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Universit PARIS-VI Pierre et Marie Curie Facult de Mdecine Piti-Salptrire

Polycopi dHistologie

PCEM1

2003 - 2004

Estelle Escudier (estelle.escudier@psl.ap-hop-paris.fr) Jacques Poirier (japoirie@ext.jussieu.fr) Jean-Michel Andr (jmandre@ext.jussieu.fr) Jean-Jacques Morre

Service dHistologie - Embryologie (Professeurs Martin CATALA et Jacques POIRIER)

Mise jour : 4 juillet 2003 Relecture : Jacques Poirier

2/117 Andr, et JJ Morre Table des Matires 3 13 Table des Matires Avant-Propos

Polycopi dHistologie - E. Escudier, J. Poirier, JM 2003 - 2004

15 e tissu

Chapitre 1 :

Matriel et mthodes de lhistologie mdicale. Le concept d

15 1.1 Matriel et mthodes de lhistologie mdicale 15 1.1.1 Le choix du matriel et les modalits de prlvement 16 1.1.1.1 Lobservation peut porter sur des prparations o les cellules restent entires 16 1.1.1.2 Le plus souvent, le matriel est fix, inclus, coup e t color 17 1.1.1.3 Avant le prlvement, des protocoles exprimentaux plu s ou moins sophistiqus sont parfois mis en uvre 17 1.1.2 Les techniques de MO et de ME sont utilises en rout ine pour visualiser les structures 17 1.1.2.1 Pour la MO : fixation au formol, inclusion en pa raffine, colorations standard (hmatine-osine ou trichrome) 18 1.1.2.2 Pour la ME : fixation la glutaraldhyde, post-fixa tion lacide osmique, inclusion en pon, contraste par lactate duranyle et le citrate de plomb 18 1.1.3 Les techniques spciales de dtection in situ 18 1.1.3.1 Lhistochimie 19 1.1.3.2 Lhistoenzymologie 19 1.1.3.3 Limmunohistochimie 19 1.1.3.4 La lectinohistochimie 20 1.1.3.5 Lhybridation in situ 20 1.1.3.6 Les procds de marquage, de rvlation et dobservation 22 1.1.4 La production des images est lie la mise en uvre de moyens optiques, le plus souvent en rapport avec un microscope 22 1.1.4.1 Les microscopes diffrent par la nature de leur so urce lumineuse 23 1.1.4.2 La cytomtrie en flux permet dexploiter des images sans les regarder 23 1.1.5 Linterprtation des images vise leur donner du sens 23 1.1.5.1 Les incidences de coupe 23 1.1.5.2 Les artfacts 23 1.1.5.3 Les dformations des images 24 1.1.5.4 La mauvaise prservation des tissus 24 1.2 Le concept de tissu 24 1.2.1 Les niveaux dorganisation structurale 24 1.2.2 La dfinition dun tissu 24 1.2.2.1 Association territoriale 25 1.2.2.2 Association fonctionnelle 25 1.2.2.3 Association biologique 25 1.2.3 Les 4 grandes familles de tissus 26 1.2.4 Les populations cellulaires libres et la ligne germ inale 26 1.2.4.1 Les populations cellulaires libres se distribuen t dans tout lorganisme et jouent un rle crucial dans les processus de dfense 26 1.2.4.2 Les cellules de la ligne germinale sigent dans les gonades et assurent la conservation de lespce 27 Chapitre 2 : Les relations intercellulaires

27 2.1 La matrice extra-cellulaire (MEC) 28 2.1.1 Les principaux polysaccharides de la MEC sont des glycosaminoglycanes et protoglycanes 28 2.1.2 La superfamille des collagnes comprend des dizaines

de types diffrents 28 2.1.2.1 Le collagne I est le plus communment distribu 29 2.1.2.2 Le collagne II est surtout prsent dans le cartilag e 29 2.1.2.3 Le collagne III est celui des fibres de rticuline 29 2.1.2.4 Le collagne IV entre dans la constitution des mem branes basales 29 2.1.2.5 Le collagne X est propre aux chondrocytes hypertr ophiques 29 2.1.3 Llastine est la molcule principale des fibres lastique s 29 2.1.4 La fibronectine est un des maillons-cls de ladhrence des cellules la MEC 30 2.1.5 Les membranes basales (MB) entourent certains type s cellulaires 30 2.1.5.1 La MB correspond une rgion spciale de MEC formant une couche complexe autour de tout ou partie de la membrane plasmique de certain es cellules 31 2.1.5.2 Les MB ont de multiples fonctions 31 2.1.6 La matrice pri-cellulaire se situe entre la membran e plasmique des cellules et la MEC 31 2.1.7 La MEC joue un rle physiologique important 31 2.2 Les molcules dadhrence 32 2.2.1 Les intgrines sont les responsables essentiels des interactions cellule-MEC 32 2.2.2 Les cadhrines, calcium-dpendantes, sont responsables dinteractions cellule-cellule 32 2.2.2.1 Les cadhrines classiques 33 2.2.2.2 Les cadhrines desmosomales 33 2.2.3 Les slectines interviennent dans le compartiment va sculaire 33 2.2.4 Les immunoglobulines interviennent dans les intera ctions cellule-cellule 33 2.3 Les systmes de jonction 34 2.3.1 Les jonctions cellule-cellule sont de quatre types diffrents : zonula occludens, zonula adhaerens, desmosomes et jonctions communic antes 34 2.3.1.1 Les zonula occludens (ZO) concernent les cellule s pithliales 34 2.3.1.2 Les zonula adhaerens (ZA) sont des jonctions danc rage qui constituent des ceintures dadhrence 35 2.3.1.3 Les desmosomes sont des jonctions dancrage relies aux filaments intermdiaires du cytosquelette intra-cytoplasmique 35 2.3.1.4 Les jonctions communicantes permettent une commu nication directe entre les cytoplasmes des cellules adjacentes 36 2.3.2 Les jonctions cellule-MEC comprennent les contacts focaux et les hmidesmosomes 36 2.3.2.1 Les contacts focaux sont des jonctions adhrentes ponctuelles entre la membrane plasmique de la cellule et la MEC sous-jacente 36 2.3.2.2 Les hmidesmosomes unissent les molcules de la MEC et les filaments intermdiaires du cytosquelette 36 2.4 Les molcules de signalisation et leurs rcepteurs 36 2.4.1 Les molcules de signalisation sont de nature biochi mique varie 37 2.4.1.1 Les anticorps 37 2.4.1.2 Les neurotransmetteurs et neuromodulateurs 37 2.4.1.3 Les hormones et neurohormones 37 2.4.1.4 Le rseau des cytokines 38 2.4.1.5 Les eicosanodes

38 signalisation 38 38 39 39 beaucoup plus 41

2.4.2 Les modalits de diffusion des diffrentes molcules de sont galement trs diverses 2.4.2.1 Neurocrinie 2.4.2.2 Autocrinie/Paracrinie 2.4.2.3 Endocrinie 2.4.3 En ralit, le monde des molcules de signalisation est complexe Les pithliums

Chapitre 3 :

41 3.1 La cellule pithliale 41 3.1.1 Les cellules pithliales sont hautement polarises 41 3.1.1.1 La membrane plasmique comprend 2 domaines distin cts : apical et basolatral 42 3.1.1.2 Les 2 domaines sont spars par un anneau de jonctio ns serres 42 3.1.2 Les filaments intermdiaires du cytosquelette des ce llules pithliales appartiennent la famille des kratines 42 3.1.3 Le ple apical des cellules pithliales prsente des diffr enciations 43 3.1.4 La rgion latro-basale des cellules pithliales est le s ige de systmes de jonction 43 3.2 Les pithliums de revtement 43 3.2.1 Les pithliums de revtement revtent lextrieur du corps et les cavits de lorganisme 44 3.2.2 Les pithliums de revtement prsentent des diffrenciation s apicales 44 3.2.2.1 Le plateau stri et la bordure en brosse sont cara ctristiques des entrocytes et des cellules du tube contourn proximal du rein 44 3.2.2.2 Les strocils correspondent des microvillosits longu es et flexueuses 44 3.2.2.3 Les cils vibratiles permettent certains pithliums de mettre en mouvement les lments du contenu de la cavit quils bordent 45 3.2.2.4 Les scrtions polarises des cellules des pithliums de revtement sont le plus souvent exocrines 45 3.2.2.5 La membrane plasmique du ple apical des cellules de lurothlium est asymtrique 45 3.2.3 Les pithliums de revtement ne contiennent aucun capil laire sanguin ou lymphatique 45 3.2.4 La classification des pithliums de revtement fait app el trois critres : la forme des cellules, le nombre des couches cellulaires et le type de diffrenciation des cellules qui le composent 46 3.2.4.1 Selon la forme des cellules superficielles 46 3.2.4.2 Selon le nombre de couches de cellules 46 3.2.4.3 Selon les spcialisations fonctionnelles et les di ffrenciations qui les sous- tendent 46 3.2.4.4 Quelques exemples dpithliums de revtement 47 3.3 Les pithliums glandulaires 47 3.3.1 La scrtion est un phnomne cellulaire trs gnral 47 3.3.1.1 La voie de scrtion constitutive est commune toutes les cellules de lorganisme 47 3.3.1.2 La voie de scrtion rgule est propre aux cellules scrtr ices 48 3.3.1.3 Les mcanismes molculaires de lexocytose sont ubiqui taires 48 3.3.2 Les glandes sont des groupements organiss de cellul es glandulaires 48 3.3.2.1 Pendant lhistognse, les pithliums glandulaires se for

ment partir des pithliums de revtement 48 3.3.2.2 Dans les glandes, les cellules glandulaires sont troitement associes du tissu conjonctif richement vascularis 48 3.3.2.3 Les 3 grandes varits de glandes 49 3.3.3 Les glandes exocrines dversent leur produit de scrtio n dans le milieu extrieur 49 3.3.3.1 Sauf exceptions, les glandes exocrines comporten t une portion scrtrice et un canal excrteur 49 3.3.3.2 Les cellules exocrines scrtent des protines enzymat iques, des mucus ou des produits complexes 51 3.3.4 Les glandes endocrines dversent dans le sang des ho rmones qui agissent distance sur les rcepteurs spcifiques des organes-cibles 51 3.3.4.1 Les cellules qui scrtent des hormones hydrosoluble s 52 3.3.4.2 Les cellules qui scrtent des hormones hydrophobes 52 3.3.4.3 Les neurones neuroscrtoires scrtent des neurohormone s 53 3.3.4.4 Les cellules neuroendocrines forment un systme en docrinien diffus scrtant de nombreux neuropeptides et des amines biognes 55 Chapitre 4 : Les tissus conjonctifs. Les tissus adipeux

55 4.1 Le tissu conjonctif lche 55 4.1.1 Les fibroblastes sont les cellules principales du tissu conjonctif 55 4.1.2 Le tissu conjonctif lche est trs rpandu dans lorganism e 56 4.1.3 Le rle que joue le tissu conjonctif lche dans lorgani sme est important et complexe 56 4.2 Le tissu rticulaire 56 4.3 Les tissus conjonctifs denses 56 4.3.1 Les tissus conjonctifs fibreux denses 57 4.3.2 Les tissus lastiques 57 4.4 Les tissus squelettiques 57 4.5 Les tissus adipeux 57 4.5.1 La graisse blanche est la plus importante rserve ner gtique de lorganisme 57 4.5.1.1 Les adipocytes blancs renferment une volumineuse vacuole de triglycrides 58 4.5.1.2 Le tissu adipeux blanc reprsente 15 20 % du poids de ladulte 58 4.5.1.3 Ladipocyte blanc assure la synthse, le stockage et la libration des lipides 59 4.5.1.4 Ladipocyte blanc est galement une cellule scrtrice e ndocrine et auto- paracrine 59 4.5.2 La graisse brune est une source de chaleur 59 4.5.2.1 Surtout abondante chez les mammifres hibernants, la graisse brune est nanmoins prsente dans lespce humaine 60 4.5.2.2 Les mitochondries des adipocytes bruns contienne nt une protine dcouplante, la thermognine, qui permet de dissiper lnergie des oxydations sous forme de chaleur 61 Chapitre 5 : Les populations cellulaires libres

61 5.1 Les lments figurs du sang 61 5.1.1 La numration-formule sanguine est un examen de rout ine 62 5.1.2 Les globules rouges effectuent le transport de loxy gne fix par lhmoglobine 63 5.1.3 Les plaquettes maintiennent lintgrit du systme circula toire et assurent lhmostase quand les vaisseaux sanguins sont endommags 63 5.2 Les cellules immunitaires dans les tissus 63 5.2.1 Les monocytes et les macrophages constituent le sy stme des phagocytes mononucls 63 5.2.1.1 Une fois forms dans la moelle osseuse, les monocy tes passent dans le sang 63 5.2.1.2 Aprs tre sortis du sang, les monocytes migrent dan s les tissus et sy diffrencient en macrophages 64 5.2.1.3 Les macrophages font partie des cellules prsentat rices dantignes 64 5.2.2 Les granulocytes interviennent dans les ractions de dfense non spcifiques de lorganisme 64 5.2.2.1 Les granulocytes neutrophiles 65 5.2.2.2 Les granulocytes osinophiles 65 5.2.2.3 Les granulocytes basophiles 65 5.2.3 Les mastocytes participent avec les granulocytes b asophiles aux ractions dhypersensibilit immdiate (ractions allergiques) 66 5.2.4 Les lymphocytes sont les cellules effectrices du s ystme immunitaire 66 5.2.4.1 Laspect morphologique des lymphocytes est monomor phe 66 5.2.4.2 Les lymphocytes acquirent leur comptence fonctionn elle au cours de leur passage dans un organe lymphode central 66 5.2.4.3 La maturation fonctionnelle des lymphocytes se t raduit par lapparition dantignes membranaires spcifiques 67 5.2.4.4 Les lymphocytes B sont responsables de limmunit hu morale 67 5.2.4.5 Les lymphocytes T sont impliqus dans limmunit cellu laire 68 5.2.4.6 Les lymphocytes NK ne sont ni T ni B 69 5.3 Le tissu lymphode 69 5.3.1 Rpartition du tissu lymphode 69 5.3.2 Les follicules lymphodes 71 Chapitre 6 : Les tissus squelettiques

71 6.1 Le tissu osseux 71 6.1.1 Le tissu osseux contient 4 types de cellules 71 6.1.1.1 Les ostoblastes 72 6.1.1.2 Les ostocytes 72 6.1.1.3 Les cellules bordantes 72 6.1.1.4 Les ostoclastes 72 6.1.2 La MEC du tissu osseux est calcifie 73 6.1.2.1 La matrice organique 73 6.1.2.2 La phase minrale 73 6.1.3 Compact ou spongieux, le tissu osseux de ladulte es t de type lamellaire 73 6.1.3.1 Os longs, os courts, os plats 74 6.1.3.2 La plupart des os sont constitus dune zone externe de tissu osseux compact et dune zone interne de tissu osseux spongieux 74 6.1.4 Le remodelage osseux est le fait dune coopration prci

se entre les ostoclastes et les ostoblastes 74 6.1.4.1 Phase dactivation 75 6.1.4.2 Phase de rsorption du tissu osseux 76 6.1.4.3 Phase dinversion 76 6.1.4.4 Phase de formation de tissu osseux 77 6.1.5 Capital osseux et perte osseuse 77 6.1.6 Los peut se rparer spontanment aprs une fracture 77 6.2 Le tissu cartilagineux 77 6.2.1 Le tissu cartilagineux, communment appel cartilage , se caractrise par 5 points essentiels 77 6.2.1.1 Cest un tissu conjonctif spcialis de consistance du re 78 6.2.1.2 Il est form de chondrocytes et de MEC 79 6.2.1.3 Le cartilage est dpourvu de vascularisation et din nervation 79 6.2.1.4 Le cartilage revt une grande diversit 80 6.2.1.5 Certains cartilages sont plus concerns que dautres par la pathologie 80 6.2.2 Le cartilage articulaire 81 6.2.3 Le cartilage de conjugaison (ou de croissance) 81 6.2.3.1 Le cartilage de croissance est organis en colonne s 81 6.2.3.2 La transition entre le tissu cartilagineux et os seux est abrupte au niveau du front de minralisation 81 6.2.3.3 GH et les strodes sexuels agissent sur la croissan ce des os 82 6.2.3.4 Le contrle molculaire de lossification endochondral e commence tre connu 83 Chapitre 7 : Le systme nerveux. Les neurones

83 7.1 Le systme nerveux 83 7.2 Les neurones 84 7.2.1 La fonction des neurones est indissociable de leur forme 84 7.2.1.1 Le neurone comprend un corps cellulaire, des den drites et un axone 84 7.2.1.2 Mais les diffrences dun neurone lautre sont nombreu ses 85 7.2.2 La structure des neurones est caractristique 85 7.2.2.1 Le noyau, volumineux et sphrique, contient un gro s nuclole 85 7.2.2.2 Le cytoplasme est riche en organites, mais leur rpartition nest pas homogne 86 7.2.3 La membrane plasmique neuronale est le sige des syn apses 86 7.2.3.1 Llment pr-synaptique renferme les vsicules synaptique s contenant les neurotransmetteurs 88 7.2.3.2 La fente synaptique est le trs mince espace qui sp are la membrane pr- synaptique de la membrane post-synaptique 88 7.2.3.3 Llment post-synaptique prsente de nombreux rcepteurs membranaires 91 Chapitre 8 : Le systme nerveux central. Le systme nerveux priphrique

91 8.1 Le systme nerveux central 91 8.1.1 Elments constitutifs 91 8.1.1.1 Les cellules gliales 92 8.1.1.2 Les capillaires sanguins 93 8.1.1.3 La MEC du SNC 93 8.1.2 Lorganisation tissulaire 93 8.1.2.1 La SG contient tous les corps cellulaires neuron aux et toutes les synapses du SNC 94 8.1.2.2 La SB, dpourvue de synapses, est essentiellement faite de faisceaux daxones myliniss 95 8.1.2.3 Lpendyme 96 8.1.2.4 Le revtement astrocytaire marginal 96 8.1.3 La rpartition de la SG et de la SB au sein du SNC rp ond des critres prcis 96 8.1.3.1 Lexemple dune coupe de moelle pinire 97 8.1.3.2 Deux exceptions : le cortex crbral et le cortex crbe lleux 98 8.2 Le systme nerveux priphrique 98 8.2.1 Les nerfs priphriques 98 8.2.1.1 Quelles soient mylinises ou amyliniques, les fibres nerveuses priphriques associent toujours un ou des axones une succession de cellul es de Schwann 98 8.2.1.2 Une fibre nerveuse priphrique amylinique est consti tue par un faisceau daxones associs une mme squence de cellules de Schwann 98 8.2.1.3 Une fibre nerveuse priphrique mylinise est constitue par un seul axone mylinis, associ une mme squence de cellules de Schwann 100 8.2.1.4 Dans les troncs nerveux, les fibres nerveuses se groupent en fascicules 100 8.2.2 Les ganglions nerveux 100 8.2.2.1 Les axones des fibres nerveuses priphriques sont is sus dun corps cellulaire neuronal 100 8.2.2.2 Les ganglions sensitifs spinaux et crniens 101 8.2.2.3 Les ganglions sympathiques et parasympathiques 101 8.2.3 Les terminaisons nerveuses 101 8.2.3.1 Les terminaisons nerveuses affrentes 101 8.2.3.2 Les terminaisons nerveuses effrentes 103 Chapitre 9 : Les tissus musculaires

103 9.1 Caractristiques gnrales 104 9.2 Les tissus musculaires stris 104 9.2.1 Le sarcomre reprsente lunit lmentaire dorganisation des p otines contractiles des myocytes stris 104 9.2.1.1 Les myofibrilles 104 9.2.1.2 Les filaments pais sont essentiellement forms de las semblage rgulier de molcules de myosine 105 9.2.1.3 Les filaments fins sont essentiellement composs de polymres dactine 105 9.2.1.4 Les disques Z sont forms par lorganisation quadrati que de filaments dalpha-actinine 105 9.2.2 Les autres constituants cytoplasmiques sont situs en tre les myofibrilles 105 9.2.2.1 De nombreuses mitochondries 105 9.2.2.2 Des filaments intermdiaires de desmine et des micr otubules 105 9.2.2.3 Le rticulum sarcoplasmique longitudinal 106 9.2.2.4 De nombreux grains de glycogne

106 9.2.3 Le sarcolemme et la rgion sous-sarcolemmique prsenten t des diffrenciations fondamentales 106 9.2.3.1 Les transporteurs de glucose 106 9.2.3.2 Le systme T 106 9.2.3.3 Les costamres 107 9.2.4 Les phnomnes molculaires de la contraction musculaire et du couplage excitation-contraction sont maintenant bien connus 107 9.2.4.1 La contraction de la myofibrille 107 9.2.4.2 Le droulement des vnements 107 9.3 Le tissu musculaire stri squelettique 108 9.3.1 Les jonctions neuro-musculaires 108 9.3.1.1 La jonction neuro-musculaire est la synapse entre les terminaisons axonales du motoneurone alpha et le rhabdomyocyte 108 9.3.1.2 Au niveau des terminaisons axonales, plusieurs ty pes de canaux ioniques sont prsents 109 9.3.2 Les jonctions myo-tendineuses 109 9.3.3 Les fibres de type I et de type II 109 9.3.4 Les fuseaux neuro-musculaires 110 9.3.5 Lorganisation du tissu conjonctif du muscle squelett ique 110 9.3.6 Les cellules satellites 110 9.4 Le tissu musculaire stri cardiaque 110 9.4.1 Le tissu musculaire stri cardiaque (ou tissu myocard ique) se caractrise par son aptitude se contracter rythmiquement et harmonieuseme nt de faon spontane 111 9.4.2 Les cellules myocardiques diffrent des cellules musc ulaires stries squelettiques par plusieurs points fondamentaux 111 9.4.2.1 Laspect gnral est trs diffrent 111 9.4.2.2 La diversit des rcepteurs membranaires 111 9.4.2.3 Labsence de jonction neuro-musculaire et donc de p laque motrice 111 9.4.2.4 Lexistence de dispositifs de jonction cellule-cell ule 112 9.4.3 Il existe trois varits principales de cardiomyocytes 112 9.4.3.1 Les cardiomyocytes contractiles 112 9.4.3.2 Les cellules myoendocrines 112 9.4.3.3 Les cellules cardionectrices 113 9.5 Le tissu musculaire lisse 113 9.5.1 Les protines contractiles ne sont pas organises aussi rigoureusement que dans le muscle stri 114 9.5.2 La prsence de jonctions communicantes permet la diff usion de lexcitation entre les CML 114 9.5.3 Entre les jonctions communicantes, le sarcolemme de s CML est divis en 2 domaines distincts 114 9.5.3.1 Un domaine correspond des plaques dadhrence 114 9.5.3.2 Lautre domaine est appel cavolaire 115 9.5.4 Les CML scrtent les molcules de leur MB et de la MEC e nvironnante 115 9.5.5 Les CML sont isoles ou groupes en tuniques ou en musc les individualiss 115 9.5.5.1 CML isoles 115 9.5.5.2 Tuniques 115 9.5.5.3 Petits muscles individualiss 116 9.5.6 Il existe en effet de multiples varits diffrentes de c ellules musculaires lisses 116 9.5.6.1 Les CML viscrales 116 9.5.6.2 Les CML vasculaires 116 9.5.6.3 Les cellules myopithliales

116 116 117 sont lobjet Avant-Propos Les auteurs

9.5.6.4 Les cellules myopithliodes 9.5.6.5 Les myofibroblastes 9.5.7 Les CML sont innerves par le systme nerveux vgtatif, et de rgulations auto/paracrines

Texte : Estelle Escudier et Jacques Poirier Schmas et dessins : Jean-Michel Andr, Jean-Jacques Morre et Jacques Poirier Animations : Jean-Michel Andr et Jacques Poirier

Images et animations : mode demploi Les images de ce document sont des animations ou des vignettes. Les vignettes peuvent tre agrandies en cliquant dessus. Il sagit dimages fixes . Les autres images comportent une ou plusieurs animations flash qui sont dcle nches en cliquant sur les lgendes de police bleues. Le survol du titre en noir permet le retour limage dorigine et laffichage de donnes dordre gnral. Lorsquune loupe apparat, il est possible de cliquer dessus pour dclencher un zoom a nim. Abrviations utilises dans les lgendes :

MO ME TM Fg fg

Microscopie optique Microscopie lectronique Trichrome de Masson Fort grossissement Faible grossissement

Le concours de PCEM1 Ce polycopi est le document de base, ncessaire et suffisant pour prparer le co ncours de PCEM1 de la Facult de mdecine Piti-Salptrire et de lUniversi- t de Nouvelle aldonie. Trois livres de rfrence, non indispensables la prparation du concours, peu- ve nt tre consults : Histologie molculaire. Texte et Atlas (J. Poirier, J.L. Ribadeau Dumas, M. Catala, J.-M. Andr, R.K. Gherardi, J.F. Bernaudin, 1 vol, 6 dition, ditions Mas- son, Paris, 1999). Histologie. Les tissus (J. Poirier, J.-L. Ribadeau Dumas, M. Catala, J.-M. An dr, R.K. Gherardi, J.-F. Bernaudin, collection des abrgs, cours + exos, ditions Mass on, 2002). Histologie. 300 QCM (J. Poirier, M. Catala, J.-M. Andr, avec la collaboration de J.-F. Bernaudin et R.K. Gherardi, ditions Masson, 2002). De multiples sites internet peuvent galement tre visits : On en trouvera une liste non exhaustive dans la rubrique Sites visiter du site dh istologie-embryologie sur le site web de la facult http://www.chups.jussieu.fr Lpreuve dHistologie du Concours Lpreuve se droule conjointement avec celle dembryologie. Elle dure 1h 30 et com- pre nd 60 QCM sans patron de rponse : 30 dhistologie et 30 dembryologie. Le programme dhistologie correspond au contenu de ce polycopi. Chapitre 1

Matriel et mthodes de lhistologie mdicale. Le concept de tissu

1.1 Matriel et mthodes de lhistologie mdicale Toute activit histologique a en commun laction de voir (observer) et dinterprter ce qui est vu. Dans toute dmarche dordre histologique, 4 tapes se succdent : 1) le choi x du matriel tudier, 2) la technique permettant de visualiser les structures ou les phnomnes que lon veu t tudier, 3) la production dimages de ces structures ou de ces phnomnes, par des moyens optiq ues, 4) linterprtation de ces images. Lhistologie molculaire a pour but de visualiser in situ - dans les tissus, les cel lules, leurs organites ou la matrice extra-cellulaire (MEC) - des molcules (en pa rticulier les gnes, leurs ARN-messa- gers et les protines pour lesquelles ils code nt), en dterminant leur situation et leur configuration. Lhistologie molculaire per met donc de dcrire la morphologie cellulaire et tissulaire en termes darchitecture et dinteractions molculaires.

1.1.1 Le choix du matriel et les modalits de prlvement Les mthodes utilises en histologie varient selon le matriel (chantillons ou specimen s) tudier et les objectifs de lexamen (diagnostic histopathologique chez lhomme ou chez lanimal, ou pro- tocole de recherche). 1.1.1.1 Lobservation peut porter sur des prparations o les cellules restent entires Des cellules vivantes peuvent tre observes entre lame et lamelle afin dvaluer c ertaines de leurs fonctions (par exemple, mobilit des spermatozodes, mesure de la frquence du batte- ment des cellules cilies, chimiotactisme des granulocytes neutr ophiles). Lexamen micros- copique est parfois effectu aprs adjonction de colorants vitaux qui permettent dvaluer la viabilit cellulaire (bleu trypan, nigrosine qui pntr ent dans les cellules mortes), ou de mettre en vidence des structures (rouge neut re visualisant les vacuoles de pinocytose). Les cultures cellulaires permettent de maintenir des cellules en survie et de les tudier in vitro. Elles peuvent tre ralises partir de fragments dorgane ou de c ellules dissocies par action enzymatique, cultives en suspension ou sur un support auquel elles adhrent. Ces techniques sont largement utilises en recherche mais au ssi en diagnostic : ainsi, par exemple, les caryotypes sont habituellement raliss sur des cultures de lymphocytes sanguins ou de cellules du liquide amniotique. Des cellules entires fixes peuvent tre examines sur des frottis (talement de cel lules sur une lame de verre) pour ltude des cellules sanguines et de celles de dif frents liquides de lorganisme (comme, par exemple, le liquide crbrospinal, du liquid e articulaire, du liquide dpanchement pleural, du liquide dascite) ou sur des empre intes (cellules provenant dun fragment dorgane - un ganglion lymphatique par exemp le - apposes sur une lame). Ces tech- niques peuvent tre utilises pour rechercher d es cellules tumorales, comme cest le cas pour les frottis cervico-vaginaux de dpis tage des cancers du col de lutrus. 1.1.1.2 Le plus souvent, le matriel est fix, inclus, coup et color

Les cellules, associes dans des tissus, sont coupes afin de pouvoir les observer a u microscope. Il sagit dobserver au microscope optique (MO) ou lectronique (ME) des cellules, tissus, organes ou fragments dorgane, voire des organismes entiers (em bryons de souris par exemple) quune pr- paration technique plus ou moins complique aura rendues suffisamment minces et transparents pour tre observs et suffisamment contrasts pour y reconnatre les divers lments constitutifs. On peut distinguer ltude d es cellules isoles ( cytologie ) et celles des coupes de tissus ou dor- ganes ( histo logie ). Les examens histologiques sont en rgle raliss aprs traitement du matriel par des agen ts physiques ou chimiques (fixateurs) qui tuent les cellules mais visent prserver au ma ximum leurs ca- ractristiques morphologiques et biochimiques.

Le matriel est prlev de diffrentes faons. Le matriel histologique peut tre obte par biopsie (directe comme pour la peau, le muscle ou avec endoscopie pour les o rganes des ap- pareils respiratoire, digestif, urinaire), par ponction laiguille (comme pour les liquides pleural, pritonal, articulaire, pour les ganglions, les s eins, la moelle osseuse). Le matriel histologique peut aussi provenir dune pice opra toire, dune autopsie ou de la dissection dorgane en exprimentation animale. La microdissection permet dintervenir sur un seul type cellulaire. Lutilisati on de systmes de microdissection utilisant un faisceau laser permet de recueillir des cell ules dont les protines, les ARN et lADN sont intacts et susceptibles dtre analyss lc le dune population cellulaire pure (par exemple constitution de banque dADN complmentaires, t ude de lexpression des gnes). 1.1.1.3 Avant le prlvement, des protocoles exprimentaux plus ou moins sophistiqus so nt parfois mis en uvre

On peut utiliser des procds classiques comme les excisions, les greffes, les traage s cellulaires. On peut galement faire appel des manipulations gntiques. Les organismes les plus utiliss pour des manipulations gntiques sont les plantes, l e ver nma- tode Caenorhabditis Elegans , la mouche Drosophile et la souris. Les d eux mthodes les plus em- ployes pour analyser la fonction dun gne in vivo sont : 1) la surexpression de ce gne (souris transgniques cres par injection directe du gne dint dans un uf fcond), 2) linvalidation de ce gne (souris knockout ).

