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AVERTISSEMENT

dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

Ce document est le fruit d'un long travail approuv par le jury de soutenance et mis disposition de l'ensemble de la communaut universitaire largie. Il na pas t rvalu depuis la date de soutenance. Il est soumis la proprit intellectuelle de l'auteur. Ceci implique une obligation de citation et de rfrencement lors de lutilisation de ce document. Dautre part, toute contrefaon, plagiat, reproduction illicite encourt une poursuite pnale. Contact au SICD1 de Grenoble :
thesebum@ujf-grenoble.fr

LIENS Code de la Proprit Intellectuelle. articles L 122. 4 Code de la Proprit Intellectuelle. articles L 335.2- L 335.10
http://www.cfcopies.com/V2/leg/leg_droi.php http://www.culture.gouv.fr/culture/infos-pratiques/droits/protection.htm

LIENS

UNIVERSIT JOSEPH FOURIER FACULT DE PHARMACIE DE GRENOBLE

Anne : 2012

LES POLYCHLOROBIPHNYLES : ENJEUX ENVIRONNEMENTAUX ET SANITAIRES, ET MYCOREMDIATION


THSE PRSENTE POUR LOBTENTION DU TITRE DE DOCTEUR EN PHARMACIE dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 DIPLME DTAT

Paul CORNU N le 20 mai 1987 Corbeil-Essonnes (91)

THSE SOUTENUE PUBLIQUEMENT LA FACULT DE PHARMACIE DE GRENOBLE

Le Mercredi 7 novembre 2012

DEVANT LE JURY COMPOS DE :

Prsident du jury : Docteur M. Serge Krivobok, Matre de Confrences lUFR de Pharmacie

Directeur de thse : Docteur M. Bello Mouhamadou, Matre de Confrences lUFR de Pharmacie

Membre Docteur Mme Florence Souard, Matre de Confrences lUFR de Pharmacie

La Facult de Pharmacie de Grenoble nentend donner aucune approbation ni improbation aux opinions mises dans les thses ; ces opinions sont considres comme propres leurs auteurs.

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REMERCIEMENTS
Bello Mouhamadou, pour mavoir fait confiance et accept de diriger cette thse. Son accueil chaleureux, ses conseils, son aide et ses encouragements mont t dun prcieux secours pour arriver bon port. Merci davoir su si bien mencadrer. Serge Krivobok, de mavoir fait lhonneur daccepter la prsidence du jury de thse. Florence Souard, davoir accept de participer ce jury, et de mettre contribution ses connaissances pour juger ce travail de thse.

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toute lquipe du LECA, pour son accueil chaleureux. Je remercie particulirement Mathieu Faure pour sa bonne humeur et son humour toujours aux rendez-vous.

mes parents, pour leur soutien sans rserve toutes ces annes, et ce quel que soit le projet entrepris. Maintenant me voil dans la vie active : je vais pouvoir moccuper de vous, tant donn votre grand ge Charlotte, ma sister de choc. Merci de mavoir soutenu dans les moments les plus difficiles, je serais toujours l pour les tiens. Allez dernire ligne droite, rien quune toute petite thse de rien du tout !

Flore, ma minisister plus tant mini, pour le soutien son ami Flamby et ses massages si bienvenus aprs les longues journes passes devant lordinateur. ma famille et mes cousins pour leur soutien. Pas facile dtre lain dans cette famille de doux dingues. mes anciens colocs : Palo, Hugo et Jam qui mont support au jour le jour dans cette aventure et dans les prcdentes. Un merci tout spcial Hugo : on a partag des moments

vraiment pas faciles cette anne, tous les deux face ce grand mur. Bonne route dans cette nouvelle vie qui soffre toi !

Momo, Michou, Fourchette et Kiou pour leur soutien, leurs conseils et leurs boulettes. Merci davoir pos a de si nombreuses reprises la question fatidique et tant hae : Et ta thse ? . Elle va me manquer.

Aux Annciens, pour leur amiti et leur humour. Ne changez rien vous tes parfaits ! Aux squatteurs, qui se reconnaitront. Merci davoir abus de mon hospitalit, me forant sortir de mon autisme parfois pathologique. Revenez quand vous voulez ! Aux Rapists Monkey, et toute la dream team du mercredi soir. Dsol davoir t un peu absent cette anne, mais on va rattraper a.

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Karoal, Moute, Pouick et Frannette pour leur soutien et leurs conseils musicaux aviss qui mont aid tenir sur la distance. Merci aussi Manukchan pour ses suggestions musicales parfois pertinentes (mais seulement parfois). ma trs chre poisse, qui ne ma pas lche toute cette anne, et grce qui mon quotidien a t plus folklorique. Merci Chlo de lavoir partag, mme si tu ten serais bien pass.

Et tous ceux que joublie, la liste est longue et ma mmoire est faible

SOMMAIRE
REMERCIEMENTS ................................................................................................................ 6 SOMMAIRE ............................................................................................................................. 8 TABLE DES ILLUSTRATIONS .......................................................................................... 10 DFINITIONS ET ACRONYMES ...................................................................................... 12 INTRODUCTION .................................................................................................................. 14 Premire Partie : Les enjeux environnementaux et sanitaires ........................................... 16 1. Proprits et utilisations des PCB.................................................................................. 17 1.1. 1.2. 1.3. dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 1.4. Structure molculaire et nomenclature ................................................................... 17 Proprits Physico-chimiques ................................................................................ 17 Synthse ................................................................................................................. 18 Applications commerciales et industrielles ............................................................ 19 Applications industrielles des PCB................................................................. 19 Commercialisation .......................................................................................... 21

1.4.1. 1.4.2. 2.

Les PCB dans lenvironnement ..................................................................................... 22 2.1. 2.2. 2.3. 2.4. 2.5. Rpartition des PCB dans les cosystmes ............................................................ 22 Zones gographiques les plus pollues .................................................................. 24 Lgislation .............................................................................................................. 27 Etiologies de la pollution........................................................................................ 27 Evolution de la pollution ........................................................................................ 29 Devenir des PCB dans lorganisme (toxicocintique) ........................................... 30 Toxicit des PCB.................................................................................................... 31 Effets toxiques des PCB ......................................................................................... 33 Toxicit aigu ................................................................................................. 33 Toxicit chronique .......................................................................................... 34

3.

PCB et Risque Sanitaire ................................................................................................ 30 3.1. 3.2. 3.3.

3.3.1. 3.3.2. 3.4.

Exposition et imprgnation de la population franaise .......................................... 35 Exposition de la population franaise ............................................................. 35 Imprgnation de la population franaise ......................................................... 36 Rglementation alimentaire et Recommandations ......................................... 37

3.4.1. 3.4.2. 3.4.3.

Deuxime Partie : la mycoremdiation ................................................................................. 38 1. 2. Rgne Fongique : dfinition et classification phylogntique....................................... 40 Rgne fongique et dgradation des PCB ....................................................................... 42
8

2.1.

Dgradation des PCB par les champignons ligninolytiques .................................. 44 Biodgradation des PCB ................................................................................. 44 Absorption des PCB dans le myclium fongique ........................................... 48 Minralisation des PCB .................................................................................. 48 Mcanismes de dgradation et minralisation ................................................ 50

2.1.1. 2.1.2. 2.1.3. 2.1.4.

2.1.4.1. Enzymes extracellulaires ............................................................................ 50 2.1.4.2. Enzymes intracellulaires ............................................................................ 55 2.2. Dgradation des PCB par les champignons filamenteux ....................................... 59 Biodgradation des PCB ................................................................................. 59 Mcanismes .................................................................................................... 60

2.2.1. 2.2.2. 2.3. dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

Dgradation des PCB par les levures ..................................................................... 62 Biodgradation des PCB ................................................................................. 62 Mcanismes .................................................................................................... 62

2.3.1. 2.3.2. 2.4. 3.

Dgradation des PCB par les champignons mycorhiziens ..................................... 63

Cas concrets de mycoremdiation ................................................................................. 63 3.1. 3.2. 3.3. Essais de mycoremdiation dans les sols ............................................................... 63 Prrequis pour la mise en place dune mycoremdiation ....................................... 64 Paramtres influenant la mycoremdiation .......................................................... 65 Conditions de faisabilit in situ ...................................................................... 65 Biodisponibilit des PCB ................................................................................ 66 Toxicit des polluants sur les champignons ................................................... 67 Inoculum fongique .......................................................................................... 68

3.3.1. 3.3.2. 3.3.3. 3.3.4. 3.4.

Stratgies envisageables pour optimiser la mycoremdiation................................ 69 Consortium...................................................................................................... 69 Augmentation de la production et de lactivit enzymatiques ........................ 69

3.4.1. 3.4.2.

CONCLUSION ....................................................................................................................... 71 RFRENCES ....................................................................................................................... 74 ANNEXES ............................................................................................................................... 86 Annexe A - Numrotation IUPAC des congnres .............................................................. 87 Annexe B - Teneurs en congnres des Aroclors 1242, 1254, 1260 .................................... 90 Annexe C - Principaux noms commerciaux des produits contenant des PCB ..................... 91 Annexe D - Les PCB dans lenvironnement ......................................................................... 92 Annexe E - Rglementation alimentaire ............................................................................... 94 Annexe F - Principaux essais de biodgradation de PCB en solution simples ou complexes par les pourritures blanches en milieu liquide ...................................................................... 96
9

TABLE DES ILLUSTRATIONS

Liste des Figures :


Figure 1 - Structure molculaire des PCB ................................................................................ 17 Figure 2 - Estimation de l'usage mondial cumul des PCB (en tonnes) ................................... 22 Figure 3 - Atlas franais des sites franais pollus par les PCB, actualis en Juillet 2011 ...... 26 Figure 4 - Evolution de la pollution par les PCB dans l'estuaire de Seine ............................... 29 Figure 5 - Reprsentation des diffrentes toxicits .................................................................. 33 Figure 6 - Phylognie des champignons ................................................................................... 41 Figure 7 - Ecologie des champignons ...................................................................................... 42 dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 Figure 8 - Cycle catalytique de LiP .......................................................................................... 52 Figure 9 - Cycle catalytique de la MnP .................................................................................... 53 Figure 10 - Cycle catalytique des laccases ............................................................................... 54 Figure 11 - Activit de la NaR dans la dgradation du PCB-153............................................. 56 Figure 12 - Voie mtabolique propose pour la dgradation des PCB par les champignons ligninolytiques .......................................................................................................................... 58 Figure 13 - Principaux mcanismes impliqus dans la dgradation des PCB chez les champignons ligninolytiques .................................................................................................... 59 Figure 14 - Voie mtabolique propose pour la dgradation du PCB-3 par T. mucoides ........ 61

Liste des Tableaux :


Tableau I - Caractristiques physico-chimiques de PCB ......................................................... 18 Tableau II - Principales utilisations des Aroclors 1242, 1254 et 1260 ..................................... 20 Tableau III - Demi-vies suggres pour les PCB dans les matrices environnementales ......... 23 Tableau IV - Facteurs dquivalence toxique (TEF) des substances de type dioxine .............. 32 Tableau V - Diffrentes techniques existant pour le traitement des sols et sdiments pollus aux PCB .................................................................................................................................... 40 Tableau VI - Diversit fongique et dgradation des PCB ........................................................ 43 Tableau VII - Quelques essais de biodgradation de PCB en solution simples ou complexes par les pourritures blanches en milieu liquide .......................................................................... 47
10

Tableau VIII - Essais de minralisation en milieu liquide ....................................................... 49 Tableau IX - Enzymes ligninolytiques intervenant dans la dgradation des PCB ................... 51 Tableau X - Principales enzymes intracellulaires intervenant dans la dgradation des PCB... 55 Tableau XI - Principaux essais de biodgradation des PCB par les champignons filamenteux en milieu liquide ....................................................................................................................... 60 Tableau XII - Principaux essais de mycoremdiation dans le sol ............................................ 64

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DFINITIONS ET ACRONYMES

AFSSA : Agence Franaise de Scurit Sanitaire des Aliments. Dsormais remplac par lANSES ANSES : Agence Nationale de Scurit Sanitaire de l'Alimentation, de l'Environnement et du travail. Aw : Activity of water, activit de l'eau. Elle quantifie la disponibilit de l'eau. Ce rapport, infrieur ou gal 1, peut tre assimil l'humidit relative du milieu. AXELERA : ple de comptitivit industriel et scientifique dans les domaines de la chimie et de lenvironnement, bas en Rhne-Alpes. CBA : Chlorobenzoic Acid ou Acide(s) chlorobenzoque(s) dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 CEMAGREF : Centre national du Machinisme Agricole, du Gnie Rural et des Eaux et Forts. Dsormais remplac par lIRSTEA (Institut national de Recherche en Sciences et Technologies pour lEnvironnement et lAgriculture). CIRC : Centre International de la Recherche sur le Cancer CITEPA : Centre Interprofessionnel Technique dEtude de la Pollution Atmosphrique CMC : Concentration Micellaire Critique CYP 450 : Cytochrome P 450 DDT : Dichloro-Diphnyl-Trichlorothane DJT : Dose Journalire Tolrable DMTP : Dose Mensuelle Tolrable Provisoire HAP : Hydrocarbure Aromatique Polycyclique INVS : Institut National de Veille Sanitaire IUPAC : International Union of Pure and Applied Chemistry KO/W : Coefficient de partage octanol/eau. LiP : Lignine Peroxydase MnP : Manganse Peroxydase NaR : Nitrate Rductase NOEL : No Observed Effect Level OMS : Organisation Mondiale de la Sant PCB : Polychlorobiphnyles POP : Polluants Organiques Persistants PCBi : PCB indicateurs galement dits rglementaires PCB-DL : PCB Dioxine-Like ou PCB de type dioxine
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PCB-NDL : PCB non Dioxine-Like PCDD : Polychlorodibenzo-dioxines, ou dioxines PCDF : Polychlorodibenzo-furanes, ou furanes PNSE : Plan National Sant Environnement Ppm : partie par million (10-6). Equivaut 1 mg/kg ou 1 g/g en masse, et 1 mg/L en concentration REACH : Registration Evaluation Authorization of Chemical (enregistrement, valuation, autorisation et restriction des produits chimiques) STEP : station dpuration T1/2 : Demi-vie. Cest la dure au bout de laquelle la quantit initiale d'une substance a diminu de moiti (que ce soit par dgradation naturelle dans lenvironnement ou biologique dans un organisme) dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 TCDD : 2,3,7,8-Ttrachlorodibenzo-para-dioxine ou dioxine de Seveso. TEF : Toxic Equivalent Factor (facteur dquivalence toxique) TEQ : Toxic Equivalent Quantity (quantit quivalente de toxicit) TNT : Trinitrotolune VTR : Valeurs Toxicologiques de Rfrence

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INTRODUCTION

Les polychlorobiphnyles (PCB) appartiennent aux polluants les plus rpandus et les plus rmanents. Ils ont t classs au sein des polluants organiques persistants (POP), parmi lesquels figurent notamment les HAP, le DDT et les dioxines. Dautre part, les PCB sont responsables deffets nocifs sur les organismes, et constituent un risque sanitaire. Face ces enjeux, les Etats se mobilisent et sengagent par la Convention de Stockholm (2001) rduire leurs missions de PCB, ainsi qu dpolluer lenvironnement. En Union Europenne, le rglement n850/2004 dcoule de cette convention. La France quant elle, a mis en place un plan national daction sur les PCB qui sinscrit dans les Plan Nationaux de Sant-Environnement (PNSE 1 & 2). Ainsi, les quipements contenant des concentrations dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 suprieures 500 mg/kg de PCB sont en cours de dcontamination. Le programme de recherche applique PCB dAXELERA sinscrit galement dans ce contexte. Il comprend quatre axes (1) : Mettre au point des techniques de dosages plus fiables et moins coteuses des PCB Comprendre les processus de transfert de PCB entre les diffrentes matrices. Faire le recensement des techniques de dpollution du sol et des sdiments disponibles, et mettre au point des techniques de dpollution alternatives moins coteuses que celles existant actuellement, Fournir un outil global daide la dcision pour les collectivits locales. Lobjectif de ce travail de thse est dune part de prsenter les enjeux environnementaux et sanitaires lis la pollution par les PCB. Et dautre part de prsenter une solution potentielle base sur une technologie alternative de dpollution utilisant les performances mtaboliques des champignons saprophytes (tudie dans le programme dAXELERA). Dans une premire partie, nous nous intresserons aux caractristiques qui ont rendu massif lusage des PCB. Nous dcrirons lampleur de cette utilisation, afin de mieux comprendre ltendue de leur distribution dans lenvironnement. Nous dresserons ensuite ltat des lieux de la pollution par les PCB, ses tiologies et son volution, avec un focus sur le cas de la France. Nous exposerons galement ltat actuel des connaissances concernant les risques sanitaires lis aux PCB, notamment en matire de toxicit et dexposition des populations.
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Dans une deuxime partie, nous prsenterons une solution de dpollution qui pourrait potentiellement tre envisage pour faire face aux enjeux prcdemment dcrits : la mycoremdiation. Nous exposerons dans un premier temps les capacits des champignons dgrader les PCB et les espces concernes. Pour chaque cas de figure, nous dcrirons les mcanismes mtaboliques impliqus lorsquils sont connus. Dans un second temps, nous dcrirons laspect concret de la mycoremdiation et les pistes explorer pour la mettre en place.

