MINISTRIO DA DEFESA EXRCITO BRASILEIRO DEPARTAMENTO DE CINCIA E TECNOLOGIA INSTITUTO MILITAR DE ENGENHARIA CURSO DE MESTRADO EM CINCIA DOS MATERIAIS

CLUDIA MARQUES

TRATAMENTO DE SUPERFCIES DE IMPLANTES DE TITNIO

Rio de Janeiro 2007

INSTITUTO MILITAR DE ENGENHARIA

CLUDIA MARQUES

TRATAMENTO DE SUPERFCIES DE IMPLANTES DE TITNIO

Dissertao de Mestrado apresentada ao Curso de Mestrado em Cincia dos Materiais do Instituto Militar de Engenharia, como requisito parcial para a obteno do ttulo de Mestre em Cincia dos Materiais. Orientador: Prof. Carlos Nelson Elias D.C.

Rio de Janeiro 2007

C2007 INSTITUTO MILITAR DE ENGENHARIA Praa General Tibrcio, 80 Praia Vermelha Rio de Janeiro - RJ CEP: 22290-270

Este exemplar de propriedade do Instituto Militar de Engenharia, que poder inclu-lo em base de dados, armazenar em computador, microfilmar ou adotar qualquer forma de arquivamento. permitida a meno, reproduo parcial ou integral e a transmisso entre bibliotecas deste trabalho, sem modificao de seu texto, em qualquer meio que esteja ou venha a ser fixado, para pesquisa acadmica, comentrios e citaes, desde que sem finalidade comercial e que seja feita a referncia bibliogrfica completa. Os conceitos expressos neste trabalho so de responsabilidade da autora e do orientador.

M357

Marques, Cludia Tratamento de Superfcies de Implantes de Titnio. - Rio de Janeiro : Instituto Militar de Engenharia, 2007. 107p : il., graf., tab. : - cm. Dissertao (mestrado) - Instituto Militar de Engenharia, 2007. 1. Titnio. 2. Implantes de Titnio, tratamento. I. Ttulo. II. Instituto Militar de Engenharia CDD 620.189322

INSTITUTO MILITAR DE ENGENHARIA

CLUDIA MARQUES

Tratamento de Superfcies de Implantes de Titnio

Dissertao de Mestrado apresentada ao Curso de Mestrado em Cincia dos Materiais do Instituto Militar de Engenharia, como requisito parcial para a obteno do ttulo de Mestre em Cincia dos Materiais. Orientador: Prof. Carlos Nelson Elias D.C. Aprovada em 30 de julho de 2007 pela Banca Examinadora:

_______________________________________________________________ Prof. Carlos Nelson Elias D.C. do IME - Presidente

_______________________________________________________________ Prof. Andr Luiz Pinto D. C. do IME

_______________________________________________________________ Prof. Jos Brant de Campos D. C. do CBPF

Rio de Janeiro 2007

Ao meu namorado, Rodrigo, motivador permanente neste caminho que exigiu de mim o esprito de perseverana.

AGRADECIMENTOS Agradeo a todas as pessoas que me incentivaram, apoiaram e possibilitaram esta oportunidade de ampliar meus horizontes. Meus familiares, amigos, mestres e, especialmente aos Professores Elias, meu orientador e Brant, constante colaborador na busca por resultados. Em especial aos meus pais, Sinsio e Maria Carmen e ao meu namorado Rodrigo, sempre prontos a darem o apoio incondicional. Agradeo tambm aos funcionrios do IME, principalmente ao tcnico Joel, do laboratrio de Microscopia e ao secretrio Hctor, do laboratrio de Biomateriais; Bacharel em qumica Silvia, do CBPF; CSN; UFF-Volta Redonda, em especial ao doutorando Fbio; UFRJ, por colaborarem diretamente para a realizao do meu trabalho e Conexo Sistema de Prtese e Implantes, a qual forneceu todas as amostras e CAPES por viabilizar este trabalho.

SUMRIO

LISTA DE ILUSTRAES .................................................................................... .............08 LISTA DE TABELAS ............................................................................................................09 LISTA DE ABREVIATURAS ................................................................................ .............10 1 2 3 3.1 3.2 3.3 3.3.1 3.3.2 3.3.3 3.4 3.4.1 3.4.2 3.4.3 3.4.4 3.4.5 3.4.6 INTRODUO ........................................................................................... .............13 OBJETIVOS ................................................................................................ .............18 REVISO BIBLIOGRFICA .................................................................. .............19 Resposta Tecidual dos Materiais ................................................................. .............19 Biomateriais e Titnio .................................................................................. .............20 Tratamento da Superfcie do Titnio ........................................................... .............23 Tratamento com CaO e Fosfato ................................................................... .............24 Tratamento com Flor ................................................................................. .............26 Bioatividade e Tratamentos Superficiais ..................................................... .............30 SBF............................................................................................................... .............34 Histria do SBF............................................................................................ .............34 Cuidados para a Preparao do SBF ........................................................... .............36 Confirmao das Concentraes Inicas do SBF ........................................ .............37 Preservao do SBF ..................................................................................... .............37 Modelos de Fludos Biolgicos e Esterilizao .......................................... .............38 Modificaes na Preparao do SBF .......................................................... .............42

3.4.6.1 Proposio de Mller ................................................................................... .............42 3.4.6.2 Proposta de Barrere ..................................................................................... .............44 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 Efeitos do Tratamento de Superfcie na Bioatividade do Titnio ................ .............46 Osteoinduo ................................................................................................ .............48 Osteocondutividade do Titnio Bioativo ..................................................... .............48 Superfcie de Titnio Oxidada Anodicamente ............................................. .............55 Superfcie de Titnio Tratada com Soluo de Clcio ................................... .............61 Efeitos da Implantao de Flor no Titnio..................................................................64

3.11 3.12

Efeitos da Titnia na Formao dos Compostos Bioativos........................... .............65 Rugosidade e Molhabilidade......................................................................... .............70

3.12.1 Rugosidade ................................................................................................... .............70 3.12.2 Molhabilidade................................................................................................ .............76 4 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 5 5.1 5.2 5.3 5.4 6 7 8 MATERIAIS E MTODOS...................................................................... .............79 Preparao para a Soluo de SBF .............................................................. .............79 Preparao das Superfcies dos Implantes e Pastilhas de Titnio ............... .............81 Caracterizao da Rugosidade, Morfologia e Molhabilidade ..................... .............82 Imerso em SBF ......................................................................................... .............83 Anlise por Difrao de RaioX e Observao no MEV............................... .............83 RESULTADOS ........................................................................................... .............85 Rugosidade .................................................................................................. .............85 Molhabilidade............................................................................................... .............87 Difrao de RaioX ....................................................................................... .............87 Anlise no Microscpio Eletrnico de Varredura........................................ .............91 DISCUSSO ............................................................................................... .............96 CONCLUSES .......................................................................................... ............101 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ..................................................... ...........102

LISTA DE ILUSTRAES

FIG.3.4.5 Micrografias obtidas por microscopia eletrnica de varredura..............................40 FIG.3.4.5.1 Espectro EDS.........................................................................................................41 FIG.3.7 FIG.3.7.1 FIG.3.7.2 FIG.3.8 FIG.3.8.1 FIG.3.9 FIG.3.11 Superfcie de titnio poroso...................................................................................50 Micrografias de MEV............................................................................................53 Avaliao em MEV dos poros do grupo AH-HCl ................................................54 Morfologia da superfcie do titnio e oxidados anodicamente..............................57 Superfcie das amostras de Ti oxidadas anodicamente em H2SO4........................58 Difratograma das amostras de Ti no-modificada e Ti modificada......................62 Curva corrente x voltagem com tempo................................................................. 66