1.1.2 Les techniques de MO et de ME sont utilises en routine pour visualiser les structures Pour rendre visible ce que lon veut observer, il est ncessaire de mettre en uvre de s techniques diverses (prparation des chantillons) que lon applique au matriel. Pour lobservation en MO ou en ME, les coupes examines sont le fruit de procdures techni ques qui requirent plusieurs tapes successives : fixation, inclusion, coupe, color ation, montage. 1.1.2.1 Pour la MO : fixation au formol, inclusion en paraffine, colorations sta ndard (hmatine-osine ou trichrome) La fixation a pour but la conservation des structures et le durcissement de s pices. Elle doit se faire immdiatement aprs le prlvement, par immersion du matriel d ans un grand volu- me de liquide fixateur. Les liquides fixateurs les plus utili ss sont le formol ou le liquide de Bouin (mlange de formol et dacide picrique). La dure de la fixation varie selon le volume des prlvements (de quelques heures pour u

n petit fragment biopsique plusieurs semaines pour un cerveau humain entier). Linclusion a pour but de permettre la ralisation de coupes fines et rgulires. L e milieu din- clusion le plus utilis est la paraffine. Comme la paraffine est hydr ophobe, le prlvement doit dabord subir une dshydratation (par immersion dans des bai ns dalcool de degr croissant puis dans des bains de tolune) avant dtre coul dans un mo ule contenant de la paraffine fon- due par chauffage et devenue liquide, qui inf iltre alors toute la pice. Aprs refroidissement, on se trouve en prsence dun bloc de paraffine, dur, lintrieur duquel la pice prleve est incluse. Dans certains cas, on u tilise dautres milieux dinclusion (cellodine, rsines plasti- ques, etc.). Les coupes du bloc de paraffine sont faites avec un microtome permettant de raliser des tran- ches de section (coupes) de 2 5 mm dpaisseur. Les coupes sont re cueillies sur des lames de verre. Les colorations ralises sur lames, accentuent les contrastes pour mieux recon natre les dif- frents lments de la prparation. Comme les colorants sont en solution a queuse, les coupes doivent dabord subir une rhydratation. Celle-ci est effectue aprs dparaffinage des coupes (par la chaleur et des bains de tolune) en immergeant les lames dans des bains dalcool de degr dcroissant puis dans leau distille. Les colorat ions les plus frquemment utilises as- socient deux ou trois colorants diffrents : lHm atine-Eosine (H.E.) associe lhmatine qui colore les noyaux en violet et losine les cyt oplasmes en rose ; les colorations trichromiques usuelles sont lHmatine-Eosine-Safr an (H.E.S.) par ajout de safran colorant en jaune les fi- bres de collagne, et le trichrome de Masson qui associe un colorant nuclaire (hmatoxyline), un colorant c ytoplasmique et un colorant bleu ou vert colorant les fibres de collagne. De nomb reuses colorations spciales (dites signaltiques) permettent de visualiser diffrente s structures ou composants des tissus (par exemple, les fibres de rticuline par d es colorations argentiques ou les fibres lastiques par lorcine). Le montage. Aprs avoir subi une dshydratation (par bains dalcool de degr croiss ant puis bains de tolune), les coupes colores sont montes entre lame et lamelle ave c une rsine syn- thtique dont lindice de rfraction est voisin de celui du verre. On dispose alors dune prparation microscopique (simplement appele lame dans le langage courant) prte bserve au MO. 1.1.2.2 Pour la ME : fixation la glutaraldhyde, post-fixation lacide osmique, incl usion en pon, contraste par lactate duranyle et le citrate de plomb La technique dite standard de ME est analogue dans ses principes celle de MO, ma is les mo- dalits prcises diffrent. La fixation se fait habituellement dans de la glutaraldhyde tamponne et est s uivie dune post-fixation lacide osmique. Linclusion se fait dans une rsine synthtique type Epon ou Araldite, aprs que le s fragments ont t dshydrats dans les alcools et dans loxyde de propylne. Les coupes ultrafines des blocs sont ralises grce un ultramicrotome qui permet dobtenir des coupes ultrafines denviron 80 nm dpaisseur. Les coupes sont recueillie s sur des grilles de cuivre. Avec le mme ultramicrotome, on peut faire des coupes semi-fines, observables en MO et permettant de guider le choix des zones tudier en ME. Le contraste des coupes seffectue habituellement avec de lactate duranyle (cont rastant les nucloprotines : noyau, nuclole, ribosomes) et des sels de plomb comme l e citrate de plomb (contrastant les membranes).

1.1.3 Les techniques spciales de dtection in situ

1.1.3.1 Lhistochimie

Les techniques histochimiques sont bases sur des ractions biochimiques qui permett ent de mettre en vidence in situ , dans les cellules ou dans les tissus, diffrents constituants (lipides, glucides, protines, acides nucliques, mtaux, etc). Par exemple, lidentification du glycogne, des protoglycanes et des mucines dans la raction de Schiff (PAS) correspond loxydation de certains polysaccharides par lacid e priodique, rvle par une coloration rouge. 1.1.3.2 Lhistoenzymologie La prsence denzymes (phosphatases, par exemple) peut tre dcele par leur action sur un subs- trat fourni au cours de la technique histoenzymologique, permettant dobten ir un produit secondai- rement rvl par coloration. 1.1.3.3 Limmunohistochimie Consulter le site du Manuel dImmunocytochimie de lUniversit de Strasbourg. Limmunohi stochimie (ou immunocytochimie) consiste dtecter dans les tissus ou les cellules, le site de la liaison dun anticorps spcifique avec la protine contre laquelle il e st dirig.

Les anticorps spcifiques sont polyclonaux ou monoclonaux Les anticorps spcifiques peuvent tre fabriqus en injectant plusieurs reprises un cha n- tillon de lantigne (protine dtecter) un animal (le plus souvent, lapin ou chvre), et en recueillant ensuite le srum riche en anticorps (antisrum). Cet antisrum conti ent dif- frents anticorps dits polyclonaux, produits par diffrents plasmocytes, re connaissant di- vers antignes de la protine dintrt. Un anticorps monoclonal correspond une population danticorps identiques dirigs con tre le mme site antignique dune protine. Ces anticorps sont produits en grande quantit en culture par un clone de lymphocytes B selon la technique des hybridomes. Aprs av oir im- munis une souris contre un antigne donn, on prlve dans sa rate des lymphocyte s B. Ceux-ci sont fusionns avec des plasmocytes tumoraux immortaliss. Aprs slection, les hybridomes ainsi obtenus sont une source permanente et stable dun seul type danticorps monoclonal. La spcificit des anticorps monoclonaux est suprieure celle de s srums po- lyclonaux, mais leur sensibilit peut tre infrieure. Les modes de rvlation de la liaison antigne-anticorps sont nombreux Il existe de nombreuses variantes techniques correspondant aux diffrents modes de rv- lation de la liaison antigne-anticorps ou des procds permettant damliorer la qu t des rsultats. Parmi ces derniers, lutilisation dun anticorps secondaire ragissant a vec lanticorps primaire et/ou le dmasquage de sites antigniques grce une digestion p ar une enzyme protolytique et/ou le chauffage des lames au four micro-ondes. 1.1.3.4 La lectinohistochimie La lectinohistochimie (ou lectinocytochimie) repose sur lutilisation de lectines, protines dorigi- ne animale, vgtale ou bactrienne, capables de reconnatre et de se li er des copules hydrocar- bones des composants cellulaires, notamment des sucres d u cell-coat revtant les membranes plasmiques. Les lectines sont spcifiques dun sucre donn. 1.1.3.5 Lhybridation in situ Lhybridation in situ (HIS) dtecte et localise des squences dADN ou dARN. Elle utilise des sondes dacides nucliques qui mettent en vidence et localisent, dan

s des cellules ou des tissus, des squences dacides nucliques complmentaires de la so nde par leurs bases. LHIS est un outil incomparable pour tudier lexpression des gnes . Elle est proche, dans son prin- cipe, des Southern et des Northern blots et re pose, comme eux, sur lhybridation dune sonde daci- de nuclique (ADN ou ARN) marque do nt la squence est complmentaire des acides nucliques que lon cherche identifier et l ocaliser. Alors que les Southern et Northern blot se font sur des broyats de tis sus, lHIS seffectue sur coupe histologique, apportant ainsi des informations prcise s sur la localisation des acides nucliques tudis. Les sondes utilises sont le plus s ouvent de lADN, un ARN-messager ou des oligonuclotides synthtiques. Le marquage des sondes peut tre ralis par des isotopes radio-actifs ( sondes chaudes : tritium H3, phosphore P32 ou P33, sou- fre S35). La rvlation se fait par autoradiographie. Le comptage des grains dargent sur les auto- radiographies permet une tude semi-quant itative. Le marquage des sondes peut galement se faire par des produits non radio -actifs (sondes dites froides ) [voir plus loin] 1.1.3.6 Les procds de marquage, de rvlation et dobservation Quil sagisse de lanticorps utilis en immunohistochimie, de la lectine utilise en lect inohis- tochimie ou de la sonde utilise en hybridation in situ, les procds de marqu age et de rvlation sont analogues.

visualiser Rvlation Observation

Raction

Marquage

ANTIGENE ANTICORPS 1aire FLUOROCHROME fluorescine rhodamine, etc MO/UV M.confocal (protine) [I.C.C] AC 2aire ENZYME HRP AP chromogne (DAB) romogne MO/(brun) MO/(rose)

SUCRE (membranes plasmiques) LECTINE

[L.C.C] ORCOLLOIDAL

ME

ADN/ ARN

SONDE [H.I.S]

froide

chaude BIOTINE DIGOXYGENINE ISOTOPES RADIO-ACTIFS AVIDINE AC-ANTIBiotine AC-ANTIDIG RADIOAUTOGRAPHIE MO ME

Il sagit de coupler (conjuguer) lanticorps, la lectine ou la sonde avec : soit un fluorochrome (cest dire un produit fluorescent, comme la fluorescine ou la rhoda- mine) que lon visualisera par lobservation au MO lumire ultra-violette o u au microscope confocal. La technique de FISH (ou Fluorescent In Situ Hybridiza tion ) consiste utiliser des sondes complmentaires des diffrents chromosomes et le s visualiser laide danticorps fluorescents. soit une enzyme (comme la peroxydase du raifort ou la phosphatase alcaline) q ue lon fait agir sur son substrat ; le produit de la raction enzymatique est rvl par un chromogne (comme la diaminobenzidine par exemple) qui le colore (en brun, en r ose ou de toute autre couleur) et que lon peut observer en MO. La sensibilit et la fiabilit des techniques immunohistochimiques utilisant les mar quages par une enzyme (mthodes dites immuno-enzymatiques) ont t amliores par plusieurs mtho- des damplification du signal : couplage de lanticorps secondaire avec un complexe pe-

roxydase-anticorps anti-peroxydase (PAP), un complexe enzymatique (Alcalin Phosp hatase Anti Alcalin Phosphatase, dite technique APAAP) ou un complexe avidine-bi otine conjugu un systme de rvlation (cf plus loin). La technique peroxydase-antipero xydase (PAP) est la mthode de choix pour le diagnostic histopathologique de routi ne. Lanticorps secondaire saccroche par un de ses sites un complexe peroxydase-anticorps anti-peroxydase. L es pe- roxydases endognes doivent videmment tre pralablement bloques par leau oxygne. s mthodes immuno-enzymatiques peuvent tre ralises sur des coupes de tissus congels ou surtout sur du matriel fix dans le formol et inclus en paraffine. soit des billes dor collodal reprables ensuite en ME ; lutilisation de billes de diamtres dif- frents permet des marquages multiples. soit de la biotine, vitamine hydrosoluble qui se lie lavidine ou streptavidine (protine bactrienne), par une liaison de haute affinit et de grande spcificit. Le systme biotineavidine est son tour marqu et rvl par un des procds prcdents (fluorochrome, enzyme lles dor). On peut galement localiser la biotine en utilisant des anticorps anti-b iotine cou- pls comme prcdemment un fluorochrome, une enzyme ou de lor collodal. soit de la digoxignine, dtecte par des anticorps anti-digoxignine coupls, selon la formule prcdente, un systme de rvlation. En associant diffrentes techniques dimmunohistochimie et/ou dHIS, utilisant des moy ens de marquage et de rvlation diffrents, des signaux multiples peuvent tre localiss simultanment dans la mme cellule. Ces marquages multiples sont possibles en MO et/ ou en ME. Ils bnficient grandement de la microscopie confocale.

1.1.4 La production des images est lie la mise en uvre de moyens optiques, le plus souvent en rapport avec un microscope Il faut produire une image de la prparation devenue observable, afin de pouvoir l a regarder. La production des images est lie la mise en uvre de moyens optiques (l oupes, microscopes) qui augmentent le pouvoir sparateur de lil humain (0,2 mm envir on) et permettent danalyser des structures trs petites. 1.1.4.1 Les microscopes diffrent par la nature de leur source lumineuse

Le microscope optique (ou photonique), le plus courant, utilise la lumire visible . La lumire peut tre remplace par une autre source lumineuse : rayons ultraviolets (m icroscope fluorescence), faisceau dlectrons (microscope lectronique transmission ou balayage) ou source laser (microscope confocal balayage laser). Le pouvoir sparateur du microscope va de 0,2 mm pour le MO 0,2 nm pour le ME. Lobs ervation microscopique requiert une bonne connaissance de lchelle des grandeurs : le diamtre dun glo- bule rouge (environ 7,5 mm) et lpaisseur dune membrane plasmique (environ 7 nm) sont des r- frences courantes. Associe lobservation au microscope, la photographie et le cinma permettent de conse rver les images. La vido permet actuellement dexploiter au mieux linformation visue lle : limage peut ainsi tre observe, communique, mesure, archive, dite. Les signaux, ts par un dtecteur, peuvent tre transmis un systme informatique pour tre analyss, amp ifis et/ou numriss. La numrisation des images permet leur stockage, leur archivage e t leur transmission distance par ordinateur. 1.1.4.2 La cytomtrie en flux permet dexploiter des images sans les regarder Elle sapplique lanalyse de cellules en suspension (naturellement, comme les cellul

es sanguines ou dissocies partir de tissus). Les cellules mises en suspension dan s un flux liquidien passent rapidement une une devant un faisceau laser. Le cyto mtre en flux permet de mesurer la taille des cellules, leur granularit ou lintensit dun marquage cellulaire par un fluorochrome. Cette tech- nique est aussi utilise p our quantifier lADN (par exemple pour ltude du cycle cellulaire, ou la dtection danom alies dans une population de cellules tumorales). Elle permet galement de dtec- te r, de sparer et de collecter des populations cellulaires spcifiques aprs marquage.

1.1.5 Linterprtation des images vise leur donner du sens

Il ne suffit pas dobserver les images produites par les microscopes, encore fautil les interprter. Linterprtation donne une signification aux images observes, dtecte la prsence dune structure, dune molcule, dune fonction chimique et permet de les loc aliser dans la cellule, le tissu, lorgane ou lorganisme. Linterprtation est base sur des processus de reconnaissance de formes, de con- trastes, de couleurs, souvent combins de faon peu dissociable dans des processus de reconnais- sance plus globa le de formules , de patrons . Parmi les difficults dinterprtation, les plus lmenta tiennent aux incidences de coupe et aux artfacts. 1.1.5.1 Les incidences de coupe Les images observes sont situes dans un plan ; elles font partie dun monde imaginai re deux dimensions, partir duquel il faut restituer le monde rl trois dimensions. Dans certains cas, on oriente le bloc par rapport au plan de coupe, mais le plus souvent les structures sont coupes selon une incidence due au hasard. 1.1.5.2 Les artfacts Il faut se mfier des artfacts, images artificielles cres par la technique. Dans une prparation his- tologique de routine, il peut exister des artfacts de prlvement (pin ces, ciseaux, coagulation, ge- lures), de fixation (desschement, retard de fixati on, fixateur trop ou trop peu concentr), dinclusion (vides artificiels dus la rtrac tion des cellules ou des tissus), de coupe (stries de rasoir, coupes trop paisses ou trop minces), de collage (dcollements, plis et replis de la coupe), de mon- t age (bulles dair entre la lame et la lamelle), de coloration (emptements, dpts, tach es de colo- rant). 1.1.5.3 Les dformations des images Dues des imperfections des moyens optiques dobservation, comme les aberrations de sphricit ou les aberrations chromatiques, les dformations des images peuvent tre rapproches des art- facts. 1.1.5.4 La mauvaise prservation des tissus La mauvaise prservation des tissus est frquente en histologie humaine, quil sagisse de prlve- ments biopsiques ou per-opratoires (retard de fixation, tissus situs proxi mit de zones patholo- giques) ou surtout de prlvements post-mortem (autopsies tardi ves).

1.2 Le concept de tissu

1.2.1 Les niveaux dorganisation structurale On reconnat, dans lorganisme, diffrents niveaux dorganisation structurale qui corres pondent, en allant du plus complexe vers le plus lmentaire, aux systmes et appareil s, aux organes, aux tissus, aux cellules, aux organites, aux molcules. Ces diffrents niveaux dorganisation structurale de lorganisme sont couverts par des disciplines distinctes dont les champs se recoupent en partie (anatomie, histologie, biologi e cellulaire, biologie molculaire, biochimie, etc). Lanatomie dcrit des systmes (ner veux) et appareils (digestif, res- piratoire, urinaire, etc) et des organes (le cur, la rate, le foie, lestomac, etc) macroscopiquement individualiss. Les organes sont faits de diffrents tissus. Les tissus reprsentant le premier niveau dorganisat ion supra-cellulaire. La cellule est lunit lmentaire de vie. Tissus et cellules se s i- tuent lchelle de la MO et, pour ltude des organites cellulaires, la ME est indisp ensable. Les molcules entrent dans le champ de la biochimie, de la biologie molcul aire, de lhistologie mol- culaire.

1.2.2 La dfinition dun tissu Les tissus sont des ensembles coopratifs de cellules diffrencies qui forment une tr iple asso- ciation, territoriale, fonctionnelle et biologique. Les tissus sont exclusivement constitus de cellules et de MEC. Seules varient dun tissu lautre la nature des cellules, la composition molculaire de la MEC et la pro portion relative des cellules et de la MEC. 1.2.2.1 Association territoriale En effet, les tissus forment habituellement des ensembles topographiquement bien individualiss, souvent mme par une limite prcise comme par exemple la membrane bas ale (MB) qui spare les pithliums du tissu conjonctif sous-jacent ou environnant. 1.2.2.2 Association fonctionnelle Quil sagisse dun ensemble de cellules toutes semblables (comme la plupart des tissu s musculai- res) ou de cellules diffrentes (comme par exemple les neurones, les a strocytes, les oligodendro- cytes, constituant le tissu nerveux du systme nerveux central), un tissu remplit un rle qui procde de lintgration cohrente quantitative et/ ou qualitative de la fonction des cellules qui le composent. Le concept de tissu est insparable de celui de diffrenciation et de spcialisation f onctionnelle des cellules. Chez les mtazoaires, la ncessaire division du travail e ntre les diverses cellules consti- tuant lorganisme a conduit la spcialisation de certaines cellules ou de certains groupes de cel- lules dans telle ou telle fonc tion (contractilit, absorption, excrtion, protection, rception sensorielle, etc). C ette spcialisation fonctionnelle est sous-tendue par une diffrenciation cellulaire, dabord molculaire (expression slective de gnes se traduisant par la synthse de pr otines diffrentes), puis morphologique (se traduisant par lapparition de structures diffrencies, comme les cils, les bordures en brosse, les vsicules de scrtion, etc, d onnant lieu des phnotypes diff- rents). 1.2.2.3 Association biologique

Chaque tissu a des caractristiques biologiques qui lui sont propres, sous langle d u renouvellement cellulaire, des contacts entre ses cellules, de son comportemen t en culture de tissu, etc.

1.2.3 Les 4 grandes familles de tissus Les tissus se rpartissent en 4 grandes familles : les pithliums, les tissus conjonc tifs, les tissus nerveux et les tissus musculaires. Dans chacune de ces familles de base, on distingue des tissus dif- frents

EPITHELIUMS

TISSUS CONJONCTIFS Epithliums de revtement Epithliums glandulaires Tissu conjonctif lche (= tissu conjonctivo-vasculaire) Tissu rticulaire Tissus conjonctifs denses Tissu adipeux Tissu osseux Tissu cartilagineux TISSUS MUSCULAIRES

TISSUS NERVEUX Tissu musculaire stri squelettique Tissu musculaire stri cardiaque Tissu musculair e lisse Tissu du systme nerveux central Tissu du systme nerveux priphrique

1.2.4 Les populations cellulaires libres et la ligne germinale A ces 4 grandes familles tissulaires, il faut adjoindre les populations cellulai res libres et les cellules de la ligne germinale. 1.2.4.1 Les populations cellulaires libres se distribuent dans tout lorganisme et jouent un rle crucial dans les processus de dfense Il sagit des hmaties, plaquettes, granulocytes (neutrophiles, osinophiles et basoph iles), masto- cytes, lymphocytes, plasmocytes, monocytes /macrophages. Les popul ations cellulaires libres (ou cellules migratrices) se distribuent dans tout lorg anisme, dans les liquides biologiques (essentiel- lement le sang, mais aussi dan s la lymphe et le liquide cphalo-rachidien), pour partie dans les tis- sus, quil

sagisse des organes du systme immunitaire (moelle osseuse, thymus, ganglions l ymphatiques, rate), du tissu conjonctif lche (dans ses diffrentes localisations) a insi que de beau- coup dpithliums. 1.2.4.2 Les cellules de la ligne germinale sigent dans les gonades et assurent la conservation de lespce A ltat normal, les cellules de la ligne germinale sigent uniquement dans les gonades . Il sagit des gonocytes primordiaux, des gonies (ovogonies et spermatogonies), d es gamtes (ovocytes I et II, spermatocytes, spermatides et spermatozodes). On en r approchera luf fcond (ou zygote). Chapitre 2

Les relations intercellulaires

La vie dun organisme pluricellulaire repose de faon incontournable sur la communic ation et les interactions entre les cellules qui le composent. Il existe deux gr ands types de communication : 1) la communication verticale, qui nest autre que lhrdit, cest dire la transmission d parents enfants des caractres de lespce et des spcificits individuelles lies la recom aison et la redistribution des gnes qui soprent pendant la gamtognse (miose) et la f ation ; 2) les communications horizontales, qui seffectuent lintrieur dun mme individu et qui , pour lessentiel, correspondent soit aux contacts directs entre cellules (molcules dadhrence et systmes de jonction cellule-cellule), soit laction de molcules de signal isation. Les molcules de signalisation sont plus ou moins diffusibles, synthtises e t scrtes par diffrents types cel- lulaires (en particulier dans le systme nerveux, le s rgulations hormonales, les processus immu- nitaires, lhmatopose) et se lient aprs un trajet plus ou moins long des rcepteurs membranaires, cytoplasmiques ou nuclaires de cellules-cibles, capables de les reconnatre. Dans ces diffrents modes de commu nication horizontale, la matrice extra-cellulaire (MEC) joue un rle de premier pl an. En effet, comme elle emplit lespace entre les cellules, la MEC est implique au ssi bien dans les contacts directs entre cellules que dans laction des diverses m olcules de si- gnalisation. Lidentification et la localisation prcise des diffrentes molcules prsentes dans la MEC (essentiellement protiques et glycoprotiques) permet de concevoir les interactions entre cellules et entre cellules et MEC, luvre dans de trs nombreux processus embryologiques, phy- siologiques et pathologiques.

2.1 La matrice extra-cellulaire (MEC) La MEC est prsente tous les niveaux de lorganisme, mais son abondance et sa compos ition va- rient selon les tissus : trs abondante dans les tissus conjonctifs lches , particulire dans les tissus osseux et cartilagineux, trs pauvre entre les cellul es pithliales. Les principales macromolcules de la MEC sont des polysaccharides (glycosaminoglyc anes et protoglycanes) et des protines fibreuses, de structure (collagnes et lastine ) ou dadhrence (fi- bronectine et laminine), jouant un rle important dans les inter actions cellule-cellule et cellule- MEC. 2.1.1 Les principaux polysaccharides de la MEC sont des glycosaminoglycanes et p rotoglycanes

Les glycosaminoglycanes sont de longues chanes polysaccharidiques non ramifies fai tes de la rptition dun mme motif disaccharidique. Les disaccharides de ce motif comp ortent un mono- saccharide A (acide glucuronique, acide iduronique ou galactose) et un monosaccharide B (N-ac- tylglycosamine ou N-actylgalactosamine). Les princi paux glycosaminoglycanes prsents dans la MEC sont lacide hyaluronique, le chondroti ne-sulfate, le dermatane-sulfate, lhparane-sulfate, lhparine, le kratane-sulfate. Laci de hyaluronique est caractris par une longue chane unique de plusieurs milliers de rsidus sucrs, avec absence de groupements sulfates. De nombreuses pro- tines extracellulaires de la MEC (collagne, fibronectine, laminine) ainsi que des rcepteurs c el- lulaires de surface (comme le CD 44) peuvent se lier lacide hyaluronique. Les protoglycanes sont forms par un noyau protique sur lequel se lient des glycosam inoglyca- nes. Les plus rpandus sont la dcorine (chondrotine-sulfate/dermatane-sulf ate) prsente dans tous les tissus conjonctifs, le perlecan (hparane-sulfate) dans les membranes basales, et laggrcane, abondant dans le cartilage. Lacide hyaluroniqu e ne forme pas des protoglycanes. Par contre, les agrgats de protoglycanes correspo ndent une molcule dacide hyaluronique sur laquelle se lient de multiples protoglyca nes. Leur charge ngative leve leur permet de retenir de grandes quantits deau. Les pr otoglycanes ont la capacit de fixer certaines cytokines ou facteurs de croissance, et ainsi de moduler leur biodisponibilit.

2.1.2 La superfamille des collagnes comprend des dizaines de types diffrents

Les collagnes constituent une superfamille de molcules forme par des protines classi ques et des protines portant des domaines de type collagnique. Chaque molcule de tr opocollagne est compose dune triple hlice alpha dont la composition en acides amins d iffre selon le type de collagne. Dans un trimre, les chanes alpha peuvent tre identiq ues ou non. Les fibres de colla- gne sont formes, dans lespace extra-cellulaire, pa r lassemblage de molcules de tropocollagne synthtises et excrtes essentiellement par l s fibroblastes. On subdivise cette superfamille en plusieurs groupes. Nous nenvis agerons ici que les types de collagne les mieux connus. 2.1.2.1 Le collagne I est le plus communment distribu Il se trouve dans le tissu conjonctif banal, dans le tissu conjonctif dense, dan s le tissu osseux. En ME, les microfibrilles de collagne prsentent une striation t ransversale due lalternance de ban- des sombres et claires selon une priodicit de 6 4 67 nm. Ces fibrilles lmentaires, jamais anas- tomoses, ont une longueur indtermine et se groupent pour former des fibres qui elles-mme sassemblent en faisceaux plus ou moins onduleux visibles en MO, surtout aprs certaines colora- tions (le safran les colore en jaune, les trichromes en vert ou en bleu, le rouge Sirius en roug e). Ces faisceaux, diversement orients dans lespace, sont le substratum essentiel du rle de soutien m- canique du tissu conjonctif. 2.1.2.2 Le collagne II est surtout prsent dans le cartilage Voir chapitre 6 page 71. Il se prsente sous forme de fines fibrilles qui ne se groupent pas en fibres de p lus fort calibre. 2.1.2.3 Le collagne III est celui des fibres de rticuline Voir chapitre 4 page 55. 2.1.2.4 Le collagne IV entre dans la constitution des membranes basales

Voir section 2.1.5 page 30. 2.1.2.5 Le collagne X est propre aux chondrocytes hypertrophiques Voir chapitre 6 page 71.

2.1.3 Llastine est la molcule principale des fibres lastiques

En MO, les fibres lastiques (caractrises, comme leur nom lindique, par leur lasticit) ne sont visibles quaprs colorations spciales (orcine, fuchsine-rsorcine) qui les font apparatre sous forme dun rseau de fines fibres allonges et anastomoses. En ME, les f ibres lastiques se pr- sentent comme des plages dune substance amorphe plus ou moin s dense aux lectrons contenant en priphrie des microfibrilles dune dizaine de nanomtr es de diamtre, constituant un rseau microfibrillaire, dpourvues de striation. La composition molculaire des fibres lastiques est complexe. Le composant amorphe est princi- palement constitu dlastine (prcde par la tropo-lastine) ; le rseau microf illaire est fait de plusieurs glycoprotines dont les plus abondantes sont les fib rillines. Les fibres lastiques sont disperses en nombre variable dans le tissu conjonctif lch e et sont abon- dantes dans les ligaments lastiques, les lames lastiques des gross es artres, le cartilage lastique.

2.1.4 La fibronectine est un des maillons-cls de ladhrence des cellules la MEC La fibronectine est une glycoprotine extra-cellulaire ubiquitaire. Elle est prsent e sous forme so- luble (scrte par les hpatocytes et les cellules endothliales) dans l es liquides de lorganisme et sous forme insoluble dans la MEC, o elle est scrte par l es cellules msenchymateuses (en par- ticulier les fibroblastes) et par certaines cellules pithliales. Elle prsente de nombreux sites de liaison pour des protines de la MEC (comme le collagne, la thrombospondine), des rcepteurs membranaires (tels q ue les intgrines), des protines du sang circulant (comme la fibrine), des glycosaminoglycanes (comme lhparine et le chondrotine-sulfate). La fibronectine, en plus de son rle de molcule majeure de ladhrence cellulaire avec le tissu con- jonctif, intervient dans la communication cellulaire. La liaison f ibronectine-intgrines membranai- res peut activer des voies de transduction du si gnal (via des protines kinases ou le cytosquelette) modifiant le comportement cel lulaire (par exemple prolifration, diffrenciation, motilit). Ainsi, la fibronectine joue un rle fondamental au cours de lembryognse et dans de multiples processus phys iologiques (cicatrisation, hmostase, angiognse) ou pathologiques (inflammation, can cro- gnse).

2.1.5 Les membranes basales (MB) entourent certains types cellulaires Dans un but de simplification, les termes de membrane basale et de lame basale s ont con- sidrs comme synonymes. 2.1.5.1 La MB correspond une rgion spciale de MEC formant une couche complexe auto ur de tout ou partie de la membrane plasmique de certaines cellules La distribution topographique des MB est ubiquitaire : une MB se trouve linterfac e entre la face basale des cellules pithliales et la MEC sous-jacente, mais galemen t autour des adipocytes, des cellules musculaires, des cellules de Schwann, de c

ertaines rgions des astrocytes, etc. Visible en MO sous la forme dun trait rouge ( aprs coloration par le PAS) ou noir (aprs imprgnation ar- gentique) surlignant le pl e basal des cellules pithliales, la MB apparat en ME sous la forme dun fin feutrage de filaments irrguliers sorientant dans les trois plans de lespace. Elle est constitue de 3 couches superposes de la membrane plasmique vers la MEC, successivement : la la- mina rara , transparente aux lectrons, la lamina densa et la lamina reticulata . Laspect morphologique, la composition molculaire, lpaisseur de s MB varient selon les types cellulaires. La famille des collagnes IV est caractristique des MB o ils forment un rseau st able de polymres. La famille des laminines participe aux MB. Les molcules de laminine 1 sassemb lent pour former un rseau qui, associ au rseau form par le collagne IV, constitue la trame de fond de la plupart des MB. La laminine 2 joue certainement un grand rle dans le maintien de la fonction normale du muscle squelettique. La laminine 5 se trouve dans les rgions de MB si- tues en regard des hmidesmosomes. Le nidogne/entactine relie, au sein du double rseau de collagne IV et de lamin ine des mo- lcules diverses comme le perlecan (heparan-sulfate protoglycane), la S PARC (secreted protein acidic and rich in cystein), la fibuline. Des constituants extrinsques, comme la fibronectine, participent la constitu tion des MB. En regard de la MB, la surface cellulaire prsente de nombreux rcepteurs des m ol- cules de la MEC : en particulier, des rcepteurs la fibronectine (intgrines), de s rcepteurs lacide hyaluronique (comme le CD44), des rcepteurs de nombreuses cytokines. 2.1.5.2 Les MB ont de multiples fonctions En plus de leur rle de structure (ancrage des cellules dans le tissu conjonctif), les MB intervien- nent dans de nombreux processus physiologiques. Selon leur lo calisation, les MB peuvent dter- miner des barrires physiologiques avec le milieu extrieur (au niveau des pithliums de revtement) ou avec le compartiment vasculaire, ou peuvent jouer un rle de filtre slectif (comme au niveau de la barrire glomrulaire ). Enfin, les MB ont un rle important dans la dtermination de la polarit et de la d iffrenciation cellulaires (tout particulirement au niveau des cellules pi- thliales) ainsi que dans les processus de rparation tissulaire, o elle sert de support la m igration cellulaire.

2.1.6 La matrice pri-cellulaire se situe entre la membrane plasmique des cellules et la MEC La matrice pri-cellulaire est la zone de transition entre le revtement cellulaire (cell coat ou gly- cocalyx) et la MEC. A son niveau, les ectodomaines des glycop rotines, protoglycanes et glyco- lipides de la membrane plasmique se trouvent entr emls avec de lacide hyaluronique et une varit de glycoprotines et protoglycanes de la EC.

2.1.7 La MEC joue un rle physiologique important Selon sa composition molculaire, la MEC joue diffrents rles physiologiques (archite cture, sou- tien mcanique, nutrition, stockage molculaire, support des migrations cellulaires, etc...). Les dif- frents composants de la MEC sont dgrads par diffrents protinases (en particulier, les mtalloprotinases et le systme plasmine/activateurs du plasminogne). Le renouvellement de la MEC est dterminant dans la croissance, le

dveloppement ou la rparation des tissus, mais inter- vient aussi dans de nombreux processus pathologiques (cancrognse, inflammation, etc).

2.2 Les molcules dadhrence Les molcules dadhrence cellulaire (Cell Adhesion Molecules, CAM) sont des glycoproti nes transmembranaires qui jouent un rle important : 1) au cours du dveloppement em bryonnaire, 2) chez ladulte normal, pour la maintenance des pithliums et la rparation tissulaire , 3) dans cer- tains processus pathologiques, comme linflammation ou le cancer. Les molcules dadhrence assurent 1) la reconnaissance spcifique entre deux cellules o u entre cellules et MEC, 2) la formation de contacts stables entre deux cellules ou entr e une cellule et la MEC, 3) la transmission de signaux capables de modifier le comportement de la ce llule avec son environnement. Les partenaires molculaires dinteractions ainsi que les types cellulaires en jeu p euvent tre iden- tiques ou diffrents. Les CAM correspondent 4 superfamilles multigniques codant pour des glycoprotines t rans- membranaires regroupes selon leurs caractristiques structurales : les intgrin es, les cadhrines, les slectines, les immunoglobulines. Dautres molcules intervienne nt dans les interactions cellu- les et MEC, comme les protines CD 44 qui servent de rcepteurs lacide hyaluronique.