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Premire Partie : Les enjeux environnementaux et sanitaires

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1.
1.1.

Proprits et utilisations des PCB


Structure molculaire et nomenclature

Les Polychlorobiphnyles (PCB) sont des xnobiotiques appartenant la famille des organochlors polycycliques. Ils prsentent une structure molculaire commune (Figure 1) constitue de deux cycles aromatiques substitus par des atomes de chlore (1 10). Le nombre et la position des atomes de chlore sur les phnyles (ortho, meta, para) vont donner lieu 209 combinaisons thoriques de PCB appeles congnres.
Figure 1 - Structure molculaire des PCB (avec 1 x + y 10) (2)

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Les diffrents congnres sont numrots de 1 209 selon lInternational Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC) (Annexe A). Plus le congnre a un numro lev, plus il est chlor. Les isomres, cest--dire les congnres ayant le mme nombre de chlores, sont rassembls en groupes homologues. Les PCB sont ainsi classs en (mono-di-tri-tetra-pentahexa-hepta-octa-nona-deca)-chlorobiphnyles. Certains PCB ont une structure molculaire plane dans lespace : ils sont dits coplanaires. Cette particularit concerne les congnres substitus uniquement en meta et para. (35)

1.2.

Proprits Physico-chimiques La substitution datomes de chlore sur les deux noyaux aromatiques confre aux PCB

une grande stabilit chimique et thermique, donc une grande persistance dans lenvironnement. Les PCB ne se dcomposent qu des tempratures suprieures 300C (6) en produisant de lacide chlorhydrique, du dioxyde de carbone et de leau. La pyrolyse des
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PCB est optimale une temprature suprieure 650C. Si la combustion a lieu dans des conditions de tempratures infrieures en prsence doxygne, il y aura alors formation de polychlorodibenzo-dioxines (PCDD) et de polychlorodibenzo-furanes (PCDF) (6). La structure molculaire des PCB explique galement le fait quils soient dune part peu solubles dans leau et solubles dans les huiles ainsi que la plupart des solvants organiques, et dautre part peu volatils. La volatilit et lhydrosolubilit diminuent avec le degr de chloration (5) (Tableau I).

Tableau I - Caractristiques physico-chimiques de PCB (3,6)

Nom Courant NCAS (Chemical Abstracts Service) dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 Formule brute Masse molaire Densit Pression de vapeur saturante Solubilit dans leau 25C Log KO/W

Polychlorobiphnyles (PCB) 1336-36-3 C12H(10-n)Cln 154,1 493,7 1,15 1,58 4,06x10-3 7,71 x10-5 mmHg 0,007 5,9 mg/L 2,8 7,14

Le coefficient de partage octanol/eau (Log KO/W) des PCB varie galement en fonction de leurs degrs de chloration et est plus lev pour le PCB dcachlor. Ce coefficient dcrit la distribution lquilibre dune molcule entre la phase apolaire (octanol) et la phase polaire (eau), le solvant octanol ayant des proprits similaires aux membranes lipidiques des cellules. Ce coefficient constitue une rfrence pour tudier in vitro la capacit dune molcule franchir les membranes biologiques et se bioaccumuler dans les organismes vivants. A partir de KO/W > 3 on considre que la molcule est bioaccumulable (5).

1.3.

Synthse

La production industrielle de PCB consiste en une chloration chaud de biphnyle par du chlore anhydre en prsence dun catalyseur, le chlorure de fer. Suivant les conditions de raction, en particulier le temps de contact des molcules dans le racteur, le degr de chloration varie de 21 68 % (7). Compte tenu des contraintes thermodynamiques de la raction de chloration et des contraintes de configuration spatiale des PCB, seuls environ 150
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congnres sont synthtisables dans les conditions de fabrication industrielle sur les 209 congnres thoriques (5). Le produit de cette synthse est un mlange dune cinquantaine de congnres et de petites impurets chlores, notamment le trichlorobenzne, les polychloro-naphtalnes, les PCDF ou encore les PCDD (7,8). Les mlanges de PCB obtenus lors de la synthse industrielle se prsentent sous la forme de liquides huileux odeur aromatique caractristique. Selon leur teneur en chlore, ils sont jauntres ou incolores, et plus ou moins visqueux voire rsineux (6).

1.4. dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 1.4.1.

Applications commerciales et industrielles

Applications industrielles des PCB

Les PCB ont t une rvolution pour la chimie. Ces produits miracles ont connu des applications multiples grce leurs proprits physico-chimiques particulires. Ils ont t trs largement utiliss entre 1930 et 1980 en milieux ouverts dits dispersifs (21 %), semiouverts (10 %) et en milieux clos (69 %) jusqu leur interdiction (11). Les PCB ont t utiliss seuls, mlangs des solvants ou en additifs (9). Le terme Askarel est employ pour dsigner de faon gnrique tous les liquides contenant des PCB. Les diffrents Askarels commercialiss ont des teneurs en chlore diffrentes, qui influencent sur leurs proprits physiques (8). La firme Monsanto & Co a brevet une gamme dAskarels sous le nom commercial Aroclor . Les Aroclors ont une nomenclature spcifique faite de quatre chiffres. Les deux premiers chiffres 12 indiquent que le mlange contient du biphnyle, et les deux derniers chiffres indiquent la teneur moyenne en chlore du mlange. Les principaux Aroclors sont les 1221, 1242, 1248, 1254 et 1260 qui contiennent respectivement 21, 42, 48, 54 et 60 % de chlore (2,8). Lexception de cette nomenclature est lAroclor 1016 qui est en ralit un distillat de lAroclor 1242. Dans cette thse, on se focalisera sur les Aroclors 1242, 1254 et 1260, qui ont t les plus utiliss (Tableau II). Les compositions de ces Aroclors sont consultables en Annexe B.

Les PCB ont t principalement utiliss pour leurs proprits dilectriques (isolants lectriques) en systmes ferms. On les retrouve ainsi dans les transformateurs lectriques sous forme dhuiles isolantes, dans les condensateurs des habitats collectifs, des installations
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industrielles et tertiaires, et galement dans les appareils usage domestique comme llectromnager, ou encore dans les moteurs de vhicules (5,9). Les PCB ont t aussi largement utiliss pour leur proprits adhsives en systmes dispersifs (ouverts) dans les encres (reprographie), les papiers autocollants, les textiles synthtiques, les linolums, les peintures, les cbles, les cordes, les adhsifs, le caoutchouc, les joints disolation et les mastics, les PVC ou encore dans certains carburants (5,9). La longvit exceptionnelle des Askarels, due leur grande stabilit thermique et chimique, procurait un gage de durabilit aux quipements dans lesquels ils taient employs. Paradoxalement, cest cette qualit qui est lun des inconvnients majeurs des PCB (5). Leur trs faible inflammabilit a conduit un usage des Askarels comme ignifugeants en systme dispersif. Cette caractristique, associe leur pouvoir isolant, leur permet de transmettre la chaleur dune rsistance. Cest pourquoi les Askarels ont t le fluide caloporteur le plus dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 utilis entre 1950 et 1980 dans les systmes de refroidissement (milieux semi-ouverts) (5,9,11). Leur rsistance loxydation, associe leurs proprits plastifiantes (viscosit) et lubrifiantes, ont galement favoris leur application comme revtement antioxydant notamment dans les turbines, ou encore comme huiles de lubrification dans lusinage de mtaux (5).

Tableau II - Principales utilisations des Aroclors 1242, 1254 et 1260 (8)

20

1.4.2.

Commercialisation

La production industrielle dbute en 1929 aux Etats-Unis par la firme Monsanto & Co., qui conserve son quasi-monopole du march en vendant des licences de production en Europe (12). On estime la production mondiale 1,3 million de tonnes, dont prs de 400 000 tonnes seraient disperses dans lenvironnement. La production franaise est quant elle estime 180 000 tonnes : elle est le 3me producteur mondial derrire les Etats-Unis et la Russie, juste devant lAllemagne (10,13). Les deux sites franais de production de PCB, qui taient situs proximit de Grenoble dans les communes de Jarrie et Pont-de-Claix, ont t en activit jusquen 1987 (14). Les Aroclors ont t commercialiss seuls puis mlangs des solvants pour donner dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 des nouveaux mlanges commerciaux (Asbestol, Abuntol, Inerteen, Therminol, Pyralne). Monsanto & Co. a galement vendu des licences de production en Europe, o les Aroclors sont retrouvs sous de nouvelles dnominations commerciales selon les pays et les firmes exploitantes. (Sovol, Kanechlor, Fenclor) (9) (Annexe C). Les tats-Unis, lEurope et le Japon ont t de grands utilisateurs de PCB. La France est particulirement concerne en raison de sa trs forte lectrification notamment dans les domaines de lhydrolectricit et du nuclaire. De plus, ces pays ont connu une forte industrialisation durant lre des PCB, et plus particulirement pendant les 30 glorieuses (Figure 2).

21

Figure 2 - Estimation de l'usage mondial cumul des PCB (en tonnes) (10)

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Leurs effets nfastes tant jusqualors ignors, les PCB ont t manipuls sans prcautions et disperss dans lenvironnement. Du fait de leur rmanence, ils sont retrouvs y compris dans les organismes, o ils sont responsables deffets toxiques.

2.
2.1.

Les PCB dans lenvironnement


Rpartition des PCB dans les cosystmes

Les PCB sont prsents dans tous les compartiments des cosystmes. Les congnres les moins chlors (plus volatils) se retrouvent dans lair par volatilisation, notamment le PCB28 qui est le plus abondamment retrouv dans latmosphre (15). On retrouve galement les PCB dans leau mais du fait de leur trs faible solubilit, ils sont surtout lis aux particules en suspension et aux sdiments fins, qui jouent un rle majeur dans la contamination des poissons (5,16). Le sol et les sdiments (marins et fluviaux) sont les compartiments les plus contamins. En raison du lessivage des sols pollus par les eaux de pluies, les PCB se concentrent dans les sdiments, en particulier ceux riches en matires organiques (17,18). Les concentrations en PCB dans les sdiments sont corrles positivement avec celles dautres polluants, notamment les mtaux lourds (Cadmium, Plomb, Nickel et Zinc) (18). Les mlanges de PCB retrouvs dans ces diffrents cosystmes sont qualitativement et quantitativement diffrents des mlanges commerciaux : en effet, ils dpendent de laffinit
22

et des demi-vies des diffrents congnres pour chacun des milieux (5). Le temps de demi-vie (t1/2) des PCB dans les matrices environnementales peut aller de quelques jours plusieurs annes (Tableau III), en fonction des diffrents mcanismes de dgradation naturelle.
Tableau III - Demi-vies suggres pour les PCB dans les matrices environnementales ( a(19) et b(20,21))

N du congnre PCB-8 PCB-28 PCB-52 PCB-101 PCB-153 PCB-180

Groupe homologue Di-CB Tri-CB Ttra-CB Penta-CB Hexa-CB Hepta-CB

Air a 1 semaine 3 semaines 2 mois 2 mois 8 mois 8 mois

Eau b 4 mois 14 mois 14 mois 3,5 ans 6 ans 6 ans

Sol b 3 semaines 8 mois 2 ans 6 ans 115 ans 195 ans

Sdiments b 8 mois 2 ans 6 ans 12 ans 20 ans 20 ans

dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

Les PCB retrouvs dans lenvironnement subissent une dgradation naturelle. Dans lair et leau, les mcanismes de dgradation des PCB sont abiotiques : il sagit de la photolyse par les UV et dans une moindre mesure loxydation. La photolyse provoque une dchloration prfrentielle des atomes en position ortho qui entraine une concentration des congnres non-ortho-substitus (7). Dans le sol et les sdiments, la dgradation est principalement biotique assure par les micro-organismes (bactries et champignons). Les congnres les moins chlors subissent une biodgradation arobie tandis que les plus chlors subissent une biodgradation anarobie plus lente (22). De plus, dans les sdiments, les congnres faiblement chlors sont moins exposs la photolyse que dans le sol, ce qui explique les diffrences de demi-vies observes.

La grande stabilit et la liposolubilit des PCB leur confrent une tendance saccumuler dans les graisses des organismes vivants (bioconcentration), et se concentrer le long des chaines trophiques (bioamplification) (3). Les organismes aquatiques et les poissons sont particulirement concerns par ce phnomne : les individus les plus gras et les plus gs seront les plus contamins (23). Les poissons dits gras sont fortement accumulateurs de PCB. Il sagit de languille, du barbeau, de la brme, de la carpe et du silure (24).

