UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZNIA CAMPUS DE PARAUAPEBAS CURSO DE GRADUAO EM ENGENHARIA FLORESTAL DISCIPLINA: ENTOMOLOGIA FLORESTAL PROF.

ELMECELLI MORAES DE CASTRO

BACTRIAS ENTOMOPATOGNICAS

Parauapebas-PA 2013.

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZNIA CAMPUS DE PARAUAPEBAS CURSO DE GRADUAO EM ENGENHARIA FLORESTAL DISCIPLINA: ENTOMOLOGIA FLORESTAL PROF. ELMECELLI MORAES DE CASTRO

BACTRIAS ENTOMOPATOGNICAS

Discentes:

Dayane Lopes Torres - 20112007 Edilene Conceio de Souza 20112008 Joelson Sousa de Paiva 20112011 Jos Maria Marques da Silva Junior 20112013 Karllane de Castro Silva 20112014 Orleice Patricia Almeida Costa 20112044 Rayana Gondin da Silva 20112041 Silmara Bento da Silva 20112030 Vanderleia da Conceio de Sousa 20112032

BACTRIAS ENTOMOPATOGNICAS CONTROLE BIOLGICO

O controle biolgico um fenmeno que acontece na natureza, atua na regulao do nmero de plantas e animais por inimigos naturais. Este controle vem sendo bastante utilizado, onde explora inimigos naturais para o controle de patgenos, pragas e ervas daninhas, pois o mesmo um componente fundamental no equilbrio da natureza. As vantagens do controle biolgico ausncia de efeitos colaterais adversos, podem atingir alto nvel de controle, o custo baixo aps a implantao e no prejudica o homem, animais e organismos benficos para o meio ambiente. As desvantagens so que esse mtodo de controle pode eliminar a praga totalmente, necessita de amplos conhecimentos tcnicos e mo-de-obra especializada e o nvel de controle pode no ser satisfatrio, necessitando de outras medidas (BERTIFILHO, 1990). Para que o controle alcance resultados, deve se comear com o reconhecimento dos inimigos da praga que esta danificando a cultura. Aps a identificao da espcie e o comportamento da praga, o principal desafio dos centros de pesquisas a reproduo desse inimigo natural em grandes quantidades com custos reduzidos. H vrios tipos de controle biolgicos. O de interesse neste presente trabalho o controle biolgico artificial, onde procede na interferncia do homem proporcionando o aumento de seres predadores, parasitas ou patgenos, podendo ser: insetos, fungos, vrus, bactrias, nematides e caros. No controle de pragas florestais, os inimigos naturais so identificados, apresentando varias alternativas para o controle dessas pragas, como o implemento da eficincia para predadores, parasitoides e microorganismos, principalmente vrus e bactrias. (BERTIFILHO, 1990). As bactrias que produzem esporos e mesmo bactrias no-esporulantes podem causar doenas em insetos. As pertencentes ao gnero Bacillus so as mais importantes para o controle biolgico, sendo o Bacillus popillae utilizado desde a dcada de 30 no controle de colepteros. Outras espcies do mesmo gnero produzem cristais proticos que so txicos quando ingeridos por insetos. o caso do B. thuringiensis , mais conhecido como Bt,

largamente empregado contra dpteros, ortpteros, himenpteros e principalmente lepidpteros( RABINOVITCH,L.; CAVADOS, C.F.G.; LIMA,M.M.2005). A espcie bacteriana Bacillus Thuringiensis considerada a de maior interesse, pois um entomopatgeno de vrias ordens de insetos-praga da agricultura como Lepidoptera, Coleoptera, Hymenoptera, alm de dpteros vetores de doenas humanas como os mosquitos do gnero Culex, Aedes e Simulium (Maagd et al., 2003; Cavados et al., 2001). Segundo Shelton et al. (2002) os primeiros produtos inseticidas contendo subespcies de B. thuringiensis foram comercializados na Frana em 1930. Em 1995 mais de 180 produtos base dessa bactria foram registrados pela Agncia de Proteo Ambiental (EPA) nos Estados Unidos da Amrica do Norte. Pertence famlia Bacillaceae, a qual engloba a maioria das espcies formadoras de esporos, B. thuringiensis um bastonete Gram-positivo, com clula vegetativa de 1,0 a 1,2 m de largura por 3,0 a 5,0 m de comprimento, geralmente mveis. O esporo possui formato elipsoidal e localiza-se na regio central ou paracentral quando no interior da clula-me. A espcie aerbia no estrita com faixa de temperatura de crescimento entre 10 e 45 C. B. thuringiensis apresenta um amplo complexo enzimtico, o que lhe permite utilizar uma variedade de substratos. A principal caracterstica que distingue a espcie das outras do mesmo gnero a presena intracelular de um cristal protico, cuja produo foi descoberta somente em 1953 por Hannay (GLARE; OCALLAGHAN, 2000; HABIB; ANDRADE, 1998; MORAES; CAPALBO; ARRUDA, 2001; VILAS-BAS; PERUCA; ARANTES, 2007). Essas bactrias realizam a produo de cristais proticos que representam uma caracterstica tpica de B. thuringiensis e, em geral, ocorre durante a esporulao. Estes cristais apresentam atividade entomopatognica para vrias espcies de insetos, destacando-se as Ordens dos lepidpteros, dpteros e colepteros. Porm, h subespcies de B. thuringiensis que apresentam cristais txicos contra insetos das Ordens Himenoptera, Hemiptera, Orthoptera, Phthraphera e tambm para alguns nematides, protozorios e caros (BRAR et al., 2006; GLARE; OCALLAGHAN, 2000; SCHNEPF et al., 1998). O modo de ao desse microrganismo est relacionado solubilizao das protenas Cry no intestino dos insetos suscetveis. Esse processo resulta na liberao de fragmentos txicos que se ligam a receptores especficos na membrana do epitlio intestinal levando a