2.2.1 Les intgrines sont les responsables essentiels des interactions cellule-MEC

Les intgrines sont des htrodimres composs de deux sous-units alpha et bta. Elles const tuent une superfamille de rcepteurs (dont une trentaine de membres fonctionnels s ont connus) de diver- ses molcules de la MEC, en particulier au niveau de la MB. Leurs principaux ligands extra-cellu- laires sont les collagnes I et IV, la lamin ine, la fibronectine, la vitronectine, le fibrinogne. Les intgrines sont lies au cy tosquelette et sont une des voies majeures de la transduction des signaux venus de la MEC destination des cellules pithliales (rgulation de lexpression de leurs gnes ). Les intgrines jouent un rle essentiel dans la rgulation de nombreuses fonctions cellulaires : for- me, polarit, prolifration, migration, survie, diffrenciation, et c...

2.2.2 Les cadhrines, calcium-dpendantes, sont responsables dinteractions cellule-ce llule

Les cadhrines, principales protines de ladhrence intercellulaire sont des glycoprotin es trans- membranaires qui jouent un rle important dans les processus du dveloppem ent ainsi que dans les processus pathologiques. Les cadhrines sont indispensables la formation des complexes de jonc- tion. La famille des cadhrines comporte une trentaine de membres identifis, dont lexpression est spcifique de tissu. Elles sont dnommes par une lettre qui rappelle le tissu o elles sont expri- mes de manire prfren ielle. 2.2.2.1 Les cadhrines classiques Elles sont concentres dans les jonctions adhaerens et sont associes au cytosquelet

te par les cat- nines. Le systme cadhrine-catnine joue un rle central dans lorganisati on structurale et fonc- tionnelle des contacts cellule-cellule dans les pithliums. On distingue la E-cadhrine (pithliale) ou uvomoruline, implique dans la compaction de la morula et dans la gnse et la maintenance des couches de cellules pithliales, l a N-cadhrine (nerveuse), la P-cadhrine (pla- centaire). 2.2.2.2 Les cadhrines desmosomales Elles ne sont prsentes que dans les desmosomes : il sagit des desmoglines (dont lant igne du pemphigus vulgaire) et des desmocollines.

2.2.3 Les slectines interviennent dans le compartiment vasculaire Les slectines sont des rcepteurs doligosaccharides localises la surface des cellules du com- partiment vasculaire et qui sapparentent aux lectines. Cette famille est compose de 3 protines responsables, lintrieur du compartiment vasculaire sanguin, d es interactions adhsives entre les leucocytes et lendothlium vasculaire ainsi quentr e les leucocytes et les plaquettes : la L-slecti- ne (prsente sur tous les leucocy tes circulants), la P-slectine (prsente dans les plaquettes), la E- slectine (prsent e dans les cellules endothliales actives).

2.2.4 Les immunoglobulines interviennent dans les interactions cellule-cellule Des immunoglobulines sont impliqus dans les interactions entre les cellules immun itaires et leurs partenaires cellulaires (comme les cellules endothliales ou les cellules prsentatrices dantignes). Les principales immunoglobulines dadhrence cellula ire sont la N-CAM (Neural-CAM), la I- CAM (Intercellular-CAM) et la V-CAM (Vascu lar-CAM). Quil sagisse des molcules dadh- rence ou des anticorps, toutes les molcules de la superfamille des immunoglobulines sont dfinies par la structure particulire de leur domaine extra-cellulaire (boucles relies par des ponts disulfu- res).

2.3 Les systmes de jonction Les systmes de jonction, identifiables en ME, sont de 3 types : occludens, dancrag e et commu- nicantes. Les systmes de type occludens et de type communicant sont t oujours des jonctions cel- lule-cellule alors que les jonctions dancrage se renco ntrent aussi bien entre deux cellules (zonula adhaerens et desmosomes) quentre un e cellule et la MEC (contacts focaux et hmidesmosomes). Les jonctions en anneau ( ou ceinture ou zonula) portent sur tout le pourtour cellulaire, alors que les jo nctions limites sur des surfaces membranaires sont dites de type macula. DISPOSITIFS DE JONCTION

Jonctions dancrage Jonctions cellule - cellule Zonula occludens Zonula adhaerens Desmosomes

Jonctions cellule - MEC

Contacts focaux Hmi-desmosomes

Jonctions communicantes

2.3.1 Les jonctions cellule-cellule sont de quatre types diffrents : zonula occlu dens, zonula adhaerens, desmosomes et jonctions communicantes 2.3.1.1 Les zonula occludens (ZO) concernent les cellules pithliales Les zonula occludens (ou jonctions serres, jonctions impermables, jonctions tanches , tight- junctions, jonctions occludens) stablissent entre les cellules pithliales o elles dterminent une barrire physiologique entre les compartiments extrieur et intri eur de lorganisme. Au niveau des zonula occludens, les membranes cytoplasmiques des cellules adjace ntes fusionnent le long de crtes (ou fibrilles) linaires formes par une succession de protines intra-membranai- res engrenes les unes avec les autres la faon dune ferm eture clair. Ces lignes de fermeture (ou crtes jonctionnelles ou chaines de scella ge) sont plus ou moins nombreuses et sentrecroisent de faon variable, constituant un rseau plus ou moins dense, et donc une barrire plus ou moins effi- cace. Les zonula occludens sont constitues de plusieurs protines transmembranaires dont les deux principaux reprsentants sont loccludine et les membres de la famille des claudines. Ces proti- nes transmembranaires sont associes dautres protines comme la ZO-1, la ZO-2, la ZO-3. La ZO-1 interagit avec la spectrine, elle-mme relie aux mi crofilaments dactine du cytosquelette. Lanneau de jonctions tanches qui entoure com pltement les faces latrales des cellules pithlia- les, prs de leur ple apical a un tri ple rle : 1) il permet aux cellules adjacentes dadhrer les unes aux autres ; 2) il constitue une barrire qui rgule le flux des molcules travers lespace para-cel- lulai re (entre les sous-units protiques de la ZO, dtroits pores peuvent permettre le pass age des ions) ; 3) il spare les deux domaines de la membrane plasmique, empchant l a libre diffusion des lipides et des protines entre les domaines apical et baso-l atral. 2.3.1.2 Les zonula adhaerens (ZA) sont des jonctions dancrage qui constituent des ceintures dadhrence Elles runissent entre elles des cellules pithliales adjacentes dont elles font tout le tour. Les zonula adhaerens forment ces jonctions par lintermdiaire des cadhrines classiques, mo lcules transmembranaires responsables dune adhrence calcium dpendante. Bien que ladhre nce de ces molcules dpende de leur domaine extra-cellulaire, celle-ci est module pa r trois molcules cytoplasmiques, les catnines (alpha-catnine, bta-catnine et gamma-ca tnine) qui se lient dune part au domaine cytoplasmique des cadhrines et dautre part - par lintermdiaire de nombreuses protines cytoplasmiques - aux filaments dactine re lis entre eux par des molcules dalpha-ac- tinine. 2.3.1.3 Les desmosomes sont des jonctions dancrage relies aux filaments intermdiair es du cytosquelette intra-cytoplasmique Ce sont des structures en forme de disque denviron 0,1 0,5 mm de diamtre et 100 nm dpais- seur. Les desmosomes assurent les liaisons intercellulaires par des molcule s transmembranaires de la superfamille des cadhrines (desmoglines et desmocollines ). Ces molcules sont en relation avec la plaque desmosomale qui contient en parti culier de la plakoglobine et des desmoplakines. Les desmosomes sont prsents non s eulement dans les cellules pithliales (relis aux filaments intermdiaires de cytokrati ne), mais galement dans certains autres types cellulaires, comme, par exemple, le s cellules myocardiques (o ils sont relis aux filaments intermdiaires de desmine).

2.3.1.4 Les jonctions communicantes permettent une communication directe entre l es cytoplasmes des cellules adjacentes Les jonctions communicantes (ou nexus ou gap-junctions) existent dans la plupart des tissus de lorganisme (pithliums, ostocytes, cellules myocardiques, cellules mus culaires lisses, systme nerveux, etc). Au niveau des jonctions communicantes, les cellules adjacentes sont unies entre elles par des petits canaux intercellulair es tubulaires. Chaque canal intercellulaire est form de laboutement de 2 hmi-canaux (ou connexons), chacun faisant partie de la membrane de chacune des 2 cellules adjacentes. Chaque connexon est fait de 6 sous-units protiques (ou connexines), vi sualisables en ME aprs cryofracture, sous la forme daggrgats de particules intra-me mbranai- res. Les connexines sont une famille multignique dont plusieurs dizaines de membres ont t iden- tifis et clons. Les connexons dun mme canal intercellulaire pe uvent tre constitus des mmes connexines ou de connexines diffrentes. Les jonctions communicantes permettent des passages directs dlectrolytes et petite s molcules (jusqu 1500 daltons) : seconds messagers (comme le Ca++ ou lAMP cyclique) , mtabolites (dune cellule ses voisines, permettant par exemple un couplage lectriq ue). Ce passage peut tre visualis par la micro-injection intra-cellulaire de traceurs fluorescents (comme le Jaune Lucifer) dont on peut suivre la diffusion dans les cellules voisines. Lo uverture des canaux intercellulaires est contrle par divers facteurs, en particuli er le pH et la concentration de Ca++ et dAMP cyclique. 2.3.2 Les jonctions cellule-MEC comprennent les contacts focaux et les hmidesmoso mes La face basale des pithliums de revtement repose sur la MEC du tissu conjonctif sou s-jacent par lintermdiaire dune MB qui a un double rle de soutien et de barrire (filt ration, diffusion, chan- ges,...). 2.3.2.1 Les contacts focaux sont des jonctions adhrentes ponctuelles entre la mem brane plasmique de la cellule et la MEC sous-jacente Les contacts focaux (ou adhrences focales ou plaques dadhrence) ralisent le chanon in term- diaire entre les molcules de la MEC et les microfilaments dactine du cytosque lette. Les rcep- teurs membranaires assurant les interactions cellule-MEC au nive au des contacts focaux appartiennent la famille des intgrines ; la principale intg rine intresse dans les contacts fo- caux est lintgrine alpha5-bta1. De nombreuses pro tines intra-cytoplasmiques assurent le lien entre le domaine cytoplasmique des intgrines et les microfilaments dactine. Des jonctions de ce type stablissent de faon transitoire pour permettre la migratio n de cellules sur la MEC, notamment au cours des processus de rparation. 2.3.2.2 Les hmidesmosomes unissent les molcules de la MEC et les filaments intermdi aires du cytosquelette Les protines hmidesmosomales sont loin dtre toutes bien identifies ; les deux les mie ux con- nues sont lantigne de la pemphigode bulleuse (BP 180) et lintgrine alpha6-bta4 qui se lie la lamine 5 de la MB. Les protines de la plaque hmidesmosomale ne sont pas encore parfaitement identifies.

2.4 Les molcules de signalisation et leurs rcepteurs

De nombreux types cellulaires scrtent des molcules de signalisation, de nature bioc himique va- rie, qui agissent plus ou moins longue distance.

2.4.1 Les molcules de signalisation sont de nature biochimique varie Les molcules de signalisation peuvent tre hydrophobes, comme les strodes traversant les membranes pour activer leur rcepteur intracytoplasmique, ou hydrophiles comme les ne urotransmet- teurs et la plupart des hormones, activant alors des rcepteurs la su rface membranaire. La plupart des protines constitutives des rcepteurs membranaire s, aprs liaison avec leur ligand gnrent un signal transmembranaire : soit en activa nt une enzyme lie la membrane (adnylate cyclase) mo- difiant alors un mdiateur intr acellulaire (AMP cyclique), soit en modifiant la permabilit de ca- naux ioniques t els que les canaux calciques. Les molcules de signalisation les plus rpandues entrent dans les catgories suivante s. 2.4.1.1 Les anticorps Voir chapitre 5 page 61. 2.4.1.2 Les neurotransmetteurs et neuromodulateurs Voir chapitre 7 page 83. Les neurotransmetteurs sont, les uns, excitateurs, comme lactylcholine, les acides amins exci- tateurs (glutamate ou aspartate), des purines (ATP, adnosine), les am ines biognes (srotonine, histamine et catcholamines : noradrnaline, adrnaline, dopami ne) ; les autres, inhibiteurs, com- me les acides amins inhibiteurs (GABA ou glyc ine). Les neuromodulateurs sont des neuropeptides opiodes (ou endorphines) - agonistes endognes na- turels des rcepteurs aux opiacs - et des neuropeptides non-opiodes (ocy tocine, vasopressine, so- matostatine, neuropeptide Y, etc). 2.4.1.3 Les hormones et neurohormones Voir chapitre 3 page 41. Consulter le cours dintroduction lendocrinologie sur le site de lUniversit de Montpe llier 2 Sciences et Techniques du Languedoc . 2.4.1.4 Le rseau des cytokines

Les cytokines constituent un ensemble htrogne de mdiateurs protiques dont certains so nt ap- pels interleukines (IL, initialement reconnus comme mdiateurs agissant entr e les leucocytes), lymphokines (mdiateurs produits par les lymphocytes), interfron s, facteurs stimulant les colo- nies (CSF), facteurs de croissance, etc... Les c ytokines sont produites par de nombreux types cel- lulaires en rponse un signal a ctivateur. Les cytokines agissent sur des cellules cibles en se fixant sur des rc epteurs spcifiques, exprims en gnral en trs faible densit sur diffrents types cellu- l ires, expliquant les multiples activits biologiques des cytokines. Selon la local isation de la cel- lule cible par rapport la cellule scrtrice, les cytokines peuve nt avoir une action autocrine, paracrine ou endocrine. Les rcepteurs membranaires aux cytokines sont classs en plusieurs grou- pes. Ils induisent des signaux spcif iques chaque cytokine et des signaux communs aux diffrents stimuli. Les cytokines inflammatoires : interleukines (IL-1, IL-6, IL-8, IL-10), Tum

or Necrosis Fac- tor (TNF), Les chmokines (ou cytokines chmotactiques) - dont une quarantaine sont indivi dualises aujourdhui - qui ont la capacit dattirer dans les tissus, lors du processus inflammatoire et de la rponse de lhte une infection, les leucocytes, pourvus de rce pteurs aux chmokines. Les cytokines anti-virales : interfrons (IFN) alpha, bta et gamma. La superfamille des TGF-bta (Transforming Growth Factor-bta) incluant les Bon e Mor- phogenetic Proteins (BMP). Les facteurs de croissance (ou Growth Factors) sont extrmement nombreux : CS Fs (Colo- ny-Stimulating-Factors ou facteurs de croissance hmatopotiques, comme lryth ropoti- ne, la thrombopotine, linterleukine-3, le G-CSF, le M-CSF, le GM-CSF), EGF (E pidermal Growth Factors), FGFs (Fibroblast Growth Factors), IGFs (Insulin-like G rowth Factors), PDGF (Platelet-Derived Growth Factor), VEGF (Vascular Endotheliu m Growth Factor), la famille des neurotrophines (dont le NGF ou Nerve Growth Fac tor), etc. 2.4.1.5 Les eicosanodes Les prostaglandines, les thromboxanes, les prostacyclines, les leukotrines et les lipoxines font partie de la famille des eicosanodes. Ce groupe de mdiateurs locau x issus des phospholipides membranaires drivent de prcurseurs (comme lacide arachid onique) forms aprs attaque enzy- matique de phospholipides membranaires par une ph ospholipase.

2.4.2 Les modalits de diffusion des diffrentes molcules de signalisation sont galeme nt trs diverses La signalisation seffectue par des molcules diffusibles qui gagnent une cible plus ou moins loi- gne de la cellule qui les a produites. 2.4.2.1 Neurocrinie La transmission de linformation est ici ponctuelle au niveau dune synapse ; la dif fusion de lin- formation est extrmement rduite. Elle concerne les neurotransmetteur s. 2.4.2.2 Autocrinie/Paracrinie Dans lautocrinie, les molcules de signalisation modifient lactivit de la cellule qui les a produi- tes ou des cellules voisines de mme type, ralisant ainsi une rgulati on en feed-back (ou rtro- action). Dans la paracrinie, les molcules sont scrtes local ement et modulent lactivit de cellu- les adjacentes au sein du mme tissu (par exemp le, le TNF produit par les macrophages activs dans la moelle osseuse stimule la s ynthse dADN par les ostoblastes voisins). En fait, on parle de plus en plus dautocri nie/paracrinie parce que les deux mcanismes sont le plus souvent associs et troitem ent intriqus. 2.4.2.3 Endocrinie Dverses dans le sang par les glandes endocrines, les hormones vont agir distance d e leur lieu de scrtion sur leurs cellules-cibles pourvues des rcepteurs appropris.

2.4.3 En ralit, le monde des molcules de signalisation est beaucoup plus complexe

Dans lorganisme, il nest plus possible de maintenir de faon stricte la distinction traditionnelle entre les hormones scrtes dans le sang par les glandes endocrines, l es neurotransmetteurs s- crts par les neurones ponctuellement au niveau des synapse s du systme nerveux et les cytokines scrtes loco-rgionalement par de nombreuses varits de cellules, notamment immunitaires. Les interactions sont la rgle. Les mmes molcul es de signalisation peuvent tre scrtes par le systme nerveux, les glandes endocrines et les cellules immunitaires et, selon les cas agir, par voie endocrine, neurocr ine ou auto-paracrine. La connaissance de la prsence et de la nature des rcep- teu rs spcifiques ports par les diffrentes cellules de lorganisme est fondamentale pour apprcier laction des diffrentes molcules de signalisation. A aucun moment, il ne fau t oublier que laction physiologique dune molcule de signalisation dpend entirement de sa liaison avec son rcep- teur. Chapitre 3

Les pithliums

3.1 La cellule pithliale

Les cellules pithliales sont caractrises par : 1) leur morphologie : les cellules pit hliales prennent, du fait de leur troite juxtaposition et de leur jointivit, une fo rme pavimenteuse, cubique ou prismatique, au lieu de la forme grossirement arrond ie des cellules libres, de la forme allonge des cellules musculaires ou de la for me toile de certaines cellules comme les neurones, les astro- cytes, les fibroblas tes ; 2) le dveloppement considrable de leurs interactions cellule-cellule par lint ermdiaire des molcules dadhrence cellulaire et des systmes de jonction spcialiss quel es forment ; 3) leur polarit cellulaire trs marque ; 4) la prsence de filaments inte rmdiaires de cytokratine dans leur cytosquelette ; 5) les relations cellule-MEC qu i seffectuent, travers la MB, par lintermdiaire de molcules dadhrence cellulaire et d systmes de jonction spcia- liss.

3.1.1 Les cellules pithliales sont hautement polarises La capacit des cellules animales gnrer et maintenir une distribution polarise des co mposants de la surface cellulaire et des organites intracellulaires est capitale pour leur capacit fonctionner en rseaux pluricellulaires. Pratiquement toutes les cellules possdent un certain degr dasym- trie. La polarit cellulaire est particulirem ent dmonstrative dans les cellules pithliales qui bor- dent les cavits de lorganisme et lexemple des entrocytes est parmi les plus parlants. 3.1.1.1 La membrane plasmique comprend 2 domaines distincts : apical et basolatra l La surface des cellules pithliales est typiquement divise en au moins deux domaines fonction- nellement et biochimiquement distincts, mais en continuit physique. Le domaine apical de la membrane plasmique, celui qui regarde la lumire de lorgane, est le domaine le plus spcialis, car la surface apicale contient la plupart des pr otines ncessaires aux fonctions spcifiques de lor- gane (digestion, absorption de nu triments, rsorption). Par contre, le domaine basolatral de la membrane plasmique c ontient la plupart des protines requises pour les processus cellulaires fon- dame

ntaux communs aux cellules polarises et aux cellules non-polarises. La gnration et la maintenance de ces 2 domaines membranaires distincts implique le tri des mo- lcules constituant la membrane plasmique. Les protines apicales, comm e les protines basolat- rales, sont synthtises dans le rticulum endoplasmique granula ire et transportes dans le complexe de Golgi, puis sont finalement adresses vers l es domaines opposs de la membrane plasmique. Du fait de linternalisation de compos ants membranaires par endocytose depuis une surface cellulaire jusqu la surface op pose (processus de transcytose), il seffectue un change permanent entre les deux do maines. Les microtubules et microfilaments jouent un rle impor- tant dans le tri et ladressage des protines aux 2 domaines de la membrane plasmique. 3.1.1.2 Les 2 domaines sont spars par un anneau de jonctions serres Lanneau de jonctions serres (ou zonulae occludens) qui entoure compltement les face s latrales des cellules pithliales prs de leur ple apical, dlimite les domaines apical et basolatral de la membrane plasmique. Cette barrire spare, dans lespace para-cell ulaire (cest dire dans lespa- ce extra-cellulaire compris entre deux cellules pithli ales adjacentes), un compartiment apical et un compartiment baso-latral, ce derni er tant en continuit avec le liquide interstitiel et, finale- ment, avec le sang.

3.1.2 Les filaments intermdiaires du cytosquelette des cellules pithliales appartie nnent la famille des kratines Dans les cellules pithliales humaines, les filaments intermdiaires sont constitus pa r des poly- mres de kratine (appele aussi cytokratine). Les filaments de kratine sont attachs aux desmo- somes et aux hmidesmosomes. Ainsi, les filaments intermdiaires de cellules adjacentes sont en contact par lintermdiaire des desmosomes permettant la cohsion entre les cellules. Les filaments intermdiaires de kratine peuvent tre visualiss dans le cytoplasme cell ulaire par immunocytochimie avec des anticorps dirigs contre les diverses cytokratines. Tous les pith- liums, quils soient ou non kratiniss, contiennent des filaments intermdiaire s de cytokratine. Par contre, les cellules pithliales sont normalement dpourvues des filaments intermdiaires ca- ractristiques dautres types cellulaires : vimentine (c ellules conjonctives), desmine (cellules mus- culaires), GFA (astrocytes), neuro filaments (cellules nerveuses). Des filaments intermdiaires de lamine se trouvent lintrieur du noyau de toutes les cellules.

3.1.3 Le ple apical des cellules pithliales prsente des diffrenciations

Les microvillosits apicales sont banales ; il sagit de petites expansions cytoplas miques plus ou moins nombreuses, de longueur et de disposition irrgulires que lon o bserve au ple apical des cellules de nombreux pithliums, quils soient de revtement ou glandulaires. Directement au contact du milieu extrieur ou de la lumire des cavits de lorganisme, le ple api- cal des cellules pithliales de revtement peut tre le sige de diverses diff enciations (dites diffrenciations apicales), dj visibles en MO, mais surtout bien identifiables en ME (v oir les pithliums de revtement section 3.2 page 43). Le ple apical des cellules glandulaires, quelles fassent partie dun pithlium de revtem ent ou dun pithlium glandulaire, est - sauf exceptions - le sige des vsicules de scrti n et de leur extrusion, le plus souvent par exocytose (voir les pithliums glandula ires section 3.3 page 47).

3.1.4 La rgion latro-basale des cellules pithliales est le sige de systmes de jonction La rgion latro-basale de la membrane plasmique de la cellule pithliale est en contac t avec les cellules adjacentes par lintermdiaire du compartiment basolatral de lespa ce para-cellulaire. Elle entre galement en contact avec la MEC du tissu conjoncti f sous-jacent. Ladhrence cellule- cellule et cellule-MEC rsulte de la redistributio n slective des molcules dadhrence voir cha- pitre 2 page 27 dans la surface cellulai re de telle sorte quelles se concentrent dans les sites de con- tact intercellula ire o elles peuvent former des systmes de jonction spcialiss (voir chapitre 2 page 2 7).

3.2 Les pithliums de revtement

3.2.1 Les pithliums de revtement revtent lextrieur du corps et les cavits de lorganis

Le corps humain est entirement limit par le revtement cutan (la peau) qui constitue une inter- face fondamentale entre lorganisme ( monde intrieur ) et le milie u extrieur ( monde extrieur ). A lintrieur du corps, existent de nombreuses cavits d plusieurs types : les unes re- prsentent des prolongements du monde extrieur lintri eur du corps (par exemple, les voies a- riennes, le tube digestif, les voies urin aires et les voies gnitales), le revtement de ces cavits sappelle une muqueuse ; les autres sont entirement closes et correspondent soit aux cavits car- dio-vasculair es (dont le revtement sintitule endocarde pour le cur et intima pour les vaisseaux) , soit aux cavits clomiques (cavits pleurales, pritonale et pricardique) dont le revte ent por- te le nom de sreuse . Tous ces ensembles tissulaires qui bordent la surface externe du corps et ses ca vits intrieures ont en commun dtre constitus par un pithlium de revtement reposant pa ntermdiaire de sa membrane basale sur une couche de tissu conjonctif sous-jacent. A chaque type de localisa- tion sassocie une terminologie diffrente :

lpithlium de la peau sappelle lpiderme et le tissu conjonctif sous-jacent le derme , lpithlium de lendocarde du cur et de lintima des vaisseaux sappelle un endothliu le tissu conjonctif sous-jacent la couche sous-endothliale , lpithlium dune sreuse sappelle un msothlium et le tissu conjonctif sous-jacent l - che sous-msothliale , les muqueuses sont constitues dun pithlium de revtement reposant sur du tissu conj onctif qui prend le nom de chorion .

3.2.2 Les pithliums de revtement prsentent des diffrenciations apicales

3.2.2.1 Le plateau stri et la bordure en brosse sont caractristiques des entrocytes et des cellules du tube contourn proximal du rein

Le plateau stri, situ au ple apical des entrocytes de lpithlium intestinal, est consti u par un grand nombre de microvillosits rectilignes de mme calibre (0,1 mm), de mme longueur (1 2 mm), disposes paralllement de faon trs ordonne. A la face externe de leur membrane

plas- mique, le feutrage du glycocalyx est bien visible en ME. Ce dispositif aug mente considrablement la surface membranaire du ple apical de la cellule et, de ce fait, joue un rle con sidrable dans les phnomnes dabsorption. Les microvillosits du plateau stri contiennent en leur centre un impor- tant faisceau de microfilaments parallles dactine mainte nus ensemble par les protines de forma- tion du faisceau dactine, principalement l a fimbrine et surtout la villine. Les termes de plateau stri et de bordure en brosse sont utiliss indiffremment dans la littrature de langue anglaise, mais les auteurs franais rservent le terme de bor dure en brosse aux arran- gements o les microvillosits sont habituellement plus lo ngues et moins rgulirement disposes que dans le plateau stri. La fonction dabsorption est analogue celle du plateau stri. Les cellules bordure en brosse les plus typi ques sont celles du tube contourn proximal du rein. 3.2.2.2 Les strocils correspondent des microvillosits longues et flexueuses

Dans les strocils, les microfilaments centraux ne sont pas organiss. Ainsi, les stroc ils, paral- lles leur base, deviennent trs sinueux et entremls leur extrmit distale es cellules st- rocils les plus typiques sont celles du canal pididymaire et du can al dfrent. 3.2.2.3 Les cils vibratiles permettent certains pithliums de mettre en mouvement l es lments du contenu de la cavit quils bordent Les cils sont surtout prsents au niveau de lpithlium des voies respiratoires et de lpi thlium de certains segments des voies gnitales (trompes utrines chez la femme). Lapp areil ciliaire com- prend trois lments : 1) le cil proprement dit, expansion cytop lasmique en doigt de gant limite par la membrane plasmique de la cellule et conte nant 9 paires de microtubules priphriques et une paire de microtubules centraux, e ntours dune gaine ; on dcrit de plus, les bras de dynine (externes et internes) qui portent lactivit ATPasique indispensable au battement cili aire, les liens de nexine et les ponts radiaires ; 2) le corpuscule basal, qui dr ive des centrioles, avec ses 9 triplets de tubules priphriques sans tubules centra ux ; 3) la racine ciliaire, reliant la base du corpuscule basal au cytosquelette . On peut rapprocher des cellules cilies les cellules sensorielles (olfactives, ves tibulaires, auditives, photorcepteurs rtiniens) dont le ple apical est le sige de dri vs ciliaires plus ou moins sophis- tiqus qui tmoignent de la double valeur originel le du cil (moteur et sensitif). 3.2.2.4 Les scrtions polarises des cellules des pithliums de revtement sont le plus so uvent exocrines Certaines cellules des pithliums de revtement ont une fonction glandulaire exocrine s et se ca- ractrisent morphologiquement par la prsence de vsicules de scrtion accumu les leur ple apical. Il sagit habituellement de cellules glandulaires exocrines (mu queuses ou sreuses) isoles (glande unicellulaire) ou groupes (glande intra-pithliale, pithlium scrtoire). On doit galement signaler la prsence, dans certains pithliums (du tube digestif, par exemple), de cellules glandulaires endocrines (cellules dites neuroendocrines) (voir plus loin). 3.2.2.5 La membrane plasmique du ple apical des cellules de lurothlium est asymtriqu e Lurothlium (pithlium des voies urinaires excrtrices, cest--dire des uretres et de la

sie) prsente une diffrenciation trs particulire au de la membrane plasmique du ple ap ical de ses cellules les plus superficielles. Cette membrane est dite asymtrique car lpaisseur de son feuillet externe est proche du double de celle de son feuille t interne. Les principales protines du feuillet externe sont les uroplakines qui ont de 1 4 domaines transmembranaires et un domaine extra-cellulaire beaucoup pl us important que leur domaine cytoplasmique qui est trs rduit. Cette membrane asymt rique autoriserait ltirement et la stabilisation de la surface cellulaire, probabl e- ment grce des interactions avec le cytosquelette sous-jacent. Ce dispositif pe rmet ainsi dviter la rupture de la membrane pendant la phase de remplissage de la vessie.

3.2.3 Les pithliums de revtement ne contiennent aucun capillaire sanguin ou lymphat ique Les pithliums tant dpourvus de capillaires sanguins, leur nutrition est assure par le s capillaires du tissu conjonctif sur lequel ils reposent ; les changes se font t ravers la MB.

3.2.4 La classification des pithliums de revtement fait appel trois critres : la for me des cellules, le nombre des couches cellulaires et le type de diffrenciation des cellules qui le composent 3.2.4.1 Selon la forme des cellules superficielles On distingue les pithliums pavimenteux (les cellules les plus superficielles sont aplaties, plus lar- ges que hautes), cubiques (les cellules les plus superficiel les sont aussi larges que hautes) et pris- matiques - ou cylindriques - (les cel lules les plus superficielles sont plus hautes que larges). 3.2.4.2 Selon le nombre de couches de cellules On distingue les pithliums simples (ne possdant quune seule couche de cellules), str atifis (possdant plusieurs couches de cellules) et pseudo-stratifis (parassant prsent er plusieurs cou- ches de cellules, mais en ralit le ple basal de toutes les cellul es repose sur la membrane basale). 3.2.4.3 Selon les spcialisations fonctionnelles et les diffrenciations qui les sou s-tendent On distingue des pithliums de protection (mcanique ou chimique), dchanges, dabsorption ou dexcrtion, de mouvements, de rception sensorielle, de scrtion, etc. 3.2.4.4 Quelques exemples dpithliums de revtement e ire de es mu

Lpiderme : pavimenteux stratifi kratinis, de protection et de rception sensoriel

Lpithlium sophagien : pavimenteux stratifi non kratinis, de protection mcaniqu Lpithlium gastrique : prismatique simple cellules ple muqueux ferm, pithliu protection chimique Lpithlium intestinal : prismatique simple avec entrocytes plateau stri et cellu queuses caliciformes, dabsorption Lpithlium respiratoire : primatique pseudo-stratifi, cili avec cellules muqueuse

s caliciformes, de mouvement Lpithlium des trompes utrines : prismatique simple cili, avec des cellules gland ulaires, de mouvement Lendothlium des capillaires : pavimenteux simple, dchanges Certains pithliums particuliers chappent cette classification : cest le cas de lpith- lium interne de la capsule de Bowmann du glomrule rnal, de lpithlium des tubes - nifres du testicule, de lpithlium des voies urinaires excrtrices (dit pithlium polym rphe ou urothlium, cf. section 3.2.2.5 page 45). 3.3 Les pithliums glandulaires Comme les pithliums de revtement, les pithliums glandulaires sont faits de cellules pi thlia- les troitement juxtaposes et jointives. Mais leurs cellules se caractrisent p ar 2 points essentiels : 1) elles sont spcialises dans la scrtion et 2) sauf exceptions, elles sont groupes en amas de for- me et de volume varis.