Les congnres les plus prsents dans les matrices environnementales et biologiques sont arbitrairement considrs comme tant des PCB indicateurs (PCBi). Par exemple, le PCB-153 est le congnre le plus abondant dans les matrices biologiques (25). Il ny a
23

cependant pas encore de consensus scientifique sur la notion de PCBi : six ou sept congnres sont regroups sous cette appellation selon les tudes. Il sagit des congnres n28, 52, 101, 118, 138, 153 et 180. Les publications concernant lexposition alimentaire aux PCB utilisent plutt six congnres en excluant le PCB-118, en raison de son caractre toxicologique diffrent (3,13,26). En outre, la somme des concentrations de ces six PCBi reprsente environ 50 % de lensemble des congnres prsents dans lalimentation. Ceci permet de doser plus facilement et moindre cot la teneur totale en PCB dune denre alimentaire (26). Les seuils de dtection des PCB varient selon la nature de la matrice et des congnres, de la mthode de dosage utilise ainsi que de la concentration des substances interfrentes (dioxines, furanes). lheure actuelle, les limites de dtection varient de 10 100 pg/L pour les chantillons aqueux, de 1 50 ng/kg pour les chantillons solides (boues, dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 sdiments, sols) et les tissus biologiques, et de 10 500 fg/m3 pour lair (27).

Il est nanmoins important de noter les grandes difficults rencontres pour doser les PCB et raliser des analyses comparatives. Premirement, malgr luniformisation et la rglementation des mthodes de dosage, toutes les tudes sont entaches de grosses incertitudes de mesures. Par exemple, pour ltude de lANSES-INVS 2011 sur limprgnation de la population franaise aux PCB, lincertitude de mesure allait de 17,4 % 22,7 % (24) ; pour ltude mene par le Centre Interprofessionnel Technique dEtude de la Pollution Atmosphrique (CITEPA) en 2011 lincertitude de mesure tait de 40 % (28). Plus rcemment, les tudes menes sur la biodgradation par les champignons montrent des incertitudes de dosages pouvant atteindre 12 % (29). Deuximement, les tudes ne prennent pas toujours en compte les mises jour des valeurs de rfrences (notamment toxicologiques) qui interviennent dans le dosage des matrices biologiques. cela sajoutent les difficults lies aux espces animales utilises qui sont variables. Cest pourquoi les donnes de la littrature concernant les PCB sont peu comparables (3,13).

2.2.

Zones gographiques les plus pollues

Les phnomnes de lessivage des sols pollus et/ou de volatilisation atmosphrique des PCB expliquent leur prsence ubiquitaire dans les matrices environnementales. Ces phnomnes expliquent galement la dispersion mondiale des PCB partir de leurs lieux de
24

rejet. Par exemple, des taux non ngligeables de PCB ont ainsi t mesurs dans les neiges en arctique (30). Les rgions les plus touches par la pollution aux PCB sont essentiellement celles ayant une forte activit industrielle. Dans ces rgions, les PCB saccumulent principalement dans les sdiments fluviaux. Ainsi, en Amrique du Nord, les PCB sont majoritairement retrouvs dans les cinq Grands Lacs, le Saint-Laurent, et lHudson. En Europe, le Lac de Rybinsk sur la Volga en Russie, le Lac Zemplnska rava en Slovaquie, le Po et lArrone en Italie, les rivires de Belgique ainsi que la Seine et le Rhne en France sont les plus pollus. En Asie, les rivires et lacs du Japon, la rivire Minjiang en Chine et lEr-Jen Tawan sont les plus concerns. Enfin en Australie la rivire Brisbane est la plus touche. (3,10) A lchelle de la France, les tudes ralises sur les sdiments fluviaux montrent quen plus des bassins du Rhne, des lacs alpins, et de la Seine, le Rhin et la Somme sont fortement dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 pollus par les PCB (Figure 3) (3134). Les concentrations en 7 PCBi mesures dpassent largement certains endroits le seuil de 400 voire 680 g/kg de poids sec de sdiments (33,34). Par exemple, dans la Seine, une teneur en 7 PCBi de 154660 g/kg de poids sec a t mesure dans les sdiments superficiels en 2003 (Annexe D) (32). Les concentrations retrouves dans les poissons de ces milieux sont galement trs leves. Concernant les ports, le plus pollu par les PCB est celui de Marseille devant ceux de Brest, Montpellier et Le Havre (14,18). En revanche, les territoires doutre-mer voient leurs cosystmes relativement prservs vis--vis de la pollution aux PCB, les niveaux mesurs tant proches des seuils de dtection de lordre du ng/kg de sdiments (25).

25

Figure 3 - Atlas franais des sites franais pollus par les PCB, actualis en Juillet 2011 (14)

dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

En rsum, les rgions les plus pollues par les PCB correspondent aux rgions ayant eu une forte activit industrielle dans les annes 30 90.

26

2.3.

Lgislation En France, lusage des PCB en systmes ouverts et semi-ouverts a t interdit avec

larrt du 8 juillet 1975. La production, la mise sur le march des PCB ainsi que leur emploi dans les systmes clos ont t interdits en 1987 avec le dcret du 2 fvrier. Cependant, lusage des transformateurs mis en circulation avant ce dcret, et contenant entre 50 et 500 ppm de PCB a t autoris jusqu leur fin de vie ou leur limination/dcontamination, prvue pour fin 2010 (6,8). Au niveau mondial, des interdictions similaires ont t dcrtes approximativement aux mmes annes. La production de PCB a t dfinitivement stoppe avec larrt de la production russe en 1993 (12). Lors de la convention de Stockholm (2001), le retrait de tous les appareils contenant des PCB a t fix pour 2025 (10). dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

2.4.

Etiologies de la pollution Avant leur interdiction, les PCB ont t rejets dans lenvironnement lors de leur

production (par volatilisation), leur stockage et leur utilisation. La plupart des pollutions massives ont t la consquence de mauvaises pratiques des industriels : dversements, gouttages, pandage et enfouissement des dchets taient des pratiques courantes (9). Lors de lutilisation des PCB en systmes dispersifs (peinture, adhsifs), la contamination est lie cet usage. En systme semi-ouverts (fluide caloporteurs) ou en systme clos (condensateurs, transformateurs) lorigine de la contamination est lie aux manutentions des appareils, ainsi quaux fuites accidentelles (9). Par exemple, les fuites les plus clbres sont laccident de Kyushu au Japon en 1968 baptis Yusho et laccident de Tawan en 1979 baptis Yushen (7). Depuis linterdiction des PCB, les missions dans lenvironnement ont t limites, mais subsistent. On distingue : Les produits secondaires involontaires issus de la combustion : en raison dune combustion incomplte ou de ractions chimiques, des PCB sont rejets involontairement lors de procds thermiques faisant intervenir des matires organiques et des chlores. Ceci concerne principalement les incinrateurs de dchets, la mtallurgie, les combustions rsidentielles (notamment du bois) ainsi que le trafic routier (3537). Les mcanismes de cette production sont encore mal connus (38).
27

Les missions accidentelles : elles sont issues du vandalisme des transformateurs, notamment pour en extraire le cuivre, ainsi que des fuites dans le stockage et la manipulation des contenants de PCB (5).

Les missions provenant des stations dpuration (STEP) urbaines : les quantits de PCB provenant de lpandage agricole des boues de STEP en France sont estimes 40 kg/an en moyenne dans les annes 2000 (32).

Les missions depuis des rservoirs de PCB : elles sont dues aux sources primaires comme les joints, les mastics, et les peintures des annes 70 et 80 (9,10), mais aussi aux sources secondaires comme les sols, les sdiments et les remblais. Par exemple, les PCB sont librs lors de fortes pluies, crues, dragages ou modifications du terrain qui vont brasser les sdiments (5).

Pour tous ces cas de figure, des rejets atmosphriques ou aquatiques sont observs. dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 Les rejets atmosphriques en France mtropolitaine en 2009, ont t estims 58 kg (28), dont 52 % seraient imputables aux industries, notamment les secteurs de la mtallurgie et du traitement des dchets dangereux ; 24 % aux incinrations dordures mnagres et aux centrales thermiques, et enfin 24 % au secteur rsidentiel et tertiaire (combustion de bois, consommation de tabac, utilisation domestique de produits). Plus rcemment, en janvier 2011, lusine Aprochim dans la Mayenne, spcialise dans la dcontamination dappareils contamins par les PCB, a t incrimine pour une pollution atmosphrique importante aux PCB suite des ngligences (14). En ce qui concerne les missions aquatiques industrielles en France, les flux rejets auraient t de 3 kg/an pour les 7 PCBi en 2005 (32). Les principaux secteurs concerns sont la mtallurgie et la chimie (5). Par exemple, lusine Trdi Saint-Vulbas dans lAin, spcialise dans le traitement des dchets pollus aux PCB, est incrimine dans la pollution du Rhne. Les rejets mesurs taient de 2 8 g de PCB par jour (9,33,39). Afin de limiter les missions aussi bien atmosphriques quaquatiques, les gouvernements ont mis en place une rglementation exigeant la pose de filtres, et encourageant la modification des procds industriels, notamment en mtallurgie (36,37).

28

2.5.

Evolution de la pollution

La pollution aux PCB a atteint son paroxysme dans les annes 60 en Europe. Lvolution a ensuite t trs ingale suivant les diffrents pays, mme si la tendance gnrale est la baisse. En France mtropolitaine, les missions atmosphriques de PCB ont diminu de 68 % entre 1990 et 2009. (28). Dans les sdiments fluviaux superficiels qui sont le reflet de la contamination annuelle, on observe une dcroissance globale (Figure 4) qui sexplique par la diminution des missions des PCB depuis leur interdiction. Cependant, cette dcroissance est parfois entache par une remonte brutale de la pollution comme en baie de Seine en 1999. Lorigine de ce pic de pollution est probablement accidentelle (23,32). dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

Figure 4 - Evolution de la pollution par les PCB dans l'estuaire de Seine (40)

La pollution globale par les PCB tend galement dcroitre par le phnomne dattnuation naturelle des PCB, mais dans une moindre mesure. Dautre part, la formation de stocks environnementaux de PCB par sdimentation dissimule la pollution, mais ne la rduit pas (32,41).

29

3.
3.1.

PCB et Risque Sanitaire


Devenir des PCB dans lorganisme (toxicocintique) Labsorption des PCB dpend de la voie dexposition. Ainsi, on distingue lexposition

professionnelle de celle de la population gnrale. Concernant lexposition professionnelle, la voie principale dexposition est linhalation, devant la voie cutane (8). Ces voies dabsorption des PCB sont trs peu documentes. Pour la population gnrale, lalimentation reprsente 95 % de lexposition aux PCB devant lair (environ 5 %), et leau (0,04 %) (8,24). En effet, lHomme est le maillon final de la plupart des chaines trophiques, il est donc particulirement expos aux PCB bioaccumuls par les organismes quil consomme. Lorigine de la contamination par les PCB via lalimentation est diverse. Ainsi, les poissons et dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 les produits de la pche constituent eux seuls 58 % de lexposition alimentaire, les produits laitiers 25 %, les viandes 15 %, et moins de1 % pour les fruits et lgumes (24,42). Chez lenfant, labsorption des PCB se fait majoritairement via lallaitement maternel (24). On estime ainsi que lallaitement contribue 5 % de la charge corporelle en PCB observe lge adulte (17). La distribution des PCB dans lorganisme se ralise majoritairement dans les tissus riches en graisses. Par ordre dcroissant, on observe une rpartition dans les tissus adipeux, puis dans la peau, le foie et la vsicule biliaire, les muscles, et enfin le sang o ils sont transports par les lipoprotines (5,15). De plus, en raison de ses fortes teneurs en matires grasses, le lait maternel concentre galement les PCB : la teneur moyenne en PCB totaux est 0,5 1,5 mg/kg de lipide de lait maternel (5). Dautre part, les PCB saccumulant tout au long de la vie, leurs concentrations sont plus importantes dans les tissus des sujets gs. Dans lorganisme, les PCB sont mtaboliss au niveau du foie par les cytochromes P450 (1A1, 1A2, 2B1, 2B2, 3A) qui sont une famille denzymes capables doxyder les composs organiques en vue de leur limination. Les PCB sont principalement oxyds en mtabolites aromatiques hydroxyls (dihydrodiols et quinones) et soufrs (mthyl-sulfons et glutathion-conjugus). Cette mtabolisation produit des oxydes darnes et des semi-quinones intermdiaires qui peuvent conduire la formation dadduits lADN et lARN. Ces adduits sont des initiateurs dans le processus de cancrogense deux phases dues aux substances chimiques (43). Llimination des PCB et de leurs mtabolites seffectue majoritairement via les selles, et dans une moindre mesure via les urines. Le lait maternel est galement une voie majeure dlimination des PCB lors de lallaitement. En effet, on observe une diminution de 20 % de
30

la charge totale en PCB de la mre aprs 3 mois dallaitement (5). Les congnres les plus chlors, moins mtaboliss et excrts, saccumulent plus dans lorganisme. Ainsi, la demivie des PCB dans lorganisme varie de 0,5 23 ans en fonction de leur degr de chloration. Dautre part, les paramtres du sujet (ge, sexe, poids, masse lipidique) vont influencer ces demies-vies (8,17,24). Enfin, les mtabolites fortement chlors saccumulent galement dans lorganisme (43).

3.2.

Toxicit des PCB

Une douzaine de congnres rassemblant des congnres non-ortho substitus (coplanaires) et mono-ortho substitus sont considrs comme dioxin-like (PCB-DL), car dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 ils prsentent des proprits structurales et toxicologiques similaires aux dioxines. En effet, la toxicit des dioxines (PCDD, PCDF et PCB-DL) est lie leur affinit avec le rcepteur Ah (aryl-hydrocarbone) (44). La 2,3,7,8-ttrachlorodibenzo-para-dioxine (TCDD), ou dioxine de Seveso, est la plus toxique de cette famille (5). Elle est en outre identifie comme cancrogne certain pour lhomme (classe dans le groupe 1 par le CIRC) (43). Dans les matrices environnementales comme biologiques, les PCB-DL sont prsents en mlanges avec les PCDD et les PCDF. Leurs teneurs sont mesures de manire indissociable en quivalent toxique (TEQ), chaque congnre tant pondr par un facteur dquivalence toxique (TEF) par rapport la TCDD (TEFTCDD = 1) (45) :

Les TEF ont t rviss par lOMS en 2005, mais certaines publications rcentes font encore rfrence aux TEFOMS 1998 (Tableau IV).

