenter sa stabilit et donc sa dure de vie.

Les colonnes

Les colonnes
Ncessit de dsactiver la colonne avant le greffage. Cela vite dadsorber les soluts (pont hydrogne entre les fonctions silanols et les soluts Le greffage covalent de la phase stationnaire la paroi du tube et la rticulation de cette dernire ont pour effet d'augmenter sa stabilit et donc sa dure de vie. Au cours de leur utilisation, les colonnes non traites perdent progressivement leur phase parce qu'une petite partie de liquide immobilis quitte la colonne au cours de l'lution surtout lorsque la temprature du four est assez proche de la temprature maximale d'utilisation de la colonne.

Les colonnes

Les colonnes : les polysiloxanes

CH3 Si O CH3
n

DB1, OV-101 Tmax= 350 C

CH3 Si O (CH3)3 CN
x%

CH3 Si O
(100-x)%

Si x = 5%

Si x = 50% DB-225

CH3 Si O Si O CH3
x% (100-x)%

DB-5, SE-54, OV-3, SPB-5 Tmax= 350 C Si x = 50% OV-17 Tmax= 250 C

Les colonnes

Les colonnes : les polysiloxanes

gamme de temprature d'utilisation trs tendue 350 C pour une substitution mthyle 260 C pour une substitution cyanopropyle greffage sur le tube capillaire via des terminaisons -OH ou -OCH3 rticulation au 60Co ou via une fonctionnalisation avec des vinyles grande flexibilit du squelette siloxane: grande permabilit aux soluts grande varit de chanes latrales: gamme de polarit intressante

Les colonnes

Les colonnes : les polythylne glycols

H H * H H
Alternative intressante aux colonnes polysiloxane Prsentent en gnral une trs bonne efficacit et une bonne slectivit. La plus utilise est la Carbowax 20M. (20M pour une MM de 20 000) Le domaine de temprature d'utilisation est plus restreint. En dessous de 65 C, la phase commence cristalliser et les pics s'largissent. Sensible l'oxygne et leau
Les colonnes
Carbowax 20M, INNOWAX

T= 65 250 C

Le four et la colonne capillaire

En plus de la nature de la phase stationnaire, 3 paramtres gomtriques caractrisent les colonnes chromatographiques

La longueur (10-100 m) Le diamtre interne (0,1-0,5 mm) Lpaisseur de la phase stationnaire

Les colonnes

Le four et la colonne capillaire

Les colonnes

Diamtre interne et paisseur de film

Choix dun quilibre entre deux facteurs: Efficacit de la colonne (nombre de plateaux thoriques) Capacit (quantit de l chantillon pouvant tre dpose sur la colonne sans entraner de surcharge) La meilleure rsolution est obtenue avec des colonnes Narrow Bore (0,20 - 0,25 - 0,32 mm de DI). La plus grande capacit est obtenue avec des colonnes Wide Bore (0,53 et 0,75 mm de DI).

Les colonnes

Diamtre interne
Influence du diamtre sur lefficacit

Diamtre Int. (mm) 0,53 0,32 0,25 0,10

H min thor. (mm) 0,507 0,306 0,239 0,096

Nombre de plateaux / m. 1970 3260 4180 10400

Chromatographie conventionnelle
- Colonnes: de 15 50 m 0,25 mm x 200 m - Programmation du four : rampes de 2 10 C/min - Dure de lanalyse : de 20 240 min

Les colonnes

Chromatographie Fast
- Colonnes: de 5 10 m 0,10 mm x 100 m - Programmation du four: rampes de 15 50 C/min - Dure de lanalyse: de 5 15 min

Les colonnes

Chromatographie Ultra-Fast

- Modules: 5 m 0,10 mm x 100 m - Programmation du four: rampes de 50 1200 C/min - Dure de lanalyse: de 1 3 min

Les colonnes

La chromatographie chirale Notion de chiralit

Dfinition : proprit de ne pas tre superposable son image dans un miroir Chaque carbone asymtrique (4 substituants diffrents) est un centre de chiralit Proprit physique associe la chiralit : une substance chirale est doue d'activit optique et fait tourner le plan de polarisation d'une lumire polarise plane qui la traverse Proprits physico-chimiques des nantiomres: identiques hormis leur action sur la lumire polarise

Les phases stationnaires chirales

La chromatographie chirale
Les nantiomres ont : Des volatilits identiques Des polarits identiques Deux solutions :
1. Drivatisation pour former des diastroisomres puis analyse en GC classique 2. Utilisation dune colonne chirale : permet la formation rversible de complexes de diastromres (liaison de Van der Walls)
Les phases stationnaires chirales

Insparables classique

en

GC

La chromatographie chirale Rgle des 3 points

A B C B C A C B Interaction impossible Interaction possible avec la phase stationnaire

3 sites dinteractions diffrents

Les phases stationnaires chirales

La chromatographie chirale Colonne base dacides amins

obtenues par copolymrisation et greffage de mthyl alkyl ou cyano alkyl thyl polysiloxanes avec des monoamides ou diamides dacides amins optiquement actifs:

Les phases stationnaires chirales

La chromatographie chirale Colonnes base de cyclodextrines

Colonnes les plus utilises les cyclodextrines sont des cycloamyloses dorigine naturelle rsultant de la dgradation de lamidon par la bactrie Bacillus macerans Famille doligosaccharides cycliques composs de sous units glycopyranoses lies en -(1,4) 3 familles sont principalement utilises selon le nombre de sous-units (6, 7 ou 8) Structure en tronc de cne, prsentant une cavit en son centre

Les phases stationnaires chirales

La chromatographie chirale

Les phases stationnaires chirales

La chromatographie chirale
Modification des cyclodextrines par raction des hydroxyles en positions 2 et 3 (autour de la couronne) et en position 6 la base Obtention de cyclodextrines drives pour offrir une gamme plus tendue de sparations chirales Phases de 1re gnration : tous les hydroxyles sont mthyls. Les cyclodextrines sont alors solubilises dans du PDMS (10-20 %) Phases de 2me gnration : Phases permthyles sauf lhydroxyle en position 6 qui peut tre substitu par un autre groupement comme le butyl silyle tertiaire

Les phases stationnaires chirales

Les dtecteurs
De nombreux dtecteurs peuvent tre utiliss en GC

Les informations apportes sont variables

On distingue : Les dtecteurs universels : dtectent tous les composs organiques

(FID, TCD) Les dtecteurs spcifiques : permettent la mise en vidence de certains composs (FPD, PFPD, AED, NPD) Les dtecteurs qui apportent une information structurale (GC/MS, GC/IRTF) Le dtecteur sensoriel (GC/O)

Le dtecteur

Les dtecteurs bass sur des procds dionisation

Dtecteur Ionisation de Flamme (FID)
Les soluts sont brls dans une flamme produisant des espces CH. et des ions CHO+ qui sont collects par une cathode Dtection des hydrocarbures, destructif Large domaine de linarit (107), limite de dtection de lordre du pg

Dtecteur thermoionique (TID, NPD) Dtection spcifique des espces phosphors et azots
FID avec une bille chauffe de sel alcalin (Silicate de Rb) Dpend du rapport H2/air

Le dtecteur

Le Dtecteur Ionisation de Flamme (FID)

lectrode collecteur dions

Air (O2)

Amplification et mesure du courant

Dihydrogne

Gaz vecteur N2 en sortie de colonne Ractions dans le FID: Formation des radicaux: Formation des molcules excits: Formation des ions:

CH3, CH2, CH, C O2*, OH* CH2 + OH* CH + OH* CH + O2* C + OH*

CH3O+ + eCH2O+ + eCHO2+ + eCHO+ + e-

Caractristique FID: Sensibilit: limite de dtection: Linarit: Slectivit:

S > 0,015 As/g LD < 3 x 10-12 g C/s 1 : 107 liaisons de C-C et C-H

Le dtecteur

Les dtecteurs bass sur des procds dionisation

Dtecteur photoionization (PID)
Lampe UV (nergie de 10,2 eV, mesure dun courant entre 2 lectrodes Non destructif, limites de dtection comparables au FID Adapt aux composs aromatiques, impropre aux petites molcules (C1-C4, mthanol)

Dtecteur capture dlectron (ECD)

Slectif aux analytes pouvant capturer des lectrons (halognes) Limite de dtection de lordre du fg, non destructif Lhlium ne peut tre utilis comme gaz vecteur (formation dions mtastables)

Le dtecteur

Les dtecteurs bass sur des techniques spectroscopiques

Dtecteurs photomtrie de flamme (FPD) ou de flamme pulse (PFPD)
Slectifs au composs soufrs et azots et 25 autres lments pour le PFPD Flamme hydrogne / Air Gnration despces S2* et HPO*, longueur donde 392 nm (S) ou 526 nm (P)

Dtecteur chemiluminescence (SCD)

Slectif aux composs soufrs Formation despce chemiluminescente

Le dtecteur

Les dtecteurs bass sur des techniques spectroscopiques

Dtecteur mission atomique (AED) Dtecteur slectif de nombreux lments
Cration dun plasma induit par micro-ondes pour atomiser et exciter les analytes Dtection multi-lments simultane possible

Infrarouge transforme de Fourrier Couplage difficile, de nombreuses solutions instrumentales

faible limite de dtection complmentaire avec la GC/MS (identification disomres)

Le dtecteur

Les dtecteurs

Le dtecteur

La sparation : apport de la thorie

Que faire ? Deux solutions, lesquelles ?

La sparation : apport de la thorie

La sparation : apport de la thorie

Solution 1 : Eloigner les pics lun de lautre : emploi dune phase stationnaire plus slective Technique fonde sur le phnomne de rtention chromatographique : nature et intensit des forces qui sexercent entre les analytes et la phase stationnaire Thermodynamique du procds Solution 2 : Rendre les pics plus troits

La sparation : apport de la thorie

La sparation : apport de la thorie

Solution 2 (suite) : Rendre les pics plus troits, sans changer la nature de la phase stationnaire : Prendre une colonne plus efficace Mieux utiliser celle dont on dispose Travail sur la cintique du processus : la rapidit du transfert des analytes entre les phases gazeuses et stationnaires Deux grandes thories : Thories thermodynamiques : temps de rtention Thories cintiques : processus de transfert de matire et conduisent une description de la forme des pics

La sparation : apport de la thorie