Universidad de Guadalajara

Centro Universitario de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias Departamento de Botnica y Zoologa

Ttulo: Evaluacin del crecimiento y fructificacin de Lentinula edodes Pegler en un sustrato de hojarasca de encino y residuos de cartn y papel

Alumno: Sulub Mas Moiss Enrique

Zapopan, Jalisco, Junio de 2011

Introduccin

Lo hongos constituyen un grupo muy variado y polimrfico muy difcil de caracterizar, sin embargo, cuando se hace referencia a ellos se habla de organismos que nacen de esporas, carecen de clorofila, se reproducen sexual y asexualmente y tienen un cuerpo generalmente formado por filamentos muy ramificados llamados hifas, las cuales en conjunto forman al micelio (Snchez y Royse, 2001). Los hongos juegan un papel muy importante en la naturaleza, pues junto a las bacterias forman el grupo de los descomponedores dentro de los ciclos trficos del carbono, nitrgeno y azufre (Herrera y Ulloa, 1990). El hombre ha consumido los hongos como alimento por ms de dos mil aos, algunas especies de setas tambin han sido utilizadas con propsitos medicinales y tnicos inicialmente era su agradable sabor y textura los que resultaban atractivos y en algunas sociedades su uso estaba limitado a la realeza (Alcalde y Salgado, 2001). Culturas como la china y la egipcia conocan de manera emprica los beneficios a la salud que estos alimentos proporcionaban (Prez et al, 2010). Muchos aos antes del desarrollo de la produccin de hongos comestibles en Estados Unidos de Amrica y Europa, los chinos ya los cultivaban y de diferentes especies. El cultivo de hongos comestibles tales como Lentinula edodes, Volvariella vovacea y Tremella fuciformis fue primero obtenido en China en los aos 1000, 1700 y 1800, respectivamente (Quimio et al, 1990) Con el correr del tiempo, la demanda provoc que se generaran sistemas productivos ms eficientes por ende rentables (Rodrguez, 2007). Actualmente su produccin se realiza en grandes extensiones de cultivo y los niveles de produccin anualmente

crecen constantemente y en los ltimos 30 aos la consciencia de las propiedades nutricionales de los hongos ha provocado el aumento de su consumo, no slo en los

estratos altos de la poblacin, sino tambin a nivel de las comunidades pobres (Alcalde y Salgado, 2001). Uno de los hongos ms apreciados es el shiitake (Lentinula edodes), que es el segundo hongo ms importante dentro de las especies industrialmente cultivadas, sobre todo en pases asiticos (Bernab et al, 2006). El mercado global es manejado por Japn, Taiwn, China, entre otros; sin embargo la explotacin industrial y comercial del hongo shiitake se ha extendido ampliamente en Europa y Amrica por las excelentes caractersticas nutricionales y medicinales (Montoya y Hernndez, 2006). El cultivo de este hongo comestible se inici en China en algn momento durante los aos 1000 y 1100 a. de c. las prcticas de cultivo fueron probablemente desarrolladas primero en algunas zonas montaosas. Las tcnicas de cultivo desarrolladas en China fueron posteriormente introducidas a Japn, el mayor productor de L. edodes (Quimio et al, 1990). En los ltimos cuarenta aos la produccin mundial de hongos comestibles se ha incrementado ms de treinta y cinco veces; de 24 000 tn en 1962 a 8,5 millones tn en 2002 (Rodrguez, 2007). En Mxico, el cultivo de otros hongos diferentes al champin (Agaricus bisporus) o a los hongos ostra (Pleurotus ostreatus) se inici a finales de la dcada de los ochentas. Entre estos hongos se destaca el hongo shiitake que iniciaba su etapa experimental de cultivo. As Mxico es el principal productor de Lentinula edodes en Latinoamrica y el segundo en toda Amrica, slo por detrs de los Estados Unidos de Amrica (Arra y Quintanilla, 2007). Los hongos comestibles han sido cultivados, no directamente en el suelo como en otras plantaciones, pero s en sustratos orgnicos. Estos sustratos son en su mayora desechos de granjas, otros cultivos o de fbricas. Estos residuos pueden ser reciclados para producir alimentos adicionales en forma de hongos para el consumo humano. En este proceso, la contaminacin ambiental puede ser reducida porque los residuos pueden ser aprovechados (Quimio et al, 1990).