31

Tableau IV - Facteurs dquivalence toxique (TEF) des substances de type dioxine (4,43)
IUPAC # Groupe dhomologues Groupe de Substitutions non-ortho non-ortho non-ortho non-ortho mono-ortho mono-ortho mono-ortho mono-ortho mono-ortho mono-ortho mono-ortho mono-ortho Nom IUPAC 3,3',4,4'-Tetrachlorobiphenyl 3,4,4',5-Tetrachlorobiphenyl 3,3',4,4',5-Pentachlorobiphenyl 3,3',4,4',5,5'-Hexachlorobiphenyl 2,3,3',4,4'-Pentachlorobiphenyl 2,3,4,4',5-Pentachlorobiphenyl 2,3',4,4',5-Pentachlorobiphenyl 2,3',4,4',5'-Pentachlorobiphenyl 2,3,3',4,4',5-Hexachlorobiphenyl 2,3,3',4,4',5'-Hexachlorobiphenyl 2,3',4,4',5,5'-Hexachlorobiphenyl 2,3,3',4,4',5,5'-Heptachlorobiphenyl TEF OMS-1998 0.0001 0.0001 0.1 0.03 0.0001 0.0005 0.0001 0.0001 0.0005 0.0005 0.00001 0.0001 1 1 0.1 0.1 0.1 0.01 0.0001 0.1 0.05 0.5 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.0001 TEF OMS-2006 0.0001 0.0003 0.1 0.03 0.00003 0.00003 0.00003 0.00003 0.00003 0.00003 0.00003 0.00003 1 1 0.1 0.1 0.1 0.01 0.0003 0.1 0.03 0.3 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.0003

dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

PCB-DL non-ortho substitus 77 tetra-CB 81 tetra-CB 126 penta-CB 169 hexa-CB PCB-DL mono-ortho substitus 105 penta-CB 114 penta-CB 118 penta-CB 123 penta-CB 156 hexa-CB 157 hexa-CB 167 hexa-CB 189 hepta-CB Polychloro-dibenzodioxines (PCDD) 2,3,7,8-TCDD tetra-CDD 1,2,3,7,8-PeCDD penta-CDD 1,2,3,4,7,8-HxCDD hexa-CDD 1,2,3,7,8,9-HxCDD hexa-CDD 1,2,3,6,7,8-HxCDD hexa-CDD 1,2,3,4,6,7,8-HpCDD hepta-CDD OCDD octa-CDD Polychloro-dibenzodifurannes (PCDF) 2,3,7,8-TCDF tetra-CDF 1,2,3,7,8-PeCDF penta-CDF 2,3,4,7,8-PeCDF penta-CDF 1,2,3,4,7,8-HxCDF hexa-CDF 1,2,3,7,8,9-HxCDF hexa-CDF 1,2,3,6,7,8-HxCDF hexa-CDF 2,3,4,6,7,8-HxCDF hexa-CDF 1,2,3,4,6,7,8-HpCDF hepta-CDF 1,2,3,4,7,8,9-HpCDF hepta-CDF OCDF octa-CDF

Les PCB-DL ont des TEF globalement plus faibles que les PCDD et les PCDF mais sont prsents en plus grande quantit dans lenvironnement. Ainsi, ils contribuent environ aux de la TEQ totale (24). Le congnre le plus contributeur aux TEQ des PCB-DL est le PCB126. En effet, il reprsente 70 % du TEQOMS 2005 des PCB-DL dans les anguilles et 80 % dans les autres poissons (46). Dautre part, le PCB-118, qui est la fois un PCB-DL et un PCBi, est trs prsent dans lenvironnement. Les PCB non dioxin-like (PCB-NDL) correspondent tous les autres congnres. Ils agissent via un mcanisme daction diffrent de celui des dioxines (5), et sont retrouvs en quantit plus importante dans lenvironnement et les organismes (45). La somme des PCBi non dioxine-like correspond environ 50 % des PCB totaux dans les matrices alimentaires (26).

32

3.3.

Effets toxiques des PCB

Les PCB sont responsables de toxicits aigus et chroniques sur les organismes vivants (Figure 5). Toutefois, seuls les effets observs sur la sant humaine seront rsums dans cette thse. La toxicit aigu a t largement tudie lors des accidents de Yusho (Japon) et Yushen (Taiwan), qui ont touch respectivement 1800 et 2000 personnes (7). Les personnes contamines ont ensuite fait lobjet dun suivi long terme, afin de dcrire la toxicit chronique des PCB. De plus, des tudes de cohortes associant dosage srique des PCB et incidence de certaines pathologies, ont t ralises dans les rgions les plus fortement contamines, notamment dans la rgion des Grands Lacs aux tats-Unis.

Figure 5 - Reprsentation des diffrentes toxicits

dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

3.3.1.

Toxicit aigu Une exposition accidentelle une faible dose de PCB, sur une courte dure, na pas de

consquences graves dmontres. En revanche, une exposition aigu forte dose peut entrainer court terme une chloracne (irritations de la peau, eczma, atteinte acniforme) et des effets oculaires (irritations et hyperscrtion des glandes lacrymales), et plus rarement des troubles hpatiques (cf. toxicit chronique), des bronchites chroniques, maux de tte, vertiges, dpression, des troubles de la mmoire et du sommeil, et de la nervosit (7).

33

3.3.2.

Toxicit chronique La toxicit des PCB est essentiellement lie laccumulation dans lorganisme de ces

composs sur le long terme (17). Des troubles hpatiques sont constats, notamment une augmentation des transaminases et des triglycrides hpatiques, une perturbation des taux de cholestrols et une augmentation de la mortalit par cirrhose du foie (22). Les PCB affectent le systme immunitaire, par une rduction de la rponse immune notamment chez lenfant expos in utero et pendant lallaitement (22,47). On observe galement une frquence plus leve des infections respiratoires telles que les bronchites chroniques (7). Au niveau du systme endocrinien, on observe une perturbation des fonctions thyrodiennes (goitre) et oestrogniques (cycles menstruels irrguliers) (7). dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 Chez les jeunes enfants exposs pendant la grossesse et lallaitement, les PCB ont des effets ngatifs sur leur dveloppement mental et moteur. Une diminution du QI moyen, ainsi quune rduction des capacits de mmorisation, dapprentissage et de reconnaissance dobjets ont t dmontrs (22,47). Il sagit, dans ltat actuel des connaissances, des effets les plus critiques observs chez lhomme, car ils apparaissent aux niveaux dexposition les plus bas (17). Ces effets seraient dus aux PCB-NDL (48). Dautres troubles ont t rapports, cependant le lien de causalit avec lexposition chronique aux PCB nest pas clairement dmontr. En effet, les tudes toxicologiques sont perturbes par la prsence dautres polluants mlangs aux PCB (PCDD, PCDF, mtaux lourds et autres POP) (17). Les PCB favoriseraient lapparition de troubles de la fertilit chez lhomme (22), de diabte de type 2 (47) et de maladies neurodgnratives (maladie de Parkinson, dmence) (4749). De plus, il existe peu de donnes sur la responsabilit du type de PCB (dioxin-like ou non dioxin-like) dans les effets toxiques rapports. Nanmoins, il est possible daffirmer que les PCB-NDL sont responsables deffets neurotoxiques (voie GABAergique) (48), immunotoxiques et endocrines (41). Laccumulation de PCB sur le long terme est galement responsable de cancers. Cependant, seul le PCB n126 a t clairement class comme tant cancrogne pour lhomme (groupe 1) par le CIRC en 2009 (43). Son activit cancrogne se traduit par une augmentation de lincidence des cancers des voies biliaires, du poumon, de la muqueuse orale et du rein (50). Son mcanisme de cancrogense est le mme que celui de la TCDD (43). Les autres PCB sont classs comme cancrognes probables pour lhomme (groupe 2A) par le CIRC depuis 1987 pour les cancers hpatobiliaires (foie, voies biliaires et pancras) (43,51).
34

Leur rle est encore dbattu pour le cancer de la prostate du fait de leur activit perturbatrice endocrinienne (47). Enfin, certains PCB les plus chlors (n156, 180 et 194) ont t rcemment associs une augmentation du risque de dveloppement de lymphome non Hodgkinien (43,47,52). Mais ici encore la cancrognicit des PCB est difficile dmontrer en raison de la haute cancrognicit avre des PCDD et des PCDF, avec lesquels ils sont mlangs.

3.4. 3.4.1. dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

Exposition et imprgnation de la population franaise

Exposition de la population franaise Lexposition humaine aux PCB est estime via les dclarations dhabitudes

alimentaires, les dosages des PCB dans les aliments et limprgnation des populations. Les poissons sont la principale source dexposition aux PCB : Les poissons deau douce sont plus contamins mais sont moins frquemment consomms par la population gnrale. Ainsi, les pcheurs en eau douce, professionnels et amateurs, sont les populations les plus exposes aux PCB. Ils reprsentent 2,5 % de la population franaise (24). Les PCB sont des micropolluants. En effet, ils ont des effets toxiques sur lenvironnement et les organismes vivants des concentrations trs faibles de lordre du ppm ou du millime de ppm (3). A lheure actuelle, il est impossible de dfinir au niveau individuel une relation entre une dose de PCB absorbe et un effet sanitaire (22). Cependant, lOMS a tabli des doses dexposition tolrables provisoires, qui correspondent aux doses pour lesquelles aucun effet nest observ (no observed effect level ou NOEL) : Pour les PCB-DL, les dioxines et les furanes, la dose mensuelle tolrable provisoire (DMTP) est 70 pg TEQOMS 98/kg de poids corporel/mois, soit une dose journalire tolrable (DJT) de 2,33 pg TEQOMS 98/kg de poids corporel/jour (17). Pour les PCB totaux, la DJT est 20 ng/kg de poids corporel/jour, soit environ 10 ng/kg de poids corporel/jour pour la somme des six PCBi (17). Lexposition de la population franaise suit la tendance de la contamination environnementale. A consommation gale, les populations actuelles sont beaucoup moins exposes aux PCB que pendant les annes 60 80 (24). Cependant, selon lANSES, 5 % de la population franaise a des valeurs dexposition suprieures aux DJT (42). Le risque sanitaire
35

ne peut donc pas tre cart, justifiant la ncessit de poursuivre les efforts pour diminuer les expositions alimentaires.

3.4.2.

Imprgnation de la population franaise Limprgnation est la teneur en PCB dans lorganisme : le sang (lipides plasmatiques)

et le lait en sont les biomarqueurs. Elle est le reflet de lexposition aux PCB et rsulte de leur accumulation au fil du temps. Les autorits sanitaires franaises ont dfini des valeurs seuil dimprgnation critique aux PCB qui correspondent aux teneurs sriques au-dessous desquelles (en ltat des connaissances actuelles) le risque deffet sur la sant induit par les PCB est ngligeable. dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 Toutefois, des valeurs dimprgnation individuelle suprieures ces seuils nimpliquent pas forcment de risque sanitaire (24,53). Les populations risque (notamment neurotoxique) sont les enfants de moins de 3 ans, les femmes allaitantes et les femmes enceintes ou susceptibles de le devenir (adolescentes et fillettes incluses). Pour ces populations, le seuil dimprgnation critique est fix : 700 ng PCB totaux /g de lipides plasmatiques (53) 50 pg TEQ (PCDD, PCDF, PCB-DL)OMS 98/g de lipides plasmatiques (24)

Pour le reste de la population, ce seuil est fix : 1800 ng PCB totaux /g de lipides plasmatiques (53) 80 pg TEQ (PCDD, PCDF, PCB-DL)OMS 98/g de lipides plasmatiques (24) Les facteurs anthropomtriques et sociodmographiques, notamment lge, sont les facteurs qui influencent le plus les variations individuelles dimprgnation aux PCB. Ainsi, les teneurs augmentent de +22 % par tranche de 5 ans (24). En France, limprgnation moyenne de la population en 2007 tait de 480 ng de PCB totaux/g de lipides plasmatiques ce qui est conforme aux normes fixes. Cependant, 3,6 % des femmes en ge de procrer et 0,4 % des adultes dpassaient les seuils dimprgnation critiques. Ces taux sont 4 5 fois suprieurs ceux des populations amricaines et nozlandaises, mais infrieurs ceux des populations tchques, slovaques et des Inuits (54). Il serait judicieux de doser les mtabolites hydroxyls des PCB dans les tudes dimprgnation, car ils sont responsables dune partie non ngligeable des effets sanitaires observs. De plus, leurs taux sriques ne sont pas toujours corrls ceux des PCB (55).
36

3.4.3.

Rglementation alimentaire et Recommandations Afin de rduire lexposition aux PCB, lUnion Europenne a mis en place en 2006 une

rglementation fixant les teneurs maximales en PCB et substances de type dioxines dans les denres alimentaires. Cette lgislation a t mise jour en dcembre 2011, en intgrant les nouveaux TEFOMS
2005

(5658). La surveillance des teneurs est effectue par les autorits

sanitaires. Elle conduit parfois des interdictions de pche et de consommation despces de poissons dans certains cours deau et zones maritimes franaises (Annexe E). Malgr le risque sanitaire que constituent les PCB, lOMS conseille de maintenir lallaitement maternel si possible de manire exclusive pendant les 6 premiers mois, quelque dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 soient les concentrations en PCB, dioxines ou autres POP. En effet, le lait maternel est un aliment nutritif essentiel et les avantages quil procure dpassent les risques encourus. Ses effets bnfiques pour la sant sont psychoaffectifs, immunologiques par une diminution du risque dinfection et dallergies, nutritifs, digestifs ainsi que mtaboliques. Ils se font sentir jusqu lge adulte. Enfin, lallaitement permet une rduction de la mortalit infantile (17,59) Dautre part, compte tenu des bnfices sur la sant quils apportent, lANSES recommande lensemble de la population la consommation de poissons. Ainsi, deux portions de poissons par semaine, dont une forte teneur en omga 3 (poissons gras) sont recommandes, en variant les espces et les lieux dapprovisionnement (24). En revanche, lANSES recommande de limiter la consommation de poissons gras deau douce (anguille, barbeau, brme, carpe, silure) (60): 1 fois tous les 2 mois pour les femmes en ge de procrer, enceintes ou allaitantes ainsi que les enfants de moins de 3 ans, les fillettes et les adolescentes. 2 fois par mois pour le reste de la population.

Selon une modlisation du CEMAGREF concernant la relation entre teneur en PCB dans les sdiments et teneur en PCB dans les poissons, le poisson serait consommable pour des teneurs en 7 PCBi infrieures 2,6 g/kg de poids sec de sdiments. Cependant, ce chiffre a t calcul par rapport la rglementation Europenne de 2006, pour des teneurs maximales en PCB dans les poissons de 8 pg/g TEQOMS 98de poids frais. Dsormais, la teneur maximale tolre dans les poissons est 6,5 pg/g TEQOMS 2005 de poids frais. Donc la teneur en PCB dans les sdiments qui exclue le risque sanitaire est a priori plus basse. Ceci justifie la ncessit de poursuivre la dpollution de lenvironnement. (23,58)
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Deuxime Partie : la mycoremdiation

38

Comme il est dcrit dans la premire partie de cette thse, la pollution par les PCB pose un rel problme de toxicit en raison de la propagation de ces molcules dans lenvironnement et leur transfert dans la chane alimentaire. Face ces situations environnementales chimiquement dgrades, plusieurs stratgies sont utilises et dveloppes pour dgrader les PCB et restaurer les sites pollus (Tableau V). On distingue les mthodes physicochimiques et les mthodes biologiques. Parmi les mthodes physicochimiques, la plus employe est lincinration. Ce procd consiste brler les PCB 1200C. Son principal avantage rside dans le fait quelle est adapte tous types de substrats et permet une dgradation totale ou partielle des PCB. Nanmoins, lincinration nest pas applicables in-situ, est coteuse et gnre certains produits de dgradation toxiques comme les dioxines, les furanes et le benzne (classs cancrignes par le CIRC) (3). dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 Les mthodes biologiques utilisent les capacits de mtabolisation de certains organismes vivants (plantes, bactries, champignons) dgrader les xnobiotiques. Ces mthodes prsentent lavantage dtre applicables in-situ et dtre plus acceptables des points de vues cologiques et conomiques. La phytoremdiation est un procd utilisant la capacit des plantes absorber, stocker voire dgrader les PCB laide des microorganismes de la rhizosphre (61,62). La bioremdiation regroupe les procds utilisant les microorganismes. Les bactries sont les microorganismes les plus tudis pour leurs capacits dgrader les PCB. Les mcanismes impliqus sont bien connus et se font en deux tapes. La premire tape est une dchloration des congnres en position meta et para en conditions anarobies, grce des dshalognases de bactries appartenant principalement au genre Dehalococcoides (6365). La deuxime tape se fait en condition arobie. Elle consiste en oxydations de PCB peu chlors par des dioxygnases de bactries appartenant majoritairement aux genres Burkholderia et Rhodococcus (66). Cette deuxime voie conduit principalement la formation dacides benzoques chlors (CBA), et dans une moindre mesure la minralisation des congnres les plus faiblement chlors (66). Cependant, lefficacit de la bioremdiation bactrienne est limite en raison : i) de la biodisponibilit des polluants qui sont moins accessibles aux enzymes intracellulaires bactriennes (67,68). ii) de la toxicit des PCB vis--vis des bactries, du fait de laccumulation des PCB et des autres polluants auxquels ils sont lis dans le cytoplasme bactrien (68). iii) du caractre inductible des enzymes bactriennes par les polluants. Les faibles concentrations de polluants tant peu inductrices du matriel enzymatique bactrien, il est ncessaire dajouter du biphnyle (toxique) dans le milieu pour pallier ce problme (68).
39

Tableau V - Diffrentes techniques existant pour le traitement des sols et sdiments pollus aux PCB (3)

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1.

