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En 1979 apareci una nueva enfermedad en salmnidos de Noruega granjas alrededor de la isla de Hitra al sur de Trondheim.

Este enfermedad persisti en Hitra y hacia el norte hasta finales otoo de 1983, cuando golpe el sur de Stavanger. En en particular, la regin de Bergen, que tiene la ms alta densidad de las explotaciones pisccolas, fue gravemente golpeado. La enfermedad se caracteriza por la anemia y extendida hemorragias, especialmente en el tegumento que rodea el los rganos internos de los peces. Hay una septicemia general, los a menudo con un gran nmero de bacterias en la sangre de mori-Bund y peces recin muertos. Los aislamientos se intentaron desde la sangre y los riones. Esta enfermedad se da principalmente a finales de otoo, invierno y principios de la primavera y se ha llamado vibriosis de agua fra o Hitra enfermedad (7). La enfermedad tambin se ha descrito en la sndrome hemorrgico plazo (13) de etiologa no definida. Se aisl una bacteria Vibrio-como de todos los peces que hemos examinado. Las pruebas con estos aislamientos fullfil de Koch postu-lates e indicar la etiologa bacteriana de la enfermedad (7). Caracterizacin de la bacteria indica fuertemente que es una nueva especie de Vibrio. MATERIALES Y MTODOS Cepas y el crecimiento bacteriano. A menos que se indique lo contrario, sustratos se prepararon con 1,5% de NaCl, y la incubacin fue a los 15 C. Los sustratos generales utilizados en este trabajo fueron agar nutriente (Oxoid Ltd., London, United King-Unido) suplementado con 5% de sangre humana (NBA), y triptona caldo de soja (TSB) (Oxoid) suplementado con NaCl a una concentracin final de 1,5%. Bacterias similares fueron aisladas de peces enfermos a lo largo de la costa oeste de Noruega. Colar HI 7751, el cual fue aislado de un salmn atlntico de piscifactora en la regin de Bergen a finales de 1983, fue elegido como el tipo de cepa y se describe aqu. Los cultivos se aislaron de peces moribundos o recin muertos en la NBA, que se incub a 15 C. Las colonias fueron detectado despus de 1 a 5 das. La salinidad ptima y rango. La salinidad ptima es determinado en TSB, que bsicamente contena 0,5% de NaCl. NaCl se aadi a la TSB para dar concentraciones finales de 1,0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5 y 4.0%. Sin sal TSB se hizo a partir de los ingredientes estndar omitiendo NaCl. El crecimiento fue medido nefelomtricamente. Para probar la supervivencia de la bacterias en la presencia de diferentes concentraciones de NaCl, los cultivos se sembr en la NBA despus de 11 das, y el No se observaron placas durante 2 semanas. Para la prueba de una NaCl requisito, modificado TSB se realiz con 1,5% de KCl; TSB que contiene 1,5% de NaCl se utiliz como control. Campo de temperatura ptima. La temperatura Optima se determin sobre una placa NBA (50 por 10 cm) en el que se establece un gradiente de temperatura por el uso de un termoesttica ms fresco en un lado y un calentador en el otro. El crecimiento lmites fueron determinados por la inoculacin en placas de NBA que se incubaron a diferentes temperaturas. Sensibilidad. Discos de sensibilidad se realizaron mediante la transferencia de 10 l de una solucin saturada de 2,4-diamino-6,7-di-isopropil-fosfato pteridina (vibriosttico agente 01129) en agua a una disco estril, que se coloca entonces en el centro de la NBA placa de cubierta con bacterias. Discos de sensibilidad a los antibiticos estriles (AB BIODISK; Solna, Suecia) se utiliza para determinar la sensibilidad novobiocina (5 pg / disco). Las pruebas bioqumicas. Actividad bioqumica fue probada usando el sistema 50CH API (API System SA, La Balme-les-Grottes, Francia) con estril de NaCl aadida al fluido a una concentracin de 1,5%. Las cepas tambin fueron probados mediante el uso de la 20B sistema API suplementado con NaCl estril a una ltima concentracin de 2,0%. La presencia de la oxidasa de citocromo se puso a prueba en 24 h culturas NBA, que fueron trasladados a papel de filtro con 1% de N, N-dimetil-p-fenilendiamina hidrocloruro (12). La reduccin de nitrato se puso a prueba mediante el uso el mtodo de Conn (5). Indol fue probado en TSB despus de 48 h con el reactivo de Kovacs (5). Metabolismo fermentativo y metabolismo oxidativo se pusieron a prueba en un