Aunque los hongos pueden crecer sobre alguna sustancia determinada o en troncos de rboles, generalmente el sustrato suele prepararse mezclando varias materias primas que se complementan entre s. Sin embargo en el caso de los hongos ligncolas, como es el caso de L. edodes o Pleurotus spp, se pudiera usar un sustrato tipo que valiese para todos como se hace en los pases orientales (Garca Rolln, 2007). Para L. edodes se han descrito sustratos a base de paja o cascarilla de arroz, paja de sorgo, fibra de coco, granos de sorgo y pulpa de caf (Bernab et al, 2006); tambin de pasto de kikuyo, man forrajero, vaina de frijol y cascarilla de algodn (Garcs et al, 2005), aserrn o virutas de varios rboles, entre otros, dando muy buenos resultados. Estudios con otros hongos comestibles como en el caso de Pleurotus ostreatus, han arrojado que la utilizacin de papel y cartn limpios de reciclaje aportaron una eficiencia bilgica de 177.5 y 112.4% respectivamente (Arra y Quintanilla, 2007). Muchos autores como Garcs et al (2005), han llegado a la conclusin de que los mejores sustratos son los que tienen un gran porcentaje de residuos lignocelulsicos. stos pueden ser sustratos muertos o en residuos forestales (Villegas et al, 2007). Por ello parece factible el uso de la hojarasca de encino y residuos de papel y cartn para el cultivo de este tipo de hongos, por su contenido rico en celulosa y lignina; adems de que podra hacer una buena reutilizacin de los sobrantes de cartn y papel. El presente trabajo pretende demostrar si un sustrato a base de hojarasca de encino mezclado con residuos de papel y cartn son propicios para el crecimiento y la fructificacin de L. edodes y aprovechar de esta manera algunos de los residuos ms comunes de nuestro medio.

Objetivo general Evaluar la efectividad de un sustrato de hojarasca de encino mezclado con residuos de papel y cartn para el crecimiento y la fructificacin de Lentinula edodes.

Objetivos especficos Medir el tiempo de colonizacin del hongo en este sustrato. Determinar el tiempo de fructificacin del hongo sobre este sustrato. Comparar la eficiencia biolgica para cada uno de los cinco tratamientos evaluados.

Hiptesis El sustrato preparado a partir de hojarasca de encino y residuos de papel y cartn es altamente efectivo para el crecimiento y la fructificacin de Lentinula edodes.

Metodologa La cepa La cepa utilizada ser Lentinula edodes L-35, depositada en el cepario del Instituto de Botnica de la Universidad de Guadalajara marcada con el nmero 78. sta se propagar en un medio de agar extracto de malta (AEM) a pH 5,5 en placas de Petri y se incubar en condiciones de obscuridad a 25 1 C durante tres semanas, segn Villegas et al (2007) y Bernab et al (2006). Preparacin del inculo El inculo se preparar a partir de granos de sorgo (Sorghum vulgare) hidratados durante 12 horas hasta alcanzar 40% de humedad. Este sustrato se colocar en frascos de vidrio de 500 ml y se esterilizar en una autoclave durante una hora a 121 C. Una vez que se enfren los frascos y su contenido, se inoculan con micelio de la cepa extrado de las placas de Petri en el medio AEM. Para esto se usa un bistur para cortar el agar en pequeos cuadros de 1 x 1 cm y luego transferirlos a los granos. Las muestras debern agitarse al ser inoculadas, y se incubarn a 22 2 C en completa