Rgne Fongique : dfinition et classification phylogntique


Le rgne fongique constitue un vaste groupe dorganismes diversifis allant des

organismes microscopiques aux macromyctes. Ce sont des organismes eucaryotes htrotrophes caractriss par une paroi constitue de chitine. Ils ont un appareil vgtatif trs simple, le thalle, qui peut tre filamenteux ou levuriforme, et se reproduisent par des spores issues de reproduction sexues et/ou asexues (69). Les champignons occupent une place majeure parmi les microorganismes du sol, par leur rle et leur abondance. En effet, ils interviennent notamment dans les cycles biogochimiques du carbone et de lazote. Dautre part, ils contrlent la transformation de la matire organique et la disponibilit des nutriments (70). Enfin, les champignons reprsentent 75 % de la biomasse microbienne du sol (67). La diversit du rgne fongique est estime environ 1 500 000 espces dont 5 % seulement seraient dcrites (71). Les techniques molculaires apportes ces dernires annes, couples lapproche systmatique, ont permis de mieux comprendre les liens phylogntiques entre les grands groupes taxonomiques. A lheure actuelle, le rgne fongique

40

est divis en cinq Phyla : Chytridiomycota, Zygomycota, Glomeromycota, Ascomycota et Basidiomycota (72) (Figure 6).

Figure 6 - Phylognie des champignons (73)

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GLOMEROMYCETES

La plupart des champignons sont des organismes ncessitant des conditions arobies strictes. Certaines espces tolrent des conditions extrmes : teneur en oxygne de 0,2 %, tempratures allant de -5 +60C, pH de 1 9, et activit de leau (humidit) de seulement 0,65 (73). Ceci explique leur prsence ubiquitaire en milieux terrestre et aquatiques (Figure 7). Les champignons ont des modes de vie diversifis (70) : Les parasites : ils se dveloppent aux dpends dorganismes htes (homme, animal ou plantes) pour lesquels ils peuvent tre pathognes. Les symbiotes : ils se dveloppent en association avec un organisme autotrophe comme une algue (lichen) ou une plante (mycorhize) sapportant des avantages mutuels : la plante fournit du carbone issu de la photosynthse, tandis que le champignon lui fournit des nutriments essentiels issus du sol. Concernant les mycorhizes, on distingue les champignons endomycorhiziens qui forment des vsicules et des arbuscules dans les racines des plantes, et les ectomycorhiziens qui forment des structures mycliennes (rseau de Hartig) autour des racines des vgtaux (74). Les saprophytes : ils se dveloppent aux dpends de la matire organique dorigine animale ou vgtale en dcomposition (75). On distingue les saprophytes ligninolytiques
41

communment appels pourriture blanche (ou White-rot fungi ) en raison de leur capacit dgrader la lignine, et les saprophytes non-ligninolytiques (ou filamenteux).
Figure 7 Ecologie des champignons (67)

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2.

Rgne fongique et dgradation des PCB


Lutilisation des champignons en matire de biotechnologie environnementale na pas

ce jour connu lessor mrit, malgr leurs extraordinaires potentialits mtaboliques. Nanmoins leurs capacits dgrader un grand nombre de polluants de structures varies ont t dmontres en conditions de laboratoire. Ces capacits sont lies leurs quipements enzymatiques riches et varis, notamment les enzymes extracellulaires ligninolytiques. Ces enzymes, peu spcifiques du substrat, sont capables de mtaboliser une large gamme de polluants organiques. De plus, le myclium fongique constitue un pige dans lequel les xnobiotiques saccumulent, devenant les substrats potentiels des systmes enzymatiques intracellulaires (75).

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La mycoremdiation des PCB concerne principalement des espces saprophytiques ligninolytiques et filamenteuses appartenant aux phyla des Basidiomyctes et Ascomyctes. Nanmoins, des cas de biodgradation des PCB par des champignons ectomycorhiziens et des levures ont t galement rapports (Tableau VI).
Tableau VI - Diversit fongique et dgradation des PCB

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2.1. 2.1.1.

Dgradation des PCB par les champignons ligninolytiques

Biodgradation des PCB

lheure actuelle, les espces fongiques les plus efficaces et les plus tudies dans la dgradation des PCB appartiennent la famille des champignons de la pourriture blanche du bois. Il sagit dun groupe physiologique de champignons capables de dgrader la lignine. La lignine est un htropolymre dunits de phnylpropane et de molcules phnoles lies de manire alatoire (75,108). Elle est responsable de la solidit et de la durabilit des arbres. La lignine est mtabolise grce une voie oxydative porte uniquement par les champignons de la pourriture blanche. Cette voie mtabolique ligninolytique est gnralement provoque par un stress nutritionnel comme un dficit en azote, mme si des exceptions sont parfois observes. Phanerochaete chrysosporium (Burdsall, 1974) est lespce modle utilise en mycoremdiation. Son gnome (30Mpb) a t entirement squenc (109), et de nombreux gnes participant lactivit ligninolytique ont t identifis (110). La faible spcificit des enzymes codes par ces gnes vis--vis des substrats, ainsi que leur fort potentiel doxydorduction permettent ce champignon de dgrader une large gamme de polluants organiques :
44

benzne, tolune et xylnes, explosifs n-htrocycliques et nitroaromatiques (TNT), organochlors (chloraliphatiques, chlorolignols, chlorophnols, PCB, PCDD), HAP, pesticides, colorants synthtiques, et polymres synthtiques (67,75,111,112). De plus, la temprature optimale de croissance trs leve (40C) de ce champignon rend son application intressante dans les bioprocds industriels (67). De nombreuses tudes ont montr la capacit de P. chrysosporium dgrader les PCB aussi bien en solutions simples quen mlanges complexes. Ainsi, lorsquil est incub en culture liquide, un taux de dgradation de 90 % en 24 heures a t observ pour le PCB-153 en solution simple 4000 mg/L (113). Concernant les mlanges complexes, Yadav et coll. (1995) ont dmontr que P. chrysosporium dgradait respectivement hauteur de 61, 31 et 18 % en 30 jours les Aroclors 1242, 1254 et 1260 concentrs 10 mg/l. Cependant, un mme congnre est dgrad plus ou dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 moins efficacement selon le type de mlange dans lequel il est prsent. En effet, le PCB-153 est respectivement dgrad hauteur de 37, 0 et 9 % au sein des Aroclors 1242, 1254 et 1260 10 mg/L (96). Ruiz-Aguilar et coll. (2002) ont pour leur part observ une dgradation de 73 % des congnres les plus faiblement chlors dun mlange environnemental proche de lAroclor 1260 600 mg/L en 10 jours (93) (Tableau VII). Dautres espces ligninolytiques ont montr des capacits dans la dgradation des PCB comparables celles de P. chrysosporium. Il sagit notamment de Trametes versicolor (Lloyd, 1921), Bjerkandera adusta (Karsten, 1880), Lentinus edodes (Singer, 1941), Lentinus tigrinus (Fries, 1825), Pleurotus ostreatus (Kummer, 1871), Coriolopsis polyzona (Ryvarden, 1972), et Grifola frondosa (Gray, 1821) (Tableau VII et Annexe F). Parmi ces espces, T. versicolor et L. tigrinus sont particulirement prometteuses. T. versicolor est capable de dgrader en culture liquide 70 % des congnres dun mlange environnemental proche de lAroclor 1260 1800 mg/L (93). L. tigrinus est quant lui capable de dgrader dans le sol 33,6 % dun mlange environnemental proche de lAroclor 1260 700 mg/kg (105). Les taux de dgradation varient selon les espces et les souches (Annexe F). Certaines espces ont galement montr des capacits dgrader certains mtabolites cls des PCB issus de la dgradation bactrienne. Cest le cas de L. tigrinus et de P. ostreatus (98,104).

Cependant la dgradation des PCB par les champignons ligninolytiques est influe par plusieurs facteurs : - la concentration en PCB, qui influence lefficacit de la biodgradation. En effet des concentrations trop leves peuvent savrer toxiques pour les champignons. Par exemple,
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Ruiz-Aguilar et coll. (2002) ont observ une baisse de lefficacit de dgradation par P. chrysosporium partir de 1800 mg/L (93). - le degr de chloration des mlanges de PCB utiliss lors des tudes da biodgradation in vitro a galement un impact fort sur lefficacit des champignons. De manire gnrale, plus il est lev, moins la dgradation est efficace (85,86,102) - un stress nutritionnel caractris par un dficit en azote ( N-limitation ) va favoriser la dgradation des PCB pour certaines espces, linhiber pour dautres ou ne pas avoir dimpact. Ainsi, Kamei et coll. (2006) ont observ une dgradation plus importante du PCB-15 par P. chrysosporium en conditions N-limites (90) que celle obtenue en conditions riches en azote. En revanche, dautres tudes utilisant la mme souche montrent que la teneur en azote du milieu influence peu la dgradation de lAroclor 1242 (96,98). De plus, Cvancarova et coll. (2012) ont observ une dgradation plus faible de lAroclor 1242 en dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 conditions N-limites par Pycnoporus cinnabarinus (Karsten, 1881) (98). Cependant, contrairement aux bactries, aucune spcificit de dgradation des congnres en fonction de la position des chlores sur le noyau biphnyle, napparait clairement chez les champignons ligninolytiques (90,106). Nanmoins, deux tudes ont mis en vidence une dgradation prfrentielle des congnres dans lordre ortho > meta > para chez P. ostreatus (85,102).

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Tableau VII Quelques essais de biodgradation de PCB en solution simples ou complexes par les pourritures blanches en milieu liquide

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Notes : Les taux de dgradation de 0 % sont signals avec un - . Le tableau complet des principaux essais de biodgradation est disponible en Annexe F. Les essais de dgradation dans le sol sont dvelopps dans le paragraphe 3.1. Essais de mycoremdiation dans les sols . 47

2.1.2.

Absorption des PCB dans le myclium fongique

Le myclium des champignons de la pourriture blanche constitue un pige dans lequel les PCB du milieu saccumulent. Ils deviennent ainsi les cibles potentielles des enzymes intracellulaires. Les PCB sont galement transports dans les hyphes au mme titre que les nutriments, parfois jusquaux carpophores o ils peuvent saccumuler. Moeder et coll. (2005), en cultivant P. ostreatus sur de la paille contamine, ont constat que les congnres les plus concerns par les phnomnes dabsorption et de translocation sont ceux qui sont les moins dgrads, savoir les plus chlors et les para-substitus (102). Laccumulation des PCB dans les champignons a une incidence sur leur viabilit : certaines espces sont plus sensibles leur toxicit, tandis que dautres tolrent de plus dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 grandes concentrations de PCB dans le milieu. Ainsi, parmi les souches utilises par RuizAguilar et coll. (2002), la souche de P. ostreatus est moins rsistante 3000 mg/L dAroclor 1260 par rapport celles de P. chrysosporium et T. versicolor (93). Dautre part, labsorption des PCB dans le myclium rend difficile la dmonstration de leur biodgradabilit par les champignons, ncessitant lutilisation de tmoins contenant du myclium tu (99). Le transport et laccumulation de PCB dans les carpophores ne constituerait pas un risque pour les consommateurs, en raison de la minorit du phnomne (102). Ainsi, la consommation de souches comestibles (P. ostreatus, L. edodes) utilises en mycoremdiation de sites pollus aux PCB, ne constituerait pas un risque pour le consommateur.

2.1.3.

Minralisation des PCB

La minralisation est une dgradation complte des PCB en molcules simples telles que CO2, H2O et ions chlorures. Elle constitue un aspect important de la remdiation car elle vite la formation de mtabolites potentiellement toxiques. Cependant, seules quelques espces montrent des capacits de minralisation des PCB (Tableau VIII). De plus, les taux sont faibles (< 16 %), et ce quelques soient les espces, souches ou type de PCB utiliss. Dautre part, le taux de minralisation nest pas forcment corrl avec le taux de dgradation, ce qui suggre lintervention de systmes enzymatiques diffrents de ceux impliqus dans la dgradation (99).
48

Les taux de minralisation des PCB par les champignons ligninolytiques sont comparables ceux obtenus dans la minralisation dautres polluants organiques tels que le TNT, le DDT, la TCDD et les HAP (111,114116), mais infrieurs ceux constats pour les teintures (23,1 48,1 %) (117), et le pentachlorophnol, qui est un fongicide persistant (jusqu 50,5 %) (118). Lefficacit de minralisation diminue avec laugmentation du degr de chloration des congnres (99). Nanmoins, lheure actuelle, aucune spcificit de minralisation en fonction de la substitution des congnres na t rapporte.

Tableau VIII - Essais de minralisation en milieu liquide

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2.1.4.

Mcanismes de dgradation et minralisation

Contrairement dautres polluants organiques tels que les HAP, les mcanismes de dgradation et de minralisation des PCB par les champignons ligninolytiques nont pas encore t clairement lucids. Il est cependant possible daffirmer quils font intervenir simultanment des systmes enzymatiques extracellulaires et intracellulaires qui sont supposs cooprer dans la dgradation des xnobiotiques.

2.1.4.1. Enzymes extracellulaires

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Les enzymes extracellulaires ligninolytiques :

Les enzymes ligninolytiques des pourritures blanches ont une faible spcificit de substrat qui leur permet de dgrader une large gamme de xnobiotiques, via des ractions doxydo-rduction. Cette particularit est facilite par la prsence de mdiateurs rdox (67). On distingue deux groupes denzymes ligninolytiques intervenant dans la mtabolisation des xnobiotiques : les peroxydases (manganse peroxydases et lignine peroxydases) et les laccases (Tableau IX). Cependant, contrairement aux autres xnobiotiques, les avis sont partags concernant limplication des enzymes ligninolytiques dans la dgradation des PCB. Selon certaines tudes, de forts taux de dgradation de PCB ont t corrls avec les taux de production des enzymes ligninolytiques (91). Cependant, dautres tudes ne montrent pas de corrlation entre les activits des enzymes ligninolytiques et le taux de dgradation des PCB (88,89,98). Ceci suggre lintervention dautres enzymes telles que les enzymes intracellulaires. Les enzymes ligninolytiques prsentent un intrt majeur dans la biodgradation des PCB en raison de leur capacit de diffusion dans les matrices extracellulaires. Ceci leur permet ainsi daccder aux composs liposolubles peu disponibles aux enzymes intracellulaires. Ces enzymes font lobjet de recherches intensives en raison de lintrt des industriels pour leur usage en biotechnologie.

