Propagao in vitro de orqudea: iodeto de potassio e cloreto de cobalto

Rodrigues Soares, J. D1.; Almendagna Rodrigues, F1.; Villa, F1.; Pasqual, M1.; Carvalho, J. G1. 1 Universidade Federal de Lavras, Departamento de Agricultura, CP3037, CEP 37200-000, Lavras-MG, Brasil. E-mail: joycerodrigues01@yahoo.com.br Introduo Na floricultura a presena das orqudeas se faz marcante, com flores de corte muito apreciadas pela beleza e durabilidade e longevidade mantida por vrias semanas. O gnero Cattleya, de ocorrncia natural no Brasil, bastante popular e atinge altos preos no mercado interno e externo, procurado por colecionadores, orquidfilos, decoradores de ambiente e apreciadores. Os mtodos de propagao convencional ou por diviso de touceiras tm se mostrado inadequados/antieconmicos para plantas da famlia Orchidadeae. Sendo assim, a cultura de tecidos vegetais destaca-se como um novo mtodo que possibilita a obteno de grande quantidade de mudas e em curto espao de tempo. Esta tcnica tem sido utilizada dentre outras, para estudos de micropropagao (Arditti & Ernst, 1993) e nutrio mineral (Caldas et al., 1998). Em estudos de nutrio mineral de plantas necessrio considerar os nutrientes como um todo, porque, no processo de absoro, um pode exercer influncia sobre o outro, dadas as possveis interaes que podem ocorrer. Embora a possibilidade de ocorrer carncia de um micronutriente seja menor do que um macronutriente, necessrio aprofundar os conhecimentos sobre as reais necessidades da orqudea em micronutrientes, uma vez que, uma planta cultivada em solo pobre desses minerais pode apresentar diminuio no seu crescimento (Malavolta, 1997). O meio de cultura deve suprir tecidos e rgos cultivados in vitro com macro e micronutrientes necessrios ao crescimento. Dentre os micronutrientes, o cobalto essencial para fixao biolgica de N2 e intervm em vrios segmentos do metabolismo dos carboidratos e protenas, devido a sua participao em sistemas enzimticos. O iodo pode ser um elemento essencial, porm, alternativamente, esse on pode agir como agente redutor (Pasqual, 2001). O iodeto de potssio (KI) e o cloreto de cobalto hexa hidratado (CoCl2.6H20) so componentes do meio MS (Murashige & Skoog, 1962). Porm, esses micronutrientes no so adicionados ao meio Knudson C, usualmente empregado na micropropagao de orqudeas. Em trabalhos in vitro, o cobalto includo na metade dos meios de cultura utilizados e a concentrao mais comum 0,1 mM. Objetivou-se determinar um novo meio de cultura acrescido de KI e CoCl 2.6H2O, que proporcione melhor desenvolvimento de plntulas de Cattleya loddgesii, u a vez que a escassez de informaes sobre o uso de micronutrientes, em especial iodo e cobalto, em orqudeas (in vitro/ex vitro) justifica o presente trabalho. Material e mtodos Plntulas de Cattleya loddgesii, obtidas atravs de germinao in vitro de sementes oriundas de auto-fecundao, foram submetidas uniformizao, em meio de cultura Knudson C (Knudson, 1946) modificado, durante trs meses. Aps este perodo, cada tubo de ensaio com 15 mL de meio KC foi inoculado com uma plntula de aproximadamente 1,0 cm de comprimento e acrescido de iodeto de potssio (0; 0,45; 0,9 e 1,35 mg L -1) e cloreto de cobalto (0; 0,015; 0,030 e 0,045 mg L-1), em todas as combinaes possveis. O meio de cultura teve seu pH ajustado para 5,8 e solidificado com 5% de gar antes da autoclavagem

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a 121C e 1 atm por 20 minutos. As plntulas foram mantidas em sala de crescimento com irradincia de 35 mol.m-2.s-1, temperatura de 251C e fotoperodo de 16 horas dirias. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em esquema fatorial 4x4, com 16 tratamentos, contendo 20 plntulas cada. Ao final de 120 dias foram avaliados nmero de folhas, nmero de brotos, nmero de razes, massa fresca de plntulas, comprimento mdio de razes e da parte area. Os dados quantitativos foram comparados por meio de regresso polinomial, empregando-se o Software Sisvar (Ferreira, 2000). Resultados e discusso Utilizando-se o teste F ao nvel de 5% de probabilidade, verificou-se interao significativa para comprimento mdio de razes, comprimento da parte area e massa fresca de plntulas. Para nmero de razes e folhas de Cattleya loddgesii, observou-se apenas significncia para o CoCl2.6H2O. No houve efeito significativo para o nmero de brotos de orqudea (Tabela 1). Tabela 1. Anlise de varincia para nmero de folhas (NF), nmero de brotos (NB), nmero de razes (NR), comprimento mdio de razes (CMR), comprimento da parte area (CPA) e massa fresca de plntulas (MFP). UFLA, Lavras, MG, 2006.
Fontes de variao G.L. NF NB Quadrados mdios NR CMR CPA MFP 0,002ns 0,02** 0,01** 0,002 30,02

KI 3 0,29ns 0,18ns 0,02 ns 0,08** 0,23** ** ns ** ** CoCl2.6H2O 3 1,22 0,01 0,73 0,12 0,05ns KI x CoCl2.6H2O 9 0,56 ns 0,12ns 0,1 ns 0,06** 0,11** erro 60 0,42 0,09 0,08 0,03 0,04 CV% 19,52 25,63 13,04 11,06 11,60 ** Significativo ao nvel de 5% de probabilidade pelo teste F; ns = no significativo.