formao de poros e ao desequilbrio osmtico da clula (Aroson & Shai, 2001; Bravo et al., 2002; Fiuza, 2004). Em decorrncia desse efeito o inseto inibe sua alimentao e, consequentemente, morre. As protenas Cry so consideradas como os principais constituintes dos cristais que caracterizam B. thuringiensis, so codificadas por genes que geralmente se localizam em plasmdios e, com menor freqncia, no cromossomo bacteriano (CRICKMORE et al., 2008).

Produo de B. thuringiensis Etapas da produo Embora a produo de B. thuringiensis seja bem estudada, h poucos dados na literatura a esse respeito, visto que muitas informaes so segredos industriais. As principais etapas para a produo de B. thuringiensis so: seleo da linhagem, estocagem, processo fermentativo, recuperao do princpio ativo (esporos e cristais), formulao do produto e anlise da qualidade (MORAES; CAPALBO; F; ARRUDA, 2001; COUCH, 2000). A estocagem apropriada de grande importncia, pois a linhagem deve conservar seu potencial txico e velocidade de crescimento. No caso de B. thuringiensis, as trocas de plasmdios ocorrem com certa freqncia e h relatos de perda de toxicidade aps sucessivas fermentaes, sendo essencial a constante busca por novas linhagens e o monitoramento durante o processo de fermentao (COUCH, 2000; BIZARRI et al., 2008). A forma mais comum de produo de B. thuringiensis por fermentao submersa (lquida) descontnua, tambm conhecida como processo em batelada. Nesta fermentao, um recipiente contendo meio de cultura lquido inoculado com o microrganismo, no havendo acrscimo ou retirada significativa do meio fermentado. Portanto, ocorre todo o desenvolvimento da cultura, sendo retirado o produto apenas no final do processo. Na fermentao industrial os passos a serem seguidos so: pr inculo, geralmente feito em frascos pequenos, pr fermentador, comumente com 1/5 do volume da fermentao e o fermentador final. importante limitar o nmero de passos no processo de produo a fim de evitar contaminaes e mudanas indesejveis no comportamento da bactria (COUCH, 2000; MORAES; CAPALBO; ARRUDA, 2001).

Meios de cultura A escolha do meio de cultivo adequado extremamente importante para o sucesso de um produto. Esta escolha deve proporcionar a mxima produo com o mnimo custo (COUCH, 2000). Os meios de cultivo para B. thuringiensis geralmente possuem uma fonte de nitrognio, outra de carbono e sais minerais. Algumas vezes se adicionam ao meio alguns tampes e anti-espumantes a fim de facilitar o processo. Vrios estudos tm sido feitos utilizando-se como meio de cultivo para B. thuringiensis guas residuais de indstrias e de estaes de tratamento de gua, tais trabalhos tm apresentado bons resultados, e muitas produes em escala piloto em vrias regies do mundo j utilizam tais resduos (LACHHAB; TYAGI;VALRO, 2002; MONTIEL; TYAGI; VALERO, 2001; VIDYARTHI et al., 2002; YEZZA et al., 2005, 2006; CHANG et al., 2008).