50

Leurs productions et scrtions ne sont pas induites par la prsence des polluants. Elles sont classiquement dcrites comme tant induites par un stress nutritionnel, lorsque la teneur en azote du milieu devient limite. Ainsi, un milieu pauvre en azote favorise la scrtion de peroxydases chez P. chrysosporium (93) et de laccases chez P. ostreatus (119). Cependant, des tudes ont montr que des enzymes ligninolytiques pouvaient tre scrtes dans des conditions suffisantes en azote. Ainsi, chez L. edodes, la production de laccases est favorise dans des conditions riches en azote (119). Dautre part, la souche BOSS 5 de B. adusta scrte significativement plus de peroxydases en conditions riches en azote (120). De plus, la proportion des enzymes ligninolytiques varie en fonction des conditions nutritionnelles. Ainsi, L. tigrinus et T. versicolor produisent plutt des peroxydases en dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 conditions pauvres en azote (93,104), tandis quun milieu riche en azote favorise la production de laccases (104,119). Enfin, la production de peroxydases est diminue par lagitation des milieux de cultures liquide (in vitro) tandis que la production de laccases serait plutt favorise par cette agitation (75).

Tableau IX - Enzymes ligninolytiques intervenant dans la dgradation des PCB


Enzymes Taxa fongiques concerns Localisation Mcanisme de raction Potentiel rdox Lignine peroxydase (EC 1.11.1.14) Basidiomyctes, uniquement chez les polyporales Extracellulaire Oxydation ( un lectron, H2O2dpendante) de composs organiques 1,4-1,5V Oxydation directe de composs aromatiques varis, mais inactivation rapide lors de loxydation de phnols. Manganse peroxydase (EC 1.11.1.13) Largement rpandue chez les Basidiomyctes Extracellulaire Oxydation ( un lectron, H2O22+ 3+ dpendante) de Mn en Mn , qui va son tour oxyder les composs organiques. 1,0-1,2V Oxydation de composs 3+ aromatiques varis via Mn . Laccases (EC 1.10.3.2) Ascomyctes et Basidiomyctes Extracellulaire (majoritaire), intracellulaire Oxydation ( un lectron, O2dpendante) de composs organiques 0,4-0,8V Oxydation directe de phnols et composs aromatiques varis. Dchloration de certains organopolluants 2,2-azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6 sulfonic (ATBS), guaiacol, 2,5-xylidine, Veratryl alcool Activit majoritairement en pH acide, rarement en pH neutre ou alcalin (119,122,123)

Commentaires

Mdiateurs rdox

Veratryl alcool, tryptophane

Mn , composs organiques contenant un rsidu-SH, acides gras insaturs et drivs Activit en pH acide (67,108,121)

2+

pH Sources

Activit en pH acide (67,121)

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o Les peroxydases :

La Lignine Peroxydase (LiP) et la Manganse Peroxydase (MnP) seraient les deux hme-peroxydases impliques dans la mtabolisation des PCB. Une troisime peroxydase dcouverte rcemment, la Versatile Peroxydase, est probablement implique dans la dgradation des PCB : il sagit dun hybride de MnP et LiP. Cette enzyme est implique dans la dgradation dautres xnobiotiques, mais aucune preuve de son activit sur les PCB na t dmontre lheure actuelle. Les activits des peroxydases sont dpendantes du peroxyde dhydrogne (H2O2) gnr de manire endogne par dautres enzymes extracellulaires. Ces peroxydases catalysent des ractions doxydation selon le schma suivant : dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 Substrat + H2O2 substrat oxyd + 2 H2O Ainsi, une induction de la production d H2O2 endogne va stimuler lactivit des peroxydases (124). Cependant, un excs dH2O2 et/ou un dficit en mdiateur rdox va rapidement inactiver les peroxydases (108). Dautre part, leur activit est optimale pour des hautes teneurs en O2 (75). La Lignine Peroxydase (Tableau IX) catalyse directement loxydation de structures aromatiques non phnoles de la lignine, et gnre des radicaux aryl cation (104) (Figure 8). Il sagit de la peroxydase fongique la plus puissante au niveau catalytique (121).
Figure 8 - Cycle catalytique de LiP, daprs Covino et coll. (2010) (104)

52

La Manganse Peroxydase (Tableau IX) catalyse loxydation de Mn2+ en Mn3+, qui, stabilis par des chlateurs tels que loxalate et le malonate, oxyde son tour les composs organiques (Figure 9). Il a t dmontr que la MnP est implique dans la minralisation partielle de certains xnobiotiques. Les gnes codant pour la MnP sont plus rpandus dans le rgne fongique que ceux codant pour la LiP. Leur transcription est rgule par la teneur en Mn2+ du milieu (108).
Figure 9 Cycle catalytique de la MnP (108)

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o Les laccases

Les laccases (Tableau IX) sont des glycoprotines contenant quatre ions cuivre. Lactivit des laccases des pourritures blanches peut tre extracellulaire (95-98 %) ou intracellulaire (3-5 %). Elles oxydent les composs phnoliques, produisant ainsi des radicaux aromatiques, en rduisant le dioxygne (O2) en eau (Figure 10). Elles ont galement la capacit de dchlorer les chlorophnols en ortho ou en para (123). Les laccases suscitent particulirement lintrt des industriels pour leur utilisation en biotechnologies, car leur activit ne ncessite pas dH2O2 (122). Dautre part, plusieurs tudes ont clairement dmontr limplication de plusieurs isoformes de Laccases dans la dgradation de mtabolites toxiques des PCB. En effet, elles interviennent dans la dgradation des CBA (122) et dhydroxy-PCB chez T. versicolor et P. ostreatus, les hydroxy-PCB en meta tant plus rcalcitrantes (125,126). De plus, il a t mis en vidence que les laccases produites par Pycnoporus cinnabarinus pouvaient

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dchlorer les Hydroxy-PCB (123) formant des produits se liant avec la fraction humique du sol.

Figure 10 - Cycle catalytique des laccases (122)

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En plus des conditions azotes, la production de laccases dpend galement de la teneur en carbone. Ainsi, une source de carbone comme le glucose, le mannitol ou encore la cellobiose induit en gnral une bonne production de laccases (119). La transcription de laccases est aussi induite par la prsence de mdiateur rdox et de cuivre (Cu2+), cofacteur ncessaire leur synthse. Cependant, de trop fortes concentrations en cuivre vont avoir un effet toxique sur la biomasse fongique. Leur activit est inhibe par de fortes concentrations en mtaux lourds et en halognures, ainsi que par lacide humique et le NaCl (122,127).

Les enzymes extracellulaires non ligninolytiques

Certaines enzymes extracellulaires sont associes aux enzymes ligninolytiques, leur servant de soutien dans cette voie, ou faisant le lien avec les voies de dgradation de la lignocellulose. Certaines de ces enzymes pourraient en outre jouer un rle dans les processus de dgradation des PCB. On distingue : o Les enzymes dont le rle est la production dH2O2 pour les peroxydases. Pour ce faire, ces enzymes oxydent des substrats organiques hydroxyls en aldhydes, ou des aldhydes en acides carboxyliques. Ce groupe comprend la glyoxal oxydase, la superoxyde dismutase, laryl-alcool oxydase et la quinone oxydorductase (75,90,128). Selon Kamei et
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coll. (2006), laryl-alcool hydrolase pourrait galement prendre part la formation de mtabolites PCB-aldhydes partir des Hydroxy-PCB (90). o Les glycosyl hydrolases extracellulaires, qui sont impliques dans la dgradation de la lignocellulose en produisant des composs hydroxyls. Ce groupe comprend notamment lendo--1,4-glucanase, lendo--1,4-xylanase ainsi que la cellobiohydrolase. Ces enzymes pourraient galement tre impliques dans la dgradation des PCB et de leurs mtabolites. Ainsi, lactivit de lendo--1,4-xylanase est corrle dans certaines conditions avec la dgradation des PCB (105). o Certaines dshydrognases extracellulaires impliques dans la dgradation de la lignocellulose, notamment la cellobiose dshydrognase, qui produit des aldhydes (128).

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2.1.4.2. Enzymes intracellulaires

Les enzymes fongiques intracellulaires intervenant dans le catabolisme des xnobiotiques ont une faible spcificit de substrat (67). Leur implication ncessite une biodisponibilit suffisante des PCB (et de leurs mtabolites) afin quils puissent pntrer dans les cellules et tre pris en charge par ces enzymes. lheure actuelle, deux systmes enzymatiques intervenant dans la dgradation des PCB ont t mis en vidence : la nitrate rductase (NaR) et les mono-oxygnases Cytochrome P 450 (CYP 450) (Tableau X). Dautres systmes enzymatiques sont probablement impliqus, mais ils nont pas encore t clairement identifis. Des voies mtaboliques encore incompltes ont t proposes en fonction des mtabolites retrouvs.

Tableau X - Principales enzymes intracellulaires intervenant dans la dgradation des PCB


Enzymes Taxa fongiques concerns Localisation Mcanisme de raction Nitrate rductase Basidiomyctes, Ascomyctes et Zygomyctes Intracellulaire Rduction NAD(P)H-dpendante de composs amins et nitrs, aromatiques ou non, en composs hydroxylamines et composs amins Clivage possible de cycles aromatiques Dchloration de certains organopolluants (67,113) Mono-oxygnases Cytochrome P450 Largement rpandue dans le rgne fongique Intracellulaire Oxydation via lincorporation dun atome doxygne dans un substrat, accompagne de la production dH2O Epoxydation et hydroxylation de structures aromatiques et aliphatiques dune large palette de polluants organiques (67)

Commentaires Sources

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La nitrate rductase

La nitrate rductase (Tableau X), qui est largement rpandue dans le rgne fongique, joue un rle cl dans le cycle de lazote en rduisant le nitrate en ammonium. Elle est connue pour sa capacit dchlorer les chlorophnols. De plus, son implication a t clairement dmontre dans la dchloration des PCB, qui constitue lune des premires tapes de leur dgradation. Ainsi, ils ont observ une dchloration du PCB-153 (2,2,4,4,5,5-HexaCB) par P. chrysosporium en conditions non ligninolytiques. Lutilisation du cofacteur (le molybdne) et de linhibiteur spcifique (le tungstne) de cette enzyme ont confirm sa responsabilit dans la dchloration (113) (Figure 11).

dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

Figure 11 - Concentration de PCB-153 mesure en prsence du cofacteur, le molybdne (Mo) et de linhibiteur, le tungstne (W) de la NaR (113)

Les mono-oxygnases Cytochrome P 450 (CYP 450)

Les mono-oxygnases cytochrome P450 (Tableau X) sont une grande famille diversifie denzymes prsentes dans tous les rgnes vivants. La prsence de multiples gnes codant pour les CYP 450 contribue la puissante polyvalence catabolique des champignons de la pourriture blanche du bois (96,129). Comme chez lhumain, la fonction des CYP 450 fongiques est de catalyser loxydation initiale de molcules organiques, afin de les rendre plus hydrophiles en vue de leur limination. Elles sont responsables dhydroxylations et dpoxydations de nombreux
56

polluants organiques. Elles produisent ainsi des mtabolites hydroxyls ou mthoxyls, ainsi que des oxydes darnes facilitant louverture des cycles aromatiques (130). Certains de ces mtabolites vont ensuite subir de multiples oxydations conduisant parfois une minralisation des substrats (67). Kamei et coll. (2006) ont mis en vidence la prsence de PCB mono-mthoxyls parmi les mtabolites de dgradation de PCB-DL par Phlebia brevispora (Nakasone, 1981), suggrant fortement lintervention des CYP 450. En effet, des mtabolites similaires impliquant clairement les CYP 450 ont t mis en vidence dans la dgradation dautres organopolluants, notamment les TCDD (106). Dautres tudes portant sur lidentification des mtabolites produits lors de la dgradation des PCB par diffrentes espces, ont permis de proposer une voie de leur dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 mtabolisation par les champignons de la pourriture blanche (Figure 12). Les PCB seraient tout dabord hydroxyls, mthoxyls et poxyds, probablement par les CYP 450. Ces mtabolites biphnyls seraient ensuite pris en charge par dautres enzymes, menant la rupture dun des cycles aromatiques pour gnrer des acides chlorobenzoques (CBA), des chlorobenzaldhydes et des alcools benzyliques (90,98). Les autres enzymes intracellulaires probablement impliques dans la mtabolisation des PCB sont laryl-alcool dshydrognase qui produit des aldhydes aromatiques, et laryl-aldhyde dshydrognase qui produit des acides carboxyliques. Il est galement possible que laryl-alcool oxydase et les enzymes ligninolytiques interviennent dans cette voie. Des tudes complmentaires sur lactivit de ces enzymes durant la dgradation des PCB sont ncessaires pour prciser cette voie mtabolique.

57

Figure 12 - Voie mtabolique propose pour la dgradation des PCB par les champignons ligninolytiques (les composs marqus dun astrisque ont t identifis dans diverses tudes) (98)

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En conclusion concernant les voies gnrales de mtabolisation des PCB par les champignons ligninolytiques, il est possible de rsumer les mcanismes impliqus dans la dgradation des PCB par le schma suivant (Figure 13) :

58

Figure 13 Principaux mcanismes impliqus dans la dgradation des PCB chez les champignons ligninolytiques

dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

2.2. 2.2.1.

Dgradation des PCB par les champignons filamenteux

Biodgradation des PCB Il nexiste que trs peu de documentation sur les organismes fongiques non

ligninolytiques. Concernant les champignons filamenteux, qui sont majoritairement terrestres, il a t dmontr que certaines espces peuvent dgrader les PCB. Ainsi, Dmochewitz et Ballschmiter (1988) ont observ quAspergillus niger (Tieghem, 1867) peut dgrader les congnres les moins chlors dun mlange de PCB proche de lAroclor 1242 (80). De plus, une tude portant sur des champignons isols dun sol historiquement pollus par les PCB a rvl que certaines espces les dgradent avec des taux remarquables. En effet, Penicillium chrysogenum (Thom, 1910) dgrade 65 % du PCB-15 (4,4-DiCB) et 72 % du PCB-52 (2,2,5,5-TetraCB) prsents 20 mg/L. Dautres espces telles que Scedosporium apiospermum (Saccardo et coll., 1919), Penicillium digitatum
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(Saccardo, 1881) et Fusarium solani (Saccardo, 1881) sont aussi capables de dgrader ces congnres mais des taux moindres (24 48 %) (78) (Tableau XI). Plus rcemment, Mouhamadou et al (submitted) ont montr les capacits des champignons filamenteux isols dun sol fortement contamin dgrader le mlange de 7 PCB indicateurs (29). Des taux remarquables de dgradation atteignant 70 % ont t obtenus avec un consortium de 6 souches fongiques au bout de 7 jours dincubation. Dune manire gnrale, les champignons filamenteux montrent des fortes capacits mtaboliques vis--vis des PCB faiblement chlors et des congnres ortho et meta substitus (82). De plus, il faut prendre garde au caractre phytopathogne de certaines espces de champignons filamenteux (par exemple Aspergillus fumigatus (Fresenius, 1863), Fusarium solani) qui ne pourraient pas tre utiliss dans des dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 processus de bioremdiation par bioaugmentation.