medio de Hugh-Leifson suplementado con 1% de glucosa mediante el uso de azul de bromotimol como un indicador (4), las pruebas se leyeron despus de 10 das. Quitinasa produccin se ensay en placas de agar que contienen quitina min- hay minerales y 0,4% secaron, quitina purificada mediante el mtodo de Hsu y Lockwood (11). Produccin de lipasa fue probada por el mtodo de Harrigan y McCance (9), y la capacidad de arginina descarboxilar fue probado en descarboxilasa Mgller medio (4). Serologa. Los sueros de conejo se produce contra algunos de los cepas bacterianas (vase la fig. 3). Un immunosor-ligado a enzimas ensayo de doblado se realiz por el mtodo de Bratthall et al. (2), con algunas modificaciones. Una placa de microtitulacin de 96 pocillos (InterMed; Nunc, Roskilde, Dinamarca) se revisti con clulas bacterianas. El suero de conejo se diluyeron 1:4000 en fosfato solucin salina tamponada con fosfato (pH 7,2) que contiene 0,05% de Tween 20 y 0,5% de albmina srica bovina (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO). Inmunoglobulina de cabra anticonejo G-horse- conjugado de peroxidasa de rbano (Bio-Rad Laboratories, Rich- mond, CA) diluido 1:3000 en tampn fosfato solucin salina que contena Tween 20 y albmina de suero bovino. La Porcin 100-P1 de una solucin de 40 mg de 0-diaminobenceno dihidrocloruro [E. Merck AG, Darmstadt, Repblica Federal de Alemania] en 100 ml de tampn fosfato-citrato de [pH 5,01 con 40 l de agua aadida inmediatamente antes de aadir uso a cada pocillo. La reaccin se detuvo mediante la adicin de 50 pl de 2,5 NHZS04 a cada pocillo despus de 3 min, y la densidad ptica a 492 nm se ley en un lector de microplacas modelo MR 600 (Dynatech Laboratories, Inc., Alexandria, VA). Las pruebas de patogenicidad. Las pruebas de patogenicidad por intrainyeccin peritoneal se llevaron a cabo utilizando el mtodo de Egidius et al. (7). Las pruebas de infeccin a base de agua eran realizado como se describe por Egidius y Andersen (6) a las 8 a 9 C. RESULTADOS Y DISCUSIN Strain HI 7751T (T = tipo de cepa) es un gram-negativas, anaerobios facultativos, curvado, mvil con forma de barra organismo. Es oxidasa positiva y fuertemente susceptibles a agente vibriosttico 0/129; Na + es necesario para el crecimiento y el contenido de guanina-ms-citosina es 42% en moles (14). El crecimiento es oxidativo o fermentativo. Estas caractersticas, junto con su morfologa se ha descrito anteriormente y su bioqumicos- reacciones cal, coloque este organismo en el gnero Vibrio (Pacini). Las caractersticas de este organismo difieren de los los de las especies de Vibrio descritos anteriormente. Proponemos las nuevas especies se describen a continuacin. Vibrio salmonicida sp. noviembre Vibrio salmonicida (Sal. luni. ci-da. N.L.n. salmn salmn; L.V. caedo matar; N.L. adj. asesino salmn salmonicida). Durante el crecimiento de aislamiento inicial en sustratos artificiales pueden tomar de 3 a 5 das. Despus de unos pocos pasajes sobre dichos sustratos, se obtiene un buen crecimiento dentro de 48 h. En muchos casos se obtienen cultivos aparentemente puros directamente de los riones de los peces moribundos o recin muertos. Las clulas de las 24 h culturas en la NBA son varillas curvadas que son 0.5 de 2 a 3 h. Cuando se aslan, las cepas pueden muestran un alto grado de pleomorfismo. Microscopio electrnico de clulas de 24-h triptona placas de agar de soja muestran la presencia de al menos nueve flagelos envainados polar (Fig. 1). No lateral se observ flagelos. Las colonias en la NBA son pequeas, lisas, con bordes enteros y grisceo; se observa ninguna pigmentacin ni enjambre. No hemlisis de la sangre ya sea humana o de oveja. La salinidad ptima para el crecimiento es de 1,5% de NaCl. Crecimiento se produce a concentraciones de NaCl entre 0,5 y 4,0% (fig. 2). Despus de obtener 11 das de crecimiento slo de culturas que contiene 3,0, 3,5, y 4,0% NaC1, lo que puede indicar una una mayor capacidad de supervivencia a salinidades ms altas. Na 'es esencial para el crecimiento.