FIG.3.8.2 Morfologia da superfcie das amostras de Ti imersas em SBF..............................59

FIG.3.11.1 Imagens de MEV das superfcies das amostras................................................... .67 FIG. 3.11.2 Modelo de difrao de raioX dos filmes de titnia andica..................................67 FIG.3.11.3 Micrografias das amostras imersas em SBF por 20 dias.......................................68 FIG.3.11.4 Micrografias e perfis lineares de partculas precipitadas.....................................69 FIG.4.1 FIG.5.1 FIG.5.3 FIG.5.3.1 FIG.5.3.2 FIG.5.4 FIG.5.4.1 FIG.5.4.3 FIG.6.1 FIG.6.2 FIG.6.3 Precipitado de SBF no cilindro de titnio anodizado............................................81 Perfis de rugosidade das amostras.........................................................................86 Difratograma das pastilhas de titnio com tratamentos superficiais .....................88 Difratograma das pastilhas de titnio....................................................................89 Difratograma das pastilhas de titnio com tratamentos.........................................90 Morfologia das superfcies originais de implantes e pastilhas..............................91 Morfologia das superfcies dos implantes de titnio............................................92 EDS de pastilhas de titnio com tratamento Vulcano...........................................95 Perfil da rugosidade das amostras analisadas........................................................97 Perfil da superfcie de discos de titnio.................................................................98 Difratograma da superfcie dos implantes tratados com ac. actico......................99

FIG.5.4.2 Morfologia das superfcies das pastilhas de titnio................................................94

LISTA DE TABELAS

TAB.3.4.1 TAB.3.4.3 TAB.3.4.5

Composio qumica do SBF..............................................................................36 Concentraes inicas.........................................................................................37 Composio inica (mM) de HBSS, SBF e Plasma ..........................................39

TAB.3.4.6.1 Solues SBF propostas por Mller....................................................................43 TAB.3.4.6.2 Composio (mM) do plasma sangneo humano (HBP)..................................45 TAB.4.1 TAB.5.1 TAB.5.2 TAB.6.1 TAB.6.2 TAB.6.3 Quantidades e purezas dos reagentes..................................................................80 Valores dos parmetros de rugosidade ...............................................................85 Valores de ngulos de contato............................................................................87 Parmetros de rugosidade..................................................................................97 Parmetros de rugosidade (Elias e cols.,2004)..................................................97 Valores de ngulos de contato (Elias e cols., 2005)...........................................99

LISTA DE ABREVIATURAS

AAS AFM ASTM CBPF CIP CSN DMSO EDS EDTA FHA HBP HBSS IBED IME MEV PSHA RMGI SBF SEM UFF UFRJ XPS

Atomic Absorption Spectrometry Atomic Force Microscopy American Society for Testing Materials Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior Centro Brasileiro de Pesquisas Fsicas Cold Isostatic Pressing Companhia Siderrgica Nacional Dimethylsulfoxide Energy Dispersive Espctrometry Ethylene Diamine Terta-acetic acid Fluoridated Hydroxyapatite Human Blood Plasma Hank`s Balanced Salt Solution Ion Beam-enhanced deposition Instituto Militar de Engenharia Microscopia Eletrnica de Varredura Plasma Spray Hydroxyapatite Resine Modificated Glass Ionomer Simulated Body Fluid Scanning Electron Microscopy Thin-film X-ray Diffractometry Universidade Federal Fluminense Universidade Federal do Rio de Janeiro X-ray Photoelectron Spectroscopy

CAPES -

TF-XRD -

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RESUMO

A substituio de ossos, articulaes e dentes por biomateriais usualmente feita em cirurgias para aliviar a dor e recuperar a funo do tecido afetado. Boa resistncia ao desgaste, boa resistncia corroso no meio corpreo, no provocar toxicidade e longa permanncia no local so algumas das caractersticas que um biomaterial deve possuir para ter sucesso nas aplicaes como implantes e prteses. Porm, no corpo humano a degenerao ssea, inflamaes nas articulaes, bem como o desgaste ou corroso das prteses e implantes, freqentemente trazem complicaes clnicas. No presente trabalho, amostras de pastilhas e implantes dentrios osseointegrveis na forma de cilindro com roscas, fabricados com titnio comercialmente puro ASTM grau 4 foram analisados com quatro tipos de superfcies usadas comercialmente: usinada, superfcie tratada com cido, superfcie anodizada e superfcie tratada com flor. Os objetivos deste estudo foram comparar a influncia dos tratamentos superficiais do Ti cp na deposio de ons aps a imerso em soluo de fludo corpreo simulado; analisar a influncia do tempo de imerso (10, 20 e 30 dias) das amostras de titnio na deposio de ons e avaliar as morfologias das amostras antes e aps a imerso usando diferentes mtodos de caracterizao das superfcies (difrao de raioX, MEV, rugosidade e molhabilidade). Os resultados mostraram que a superfcie com melhor resultado de deposio de ons da soluo foi a anodizada; apesar dos tempos de imerso terem sido relativamente baixos, observou-se um resultado significativamente positivo no que se refere aos tratamentos anodizado, com cido e com flor; nas amostras imersas em soluo por 10 dias no houve significativa presena de precipitados.

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ABSTRACT

The replacement of bones, articulations and tooth, for biomaterials are usually done in surgeries to relieve the pain and to recover the function of the affected tissue. High-wear resistance, high corrosion resistance in the human body environment, no toxicity and long time in the place are some the main characteristics that a biomaterial should present to have success in the application. However, in the human body the bone degeneration, inflammations in the articulations, as well as the wear or corrosion of the prostheses and implants, frequently happens and brings clinical complications. In the present work, samples of discs and screw dental implants manufactured with commercial pure titanium ASTM degree 4 were analyzed with four types of surfaces treatment used commercially: machined, acid etched, anodized and imersed in fluorine. The goal of this study had been compare the influence of the surface treatments of Ti cp in the deposition of ons after immersion in simulated corporeal fluid solution; to analyze the influence of immersion time (10, 20 and 30 days) of titanium samples in the deposition of ons and to evaluate the morphologies of the samples before and after the immersion in using different methods of characterization of the surfaces (X-ray diffraction, SEM, rugosity and wettability). The results had shown that the surface with better result of ons deposition from solution was the anodized one; despite the immersion times having been relatively low, a significantly positive result was observe for the treatments anodized, with acid and with fluorine; in the immersed samples per 10 days in solution it did not have significant presence of precipitated.

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1 INTRODUO

Desde o sculo XVI, os materiais metlicos tm sido utilizados em aplicaes como implante. Metais nobres como o ouro, a prata e a platina, em funo de suas propriedades mecnicas inadequadas para a maioria das aplicaes e devido ao custo elevado, tiveram srias restries. Atualmente, existem trs grupos de materiais metlicos em amplo uso como biomateriais, so eles: os aos inoxidveis, as ligas base de cobalto, especialmente o Vitallium com 66% de Co, 28% de Cr e 6% de Mo e as ligas base de titnio. O metal titnio e suas ligas tm sido usados com sucesso como biomateriais, devido s suas propriedades mecnicas, qumicas, excelente resistncia corroso e biocompatibilidade (HAMADA et al., 2002). Um biomaterial qualquer material, sinttico ou natural, que pode ser usado como um sistema ou parte de um sistema que oferece, aumente, ou substitua algum tecido, rgo ou funo do corpo. J a biocompatibilidade de um dispositivo mdico implantvel por longo perodo compreende a capacidade do dispositivo cumprir com sua funo destinada, com o desejado grau de incorporao no hospedeiro, sem provocar efeitos local ou sistmico indesejveis determinados requisitos (WILLIAMS, 1999). Os biomateriais devem possuir entre eles pode-se citar: biocompatibilidade, essenciais,

