3.

CALIBRAO E PADRONIZAO
3.1. Calibrao de sinais
Processo que consiste em comparar o sinal medido por um equipamento ou instrumento de medida e o valor da grandeza estabelecido por um padro, ajustando o sinal at que ele coincida com o sinal conhecido para esse padro. Ex: Calibrao de uma balana de laboratrio:

100,000
100,00 0,002 g

100,00g

comparao
102,40g

102,40 g

3.2. Mtodos de padronizao

Padronizao: Processo que determina a relao entre o sinal medido e a quantidade de analito, isto determinar o valor de k.

S A = k CA

Obtida experimentalmente a partir de contendo quantidades conhecidas de analito (solues padro)

3.2.1. Reagentes usados como padres Reagente primrio: reagente de pureza conhecida usado para preparar uma soluo padro de concentrao rigorosamente conhecida. Grau de pureza elevado (> 99,9%) Estvel no estado slido e em soluo No deve ser higroscpico nem voltil Massa molar elevada (minimiza o erro relativo na pesagem) Facilmente disponvel e de baixo custo

Numa balana com incerteza 0,0001g, a pesagem de uma substncia de massa molar igual 50gmol-1 representa uma incerteza de 2x10-6 moles. Para uma substncia com uma massa molar de 5000 g mol-1, a incerteza de apenas 2x10-8 moles

Exemplos de reagentes primrios:

m (K2Cr2O7) = 0,1250g

Dicromato de potssio (K2Cr2O7) Hidrogenaftalato de potssio (aferio do NaOH) M = 294,19g/mol KC8H5O4, M=204,23 g/mol Tetraborato sdio (aferio do HCl) Na2B4O7.10H2O, M=381.37g/mol Carbonato de sdio n (K2Cr2O7) = 4,249 x 10-4 moles V = 250 mL

[K2Cr2O7] = 1,700 x 10-3 M

Reagente secundrio: reagente que no cumpre os requisitos atrs referidos, sendo a sua pureza no estado slido ou concentrao em soluo determinada relativamente a um padro primrio. Ex: NaOH, HCl

3.2.2. Preparao de solues padro

Prepara-se a soluo padro mais concentrada (soluo me) por pesagem e as mais diludas por diluies sucessivas.

Soluo me

CiVi = CfVf

Soluo me

3.2.3. Padronizao externa - mtodo da curva de calibrao Usam-se padres externos (preparados separadamente das amostras) com concentraes conhecidas de analito o mais prximo possveis da realidade da amostra em estudo e constri-se uma curva de calibrao.

CP1
SA,P4

CP2

CP3

CP4

Curva de calibrao
SA,P3

SA,am
SA,P2

Am = amostra P = padro Se a curva for linear K = declive

CA,P1 CA,P2

SA,P1 CA,P3 CA,P4

CA,am

Exemplo: Num mtodo de quantificao do chumbo no sangue obtm-se a seguinte curva de calibrao:

SA = 0,296 CA + 0,003 (CA em ppb)

Qual a concentrao de chumbo na amostra se SA,am = 0,397?

C A,am =

SA,am 0,003 0,296

0,397 0,003 = = 1,33 ppb 0,296

Idealmente, SA deveria ser igual a zero quando CA = 0. A existncia de um termo extra na equao da curva de calibrao resulta da incerteza na medio do sinal dos padres.

Quando a matriz da amostra muito diferente da dos padres pode acontecer que a mesma concentrao de analito origine respostas diferentes na matriz dos padres e na matriz da amostra. Este efeito designado por efeito de matriz.

Curva de calibrao obtida com a matriz dos padres

SA
Sinal

Se a matriz da amostra for conhecida deve-se ajustar a matriz dos padres da amostra.

Curva de calibrao obtida com a matriz da amostra

SA

Se a matriz da amostra for desconhecida deve-se optar por outro mtodo de padronizao.
CA
concentrao

3.2.4. Mtodo da adio de padro A) Volume fixo

Quantidades conhecidas de analito so adicionadas amostra. A leitura do sinal feita em vrias solues, todas elas contendo o mesmo volume de amostra e concentraes diferentes de padro adicionado. 1) Adiciona-se a cada balo o mesmo volume de amostra (V0) de concentrao CA,am(i) 3) Adiciona-se a cada um dos bales solvente at marca

2) Adiciona-se a cada balo ( excepo do balo 1) diferentes volumes de padro com concentrao CA,p(i)

CA,am(f) ; CA,p(f)
Concentrao final do analito na amostra Concentrao final do analito no padro

SA,am = k CA,am(f) SA,am+p = k CA,am(f) + k CA,p(f)

SA,am SA,am + p
C A,p (f) = C A,p (i) Vp Vf

C A,am (f) C A,am (f) + C A,p (f)

C A,am (f) = C A,am (i) V0 Vf

SA,am + p C A,am (f) = SA,am C A,am (f) + SA,am C A,p (f)

A) Volume varivel

SA,am + p = SA,am +

SA,am C A,am (f)

C A,p (f)
SA,am+p 3 2

+ a x

CA,p(f) CA,am(f) (abcissa na origem)

Quando SA,am+p = 0 CA,p = -CA,am(f)

C A,am (i) = C A,am (f)

Vf V0

Adicionar Vp de padro CA,p(i)

V0

amostra

Vf

amostra + padro

C A,am (i)

C A,am (f) + C A,p (f)

SA,am = k CA,am(i)

SA,am+p = k CA,am(f) + k CA,p(f)

SA,am SA,am + p

C A,am (i) C A,am (f) + C A,p (f)

SA,am + p C A,am (i) = SA,am C A,am (f) + SA,am C A,p (f)

SA,am + p =

SA,am V0 Vf

SA,am C A,am (i)

C A,p (f)

Multiplicar todos os termos por (Vf/V0)

SA,am Vf Vf SA,am + p V = SA,am + C (i) C A,p (f) V A,am 0 0

b +

Quando y = 0:

Vf C A,p (f) V = C A,am (i) 0

SA,am+p (Vf/V0)

Vf 0 = SA,am + C A,p (f) C A,am (i) V 0 SA,am

CA,p(f)(Vf/V0)

CA,am(i)
(abcissa na origem)

3.2.5. Mtodo do padro interno Muitas vezes a resposta do instrumento varia de ensaio para ensaio, no sendo por isso reprodutvel. Noutros casos pode ocorrer perdas de amostra durante a sua preparao. Nesses casos torna-se necessrio adicionar um padro diferente do analito a todas as amostras e padres. Como o analito e o padro sofrem o mesmo tratamento, a reprodutibilidade no afectada.

S A = k A CA

S PI = k PI C PI

SA S PI

SA k A CA = S PI k PI C PI SA CA = F S PI C PI
Factor de resposta Quando CPI no constante

CA C A ou C PI

3.2.5. Regresso linear em curvas de calibrao A utilizao de uma Calibrao Analtica pressupe o conhecimento da funo matemtica que descreve a relao sinal vs. concentrao, independentemente da forma como esta foi obtida.
Tcnica de regresso linear (mtodo mnimos quadrados): Tcnica matemtica que permite encontrar a equao da recta que melhor descreve o conjunto de dados experimentais. Usualmente: Minimiza o somatrio do quadrado dos desvios ou erros residuais

Sinal

Valor experimental

y = ax + b

i y
Erro residual

yi
a= n xi yi xi y i n x
2 i

( x )

Valor previsto pela recta de regresso

2 2 i

y b=

a xi n

Recta de regresso

Concentrao analito