El crecimiento tiene lugar entre 1 y 22 C; crecimiento ptimo se produce a los 15 C. Un ligero aumento de la temperatura mxima puede ocurrir despus de muchos pasajes sobre un sustrato artificial. Las culturas no son sensibles a la agente vibriosttico 0/129, con zonas de inhibicin de hasta 30 mm de dimetro, y estn dimetro relativamente resistente a la novobiocina (de inhibicin zona, 18 mm). Las reacciones bioqumicas. La catalasa y oxidasa del citocromo estn presentes. Citrato no se puede utilizar como la nica de carbono fuente; nitratos no se reducen. Acetona, arginina, H * S, y indol no se producen. Quitinasa, P-galactosidasa, gelatinasa, lipasa, y la ureasa no estn presentes. D-fructosa, D-galactosa, D-glucosa, maltosa, ribosa, trehalosa y son utilizar, como son N-acetilglucosamina, gluconato, y el hombre- manitol. El glicerol se utiliza lentamente. Los siguientes compuestos no se utilizan: D-arabinosa, L-arabinosa, D-celobiosa, D-fucosa, L-fucosa, f3-gentibiosa, lactosa, D-lycose, D-manosa, melecitosa, melibiosa, D-rafinosa, ramnosa, sacarosa, L-sorbosa, D-tagatosa, D-turanosa, D-xilosa, L-xilosa, adonitol, D-arabitol, L-arabitol, la amgdala, arbutina, dulcitol, eritritol, esculina, a-metil-D-glucsido, 2-ceto-gluconato, 5-ceto-gluconato, glicgeno, inositol, inulina, un hombre-metil-Noside, salicina, sorbitol, almidn, xilitol, y p-metil xilsido. Las reacciones de la cepa tipo se han probado mediante el uso Sistemas API en varias ocasiones durante los 2 aos desde su aislamiento y parece ser estable, a pesar de que las reacciones tienden a se vuelven ms dbiles. La prdida de la capacidad de utilizar gluconato es la nica excepcin. Otros siete aislamientos de peces enfermos de diferentes localidades a lo largo de la costa oeste de Noruega y se aslan de Shetland (3) tambin han sido probados mediante el uso de la API sistemas. Los resultados son similares a los obtenidos con la tipo de cepa, con unas pocas excepciones. Slo cuatro de las cepas, incluyendo el de Shetland, puede utilizar la galactosa. La Cepa Shetland puede utilizar D-manosa, y su utilizacin de los glucosa vara. Dos de las cepas no utilizan manitol. Las cepas varan en su capacidad de utilizar ribosa, y el reaccin suele ser dbil. Holm et al. (10) que se encuentra la misma patrn bioqumico como se ha descrito anteriormente para el tipo de cepa, con la excepcin de la utilizacin lenta de celobiosa y utilizacin de gentiobiosa y D-manosa. Serologa. No hay reaccin cruzada se observa con la enzima- enzimoinmunoensayo entre V. salmonicida y tres cepas de Vibrio anguillarum (Fig. 3). V. salmonicida es serolgicamente distinto de V. anguillarum. Patogenicidad. Inyeccin intraperitoneal de cultivos de caldo de V. salmonicida tanto en la trucha arco iris y el salmn del Atlntico y el desafo a travs del agua se reproducen los sntomas idnticos a los de los brotes naturales. En cada caso la bacteria se puede reaislado. Salmn del Atlntico parece ser ms susperceptible de la trucha arco iris a la enfermedad. De 22 especies descritas anteriormente, slo Vibrio fisheri (l), Vibrio logei (l), Vibrio marinus (l), y Vibrio damsela (8) tener contenidos de guanina ms citosina que son significativamente menor que 44% en moles, como es el caso con V. salmonicida. Estas cuatro especies tambin son las nicas especies que tienen la mismo patrn de temperatura para el crecimiento como V. salmonicida. Patogenicidad se puede perder por el paso de artificial sub-sustratos, pero se puede recuperar mediante el paso a travs de los peces. Enfermedad los brotes se producen a bajas temperaturas del agua, que est en acuerdo con los rangos de temperatura que encontramos para crecimiento. Los brotes de enfermedades hacia el sur a lo largo de la noruega Costa en el ao 1983 podra estar relacionado con el agua generalmente ms bajos temperaturas en esta regin durante ese ao. V. salmonicida (cepa de tipo HI 7751) se ha depositado en la Coleccin Nacional de Bacterias marinas, Aberdeen, Escocia, como cepa NCMB 2262.

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