biofuncionalidade ( a capacidade de o material cumprir com uma reao apropriada a um hospedeiro especfico) (WILLIAMS, 1999), bioadeso, propriedades mecnicas e qumicas compatveis com quelas dos ossos. Os estudos com ligas de titnio levaram adio de diferentes componentes, tais como: zircnio, alumnio, nibio, tntalo e platina, surgindo ento novas ligas. Para acelerar os mecanismos envolvidos na osseointegrao, os implantes de titnio so freqentemente recobertos com hidroxiapatita e fosfatos de clcio, Ca3(PO4)2, dentre outros, visando promover uma ligao qumica com o osso (BARRERE et al., 2002). Entretanto, no est completamente explicada a resposta celular camada de apatita e o titnio, especialmente as funes desenvolvidas pelo clcio e o radical fosfato na interao entre as clulas e as camadas (FENG et al., 2004). De acordo com a literatura, o osso adjacente ao implante recoberto por hidroxiapatita, Ca10(PO4)6(OH)2, principal componente mineral do osso e do dente, mais organizado que o osso adjacente aos materiais empregados como implante e

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apresenta um grau de mineralizao mais elevado. O recobrimento com hidroxiapatita (HA) vem sendo usado devido ao fato deste material cermico permitir que os implantes de titnio (Ti) ou suas ligas adquiram uma unio osso-implante superior quelas obtidas com superfcies de implantes sem recobrimento (SOUZA, 2003). Desde que Brnemark et al. (1977) descreveram o mecanismo e os efeitos da osseointegrao, h quase quatro dcadas, diversas pesquisas biomdicas e de materiais tm procurado encontrar um desenho ideal da superfcie de implante dentrio capaz de garantir uma longa permanncia de ancoragem ao tecido sseo (VANZILLOTTA et al., 2006). Segundo Brnemark et al., a osseointegrao consiste em uma conexo estrutural e funcional direta entre o tecido sseo e a superfcie de um implante submetido ao carregamento. O desenvolvimento da interface osso-implante depende das interaes diretas da matriz ssea e dos osteoblastos (clulas produtoras de tecido sseo) com os biomateriais. Alm disso, a ligao celular parece ser muito sensvel s variaes na superfcie de composio qumica e topografia do titnio (forma e rugosidade) comercialmente puro grau 4 (FENG et al., 2004). Caractersticas superficiais como: energia de superfcie, rugosidade, topografia e aspectos qumicos, como pH, so condies importantes para as interaes do implante com o tecido sseo do hospedeiro (NAYAB et al., 2005). O processo de crescimento de clulas sobre a superfcie do implante se faz to dependente da variao de rugosidade, que implantes com superfcie no estado como usinada apresentam proliferao de clulas, preferencialmente, ao longo das marcas de usinagem. Trata-se de uma rugosidade com forte direcionalidade. Em contrapartida, nas superfcies submetidas ao tratamento para mudana da morfologia e rugosidade observou-se uma menor direcionalidade quanto rugosidade e, conseqentemente uma melhor interao das clulas na superfcie dos implantes. Outro aspecto a ser considerado em relao ao efeito da microestrutura superficial na adeso celular o tipo de clula. Existem clulas com caractersticas de rugofilia, cujas superfcies rugosas so preferidas, como osteoblastos, macrfagos, clulas epiteliais e leuccitos e, clulas que so mais atradas por superfcies lisas, como clulas gengivais (fibroblastos) (ELIAS et al., 2004). Com o objetivo de criar substitutos biolgicos para restaurar, manter ou melhorar a funo de diversos tecidos, estratgias como a reposio atravs de material sinttico e o uso de substncias capazes de induzir clulas ou tecidos implantados em local apropriado so utilizadas. O tecido sseo um dos poucos tecidos com capacidade de regenerao. Isto se deve habilidade dos fatores de crescimento em direcionar as clulas-tronco para as vias

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condrognica e osteognica, e ao papel das foras mecnicas estimulando a remodelao ssea (SICCA et al., 2000). Materiais bioativos, incluindo hidroxiapatita, bioglass e vidro cermico AW, possuem propriedades osteocondutivas, podendo aderir diretamente ao osso vivo, via camada de apatita. reconhecido que biomateriais no tm carter osteoindutivo na ausncia de agentes osteoindutivos adicionais, tal como as protenas morfogenticas sseas (BMP). Porm, certos biomateriais com fosfato de clcio foram reconhecidos por serem osteocondutores por possurem uma estrutura especfica porosa. Eles induzem a formao ssea em stios extraesquelticos sem a necessidade de clulas osteognicas adicionais ou BMP. A implantao em tecido mole no fornece prova conclusiva de induo ssea pelo biomaterial. Alm disso, o mecanismo de osteoinduo pela cermica de fosfato de clcio (HA) no claro. Como os biomateriais osteocondutores contm o on clcio e o radical fosfato, so considerados os seguintes fatores importantes: a) composio qumica do biomaterial, b) propriedades de dissoluo especfica do material e c) a morfologia de sua superfcie. Clinicamente, o desempenho ideal do biomaterial consiste em possuir capacidades de bioatividade e osteoconduo, relacionadas com suas propriedades mecnicas e qumicas (FUJIBAYASHI et al., 2004). A osteoinduo uma das principais propriedades atribudas aos enxertos sseos. O termo refere-se ao processo pelas quais as clulas-tronco mesenquimais, presentes no tecido circunjacente ao local do enxerto, so induzidas ao processo de recrutamento, proliferao e diferenciao de clulas, visando a regenerao de determinado tecido. Esse processo pode ser desencadeado por uma srie de substncias, como por exemplo, os fatores de crescimento, considerados potentes indutores celulares (ALEXANDER, 1987; WEIGEL, 1996; MARTINEZ, 1999 in GIORDANO, ALMEIDA, 2003). Na osteoinduo, as clulas mesenquimais so estimuladas a se transformarem em condroblastos e osteoblastos que produzem a matriz ssea mineralizada. Estas modificaes so promovidas por vrios fatores, incluindo as protenas morfogenticas do osso (BMP) (STEVENSON, 1998; MARTINEZ, 1999 in GIORDANO, ALMEIDA, 2003). Por outro lado, a osteoconduo define-se como um processo pelo qual o enxerto serve passivamente como arcabouo para migrao de vasos sangneos e deposio de osso novo. Isto , um processo de direcionamento da formao tecidual produzido por uma estrutura fsica. Alm disso, a osteoconduo pode resultar da osteoinduo (ALEXANDER, 1987; WEIGEL, 1996; MARTINEZ, 1999 in GIORDANO, ALMEIDA, 2003). Os materiais