obscuridad durante dos semanas, obteniendo as la semilla. Cuando los granos ya han sido cubiertos por el micelio, ya estarn listos para la siembra. Preparacin del sustrato definitivo y siembra El sustrato utilizado ser hojarasca de encino (Quercus rugosa) mezclada con residuos de papel y de cartn. Para su utilizacin, la hojarasca se hidratar sumergindola en agua corriente durante 24 horas hasta alcanzar una humedad de 60 % dentro de un contenedor de 200 lt de capacidad. El cartn y el papel sern recolectados de residuos domsticos. Para su manejo igualmente se sumergirn en agua corriente por separado en un contenedor de 200 lt durante 72 horas hasta su total hidratacin. Posteriormente a la hidratacin el cartn y el papel sern cortados a en trozos pequeos, esto con el fin de que el hongo pueda colonizarlos mejor. Se realizarn mezclas con los tres ingredientes hidratados a diferentes proporciones, sobre una mesa previamente desinfectada con hipoclorito de sodio (NaClO) al 5% y se contar con un tratamiento de control a base de un sustrato comercial de aserrn de cedro y salvado de trigo. Las proporciones utilizadas sern las siguientes:

Nmero de tratamiento T1 T2 T3 T4 T5* Total (Kg)

Hojarasca de encino (%) 80 50 50 50

Cartn (%)

Papel (%)

Hojarasca de encino (Kg)

Cartn (Kg)

Papel (Kg)

10 25 35 15

10 25 15 35

2 1.5 1.5 1.5

0.25 0.625 0.875 0.375

0.25 0.625 0.375 0.875

6.5

2.125

2.125

*tratamiento testigo que consta de 50% de aserrn de cedro y 50% de salvado de trigo.

La mezcla de cada tratamiento ser depositada en bolsas de polietileno de alta densidad de 40 x 30 cm. Cada bolsa ser llenada con 2.5 Kg del sustrato conteniendo 60 % de humedad. Cada tratamiento contar con 5 repeticiones por lo que durante el

experimento se tendrn un total de 25 bolsas, de las cuales 20 contendrn la mezcla de hojarasca y residuos de papel y cartn, y cinco bolsas con el tratamiento testigo. Posteriormente, las bolsas con el sustrato pasarn al proceso de esterilizacin que ser llevada a cabo en una autoclave a 121 C durante tres horas, esto con el fin de eliminar cualquier otro organismo que podra competir con el hongo que se sembrar. Las bolsas se dejarn enfriar en un cuarto limpio y se proceder a la inoculacin con la semilla obtenida con granos de sorgo esterilizados. La semilla se aadir homogneamente en una proporcin de 15 % del peso hmedo del sustrato y se mezcla mediante agitacin manual. Cada bolsa deber estar etiquetada indicando el tratamiento y el nmero de repeticin de que se trate. Las bolsas sern selladas posteriormente y sern incubadas en obscuridad a 28- 30 C hasta que el hongo colonice el sustrato y el micelio muestre manchas de color caf obscuro. Para estimular la fructificacin en el sustrato colonizado, las bolsas sern retiradas y los bloques se trasladarn a un cuarto de fructificacin con una temperatura de 15 C, permitiendo que del sustrato tengan una iluminacin natural indirecta con una duracin al da de 8 horas y 16 horas de obscuridad. Los sustratos se humectarn manualmente con una regadera tres veces al da, hasta la aparicin de los primordios. Los carpforos obtenidos sern cosechados y pesados para evaluar la produccin, siguiendo la frmula de eficiencia biolgica de Tchierpe y Hartman (1977), la cual consiste en dividir el peso fresco de los hongos cosechados entre el peso seco del sustrato empleado expresado en porcentaje:

Anlisis estadstico En todos los casos se seguir un diseo estadstico completamente al azar de los cinco tratamientos con cinco repeticiones cada uno, mediante la prueba de comparacin medias con el mtodo de Tukey (p>0.05). Para el tiempo de colonizacin y de fructificacin se realizar un anlisis unifactorial de varianza (ANOVA) con un 95% de confianza. Se utilizar para los anlisis el programa de cmputo Statgraphics Plus 5.0.

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