3.3.1 La scrtion est un phnomne cellulaire trs gnral Le concept de scrtion renvoie lide quune cellule exporte hors de son cytoplasme des m ol- cules quelle a synthtises. Il existe 2 voies intra-cellulaires de scrtion : la voi e constitutive et la voie rgule. 3.3.1.1 La voie de scrtion constitutive est commune toutes les cellules de lorganis me Elle est caractrise par un flux constant de vsicules de transport qui partent de la face trans du rseau de Golgi et gagnent la membrane plasmique avec laquelle elle s fusionnent par exocytose. La membrane de ces vsicules de transport sincorpore la membrane plasmique dont elles assu- rent le renouvellement en lui apportant de nouveaux constituants protiques et lipidiques, tandis que le contenu vsiculaire fa it de protines solubles (protoglycanes et glycoprotines de la MEC, enzymes et/ou mo lcules de signalisation, notamment cytokines et facteurs de croissance) est d- ver s de faon continue dans lespace extra-cellulaire. 3.3.1.2 La voie de scrtion rgule est propre aux cellules scrtrices

On donne le nom de cellules scrtrices aux cellules spcialises dans lactivit scrtoire. les peuvent appartenir aux diffrentes familles tissulaires : cellules des tissus conjonctifs et/ou popu- lations cellulaires libres, cellules musculaires (cellul es myo-endocrines, cellules myo-pithlio- des), cellules du tissu nerveux (neurones) , cellules pithliales. On appelle cellules glandulaires, les cellules scrtrices de nature pithliale. Ces ce llules glan- dulaires peuvent tre isoles dans un pithlium de revtement (cellules muqu euses caliciformes, cellules neuroendocrines), ou groupes en amas plus ou moins v olumineux qui portent le nom de glandes o les cellules sont troitement juxtaposes e t jointives, formant des pithliums glandu- laires. Alors que la scrtion constitutive est continue, la scrtion rgule est dclenche par un nal. Sauf exceptions (comme par exemple les cellules scrtrices de strodes), le produit de scrtion est stock dans des vsicules de scrtion issues du Golgi. Le signal, en gnral hormone ou un neurotransmetteur, qui sassocie son rcepteur au niveau de la cellul e scrtrice, dclenche une cascade dvnements intracellulaires dont une augmentation du Ca++ cytosolique qu i entrane la libration du produit de scrtion, le plus souvent par exocytose.

3.3.1.3 Les mcanismes molculaires de lexocytose sont ubiquitaires Initialement lucids dans les cellules nerveuses au niveau des synapses, les mcanism es molcu- laires de lexocytose semblent communs aux diffrentes cellules scrtrices. La fusion des vsicu- les de scrtion avec la membrane est base sur une interaction entr e des protines dancrage la membrane et des facteurs molculaires solubles facilitant la fusion, correspondant des familles de protines conserves au cours de lvolution. Les facteurs molculaires solubles correspondent au NSF (N-ethylmaleimide-sensitiv e factor) et aux SNAPs (soluble NSF attachment proteins). Au cours de la fusion vsiculaire, le s SNAPs inte- ragissent avec les SNAREs (SNAP receptors) : les v-SNAREs sont prse ntes sur la membrane de toutes les vsicules et les t-SNAREs sur la membrane cytop lasmique o survient la fusion. Les v- SNAREs correspondent aux isoformes de la sy naptobrvine et les t-SNAREs la syntaxine et la famille des protines SNAP25 (25 kDa synaptosome-associated protein). Lassemblage du com- plexe SNAREs permet la fusi on de la membrane de la vsicule de scrtion avec la membrane plas- mique et le produ it de scrtion est dvers dans le milieu extra-cellulaire. Le signal dclenchant lexocyto se varie selon les cellules et peut dpendre du calcium intracellulaire, du GTP ou de lAMPc.

3.3.2 Les glandes sont des groupements organiss de cellules glandulaires

3.3.2.1 Pendant lhistognse, les pithliums glandulaires se forment partir des pithliu de revtement

Ainsi, par exemple, les glandes sudoripares, sbaces et mammaires se forment partir de lecto- derme de surface ; les glandes digestives se diffrencient partir de lpithl ium dorigine endo- dermique de lintestin primitif ; les corticosurrnales naissent d e lpithlium clomique dorigine msodermique. 3.3.2.2 Dans les glandes, les cellules glandulaires sont troitement associes du ti ssu conjonctif richement vascularis Les glandes peuvent constituer des organes identifiables lchelle macroscopique (co mme lhy- pophyse, la thyrode, les parotides, les glandes mammaires, le pancras, le foie, etc.) ou identifia- bles seulement lchelle microscopique dans la paroi dorgan es creux (glandes sophagiennes, gastriques, intestinales, trachales, etc.). 3.3.2.3 Les 3 grandes varits de glandes

Lorsque le produit de scrtion est destin sortir de lorganisme, on parle de glandes e xocrines (ou glandes scrtion externe) ; sil est destin rester lintrieur de lorganisme, on de glandes endocrines (ou glandes scrtion interne). Les glandes amphicrines sont la fois exocrines et endocrines, quelles soient comp oses dun seul type cellulaire exerant les deux fonctions (comme la cellule hpatique dans le foie) ou quel- les contiennent des cellules exocrines et des cellules end ocrines (comme le pancras, avec les aci- nus sreux exocrines et les cellules endoc rines des lots de Langerhans).

3.3.3 Les glandes exocrines dversent leur produit de scrtion dans le milieu extrieur 3.3.3.1 Sauf exceptions, les glandes exocrines comportent une portion scrtrice et un canal excrteur

La description morphologique de ces glandes tient compte des caractristiques des por- tions scrtrices et des canaux excrteurs. Le produit de scrtion est dvers dan le milieu extrieur ou dans une cavit de lorganisme en continuit avec le milieu extri eur, le plus sou- vent par un canal excrteur. Ainsi, peut-on distinguer les glandes simples (canal excrteur unique) ou composes (canal excrteur ramifi), les glandes tubuleuses (portion scrtrice en forme de tube a llong), aci- neuses (portion scrtrice en forme de petite sphre lumire rduite) ou alv ires (portion scrtrice en forme de sac arrondi lumire importante). Une telle classi fication est videm- ment trop rigide et tous les intermdiaires sont possibles, do le s qualificatifs de tubulo-aci- neux ou tubulo-alvolaire. Portions scrtrices (ou uni ts scrtantes) et canaux excrteurs sont envelopps par un stroma de tissu conjonctif co ntenant de nombreux capillaires sanguins ; dans les glandes composes, le stroma dl imite des lobules. Il existe quelques exceptions o le canal excrteur fait dfaut. Le produit de scrt ion de la glande est alors directement dvers dans le milieu extrieur ou dans une ca vit en conti- nuit avec lui. Il sagit de cellules glandulaires situes dans un pithlium de revtement (comme les cellules muqueuses caliciformes rparties dans lpithlium inte stinal), de glan- des intra-pithliales (comme dans lpithlium urtral) ou dun vritable ium scr- toire (comme lpithlium gastrique). 3.3.3.2 Les cellules exocrines scrtent des protines enzymatiques, des mucus ou des produits complexes

Les cellules exocrines scrtant des protines enzymatiques (trypsine, amylase, p epsine, etc.) correspondent aux cellules dites sreuses (respectivement, cellules acineuses du pancras, cellules parotidiennes, cellules principales de lestomac, et c.). Elles se caractrisent par le dveloppement des organites impliqus dans la synths e et lexportation des protines (nuclole volumineux, rticulum endoplasmique granulair e trs dvelopp, appareil de Golgi important, prsence de vsicules de scrtion). Les cellules exocrines scrtant des mucus correspondent aux ce llules dites muqueuses (cellules caliciformes, cellules ple muqueux ferm de lpithlium gastri- qu cellules de trs nombreuses glandes du tube digestif, de larbre tracho-bronchique et du tractus uro-gnital, etc.). Les mucus sont des produits visqueux riches en gly cosaminoglyca- nes et/ou en protoglycanes. Les processus cytophysiologiques sont analogues ceux des cel- lules exocrines scrtant des protines. Habituellement, labond ance des vsicules de scrtion de mucus fait quen microscopie optique la cellule muque use a un aspect clair qui soppose laspect sombre des cellules sreuses. A ct des glandes sreuses et des glandes muqueuses, trs largement distribues dans lorga- nisme, il existe un certain nombre de glandes dont le produit de scrtion nes t ni une pro- tine ni du mucus mais des produits complexes pouvant contenir des l ipides (comme le sbum, le lait, la bile, etc.) ou encore des ions H+ (comme les cellules bordantes des glandes fundiques de lestomac) (cf. tableau).

Glandes exocrines Glandes Glandes Glandes Glandes sudoripares sbaces lacrymales mammaires

Glandes salivaires Foie Estomac Pancras exocrine etc. Scrtions externes Sueur Sbum Larmes Lait Salive Bile Suc gastrique Suc pancratique etc.

Selon la faon dont le produit de scrtion est dvers lextrieur de la cellule gl laire, on distingue classiquement plusieurs types de glandes exocrines. Lextrusion du produit de scrtion seffectue le plus souvent par le mcanisme gnral dexo ose (glandes dites mrocrines ). Seules, certaines glandes cutanes font exception : 1. Les glandes sbaces sont dites holocrines : les cellules sont limines avec leu r produit de scrtion lipidique, le sbum, qui remplit entirement leur cytoplasme ; 2. Les glandes mammaires et certaines glandes sudoripares sont dites apocrin es : le produit de scrtion est limin avec la couronne de cytoplasme qui les entoure et qui se dtache du reste de la cellule. Cest aussi le cas du composant lipidique de la scrtion lacte des glandes mammaires et du produit de scrtion des glandes sudori pares apocrines qui si- gent dans les creux axillaires et dans la rgion des organe s gnitaux externes. 3.3.4 Les glandes endocrines dversent dans le sang des hormones qui agissent dist ance sur les rcepteurs spcifiques des organes-cibles

Glandes endocrines Glande thyrode ) Calcitonine Glandes parathyrodes Glandes surrnales mdullosurrnale corticosurrnale Adrnaline, noradrnaline Minralocorticodes Glucocorticodes (cortisol) Andrognes Pancras Glucagon Ovaires Progestrone Testicules Hypothalamus Adno-hypophyse etc. (cf Tableau suivant) (cf Tableau suivant) etc.

Hormones Hormones thyrodiennes (T3, T4 Parathormone (PTH)

Insuline Oestrognes Testostrone

Le plus souvent, les cellules glandulaires se disposent en traves, en cordons ou l ots dans un stro- ma conjonctif contenant de nombreux capillaires sanguins de ty pe fentr. La disposition des cel- lules glandulaires en follicules est propre la t hyrode. Le produit de scrtion, qui prend le nom dhormone , passe dans la circulation sangui ne pour aller agir en tant que signal sur une cellule-cible situe plus ou moins loin. Se reporter au cours dintroduction lendocrinologie sur le site de lUniversit de Mont pellier 2 Sciences et Techiques du Languedoc . 3.3.4.1 Les cellules qui scrtent des hormones hydrosolubles

Elles ont les mmes caractristiques morphologiques que les cellules exocrines scrtant des pro- tines. En ME, les vsicules de scrtion des cellules scrtrices damines biogne e distinguent toutefois par leur aspect de grains denses entours dun halo clair (vs icules cur dense). Les hormones hydrophiles sont soit des peptides, polypeptides et protines, soit d es petites molcules charges ou amines biognes (adrnaline, noradrnaline, mlatonine...). Les rcepteur de ces hormones sont localiss dans la membrane plasmique des cellules-cibles et sont coupls des systmes de transduction tels que les protines G ou les tyrosines-ki nases qui activent leur tour dautres enzymes ou des complexes multiprotiques. 3.3.4.2 Les cellules qui scrtent des hormones hydrophobes

Les hormones hydrophobes diffusent librement travers la membrane plasmique et se lient des rcepteurs intranuclaires. Il sagit des hormones strodiennes (strognes, pr strone, testos- trone, cortico-strodes, etc.), de lhormone thyrodienne , de la vitamine D et de lacide rtinoque (mtabolite de la vitamine A). Une fois activs, les rcepteurs nuclaires se lient lADN et modulent spcifiquement la transcription de certains gnes dans la cellule cible. Les cellules endocrines scrtrices dhormones strodes se caractrisent essentiellement pa r : 1) un rticulum endoplasmique lisse abondant ; 2) des mitochondries trs nombreuses et, pour beaucoup dentre elles, crtes tubulaires (et non lamellaires comme dans la plupart des autres ty- pes de cellules) ; 3) des vacuoles lipidiques (liposomes ). En MO, lutilisation de solvants des grais- ses dans la prparation des coupes vi de ces vacuoles de leur contenu lipidique et confre aux cellules un aspect spongi eux qui leur a fait donner le nom de spongiocytes. Les enzymes permettant la syn thse des hormones strodes partir du cholestrol sont principalement localises dans les mitochondries et dans le rticulum endoplasmique lisse. Les hormones strodes ne son t jamais stockes sous forme dhormones actives, la stimulation cellulaire entranant la modification enzy- matique de leur prcurseurs et leur synthse. Il ny a pas de vsi cules de scrtion (les liposomes ne sont pas des vsicules de scrtion mais reprsentent l es rserves desters de cholestrol) et pas dexocytose (lextrusion se fait par diffusion travers la membrane plasmique et ne donne pas lieu des phnomnes morphologiquement observables). 3.3.4.3 Les neurones neuroscrtoires scrtent des neurohormones Se reporter au cours de Neuroendocrinologie de lUniversit de Montpellier 2 Science s et Tech- niques du Languedoc . Bien que constitu de cellules du systme nerveux central et non de cellules pithliale s glandulai- res, lhypothalamus a nanmoins une fonction endocrine, due la prsence d e neurones neuros- crtoires. Ces neurones particuliers qui sigent dans lhypothalamus

se rpartissent en deux groupes : 1) certains neurones de lhypothalamus latral scrtent des neuro-hormones hypophysiotropes qui, par voie sanguine, st imulent (librines ou Releasing Hormones ) ou frei- nent (statines ou Inhibiting Fa ctors ) la scrtion des hormones adno-hypophysaires par les cel- lules glandulaires e ndocrines de ladnohypophyse (cf. tableau) ; 2) les neurones des noyaux supra-optiq ues et paraventriculaires scrtent les hormones dites post-hypophysaires (ocytocine et vasopressine - ou hormone antidiurtique ou ADH), dverses dans la circulation au niveau de la post-hypophyse. Hormones adno- hypophysaires ACTH TSH FSH et LH Neuro-hormones hypothalamiques hypophysiotropes Librines Statines Corticolibrine Thyrolibrine Gonadolibrine (GnRH) GH Prolactine Somatolibrine Prolactolibrine Somatostatine Prolactostatine (PIF)

ACTH = hormone corticotrope TSH = hormone thyrotrope FSH et LH = hormones gonadotropes (folliculostimulante et lutinisante) GH = Growt h Hormone = Hormone de croissance = STH = Somathormone GnRH = Gonadotropin Relea sing Hormone PIF = Prolactin Inhibiting Factor 3.3.4.4 Les cellules neuroendocrines forment un systme endocrinien diffus scrtant de nombreux neuropeptides et des amines biognes Les cellules neuroendocrines (cellules NE), dites aussi cellules argentaffines o u entrochromaffi- nes, sont disperses principalement dans les pithliums de revtement digestifs et respiratoires et dans les glandes digestives. Les cellules de Merke l des pithliums malpighiens cutano-muqueux et les cellules des paraganglions (mdullo -surrnales, corpuscules carotidiens, etc.) sont galement des cellules NE. Les cell ules NE scrtent de nombreux neuropeptides et des amines biognes (no- radrnaline, adrn aline, dopamine et/ou srotonine). La scrtion se fait dans le milieu extracellu- lai re et laction sexerce loco-rgionalement sur les cellules NE elles-mmes et/ou sur les cellules voisines (scrtion auto/paracrine) ; une action endocrine est galement pos sible. En ME, les vsi- cules de scrtion apparaissent comme des grains denses entours dun halo clair cern par une membrane (vsicules cur dense) . Les immunomarqueurs des neurones sont positifs dans les cellules NE, mais seuls les immunomarquages ave c les anticorps spcifiques dirigs contre les dif- frents peptides et/ou amines scrts p ar chacune des varits de cellules NE permettent de les caractriser prcisment. Chapitre 4

Les tissus conjonctifs. Les tissus adipeux

4.1 Le tissu conjonctif lche Le tissu conjonctif lche (ou tissu conjonctivo-vasculaire) se caractrise par la prs ence entre ses cellules dune trs abondante matrice extra-cellulaire (MEC). Dans cette MEC, lhistologie classique distinguait des fibres (collagnes, lastiques et de rticuli- ne) et une substance fondamentale (microscopiquement amorphe).

4.1.1 Les fibroblastes sont les cellules principales du tissu conjonctif Les fibroblastes (ou fibrocytes) sont des cellules fusiformes ou toiles possdant de longs prolon- gements cytoplasmiques. Ils proviennent dune cellule-souche msenchy mateuse multipotente qui est galement lorigine des adipoblastes, des chondroblaste s, des ostoblastes et des myoblastes. En MO, leur cytoplasme est peu visible et s eul leur noyau, ovode, allong, avec un ou deux nu- cloles, est bien visible. En ME, on y dcle tous les organites cellulaires habituels et surtout, dans les fibroblas tes en pleine activit, les organites impliqus dans la synthse des protines. Le ph- no type des fibroblastes est modulable en fonction de leur degr dactivation (par exem ple, trans- formation en myofibroblaste). Les fibroblastes synthtisent les macrom olcules protiques et polysaccharidiques de la MEC du tissu conjonctif. Les fibrobl astes sont aussi capables de scrter de nombreuses autres molcules (cytokines, facte urs de croissance, enzymes) et jouent un rle im- portant dans les processus de rpa ration tissulaire ou dans lentretien des ractions inflammatoires.

4.1.2 Le tissu conjonctif lche est trs rpandu dans lorganisme On en trouve, notamment sous la peau (tissu conjonctif sous-cutan), entre les mas ses musculaires, dans le chorion et la sous-muqueuse du tube digestif, dans le chorion des voies respiratoires, des voies gnitales et urinaires, dans ladventice des vaisseaux, sou s lpithlium des sreuses, dans de nombreux organes pleins (stroma conjonctif). Le ter me de parenchyme dsigne le tissu propre dun viscre plein, alors que le terme de str oma dsigne le tissu conjonctif contenant les vaisseaux et nerfs destins au parench yme.

4.1.3 Le rle que joue le tissu conjonctif lche dans lorganisme est important et com plexe Ainsi, le tissu conjonctif possde un rle de soutien et demballage des tissus et org anes ; il assure le passage de nombreuses substances entre le sang et les tissus ; sige des cellules libres du syst- me immunitaire (lymphocytes et plasmocytes, m onocytes et macrophages, granulocytes, mastocy- tes), il joue un rle majeur dans les ractions inflammatoires et dans les phnomnes immunitaires ainsi que dans les pr ocessus de cicatrisation (par prolifration des fibroblastes et production des mac romolcules de la MEC).

4.2 Le tissu rticulaire Le tissu rticulaire (ou rticul) correspond au tissu conjonctif qui constitue le str oma des organes hmatopotiques et lymphodes (ganglions lymphatiques, rate, moelle oss euse), du foie et du rein ; sa charpente collagne, principalement faite de collagn e de type III, peut tre visualise en MO aprs coloration argentique sous la forme dun rseau de fines fibres colores en noir, dites fibres de rticuline. En ME, le collagn e III apparat sous forme de fins microfilaments apriodi- ques, disperss dans une ma trice riche en protoglycanes.

4.3 Les tissus conjonctifs denses Les tissus conjonctifs riches en fibres, pauvres en cellules et en substance fon damentale, ont une fonction essentiellement mcanique.

4.3.1 Les tissus conjonctifs fibreux denses Ils contiennent essentiellement des fibres de collagne ; ils se rpartissent en deu x sous-groupes : 1) les tissus fibreux non orients (derme, prioste, capsules articulaires, dure-mre, capsules des organes pleins (comme le foie, la rate, les reins, etc) ; 2) les t issus fibreux orients (unitendus : li- gaments et tendons, ou bitendus : aponvrose s et stroma de la corne). 4.3.2 Les tissus lastiques Les fibres (ou lames) lastiques y prdominent largement, entre de rares fibroblaste s ou entre les cellules musculaires lisses (comme dans la mdia des artres de gros calibre).

4.4 Les tissus squelettiques Ces tissus conjonctifs spcialiss sont caractriss par la nature solide de leur MEC. I ls regroupent les tissus osseux et cartilagineux (cf. chapitre 6 page 71).

4.5 Les tissus adipeux Il existe deux varits dadipocytes (ou cellules adipeuses) - les adipocytes blancs e t les adipocytes bruns - et, par voie de consquence, deux types de tissu adipeux (couramment appel graisse ) : le tissu adipeux blanc ou graisse blanche et le tiss u adipeux brun ou graisse brune.

4.5.1 La graisse blanche est la plus importante rserve nergtique de lorganisme

4.5.1.1 Les adipocytes blancs renferment une volumineuse vacuole de triglycrides

Les adipocytes de la graisse blanche sont des cellules sphriques, dun diamtre denvir on une cen- taine de micromtres voire plus. Leur cytoplasme renferme une volumine use vacuole lipidique uni- que (triglycrides), entoure par une mince couronne cyto plasmique contenant un appareil de Golgi, du rticulum endoplasmique granulaire, d u rticulum endoplasmique lisse et des mitochon- dries. Du fait du passage dans les solvants des graisses, la vacuole lipidique disparat sur les prparations standards de MO, aprs inclusion en paraffine ; pour lobserver, il est ncessaire de faire des cou- pes conglation et dutiliser des colorants des gr aisses comme lhuile rouge ou les Soudans (noir, par exemple). Le noyau, aplati, e st refoul contre la membrane plasmique. Une fine MB entoure la membrane plasmique . Les adipocytes blancs peuvent tre isols au sein du tissu conjonctif lche et dans la moelle osseuse ou tre groups pour constituer le tissu adipeux blanc. 4.5.1.2 Le tissu adipeux blanc reprsente 15 20 % du poids de ladulte Dans le tissu adipeux blanc, les adipocytes, tasss les uns contre les autres, pre nnent une forme po- lydrique. Ils sont spars par des fibres de rticuline et de trs no mbreux capillaires sanguins ainsi que par des fibres nerveuses amyliniques reprsen tant des fibres sympathiques noradrnergiques. Les adipocytes sont groups en petits lobules, visibles lil nu, spars par de fines cloisons con- jonctives contenant des fibroblastes, des macrophages, des mastocytes et des fibrilles de collagne. Le ti ssu adipeux blanc est principalement localis dans : 1) le pannicule adipeux souscutan, dif- fus et rgulier chez le ftus et le nouveau-n, prdominant sur la nuque et l es paules chez lhom- me, sur la poitrine, les hanches, les cuisses et les fesses c hez la femme ; 2) les rgions profondes, comme le msentre, les piploons, les rgions rtr opritonales ; 3) les orbites, les paumes et face palmaire des doigts, les plantes et face plantaire des orteils. Les deux premires localisations cor- respondent de s rserves nergtiques qui fondent lors du jene, alors que la troisime joue un rle de so utien et de protection mcanique et est peu sensible au jene. 4.5.1.3 Ladipocyte blanc assure la synthse, le stockage et la libration des lipides La synthse des lipides (ou lipognse) est stimule par linsuline. Cette synthse seffectue partir de diffrents substrats (triglycrides dorigine alimenta ire et glucose). Le glucose pntre dans ladipocyte par diffusion facilite grce deux pr oti- nes transmembranaires qui servent de transporteurs, GLUT1 et GLUT4. GLUT1 es t situ de faon prdominante dans la membrane plasmique, alors que GLUT4 est en major it si- tu dans la membrane de vsicules intracytoplasmiques. Dans ladipocyte, la fixa tion de linsuline sur son rcepteur membranaire spcifique stimule la transcription d u gne codant pour GLUT4 et la traduction de ses ARN-messagers, et active la trans location vers la mem- brane plasmique des vsicules dont la membrane contient GLUT 4. Les vsicules samar- rent la membrane plasmique et fusionnent avec elle. Cest par ce mme mcanisme que linsuline stimule lentre du glucose dans la cellule musculaire s trie squelettique et dans le cardiomyocyte. Le stockage des lipides se fait sous forme de triglycrides. Le tissu adipeux blanc renferme la quasi-totalit des triglycrides stocks dans lorganisme ; il reprsente, de ce fait, une des plus importantes rserves nergtiqu es de lorganisme. Cest cette rserve que lorganisme fait appel lorsque les rserves de gluci- des sont puises (jene, efforts physiques, lutte contre le froid, etc.), ou i nutilisables (dia- bte grave). Lhydrolyse des triglycrides (ou lipolyse), stimule par les catcholamines, libre dans le sang des acides gras non estrifis. La lipolyse est due laction de deux lipases prsentes dans le cytoplasme des adipoc ytes

et qui sont activs par les catcholamines (adrnaline et noradrnaline, quil sagisse des hormones mdullo-surrnaliennes ou des transmetteurs venus des terminaisons sympathi - ques). Le rcepteur bta-3-adrnergique reprsente le principal rgulateur de la lipolys e adipocytaire aussi bien dans les adipocytes du tissu adipeux blanc que dans ce ux du tissu adipeux brun. Ce rcepteur de ladrnaline et de la noradrnaline, principal ement exprim dans les adipocytes (et dans le tube digestif), diffre du rcepteur bta1 (surtout exprim dans le cur) et du bta-2 (essentiellement exprim dans larbre bronchique). Les acides gras non estrifis que les adipocytes librent ainsi dans le sang sont utilisables p ar les autres cellules de lorganisme des fins nergtiques. 4.5.1.4 Ladipocyte blanc est galement une cellule scrtrice endocrine et auto- paracr ine Les adipocytes, longtemps considrs comme des cellules de stockage des graisses, in tervenant comme isolant thermique et mcanique, ont acquis avec la dcouverte de la leptine, le statut de cel- lules scrtrices endocrines, capables de communiquer ave c le systme nerveux central. Par ailleurs, des tudes ralises sur des souris atteinte s dobsit congnitale ont permis de caractri- ser de nouvelles protines intervenant dans la rgulation des dpenses nergtiques, en particulier au niveau des adipocytes.

Ladipocyte scrte une hormone, la leptine, produit du gne ob, qui au niveau de lhypoth a- lamus rgule lapptit. Chez la souris, la mutation du gne ob est responsable, ltat homozygote, dune obsit g ue. Ce gne, exprim dans le tissu adipeux, code pour une protine synthtise par les adi pocytes et exporte dans le sang pour agir au niveau de rcepteurs situs dans cer- ta ins neurones de lhypothalamus. Dans lespce humaine, le gne homologue du gne ob de la souris a t identifi et clon, et, son produit la leptine (protine hautement conserve ch ez les vertbrs) a t caractris. La leptine se comporte comme une hormone de la sa- tit gissant en rgulant lapptit en fonction de la masse de tissu adipeux, par un rtro- co ntrle hypothalamique. Au niveau de cette boucle rgulatrice de la prise alimentaire , la leptine active la voie anorexigne (qui coupe la faim) et inhibe la voie orex igne (qui ouvre lapptit). Par ailleurs, la leptine jouerait un rle dans la biologie de la reproduction (mat uration sexuelle, fcondit, strilit). Les adipocytes scrtent des cytokines et dautres molcules. Les adipocytes scrtent en particulier du TNF-alpha et aussi de lIL-6 qui limiteraie nt lo- calement lentre des acides gras dans le tissu adipeux. Ladipocyte scrte galemen t des facteurs angiogniques (favorisant sa propre vascularisation), des prostagla ndines, des s- trognes, de langiotensinogne, des protines du complment, etc...

4.5.2 La graisse brune est une source de chaleur

4.5.2.1 Surtout abondante chez les mammifres hibernants, la graisse brune est nanm oins prsente dans lespce humaine Contrairement aux adipocytes blancs, les adipocytes bruns ont un noyau central e t un cytoplasme rempli de nombreuses petites vacuoles lipidiques (la cellule est dite multiloculaire) et de mitochon- dries. Surtout abondante chez les mammifres hibernants (comme la marmotte), la graisse brune est nanmoins prsente dans lespce h umaine, principalement au dbut de la vie. Chez le ftus et le nouveau-n, elle se rpartit dans la rgion interscapulaire, autour des gros vaisse aux (aisselles, cou), autour des reins et du cur. Chez ladulte, sa persistance est sujette discussion.

4.5.2.2 Les mitochondries des adipocytes bruns contiennent une protine dcouplante, la thermognine, qui permet de dissiper lnergie des oxydations sous forme de chaleu r

La graisse brune est implique dans la thermognse sans frisson et celle induite par lalimentation. Sa localisation habituelle au contact immdiat des principaux vaisse aux sanguins facilite la diffu- sion dans tout lorganisme de la chaleur quelle pro duit (calorifre naturel, source de chaleur). La vascularisation et linnervation sy mpathique sont richement dveloppes. Chaque adipocyte, por- teur de rcepteurs bta3-ad rnergiques, est au contact dune terminaison sympathique noradrner- gique. Au lieu dtre couple la phosphorylation oxydative, lnergie libre par loxydation mito driale des acides gras a la capacit de se convertir en chaleur. La protine mitocho ndriale respon- sable de ce dcouplage est la thermognine ou UCP1 (pour UnCoupling Protein 1). Il existe une troite corrlation entre le contenu en thermognine, dont le xpression est contrle au niveau transcriptionnel par les catcholamines, et le poten tiel thermognique du tissu. Ladipocyte brun contient de la T4-5 diodase, enzyme capa ble de convertir la T4 (ttraiodothyronine) circulante en triiodothyronine, et ind ispensable pour que la transcription du gne de lUCP 1 , et donc la r- ponse au froi d des adipocytes bruns, soit maximale. Linvalidation du gne Ucp 1 conduit constater que les animaux Ucp-/- sont trs sensibles au froid, ne peuvent maintenir le ur temprature un niveau lev et que leurs adipocytes bruns accumulent une quantit ano rmalement leve de triglycrides, ce qui confirme le rle essentiel de lUCP dans la thermognse normalement in duite par le froid. Par immunocytochimie ou hybridation in situ , il est possible de dtecter dans les mitochondries la protine dcouplante UCP 1 ou son ARN-m, caractristiques de ladipocyte brun ; par cont re les enzymes de la phosphorylation sont absents (il ny a pas de particules lmenta ires sur la membra- ne interne des mitochondries), en effet, il ny a pas de phosp horylation oxydative : le couplage avec la phosphorylation de lADP en ATP ne se f ait pas. Par contre, loxydation des acides gras est abondante dans ces mitochondr ies, la consommation dO2 est leve et les cytochrome-oxydases y sont abondantes (ce qui donne la couleur brune ces adipocytes). Chapitre 5

Les populations cellulaires libres Les populations cellulaires libres (ou cellules migratrices) se distribuent dans la circulation sanguine et lymphatique, dans les organes lymphodes ainsi que dan s le tissu conjonctif lche et notamment les muqueuses de nombreux organes. Le san g, vhicule principal des courants de mi- gration cellulaire, est le sige des change s permanents entre cellules et tissus. Dans le sang, les globules rouges assurent les changes gazeux au niveau de la bar rire alvolo- capillaire et les plaquettes maintiennent lintgrit du systme circulatoire . Dans les tissus, les globules blancs qui appartiennent aux diffrents systmes de dfe nse de lorganisme sont en permanence exposs divers agents pathognes. Les dfenses non-spcifiques cor- respondent aux barrires tissulaires et aux phagocytes professionnels . Les dfe nses spcifiques (immunit acquise) ncessitent un contact pralable avec lagent pathogne, ncessaire sa recon- naissance. Lefficacit des dfenses spcifiques repose sur les capa cits de lorganisme distin- guer ses propres molcules ( soi , dont le marqueur princip al est le systme HLA) des molcules (antignes) trangres (non soi ). Se reporter au cours de microbiologie (immunologie) de la Facult libre de mdecine

de Lille. Toutes les cellules du sang et cellules immunitaires sont issues de ce llules souches multipotentes hmatopotiques situes dans la moelle osseuse.

5.1 Les lments figurs du sang Se reporter au cours de physiologie et danatomie humaines de lUniversit de Nebraska Omaha (USA).

5.1.1 La numration-formule sanguine est un examen de routine La numration globulaire consiste compter le nombre de globules rouges (GR), de gl obules blancs (GB) ou leucocytes et de plaquettes par unit de volume de sang. Les rsultats normaux sont les suivants : GR : 5 000 000 500 000 par microlitre, chez lhomme 4 500 000 500 000 par microlitre, chez la femme GB : 7 000 3 000 par microlitre, chez ladulte Plaquettes : 150 000 450 000 par microlitre La formule sanguine (ou formule leucocytaire) consiste valuer le nombre de chacun e des dif- frentes populations de leucocytes. Actuellement, les rsultats sont expr ims en nombre absolu par microlitre (1 microlitre = 1 mm3) plutt quen pourcentage des diffrentes varits de leu cocytes : Granulocytes neutrophiles : 1 800 8 000 Granulocytes osinophiles : 50 500 Granulocytes basophiles : < 100 Lymphocytes : 1 500 4 500 Monocytes : 100 1 000

La numration-formule sanguine est ralise par des automates, mais lidentification des anoma- lies cellulaires se fait sur des frottis. La numration des sous-populations lymphocytaires, ralise par immunomarquage sur lam es ou en cytomtrie de flux, donne, ltat normal, les rsultats suivants, titre dexempl pour un nombre total de lymphocytes de 2000 par microlitre :

Lymphocytes B 200 300 Lymphocytes T 1500, dont : Lymphocytes T4 1000 Lymphocytes T8 500 rapport T4/T8 2 Lymphocytes NK 200 300.