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osteocondutores, geralmente inorgnicos, permitem aposio de um novo tecido sseo na sua superfcie, requerendo a presena de tecido sseo pr-existente como fonte de clulas osteoprogenitoras (SICCA et al., 2000). Outro termo importante para se conceituar osteognese. Este denota os elementos celulares do enxerto que sobreviveu ao transplante e esto ativamente produzindo osso novo (ALEXANDER, 1987 in GIORDANO, ALMEIDA, 2003). Entretanto, segundo Weigel (1996), embora algumas clulas do enxerto possam sobreviver transferncia, as principais fontes de clulas para esta fase so as clulas osteognicas e osteoprogenitoras do hospedeiro. Os materiais osteognicos, os quais so orgnicos, possuem capacidade de estimular a formao de osso diretamente a partir de osteoblastos (SICCA et al., 2000). Diversas pesquisas tm sido desenvolvidas na rea odontolgica, para modificar a morfologia da superfcie de implantes com o intuito de modificar a rugosidade superficial, melhorar a biofixao endssea, favorecer a cintica do processo de neoformao ssea e obter sucesso na osseointegrao. Entre esses procedimentos pode-se citar: a) deposio de uma camada de hidroxiapatita; b) ataque cido; c) jateamento com partculas de xido de titnio (TiO2); d) microranhuras; e) oxidao andica; f) implantao inica (VANZILLOTTA et al., 2006) e g) jateamento seguido de imerso em cido (ELIAS et al., 2004). Informaes pr-clnica a respeito de jateamento com posterior ataque cido em implantes de Ti comercialmente puros indicaram que a extenso da formao ssea nesta superfcie maior do que nos implantes comercialmente puros usinados, sem tratamento superficial (COOPER et al., 2006). Portanto, a importncia do tratamento da superfcie do implante comprovada a partir de estudos, os quais demonstraram que o mecanismo de osseointegrao de implantes apenas usinados, inicia-se ao seu redor e, no sobre a sua superfcie. Portanto, a cicatrizao no local desses implantes, ocorre a partir de um processo de mineralizao gradativo em direo ao implante (SENNERBY e ERICSON, DELIGIANI et al. in ELIAS, 2004). A superfcie de um implante somente usinado no indutora, necessitando a deposio de materiais bioativos, os quais facilitaro a formao de pontes de clcio e fsforo (ELIAS et al., 2004). Nas aplicaes do titnio, a implantao com ons de nitrognio (nitretos) tem sido usada visando melhorar a resistncia corroso e ao desgaste. ons de clcio (Ca++) tambm tm sido implantados na superfcie do Ti para aumentar a bicompatibilidade, resultando em aumento do crescimento sseo in vivo. No entanto, a implantao de Ca++ no mostrou efeitos

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benficos na viabilidade ou na atividade funcional das clulas sseas, no que diz respeito ao aumento da resistncia corroso (NAYAB et al., 2005). Outro processo que pode ser utilizado para verificar se houve ou no formao de tecido sseo em torno do implante dentrio, analisando o efeito do on flor (F-) na superfcie do implante jateada com partculas de TiO2. Segundo COOPER et al. (2006), o tratamento do implante jateado com on flor aumenta a aderncia osteoblstica e, com isso, ocorre o aumento do contato osso-implante. Atravs da avaliao morfolgica por microscopia eletrnica de varredura (MEV), observou-se uma proliferao celular maior, em 24 horas, nas superfcies tratadas com on flor em relao quelas sem flor. Portanto, o tratamento com flor tem sido utilizado para aumentar a taxa de proliferao das clulas osteoblsticas. Alm daqueles processos mais comuns de modificao da superfcie do titnio a fim de obter melhor osseointegrao, outros processos especiais tambm tem sido utilizados, como a imerso do titnio ou suas ligas em solues aquosas, por exemplo, de NaOH (hidrxido de sdio) e H2O2 (perxido de hidrognio) (HAMADA et al., 2002). Ultimamente, um mtodo simples para estimar o potencial de envolvimento do osso com diferentes materiais consiste na imerso desses biomateriais no fluido corpreo simulado (SBF). De acordo com Kokubo et al. (2006), um requisito essencial para o crescimento sseo in vivo no material sinttico a formao de uma camada de hidroxiapatita sobre a superfcie do biomaterial. Esta apatita permite a ativao de sinais das protenas e clulas para iniciarem a cascata de eventos que resultam na formao ssea.

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2 OBJETIVOS

Os objetivos deste trabalho so: a) Comparar a influncia de tratamentos qumicos superficiais (ataque com cido, tratamento em soluo contendo fluoretos e anodizao) do Ti comercialmente puro grau 4 na deposio de ons aps a imerso em soluo SBF; b) c) Analisar a influncia do tempo de imerso (10, 20 e 30 dias) das amostras de titnio na deposio de ons e, Avaliar as morfologias das amostras antes e aps a imerso em SBF usando diferentes metodologias de caracterizao das superfcies (difrao de Raios-X, microscopia eletrnica de varredura, rugosidade e molhabilidade).

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3 REVISO BIBLIOGRFICA

Pacientes podem sofrer dor e perda parcial ou completa da funcionalidade de partes do corpo devido s doenas degenerativas e inflamatrias. Em alguns casos aconselhvel o uso de implantes e enxertos. A substituio de ossos, articulaes e dentes por biomateriais usualmente feita em cirurgias para aliviar a dor e recuperar a funo do tecido afetado. A exigncia por uma qualidade de vida e o desenvolvimento de novos biomateriais utilizados em cirurgias ortopdicas reduziram drasticamente a rejeio do organismo hospedeiro, mas principalmente evitaram infeco a curto prazo, melhoraram a biocompatibilidade a longo prazo e permitiram determinar as limitaes dos materiais. Boa resistncia ao desgaste, boa resistncia corroso no meio corpreo, no provocar toxicidade ao corpo e longa permanncia no local so algumas das principais caractersticas que um biomaterial deve possuir para ter sucesso na aplicao. Porm, no corpo humano a degenerao ssea, inflamaes nas articulaes, bem como o desgaste ou corroso das prteses e implantes, freqentemente ocorrem e trazem complicaes clnicas (HE e HAGIWARA, 2006).

3.1 RESPOSTA TECIDUAL DOS MATERIAIS

Antes das aplicaes os biomateriais so freqentemente analisados e testados in vitro e in vivo quanto s suas propriedades osteocondutivas e indutivas. Para a osteoinduo necessrio haver clulas capazes de se diferenciarem em clulas formadoras de osso. O parmetro mais confivel para a diferenciao final e formao ssea consiste na produo de clulas intermedirias controladas pela matriz extracelular calcificada. Nos estudos dos biomateriais, a quantidade de matriz mineralizada formada no material s confivel quando comparada capacidade osteoindutiva dos materiais. Um dos mtodos empregados para avaliar a capacidade osteoindutiva do biomaterial atravs do emprego de solues simuladoras do meio corpreo. Nestes ensaios importante estar certo que a deposio de minerais no conseqncia de precipitaes espontneas devido aos altos nveis de ons de clcio e fosfato existentes na soluo empregada no estudo, mas sim, um processo de clulas intermedirias ocorrendo sob condies fisiolgicas que tm sido equivalente ossificao

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in vivo. Calcificao distrfica do biomaterial deve ser distingida da mineralizao metablica de clulas intermedirias. Diferentes parmetros de expresses precoces (avaliao de nveis de fosfatase alcalina e formao de colgeno tipo 1 (um)) e tardias (osteocalcinas) de osteoblastos foram correlacionados. Segundo Declercq (2005), um meio deve ser criado para atrair o potencial de formao de clulas sseas. Essas clulas devem receber a correta estimulao para sintetizar e mineralizar a matriz extracelular orgnica controlada durante o percurso. Nas avaliaes da capacidade osteoindutivas dos biomateriais executadas in vitro freqentemente so usadas linhas de clulas osteoblsticas, bem como clulas primrias. Como parmetros para o potencial osteoindutivo de biomateriais, clulas so analisadas nos nveis de expresso de fosfatase alcalina, sntese de colgeno e potencial de mineralizao. A base da diferenciao final das clulas em osteoblastos a formao da matriz extracelular calcificada. Entretanto, a deposio de sais de clcio no ocorre somente no processo de ossificao, mas tambm em tecidos degradados e necrticos (calcificao distrfica ou no-metablica). Especialmente, quando cultivam-se clulas diferenciadas. Normalmente, a cultura pode vir acompanhada por precipitaes de sais de clcio, os quais no so representativos para a formao ssea. Alm disso, os altos nveis de fosfatase alcalina criam a possibilidade de ocorrer secreo, resultando na clivagem de -glicerofosfato e subseqentemente na precipitao no especfica do mineral (DECLERCQ et al., 2005).