Parmetros fsicos durante a fermentao Geralmente, os parmetros monitorados durante o processo de fermentao so: temperatura, pH e taxa de oxignio dissolvido. Sendo este ltimo influenciado, principalmente, pelas taxas de aerao e agitao (COUCH, 2000). O cultivo de B. thuringiensis feito com temperaturas em torno de 30C, sendo que temperaturas superiores podem induzir a supresso da formao de protenas Cry e conseqente diminuio do rendimento. Da mesma forma, temperaturas inferiores desaceleram o ciclo de multiplicao celular, o que causa aumento no tempo e conseqente custo da produo (MORAES; CAPALBO; ARRUDA, 2001; COUCH, 2000). Embora muitos estudos sejam feitos analisando-se os parmetros individuais, o cultivo deve ser visto e estudado como um todo. Neste sentido destaca-se o mtodo de superfcie de resposta que permite uma anlise mais ampla dos parmetros, bem como o estudo da combinao destes fatores (HSU; WU, 2002). O Efeito das Bactrias Sobre os Insetos Atualmente aps estudos foi possvel concluir que algumas bactrias possuem a capacidade de auxiliar no combate a insetos, minimizando assim grandes prejuzos sobre o cultivo de espcies florestais e agrcolas, alm disso a busca por mtodos alternativos de controle de insetos-praga tem sido realizada com afinco por vrios laboratrios ao redor do

mundo, devido necessidade de uma agricultura mais sustentvel e desenvolvida com uma maior preocupao com a preservao do meio ambiente. Dependendo da espcie, as bactrias podem causar inmeros efeitos sobre os insetos tais como: lise osmtica, envio de informaes ao sistema imunolgico para que o mesmo destrua as partes infectadas, entre outros (BOBROWSKI,V.L; FIUZA, L.M.; PASQUALI,G.; ZANETTINI,M.H.B.2003). Bacillus thuringiensis uma bactria gram-positiva e entomopatognica, aerbica ou facultativamente anaerbica, naturalmente encontrada no solo. semelhana de outras bactrias, esta espcie pode manter-se em latncia na forma de endsporos, sob condies adversas. Durante a fase de esporulao, as bactrias sintetizam protenas que se acumulam na periferia dos esporos na forma de cristais em um dos polos da clula. Esta bactria ataca os insetos da seguinte maneira: durante a fase de multiplicao as bactrias sintetizam protenas que se acumulam na periferia dos esporos na forma de cristais. Aps a ingesto da bactria pelo inseto, os cristais so solubilizados no suco gstrico alcalino. As protoxinas constituintes dos cristais so ativadas na regio do intestino mdio, as toxinas ligam-se a receptores stio especficos do epitlio levando formao de poros na membrana e causando a lise celular. (BOBROWSKI,V.L; FIUZA, L.M.; PASQUALI,G.; ZANETTINI,M.H.B.2003).

REFERNCIAS Aroson, A. I. & Shai, Y. 2001. Why Bacillus thuringiensis insecticidal toxins are so effective: unique features of their mode of action. FEMS Microbiology Letters 195: 1-8. Berti Filho, E. O Controle Biolgico do Insetos Praga. In: W.B. Crocomo (Ed.) Manejo Integrado de Pragas. Editora UNESP, So Paulo. 1990. P.87-104. BIZARRI, M. F.; BISHOP, A. H.; DINSDALE; A.; LOGAN, N. A. Changes in the properties of Bacillus thuringiensis after prolonged culture in a rich medium. Journal of Applied Microbiology, Oxford, v. 104, n. 1, p. 60-69, 2008.

BOBROWSKI,V.L; FIUZA, L.M.; PASQUALI,G.; ZANETTINI,M.H.B.; Genes de Bacillus thuringiensis: uma estratgia para conferir resistncia a insetos em plantas. Cincia Rural, Santa Maria, v.34, n.1, p.843-850, set-out, 2003. Disponvel em:

<http://www.scielo.br/pdf/%0D/cr/v33n5/17128.pdf> Acesso em: 20 de jun 2013. BRAR, S. K.; VERMA, M.; TYAGI, R. D.; VALRO J. R. Recent advances in downstream processing and formulations of Bacillus thuringiensis based biopesticides. Process Biochemistry, New York, v. 41, n. 2, p. 323-342, 2006 BRAVO, A.; MIRANDA, R.; GMEZ, I.; SOBERN, M. 2002. Pore formation activity of Cry 1Ab toxin from Bacillus thuringiensis in an improved membrane vesicle preparation from Manduca sexta midgut cell microvilli. Biochemistry et Biophysical Acta 1562: 63-69.

CAVADOS, C.F.G., FONSECA, R.N.; CHAVES, J.Q.; Rabinovitch, L.; Arajo-Coutinho. C.J.P.C. 2001. Identification of Entomopathogenic Bacillus Isolated from Simulium (Diptera, Simuliidae) Larvae and Adults. Memrias do Instituto Oswaldo Cruz 96(7): 1017-1021.