5.1.2 Les globules rouges effectuent le transport de loxygne fix par lhmoglobine Les globules rouges (ou hmaties, rythrocytes, normocytes) sont des cellules anucles, en forme de disque biconcave, denviron 7,5 mm de diamtre. Le volume globulaire mo

yen est de 85 95 mm3. Le rle principal des globules rouges est de maintenir ltat fonctionnel le pigment r espiratoire quest lhmoglobine. La concentration normale de lhmoglobine dans le sang e st de 13 18 g/ 100ml chez lhomme et de 12 16 g/100 ml chez la femme. Lhmoglobine, constituant maje ur du globule rouge (environ 1/3 de son poids), assure 3 fonctions principales : 1) transporter loxygne des poumons aux tissus ; 2) permettre le transfert dune partie du CO2 des tissus aux poumons ; 3) tamponner les ions H+ librs par les tissus. Le glucose est la principale source dnergie pour le globule rouge (glycolyse anarobie intra-rythrocytaire). La membrane plasmique d e lhmatie porte des antignes qui dterminent les groupes sanguins (A, B, O, Rhsus, etc .). La dure de vie des globules rouges est de 120 jours.

5.1.3 Les plaquettes maintiennent lintgrit du systme circulatoire et assurent lhmostas e quand les vaisseaux sanguins sont endommags Les plaquettes sanguines (ou thrombocytes) sont des fragments cellulaires anucls ( 2 5 mm de diamtre) contenant des mitochondries, des vsicules cur dense et un cytosq uelette riche en pro- tines contractiles. Leur dure de vie est de 8 12 jours. Les plaquettes proviennent de la fragmen- tation cytoplasmique de leurs prcurseurs mdu llaires, les mgacaryocytes. Elles jouent un rle fondamental dans les processus de lhmostase et de la coagulation. Le phnomne de lagrgation plaquettaire qui joue un rle rucial dans ces processus fait intervenir de nombreuses molcules dadhrence.

5.2 Les cellules immunitaires dans les tissus

5.2.1 Les monocytes et les macrophages constituent le systme des phagocytes monon ucls 5.2.1.1 Une fois forms dans la moelle osseuse, les monocytes passent dans le sang Ce sont les plus grands des leucocytes normaux (12 20 mm). Leur noyau est volumi neux, central ou priphrique, rniforme ou indent. Leur cytoplasme est caractris par des expansions cyto- plasmiques et par la prsence de grains azurophiles (en MO) corr espondant des lysosomes pri- maires (en ME). 5.2.1.2 Aprs tre sortis du sang, les monocytes migrent dans les tissus et sy diffren cient en macrophages

Les macrophages, dissmins dans lensemble de lorganisme, se distinguent des monocytes par une plus grande taille, le dveloppement considrable de lappareil vacuolaire (vs icules dendo- cytose, endosomes, lysosomes primaires, phagosomes, phagolysosomes) et des expansions cyto- plasmiques qui forment de vritables pseudopodes. Les pro prits fondamentales des macrophages sont leur mobilit, leur pouvoir de phagocytose et leur capacit scrtrice. Cette capacit scrtrice est multiple : fractions du complment cytokines (interleukines 1 et 6, TNF-a), facteurs hmatopotiques (GM-CSF), protases et antiprotases (a-1 antitrypsine), prostaglandines, rad icaux li- bres (oxyde nitrique, eau oxygne, radical OH). Les macrophages jouent un

rle prpondrant dans les dfenses de lorganisme : nettoyage non spcifique ( cellules po belles ) et rle dans les ractions immunes. Les fonctions des monocytes/macrophages sont modules par diffrentes cy- tokines comme linterfron g produit par les lymphocyt es T. 5.2.1.3 Les macrophages font partie des cellules prsentatrices dantignes Voir plus loin.

5.2.2 Les granulocytes interviennent dans les ractions de dfense non spcifiques de lorganisme

Les granulocytes possdent un noyau unique qui prsente plusieurs lobes de formes di verses, ayant pu faire croire, tort, quils taient multinucls, do le nom de polynucl s . Le cytoplasme des granulocytes contient diffrents types de granulations, carac tristiques de chaque granulocyte. Selon les affinits tinctoriales en MO de leurs g ranulations, les granulocytes sont rpartis en trois catgories : neutrophiles, osino philes et basophiles. 5.2.2.1 Les granulocytes neutrophiles

Le cytoplasme des granulocytes neutrophiles contient des granulations qui peuven t se rpartir en au moins 3 varits, qualifies de granulations primaires, secondaires ou tertiaires, en fonction de la nature de leur contenu, de leur diamtre, de leur affinit tinctoriale en MO et de leur densit aux lectrons en ME. Les unes sont des lysosomes qui contiennent de la myloproxydase et des mo- lcules bactricides indpendan tes de loxygne (hydrolases acides, lastase, cathepsines, proti- nes cationiques di tes tueuses , lysozyme, dfensines...). Dautres, dpourvues denzymes lysosomiales et de peroxydases, contiennent principalement du lysozyme, de la lactoferrine, du cy- tochrome b, de la collagnase, de la glatinase, de la phosphatase alcaline. Dautres enfin contien- nent essentiellement de la glatinase. Les neutrophiles agissent localement au niveau des tissus, pour dtruire et liminer les agents pa- thognes ainsi que les cellules ou molcules devenues anormales. Cet te fonction saccomplit en diffrentes tapes plus ou moins intriques : 1) dplacement de s granulocytes neutrophiles qui se rendent sur les lieux (chimiotactisme) 2) pha gocytose (reconnaissance, adhrence puis englobe- ment de la cible), 3) dgradation par les protines tueuses et par les systmes tueurs dpendants de loxygne, aboutissant la production de substances puissamment bactricides telles que H2O2, radicaux oxydants (OH, HOCl) ; les substances antibactriennes oxygne-indpendantes c ontenues dans les lysosomes primaires (dfensines, protinases neutres comme la cathepsi ne G, lyso- zyme) conduisent une destruction bactrienne partielle qui sera acheve par les monocytes/ macrophages. La dure de vie des granulocytes neutrophiles est de lordre de 24 heures. 5.2.2.2 Les granulocytes osinophiles Les granulocytes osinophiles sont les cellules effectrices principales de limmunit anti-parasitai- re, des ractions dhypersensibilit retarde et de la rsistance aux tume urs. Les granulations osi- nophiles sont colores en rouge-orang par les colorations standard ; en ME, la matrice de ces granulations est finement granulaire et con tient une formation cristalline ( cristallode ) arran- gement rgulier priodique de ba ndes claires et de bandes sombres. Les granulations des osino- philes contiennent des eicosanodes et de nombreuses protines dont certaines entranent la dgranulation des mastocytes et la libration dhistamine. La peroxydase des osinophiles, diff- rent e de celle des neutrophiles et des monocytes, possde la capacit de dtruire de nombr eux mi- croorganismes, en particulier des parasites, mais galement des cellules t

umorales. Aprs une demi-vie de quelques heures dans la circulation sanguine, les o sinophiles passent dans les tissus (comme la peau, les poumons, le tube digestif ) o ils persistent quelques jours. 5.2.2.3 Les granulocytes basophiles Les granulocytes basophiles contiennent dans leur cytoplasme des granulations vo lumineuses, m- tachromatiques, de couleur bleu-noir aprs coloration au May-Grunwal d-Giemsa. Ils circulent dans le sang et passent dans les tissus en cas de raction s allergiques. Ils interviennent alors dans les ractions dhypersensibilit immdiate ( ractions allergiques, conjointement avec les mastocy- tes tissulaires, selon des mcanismes analogues (cf plus loin). Leur dure de vie est de quelques jours.

5.2.3 Les mastocytes participent avec les granulocytes basophiles aux ractions dhy persensibilit immdiate (ractions allergiques)

Les mastocytes et les granulocytes basophiles possdent une origine commune partir des cellules souches hmatopotiques, mais ont subi une diffrenciation diffrente (nota mment, expression sur la membrane du mastocyte dun rcepteur c-kit, absent de celle des granulocytes basophiles). Mas- tocytes et basophiles ont une physiologie co mmune mais sont morphologiquement diffrents. Les mastocytes sont des cellules arr ondies, noyau rond central, dont le cytoplasme renferme des gra- nulations mtachr omatiques en MO et de structure feuillete et lamellaire en ME. Contrairement aux basophiles, ils ne sobservent que dans les tissus o ils sont souvent groups autour de petits vaisseaux sanguins, et ne se trouvent pas dans le sang. Chez des sujets gntiquement prdisposs, dits atopiques , certains antignes (allergnes ti- mulent la production danticorps IgE par les plasmocytes. Ces anticorps IgE se lient de faon non spcifique, par leur fragment Fc, aux rcepteurs membranaires des basophiles et des mastocytes. Lors dun contact ultrieur avec le mme allergne, celuici se fixe sur le fragment Fab spcifique des IgE lis la membrane de ces cellules, entranant la libration dans le milieu extracellulaire du contenu de leurs granulat ions (hparine, acide hyaluronique et surtout histamine) et la production de cytok ines et de leukotrines. Ces molcules agissent sur des tissus cibles et sont respon sables de phnomnes allergiques (comme lurticaire, le rhume des foins, lasthme, voire des ch ocs ana- phylactiques graves).

5.2.4 Les lymphocytes sont les cellules effectrices du systme immunitaire 5.2.4.1 Laspect morphologique des lymphocytes est monomorphe Les lymphocytes se caractrisent par : 1) leur forme, rgulire, arrondie ; 2) leur ta ille, le plus sou- vent petite (voisine de celle dun globule rouge) ; toutefois, ct de ces petits lymphocytes, on distingue des moyens et des grands lymphocytes, d e taille plus grande ; 3) leur noyau, sphrique, fonc, sans nuclole visible, occupan t la presque totalit du volume de la cellule ; 4) leur cytoplas- me, rduit une min ce couronne contenant les organites cellulaires habituels en quantit trs res- trei nte. 5.2.4.2 Les lymphocytes acquirent leur comptence fonctionnelle au cours de leur pa ssage dans un organe lymphode central Les lymphocytes, issus des lymphoblastes, quittent la moelle osseuse, passent da

ns la circulation et se dirigent vers un organe lymphode dit central, o ils se mul tiplient et produisent des lympho- cytes qui acquirent leur spcificit immunitaire. Les deux organes lymphodes centraux, le thy- mus et la moelle osseuse produisent des lymphocytes diffrents sur le plan fonctionnel. Le thymus induit la comptence d es lymphocytes T, responsables de limmunit cellulaire. La moelle osseuse induit la comptence des lymphocytes B, responsables de limmunit humorale. Chaque lympho- cyt e devient alors immunologiquement comptent , et porte sur sa membrane des rcepteurs spcifiques, capables de reconnatre un antigne. Les lymphocytes comptents se rpartiss ent via la circulation dans lorganisme : dans les organes lymphodes (rate, ganglio ns) et dans les tissus conjonctifs, tout particulirement dans le chorion des muqu euses o les lymphocytes sont disperss ou forment des amas lymphodes. Sous leffet dune stimulation antignique, les lymphocytes comptents activs deviennent des cellules e ffectrices. 5.2.4.3 La maturation fonctionnelle des lymphocytes se traduit par lapparition dan tignes membranaires spcifiques Les tapes de la diffrenciation lymphocytaire sont marques par lapparition dantignes me m- branaires appels CD pour cluster de diffrenciation . Ces antignes sont utiliss com me des marqueurs, pouvant tre identifis par immunomarquage avec des anticorps mono clonaux. Cer- tains antignes sont prsents sur tous les lymphocytes (comme CD45), da utres sont spcifiques de chaque famille lymphocytaire, caractrisant leur maturatio n fonctionnelle ou ltat dactivation cellulaire. 5.2.4.4 Les lymphocytes B sont responsables de limmunit humorale Les lymphocytes B expriment leur surface des immunoglobulines capables dinteragir directe- ment avec les antignes. Aprs stimulation antignique, ils se transforment en plasmocytes capa- bles de scrter les immunoglobulines (ou anticorps circulants : IgG, IgA, IgM, IgE). Les lymphocytes B synthtisent les immunoglobulines (ou anticorps) Les lymphocytes B (de Bone marrow , moelle osseuse), diffrencis dans la moelle osseuse, sont identifis par les anticorps anti-CD19 ou CD20. Dans les lymphocytes B matu- res (ceux du sang et des organes lymphodes), les immunoglobulines sont insre s dans la membrane plasmique. Ces immunoglobulines de surface (ou membranaires) sont le rcep- teur pour lantigne et constituent le marqueur phnotypique essentiel de s lymphocytes B. La grande majorit des lymphocytes B du sang humain portent des I g M, trs peu des Ig G ou des Ig A. Aprs stimulation antignique, les lymphocytes B se diffrencient en plasmocytes Les plasmocytes scrtent de grandes quantits danticorps spcifiques. Dans les plasmo- c ytes, lexpression des immunoglobulines de surface disparait, remplace par des immu no- globulines intracytoplasmiques prsentes dans les citernes du rticulum endoplas mique granulaire (majoritairement IgG et IgA). Les plasmocytes sont morphologiquement faciles reconnatre : 1) leur forme est ova laire ; 2) leur noyau arrondi, situ en position excentrique, possde une chromatine dispose en grosses mottes la priphrie du noyau (donnant un aspect en rayons de roue) ; 3) leur cy- toplasme comporte deux zones : une petite zone claire, prinuclaire, conte nant les centrio- les entours par un volumineux appareil de Golgi et le reste du cytoplasme, occup par un rticulum endoplasmique granulaire trs dvelopp, avec de nombr eux ribosomes libres (responsables de lintense basophilie du cytoplasme) ; les ci ternes du rticulum granulaire sont parfois distendues par la scrtion dimmunoglobulin es. Les plasmocytes sont rpartis dans les organes lymphodes et hmatopotiques et dans le t issu conjonctif lche. A ltat normal, on nen trouve pas dans le sang ni dans la lymph e. 5.2.4.5 Les lymphocytes T sont impliqus dans limmunit cellulaire

Les lymphocytes T reconnaissent des antignes trangers partiellement dgrads dans les cellules cibles et dont certains de leurs fragments ont ensuite t exposs la surface cellulaire.

Les lymphocytes T expriment sur leur membrane un rcepteur pour les antignes (TCR p our T-Cell Receptor) Les lymphocytes T (de Thymus ) qui acquirent leur immunocomptence dans le thy- mus, sont identifis par les anticorps anti-CD2 et CD3 (marqueurs pan-T ). Au terme de la maturation intrathymique, les lymphocytes T expriment sur leur membrane un rce pteur pour les antignes, appel rcepteur T (ou TCR) compose de deux chanes glycoprotiques (a/b ou g/d). Les diffrents TCR reconnaissent des peptides antigniques prsents la surface dune cellule associs des molcules du complexe majeur dhistocompatibilit (C MH). Les molcules HLA de classe I sont portes par presque toutes les cellules nucles alor s que les molcules HLA de classe II sont exprimes sur les cellules prsentatrices danti g- nes (CPA). Les CPA sont principalement les macrophages activs, les lymphocytes B, les cellules dendritiques folliculaires des centres germinatifs ganglionnaire s (interagissant avec les lymphocytes B), les cellules dendritiques interdigites (comme les cellules de Lan- gerhans de la peau) prsentant les antignes aux lymphoc ytes T, les cellules endothliales. Le TCR est associ la surface du lymphocyte T av ec le complexe CD3 qui assure la trans- duction intracellulaire du signal aprs re connaissance de lantigne par le TCR. Lexpression des corcepteurs CD4 ou CD8 permet didentifier les sous-populations lymp ho- cytaires T (auxiliaires et cytotoxiques) Aprs maturation thymique, les lymphocytes expriment soit le CD4, lymphocytes T au xiliaires (T4 ou Th pour helpers ) qui reconnaissent un antigne associ au CMH de clas se II, soit le CD8, lymphocytes T cytotoxiques (ou T8) qui reconnaissent un anti gne associ au CMH de classe I. Le CD4 est aussi le rcepteur du virus du sida, ce qu i permet ce virus dinfecter les lymphocytes T auxiliaires. Les protines transmembranaires CD4 et CD8 sont des rcepteurs accessoires (ou costi mu- lateurs) qui se lient la partie non variable du CMH et stabilise linteraction TCR/comple- xes peptide-CMH. Ladhsion cellulaire entre le lymphocyte T et la CPA est encore renforce par lassociation de molcules dadhrence accessoires prsentes sur le s deux cellules. Les antignes exognes activent les lymphocytes auxiliaires T4 Les antignes exognes (comme les antignes microbiens), internaliss par endocytose dan s les CPA sont fragments en peptides dont le plus immunogne est coupl une mo- lcule CMH-II et prsent la surface cellulaire. La reconnaissance du complexe peptide exogn e-CMH II par les lymphocytes T4, dclenche une prolifration clonale de lympho- cyte s T4 spcifiques de lantigne reconnu. Ces lymphocytes auxiliaires ne dtruisent pas di rectement les cellules cibles portant les antignes exognes, mais scrtent des mdia- te urs locaux (lymphokines, interleukines ou cytokines) qui stimulent dautres cellul es ef- fectrices (macrophages, cellules B actives) dirige contre le mme antigne. Sel on les cytokines produites, on distingue deux sous-types de lymphocytes T4 : les cellules Th1 qui stimulent les lymphocytes T cytotoxiques spcifiques, et les cel lules Th2 qui stimulent les lymphocytes B, les osinophiles et les mastocytes. Les antignes endognes activent les lymphocytes cytotoxiques T8 Les antignes endognes sont des protines synthtises par la cellule elle-mme, partir de son propre gnome (antigne cancreux) ou dun gnome viral (antigne viral). Les lym- phocy tes T cytotoxiques dtruisent directement les cellules cibles. Un fragment de lanti - gne endogne, synthtis par la cellule, est coupl une molcule CMH-I et prsent la cellulaire. La reconnaissance du complexe peptide endogne-CMH I par les lym- pho cytes T8 spcifiques de lantigne, entrane lautodestruction de la cellule cible par s- c rtion dans lenvironnement cellulaire de molcules induisant lapoptose (comme la perfo rine, le TNFb, les srine protases, les granzymes).

5.2.4.6 Les lymphocytes NK ne sont ni T ni B Les lymphocytes NK ( Natural Killers ) sont des lymphocytes de grande taille, cont enant dans leur cytoplasme des granulations azurophiles. Ils possdent une activit cytotoxique spontane sur des cibles tumorales ou infectes par des virus. Leur mcanisme daction est diffrent d e celui des lymphocytes cytotoxiques T8. Les lymphocytes NK reconnaissent la sur face des autres cellules un double signal : activateur (glycoconjugu membranaire) et inhibiteur (peptide du soi ) de la cytotoxicit. Dans les cellules normales, la reconnaissance dun peptide caractristique du soi- normal inhibe la cytotoxicit. Si une cellule exprime sa surface un peptide tranger ( non-soi sur une cellule infec te par un virus ou soi anormal sur une cellule tumorale), seul le signal ac- tiva teur est mis et la cellule cible est lyse par exocytose de composs cytolytiques.

5.3 Le tissu lymphode

5.3.1 Rpartition du tissu lymphode Le tissu lymphode permet lintgration des interactions cellulaires complexes interve nant dans les rponses immunes. Ce tissu lymphode constitue dune part, les organes l ymphodes centraux ou primaires (moelle osseuse, thymus), dautre part dans les orga nes lymphodes priphriques ou se- condaires, lieux de dveloppement de la rponse immune . Les organes lymphodes priphriques sont soit encapsuls (ganglions lymphatiques, rat e) ragissant aux antignes dorigine tissulaire ou sanguine soit non encapsuls prsents dune manire diffuse dans les muqueuses de lorganisme en particulier la muqueuse dig estive, la muqueuse bronchique, la muqueuse urinaire (MALT : Mu- cosal Associate d Lymphoid Tissue) ragissant aux antignes atteignant la surface des muqueuses. La communication entre ces compartiments du tissu lymphode est le fait dun pool de ly mphocy- tes recirculants.

5.3.2 Les follicules lymphodes Dans tous les cas et lexception du thymus qui constitue un organe lymphode trs part iculier, lorganisation du tissu lymphode comporte toujours une trame de tissu rticu laire dans les mailles de laquelle se situent macrophages, cellules dendritiques et cellules lymphodes, le plus souvent regroupes en follicules. Chez le nouveau-n avant tout contact antignique, il nexiste que des follicules prim aires ; les fol- licules secondaires napparaissant quaprs stimulation antignique. Le s follicules lymphodes se- condaires possdant un centre germinatif sont observs aprs stimulation antignique. Ils contiennent de nombreux lymphocytes B en cours de pr olifration (centroblastes), associs des cellules dendritiques folliculaires prsenta trices dantigne et quelques macrophages associs des lymphocytes T. Les centres germ inatifs sont entours dune couronne de petits lymphocytes de type B. Ces structures ont un rle important dans le dveloppement des rponses immunes impli- quant les lym phocytes B, en particulier dans la mmoire de la rponse mdie par les lymphocytes B qu i parat tre la fonction premire des centres germinatifs. Ainsi les capacits immunologiques dpendant des lments lymphodes sont toujours troiteme nt lies au systme macrophagique qui les entoure. Chapitre 6

Les tissus squelettiques

6.1 Le tissu osseux Le tissu osseux, comme le tissu cartilagineux, est un tissu squelettique , tissu conjonctif spcia- lis, caractris par la nature solide de la MEC. La matrice osseuse a la particularit de se calcifier, ce qui la rend opaque aux rayons X et permet ltu de des os par radiographie. Le squelette a 3 fonctions. 1) Fonction mcanique : le tissu osseux est un des tis sus les plus rsistants de lorganisme, capable de supporter des contraintes mcaniques, donnant los so n rle de soutien du corps et de protection des organes. 2) Fonction mtabolique : l e tissu osseux est un tis- su dynamique, constamment remodel sous leffet des press ions mcaniques, entranant la libra- tion ou le stockage de sels minraux, et assurant ainsi dans une large mesure (conjointement avec lintestin et les reins) le contrle du mtabolisme phosphocalcique. 3) Fonction hmatopoitiq ue : les os renferment dans leurs espaces mdullaires, la moelle hmatopotique, dont l es cellules souches, lorigine des 3 lignes de globules du sang, se trouvent au voi sinage des cellules osseuses. Les cellules stromales de la moelle osseuse fourni ssent un support structural et fonctionnel aux cellules hmatopoitiques. Certaines dentre elles sont des cellules-souches multipotentes susceptibles de se diffrencie r dans de multiples lignages diffrents (fibroblastes, chondrocytes, ostoblastes, a dipocytes).

6.1.1 Le tissu osseux contient 4 types de cellules

Les cellules bordantes, les ostoblastes et les ostocytes sont les cellules ostoform atrices. Les os- toclastes sont ostorsorbants. Les ostoblastes, les ostoclastes et les cellules bordantes de los se trouvent la su rface des plages de tissu osseux, alors que les ostocytes sont situs lintrieur de la matrice osseuse. Contrairement aux cellules ostoformatrices qui drivent de cellul es-souches msenchymateuses pluripotentes, les ostoclastes drivent de la ligne hmatopot que monocytaire (cellule-souche hmatopotique CFU-M). 6.1.1.1 Les ostoblastes Ce sont des cellules ostoformatrices cubiques situes la surface externe et interne du tissu osseux en croissance. Ils sont relis entre eux et avec les ostocytes par des jonctions co mmunicantes. Leur membrane plasmique renferme en abondance de la phosphatase alc aline . Les ostoblastes labo- rent les constituants organiques de la MEC ; de ce f ait, leur cytoplasme est riche en organites im- pliqus dans la synthse protique (rti culum endoplasmique granulaire abondant, appareil de Golgi volumineux). Le deven ir des ostoblastes peut se faire selon 3 voies : 1) transformation en ostocytes en sentourant compltement de MEC, 2) mise au repos sous la forme de cellules bor- da ntes tapissant les surfaces osseuses ou 3) mort par apoptose. 6.1.1.2 Les ostocytes Ce sont des ostoblastes diffrencis, incapables de se diviser, entirement entours par

la MEC osseuse minralise. Les ostocytes sigent dans des logettes (ostoplastes) do part nt des cana- licules anastomoss contennant leurs prolongements cytoplasmiques, fi ns, nombreux, plus ou moins longs, relis entre eux par des jonctions communicante s. Leur corps cellulaire est de plus petite taille que celui des ostoblastes, fus iforme, possdant moins dorganites que les ostoblastes. Les ostocytes, avec des capac its de synthse et de rsorption limites, participent au maintien de la matrice osseus e et contribuent lhomostasie de la calcmie. 6.1.1.3 Les cellules bordantes Les cellules bordantes sont des ostoblastes au repos, susceptibles, sils sont soll icits, de rede- venir des ostoblastes actifs. Elles revtent les surfaces osseuses q ui, un moment donn, ne sont soumises ni formation ni rsorption osseuse. Ce sont de s cellules aplaties et allonges, poss- dant peu dorganites et relies entre elles et avec les ostocytes voisins par des jonctions commu- nicantes. 6.1.1.4 Les ostoclastes

Ce sont des cellules post-mitotiques, trs volumineuses, de 20 100 mm de diamtre, p lurinucles, hautement mobiles, capable de se dplacer la surface des traves osseuses dun site de rsorption un autre. Lorsquil est activ, lostoclaste, cellule ostorsorba dveloppe son appareil lyso- somal et se polarise fortement ; sa membrane plasmiqu e se diffrencie en deux domaines spars par un anneau tanche de jonctions cellule-MEC : un domaine apical qui dveloppe une bordure en brosse au contact de la surface osseuse et un domaine basolatral situ loppos (voir plus loin).

6.1.2 La MEC du tissu osseux est calcifie La MEC de los comporte une partie organique et une phase minrale. 6.1.2.1 La matrice organique La MEC organique est compose de microfibrilles de collagne I, de protoglycanes, dosto pon- tine (reliant lhydroxy-apatite aux cellules osseuses), dostonectine (intervena nt dans la minrali- sation par son affinit pour le collagne I et le calcium), dostoca lcine (marqueur des ostoblastes matures, intervenant dans la minralisation), de si aloprotine osseuse et de thrombospondine (per- mettant lattache des cellules osseu ses la MEC via un rcepteur membranaire de la famille des intgrines). La MEC osseus e contient des cytokines et facteurs de croissance scrts par les ost- oblastes et jo uant un rle fondamental dans la rgulation du remodelage du tissu osseux et de la m inralisation de la MEC osseuse (voir plus loin). 6.1.2.2 La phase minrale Elle est constitue de cristaux dhydroxy-apatite (phosphate de calcium cristallis) e t de carbonate de calcium. Ces cristaux sont visibles en ME entre les fibres de collagne et/ou lintrieur de cel- les-ci, sous la forme de petites aiguilles hexagon ales, denses aux lectrons. Les ions Ca++ et PO43situs en surface des cristaux participent des changes rapides avec le liquide inte rstitiel et donc avec le courant sanguin. Los, qui contient 98 % du calcium de lorganisme, reprsente un rservoir de calcium et joue un rle primordial dans le mtabolisme phosphocalciqu e. La minralisation de la MEC osseuse rend compte de la duret de los.

6.1.3 Compact ou spongieux, le tissu osseux de ladulte est de type lamellaire Chez ladulte, le tissu osseux est dit lamellaire, parce que la matrice osseuse es t dispose en lamel- les superposes o les microfibrilles de collagne sont arranges par alllement selon une direction qui se modifie dans chaque lamelle successive. Chez le ftus et le jeune enfant, ou en cas de frac- ture, ou encore au cours de certa ines maladies, la trame de microfibrilles de collagne produite par les ostoblastes est irrgulire et le tissu osseux est transitoirement non-lamellaire ( tissu osseux tiss ). 6.1.3.1 Os longs, os courts, os plats Les os, principalement constitus de tissu osseux, contiennent galement du tissu hma topotique, du tissu adipeux, des vaisseaux, des nerfs, du tissu cartilagineux et d u tissu conjonctif. Il existe 3 varits anatomiques dos : les os longs (comme le tibia, le fmur), courts (comme les os du carpe) et plats (comme le sternum, les ctes). Sauf au niveau des surfaces articulaires o se trouvent les cartilages articulaires, les os longs, c ourts ou plats, sont entours par le prioste , cons- titu par une couche externe de tissu conjonctif fibreux et par une couche interne contenant les cel- lules ostop rognitrices. La cavit centrale des os longs est borde par lendoste , constitu dune fin e couche de tissu conjonctif contenant des cellules ostoprognitrices et des cellul es bordantes. 6.1.3.2 La plupart des os sont constitus dune zone externe de tissu osseux compact et dune zone interne de tissu osseux spongieux Le tissu osseux compact (ou cortical ou haversien) Il est principalement constitu dostones ou systmes de Havers fait de lamelles osseus es cylindriques disposes concentriquement autour du canal de Havers. Entre les la melles, se situent les ostoplastes contenant le corps cellulaire des ostocytes. Le canal de Havers con- tient des capillaires sanguins et des filets nerveux amylin iques enrobs dun peu de tissu conjonctif lche. Les canaux de Havers sont relis entre eux, avec la cavit mdullaire et avec la surface de los par des canaux transversaux ou obliques, les canaux de Volkmann. Cette disposition confre los compact un maxi mum de rsistance. Entre les ostones se trouvent des lamelles osseuses, vestiges dos tones anciens partiellement rsorbs et cons- tituant les systmes interstitiels. La di aphyse des os longs est borde extrieurement et in- trieurement par des lamelles oss euses circonfrentielles, ralisant le systme circonfrentiel externe et le systme circo nfrentiel interne. Le tissu osseux spongieux (ou trabculaire) Le tissu osseux spongieux sige essentiellement dans les os courts et les os plats (sternum, ailes iliaques) ainsi que dans les piphyses des os longs. Il est form p ar un lacis tridimen- sionnel de spicules ou trabcules de tissu osseux, ramifis et anastomoss, dlimitant un la- byrinthe despaces intercommunicants occups par de la m oelle osseuse et des vaisseaux.