Tableau XI - Principaux essais de biodgradation des PCB par les champignons filamenteux en milieu liquide

2.2.2.

Mcanismes

Les champignons filamenteux possdent un matriel enzymatique extracellulaire qui est classiquement dcrit comme non ligninolytique. Cependant, des laccases ont t mises en vidence chez certaines espces dascomyctes non-ligninolytiques, notamment appartenant aux genres Penicillium, Aspergillus, Fusarium (78,122) et Doratomyces (Mouhamadou Bello, communication personnelle). Nanmoins, mme si une activit laccase est prsente, Tigini et coll. (2009) n ont pas observ de corrlation entre le taux de dgradation des PCB et lactivit de ces enzymes (78). Il est galement possible, comme chez les pourritures blanches, que des enzymes cellulosiques extracellulaires soient impliques dans la dgradation des PCB mais rien na t dmontr lheure actuelle.
60

Les seules activits enzymatiques dmontres dans la dgradation des PCB par les champignons filamenteux concernent les enzymes intracellulaires. Ceci est renforc par le fait quils absorbent fortement les PCB du milieu (entre 10 et 80 % selon les souches) (78), et les transportent au sein du myclium. Les deux systmes enzymatiques mis en jeu dans la dgradation sont la nitrate rductase et les mono-oxygnases CYP 450. En effet, De et coll. (2006) ont observ in vitro une dchloration des PCB par une nitrate rductase purifie despces du genre Aspergillus (113). Plusieurs tudes ont galement rvl que les champignons filamenteux (en particulier Paecilomyces lilacinus (Samson, 1974)) peuvent oxyder les PCB en mtabolites hydroxyls via les CYP 450 (77,82,131). Les mtabolites issus de cette oxydation peuvent ensuite subir des oxydations supplmentaires par dautres enzymes, conduisant parfois dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 des ouvertures de cycles aromatiques (82). Les voies de dgradation des PCB par les champignons filamenteux sont rsumes sur la Figure 14.

Figure 14 - Voie mtabolique propose pour la dgradation du PCB-3 par T. mucoides. Les tapes (a) et (b) sont probablement effectues par les CYP 450 (82)

61

2.3.

Dgradation des PCB par les levures

2.3.1.

Biodgradation des PCB

Comme pour les champignons filamenteux, la dgradation des PCB par les champignons levuriformes a t mise en vidence. Ainsi, Debaryomyces castelli (Capriotti, 1958), Debaryomyces maramus (Di Menna, 1954) et Dipodascus aggregatus (FranckeGrosman, 1953) en consortium sont capables de dgrader les PCB-25 (2,3,4-TriCB) et PCB-31 (2,4,5-TriCB) la concentration de 100 ppm en 45 jours avec des taux respectifs de 60 % en culture monophasique aqueuse, et 85 % en culture biphasique (phnol et phase aqueuse) (84). Il apparait que le degr de dispersion, le degr dagitation et le degr dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 dadhsion cellulaire des levures la phase organique font varier le taux de dgradation des PCB (84). Lutilisation de levures pour remdier les sols ou les sdiments pollus prsente un intrt. En effet, les levures sont des organismes aussi bien terrestres quaquatiques. Romero et coll. (2006) suggrent lutilisation des levures en consortium dans les milieux humides, pour une meilleure efficacit de remdiation (84).

2.3.2.

Mcanismes

Tout comme les champignons filamenteux, les levures sont classiquement dcrites comme dpourvues denzymes ligninolytiques. Cependant, des laccases ont t identifies chez lespce pathogne Cryptococcus neoformans (Viullemin, 1901) (Basidiomyctes). Chez les levures Ascomyctes, la production de laccase na pas t dmontre, mme si une squence putative encodant une oxydase multicuivres lie la membrane de Saccharomyces cerevisiae (Meyen, 1838) a t mise en vidence (122). Les systmes enzymatiques identifis lheure actuelle comme tant impliqus dans la dgradation des PCB sont intracellulaires. Ils correspondent ceux identifis chez les champignons filamenteux, savoir les mono-oxygnases CYP 450 (67,82,132). Les mtabolites et mcanismes identifis sont ceux dcrits prcdemment dans la Figure 14.

62

2.4.

Dgradation des PCB par les champignons mycorhiziens

La dgradation des PCB par les champignons mycorhiziens est trs peu documente. En effet, seule une tude a test les capacits des champignons ectomycorhiziens dgrader les PCB. Donnelly et coll. (1995) ont constat que seules quelques espces taient capables de les dgrader. Ainsi, Radiigera atrogleba (Zoller, 1944) et Gautieria crispa (Stewart & Trappe, 1984) sont capables de dgrader 60 90 % dun mlange de DiCB et TriCB. Radiigera atrogleba se rvle galement capable de dgrader des PentaCB (107). Ces espces prsentent un intrt dans la bioremdiation naturelle des sols. Cependant, tant donn leur cologie complexe (symbiose avec les plantes), lintrt de dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 lutilisation de champignons mycorhiziens en mycoremdiation industrielle des sols est limit. Les endomycorhiziens sont quant eux utiliss non pas pour leurs capacits dgrader les PCB, mais pour leur capacit favoriser labsorption par les plantes. En effet, Glomus caledonium (Trappe & Gerdemann, 1974), lorsquil est associ la luzerne et Sinorhizobium meliloti (Dangeard, 1926) (bactrie), augmente considrablement les rendements de phytoextraction des PCB (61).

3.
3.1.

Cas concrets de mycoremdiation


Essais de mycoremdiation dans les sols Lefficacit des champignons dchlorer, dgrader voire minraliser une large

gamme de xnobiotiques dont les PCB a t clairement dmontre en milieu liquide avec agitation, qui permet une bonne croissance fongique. Cependant, une dgradation in vitro ne conduit pas forcment une action dans le sol. En effet, quatre souches de P. chrysosporium et une souche de T. versicolor connues pour dgrader les PCB en milieu liquide nont pas montr de capacits les dgrader dans le sol (85).

Seulement quelques essais de mycoremdiation des PCB ont t raliss dans des msocosmes (Tableau XII). Ce sont des bioracteurs contenant une matrice sol, dans lesquels les champignons sont mis en prsence du polluant. Les conditions de temprature,
63

pH et humidit (pour ne citer que les plus importantes) y sont strictement rgules, permettant dapprcier les paramtres optimaux de biodgradation in situ. Ainsi, une tude a montr que P. ostreatus dgrade 40 % des congnres faiblement chlors dun mlange dAroclor 1242 10 ppm en 60 jours (85). Plus rcemment, Federici et coll. (2012) ont observ que L. tigrinus est capable de dchlorer 23 % et dgrader 33 % dun mlange environnemental htrogne proche de lAroclor 1260 700 mg/kg, en prsence dune flore microbienne autochtone (105). De la mme faon, Mouhamadou et coll., ont montr dans des expriences en pilote de laboratoire quun mlange de 6 souches dascomyctes supplment avec de la paille permettait dobtenir environ 30 % de dgradation des 7 PCB indicateurs au bout de 2 mois dincubation (29).

dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

Tableau XII - Principaux essais de mycoremdiation dans le sol


Mlange de PCB utilis Aroclor 1260 Concentration en PCB 700 mg/kg Taux de dgradation 33,6 % de dgradation et 23,2 % de dchloration 10 mg/L 0% Milieu et conditions tiges de mas, N (1,2 %), sans huile de soja N (0,08 % w/w), C (0,8 % w/w), pH : 5,3 N (0,08 % w/w), C (0,8 % w/w), pH : 5,3 N (0,08 % w/w), C (0,8 % w/w), pH : 5,3 Dure Espces utilises Lentinus tigrinus (= Panus tigrinus) Phanerochaete chrysosporium Trametes versicolor Souches Sources

60j

CBS 577.79

(105)

60j

ATCC 34541

(85)

Aroclor 1242

10 mg/L

0%

60j

CCBAS 614 3004 SOMYCEL, F6, P15, P19

(85)

10mg/L

40 %

60j

Pleurotus ostreatus

(85)

3.2.

Prrequis pour la mise en place dune mycoremdiation Afin dobtenir une bioremdiation efficace et durable, il est ncessaire demployer

des souches facilement cultivables, gntiquement stables et non pathognes. Ces souches doivent galement tre capables de dgrader les PCB avec des rendements satisfaisants dans les conditions de bioremdiation, ainsi qutre rsistantes de grandes concentrations de polluants. Il est galement ncessaire dutiliser des souches natives potentiellement adaptes au substrat en bioremdiation. En effet, des tudes comparatives ont montr une efficacit de dgradation infrieure des souches modles prserves dans des collections, par rapport celles rcemment isoles dun sol contamin (94,99).

64

Les enzymes impliques dans la dgradation des PCB doivent tre clairement identifies et stables dans les conditions environnementales des milieux destins tre dpollus. Il est galement ncessaire que les mtabolites forms soient clairement identifis et que leur innocuit soit dmontre. Il est enfin ncessaire de mettre au point dune mthode de dtection de la colonisation dun site par le champignon, ainsi quune mthode de vrification de la dgradation des PCB afin de pouvoir quantifier les taux de remdiation rels in situ.

3.3.

Paramtres influenant la mycoremdiation La viabilit, lefficacit et la durabilit de la mycoremdiation in situ dpendent de

dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

plusieurs facteurs. 3.3.1.

Conditions de faisabilit in situ Les conditions de faisabilit in situ dune mycoremdiation par les pourritures

blanches mettent en jeu deux aspects : les facteurs physicochimiques du site bioremdier dune part, et la rhizosphre de ce mme site dautre part. Concernant les facteurs physicochimiques, la temprature du sol est la limite majeure de faisabilit de la mycoremdiation. En effet, aucune croissance de champignon de la pourriture blanche nest dtecte pour des tempratures infrieures 10C (133). Dautre part, lactivit des laccases varie en fonction des tempratures (122). Ainsi, le climat joue un rle primordial dans la dgradation des PCB par les pourritures blanches. Le pH, lhumidit, la gochimie, le rapport C/N (indicateur du rapport entre quantits de carbone et dazote du sol), la pollution et la permabilit du sol jouent galement un rle important dans la mise en place dune mycoremdiation viable et efficace. Chaque sol a des particularits chimiques et biologiques ncessitant la slection dune souche adquate en fonction des conditions du milieu (75). Les pourritures blanches de la classe des Basidiomyctes sont trs peu prsentes dans les habitats aquatiques (134). Enfin, la profondeur influence galement la mycoremdiation des PCB. En effet, Bedard et Haberl (1990) ont observ une diminution du taux de dgradation de 10 % au-del des 10 premiers centimtres du sol (135).

65

La nature des plantes vivant dans un milieu donn a galement un impact sur la microflore de la rhizosphre. En effet, lespce de plante, son stade de dveloppement et son tat de sant vont influencer les communauts microbiennes (136). Ainsi lintroduction dune nouvelle plante dans le milieu peut modifier la microflore de la rhizosphre (107). Dautre part, une tude montre que lexpression des gnes de P. chrysosporium intervenant dans la conversion de la lignocellulose est influence par les espces darbres avec lesquelles le champignon est en contact (137). Cette adaptation en fonction de la source de carbone peut donc affecter la production des enzymes intervenant dans la dgradation des PCB (137). La microflore indigne joue quant elle un rle majeur sur le dveloppement de lespce inocule, ainsi que sur la dgradation des PCB. Certaines communauts vont agir dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 en synergie, tandis que dautres vont tre en concurrence ou pathognes les unes par rapport aux autres (136). Ces relations dpendent de lespce fongique et de sa capacit coloniser le sol, ainsi que du type de sol et de sa composition en bactries (133). Il est donc important de privilgier linoculum despces fongiques ayant de meilleures capacits pour coloniser un sol non strile sans tre affectes ngativement par la microflore indigne. Ainsi, les espces Pleurotus spp., Phanerochaete spp., ou T. versicolor sont considres comme tant des comptiteurs forts (133). De plus, les espces fongiques introduites doivent peu perturber les communauts microbiennes du sol capables de dgrader les PCB. En effet, certaines tudes ont montr que lintroduction dune souche fongique peut induire une inhibition des croissances des bactries natives, et saccompagner dune baisse defficacit de leur bioremdiation (105).

3.3.2.

Biodisponibilit des PCB

La biodisponibilit des PCB dans le sol est faible. Elle dpend de leur solubilit, du Log KO/W de chaque congnre, de la porosit du sol et de ladsorption aux particules organiques du sol. De plus, les PCB sont rpartis dans le sol de faon htrogne, formant des agrgats (75). Lutilisation de surfactants ou de cosolvants organiques permet daugmenter la solubilit des PCB, augmentant ainsi leur biodisponibilit (138). De plus, les tensioactifs non-ioniques, qui sont des drivs dacides gras insaturs, augmentent lefficacit de MnP

66

en remplissant la fonction de mdiateur rdox, comme cest le cas pour le Tween 80 (94,108). Cependant, le choix des tensioactifs peut savrer dcisif puisquils peuvent inhiber la biodgradation des PCB (94). De plus, les tensioactifs peuvent inhiber la croissance de certaines espces fongiques, en provoquant la lyse des cellules fongiques, sils sont utiliss de trop fortes concentrations. En revanche, le Tween 80 une concentration de 302 mg/L, na aucun effet sur la croissance des champignons tout en permettant une bonne mulsion des PCB (93). Enfin, une tude a montr que lutilisation de Triton X-100 une concentration infrieure de moiti la concentration micellaire critique (CMC), soit 0,14 mM, navait dimpact ni sur la croissance de T. versicolor, ni sur le taux de dgradation des PCB. dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 Nanmoins, la minralisation du PCB-31 a t multiplie par 2,5. Ceci pourrait sexpliquer par une stimulation de la respiration des souches fongiques en augmentant la surface dchange entre les cellules fongiques et le milieu de culture, ou par la stim ulation de MnP (94). Plusieurs surfactants pouvant tre utiliss dans la mycoremdiation des PCB sont ltude. Les tensioactifs non-ioniques tels que le Triton X-100 et le Tween 80 sont les candidats les plus prometteurs. Certaines huiles vgtales ont montr de bons rsultats en tant que cosolvants dans la mycoremdiation des HAP, notamment lhuile de soja. Cependant, Federici et coll. (2012) ont constat de moins bon rendements de dgradation des PCB avec huile de soja dans le sol (105).

3.3.3.