3.2 BIOMATERIAIS E TITNIO

Diversos biomateriais tm sido utilizados em cirurgias ortopdicas e odontolgicas. Outras aplicaes incluem dispositivos de fixao de vrtebras, discos vertebrais, alm de stents cardiovasculares. As listas dos biomateriais incluem os aos inoxidveis, ligas Co-CrMo, ligas de titnio e outras ligas com aplicaes especficas, como Au-Pd. O titnio e as ligas base de titnio possuem biocompatibilidade, resistncia corroso, baixo mdulo de elasticidade e baixa densidade. Devido a estas qualidades, o titnio o material de escolha para as cirurgias de implantes odontolgicos e ortopdicos. A forma do implante outro fator importante a ser considerado para a substituio do tecido duro, pois havendo concentrao de tenso, o fenmeno de reabsoro do osso natural pode acontecer, promovendo o enfraquecimento da interface osso-implante, esta a causa principal do insucesso da osseointegrao. Quando isso ocorre necessrio realizar uma cirurgia de

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reparo e reavaliar toda a metodologia aplicada. Uma causa bem documentada de insucesso de prteses ortopdicas a necrose ssea, esta tem sido associada degradao da prtese e liberao de fragmentos dos componentes articulares para o meio. Alguns desses fragmentos migram para a regio do implante e, com isso facilitam a morte de clulas sseas (osteoblastos) (RACK e QAZI, 2006). O titnio comercialmente puro e as ligas de Ti, como Ti-6Al-4V, so freqentemente usadas em cirurgias ortopdicas. O mdulo de elasticidade do titnio e da liga Ti6Al4V varia entre 100 e 120GPa e do osso entre 10 e 30GPa. A diferena do mdulo de elasticidade da prtese e do osso desfavorvel para a sade do osso e seu remodelamento. Para resolver este problema e melhorar as propriedades mecnicas e biolgicas, novas ligas de titnio tm sido desenvolvidas para aplicaes biomdicas. O mtodo normal para se conseguir um melhor desempenho das ligas de titnio quanto s propriedades mecnicas e biolgicas modificar sua composio. Alguns elementos que formam a fase , como Nb, Ta, Mo e Zr e, outros que estabilizam a fase , como Fe, Cr e Sn so usualmente adicionados nas ligas de titnio para formar completa ou parcialmente a estrutura-, a qual possui baixo mdulo de elasticidade e contribui para diminuir a diferena entre o mdulo de elasticidade da liga e do osso. Alm disso, certos elementos de liga como Cu, Co, Ni e Si so utilizados para aumentar a resistncia mecnica das ligas. As ligas biomdicas de Ti modificadas tambm exibem alta resistncia ao torque. Quando o tamanho do gro reduzido em escala nanomtrica, a resistncia deformao aumenta significativamente. Por outro lado, a frao volumtrica do contorno de gro ir tambm aumentar significativamente e alterar outras propriedades. Para as ligas com tamanho de gro em escala nanomtrica, devido alta quantidade de defeitos (como vacncias, discordncias) esperado ter no contorno do gro menor mdulo de elasticidade do que nos interiores dos gros. Portanto, o contorno de gro tambm contribui para reduzir o mdulo de elasticidade da liga. A fase -dendrtica contribui com a plasticidade e o baixo mdulo de elasticidade, enquanto a matriz (constituinte de fases eutticas) contribui para aumentar a resistncia mecnica. Em ligas de Ti livres de nquel (como Ti-Cu-Fe(Co)-SnNb) possvel obter uma microestrutura bimodal, a qual tambm exibe resistncia ao torque e baixo mdulo de elasticidade, revelando que essas ligas possuem potencial para aplicaes biomdicas (HE e HGIWARA, 2006). Os efeitos dos mtodos de passivao no comportamento da dissoluo do Ti-6Al-4V foram estudados e observou-se que h reduo significativa da taxa de dissoluo do on, a

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que foi atribuda presena da fase de transio anatsio-rutilo na superfcie do xido. Chang e Lee estudaram os efeitos qumicos da liga de Ti e caractersticas nanosuperficiais (caractersticas qumicas da nanosuperfcie dos xidos, grupo hidroxila anftero adsorvido nos xidos e espessura dos xidos) na biocompatibilidade in vitro do Ti-6Al-4V em termos de adsoro de clcio (Ca) e fsforo (P), assim como a dissoluo de on em SBF. O estudo mostrou que as amostras modificadas possuam menor percentual de Alumnio e Vandio nos xidos da nanosuperfcie em comparao com a liga Ti-6Al-4V e, tambm indicou que os elementos qumicos cobre (Cu) e nquel (Ni) no mudaram a capacidade de adsoro de Ca e P, quando comparadas com amostras imersas por 16 dias em soluo Hank EDTA. No entanto, a diferena na espessura no pareceu exercer uma influncia significativa na adsoro de Ca e P aps 16 dias imersos em SBF. O titnio comercialmente puro com baixo teor de ferro (Fe) minimiza as interaes adversas entre o implante e o corpo humano. Apesar desses atributos positivos, a resistncia mecnica do Ti cp permanece abaixo do limiar normal considerado para substituio de tecido duro. Na verdade, o desejo de aumentar a resistncia mecnica dos implantes tem levado ao aumento do uso de Ti cp grau 4 para biodispositivos, pois o titnio grau 4 tem maior resistncia mecnica do que o grau 2 devido a maior quantidade de oxignio e ferro em soluo slida. Yao et al. mostraram que a estrutura de granulao ultrafina do titnio comercialmente puro grau 2, influencia na funcionalidade das clulas in vitro cultivadas na superfcie do implante. Esse resultado fornece evidncia do aumento da adeso osteoblstica aps 4 horas exposta no titnio cp com gro ultra-fino, comparado ao titnio convencional grau 2. Os autores sugeriram que esses resultados podem ser relatados pelo aumento do nmero de contornos de gros em locais de materiais com granulao ultra-fina ou para um aumento na atividade local reativa promovendo adeso celular (RACK e QAZI, 2006). Os implantes removidos do organismo humano apresentam clara correlao entre a corroso do metal e a resposta tecidual. Alm disso, os ons liberados pela degradao da prtese podem afetar a resposta celular em locais sadios do corpo humano. O efeito da dissoluo dos ons depende da taxa de difuso, atravs da camada de xidos do metal e da dissoluo dos xidos. A resistncia superior corroso do Ti em relao a outros metais tem sido atribuda pela existncia de uma fina e estvel camada de xido passivante de TiO2 (xido de titnio). Apesar das caractersticas dos xidos dos metais em termos qumicos,

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presena de grupo hidroxila anftero adsorvido e a espessura da camada de xidos serem importantes na biocompatibilidade dos materiais, elas no so totalmente compreendidas. A camada de TiO2 hidratada conhecida por possuir no mnimo dois tipos de grupos hidroxila. A hidroxila acidfera com oxignio duplamente coordenado com o Ti e o grupo Ti-OH bsico, simplesmente coordenado. O grupo OH acidfero tende a agir como um ction no local da troca, enquanto o grupo bsico da OH pode agir como um nion no local da troca. Healy e Ducheyne sugeriram que o Ti no possua contato direto com o sistema biolgico, ao contrrio, ele tinha uma transio gradual de volume do metal: xido estequiomtrico, Ca e P substitudos por xido hidratado, lipoprotena adsorvida, glicolipdeos, proteoglicanas, filamentos de colgeno e feixes para clulas. Alguns trabalhos detectaram o aumento de espessura do xido com o tempo de implantao.