6.1.4 Le remodelage osseux est le fait dune coopration prcise entre les ostoclastes et les ostoblastes

Que ce soit dans los compact ou trabculaire, le tissu osseux est en constant renou vellement. Ce remodelage permanent, dans lequel sintriquent la rsorption et la for mation de tissu osseux, sef- fectue grce des units fonctionnelles de remodelage o le s ostoclastes et ostoblastes sont troitement associs. Los est ainsi form de millions d nits fonctionnelles de remodelage, mo- biles et progressant dans le tissu osseux (les ostoclastes tant lavant et les ostoblastes lar- rire). Les activits mtaboliq ces 2 populations cellulaires sont couples dans lespace et dans le temps. Un cycle de remodelage dure environ 4 mois chez ladulte, la phase de formation tant plus l

ongue que celle de rsorption. 6.1.4.1 Phase dactivation

La surface osseuse est normalement recouverte de cellules bordantes qui empchent laccs des os- toclastes la MEC. Sous laction de facteurs ostorsorbants (hormone parat yrodienne ou PTH, vitamine D3 et prostaglandine Pg E2), les cellules bordantes se rtractent et librent laccs aux ostoclastes qui peuvent adhrer la matrice osseuse. L lux des ostoclastes est favoris par la prolifration de leurs prcurseurs mdullaires so us leffet de plusieurs molcules, notamment du M-CSF. Les ostoclastes proviennent de la fusion de prostoclastes issus de prcurseurs mono- nucls, eux-mmes issus des monocy tes sous laction du M-CSF scrt par les ostoblastes, no- tamment en rponse la vitamine D3 et la PTH. Les ostoblastes sont galement indispensables la mise en place du programme de diffr enciation des prcurseurs ostoclastiques en prostoclastes puis en ostoclastes et enfin en ostoclastes ac- tifs. La mise en place du programme de diffrenciation des prcur seurs ostoclastiques en prost- oclastes puis en ostoclastes est principalement sous la dpendance de 3 molcules : ODF (Osteoclast Differentiating Factor), O PG (ostoprotgrine) et RANK (receptor activator of nu- clear factor kappa B). ODF, situ dans la membrane plasmique des ostoblastes, peut se lier OPG, scrte par les ostoblastes ou RANK, rcepteur situ dans la membrane des prcurseurs ostoclastiques. La l iaison ODF/RANK stimule la diffrenciation ostoclastique tandis que la liaison ODF/ OPG lin- hibe. Chez la souris, linvalidation gnique dOPG entrane une rduction de la masse osseuse (o stopo- rose par hyperostoclastose) alors que son hyperexpression chez des souris t ransgniques entrane une augmentation de la masse osseuse (ostoptrose par absence dosto clastes). A linverse, tou- jours chez la souris, linvalidation du gne RANK ou du gne ODF entrane une ostoptrose s- vre due labsence dostoclastes. Ainsi ODF apparat co facteur essentiel de lostoclastognse, processus dans lequel les ostoblastes (producte urs notamment de M-CSF et dODF) sont indispensables. 6.1.4.2 Phase de rsorption du tissu osseux

Chaque ostoclaste devenu actif se fixe la matrice sur le lieu de rsorption et la p hase de rsorp- tion de la matrice commence. Elle seffectue en deux tapes successive s : 1) dissolution de la phase minrale par acidification du compartiment de rsorpt ion, 2) dgradation de la matrice organique sous laction denzymes protolytiques lysos omales. Les caractristiques morphologiques des ostoclastes tmoignent de leur rle de destruct ion du tis- su osseux (ostoclasie). La constitution dun anneau priphrique de scellag e permet lisolement dune chambre de digestion tanche (ou lacune de Howship) entre l a membrane de lostoclaste et la surface de la MEC osseuse. Cet anneau circonfrentie l de scellage est fait dune multitude de jonctions cellules-MEC ponctuelles ou po dosomes . Chaque podosome est fait dune chane de mo- lcules de la MEC (ostopontine, sialoprotines osseuses, thrombospondine, vitronectine et colla- gne I), de molcules transmembranaires (intgrines aV-b3 et a2-b1), puis de molcules intracytoplasmique s (taline, vinculine, etc.) lies aux faisceaux de filaments dactine du cytosque- l ette de lostoclaste disposs perpendiculairement la surface cellulaire et entre lesq uels se logent des invaginations tubulaires de la membrane plasmique. La rgion cy toplasmique dans laquelle se situe cet anneau dactine (dite zone claire ) est dpour vue dorganites de synthse. Le domaine apical de la membrane plasmique de lostoclaste formant le toit de la ch ambre de di- gestion se diffrencie en une bordure en brosse au niveau de laquelle se trouve une pompe protons qui, grce lactivit de lanhydrase carbonique II, scrte des ions H+ qui par la ification quils entranent dissolvent la phase minrale de la MEC du plancher de la chambr

e. Cest ga- lement au niveau de la bordure en brosse que les nombreux lysosomes de la cellule dversent leur contenu enzymatique (hydrolases acides et notamment pho sphatase acide, cathepsine, collagna- ses, mtalloprotinases) destin digrer les consti tuants organiques de la MEC osseuse. La mor- phologie des ostoclastes reflte leur degr dactivation : la vitamine D et la PTH, qui stimulent lactivit des ostoclastes, a ugmentent leur bordure en brosse, alors que la calcitonine et la Pg E2, inhibant leur activit, la diminue. Des rcepteurs la calcitonine et des rcepteurs la prostag landine PgE2 sont prsents dans le domaine baso-latral de la membrane plasmique des os toclastes. Au total, les hormones comme la PTH et la VitD3, ainsi que certaines c ytokines (IL-1, TNFalpha) induisent la scrtion par les ostoblastes de facteurs molcu laires locaux (M-CSF, IL-6, IL-11, Pg E2). Ces derniers, lexception du M-CSF, agi ssent en retour sur lostoblaste pour induire lex- pression du facteur membranaire O DF. Ce facteur interagit avec son rcepteur RANK port par le prcurseur ostoclastique et dclenche le programme de diffrenciation cellulaire qui aboutit lactivation de los toclaste. 6.1.4.3 Phase dinversion Quand les ostoclastes ont fini de creuser une lacune, ils meurent par apoptose et sont remplacs par des macrophages qui lissent le fond de la lacune. 6.1.4.4 Phase de formation de tissu osseux Elle comporte 2 temps, au cours desquels les ostoblastes jouent le rle majeur : 1) la production de MEC par les ostoblastes, 2) la minralisation de cette MEC. La production de MEC est lie la prolifration et lactivation des ostoblastes Quand la rsorption osseuse est termine, les cellules ostoprognitrices prsentes la sur - face de la matrice rode, au fond de la lacune (appel ligne cmentante) se divisent et se diffrencient en ostoblastes. Ces ostoblastes synthtisent une nouvelle MEC non encore minralise (substance pr-osseuse ou tissu ostode ) qui comble la lacune. Plusieurs hormones, notamment les strognes, les andrognes et la vitamine D stimulen t la production de matrice osseuse. De nombreux facteurs de croissance scrts par le s os- toblastes, stocks dans la matrice osseuse, puis relargus sous forme active lo rs de la r- sorption, agissent dans le mme sens : FGF2, TGFb, IGF (dont la synthse est stimule par lhormone de croissance GH) et les BMP (Bone Morphogenetic Protein) . Les BMP jouent un rle essentiel dans lostognse par des effets combins sur le recrute ment, la prolif- ration et la diffrenciation des ostoblastes et de leurs prcurseurs. Chez lhomme, il a t isol 8 gnes codant pour 8 BMP (1 8). Les BMP (sauf BMP-1 qui ne prsente pas de proprits osto-inductrices) font partie de la superfamille des TGF-b. A linverse, IL1 et TNF-alpha inhibent la production de matrice osseuse par les os toblastes. La minralisation se fait, dans un deuxime temps, au niveau du front de minralisatio n, la jonction entre tissu ostode et tissu minralis La phosphatase alcaline , enzyme synthtise par les ostoblastes, hydrolyse les ester s phosphoriques inhibiteurs de la minralisation. Les ostoblastes produisent des vsi cules matricielles, rservoirs de phosphatases alcalines et dions, qui, dverses dans le milieu extracellulaire initieraient la minralisation du tissu ostode en favorisa nt les concentra- tions locales en ions calcium et phosphates. Lostocalcine augmente la concentration locale de calcium extra-cellulaire et le fi xe sur le tissu ostode. La vitamine D3 joue un rle important en favorisant labsorpti on intestinale du calcium et sa fixation sur los. La carence en vitamine D3 entran e une augmentation de la scrtion de PTH qui provoque une dminralisation des os qui sa ppauvrissent en cal- cium et en phosphore (rachitisme chez lenfant, ostomalacie ch ez ladulte). 6.1.5 Capital osseux et perte osseuse

Jusqu lge de 20 ans, la masse osseuse augmente progressivement. A cet ge, le capital osseux est constitu ; il reste stable pendant quelques annes, puis diminue lenteme nt avec lge, chez la femme comme chez lhomme, les mcanismes de destruction du tissu osseux lemportant sur les mcanismes de construction. Chez la femme, la perte osseu se sacclre nettement la mnopause, du fait de la carence en strognes. Cette ostoporos ugmente considrablement le risque de fracture et justifie le plus souvent un trai tement strognique substitutif prolong des femmes aprs la mnopause.

6.1.6 Los peut se rparer spontanment aprs une fracture Une fracture, comme toute blessure, entrane une destruction tissulaire et une hmor ragie. Des si- gnaux chmo-attractants et dangiognse attirent sur place les cellules impliques dans les phases initiales du processus de rparation. Les granulocytes ne utrophiles et les macrophages liminent localement les dbris cellulaires. Les cellu les msenchymateuses et les capillaires sanguins proli- frent et permettent la form ation de tissu conjonctif puis de tissu cartilagineux qui forment un cal et comb lent le foyer de fracture. Paralllement, les cellules ostoprognitrices (du prioste e t de lendoste) prolifrent et se diffrencient en ostoblastes qui fabriquent du tissu ostode qui pro- gressivement remplace lbauche cartilagineuse du cal qui se calcifie. Le cal osseux est ensuite re- model par les ostoclastes pour restaurer la forme o riginale de los fractur. Ces diffrents vnements cellulaires sont sous la dpendance de facteurs molculaires impliqus dans la forma- tion des os au cours du dveloppement ( en particulier, le TGF-b, les BMP et les IGF). La rparation dune fracture est favorise par limmobilisation des fragments osseux (plt re, osto- synthse chirurgicale) et dure normalement 6 12 semaines selon le type de fracture.

6.2 Le tissu cartilagineux

6.2.1 Le tissu cartilagineux, communment appel cartilage , se caractrise par 5 points essentiels

6.2.1.1 Cest un tissu conjonctif spcialis de consistance dure Comme pour le tissu osseux, la consistance du tissu cartilagineux est dure, mais contrairement los, le cartilage nest pas minralis (sauf exception que nous verrons au cours de lossification). 6.2.1.2 Il est form de chondrocytes et de MEC Le tissu cartilagineux est form dun seul type cellulaire, les chondrocytes, rpartis dans une MEC abondante et complexe. Les chondrocytes Les chondrocytes sont des cellules volumineuses, arrondies, situes dans de petite s logettes (ou chondroplastes) quelles emplissent compltement ltat vivant. Ils possde nt de nombreux rcepteurs en particulier pour lhormone de croissance (GH), les vita mines A et D, la parathormone, les glucocorticodes et les strognes. Les chondrocyte s assurent la synthse et la dgradation de tous les composants de la MEC cartilagin euse. La MEC

Les molcules de la MEC La haute teneur en eau de la MEC (70 80 % de son poids) permet la dformabilit des cartilages. Parmi les diffrents collagnes prsents dans la MEC cartilagineuse, le collagne II est de loin le plus abondant. Les protoglycanes sont principalement reprsents par laggrcan , qui donne au car- tila ge ses proprits mcaniques de compressibilit et dlasticit. Les glycosamino- glycanes (c ondrotine-sulfate et kratane-sulfate) des protoglycanes sulfats sont riches en radic aux acides trs hydrophiles, responsables de la teneur en eau et de llasticit du cart ilage. Ces protoglycanes sont associs lacide hyaluronique et la COMP (Cartilage Oli gomeric Matrix Protein). Enfin, la MEC contient des enzymes protolytiques permettant la dgradation de la ma trice au cours de son renouvellement (mtalloprotinases matricielles et aggrca- nase s) et de nombreux facteurs de croissance et cytokines produits par les chondrocy - tes et/ou provenant dautres cellules (monocytes/macrophages, synoviocytes). Selon la richesse de la MEC en fibres collagnes ou lastiques on distingue 3 varits histologiques de cartilage. le cartilage hyalin Les microfibrilles de collagne, peu abondantes et de petit calibre, disposes en un rseau mailles larges, ne sont pas visibles en MO, do laspect amorphe et homogne de l a MEC du cartilage hyalin. le cartilage fibreux (ou fibro-cartilage) Contrairement au prcdent, sa MEC contient dpais faisceaux de fibres de col- lagne de type I. Ces fibres sont bien visibles par une coloration telle quun tri- chrome q ui permet de montrer que les faisceaux sont orients le long des lignes de force ( contraintes mcaniques que subit le tissu). le cartilage lastique Le cartilage lastique se distingue par une densit cellulaire beaucoup plus im- por tante que les autres types de cartilage et par la prsence de nombreuses fibres las tiques (mises en vidence par lorcine ou la fuchsine-rsorcine). Ces fibres lastiques s ont disposes en un rseau tridimensionnel permettant leur dforma- tion et la restitu tion de leur forme initiale. Le concept de chondrone Un chondrone, constitu par un chondrocyte et son microenvironnement pricellulaire, re- prsente lunit structurale, fonctionnelle et mtabolique des cartilages hyalins. Autour du glycocalyx de la membrane plasmique du chondrocyte, se trouve une couc he pricellulaire de MEC riche en collagne VI et en collagne IX. Les intgrines situes dans la membrane plasmique des chondrocytes servent de rcepteurs pour de nombreus es macromolcules de la MEC et jouent un rle majeur dans les interactions cellule-M EC et dans la transduction des signaux mcaniques, indispensables la vie et la fon ction des chondrocytes. 6.2.1.3 Le cartilage est dpourvu de vascularisation et dinnervation Fait unique par rapport tous les autres tissus de lorganisme, le tissu cartilagin eux est totalement dpourvu de vaisseaux sanguins et lymphatiques ainsi que de ner fs. La plupart des cartilages sont nourris par diffusion travers la matrice, partir des capillaires de la couche interne du prichondre . Tous les cartilages de lorganisme adulte, lexcept ion des car- tilages articulaires, sont recouverts de prichondre, tissu conjoncti f form de fibroblastes et dun rseau dense de fibres de collagne. Contrairement au ca rtilage, le prichondre est un tissu vascu- laris qui joue un rle dans la nutrition, la croissance et la rparation du cartilage. Les cellules m- senchymateuses de la couche interne du prichondre peuvent se transformer en chondrocytes qui produisen t la matrice. Cette croissance appositionnelle (ou prichondrale) soppose la croiss an- ce interstitielle (rare chez ladulte) qui se fait par mitoses des chondrocyte

s. Si les mitoses se font suivant une seule direction, on aboutit un groupe de c hondrocytes disposs en ligne (groupe iso- gnique axial) ; si les mitoses se succden t dans des directions diverses, on aboutit un groupe de chondrocytes disposs circ ulairement (groupe isognique coronaire). 6.2.1.4 Le cartilage revt une grande diversit Sous la dnomination apparemment uniforme de cartilage , on distingue des cartilage s trs dif- frents sur le plan topographique, molculaire et fonctionnelle les cartilages du systme osto-articulaire Des cartilages hyalins font partie des pices osseuses : modles cartilagineux des bauches osseuses du squelette ftal cartilages de conjugaison (cf. plus loin) cartilages articulaires (cf. plus loin) cartilages costaux (au niveau de linsertion des ctes sur le sternum) Des cartilages fibreux sont situs au voisinage de pices osseuses :

disques intervertbraux symphyse pubienne mnisques du genou insertion du tendon dAchille les cartilages de la sphre ORL et des voies ariennes cartilages hyalins prsents au niveau : fosses nasales, cartilages thyrode, cricode et arythnode du larynx, anneaux trachaux et cartilages bronchiques cartilages lastiques prsents au niveau : nez, pavillon de loreille, conduit auditif externe, trompes dEustache, piglotte

6.2.1.5 Certains cartilages sont plus concerns que dautres par la pathologie Chez lhomme, les cartilages de la sphre ORL et de larbre tracho-bronchique ne font p as vrai- ment parler deux. Les fibrocartilages sont sujets des pathologies relativement frquentes (hernies d iscales, fractu- res des mnisques). Par contre, les cartilages articulaires et de croissance prsentent un intrt mdical p rpondrant. Les lsions des cartilages articulaires sont frquentes, responsables des o stoarthrites , notam- ment de la hanche (coxarthrose) ou du genou (gonarthrose). Labsence de prichondre leur ni- veau (cf. plus loin) fait quen cas dusure de ce cart ilage, les chondrocytes, dont les capacits de division sont faibles chez ladulte, ne peuvent tre remplacs et la rparation du cartilage est im- possible. Les cartilages de conjugaison, responsables de la croissance en longueur des os (cf. plus loin) sont le sige de multiples pathologies, en particulier dorigine gntiq ue.

6.2.2 Le cartilage articulaire

Les cartilages articulaires sont localiss lectivement au niveau des articulations mobiles. La face articulaire forme linterface entre les deux pices osseuses. Ainsi , les cartilages articulaires assu- rent le jeu et la mobilit de larticulation. La face oppose larticulation (ou face abarticulaire) est enchsse dans los avec une calc ification de la MEC cartilagineuse situe linterface osseuse. Enfin, latralement, lar ticulation est limite par le tissu synovial. La disposition des chondrocytes dans ce type de cartilage est particulire. Les ce llules superficiel- les (au voisinage de larticulation) sont aplaties et parallles la surface articulaire ; les cellules profondes sont plus arrondies et prennent une disposition en colonnes perpendiculaires la surface articulaire. Les cartilages articulaires empchent, avec le liquide synovial, le frottement des surfaces osseuses. Le cartilage articulaire doit tre rigide mais aussi dformable pour assurer une rpartition harmo- nieuse des pressions qui sexercent sur larticula tion. La disposition des fibres de collagne II en arcades ou ogives contribue gra ndement cette rpartition. Dpourvus de prichondre, les cartilages articulaires se nourrissent essentiellement partir du liquide synovial, et, pour une part, grce des changes avec los sous-chondral.

6.2.3 Le cartilage de conjugaison (ou de croissance) Les cartilages de conjugaison interviennent, au cours de lenfance et de ladolescen ce, dans la croissance des os longs, donc dans la taille du futur adulte. Lossifi cation endochondrale est un processus complexe imparfaitement connu, intervenant chez le ftus et tout au long de la croissan- ce. Jusqu lge adulte, la croissance en longueur des os seffectue grce la prolifration des car- tilages de conjugaison suiv ie dune ossification endochondrale. Ce type dossification soppose lossification de m embrane , beaucoup plus simple, se rsumant la diffrenciation, au sein dun tissu con jonctif, dostoblastes partir de cellules souches msenchymateuses. 6.2.3.1 Le cartilage de croissance est organis en colonnes Le cartilage de croissance est form de couches successives individualisables en M O. La zone du cartilage hyalin la plus loigne du front dossification constitue une rser ve de chondrocytes au repos. Les cartilages de conjugaison sont fertiles sur leur versant diaphysaire, o se pr oduisent de nombreuses mitoses des chondrocytes. La prolifration des chondrocytes permet la form ation de colon- nes verticales (groupes isogniques axiaux du cartilage sri ). Les c hondrocytes de forme arrondie deviennent progressivement de plus en plus aplatis . Puis, le volume des chondrocytes augmente condidrablement. Cette couche prend le nom de cou- che hypertrophique dans laquelle les chondrocytes synthtisent du coll agne spcifique de type X et de la phosphatase alcaline concentre dans des vsicules m atricielles qui sont libres dans la matrice extra-cellulaire. La phosphatase alcal ine permet la libration de phosphate inorganique qui se lie au calcium pour forme r des cristaux dhydroxy-apatite, au niveau de la zone de cartilage calcifi . Paral llement, les chondrocytes hypertrophiques dgnrent et meurent par apoptose. 6.2.3.2 La transition entre le tissu cartilagineux et osseux est abrupte au nive au du front de minralisation Dans les chondroplastes laisss vide par lapoptose des chondrocytes et la phagocyto se de leurs restes par des ostoclastes, des capillaires sanguins venus de los sous

-chondral pntrent et am- nent des cellules msenchymateuses indiffrencies issues de la moelle osseuse. Ces cellules se diffrencient en ostoblastes ; ces derniers laborent du tissu osseux qui progressivement remplace le tissu cartilagineux. Ainsi, au fur et mesure que les cartilages de conjugaison saccroissent par prolifration des chondrocytes, ils sont remplacs par du tissu osseux. 6.2.3.3 GH et les strodes sexuels agissent sur la croissance des os Pendant toute la priode de croissance staturale post-natale, la croissance en lon gueur des os longs est sous la dpendance de facteurs hormonaux agissant sur les c artilages de conjugaison, au premier rang desquels se situent IGF1 (dont lhormone de croissance GH stimule la pro duction par le foie) et les strodes sexuels, andrognes et strognes, ce qui explique l a pousse de croissan- ce au moment de la pubert. Quand tous les cartilages de conj ugaison ont t remplacs par du tissu osseux et quil ne reste plus de chondrocytes sus ceptibles de se diviser, la croissance en longueur des os longs est termine et la taille dfinitive de lindividu est atteinte. 6.2.3.4 Le contrle molculaire de lossification endochondrale commence tre connu

La squelettognse des vertbrs requiert une transition coordonne entre la chondrognse et los- tognse. Les chondrocytes hypertrophiques du cartilage de conjugaison jouent un rle central dans cette transition. Diffrents facteurs de transcription dclenchent la diffrenciation des chondrocytes d u cartilage s- ri en chondrocytes hypertrophiques-scrteurs dindian hedgehog (ihh). Ih h agit sur les cellules ostoprognitrices et dclenche leur diffrenciation en ostoblast es. En rtro-action, Ihh induit ga- lement la scrtion par les chondrocytes de PTHrP ( Parathormone-related peptide) qui stimule la prolifration des chondrocytes du car tilage sri et inhibe leur diffrenciation en chondrocytes hy- pertrophiques. Les chondrocytes hypertrophiques scrtent galement du VEGF qui promeut la noangiognse. Les vaisseaux sanguins envahissent le cartilage hypertrophique et permettent des phagocytes daccder aux chondrocytes hypertrophiques morts dapoptose pour liminer le s restes. Les osto- blastes peuvent alors venir dposer de la MEC osseuse le long d es traves rsiduelles de cartilage calcifi. Chapitre 7

Le systme nerveux. Les neurones

7.1 Le systme nerveux

Le tissu nerveux, substratum histologique du systme nerveux (SN), est spcialis dans la conduc- tion, la transmission et le traitement des informations. Prsent dans toutes les rgions du corps, il est - avec le systme hormonal et le monde des cytok ines - lun des trois grands moyens de com- munication de lorganisme. Dun point de vue anatomique, il est commode de distinguer au sein du tissu nerveu x, ce qui appartient au systme nerveux central (SNC) de ce qui appartient au systme nerveux pri phrique (SNP), tout en se souvenant que ces distinctions sont arbitraires et que le SN forme un tout qui, in vivo, nest pas dcoup en organes spars. Le SNC (ou nvraxe), concentr lintrieur du crne et de la colonne vertbrale qui le protgent, est constitu haut en bas par lencphale (cerveau, tronc crbral - pdoncules, protubrance et bulbe -

et cervelet) prolong par la moelle pinire. Le SNP, en parfaite continuit avec le SNC , est form par les ganglions et les nerfs priphriques qui irradient du nvraxe vers t ous les points de lorganisme, assurant lacheminement des informations vers le SNC et celui des ordres du SNC vers les effecteurs priphriques. Dun point de vue physiologique, on distingue volontiers dans lensemble du SNC et S NP ce qui appartient la vie de relation et ce qui appartient la vie vgtative (systme nerveux vgtatif ou autonome : SNV ou SNA) ; on a tendance actuellement isoler galement un S N intestinal ou SN entrique (SNE). Mais, l encore, ces distinctions arbitraires ne remettent aucunement en cause lunicit du SN. Dun point de vue histologique, llment constitutif de base du tissu nerveux est le ne urone.

7.2 Les neurones Les neurones (ou cellules nerveuses) sont des cellules hautement diffrencies, spcia lises dans la communication intercellulaire. Ils reoivent, traitent et transmetten t des informations (des si- gnaux). Chez ladulte, les neurones matures ne se reno uvellent pas, car ce sont des cellules horscycle qui ne se divisent pas. Les cellules neuro-sensorielles olfactives font ex ception : elles se re- nouvellent pendant toute la vie partir de cellules-souche s situes dans la couche basale de lpi- thlium olfactif. De nombreux travaux insisten t actuellement sur lexistence dans le cerveau adulte dune population de cellules-s ouches capables de se diffrencier en neurones et en cellules gliales. Leur rle et leur importance ne sont toutefois pas encore clairement tablis dans lespce humaine. Un neurone seul, isol, na pas de signification. La fonction du systme nerveux (SN) implique que les neurones communiquent entre eux, au niveau des synapses, ralisa nt ainsi des chanes, des bou- cles, des circuits, des rseaux nerveux extraordinair ement compliqus.

7.2.1 La fonction des neurones est indissociable de leur forme

7.2.1.1 Le neurone comprend un corps cellulaire, des dendrites et un axone Dlimite par sa membrane plasmique, la cellule nerveuse est constitue par un corps c ellulaire (ou soma ou prikaryon) do partent des prolongements (ou neurites) de deux types, les dendri- tes et laxone, qui diffrent par de nombreux caractres. Les dend rites, habituellement multiples, et toujours trs courts, conduisent linflux nerveu x (ou signal nerveux) vers le corps cellulaire, alors que laxone, toujours unique , parfois trs long (pouvant atteindre 1 mtre), conduit linflux nerveux partir du co rps cellulaire et en sen loignant, jusqu ses cibles. 7.2.1.2 Mais les diffrences dun neurone lautre sont nombreuses Selon la disposition gnrale des prolongements par rapport au corps cellulaire , on dis- tingue des neurones unipolaires (qui nont quun seul prolongement), bipol aires (qui ont un prolongement affrent et un prolongement effrent), pseudo-unipola ires (ayant un prolonge- ment unique qui se bifurque distance du corps cellulair e en un prolongement affrent et un prolongement effrent) ou multipolaires (qui ont des prolongements multiples : un seul axo- ne, mais de nombreux dendrites). Selon la forme du corps cellulaire, on reconnat des neurones toils, fusiformes

, cniques, polydriques, sphriques, pyramidaux (selon leur volume, on distingue les cellules pyramida- les en petites, moyennes, grandes ou gantes). Selon lorganisation dans lespace des ramifications dendritiques on distingue des neu- rones isodendritiques, (divergence des dendrites dans toutes les direct ions), allodendriti- ques (asymtrie limite de larbre dendritique) ou idiodendritiqu es (organisation spcifique de larbre dendritique). La longueur de laxone diffre dans les neurones de Golgi type I (neurones de p rojection) qui ont un axone long - pouvant atteindre plus dun mtre - et dans les neurones de Golgi type II (neurones dassociation) dont laxone, court, ne sort pas des environs immdiats du corps cellulaire. 7.2.2 La structure des neurones est caractristique

7.2.2.1 Le noyau, volumineux et sphrique, contient un gros nuclole La plupart des neurones possdent, au milieu de leur corps cellulaire, un noyau un ique, volumi- neux, sphrique, clair, chromatine disperse, avec un gros nuclole, arr ondi, dense, bien visible en MO. 7.2.2.2 Le cytoplasme est riche en organites, mais leur rpartition nest pas homogne Lappareil de Golgi, habituellement volumineux, est situ dans le corps cellulaire, en position juxta-nuclaire Les corps de Nissl se situent dans le corps cellulaire et ventuellement dans les dendrites Lexamen en MO de prparations colores par des bleus basiques montre que le cytoplasme du corps cellulaire neuronal et de la partie proximale des dendrites contient un matriel in- tensment basophile rparti de faon variable et se prsentant s ous forme de blocs assez vo- lumineux ou au contraire dun fin semis de granulatio ns. Ces corps de Nissl correspondent, en ME, des amas de citernes de rticulum end oplasmique granulaire entre lesquels se trouvent de nombreux ribosomes libres so uvent arrangs en petites rosettes de 5 6 grains (polysomes). Labondance de cet erg astoplasme est le tmoin de limportance des synth- ses protiques de la cellule nerveu se. Prsents galement dans les dendrites, les corps de Nissl sont par contre totalement absents de laxone et de son cne dimplantation. Les mitochondries et le cytosquelette sont ubiquitaires, dans tout le cytoplasme neuronal Les mitochondries sont nombreuses et rparties dans le corps cellulaire, les de ndri- tes et laxone Le cytosquelette est particulirement riche. Prsent dans le corps cellulaire, le s den- drites et laxone, le cytosquelette est compos de microfilaments dactine, de fila- ments intermdiaires (constitus de protines de neurofilaments) et de microtubu les. Les microtubules sont indispensables la ralisation du flux axonal (ou transp ort axonal) qui permet les transports bidirectionnels dorganites (mitochon- dries , vsicules synaptiques, lysosomes), de canaux ioniques, de neurotransmetteurs et neuromodulateurs, doligomres des protines du cytosquelette, de molcules di- verses e ntre le corps cellulaire et les extrmits axonales. Les synthses protiques ont lieu d ans le corps cellulaire du neurone et ne peuvent se produire dans laxone. Ainsi, les produits nouvellement synthtiss doivent cheminer le long de laxone pour per- me ttre le maintien de lintgrit de la terminaison nerveuse qui est parfois trs loi- gne d u site du corps cellulaire. On distingue un flux axonal antrograde (rapide ou len t) allant du corps cellulaire vers la priphrie et un flux axonal rtrograde chemi- n ant en sens inverse. Le flux axonal rapide antrograde est assur par les kinsines qu i se lient aux organites transporter et aux microtubules axonaux. Le flux axonal rtro-

grade est assur par les dynines cytoplasmiques qui ralisent comme prcdemment un pont protique entre lorganite et les microtubules. Dans les deux cas, le mouve- ment es t gnr par lactivit ATPasique de ces molcules. Les mcanismes du flux axonal lent sont m l connus. Les autres organites En plus des principaux organites prcdemment dcrits, on trouve encore dans le cytopl as- me neuronal du rticulum endoplasmique lisse, des lysosomes, des amas de lipof uscine (pigment jaune-brun dont labondance augmente avec lge). Les neurones adultes ne pos- sdent habituellement pas de centrosome. Les cas particuliers Les neurones pigments du tronc crbral contiennent dans leur cytoplasme des grain s de neuro-mlanine. Les neurones neuro-scrtoires, situs dans lhypothalamus, renferment des vsicu- les de scrtion, arrondies, denses, entoures dun halo clair, contenant des neuro-hor- mon es. Celles-ci sont dverses dans la circulation sanguine et agissent distance sur d es cellules-cibles de nature diverse (cf. chapitres 2 page 27 et 3 page 41).

7.2.3 La membrane plasmique neuronale est le sige des synapses

Les synapses sont des zones spcialises de contact membranaire permettant la transm ission de linflux nerveux dun neurone un autre neurone ou dune cellule rceptrice un neurone ou dun neurone une cellule effectrice. Les synapses lectriques sont des jonctions communicantes assurant le couplage lect rotonique des deux neurones quelles relient ; a diffusion lectrotonique de linflux nerveux y est passive, bi- directionnelle, trs rapide, sans fatigabilit, Dans la pratique courante, le terme de synapse dsigne en fait uniquement les syna pses chimiques, au niveau desquelles la transmission de linflux nerveux se fait de faon unidirecti onnelle par lin- termdiaire de molcules de signalisation ou neurotransmetteurs (ou mdiateurs chimiques). Les synapses ne sont pas visibles en MO. Leur identification et leur tude morphol ogique ncessite la ME. Chaque synapse comporte un lment prsynaptique et un lment post-synaptique spars par un fente synaptique comprise entre la membrane prsynaptique et la membrane postsyna ptique. Aprs avoir intgr les informations quil a reues, le neurone y rpond dune faon voque en librant dans la fente synaptique un ou plusieurs neurotransmetteurs cont enus dans des vsicules synaptiques. Ces molcules agissent directement sur le neuro ne post-synaptique. 7.2.3.1 Llment pr-synaptique renferme les vsicules synaptiques contenant les neurotra nsmetteurs En dehors des mitochondries et du cytosquelette, les deux constituants les plus importants de llment prsynaptique sont les vsicules synaptiques (dites aussi vsicules prsynaptiques) et lpaississement de la membrane prsynaptique. Le feuillet interne de la membrane prsyn aptique apparat en effet plus pais et plus dense aux lectrons que le reste de la me mbrane plasmique du neurone. Cette densification membranaire correspond une stru cture complexe appele grille pr- synaptique, faite de larrangement rgulier, trigonal , de projections denses relies par de fins mi- crofilaments et circonscrivant ain si des emplacements o les vsicules synaptiques peuvent se loger individuellement. De petites dpressions (synaptopores) visibles la face externe de la mem- brane prs ynaptique senfoncent en regard des emplacements vsiculaires situs sur lautre face de la membrane.

Les vsicules synaptiques peuvent tre classes selon leur taille, leur forme, la dens it de leur con- tenu et surtout la nature des neurotransmetteurs quelles dversent d ans la fente synaptique. Les tudes en immunocytochimie et en hybridation in situ ont bien montr que la co-localisation de dif- frents neurotransmetteurs et/ou neur omodulateurs dans une mme synapse est frquente.