Toxicit des polluants sur les champignons A lheure actuelle, lune des principales limites de la bioremdiation est la toxicit

des polluants vis--vis des microorganismes. Des tudes ralises sur des champignons montrent un effet toxique des PCB sur certaines espces en fonction de la concentration du polluant, sa composition et les mtabolites toxiques produits lors de sa dgradation (79). Or, un site pollu est rarement le fait dun seul polluant mais plutt luvre dun cocktail de polluants organiques (HAP, pesticides, dioxines) et de mtaux lourds, qui inhibent la croissance et lactivit des champignons lorsquils sont prsents en grande concentration (119,139). De plus, les mtaux lourds sont particulirement absorbs par les champignons (139).
67

Nanmoins, la slection de souches issues de sols historiquement pollus permet dobtenir des souches rsistantes de grandes concentrations de polluants. Ainsi, Tigini et coll. (2009) ont isol des souches de Penicillum digitatum, Scedosporium apiospermum et Penicillum chrysogenum tolrant 900 mg/kg de PCB. De plus, ces souches sont capables de les dgrader avec de bons rendements (78). Plusieurs espces de pourritures blanches sont galement tolrantes de hautes concentrations en mtaux lourds (139) et en polluants organiques (105,133).

3.3.4.

Inoculum fongique Contrairement aux bactries, les pourritures blanches nutilisent pas la lignine ou

dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012

les xnobiotiques comme source directe dnergie. Elles requirent un substrat de croissance diffrent sous forme de lignocellulose. Linoculum ncessite donc un apport de dchets lignocellulosiques afin daugmenter la capacit de dveloppement de lespce fongique introduite, ainsi que sa capacit concurrencer la microflore autochtone (92). De plus, linoculum doit avoir un volume adapt car plus sa biomasse est grande, plus le dveloppement du champignon dans le sol sera rapide et la mycoremdiation aura de chances de succs (140). Plusieurs sources de lignocellulose sont possibles. Ainsi on distingue les copeaux de bois ou dcorce, les pis ou tiges de mas, les tiges de canne sucre, la paille de luzerne ou encore la tourbe (75,97,133). Les pis de mas permettent en outre de bons rendements de production de peroxydases(141). La nature du vecteur de linoculum joue galement un rle dans la croissance fongique initiale. On distingue les vecteurs lignocellulosiques, le compost de champignon contenant directement du myclium ou encore des granuls recouverts dalginate imprgn de spores (75,140). Lutilisation de vecteurs lignocellulosiques est particulirement conomique.

68

3.4. 3.4.1.

Stratgies envisageables pour optimiser la mycoremdiation

Consortium

La cohabitation des plusieurs espces de champignons ligninolytiques entre elles ou avec dautres groupes de champignons, peut tre recherche si ces associations permettent une dgradation des PCB avec un meilleur rendement. Une tude a mis en vidence une dgradation plus importante (de lordre de 90 %) dune solution de PCB incube en milieu liquide, avec un consortium de cinq pourritures blanches (P. chrysosporium, B. adusta, T. versicolor, P. ostreatus et Lentinus edodes) par rapport P. chrysosporium uniquement (99). Les pourritures blanches peuvent donc dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 sattaquer diffremment aux congnres prsents dans le mlange. Dautres tudes en milieu liquide ont montr que les associations dune espce de pourriture blanche avec une levure ou mme une bactrie connue pour dgrader les PCB, les dgradaient de manire plus efficace par rapport aux souches de pourritures blanches utilises seules (83,87). Dun point de vue enzymatique, linteraction dune pourriture blanche avec dautres microorganismes (bactries, levures, ou autre champignon) dans le sol induit une forte scrtion de laccases dans le milieu (142). Il serait alors possible dinoculer plusieurs espces de champignons, ou dassocier des bactries aux pourritures blanches dans linoculum, de manire exercer une synergie dans la dgradation des PCB. Ce consortium prsenterait galement lintrt de dgrader une gamme plus large de congnres, de mtabolites et dautres polluants organiques prsents dans les sols pollus par co-mtabolisme (83).

3.4.2.

Augmentation de la production et de lactivit enzymatiques Plusieurs stratgies sont envisages pour stimuler la production et lactivit des

enzymes ligninolytiques par les pourritures blanches. Le gnie gntique est lune des voies explores. Cependant, selon la Directive Europenne 2001/18/CE, la dissmination dans lenvironnement de champignons gntiquement modifis ne constitue pas un processus sr. Ainsi, seule lhybridation croise est autorise afin de crer des souches plus productives denzymes qui soient plus stables et plus efficaces vis--vis des PCB (127,143). Nanmoins, il apparait que les
69

Ascomyctes sont plus souples vis--vis des manipulations gntiques que les Basidiomyctes (127). Lautre voie la plus explore pour augmenter lactivit des enzymes ligninolytiques est laddition dinducteurs dans le milieu. Plusieurs tudes ont montr quil est possible dinduire une production de radicaux hydroxyles endognes chez T. versicolor, via un cycle rdox de quinone extracellulaire dans lequel intervient la quinone oxydorductase. Ainsi, les radicaux hydroxyles produits permettent daugmenter lactivit des peroxydases, se traduisant par une augmentation de la minralisation de certains xnobiotiques (128,144). Cependant, cette mthode est plutt applicable dans les milieux aquatiques tels que les efflux industriel (124). Enfin, laddition de surfactant drivs dacides gras insaturs joue le rle dinducteur pour les peroxydases, augmentant ainsi leur activit dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 (108).

70

THESE SOUTENUE PAR PAUL CORNU

LES POLYCHLOROBIPHENYLES : ENJEUX ENVIRONNEMENTAUX ET SANITAIRES, ET MYCOREMEDIATION

CONCLUSION :

Les PCB, produits miracles des annes 1930 80, ont connu de multiples usages dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 industriels et domestiques. Cest leur grande stabilit chimique, gage de durabilit, qui a rendu leur utilisation massive. Cependant, cette stabilit rend les PCB peu biodgradables. Elle est lorigine de leur grande rmanence dans lenvironnement, et de leur accumulation dans les organismes le long de la chaine alimentaire. Leurs effets nfastes tant jusqualors ignors, les PCB ont t manipuls sans prcautions et se retrouvent disperss dans lenvironnement. Les fleuves des rgions fortement industrialises dEurope, des tats-Unis et du Japon durant les trente glorieuses sont les plus touchs par la pollution. En France, le Rhne et la Seine sont les plus concerns. Une diminution de la pollution a lieu, mais elle est lente en raison de la formation de stocks sdimentaires . En outre, malgr linterdiction mondiale de production et dutilisation des PCB en 1987, les sites industriels dsaffects sont une source prenne de pollution lie aux intempries ou au vandalisme. Chez lHomme, les PCB sont principalement responsables dune toxicit sur le long terme, essentiellement via une exposition alimentaire. Leurs nombreux effets toxiques, apparents ceux des dioxines, affectent essentiellement le neuro-dveloppement de lenfant, les fonctions physiologiques hpatiques, immunes et endocriniennes, et provoquent des cancers. Cependant, de plus amples recherches sont ncessaires afin de mieux prciser leurs effets et leurs valeurs toxicologiques de rfrence, dans le but de mieux valuer le risque sanitaire long terme. Face ces situations environnementales chimiquement dgrades et la toxicit des PCB, lutilisation de microorganismes susceptibles de dgrader ces lments toxiques offre une alternative avantageuse aux mthodes physico-chimiques, avec un impact environnemental moindre et un cot rduit. Des tudes utilisant les extraordinaires
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capacits mtaboliques de certains champignons dans la dgradation des xnobiotiques sont en cours. Ces tudes ont montr que, en conditions de laboratoire, certains champignons Basidiomyctes ligninolytiques et certains champignons filamenteux des classes des Ascomyctes et Zygomyctes sont capables de dgrader divers congnres de PCB en milieu liquide. Toutefois, lapplication in situ reste encore insatisfaisante en raison dune part de l'origine non tellurique des souches modles potentiellement efficaces, difficiles utiliser en bioaugmentation dans des sols pollus, et dautre part de labsence dinformations concernant les mcanismes enzymatiques de dgradation des PCB. Ces limites constituent des verrous technologiques lever tant dun point de vue fondamental pour mieux apprhender les mcanismes de biodgradation, que dun point de vue appliqu pour dumas-00753466, version 1 - 19 Nov 2012 contribuer lamlioration des biotechnologies environnementales. LHomme na de cesse dinnover et de mettre sur le march de nouveaux produits. Ces dernires annes les gouvernements ont tabli une liste de principes de prcaution afin dviter de nouvelles catastrophes cologiques et toxicologiques. Ainsi, depuis 2007, les industriels sont soumis au rglement REACH (Registration Evaluation Authorization of CHemical) applicable toute substance chimique susceptible dtre commercialise en U.E. De leur ct, les tats-Unis rflchissent un systme similaire.

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Ce travail a t soutenu par le ple de comptitivit AXELERA et ralis dans le cadre du projet FUNGI EAT PCB financ par le ple AXELERA.

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ANNEXES

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Annexe A - Numrotation IUPAC des congnres (4)

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Annexe B - Teneurs en congnres des Aroclors 1242, 1254, 1260 (5)

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Annexe C - Principaux noms commerciaux des produits contenant des PCB (5,12,145)
Pays Noms Commerciaux Aroclor, Asbestol, Bakola 131, Clophen, Chlorextol, Diaclor, Etats-Unis Dykanol, Elemex, Hyvol, Inerteen, No-Flamol, Pyranol, Pyrenol, Pyrochlor, Saf-T-Kuhl, Therminol France Royaume-Uni Allemagne (ex-R.F.A.) Abuntol, Asbestol, Electrophnyle, Hydol, Phenoclor, Pyralne, Therminol Aroclor, Pyroclor Clophen, Elaol Fenclor, D.K. Kanechlor, Santotherm Sovol, Solvol Delor

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Italie Japon Ex-U.R.S.S. Ex-Tchcoslovaquie

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Annexe D - Les PCB dans lenvironnement


Carte des teneurs mesures en sept PCBi dans les sdiments de la Seine en 2003 (32)

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Carte des teneurs en 7 PCBi mesures dans les poissons et les sdiments dans le bassin RhneMditerrane 2005-2010 (33)

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Denres alimentaires Rglementation de 2006 2012 (TEFOMS 1998) Somme des dioxines (OMS-PCDD/F-TEQ) 3,0 pg/g de graisses 2,0 pg/g de graisses 1,0 pg/g de graisses 6,0 pg/g de graisses 4,0 pg/g de poids ltat frais 8,0 pg/g de poids ltat frais 3,5 pg/g de poids ltat frais 6,5 pg/g de poids ltat frais 12,0 pg/g de graisses 4,5 pg/g de graisses 10,0 pg/g de graisses 40 ng/g de graisses 75 ng/g de poids ltat frais 4,5 pg/g de graisses 4,0 pg/g de graisses 1,5 pg/g de graisses 2,5 pg/g de graisses 1,75 pg/g de graisses 1,0 pg/g de graisses 4,0 pg/g de graisses 3,0 pg/g de graisses 1,25 pg/g de graisses Somme des dioxines et PCB-DL (OMS-PCDD/F-PCBTEQ) Somme des dioxines Somme des dioxines et PCB-DL (OMS-PCDD/F-TEQ) (OMS-PCDD/F-PCBTEQ) Rglementation partir de 2012 (TEF OMS 2005)

Teneurs maximales

Viandes et produits base de viande ( l'exclusion des abats comestibles) provenant des animaux suivants :

Bovins et Ovins Volailles Porcs

Somme des PCB28, PCB52, PCB101, PCB138, PCB153 ET PCB180 (=[6PCBi-NDL]) 40 ng/g de graisses 40 ng/g de graisses 40 ng/g de graisses

Foies des animaux terrestres ci-dessus et produits drivs de ces foies

denres alimentaires (5658)

Chair musculaire de poisson, produits de la pche et produits drivs, lexclusion :

. de l'anguille sauvage capture,

. du poisson deau douce sauvage captur, lexception des espces de poissons diadromes captures en eau douce,

Annexe E - Rglementation alimentaire

. du foie de poisson et des produits drivs de sa transformation,

. des huiles marines. La teneur maximale pour les crustacs sapplique la chair musculaire des appendices et de labdomen. Dans le cas des crabes et crustacs de type crabe ( Brachyura et Anomura ), elle sapplique la chair musculaire des appendices. 4,0 pg/g de poids ltat frais 4,0 pg/g de poids ltat frais 2,0 pg/g de graisses 10,0 pg/g de graisses 12,0 pg/g de poids ltat frais 8,0 pg/g de poids ltat frais 3,5 pg/g de poids ltat frais 3,5 pg/g de poids ltat frais 1,75 pg/g de graisses 6,5 pg/g de poids ltat frais 10,0 pg/g de poids ltat frais 6,0 pg/g de graisses 125 ng/g de poids l'tat frais 300 ng/g de poids l'tat frais 200 ng/g de graisses

Chair musculaire de poisson deau douce sauvage captur, lexception des espces de poissons diadromes captures en eau douce, et produits drivs

Chair musculaire danguille sauvage capture ( Anguilla anguilla ) et produits drivs

Huiles marines (huile de corps de poisson, huile de foie de poisson et huiles dautres organismes marins destins tre consomms par lhomme) 3,0 pg/g de graisses 3,0 pg/g de graisses 3,0 pg/g de graisses 2,0 pg/g de graisses 1,0 pg/g de graisses 2,0 pg/g de graisses 0,75 pg/g de graisses 25,0 pg/g de poids ltat frais 6,0 pg/g de graisses 6,0 pg/g de graisses 4,5 pg/g de graisses 4,0 pg/g de graisses 1,5 pg/g de graisses 3,0 pg/g de graisses 1,5 pg/g de graisses -

Foie de poisson et produits drivs de sa transformation lexclusion des huiles marines vises ci-dessus

2,5 pg/g de graisses 2,5 pg/g de graisses 2,5 pg/g de graisses 1,75 pg/g de graisses 1,0 pg/g de graisses 1,5 pg/g de graisses 0,75 pg/g de graisses 0,1 pg/g de poids ltat frais

20,0 pg/g de poids ltat frais 5,5 pg/g de graisses 5,0 pg/g de graisses 4,0 pg/g de graisses 3,0 pg/g de graisses 1,25 pg/g de graisses 2,5 pg/g de graisses 1,25 pg/g de graisses 0,2 pg/g de poids ltat frais

200 ng/g de poids ltat frais 40 ng/g de graisses 40 ng/g de graisses 40 ng/g de graisses 40 ng/g de graisses 40 ng/g de graisses 40 ng/g de graisses 40 ng/g de graisses 1,0 ng/g de poids l'tat frais

Rglementation fixant les teneurs maximales en PCB et substances de type dioxines dans les

Lait cru et produits laitiers, y compris matire grasse OEufs de poule et ovoproduits Graisses des animaux suivants: Bovins et Ovins Volailles Porcs

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Graisses animales mlanges Huiles et graisses vgtales Denres alimentaires destines aux nourrissons et aux enfants en bas ge

Atlas franais des interdictions de pche, consommation et commercialisation de poissons relatifs une contamination par les PCB, en juillet 2011 (146)

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Annexe F - Principaux essais de biodgradation de PCB en solution simples ou complexes par les pourritures blanches en milieu liquide

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Notes : Les taux de dgradation de 0 % sont signals avec un - . Les essais de dgradation dans le sol sont dvelopps dans le paragraphe 3.1. Essais de mycoremdiation dans les sols .

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