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Mthodes de dosage des polyphnols

EFSTATHIOU Tho
Directeur du laboratoire Analyses & Recherche

Flavan-3-ols : B1 catchines,OPC, tannins C.

Extractions des polyphnols


Milieux dextractions
- Matires premires : les sources vgtales - Ingrdients (extraits vgtaux) - Produits finis : diffrentes formes galniques - Milieux biologiques : plasma, urines

Modes dextraction
* Extraction aux solvants

MATIRES PREMIRES :
Lobjectif de cette extraction cest de librer les polyphnols prsents dans des structures vacuolaires par rupture du tissu vgtal et par diffusion.

Prparation des chantillons : certains polyphnols sont instables, se


dgradent (oxydation) par action enzymatique, il est prudent dincorporer un antioxydant (BHT, Vit C) Dlipidation pour les matires riches en lipides

Extraction aux solvants


Facteurs influenant lefficacit de lextraction aux solvants
* Nature du solvant: eau, mthanol, actonitrile, actone, actate dthyle. * Le pH du milieu dextraction : dtermine le degr de solubilit des substances solubles * La temprature : 25-55 C * Le nombre dextractions et le volume du solvant utilis * La taille et la forme des particules : produit bien homognis

Extraction Phase-solide (SPE)


Technique pour fractionner/purifier ou encore pour pr concentrer des composs prsents dans des matrices liquides.

Exemples de phases solides :


* C18 pour extraire les acides phnoliques, flavonodes * Amberlite (changeuse dions) elle est utilis pour liminer les composs polaires non phnoliques des extraits riches en anthocyanins * Polyvynilpyrrolidone (polyclar AT) sont utiliss pour sparer les anthocyanins * PVPP pour liminer les sucres et acides. On utilise un solvant (mthanol, thanol) pour dcrocher les polyphnols fixs sur le support.

Extraction Supercritique (SFE)


- Le CO2 supercritique il est trs utilis comme solvant

dextraction. * Sa faible viscosit lui confre une grande capacit de diffusion lui permettant davoir accs des composs phnoliques lis la paroi cellulaire. * sa densit relativement lev lui confre un pouvoir de solvatation lev lui permettant ainsi un meilleur taux dextraction
- Procd non dnaturant : minimise les phnomnes

doxydation ou isomrisation - Temps dextraction rduit

Techniques de filtration membranaire


MicroF, UF et NanoF utilises pour fractionner et concentrer les composs phnoliques. * la microF permet la dlipidation * la microfiltration pour dessaler

- Procds physiques * peu dnaturants * non polluants

Pour les extraits vgtaux et produits finis les techniques dextraction sont identiques celles utilises pour lextraction des matires premires
Une validation de la technique dextraction doit tre effectue sur chaque nouvelle matrice : valuation de la rptabilit, reproductibilit et justesse de la mthode.

Milieux biologiques
Dans les tissus mammaliens les polyphnols sont habituellement prsents sous formes conjugus ( bta glucuronides et sulfates) Une hydrolyse enzymatique, laide dun mlange enzymatique, est ncessaire avant lextraction des polyphnols

Analyse des polyphnols


) Dosage des polyphnols totaux par spectrophotomtrie mthode de Folin (mthode non spcifique) Dosage des polyphnols par mthode HPLC
* sparation sur colonne phase inverse (C18) * dtection laide de : - spctro UV (prfrentiellement un barrette de diode) - CoulArray (dtection coulomtrique)

) Caractrisation des polyphnols HPLC- MS et RMN