Les petites vsicules synaptiques renferment des neurotransmetteurs classiques Elles sont groupes prs des zones actives de la membrane prsynaptique. Aprs leur exoc ytose, elles sont recycles et remplies localement. Leur membrane est riche en syn ap- tophysine, protine transmembranaire majeure des petites vsicules synaptiques d u SNC et du SNP ainsi que des cellules neuroendocrines. Ces vsicules ne contienne nt pas de pro- tines solubles du type de la chromogranine. On distingue 3 varits de petites vsicules synaptiques : 1) les petites vsicules syna ptiques sphriques centre clair ont un contenu transparent aux lectrons, fait dactylcholine, dacides amins excitateurs (glutamate ou aspartate) et/ou de purines (ATP, a dnosine) ; 2) les petites vsicules synaptiques sphriques centre dense renferment de s amines biognes (catcholamines [noradrnaline, adrnaline, dopamine], srotonine, hista mine) et/ou des purines ; 3) les petites vsicules synaptiques ovalaires centre cl air contiennent souvent des neurotransmetteurs inhibiteurs comme le GABA (acide gamma- amino-butyrique) ou la glycine. Le cycle des petites vsicules synaptiques dans la terminaison nerveuse requiert s uccessivement : 1) le remplissage des vsicules avec le neurotransmetteur, 2) la t ransloca- tion des vsicules vers les zones actives de la membrane prsynaptique, 3) larrimage des vsicules la membrane plasmique prsynaptique, 4) la fusion des membra nes avec ouver- ture de pores de fusion, 5) la libration du neurotransmetteur par exocytose dans la fen- te synaptique, 6) le recyclage membranaire des vsic ules. La fusion des vsicules synaptiques avec la membrane plasmique et lexocyt ose du neurotransmetteur sont dclen- ches par larrive du potentiel daction (influx ne rveux) qui, lorsquil atteint lextrmit synaptique, entrane la dpolarisation de la membr ane prsynaptique et, par voie de cons- quence, louverture des canaux calciques volt age-dpendants situs dans cette membrane et donc lentre de Ca++ dans la terminaison prsynaptique. Le mcanisme intime par lequel le neurotransmetteur est libr dans la fente synaptiqu e r- pond la description gnrale du phnomne dexocytose qui a t expose dans le chapi 3 page 41. Le rle majeur est donc dvolu au complexe form par linteraction des protine s cytoplasmiques NSF et SNAPs avec les glycoprotines membranaires v-SNAREs et t- SN AREs. La synaptotagmine (calmodulin-binding protine transmembranaire prsente dans toutes les vsicules synaptiques) joue un rle majeur dans le dclenchement du processus dexocytose par le Ca++ entr dans la cellule. Les grandes vsicules synaptiques centre dense renferment des neuropeptides, ventue llement associs des neurotransmetteurs classiques Les grandes vsicules synaptiques centre dense sont sphriques, dun diamtre suprieur c lui des petites vsicules synaptiques et contiennent en leur centre un grain dense aux lectrons spar de la membrane par un halo clair. Elles sont produites dans le c orps cellu- laire au niveau de lappareil de Golgi. Elles contiennent des neurohor mones ou des neuro- peptides, ventuellement associs des neurotransmetteurs classiq ues. Elles contiennent galement des protines solubles du type de la chromogranine. Les neuropeptides sont plus des neuromodulateurs que des neurotransmetteurs au s ens pro- pre. On distingue les neuropeptides opiodes (ou endorphines), agonistes endognes natu- rels des rcepteurs aux opiacs, et les neuropeptides non-opiodes (ocyt ocine, vasopressine, somatostatine, neuropeptide Y, etc). Leur libration partir d es terminaisons nerveuses du SNC a plus de points communs avec la libration des h ormones partir des cellules endo- crines quavec lexocytose des petites vsicules syn aptiques. Lexocytose des grandes v- sicules centre dense se distingue en effet de celle des petites vsicules synaptiques par au moins 4 points : 1) elles sont situe s distance des zones actives et les neuropeptides sont librs de faon ectopique, cest dire pas directement dans la fente synaptique ; 2) il ny a pas de recyclage loca

l des grandes vsicules centre dense dans les extrmits prsynap- tiques, car les neuro peptides sont synthtiss de novo par clivage de prcurseurs peptidi- ques synthtiss dan s le corps cellulaire ; 3) Les grandes vsicules centre dense sont dpourvues de la plupart des protines spcifiques associes aux petites vsicules synapti- ques, ou en c ontiennent des quantits bien moindres (cest le cas de la synaptophysine) ; 4) Le contenu des grandes vsicules centre dense est libr par une augmentation globa le de la concentration en Ca++ et non par un couplage localis entre les canaux ca lcium et lexocytose. Le plus souvent, llment pr-synaptique est une terminaison axonale (cf. plus loin) 7.2.3.2 La fente synaptique est le trs mince espace qui spare la membrane pr-synapt ique de la membrane post-synaptique

7.2.3.3 Llment post-synaptique prsente de nombreux rcepteurs membranaires En ME, la membrane post-synaptique prsente un paississement dense aux lectrons plus impor- tant que celui de la membrane prsynaptique. Le neurotransmetteur libr dans la fente synaptique se fixe sur les rcepteurs ionotr opiques ou m- tabotropiques de la membrane postsynaptique. Les rcepteurs ionotropiques (ou rcepteurs-canaux) Leur ouverture est contrle par un neurotransmetteur. Louverture des canaux sodium, rcepteurs de lactylcholine ou du glutamate, entrane lentre de Na+ dans llment posttique et par voie de consquence une dpolarisation de la membrane de la cellule-cible et donc une excitation neuronale (synapses excitatrices). Louverture des cana ux chlore, rcepteurs du GABA ou de la glycine, entrane une hyperpolarisation de la mem- brane de la cellule-cible et donc une inhibition neuronale (synapses inhib itrices). Les rcepteurs mtabotropiques A la diffrence des rcepteurs ionotropiques, les rcepteurs mtabotropiques sont spars de s canaux ioniques dont ils rglent le fonctionnement, le couplage tant assur par une protine membranaire de la famille des protines G. La stimulation de certains neurones post-synaptiques entrane la production de NO NO (monoxyde dazote ou oxyde nitrique) est produit grce la prsence dune enzyme, la N O-synthtase, qui peut tre dtecte par immunocytochimie. Cest par simple diffusion que NO est libr travers la membrane du neurone et quil pntre dans le neurone rece- veur. Son rle exact est inconnu. Le plus souvent llment post-synaptique est un dendrite (synapses axo-dendritiques) ou un corps cellulaire (synapses axo-somatiques) Les ramifications dendritiques de certains neurones (comme les cellules pyramida les du cortex crbral et les cellules de Purkinje du cortex crbelleux) sont couvertes de trs nom- breuses petites protrusions, appeles pines dendritiques, qui constitue nt autant dlments post-synaptiques diffrencis. Il existe galement des synapses axo-axoniques, o une terminaison axonale prsynaptiq ue entre en contact avec laxone dun autre neurone soit au niveau de son segment initi al, soit tout prs de sa propre terminaison ; dans ce dernier cas, cette synapse a xo-axonique sert inhiber le fonctionnement de la terminaison axonale sur laquell e elle fait contact (phno- mne de linhibition prsynaptique). Plus rarement, il sagit de synapses dendro-dendritiques, dendro-somatiques, dendr o-axo- niques, somato-dendritiques, somato-somatiques ou somato-axoniques. Chapitre 8

Le systme nerveux central. Le systme nerveux priphrique

8.1 Le systme nerveux central

8.1.1 Elments constitutifs Le SNC est constitu de neurones (voir chapitre 7 page 83), de cellules gliales, d e capillaires san- guins et de MEC. 8.1.1.1 Les cellules gliales Il existe 4 varits de cellules gliales : les astrocytes, les oligodendrocytes, les cellules pendymai- res et les cellules microgliales. Les termes de cellules nvrog liques, de nvroglie ou de glie sont synonymes de celui de cellules gliales. Les astrocytes Se reporter lAtlas of Ultrastructural Neurocytology, sur les astrocytes. De forme toile, les astrocytes sont faits dun corps cellulaire contenant le noyau e t de pro- longements cytoplasmiques diversement ramifis. En ME, ils se caractrisen t par labon- dance, dans le cytoplasme du corps cellulaire et des prolongements, de filaments intermdiaires (gliofilaments) riches en GFAP (protine glio-fibrillair e acide) et de grains de glycogne. Ce stock glycognique constitue la principale rse rve nergtique crbrale. La membrane astrocytaire contient de nombreux canaux ioniques voltage-dpendants (canaux-Na+, canaux-K+, canaux-Ca++, canaux-Cl-) ainsi que des canaux ioniques mcano - sensibles activs par ltirement (et probablement impliqus dans la rgulation du volum e cellulaire). On y trouve galement un certain nombre de transporteurs ioniques act ifs (pompes et changeurs) et des rcepteurs membranaires pour de nombreux ligands (neurotra nsmetteurs, neuropeptides, cytokines, etc). Enfin, de nombreuses jonctions communi cantes existent entre les astrocytes et entre les neurones et les astrocytes. Les astrocytes synthtisent et scrtent des neurostrodes. Ils contiennent des rcepteurs nuclaires pour les hormones thyrodiennes, pour les strodes sexuels et pour les corti cos- trodes surrnaliens. Les nombreux prolongements cytoplasmiques des astrocytes sont de 4 grands types : 1) un grand nombre de prolongements cytoplasmiques forment une sorte de rseau q ui joue un rle de support structural au sein du parenchyme du SNC ; 2) de petites languettes partant des prolongements cytoplasmiques prcdents entourent troitement les synapses et per- mettent ainsi la slectivit de la transmission nerveuse en empc hant la diffusion des neurotransmetteurs ; 3) certains prolongements cytoplasmiq ues (ou pieds vasculaires des astrocytes) entourent compltement les capillaires s anguins et les sparent des neurones ; 4) enfin, la surface du nvraxe est forme par la juxtaposition de prolongements cyt oplasmiques astrocytaires ralisant le revtement astrocytaire marginal du SNC. Les oligodendrocytes Consulter lAtlas of Ultrastructural Neurocytology, sur les oligodendrocytes. Les oligodendrocytes possdent un corps cellulaire de petit volume do partent quelqu

es prolongements cytoplasmiques, plus fins et moins nombreux que ceux des astroc ytes. Les oligodendrocytes de la substance blanche laborent la myline du SNC. Les cellules microgliales appartiennent au systme des monocytes/macrophages En MO, les cellules microgliales (ou microglie) apparaissent comme des cellules de petite taille, avec un noyau arrondi ou ovalaire, dense et un cytoplasme visu alis soit par des co- lorations argentiques, soit surtout actuellement par des le ctines ou des anticorps monoclo- naux. Les cellules microgliales proviennent des monocytes sanguins ayant pntr dans le parenchyme du SNC et peuvent, lors de lsions du tissu nerveux, sactiver et se transformer en macrophages. Les cellules prsentat rices de lantigne dans le SNC sont les cellules mi- crogliales. Lorsquelles sont ac tives, les cellules microgliales scrtent de nombreuses molcules dont plusieurs cytok ines, des protases, des anions superoxyde et de loxyde ni- trique NO. Les pendymocytes constituent le revtement du systme ventriculaire Voir plus loin. 8.1.1.2 Les capillaires sanguins Les capillaires du SNC sont des capillaires continus, faits de cellules endothlia les jointives entou- res par une MB continue se ddoublant par endroits pour envelo pper des pricytes. Les pieds vas- culaires des astrocytes entourent compltement le s capillaires, dont ils restent spars par la MB. Ils se distinguent morphologiquem ent des capillaires continus banals par trois points essentiels : 1) la prsence de jonctions intercellulaires de type zonula occludens, 2) la raret des vsicules de pinocytose, et 3) labondance des mitochondries. De ce fait, les ca pillaires sanguins jouent un rle essentiel dans la restriction des changes entre l e sang et le SNC ( barrire sang-cerveau ). Les cellules endothliales des capillaires crbraux sont hautement polarises et la mem brane plas- mique luminale prsente une architecture molculaire (en particulier enz ymatique) diffrente de celle de la membrane abluminale. Labsence de pores et la prs ence de jonctions occludens conti- nues font que les nutriments hydrosolubles do ivent, pour pntrer dans le cerveau, utiliser la voie de transporteurs membranaires. Ces transporteurs membranaires assurent la slectiv it de la bar- rire sang/cerveau. Cest ainsi que sont captes prfrentiellement dans le s ang et transportes vers le tissu nerveux des macromolcules telles que le D-glucose (grce un transporteur de glucose, le GLUT1), des peptides et des acides amins. 8.1.1.3 La MEC du SNC Le volume du compartiment extra-cellulaire est important si lon envisage ltendue de s surfaces de contact entre les innombrables prolongements neuronaux et gliaux. Reprsentant de 20 30 % du volume tissulaire total, son rle est fondamental. Les ne urones nont en effet aucun contact di- rect avec les capillaires et leurs changes avec le sang peuvent seffectuer par lintermdiaire des astrocytes ou par diffusion d ans lespace extra-cellulaire. Cet espace extra-cellulaire contient les lments de la MEC du SNC, ainsi rpartie entre les neurones, les cellules gliales et les capill aires sanguins. La nature et la proportion des protines, glycoprotines et protoglyc anes qui composent la MEC du SNC sont diffrentes de celles de la MEC des autres t issus : elle est moins riche en col- lagnes, en fibronectine et en laminine, mais contient en revanche plus de protoglycanes et de glycoprotines ; elle contient gal ement des protases extracellulaires et des inhibiteurs des prota- ses.

8.1.2 Lorganisation tissulaire Le parenchyme du SNC est organis en substance grise (SG) et substance blanche (SB ). Sa surface profonde est borde par le revtement pendymaire. Sa superficie est for me par le revtement as- trocytaire marginal.

8.1.2.1 La SG contient tous les corps cellulaires neuronaux et toutes les synaps es du SNC La SG correspond aux rgions o stablissent les connexions interneuronales (synapses). Cest dans la SG que sigent toutes les synapses du SNC. Cest son niveau que sont in tgres les infor- mations et construit le signal. Elle est donc constitue par le gro upement des corps cellulaires neu- ronaux et de leurs prolongements qui se fait suivant une organisation spatiale particulire chaque rgion (architectonie), par de s cellules gliales (astrocytes, oligodendrocytes, microglie) et par des capillai res. Les oligodendrocytes sont souvent situs tout contre les corps cellulaires de s neurones (oligodendrocytes satellites). De ce fait, on suppose lexistence de re lations mtaboliques troites entre oligodendrocytes et neurones. On appelle neuropile les plages de SG situes entre les corps cellulaires neuronau x, les corps cellulaires gliaux et les capillaires sanguins ; le neuropile, tel quil apparat en ME , est donc constitu par lenchevtrement dinnombrables prolongements cytoplasmiques ne uronaux (axones et den- drites) et gliaux, de calibre variable et souvent imposs ibles identifier prcisment. Tous ces l- ments sont jointifs et ne laissent entre leu rs membranes plasmiques quun espace de 20 25 nm qui dfinit le compartiment extra-c ellulaire de la SG (voir plus haut). Les neurones nont aucun contact direct avec les capillaires et leurs changes avec le sang seffectuent par lintermdiaire des astrocytes ou par diffusion dans la MEC des espaces extra-cellulaires. 8.1.2.2 La SB, dpourvue de synapses, est essentiellement faite de faisceaux daxone s myliniss L aussi, les lments sont jointifs et ne laissent que peu despace extra-cellulaire. L e fait structural dominant est le groupement en faisceaux des axones myliniss. Les cellules gliales (astrocytes, oligodendrocytes, microglie) sont groupes entre ce s faisceaux ou allonges suivant leur axe lon- gitudinal. Les capillaires sanguins sont peu nombreux. La SB est avant tout un organe de conduc- tion et son organi sation trs diffrente de celle de la SG va de pair avec une activit mtabolique moindr e. Dans la SB, les oligodendrocytes forment la myline Disposs entre les fibres nerveuses mylinises, les oligodendrocytes assurent la form ation de la myline du SNC par lenroulement de leurs prolongements cytoplasmiques a utour des axones. La structure membranaire rgulirement spirale et priodique de la myl ine sex- plique par cet enroulement et par laccolement conscutif des membranes plas miques des prolongements cytoplasmiques oligodendrogliaux. Loligodendrocyte envoi e un certain nombre de prolongements qui senroulent autour des axones adjacents. Ainsi un oligoden- drocyte mylinise en moyenne une quarantaine dinternodes situs su r des fibres nerveuses diffrentes dans le systme nerveux central. Les oligodendroc ytes enroulent leur propre membrane plasmique en couches superposes qui forment u ne spirale serre autour de laxone sur un segment de fibre nerveuse appele internode (ou segment interannulaire), spar des internodes adjacents par les nuds de Ranvier , dpourvus de myline, au ni- veau desquels laxone est entour par des prolongements a strocytaires. La disposition des lamelles myliniques au niveau des nuds de Ranvier sexplique par le mode de formation de la myline et par le fait que la longueur de chaque tour de spire va en croissant de laxone vers la priphrie. Consulter lAtlas of Ultrastructural Neurocytology, sur la myline du SNC. En ME, la myline apparat comme une structure lamellaire spirale En coupe transversale, la myline se prsente comme une structure lamellaire spirale, r- gulirement arrange, constitue par lalternance de lignes denses majeures (ou priodi - ques) et de bandes claires (intrapriodiques). Chaque bande claire est elle mme d ivise en deux parties gales par une (ou deux) lignes denses mineures ou intrapriodi que(s) plus fi- ne(s). La disposition priodique de la myline rsulte de la conjoncti

on de trois phnomnes : (1) laplatissement dune portion de la cellule mylinisante en u n mince feuillet dpourvu de cytoplasme (fusion des faces internes des membranes c ytoplasmiques ralisant la ligne dense majeure) ; (2) lenroulement de ce feuillet a utour de laxone ; (3) et le raprochement des tours de spire avec accolement des f aces externes des membranes cy- toplasmiques (ralisant la ou les lignes denses mi neures) : ce compartiment extracellulaire intramylinique est spar de lespace extrace llulaire gnral par des complexes de jonc- tion. La diffrence de rapprochement des membranes selon quil sagit de laccolement de leurs faces internes ou de leurs faces externes, est lie une diffrence dans la composit ion pro- tique des deux faces de la membrane. La composition protique diffrente de la myline centrale et de la myline priphrique (cf infra) se traduit morphologiquement par une p- riodicit lgrement diffrente des deux types de myline. La composition chimique de la myline est trs particulire En effet la myline centrale contient 70 % de lipides (cholestrol, phospholipides e t glyco- lipides) et 30 % de protines ; ce rapport est invers dans la membrane des autres types cel- lulaires. Cette richesse en lipides exclut leau et les ions qu i y sont dissouts, et fait de la myline un bon isolant lectrique. Les principales protines spcifiques de la myline du SNC sont la PLP (ProteoLipid Protein), la MBP ( Myelin Basic Protein) et la MAG (Mye- lin Associated Glycoprotein). La mylinisation des axones acclre la conduction de linflux nerveux, au moindre cot nergtique et dans le minimum despace possible Les fibres mylinises dont les axones sont les plus larges ont les gaines de myline les plus paisses (cest dire ayant le plus grand nombre de tours de spire), les int ernodes les plus longs, et la vitesse de conduction la plus leve.

Lacclration de la conduction nerveuse. Les nuds de Ranvier constituent une zone d e faible rsistance lectrique au niveau de laquelle peu prs tous les canaux Na+ de la xone sont concentrs ; ils constituent donc la zone privilgie pour le dclenchement des potentiels daction. Les proprits disolant lectrique de la myline facil itent la propagation passive au nud suivant des courants associs au potentiel dacti on nodal, la conduction nerveuse le long de laxone mylinis seffectuant de fa- on salt atoire dun nud de Ranvier lautre. Lconomie dnergie. Lnergie mtabolique axonale est conserve en cas de my- linisat sque lexcitation active ncessaire la propagation de linflux est res- treinte aux pe tites rgions nodales. Lconomie despace. La vitesse de conduction est proportionnelle au diamtre de la f ibre pour une fibre mylinise et la racine carre du diamtre pour une fibre non mylinis , ce qui explique la prodigieuse conomie despace qui rsulte de la myli- nisation. 8.1.2.3 Lpendyme

Les pendymocytes (ou cellules pendymaires) forment un pithlium cubique ou prismatiqu e simple cili assurant le revtement des cavits ventriculaires du SNC (ventricules l atraux, troisi- me ventricule, aqueduc de Sylvius, quatrime ventricule, canal de lpen dyme) et jouent ainsi un rle dans les changes entre le LCR et le SNC. Les faces la trales des cellules pendymaires sont relies par des zonula adhaerens et dabondantes jonctions communicantes, mais il nexiste pas de zonula occludens. Leur ple apical est cili et prsente, entre les cils, de nombreuses microvillosi- ts dont le glycoca lyx joue un rle important dans les changes avec le LCR. Leur ple basal met un prolon gement cytoplasmique qui senchevtre avec les prolongements cytoplasmiques des astrocytes sous-pendymaires. Les cellules pendymaires expriment la GFAP et la viment ine. Lpendyme rgle les mouvements deau entre le LCR et le compartiment extracellulai re du sys- tme nerveux central ; il exerce galement une activit dendocytose, de phag ocytose et de dgra- dation lysosomiale vis vis de diverses molcules ou particules prsentes dans le LCR. 8.1.2.4 Le revtement astrocytaire marginal

La superficie de tout le nvraxe est forme par la juxtaposition de prolongements cy toplasmiques astrocytaires dont la face externe est en contact, par lintermdiaire dune MB continue, avec le LCR (liquide cphalo-rachidien ou liquide crbro-spinal) con tenu dans les mailles de la leptom- ninge.

8.1.3 La rpartition de la SG et de la SB au sein du SNC rpond des critres prcis Dans lensemble, la SG est profonde, situe autour des cavits pendymaires : axe gris d e la moel- le, noyaux gris du tronc crbral et au niveau de lencphale, ganglions de l a base (noyaux gris centraux) : thalamus, noyaux cauds et noyaux lenticulaires. L a SB est plus priphrique : cordons de la moelle, centre ovale. 8.1.3.1 Lexemple dune coupe de moelle pinire Lexemple le plus simple permettant de mettre en place les lments constitutifs du SN C est celui dune coupe horizontale de la moelle pinire. A faible grandissement en MO

Sur une coupe horizontale de moelle pinire humaine colore par lhmatine-osine, aprs fi ion au formol et inclusion en paraffine, faible grandissement en MO, on repre aism ent, un axe de substance grise, en forme de X, avec de chaque ct une corne ant- rie ure (ou ventrale), une corne postrieure (ou dorsale) et - au niveau de la moelle thoraci- que - une corne intermdiaire (ou latrale). Cet axe gris est cen tr par le canal de lpendyme et est entour par des cordons de substance blanche : cordons antro-latraux et cordons postrieurs. La racine antrieure (ou ventrale), mot rice, part de la corne antrieu- re. La racine postrieure (ou dorsale) entre dans l a moelle au niveau de la corne postrieure. Le ganglion spinal (ou rachidien) est situ sur le trajet de la racine postrieure. Plus loin, les deux racines se runissen t pour former un nerf priphrique. A des grandissements suprieurs Laxe de SG La corne antrieure contient les corps cellulaires des motoneurones alpha, multipo lai- res, polydriques, de grande taille, isodendritiques, de Golgi type I. En deh ors des corps cellulaires des neurones, seuls les noyaux des cellules gliales so nt bien visibles ; les uns, relativement arrondis, volumineux et clairs, apparti ennent des astrocytes, les autres galement arrondis, mais plus petits et plus som bres, des oligodendrocytes et des cellules microgliales. Les capillaires sanguin s sont trs nombreux. Lespace compris entre les corps cellulaires neuronaux, les ce llules gliales et les capillaires san- guins est grossirement amorphe. Il est dpou rvu de structures morphologiquement identifiables et est inaccessible une analys e morphologique prcise en MO. Il correspond au neuropile, dont seule la ME permet ltude. Cest dans ce neuropile que sige nt les synapses, mais la MO ne permet pas de les voir. Le canal de lpendyme Au niveau de la moelle, la lumire du canal pendymaire est souvent virtuelle et il nest pas rare de ne voir quun petit amas de cellules pendymaires sans lumire d- celab le. Les cordons de SB Les cordons de SB de la moelle correspondent des axones myliniss groups en faisceau x parallles. Ces axones appartiennent plusieurs groupes de neurones de si- tuatio n anatomique et de signification physiologique diffrente. Ceux formant les cor- d ons postrieurs proviennent de corps cellulaires neuronaux situs dans les ganglions spinaux et vhiculent la sensibilit profonde vers le bulbe, puis le thalamus et le

cortex crbral. Les axones des cordons antro-latraux correspondent les uns des voies as- cendantes (partant de la corne postrieure de la moelle et se dirigeant vers le cervelet, le thalamus ou dautres rgions de lencphale), les autres des voies desce ndantes (notamment le faisceau pyramidal) apportant aux motoneurones de la corne antrieure de la moelle les ordres venus des structures suprieures de lencphale. En MO, sur une coupe horizontale de moelle pinire technique de faon routinire, les fa isceaux daxones myliniss se prsentent comme un groupement cte cte de sections circula res comprenant un centre punctiforme osinophile correspondant laxone coup transvers alement et une couronne vide de son contenu par les solvants des graisses et corr espondant la gaine de myline entourant laxone. Les noyaux de cellules gliales (ast rocytes et oligodendrocytes) sont moins bien visibles que dans la SG. Les capill aires sanguins sont beaucoup moins abondants que dans la SG. Les colorations dites myliniques permettent de visualiser les gaines de myline, en noir (coloration de Loyez la laque dhmatoxyline) ou en bleu-vert (luxol-fast blue ). La coloration de Bodian au protinate dargent, qui colore les axones en noir, pe ut tre fructueusement associe la coloration par le bleu luxol. 8.1.3.2 Deux exceptions : le cortex crbral et le cortex crbelleux La surface des hmisphres crbraux et du cervelet fait exception en ce sens quelle est revtue par une paisse couche de substance grise, appele manteau ou cortex. Les hmisphres crbraux Le cortex crbral est organis en couches parallles la surface et en colonnes perpendi - culaires. Laspect et la rpartition des neurones varient dun endroit lautre du cort ex ce qui permet de dresser une vritable carte cytoarchitectonique du cortex crbral et de dis- tinguer des aires fonctionnellement diffrentes. Le cervelet Le cortex crbelleux est organis en 3 couches parallles la surface et son aspect hist o- logique est identique dun endroit lautre. 8.2 Le systme nerveux priphrique

8.2.1 Les nerfs priphriques

8.2.1.1 Quelles soient mylinises ou amyliniques, les fibres nerveuses priphriques asso cient toujours un ou des axones une succession de cellules de Schwann En effet, quils soient ou non myliniss, les axones des nerfs priphriques sont toujour s entours par des cellules de Schwann. Lensemble axone(s) + succession de cellules de Schwann est d- sign par le terme de fibre nerveuse priphrique . Chaque cellule de Schwann est limite par une membrane plasmique revtue dune MB ; el le pos- sde un noyau ovalaire allong et un cytoplame contenant les organites habit uels de la cellule ainsi que diverses inclusions ; et surtout, elle est caractrise et dfinie par le fait quelle entoure un ou plusieurs axones invagins dans des dpres sions de sa membrane plasmique ; les rapports prcis quaffectent les axones avec le s cellules de Schwann qui leur sont associes permettent de recon- natre deux types fondamentaux de fibres nerveuses priphriques : les fibres nerveuses amylini- ques et les fibres nerveuses mylinises. 8.2.1.2 Une fibre nerveuse priphrique amylinique est constitue par un faisceau daxone s associs une mme squence de cellules de Schwann

Chaque axone est log dans une invagination de la cellule de Schwann et apparat ain si suspendu la surface de la cellule par un msaxone . Ce mode dengainement des axon es par la cellule de Schwann varie grandement en complexit selon les fibres. Parf ois, il ny a que quelques axones associs chaque cellule de Schwann ; dans dautres c as, les axones sont trs nombreux et lon peut alors trouver un msaxone principal se divisant en msaxones secondaires pour aller entourer chaque axone. Par dfinition, une fibre nerveuse priphrique amylinique est totalement dpourvue de myl ine.

8.2.1.3 Une fibre nerveuse priphrique mylinise est constitue par un seul axone mylinis associ une mme squence de cellules de Schwann

Les techniques usuelles de MO ne permettent pas une bonne tude histologique des f ibres nerveu- ses priphriques ; toutefois, la coloration de Bodian-luxol qui color e les axones en noir et les gai- nes de myline en bleu des mers du sud permet sur coupes paraffine une premire analyse des fibres mylinises. Par la mthode du teasing (ou dissociation des fibres), avec une coloration par lacide osmique, les fibres nerveuses mylinises sont accessibles une tude histologique permettant de voir les internodes (entre deux nuds de Ranvier successifs), de constater ltat normal ou non de la gaine de myline, de mesurer leur longueur. Dans le SNP, au cours des premiers stades du dveloppement, laxone qui deviendra myl inis se comporte comme les axones non myliniss, cest dire quil sinvagine dans une dp sion de la cellule de Schwann qui finit par lentourer presque compltement en laiss ant un msaxone. En- suite, les feuillets externes de la membrane plasmique fusion nent au niveau du msaxone qui de- vient alors virtuel. Ainsi transform, le msaxone sallonge et senroule en spirale autour de laxone. Au dbut, les diffrents tours de spi re du msaxone sont spars les uns des autres par du cytoplasme de la cellule de Schw ann, mais ensuite, un accolement se ralise qui fait disparatre le cytoplasme inter mdiaire.

La myline compacte (ou serre) Une fois la mylinognse acheve, la myline prend laspect ultrastructural dune struc- tur lamellaire spirale priodique. La ligne dense majeure ou priodique, forme par laccolement des faces cytoplas- m iques de la membrane plasmique de la cellule de Schwann, se situe lemplacement o s e trouvait le cytoplasme. La double ligne dense mineure ou intrapriodique, situe entre les lignes denses majeures, correspond lapposition des faces extracellulaires de la membrane plasmi - que de la cellule de Schwann, et se situe donc dans la continuit de lespace extr a-cel- lulaire. De part et dautre de la spirale compacte ainsi constitue, persiste un court msaxone , situ dans la continuit de la double ligne dense mineure, et reliant la membrane plasmique de la cellule de Schwann respectivement la lamelle de myline la plus ex terne (msaxone ex- terne) et la plus interne (msaxone interne). Une cellule de Schwann mylinise un seul internode dune seule fibre nerveuse pri- phr ique. Les nuds de Ranvier sont le sige dun enchevtrement cytoplasmique des deux cell ules de Schwann adjacentes. La myline non-compacte Les incisures de Schmidt-Lanterman. Ce sont des incisures transversales qui a ppa- raissent en ME comme une dissociation focale des lignes denses majeures sexp li- quant par des manques partiels daccolement qui entranent la persistance entre les tours de spire dun peu de cytoplasme schwannien. Les languettes paranodales. Aux incisures, sassocie un rseau cytoplasmique marginal, ou bride latrale, qui apparat comme des languettes superposes de cytoplasme situes en bordure du nud de Ranvier. Dans les deux cas, des jonctions communi- ca ntes rflchies existent entre les portions de cytoplasme schwannien spares par des la

melles myliniques. Ces rseaux cytoplasmiques permettent le renouvelle- ment molcula ire et la circulation entre le corps cellulaire et les diffrentes rgions de la myli ne. Larchitecture molculaire de la myline du SNP est diffrente de celle de la myline du S NC Dans le SNP, les protines les plus abondantes sont les protines P0, P1, et P2, auxquel- les sajoutent des protines minoritaires dont la pathologie humaine indiqu e le rle physio- logique important telles que la peripheral myelin protein (PMP 2 2), la MAG (MyelinAssociated-Glycoprotein) et la connexine 32. 8.2.1.4 Dans les troncs nerveux, les fibres nerveuses se groupent en fascicules

Les nerfs priphriques sont constitus de fibres nerveuses priphriques, mylinises et amy - niques, groupes en fascicules (ou faisceaux). Chaque fascicule est limit par son prinvre. A lin- trieur de chaque fascicule, entre les fibres nerveuses, se trouve le ndonvre. Lensemble des fascicules est maintenu par lpinvre. Lendonvre est le tissu conjonctif lche situ lintrieur des fascicules Il comporte des fibroblastes disperss, quelques mastocytes et de nombreuses micro fi- brilles de collagne orientes longitudinalement. Il contient de nombreux capill aires san- guins de type continu, dont lendothlium est le sige dune barrire entre le sang et les fibres nerveuses priphriques analogue la barrire sang-cerveau du systme nerveux central. Lpinvre est le tissu conjonctif dense qui enveloppe le tronc nerveux et runit les un s aux autres ses diffrents fascicules Il est fait de fibroblastes et de faisceaux de microfibrilles de collagne ; il co ntient un nombre variable dadipocytes et de nombreux vaisseaux sanguins (vasa nervorum). Le prinvre entoure chaque fascicule Chaque fascicule nerveux est entour par une dizaine de couches de cellules prineur ales aplaties, solidarises par des jonctions intercellulaires, et revtues par une MB, disposes concentriquement et spares les unes des autres par quelques microfibri lles de collagne le plus souvent longitudinales.

8.2.2 Les ganglions nerveux

8.2.2.1 Les axones des fibres nerveuses priphriques sont issus dun corps cellulaire neuronal Les corps cellulaires neuronaux do partent les axones des fibres nerveuses priphriqu es sont re- groups soit dans les noyaux des nerfs moteurs situs dans la substance grise du nvraxe (moelle pinire et tronc crbral), soit dans des ganglions nerveux. Un ganglion nerveux est constitu par un amas de corps cellulaires neuronaux entou rs par des cellules capsulaires, avec les neurites (dendrites et axones) qui en naissent, qui sy terminent ou qui le traversent. Il comprend un stroma conjonctif en continuit a vec lenveloppe fibreuse du gan- glion. Il existe deux grands types de ganglions. 8.2.2.2 Les ganglions sensitifs spinaux et crniens Les ganglions nerveux sensitifs spinaux (ou rachidiens) et leurs quivalents situs sur le trajet des nerfs crniens sensitifs contiennent le corps cellulaire des neu rones sensitifs pseudo-unipolaires

(neurones en T). Les corps cellulaires neuronaux, volumineux, sphriques, sont cen trs par un gros noyau clair nuclol et sont entours par des cellules capsulaires (ou cellules satellites). Aucune synapse ne sy fait. Le stroma conjonctivo-vasculaire est en continuit avec lenveloppe conjonc- tive fibreuse du ganglion. 8.2.2.3 Les ganglions sympathiques et parasympathiques Ces ganglions, qui appartiennent au systme nerveux vgtatif, contiennent le corps ce llulaire des neurones vgtatifs (sympathiques ou parasympathiques) dits post-gangli onnaires. De nombreuses synapses sy effectuent.