3.3 TRATAMENTOS DA SUPERFCIE DO TITNIO

Titnio e hidroxiapatita so largamente usados na odontologia como biomateriais. O titnio possui resistncia corroso em fluidos fisiolgicos, enquanto a hidroxiapatita possui a capacidade de interagir quimicamente com o tecido sseo humano. No entanto, os materiais cermicos apesar de possurem superfcie bioativa no podem ser usados como implantes devido a sua fragilidade. Por outro lado, o titnio tem boas propriedades mecnicas, porm sua interao com os tecidos no to alta como a hidroxiapatita e fosfatos de clcio. O titnio forma espontaneamente uma camada de fosfato de Ca durante a exposio em SBF, porm a espessura da camada muito fina, aps 30 dias em soluo de fluido corpreo (SBF), a espessura dessa camada de aproximadamente poucos nanmetros. Modificando-se a superfcie do titnio, a formao de hidroxiapatita pode ser aumentada. Um dos mtodos usados para a modificao da superfcie do titnio a implantao inica. A tcnica de implantao inica til para produo de camadas superficiais mais reativas, as quais so integradas no substrato e possuem uma composio especfica. Hanawa et al. constataram que a implantao de clcio melhora a capacidade do titnio induzir a formao de precipitados de fosfato de clcio. Porm, as avaliaes da resistncia corroso aps a implantao de clcio na superfcie do titnio mostraram que h formao de pites de corroso durante a polarizao andica.

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3.3.1 TRATAMENTO COM CaO E FOSFATOS

A capacidade de alguns materiais cermicos, entre eles os fosfatos de Ca, de se ligarem aos tecidos sseos atribuda s propriedades de seus componentes CaO e P2O5. Por conseguinte, pode-se esperar que com o enriquecimento da camada de xido da superfcie do titnio com CaO e P2O5 possvel aumentar a capacidade de haver a nucleao do fosfato de clcio. Na anlise de espectroscopia de fotoeltron de raio X do clcio implantado no titnio revelou que o clcio implantado possui a forma de CaO, enquanto o fsforo implantado no titnio est parcialmente oxidado. Espera-se que a implantao em dois passos, a primeira implantao com clcio e a segunda com fsforo, permita formar uma superfcie mais bioativa. Wieser et al. avaliaram o efeito da implantao de clcio e fsforo, em duas etapas, na composio qumica da camada da superfcie do titnio e constataram que na camada havia formado xido de clcio, porm no tinha fosfato de clcio. Pham e colaboradores estudaram a bioatividade do titnio sujeito a implantao de clcio e fsforo seguido de aquecimento a 500C em atmosfera de oxignio. A camada de superfcie obtida foi enriquecida com CaO e P2O5 e, quando imersa em soluo simulada de fluido corpreo mostrou maior capacidade de nucleao da hidroxiapatita, em relao ao titnio no modificado. A implantao em dois passos de ons clcio e fsforo sobre o titnio tem sido bem combinada com vrios tratamentos de implantao com o objetivo de produzir camadas contnuas de hidroxiapatita. Pham e colaboradores submeteram o titnio implantado com ons ao aquecimento hidrotrmico, enquanto Baumann e colaboradores realizaram a implantao de clcio a uma temperatura de 600C. As camadas de hidroxiapatita obtidas nos experimentos mostraram uma boa adeso ao substrato. Alm disso, na anlise de difrao de raios X os anis no definidos indicaram que a camada superficial era amorfa e, pela observao no MEV, constatou-se que as superfcies das amostras foram cobertas com precipitados, os quais no formaram uma camada contnua. Aps imerso em SBF, as amostras apresentaram aumento no nmero e tamanho dos precipitados e tambm observou-se a presena de oxignio alm de clcio, fsforo e titnio. A profundidade de penetrao do oxignio menor do que dos elementos implantados. Enquanto a profundidade de penetrao do clcio de aproximadamente 100nm, a do

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fsforo de 60nm e a do oxignio menor. A concentrao mxima de clcio encontra-se na superfcie e constante at a profundidade de 30nm, o que sugere o local onde se realiza a reao qumica com o titnio. Os perfis de concentrao dos elementos presentes na camada de superfcie depois de expostos soluo SBF indicou que a composio da superfcie da amostra foi alterada. As concentraes dos principais elementos (Ti e Ca) diminuram, o contrrio ocorreu com as concentraes do fsforo e oxignio. Essas mudanas podem ser atribudas formao de precipitados de fosfato de clcio (KRUPA et al., 2005). Portanto, provvel que a modificao da camada de superfcie pela implantao dos ons de clcio e de fsforo melhore a resistncia corroso e a bioatividade do titnio. Embora as doses de clcio e fsforo fossem as mesmas (1017 ons/cm2), a concentrao de clcio na superfcie foi quatro vezes maior do que a do fsforo. A concentrao de clcio constante abaixo da profundidade de aproximadamente 20nm; isso sugere que o clcio presente na camada est na forma de composto qumico. Atravs das anlises em XPS (espectroscopia fotoeltron de raio X), mostrou-se que este composto era CaO (xido de clcio) e, que durante a implantao, parte do fsforo resistiu oxidao e outra parte ocorria em forma de fosfatos. Espera-se que a presena de CaO e PO4-3 ou P2O5 estimule a precipitao de fosfato de clcio pela soluo SBF. As avaliaes da capacidade de nucleao da hidroxiapatita na superfcie do titnio tm mostrado que a nucleao depende da quantidade de grupos hidroxila presentes na superfcie do titnio. Hanawa et al. observaram que a quantidade de grupos hidroxila na superfcie do titnio com clcio implantado maior que no titnio no-implantado. O mecanismo de formao de fosfatos de clcio na superfcie metlica de titnio ocorre em dois estgios: primeiro, h a adeso do on fosfato da soluo ligado ao grupo hidroxila atravs do envolvimento com o hidrognio e, ento os ons fosfatos atraem os ons de clcio da soluo. A maior quantidade de grupos hidroxilas na superfcie, o maior nmero de fosfato adsorvido e, por sua vez, o maior nmero de ons clcio atrados da soluo tm como conseqncia, o aumento do nmero de precipitados. Quando h presena de clcio na camada implantada, gradativamente ocorre difuso na regio ao redor da soluo, levando ao aumento do pH e da concentrao de clcio na superfcie do titnio e, com isso ocorre a nucleao dos fosfatos de clcio (KRUPA et al., 2005). Por outro lado, pesquisadores tambm constataram que a aplicao de potenciais acima de 2,5 V o clcio implantado no titnio fica sujeito a pite de corroso. Por essa razo, comeou-se a implantar fsforo, o qual um constituinte dos fosfatos.

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Ferdjani e colaboradores avaliaram a distribuio do fsforo na camada implantada com dose de 5x1016 P+/cm2 e energia de 130 keV. Os tomos de fsforo ocupam os stios intersticiais nessa camada. O efeito da implantao do on fsforo na superfcie do titnio sobre a composio qumica da camada implantada foi avaliado atravs de amostras implantadas com doses de 1x1015 a 3x1017 P+/cm2 com uma energia de 20 keV. Observou-se que em doses abaixo de 1016, o fsforo no apresenta reao qumica com o titnio, enquanto que em doses equivalentes e acima de 1017 P+/cm2, h formao de uma nova fase TiP. A quantidade da fase TiP aumentava de acordo com o acrscimo da dose de fsforo. Os efeitos da energia do on fsforo e a dose de fsforo na composio qumica, alm da estrutura da camada implantada na superfcie foram analisados por Wieser et al. Os parmetros que eles usaram para a implantao foram de 3x1017 P+/cm2 com energia de 30 keV e 5x1017 P+/cm2 com uma energia de 195 keV. A espessura da camada implantada era de 60nm com uma energia de 30 keV e, 250nm com uma energia de 195 keV. Pela anlise de difrao de raio X, no se identificou compostos qumicos de fsforo, mas sim uma camada superficial parcialmente amorfa (KRUPA et al., 2002).