Para nmero de folhas de Cattleya loddgesii observou-se significncia apenas para o CoCl2.6H2O. Com incremento nas concentraes desse micronutriente, verificou-se um aumento de forma quadrtica no nmero de folhas, onde maior nmero (3,57) ocorreu com adio de 0,015 mg L-1 ao meio Knudson C. O meio Knudson C no possui em sua formulao fontes de iodo e cobalto. Pode-se inferir com isso que o acrscimo desses micronutrientes tenham aumentado o nmero de folhas de plntulas de orqudea. Amarelecimento das folhas e murchamento das plntulas tambm foram observados nos tratamentos que continham altas concentraes de CoCl2.6H2O, corroborando com Pasqual (2001), que afirma que concentraes muito elevadas de cloro em algumas espcies podem favorecer o aparecimento desses sintomas. Tambm o excesso de cobalto no meio de cultura diminui a absoro de Fe e Mn, apresentando folhas clorticas, depois entram em secamento e necrose (Pasqual, 2001). Comportamento similar ao nmero de folhas foi observado em relao ao nmero de razes de orqudea. Houve formao de razes em todos os tratamentos que continham fonte de cobalto e tambm no tratamento controle. Em funo da anlise de varincia, verificou-se significncia apenas para o CoCl 2.6H2O, onde, incremento nas concentraes de fontes de cobalto, verificou-se aumento no nmero de razes, sendo que maior nmero (2,3) observado com a adio de 0,045 mg L-1. Quando se aumenta a quantidade de razes formadas in vitro, aumenta-se tambm a rea de contato raiz/substrato, refletindo em maior absoro dos nutrientes. Desta forma, o cobalto ou o cloro presente no CoCl 2.6H2O contriburam no aumento do nmero de razes. Kanashiro (2005) tambm observou em bromlias (Aechmea blanchetiana) uma maior absoro de nutrientes em meio MS modificado, ocasionando aumento no sistema radicular. Para o comprimento mdio de razes houve significncia na ausncia e em 0,45 mg L-1 de iodeto de potssio, sendo os resultados muito semelhantes entre si. Verificou-se melhores respostas (1,81 cm) na ausncia de KI com a adio de 0,045 mg L-1

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de CoCl2.6H2O ao meio Knudson C. Num substrato com deficincia de nutrientes como o caso do meio Knudson C, aumentar o comprimento das razes uma maneira da plntula buscar os nutrientes necessrios ao seu desenvolvimento, mesmo que isto implique em gasto de reservas. Observou-se que a adio de 0,045 mg L -1 de cloreto de cobalto no meio Knudson influenciou o comprimento mdio do sistema radicular desta maneira. Evidencia-se assim que, para promover o comprimento mdio do sistema radicular, a adio de fontes de cobalto no meio Knudson benfica. Pelo teste F verificou-se interao significativa entre as fontes de iodo e cobalto estudadas para comprimento da parte area. Observou-se que com o aumento das concentraes de cloreto de cobalto acrescidas de 0,45 mg L-1 de iodeto de potssio h aumento (1,84) de forma linear no comprimento das plntulas de orqudea. O crescimento de plantas, rgos, tecidos e clulas in vitro depende do desenvolvimento de meios de cultura otimizados para a perfeita interao de componentes essenciais como fontes de carbono e nutrientes minerais. Os fatores que limitam esse crescimento in vitro so similares queles que limitam in vivo (Amaral, 2003). Para peso fresco da parte area de Cattleya loddgesii observou-se interao significativa para iodo e cobalto. Com incremento nas concentraes de cloreto de cobalto, verificou-se um aumento de forma quadrtica no comprimento da parte area, na ausncia, em 0,45 e 0,9 mg L-1 de iodeto de potssio. Pode-se inferir assim que maior nmero de folhas, na ausncia de KI ocorrer em concentraes acima de 0,9 mg L-1 de CoCl2.6H2O. Concluses Maiores resultados no crescimento in vitro de plntulas de C. loddgesii foram obtidos na ausncia de iodeto de potssio e com a adio de 0,045 mg L-1 de cloreto de cobalto. Bibliografia
Amaral, A.F.C. Comportamento in vitro de explantes de matrizes de cenoura ( Daucus carota L.) tratadas com variveis nveis de potssio. Piracicaba, 2003. 103p. Dissertao (Mestrado) Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, Universidade de So Paulo. Areditti, J.; Erenest, R. Micropropagation of orquids. New York: John Wiley, 1993. 682 p. Caldas, L. S.; Haridasan, P.; Ferreira, M. E. Meios nutritivos. In: Torres, A. C.; Caldas, L. S.; Buso, J. A. (Ed.). Cultura de tecidos e transformao gentica de plantas. Braslia: EMBRAPA/ CNPH, 1998. v. 1. p. 87-132. Ferreira, D. F. Anlises estatsticas por meio do SISVAR para windows verso 4.0. In: REUNIAO ANUAL DA REGIAO BRASILEIRA DA SOCIEDADE INTERNACIONAL DE BIOMETRIA, 45., 2000, So Carlos, SP. Anais... So Carlos: UFSCAR, 2000. V.1. 258p. p.225. Kanashiro, S. Nitrognio, fsforo, potssio, clcio e o crescimento de plntulas de Aechmea blanchetiana (Baker) L.B. Smith in vitro. 2005. 187p. Tese de Doutorado em Fitotecnia, ESALQ, Piracicaba. Malavolta, E.; Vitti, G.C.; Oliveira, S.A. Avaliao do estado nutricional das planta; princpios e aplicaes. Piracicaba: POTAFOS, 1997. 319p. Pasqual, M. Cultura de tecidos vegetais: tecnologia e aplicaes: meios de cultura. Meios de cultura. Lavras-MG: UFLA/FAEPE, 2001. 74p.