Preparacin de Buffers. Titulacin de Aminocidos.

Flor Vera, Roosevelt Yamarte, Helim Pirela, Wilfredo Rusa

Laboratorio de Bioqumica. Departamento de Biologa. Facultad Experimental de Ciencias. Universidad del Zulia. Maracaibo 2012. 4 de Diciembre del 2012

1.- Resultados. Preparacin del Buffer acetato: en 40mL de acetato de sodio con pH=2,71 se agreg cido actico hasta llegar a pH=5. Se agregaron 60mL de cido actico hasta llegar a dicho pH. Valoracin de la capacidad tamponante de buffers preparados: se titularon 25mL del buffer acetato preparado con NaOH y HCl. En la Tabla 1 se expresan los valores de pH obtenidos por mL agregados de NaOH y HCl. Se anexan las Grficas 1 y 2 donde se expresan las curvas de titulacin del buffer en pH vs. mL de HCl y NaOH respectivamente. mL HCl 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 pH 4,54 4,49 4,38 4,31 4,18 4,05 3,95 3,79 3,48 3,35 mL NaOH 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 pH 4,70 4,76 4,84 5,20 5,09 5,21 5,46 5,61 5,86 7,35

Tabla 1. Cantidad de HCl y NaOH agregados al buffer y variacin del pH.

Curva de titulacin de un aminocido problema: se titul un aminocido desconocido (X2) de pH=1,92 con NaOH. Los mL de NaOH empleados se expresan en la Tabla 2 y se anexa la Grfica 3 con la curva de titulacin del aminocido en pH vs. mL de NaOH agregados. mL NaOH 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 Clculo del pka del buffer acetato: pH= pka + log [S]/[A] pH 3,42 8,53 9,30 10,42 11,40 12,24

Tabla 2. Cantidad de NaOH agregados al aminocido desconocido y variacin del pH.

-pka + pH= log [S]/[A] -pka= log[S]/[A] - pH pka= - log [S]/[A] + pH pka= - log[200mM]/[200mM] + 5 pka= 5. 2.- Discusin. Buffer: El Buffer Acetato realizado se compone de acetato de sodio (base conjugada) y cido actico (cido dbil), ambos con concentracin de 200 mM (0,2 M). El objeto del empleo de soluciones amortiguadoras tanto en tcnicas de laboratorio como en la finalidad funcional del organismo, es precisamente impedir o amortiguar las variaciones de pH y, por eso, suele decirse que sirven para mantenerlo constante. Mecanismo del Buffer: El cido estar parcialmente disociado, estableciendo un equilibrio entre las partculas de cido sin disociar, los iones hidrgeno y los iones de base conjugada. El acetato de sodio, como todas las sales, est disociado completamente y, por esta causa, el in acetato procedente de la sal desplaza el equilibrio hacia la formacin de cido, disminuyendo la concentracin de hidrogeniones libres. La presencia conjunta de la sal y el cido hace decrecer la acidez. Si las cantidades de sal y cido son del mismo orden de magnitud, la concentracin de iones hidrgeno se regular por la reaccin de equilibrio del cido. Si se aade un cido fuerte (HCl) se produce un aumento instantneo de la concentracin de iones hidrgeno, los cuales son neutralizados por la base conjugada, liberando as una cantidad equivalente de cido dbil. Si aadimos al sistema una base fuerte (NaOH), los iones hidroxilo consumen rpidamente iones hidrgeno del sistema para formar agua, lo que provoca (en el Buffer acetato) la transformacin de cido actico libre en acetato, que es una base menos fuerte que la base agregada. Usos: La utilidad de las soluciones amortiguadoras en la regulacin del equilibrio cido-base, destaca precisamente en la posibilidad de mantener la concentracin de iones hidrgeno dentro de lmites estrechos, con esto, el pH puede considerarse invariable. El pH puede mantenerse aproximadamente al nivel que convenga, escogiendo las mezclas adecuadas. En el caso del Buffer Acetato, su mxima capacidad de tamponamiento es en pH=5 ya que ese es su pka. Cuando el pH sobrepasa excesivamente este valor, el buffer pierde su capacidad. En la titulacin con HCl, se observ que el Buffer acetato disminuy su capacidad de tamponamiento al agregar 2 mL del cido fuerte, ya que el pH vari desde 4,54 hasta 3,35 . En la titulacin con NaOH el Buffer perdi su capacidad al agregar 2 mL de la base, ya que el pH vari desde 4,70 hasta 7,35. Esto quiere decir que el Buffer acetato desempea su mayor capacidad de tamponamiento en medio cido.

Aminocido desconocido: Los aminocidos, por ser anfteros, presentan una buena capacidad buffer. Al presentar grupos cidos y bsicos simultneamente, se neutralizan mutuamente constituyendo una sal interna formando un in hbrido. Debido a esto, su importancia fisiolgica depende mayormente del pk de cada uno de ellos. Dentro del laboratorio se comprob la capacidad buffer de un aminocido desconocido (concentracin 25mM), titulando con NaOH hasta un pH mayor a 12. Como se puede observar en la grfica 3, se observo donde el pH se mantuvo relativamente constante, lo cual lleva a interpretar que el grupo R del aminocido desconocido no est cargado, es decir, no presenta grupos cidos ni bsicos que afecten su capacidad buffer.