8.2.3 Les terminaisons nerveuses

8.2.3.1 Les terminaisons nerveuses affrentes Ce sont des rcepteurs capables de transformer une stimulation mcanique, chimique o u thermique en un message affrent. Llment fondamental de leur structure est la termi naison du prolonge- ment priphrique dune cellule nerveuse en T du ganglion rachidie n ou crnien. Les unes sont des terminaisons nerveuses libres (comme on en voit entre les krati nocytes de la peau ou entre les cellules de lpithlium antrieur de la corne), qui sont des rcepteurs de la dou- leur. Les autres sont des terminaisons nerveuses entoures dune structure plus ou moins c omplexe for- mant un rcepteur, encapsul ou non. 8.2.3.2 Les terminaisons nerveuses effrentes La varit la mieux connue est la jonction neuromusculaire (cf. chapitre 9 page 103) . Les terminai- sons effrentes au niveau des cellules musculaires lisses et des g landes se prsentent comme des terminaisons nerveuses libres. Chapitre 9

Les tissus musculaires

9.1 Caractristiques gnrales Les cellules musculaires (myocytes ou fibres musculaires) possdent un certain nom bre de carac- tristiques communes. Elles sont spcialises dans la production dun travail mcanique, la contraction mus culaire. Leur cytoplasme contient un matriel protique filamentaire contractile, les myof ilaments dactine (associs des filaments de tropomyosine) et de myosine, ainsi que des filaments in- termdiaires de desmine. Elles contiennent une concentration plus ou moins leve de myoglobine, pigment r espiratoi-

re fixant de loxygne. Leur membrane plasmique contient de nombreux rcepteurs des molcules varies ainsi que des transporteurs (notamment de glucose). Elles sont revtues par une membrane basale. Le complexe dystrophine-protines associes la dystrophine tablit un lien entre le s fi- laments dactine du myocyte et la laminine de la MB. La dystrophine est une protine situe sous la membrane plasmique de tous les types de myocytes (squelettiq ues, cardiaques et lis- ses). Elle permet laccrochage des filaments dactine de la cellule musculaire la laminine de la MB. En effet, elle se lie dune part aux synt rophines (protines intracytoplasmiques sous- sarcolemmiques) et aux filaments dact ine et dautre part un complexe de protines asso- cies la dystrophine. Ce complexe e st fait de 5 glycoprotines transmembranaires et dune protine extracellulaire qui se lie la laminine de la MB. Au-del de ces caractristiques communes, on distingue trois types diffrents de cellules musculaires : stries squelettiques, stries cardiaques et lisses. 9.2 Les tissus musculaires stris

9.2.1 Le sarcomre reprsente lunit lmentaire dorganisation des protines contractiles d myocytes stris La structure, lultrastructure et larchitecture molculaire du sarcomre est identique ( quelques nuances prs) dans les cardiomyocytes et les cellules musculaires stries squelettiques. Cependant, mme quand des molcules portent le mme nom dans les deux t ypes de myocytes stris, il sagit souvent disoformes diffrentes. 9.2.1.1 Les myofibrilles Les myofibrilles sont des cylindres parallles allongs dans le sens de la cellule, faits de la succes- sion rgulire, bout bout, de petits cylindres identiques appels sarcomres (ou cases musculai- res). Chaque sarcomre est fait dun faisceau de myofil aments parallles son grand axe. La rpartition des deux contingents de myofilaments (filaments fins dactine et filaments pais de myosine) dtermine au sein du sarcomre des rgions de structure diffrente rendant compte de la striation transversale des myofibrilles bien visible en MO. Les filaments pais sont disposs au milieu du sarcomre lemplacement du disque A ou di sque sombre. Le disque M correspond leur apparent renflement mdian. Dans le disqu e H, ils sont seuls prsents. Par contre, dans les parties latrales du disque A, le s filaments fins et pais se che- vauchent, les filaments fins se disposant entre les filaments pais selon un mode hexagonal rgu- lier, avec des ponts dunion. Au niv eau du disque I ou disque clair, les filaments fins sont seuls prsents. Le disque (ou strie) Z est marqu par linterpntration sur une faible distance des ex- trmits des filaments fins de deux sarcomres contigus, avec, ce niveau, un double systme quadratique de ponts entre les filaments fins de chacun des deux sarcomres. 9.2.1.2 Les filaments pais sont essentiellement forms de lassemblage rgulier de molcu les de myosine

Chaque molcule de myosine est forme de 2 chanes lourdes identiques et de 2 paires d e chanes lgres. Les deux chanes lourdes de la myosine sont accoles lune lautre : leu ongue queue forme un axe torsad, et leur ple globulaire merge du filament pais sous la forme dune tte dou- ble. Lmergence des ttes de myosine se fait selon une dispositi on gnrale ayant lapparence dun pas de vis. La partie distale des ttes de myosine possd e deux sites de fixation, lun pour lATP et lautre pour lactine. La tte de myosine pos sde une activit ATPasique active au con- tact de lactine. Les disques M renferment des filaments de myomsine qui relient entre eux les fila ments de myo- sine et les maintiennent groups en faisceaux.

La titine (ou connectine) est un filament protique qui, dans chaque demi-sarcomre, relie chaque filament pais la strie Z. Composant lastique , elle maintient lalignem ent des filaments pais et oppose une rsistance ltirement excessif du sarcomre. Elle stend de la strie Z jusq a strie M. 9.2.1.3 Les filaments fins sont essentiellement composs de polymres dactine Lactine est une molcule polypeptidique de forme globulaire. La polymrisation des mo nomres dactine se fait sous une forme filamentaire. Les polymres dactine saccolent pa r deux pour for- mer une longue double hlice. Les myofilaments fins sont forms de lassociation de cette double hlice dactine et de deux protines rgulatrices : la tropo myosine, dimre filamenteux rigide de renforcement, et la troponine, complexe de t rois sous-units polypeptidiques (I, C et T) disposes intervalles rguliers le long d es filaments dactine, en regard de chaque tte de myosine, et im- pliques dans la rgu lation de la contraction musculaire par le calcium (voir plus loin). Parmi les nombreuses autres molcules associes aux filaments dactine, nous citerons seulement la tropomoduline qui coiffe lextrmit libre des filaments dactine. 9.2.1.4 Les disques Z sont forms par lorganisation quadratique de filaments dalphaactinine Ils servent relier lextrmit des filaments fins de chaque sarcomre entre elles et ave c les extr- mits des filaments fins du sarcomre adjacent. Ils contiennent galement u ne des extrmits des filaments de titine et les filaments intermdiaires de desmine.

9.2.2 Les autres constituants cytoplasmiques sont situs entre les myofibrilles 9.2.2.1 De nombreuses mitochondries Disposes en file entre les myofibrilles, les nombreuses mitochondries fournissent lATP ncessai- re la production dnergie mcanique par le myocyte stri. 9.2.2.2 Des filaments intermdiaires de desmine et des microtubules La desmine, principalement prsente au niveau des stries Z, forme un rseau de filam ents interm- diaires qui stend de la membrane plasmique lenveloppe nuclaire. 9.2.2.3 Le rticulum sarcoplasmique longitudinal Il est constitu par un rseau de canalicules et de saccules anastomoss, longitudinau x, entourant chaque myofibrille et se rsolvant en une citerne terminale au niveau de chaque sarcomre. 9.2.2.4 De nombreux grains de glycogne Bien visibles en ME, ils constituent une rserve nergtique. Il existe galement de nom breuses goutelettes lipidiques.

9.2.3 Le sarcolemme et la rgion sous-sarcolemmique prsentent des diffrenciations fo ndamentales

Le terme de sarcolemme sapplique, selon les auteurs, soit lensemble de la membrane plasmique et de la MB qui la tapisse, soit la seule membrane plasmique du myocy te. 9.2.3.1 Les transporteurs de glucose

Le glucose pntre dans le myocyte stri par diffusion facilite grce deux protines trans em- branaires qui servent de transporteurs, GLUT1 et GLUT4. Linsuline, lexercice m usculaire et lhypoxie stimulent lentre du glucose dans la cellule. 9.2.3.2 Le systme T Le systme T est un systme transversal de canalicules (ou tubules) reprsentant des i nvaginations tubulaires de la membrane plasmique. Ces canalicules pntrent dans le cytoplasme et cheminent autour des myofibrilles entre les citernes terminales du rticulum sarcoplasmique longitudinal. La membrane des citernes terminales du rtic ulum sarcoplasmique et celle des canalicules du systme T renferme de nombreux can aux calciques. La MB du myocyte passe en pont au dessus de lorigine des tubules T . 9.2.3.3 Les costamres Les costamres, analogues aux contacts focaux, servent attacher les filaments dacti ne intra- cellulaires aux protines de la MEC, en particulier la fibronectine, don t les intgrines de la membrane plasmique constituent les rcepteurs. 9.2.4 Les phnomnes molculaires de la contraction musculaire et du couplage excitati on-contraction sont maintenant bien connus 9.2.4.1 La contraction de la myofibrille La contraction de la myofibrille strie rpond la modification des liaisons (ponts du nion) unis- sant les filaments dactine et de myosine. Il en rsulte une progression des filaments dactine entre les filaments de myosine, entranant un raccourcisseme nt du sarcomre, donc de la myofibrille, donc du muscle. La modification structura le des liens unissant myosine et actine est associe une hydrolyse de lATP musculaire, raction troitement dpendante de la prsence dions Ca++. Plus le sarcomre est contract, plus le disque H et les demi-disques I raccourcisse nt, alors que le disque A ne se modifie pas. Si le muscle est tir, les consquences sont inverses : le disque H et les demi-disques I deviennent plus larges et le d isque A reste toujours identique. 9.2.4.2 Le droulement des vnements La dpolarisation de la membrane plasmique du myocyte se propage le long des membr anes du systme T, puis est transfre au rticulum sarcoplasmique ; la dpolarisation de la membra- ne du rticulum sarcoplasmique permet au Ca++ qui tait contenu une conce ntration leve dans les citernes du rticulum sarcoplasmique den sortir par des canaux-Ca++ transm embranaires et de se retrouver ainsi dans le cytosol ; en se fixant sur la troponine C, le C a++ entrane la rup- ture de la liaison troponine I-actine, ce qui permet un lger dp lacement de la molcule de tropomyosine, dgageant ainsi les sites de liaison myosine-actine qui taient bloqus par la tropomyosine, et entranant un contact actine-myosine ; ce contact actine-myosine

dclenche lactivation de lATP-ase (actine-dpendante) de la myosine qui catalyse lhydro lyse de lATP (ATP donne ADP + nergie) et entrane la fixation de lactine sur la myosi ne et le changement de conformation de la tte de myosine, responsable du dplacemen t du filament dactine et donc de la contraction de la myofibrille (la disposition de la tte de myosine sur le filament dac- tine fait un angle denviron 90 ; le dtache ment du phosphate de la tte de myosine sassocie la libration dnergie entranant la fix tion plus forte de la myosine sur lactine et une rotation de 45 de la tte de myosine qui entrane un dplacement denviron 10 nanomtres ; la libration de lADP laisse la tte de myosine ancre lactine).

9.3 Le tissu musculaire stri squelettique

Cerne par sa membrane plasmique entoure de sa MB, la cellule musculaire strie squel ettique (ou fibre musculaire strie squelettique ou rhabdomyocyte) a la forme dun c ylindre allong, dont le diamtre est denviron 10 100 micromtres et dont la longueur e xcde rarement 10 cm. Elle possde plusieurs centaines de noyaux situs en priphrie de la cellule, contre sa memb rane plas- mique. Son cytoplasme contient de trs nombreuses myofibrilles organises selon le modle sar- comrique.

9.3.1 Les jonctions neuro-musculaires

9.3.1.1 La jonction neuro-musculaire est la synapse entre les terminaisons axona les du motoneurone alpha et le rhabdomyocyte Dans un muscle squelettique normal, chaque cellule musculaire possde une innervat ion unique. La plaque motrice est lendroit du sarcolemme o seffectue la jonction ne uro-musculaire. Chaque arborisation axonale repose dans une gouttire creuse la sur face de la cellule musculaire. Dans cette gouttire synaptique, laxone repose sur l a membrane plasmique de la cellule musculaire (re- vtue de sa MB) dont il nest spar que par la fente synaptique primaire. Il renferme des mitochon- dries et des vsic ules synaptiques et est recouvert sa face suprieure par une cellule de Schwann. L a membrane plasmique de la cellule musculaire, revtue de sa MB, est dprime, ce nive au, en de multiples invaginations parallles dterminant les fentes synaptiques seco ndaires dont lensem- ble constitue lappareil sous-neural de Couteaux, trs riche en actylcholinestrase. 9.3.1.2 Au niveau des terminaisons axonales, plusieurs types de canaux ioniques sont prsents

On trouve, comme sur toute la longueur de la fibre nerveuse, des canaux-Na+ et d es canaux-K+ voltage-dpendants. Surtout, il existe des canaux-Ca++ voltage-dpendan ts qui souvrent en cas de dpolarisation axonale et permettent un influx intra-cell ulaire de calcium qui dclenche la fusion des vsicules dactylcholine la membrane plasmique du neurone et donc lexocytose bru- tale et massive du neurotransmetteur dans la fente synaptique. Une fois libre dans la fente synaptique, lactylcholine se lie un rcepteur spcifique de lactylcholin , situ dans la mem- brane plasmique de la cellule musculaire uniquement au niveau de la fente synaptique. Le rcep- teur de lactylcholine est une molcule transmembran aire forme de cinq sous-units qui forment un canal ionique ligand-dpendant. Quand la

ctylcholine se lie son rcepteur, elle entrane louverture de ce dernier et lentre de Na+ dans la cellule musculaire, ce qui e ntrane la dpolarisation de la membrane plasmique du myocyte et donc un potentiel daction mus cu- laire se traduisant par une contraction du myocyte. Linactivation de lactylcholine de la fente synaptique se produit selon deux process us lmentai- res diffrents. Une partie du neurotransmetteur est limine par diffusion p assive hors de la fente. Le reste est hydrolys en actate et choline par lactylcholin estrase, enzyme synthtise par le myocyte et excrte dans la fente synaptique o elle sen hsse dans la MB. Outre les rcepteurs de lactylcholine situs au niveau de la plaque motrice, il existe de nombreux rcepteurs diffrentes molcules de signalisation (hormones - en particulier linsuline -, cytoki- nes, etc). 9.3.2 Les jonctions myo-tendineuses Les rhabdomyocytes sinsrent sur les os par lintermdiaire de tendons. Cest au niveau d es jonc- tions myo-tendineuses que les forces gnres par la contraction des myofibri lles sont transmises travers la membrane plasmique du myocyte pour agir sur le t endon. A cet endroit, la membrane plasmique du myocyte est le sige de nombreux re plis qui multiplient la surface de linterface entre la cellule et la MEC par un f acteur de 10 50. Les microfibrilles de collagne du tendon senfon- cent entre les va ginations cellulaires et arrivent en troit contact avec la membrane plasmique du myocyte revtue de sa MB.

9.3.3 Les fibres de type I et de type II Les cellules musculaires stries squelettiques possdent des caractristiques morpho-f onctionnel- les variables qui permettent de distinguer des myocytes de type I, d e type II et de type intermdiaire aux deux prcdents. Les myocytes de type I (ou fibres rouges , car riches en myoglobine) sont de p etit calibre et contraction lente (essentiellement pour maintenir la station deb out et les postures). Ils sont riches en mitochondries et sont donc identifiable s en histo-enzymologie par leur richesse en enzymes oxydatives (SDH, NADH-TR, Co x). Ils fonctionnent principalement par la voie de la glycolyse arobie. Les myocytes de type II (ou fibres blanches , car pauvres en myoglobine) sont de grand calibre et contraction rapide (essentiellement pour les mouvements des membres). Ils sont riches en glycogne. Ils sont identifiables en histo-enzymologi e par leur richesse en ATPase pH 9,4 et en phosphorylase. Ils fonctionnent princ ipalement par la voie de la glycolyse ana- robie. Les myocytes de type intermdiaire possdent certaines caractristiques de ceux de type I et dautres de ceux de type II. Une unit motrice, cest dire lensemble dun motoneurone alpha et des rhabdomyocytes qui l innerve, est forme de cellules musculaires du mme type. En effet, le type des ce llules musculaires est rgul par le motoneurone alpha qui exerce une influence perm anente sur elles.

9.3.4 Les fuseaux neuro-musculaires Ce sont des rcepteurs sensoriels encapsuls, rpondant au degr de tension et la vitess e dtire- ment du muscle. Disposs en parallle avec les cellules musculaires stries ext rafusales, ils sont faits de cellules musculaires stries spcialises dites intrafusa les et de fibres nerveuses motrices (fibres gamma) et sensitives.

9.3.5 Lorganisation du tissu conjonctif du muscle squelettique Un muscle squelettique est constitu par des cellules musculaires stries groupes en faisceaux et assembles par du tissu conjonctivo-vasculaire qui se rpartit plusieur s niveaux : lendomysium entoure chaque myocyte, le primysium entoure chaque faisce au et lpimysium revt le muscle dans son entier.

9.3.6 Les cellules satellites Situes entre la membrane plasmique et la MB du rhabdomyocyte, les cellules satell ites possdent un seul noyau. Elles sont capables, en cas de lsion musculaire, dtre a ctives et de contribuer la rparation des myocytes lss ou la formation de nouveaux my ocytes (rgnration musculai- re).

9.4 Le tissu musculaire stri cardiaque

9.4.1 Le tissu musculaire stri cardiaque (ou tissu myocardique) se caractrise par son aptitude se contracter rythmiquement et harmonieusement de faon spontane Les battements cardiaques et leur rythme sont dtermins par lactivit intrinsque des ca rdiomyo- cytes du nud sino-auriculaire. En effet, les cardiomyocytes sont spontanm ent excitables ; leur dpolarisation et repolarisation rythmique est indpendante du systme nerveux. Le systme ner- veux vgtatif exerce toutefois une influence sur le r ythme des contractions : schmatiquement, le parasympathique (actylcholine) ralenti t le cur alors que le sympathique (noradrnaline) lacc- lre. 9.4.2 Les cellules myocardiques diffrent des cellules musculaires stries squeletti ques par plusieurs points fondamentaux 9.4.2.1 Laspect gnral est trs diffrent Les cellules myocardiques (ou cardiomyocytes), beaucoup moins allonges que l es rhabdo- myocytes, ont une forme de cylindre dont les extrmits prsentent des bifu rcations, grce auxquelles elles entrent en connexion avec les cellules myocardiqu es adjacentes pour former un rseau tridimensionnel complexe. Au lieu des centaines de noyaux sous-sarcolemmiques des rhabdomyocytes, cha que cardiomyocyte possde un noyau, central, unique, allong dans le sens du grand axe de la c ellule. Les myofibrilles divergent autour du noyau et laissent, comme dans la cellu le musculaire lis- se, une rgion axiale fusiforme dpourvue de matriel contractile e t contenant divers organites cytoplasmiques. Les mitochondries sont plus nombreuses et les grains de glycogne plus abonda nts que dans les rhabdomyocytes. 9.4.2.2 La diversit des rcepteurs membranaires

La membrane plasmique comporte de nombreux rcepteurs (rcepteurs de lactylcholine, rce p- teurs alpha-1, bta-2 et surtout bta-1 de ladrnaline/noradrnaline, rcepteurs de lang otensine II, canaux calciques voltage-dpendants, canaux calciques ligand-dpendants , etc).

9.4.2.3 Labsence de jonction neuro-musculaire et donc de plaque motrice

9.4.2.4 Lexistence de dispositifs de jonction cellule-cellule Des dispositifs de jonction trs particuliers assurent en effet la cohsion des cell ules myocardiques de lensemble du cur et permettent dune part la transmission dune c ellule lautre de la tension dveloppe par la contraction des myofibrilles et dautre p art la diffusion rapide de lexcitation dune cellule lautre travers le cur. Ces dispo sitifs de jonction (ou traits scalariformes ou disques intercalaires ou stries intercalaires ) visibles en MO aux extrmits de chaq ue cardiomyocyte sous la forme dun trait continu globalement transversal mais fait de l a succession al- terne de segments transversaux et de segments longitudinaux, app araissent en ME comme constitus de desmosomes, de zonula adhaerens et de jonction s communicantes. Les desmosomes sont situs indiffremment au niveau des portions transversales ou longitu- dinales des traits scalariformes ; les filaments intermdiaires de des mine sy attachent. Les desmosomes permettent une forte adhsion des cellules entre elles et vitent ainsi que les contractions rgulirement rptes ne les dtachent les unes des autres. Les zonula adhaerens, situes dans la portion transversale des disques interc alaires, servent galement de jonctions dancrage cellule-cellule et constituent la zone de liaison entre lex- trmit des filaments dactine des derniers sarcomres des cel lules myocardiques contiges. Les jonctions communicantes, situes dans la portion longitudinale des disque s intercalai- res, forment des voies de faible rsistance permettant la transmissi on intercellulaire directe des signaux contractiles. Chaque cardiomyocyte prsente une dizaine environ de disques in- tercalaires avec ses voisins et de lordre dun millier de jonctions communicantes au total, chaque jonction communicante regrou pant de nombreux canaux intercellulaires.

9.4.3 Il existe trois varits principales de cardiomyocytes

9.4.3.1 Les cardiomyocytes contractiles Quils sigent dans les ventricules ou dans les oreillettes, les cardiomyocytes cont ractiles corres- pondent - des nuances prs - au type de description. 9.4.3.2 Les cellules myoendocrines Pauvres en myofibrilles, ces cardiomyocytes ont galement une fonction endocrine. Ils contiennent de nombreuses vsicules de scrtion, denses aux lectrons, contenant le prcurseur dune famille de polypeptides collectivement connus sous le nom de cardi odilatine ou Facteur Auriculaire Natriurtique, hormones impliques dans la rgulation du volume sanguin et la composition lec- trolytique du liquide extra-cellulaire. Elles entranent une vasodilatation, une baisse de la pression artrielle et une di minution du volume sanguin, avec une considrable augmentation de la diurse et de lli mination urinaire de sodium.

9.4.3.3 Les cellules cardionectrices Ce sont des cardiomyocytes modifis qui constituent le systme de conduction du myoc arde (sys- tme cardionecteur). Ces cellules sont spcialises dans linitiation de lexci tation (qui est myo- gnique) et dans la conduction de lexcitation. On en distingue deux varits principales. Les cellules nodales Elles sont situes dans le nud sino-auriculaire, le nud auriculo-ventriculaire et le tronc du faisceau de His. Nettement plus petites que les cardiomyocytes banals, elles sont pau- vres en myofibrilles et riches en glycogne. Leur aspect fusiform e et leur disposition en- chevtre au sein dun tissu conjonctif abondant et dense pe uvent les rendre difficiles diffrencier des fibroblastes qui les entourent, mais un examen attentif on dcouvre leur striation transversale. Cest l que nat linitiation de chaque battement : le nud sino-auri- culaire est le pace-maker de lexcitation cardiaque. Les cellules de Purkinje Elles sont situes dans les branches du faisceau de His et dans le rseau de Purkinj e. Ce sont des cellules beaucoup plus volumineuses que les cardiomyocytes banals . Leur cytoplasme est abondant, clair, riche en glycogne et en mitochondries, pau vre en myofibrilles. La con- duction de londe de dpolarisation se fait une vitesse 4 5 fois plus leve que dans les cardiomyocytes banals.

9.5 Le tissu musculaire lisse Les cellules musculaires lisses (CML), ou liomyocytes, jouent un rle majeur dans l a vie vgta- tive. Elles se caractrisent par le fait quelles sont le sige de contracti ons spontanes, susceptibles dtre rgules par de nombreux stimuli (nerveux, hormonaux, cytokiniques) et quelles scrtent de nombreuses molcules.

9.5.1 Les protines contractiles ne sont pas organises aussi rigoureusement que dan s le muscle stri

Fusiforme et allonge, la CML comporte un noyau unique central et un cytoplasme qu i prsente deux zones : lune contient les organites vitaux de la cellule et coiffe les deux ples du noyau, lautre occupe la plus grande partie de la cellule et est r emplie de myofilaments. Son cytoplasme renferme des protines contractiles, actine et myosine, qui ne sont pas organises selon lagence- ment prcis et rigoureusement parallle visible dans les myofibrilles du muscle stri. Seuls les mi- crofilaments fins dactine sont visibles en ME de routine ; ils se groupent en faisceaux irrguli ers orients selon le grand axe de la cellule, plus ou moins obliquement par rappo rt celui-ci. Comme dans le muscle stri, les filaments dactine sont associs des molcu les de tropomyosine ; en re- vanche, ils sont dpourvus de troponine. Les microfil aments pais de myosine ne peuvent tre mis en vidence que par des techiques particul ires. Les myofilaments dactine et de myosine satta- chent des zones denses constitue s dalpha-actinine (et donc analogues du matriel de strie Z) et soit disperses dans le cytoplasme soit accoles la face interne de la membrane plasmique. A ces zones denses, sattachent galement des filaments intermdiaires de desmine et de vimentine. Les phnomnes molculaires de la contraction de la CML sont diffrents de ceux de la c ellule musculaire strie ou cardiaque. Le rle du calcium y est galement essentiel, m ais labsence de tro- ponine modifie les modalits de la liaison de lactine la myosin

e. Le premier vnement est lafflux de calcium dans le cytoplasme ; Ca++ provient soit du rticulum endoplasmique lisse soit de lespace extra-cellulaire. Dans ce dernier cas, il pntre travers les canaux-calcique s voltage et/ ou ligand-dpendants du domaine cavolaire de la membrane plasmique. Une fois dans l e cyto- plasme, Ca++ se lie la calmoduline (calcium-binding protein) pour former un complexe Ca++/ calmoduline qui active une enzyme, la kinase des chaines lgres de myosine, qui permet la phophorylation dune des deux chanes de myosine lgres de chaque tte de myosine, lnergie t fournie par un ATP qui devient ADP. Cette phosphorylation entrane le dmasquage du site de liaison de lactine sur la tte de myosine lourde, do sen suit la liaison actine-myosin e et la con- traction de la CML.

9.5.2 La prsence de jonctions communicantes permet la diffusion de lexcitation ent re les CML Selon les varits de CML, et ventuellement selon les conditions fonctionnelles, le n ombre des jonctions communicantes est extrmement variable. Ainsi le nombre des jo nctions communicantes entre les CML utrines (myomtre) varie considrablement selon l es circonstances physiologi- ques. Chez la femelle non-gestante, ou au cours de la gestation jusquau moment du travail, il y a un paralllisme entre dune part la fa ible activit contractile des CML de lutrus, la restriction spa- tiale de cette acti vit contractile et son caractre asynchrone dans les diffrentes parties du myo- mtre et dautre part le fait que les jonctions communicantes et lexpression de la connex ine 43 sont indtectables. En revanche, ds que le travail commence, les contraction s des CML sintensifient, se propagent sur de grandes distances et se synchronisen t dans les diffrentes rgions de lutrus ; paralllement, on observe une expression croi ssante de la connexine 43 et lapparition de jonctions communicantes de plus en pl us nombreuses. Ces vnements sont sous la dpendance dune rgu- lation hormonale et sont dclenchs par laccroissement en fin de grossesse des concentrations destrognes, de pr ogestrone et de prostaglandines.

9.5.3 Entre les jonctions communicantes, le sarcolemme des CML est divis en 2 domaines distincts La membrane plasmique des CML est revtue dune MB qui repose sur la MEC adjacente. 9.5.3.1 Un domaine correspond des plaques dadhrence Ces plaques dadhrence sont impliques dans laccrochage des filaments dactine de la cel lule aux molcules de la MEC. A leur niveau, se trouvent des intgrines et de nombre uses protines cyto- plasmiques. 9.5.3.2 Lautre domaine est appel cavolaire

Ce domaine correspond aux zones situes entre les prcdentes et riches en invaginatio ns vsicu- laires ou cavoles, dont une des principales protines constitutives est la cavoline ; cest au niveau de ce domaine que limmunofluorescence et limmunolectroniqu e permettent de localiser le com- plexe dystrophine-protines associes. Ce complexe prsente des rcepteurs la laminine qui permettent ladhrence de la cellule la MEC. On note galement la prsence de trs nombreux rcepteurs membranaires, en particulier lact lcholine, ladrnaline-noradrnaline (r- cepteurs adrnergiques alpha, bta-1 et surtout b

-2), locytocine, la vasopressine, lhistamine, langiotensine II, aux prostaglandines, etc., ainsi que des canaux calcium ( les uns voltage-dpendants et les autres rcepteurs-dpendants) et des canaux potassiu m (dont louvertu- re entrane une hyperpolarisation et la relaxation de la CML, alo rs que leur fermeture dclenche une dpolarisation et donc la contraction de la CML) .

9.5.4 Les CML scrtent les molcules de leur MB et de la MEC environnante Les molcules constitutives de la MB des CML et de la MEC adjacente sont synthtises et scr- tes par les CML. Ainsi, les CML artrielles peuvent prsenter, selon les condit ions physiologiques et/ou pathologiques, un aspect diffrent : phnotype scrtoire, dvol u la synthse des macromo- lcules de la MEC de la paroi artrielle, ou phnotype contra ctile o prdomine le matriel myofi- lamentaire contractile.

9.5.5 Les CML sont isoles ou groupes en tuniques ou en muscles individualiss 9.5.5.1 CML isoles Les CML peuvent tre isoles, dans la capsule ou le stroma de certains organes plein s (comme la prostate ou les corps caverneux), dans le tissu conjonctif sous-cuta n (au niveau du scrotum ou du mamelon du sein) ou encore au centre des villosits i ntestinales. 9.5.5.2 Tuniques Le plus souvent, les CML sont groupes en couches superposes pour former des tuniqu es qui constituent la musculature lisse des organes creux (vaisseaux sanguins et lymphatiques, tube di- gestif et canaux excrteurs des glandes digestives, arbre tracho-bronchique, voies uro-gnitales, utrus). 9.5.5.3 Petits muscles individualiss Enfin, rarement, les CML se groupent pour former des petits muscles individualiss , comme les muscles arrecteurs des poils (dont la contraction entrane la chair de poule ), les muscles cons- tricteur et dilatateur de liris (qui rglent le diamtre d e la pupille), les muscles ciliaires (qui per- mettent laccomodation dans la visi on de prs). 9.5.6 Il existe en effet de multiples varits diffrentes de cellules musculaires lis ses 9.5.6.1 Les CML viscrales Elles correspondent dans lensemble au type de description pris ci-dessus. Il exis te toutefois des diffrences considrables selon les localisations. 9.5.6.2 Les CML vasculaires Entrant dans la constitution des parois vasculaires (artres, artrioles, veines et veinules), elles sont sensiblement diffrentes de celles des viscres. Les technique

s immuno-histochimiques et histo- enzymologiques permettent de mettre en vidence des diffrences dans la nature des protines cy- tosquelettiques et enzymatiques des CML viscrales et des CML vasculaires. Les pricytes, qui, dans certains capillaire s, entourent les cellules endothliales en tant logs dans un ddoublement de la MB, on t des caractres qui les rapprochent beaucoup des CML ; en particulier, ils sont i m- munoractifs avec les anticorps anti-actine musculaire lisse et sont susceptibl es de se contracter. 9.5.6.3 Les cellules myopithliales Ce sont des CML de forme allonge ou toile qui se moulent sur les acinus de certaine s glandes exocrines comme les glandes sudoripares, lacrymales, salivaires, mamma ires, bronchiques. Leur contraction entrane lexpulsion du produit de scrtion hors de s acinus glandulaires. 9.5.6.4 Les cellules myopithliodes

Les cellules myopithliodes sont des CML ayant subi une diffrenciation particulire les rappro- chant de cellules pithliales glandulaires : elles contiennent la fois du matriel contractile myo- filamentaire et des vsicules de scrtion. Dans lappareil juxt a-glomrulaire du rein, les cellules myopithliodes de la paroi artrielle scrtent la rn . 9.5.6.5 Les myofibroblastes Prsents dans de nombreux organes (comme par exemple dans le testicule, autour des tubes smi- nifres), les myofibroblastes ont - comme leur nom lindique - une morpho logie intermdiaire celle des CML et des fibroblastes. Ils contiennent des filamen ts dactine et de myosine, des fila- ments intermdiaires de vimentine et de desmine . Ils jouent un rle important dans les processus de cicatrisation et de rparation tissulaires. 9.5.7 Les CML sont innerves par le systme nerveux vgtatif, et sont lobjet de rgulation s auto/paracrines

La contraction de la CML ne sexerce pas sous le contrle de la volont. Elle peut tre spontane ou dpendre du systme nerveux vgtatif, dune stimulation hormonale ( titre dex le, les hor- mones dites post-hypophysaires, la vasopressine et surtout locytocin e entranent une contraction des CML) et/ou de modifications locales survenant lintr ieur du muscle lisse lui-mme et en par- ticulier de ltirement. Les molcules agissant par voie paracrine (en particulier celles synthtises par les cellules endothliales des vaisseaux) sont nombreuses, les unes action vasoconstrictive, les autres ac tion vasodilatatrice. Les terminaisons nerveuses qui innervent les CML sont des ter- minaisons nerveuses libres ; il nexiste pas de synapse identifiable. Le degr de contraction des CML de la paroi des vaisseaux est responsable du tonus musculaire lisse des petites artres et artrioles. La vasoconstriction due leur contraction en trane une rduc- tion du calibre des vaisseaux et donc une augmentation des rsistanc es priphriques au courant sanguin ce qui conduit une lvation de la pression artrielle . La bronchoconstriction due la contraction des CML de la paroi des voies ariennes entrane une rduction du calibre des petites bronches et joue un rle de premier plan dans lasthme. Le para- sympathique, par la voie du nerf pneumogastrique, libre de lactylcholine qui, en se liant ses rcepteurs situs dans la membrane des CML, entrane un effet bronchoconstricteur, dont lanta- goniste est latropine. A linverse, les f ibres sympathiques post-ganglionnaires librent leurs ter- minaisons de la noradrna line qui en agissant sur les rcepteurs bta-2 des CML entrane une bronchodilatation. Outre les fibres nerveuses cholinergiques et noradrnergiques, il existe galement p

our inner- ver les CML des fibres peptidergiques multiples et varies. Ces fibres peptidergiques sont parti- culirement importantes dans le systme nerveux entrique q ui innerve les CML du tube digestif.