3.3.2 TRATAMENTO COM FLOR

A presena da camada de xido de titnio estvel e densa formada na superfcie do Ti responsvel pela resistncia corroso do metal em relao aos fluidos corpreos. Os ons de flor so agressivos camada de xido protetora do titnio e suas ligas (LIN eYEN, 2006). Por isso, os fluoretos contidos nos cremes dentais comerciais e gis profilticos usados oral e topicamente para prevenir cries dentais ou aliviar a sensibilidade devem ser limitados a 0,1-2% (1000-20000 ppm). A presena de ons flor tpicos pode iniciar uma severa degradao do Ti e suas ligas atravs do processo de corroso. No entanto, outro mtodo usado para aumentar a biocompatibilidade do Ti o contato de sua superfcie com o on flor e seus compostos (Huang, 2003). Turpin et al. in Huang (2003) estudaram a influncia dos cimentos fluoretados acidificados (como os cimentos de ionmero de vidro) na passivao do Ti. Observaram que os cimentos de ionmero de vidro fluoretados aumentavam a suscetibilidade do Ti corroso. Quando o flor est presente na saliva artificial, o tempo para ocorrer a falha por fadiga do metal significativamente reduzido, provavelmente por causa da ocorrncia de

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pites de corroso provocados por reaes superficiais. Em uma rea em que os ons de flor no esto presentes, o Ti resiste ao processo de corroso na forma de fendas e pites para valores baixos de pH. Acrescentando flor na soluo faz-se com que o Ti possua maior potencial ativo e menor resistncia corroso. Segundo Di Carlo et al. in Huang (2003), as prteses dentrias poderiam ser atacadas topicamente por gel contendo flor em solues Ringer neutra e cida. Isso foi comprovado a partir de uma soluo contendo mais do que 20ppm de flor, o que pode levar a destruio da camada de xido protetora formada na superfcie do titnio. Bosker et al. relataram que 20ppm de flor poderia causar corroso por desgaste na superfcie do metal e, apresentar pites de corroso aps imerso em cremes dentais contendo flor e maior extenso de corroso ps-imerso em gel fluoretado. De acordo com Nagakawa et al. in Huang (2003), quando a concentrao de fluoreto de sdio (NaF) na soluo maior do que 30ppm, a passivao do filme de xido de titnio destruda. Horasawa e Marek in Huang afirmaram que h descolorao do titnio em soluo com 1% de cloreto de sdio (NaCl), bem como em baixas concentraes (5-15mg/cm2) de ons de flor liberados pelo uso de cimentos de ionmero de vidro dental. Sabe-se que logo aps a cirurgia h a formao de uma camada de protenas adsorvida na superfcie do implante dentrio quando o material desse implante introduzido na cavidade oral. A presena dessa camada de protena pr-adsorvida muito importante para a biocompatibilidade do implante. Portanto, as protenas que naturais da saliva humana podem ter influncia significativa na resistncia corroso dos implantes de Ti e suas ligas (Huang, 2003). Segundo Cook et al. in Huang (2003), em relao ao Ti cp, Ti13Nb13Zr e Ti6Al7Nb, a liga Ti-6Al-4V apresenta menor perda de peso pela degradao por corroso quando testada em uma soluo salina contendo albumina em relao soluo somente salina. A protena albumina bovina em fosfato no estado-tampo (PBS) aumenta a resistncia corroso do Ti-6Al-4V, no entanto induz maior corroso nas ligas Ti-13Nb-13Zr e Ti-6Al-7Nb. A adio da protena albumina na soluo PBS reduz a influncia do pH na corroso da liga Ti-6Al-4V. Quando se lava a cavidade oral, aps o uso de creme dental ou gel profiltico contendo flor, o teor de protenas naturalmente presentes na saliva reduz e a resistncia corroso das ligas odontolgicas nos meios orais alterada. Observa-se que as curvas de polarizao potenciodinmicas da liga Ti-6Al-4V na saliva artificial contendo flor, com e sem adio de albumina, exibem comportamento de transio de ativo para passivo, exceto

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quando a concentrao de NaF aumentada acima de 0,5%. Aumentando a concentrao de NaF entre 0,01% e 0,5% h reduo na resistncia corroso, isto , ocorre maior corroso, especialmente em alta concentrao de NaF (>0,15%). A adio de albumina entre 0,01 e 0,2%, aumenta a resistncia corroso no meio fluoretado e independe da concentrao de F-. Alm disso, a proteo do filme passivo de TiO2 na liga Ti-6Al-4V destruda pelos ons de flor atravs da formao de Na2Ti F6, quando a concentrao de NaF superior a 0,1%. Este comportamento evitado pela adsoro de albumina dentro da superfcie do metal atravs do mecanismo de ligao do clcio (HUANG, 2003). desejvel a liberao de flor pelos materiais usados em aplicaes odontolgicas, como anteriormente citadas. Isso porque, materiais que liberam grande concentrao de flor possuem tambm grande potencial de preveno das cries. O ionmero de vidro um material largamente aceito e que satisfaz bem os requisitos para a aplicao odontolgica. No entanto, possuem a desvantagem de ter baixa resistncia fratura. Por isso, seu uso limitado em reas com baixas tenses. J o ionmero de vidro modificado com resina (RMGI) um material semelhante resina compsita, com propriedades fsicas aceitveis e a liberao de flor comparvel ao do ionmero de vidro convencional. Uma maneira de atingir isso incorporar flor inorgnico, como NaF, no sistema de monmero. Este mtodo depende, sobretudo, da difuso de gua a partir da dissoluo da matriz do polmero do composto de flor, com subseqente migrao externa do flor. Porm, essa migrao pode provocar vazios na matriz e, com isso, enfraquecer a estrutura do material. Outro caminho seria pela disperso na matriz polimrica, de agentes solveis em gua. A difuso da gua na matriz polimrica pode resultar na liberao de on de flor. Mas, devido baixa solubilidade ocorre perda de volume e, atravs da porosidade possvel ocorrer a liberao de flor. Para impedir a sada do flor, este deve ser encapsulado em material insolvel e preencher a matriz polimrica. Mesmo em materiais com trincas, a liberao de flor ocorre, porm ao longo do tempo a concentrao de flor liberada ser menor se comparada com a do ionmero de vidro convencional. O flor orgnico vem sendo avaliado como aditivo para matrizes polimricas (Glasspoole, Erickson e Davidson, 2001). Kadoma et al. in Glasspoole (2001) descreveram o uso de co-polmeros de flor metacrilol (MF)-metil metacrilato (MMA), nos quais a hidrlise do grupo de cido fluordrico resulta na liberao de flor. Esta baseada no sal acrlico-amino-HF, pelo qual o flor pode ser liberado pelo ataque de outro on negativo ao redor dos fluidos. As taxas de liberao do flor variam entre 6 e 9g/g/dia e so detectadas nos compostos contendo t-