CHANG, M.; SHUN-GUI-ZHOU, E.; LU, E. N.; NI, J-R. Starch processing wastewater as a new medium for production of Bacillus thuringiensis. World Journal of Microbiology & Biotechnology, Oxford, v. 24, n. 4, p. 441-447, 2008.

COUCH, T. L. Industrial fermentation and formulation of entomopathogenic bacteria. In:

CHARLES, J. F. (Org.). Entomopathogenic bacteria: from laboratory to field applications. New York: Kluwer Academic Publishes, 2000. p. 297-316. CRICKMORE, N.; ZEIGLER, D. R.; SCHNEPF, E.; VAN RIE, J.; LERECLUS, D.; BAUM, J.; BRAVO, A.; DEAN, D. H. Bacillus thuringiensis toxin nomenclature. Disponvel: <http://www.lifesci.sussex.ac.uk/Home/Neil_Crickmore/Bt/>. Acesso em: 24 dez. 2008. Fiuza, L.M. 2004. Receptores de Bacillus thuringiensis em insetos. Biotecnologia Cincia e Desenvolvimento 32: 84-89. GLARE, T. R.; OCALLAGHAN, M. Bacillus thuringiensis biology, ecology and safety. Chichester: John Wiley & Sons, 2000, 350 p. HABIB, M. E. M.; ANDRADE, C. F. S. Bactrias entomopatognicas. In: ALVES, S. B. (Coord.). Controle microbiano de insetos. Piracicaba: Manole, 1998. p. 130-140. HSU, Y.; WU, W. A novel approach for scaling-up a fermentation system. Biochemical Engineering Journal, Amsterdam, v. 11, n. 2/3, p. 123-130, 2002. LACHHAB, K.; TYAGI, R. D.; VALRO, J. R. Production of Bacillus thuringiensis biopasticides using wastewaters sludge as raw material: effect of inoculum and sludge solids concentration. Process Biochemistry, New York, v. 37, n. 2, p. 197-208, 2002. Maagd, R.A.; Bravo, A.; Berry, C.; Crickmore, N.; Schnepf, H.E. 2003. Structure, diversity and evolution of protein toxins from spore-forming entomopathogenic bacteria. Annual Review Genetics 37: 409-433 MORAES, I. O.; CAPALBO, D. M. F.; ARRUDA, R. O. M. Produo de bioinseticidas. In: LIMA. U.A.; AQUARONE, E.; BORZANI; W.; SCHMIDELL, W. (Coord.). Biotecnologia industrial: processos fermentativos e enzimticos. Porto Alegre: Edgar Blcher, v. 3, 2001. p. 245-265. MONTIEL, M. L. T.; TYAGI, R. D.; VALERO, J. R. Wastewaters treatment sludge a raw material for the production of Bacillus thuringiensis based biopesticides. Water Ressearch, Oxford, v. 35, n. 16, p. 3807-3816, 2001. RABINOVITCH,L.; CAVADOS, C.F.G.; LIMA,M.M.; Biotecnologia Cincia &

Desenvolvimento. Pesquisadores do Instituto Oswaldo Cruz FIOCRUZ. Ano VIII n.34

jan/jun 2005. p. 40-41. Disponvel: <http://www.biotecnologia.com.br/revista/bio06/6_c.pdf> Acesso em: 20 de jun 2013. SCHNEPF, E.; CRICKMORE, N.; RIE, J. V.; LERECLUS, D.; BAUM, J.; FEITELSON, J.; ZEIGLER, D. R.; DEAN, D. H. Bacillus thuringiensis and its pesticidal crystal proteins. Microbiology and Molecular Biology Review, Washington: [s.n.], v. 62, p. 775-806, 1998. Shelton, A.M.; Zhao, J.Z.; Roush, R.T. 2002. Economic, ecological, food safety and social consequences of the deployment of Bt transgenic plants. Annual Review Entomology 47: 845-881.

VIDYARTHI, A. S.; TYAGIA, R. D.; VALEROB, J. R.; SURAMPALLI, R. Y. Studies on the production of B. thuringiensis based biopesticides using wastewaters sludge as a raw material. Water Ressearch, Oxford, v. 36, n. 19, p. 4850-4860, 2002. VILAS-BAS, G. T.; PERUCA, A. P. S.; ARANTES, O. M. N. Biology and taxonomy of Bacillus cereus, Bacillus anthracis and Bacillus thuringiensis. Canadian Journal of Microbiology, Ottawa, v. 53, n. 1, p. 673-687, 2007. YEZZA, A.; TYAGI, R. D.; VALRO, J. R.; SURAMPALLI, R. Y. Wastewaters sludge pretreatment for enhancing entomotoxicity produced by Bacillus thuringiensis var. kurstaki. World Journal of Microbiology & Biotechnology, Oxford, v. 21, n. 6/7, p. 1165-1174, 2005.