ANLISIS DEL QUIMERISMO EN NIOS CON LEUCEMIA DESPUS DEL TRANSPLANTE DE MDULA SEA

Quimera
El trmino quimera se refiere a un organismo el cual contiene poblaciones celulares de otro individuo, que viven y funcionan juntas.|

QUIMERISMO

NATURAL

ARTIFICIAL

FETAL

TRANSPLANTE DE ORGANOS

MATERNO

TRANSPLANTE DE CELULAS HEMATOPOYETICAS

OTROS CASOS

TRANSFUSION

El anlisis de quimerismo es esencial en el seguimiento de pacientes sometidos a transplante alognico de mdula sea (Alo-TMO). El estado de quimera es uno de los factores que determinan el curso del periodo postransplante, y la posibilidad de rechazo y/o recada.

 Objetivo: Caracterizar el quimerismo y realizar el seguimiento del transplante en pacientes sometidos a Alo-TMO utilizando los VNTRs para detectar tempranamente el posible rechazo del transplante.

 Despus del transplante alognico de mdula sea se desarrolla quimerismo, el cual se puede presentar en diferentes estados: Quimerismo Completo. Quimerismo Mixto.

 Las quimeras influyen en el comportamiento del transplante: Lmite de recada Gravedad de la enfermedad injerto contra husped. Efecto injerto contra leucemia. La diferencia de los marcadores polimrficos entre el donador y el receptor permiten la deteccin del quimerismo.

Mtodos.
Se realizo PCR en el seguimiento de Alo-TMO mediante el anlisis de los VNTRs, para identificar el estado de quimerismo as como para detectar el posible rechazo del transplante.

Materiales y Mtodos.
Poblacin: 4 Pc. Sometidos a Alo-TMO con 3 marcadores diferentes: HUMARA, D1S80, TH01.

Seguimiento: Despus del transplante: c/8 das x 3 meses. Cada 15 das hasta el 6to mes. Despus del sexto mes una vez al mes hasta completar el ao.

Obtencin del DNA

5 ml de Sangre + 20 ml de MgCl2 25 mM Lisado de eritrocitos. Lavado con MgCl2 25 mM/ Nonidet P40 0.1%. Lisis nuclear proteinasa K 300g/L. Tcnica fenol/cloroformo.

MTODO DE PURIFICACIN ADN GENMICO FENOLCLOROFORMO-ALCOHOL ISOAMILICO

PCR
Las condiciones de la PCR fueron las siguientes: 300 ng de DNA MgCl2, 1,5 mM DNTPs, 200uM

PCR
HUMARA y TH01 94C 15min inicial 94C 45 seg 65C 45 seg 72C 90 seg 35 ciclos

D1S80
940C 3 min inicial 94C 1 min 64C 1 min 72C 90 seg 30 ciclos

PCR
Gel poliacrilamida 6% Bromuro de etidio Eagle eye, marca stratagen

RESULTADOS

1 min

* 1,3,4 evolucin favorable

Quimerismo Completo

Quimerismo Mixto

D1S80 y TH01 son informativos en 3 de cuatro pacientes, HUMARA solo para dos. Alto porcentaje de heterocigocidad (80 90%)

DISCUSION
El analisis de los VNTRs en el rea de transplante de mdula sea, ha sido un mtodo exitoso para identificar clulas residuales o recurrentes del paciente; para predecir una recaida (principalmente en pacientes con leucemias cronicas) realizar el seguimiento del transplante y de la terapia.

Conclusin
Esta tcnica de anlisis de VNTRs en gel de acrilamida aplicada en el laboratorio de transplante de mdula sea para el seguimiento de Alo TMO permite detectar tanto el quimerismo completo como el mixto, para complementar la informacin clnica y actuar teraputicamente en forma temprana.