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butilamino etil metacrilato cido fluordrico (t-BAEMA/HF). Hamer e Suh estenderam o trabalho de Rawls para substituir o flor com morfolinoetil metacrilato cido fluordrico (MEM/HF) com a liberao de flor do co-monmero. Observaram que este monmero possui aproximadamente liberao de flor duas vezes maior. Aasen et al. in Glasspoole (2001) exploraram a influncia de baixas concentraes do composto flor nos sistemas de monmero e observaram liberao de flor inferior a dos ionmeros de vidro convencionais. J, Glasspoole, Erickson e Davidson usaram altos nveis do composto flor com duas formulaes de monmero. A liberao de flor pelos dois sistemas de monmeros, cada um contendo 15% em peso de flor orgnico foi medida por 13 dias. Os valores cumulativos em 13 dias foram de 3,08 e 4,36g/cm2. A solubilidade inicial e os testes de liberao de flor indicaram claras vantagens do sistema de monmero mais hidroflico, BisGMA/HEMA, em relao ao sistema BisGMA/TEGDMA. As vantagens esto na capacidade de incorporar mais flor orgnico e aumentar a taxa de liberao desse flor. Com isso, espera-se uma reduo nas propriedades fsicas devido necessidade de um cruzamento de agentes eficiente como o TEGDMA. Alm disso, foi esperado que as propriedades fsicas se adequassem s aplicaes odontolgicas. A primeira diferena entre o composto experimental e os ionmeros de vidro que o composto tem uma taxa de liberao de flor linear, enquanto o ionmero de vidro apresenta uma taxa de liberao alta e precoce, a qual diminui com o passar do tempo. As taxas de liberao de flor tm sido analisadas em sistemas polimricos utilizando aditivos de flor orgnico, assim como pelo fluoralumnio silicato de vidro adicionado matriz resinosa. A quantidade liberada de flor cumulativa pode no ser a melhor medida da eficincia de liberao de flor pelo material, ao contrrio, o melhor indicativo so as taxas de liberao de flor. Para as primeiras duas semanas, a taxa de liberao de flor pelo ionmero de vidro excede quela do composto experimental. J, aps duas semanas, o composto experimental apresentou liberao semelhante ou maior que os ionmeros de vidro avaliados. Portanto, para uma longa proteo contra a desmineralizao, o composto experimental forneceu proteo comparvel ou melhor do que quela apresentada pelos ionmeros de vidro. A queda precoce da liberao do flor pelos ionmeros de vidro pode tambm fornecer benefcios ao longo do tempo, desde que as lentas liberaes sejam mantidas. Uma aplicao desse material uslo ao redor dos bracktes ortodnticos com o objetivo de controlar a desmineralizao prxima a eles. A alta taxa de liberao de flor acima de um ano ajusta-se com o tempo de

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tratamento ortodntico e as propriedades fsicas so adequadas para determinadas aplicaes (GLASSPOOLE, ERICKSON e DAVIDSON, 2001).

3.3.3 BIOATIVIDADE E TRATAMENTOS SUPERFICIAIS

Na ltima dcada, diferentes modificaes na superfcie do titnio foram empregadas para obter implantes com maior capacidade de envolvimento com o osso. A alta bioatividade do titnio deve-se basicamente ao tratamento de superfcie e, conseqentemente formao da camada de xido de titnio, a qual favorece o envolvimento do titnio com o osso natural aps a imerso em soluo de fluido corpreo simulado. Diversas tcnicas para a preparao do filme de titania TiO2, como oxidao andica, oxidao trmica, tratamento qumico, sol-gel e deposio de feixe acrescido de on (IBED) tm sido pesquisadas (Lin e Yen, 2006). O sol-gel convencional usualmente obtido pelo mtodo de recobrimento por imerso. O qual consiste de vrios ciclos de sinterizao para obter a espessura necessria. A deposio eletroltica catdica um mtodo importante no processamento cermico, o qual fornece um processo em baixa temperatura, baixo custo e assegura alta pureza. Portanto, esse mtodo pode ser utilizado para empregar camadas uniformes no titnio e suas ligas, alm de outros materiais para aplicaes que envolvem o osso. Lin e Yen prepararam a camada de anatsio TiO2 preparada por deposio eletroltica (EDT) e realizaram caracterizaes por difrao de raio X (XRD), espectrmetro fotoeltron de raio X, microcopia eletrnica de varredura (SEM), microscopia de fora atmica (AFM), testes de imerso, polarizao cclica dinmica e cultura de clulas. As imagens tridimensionais e as anlises da microscopia de fora atmica permitiram analisar a nanoestrutura superficial do filme biocermico. Para a anlise da resistncia corroso, as amostras no tratadas e tratadas com deposio eletroltica foram recozidas a 300C (EDT 300) e as com deposio eletroltica em 700C (EDT 700) foram polarizadas potenciodinamicamente em soluo de saliva artificial e 1000ppm de soluo de saliva contendo flor. Alm disso, as amostras EDT 300 e EDT 700 foram imersas em 35ml de SBF por 1, 3, 7, 14 e 21 dias, em pH 7,4 a 36 + 1C, respectivamente. O precipitado e a taxa de dissoluo durante a imerso foram medidos pela variao do peso por unidade de rea. Observou-se que a intensidade de difrao do anatsio aumentou com a temperatura de recozimento e, gradativamente

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transformou-se em rutilo a 500C. Quando a temperatura atingiu 600C, a intensidade de difrao do anatsio diminuiu e a do rutilo aumentou. A partir da frmula Scherer identificou-se a camada de deposio eletroltica da estrutura nanocristalina. O tamanho cristal de anatsio aumentou com o acrscimo da temperatura, de 11,25nm (EDT 300) para 18,12nm (EDT 700). Enquanto o tamanho do cristal do rutilo aumentou de 27,62nm (EDT 600) para 39,46nm (EDT 700). Atravs das imagens de microscopia de fora atmica, a rugosidade (Ra) da amostra EDT 300 foi de 3,587nm e, foram identificados nanocristais. Nas amostras EDT 500 foram observadas nanotrincas, assim como nas amostras EDT 700, porm esta apresentou maior nmero. A rugosidade aumentou para 10,158nm, e observouse o aumento do tamanho do cristal com o aumento da temperatura. Por outro lado, sabe-se que as nanotrincas so atribudas s tenses trmicas, as quais aumentam a probabilidade de exposio do substrato titnio, quando a temperatura ultrapassa 500C. O comportamento in vivo das cermicas bioativas (biovidro e hidroxiapatita), as quais envolvem-se ao osso vivo espontaneamente atravs de uma camada de apatita biologicamente ativa e conectada ao osso, pode ser estimado utilizando testes in vitro com a imerso em fluidos corpreos simulados. Para os testes de imerso, a perda de peso das amostras EDT 300 foi maior do que nas amostras no tratadas e EDT 700. O decrscimo nas concentraes de Ca e P da soluo SBF, determinadas por difrao de raioX correlacionado com a formao de apatita nas amostras, o que significa que o cristal de apatita cresce com o consumo de Ca e P da soluo SBF. Alm disso, a bioatividade in vivo da titania atribuda ao grupo hidroxila e carga negativa do anatsio TiO2. Portanto, a superfcie do anatsio apresenta carga negativa e combina-se efetivamente com a carga positiva dos ons de Ca na soluo. Novas combinaes com cargas negativas de ons de P foram formadas para produzir fosfato de clcio amorfo, este transforma-se espontaneamente em apatita devido a uma fase estvel no meio corpreo que a apatita possui. A nanofase cermica (EDT 300) possui maior rea superficial para fornecer adsoro de Ca e P, aumentando a nucleao da apatita. Por isso, a eficincia da deposio de apatita no somente devido ao grupo funcional Ti-OH, mas por uma complexa forma atribuda a sua nanoestrutura e cristalografia (LIN e YEN, 2006). Ao contrrio da hidroxiapatita, que possui propriedades mecnicas indesejveis para aplicaes em substituio a tecidos duros ou dispositivos ortopdicos, a fluorapatita [FA, Ca10(PO4)6F2] possui maior estabilidade trmica do que a simples hidroxiapatita e permanece intacta nas temperaturas de sinterizao. A fluorapatita, ligada a hidroxiapatita,

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tambm um material biocomptivel. O flor pesquisado para estimular a formao da matriz extracelular in vitro e aumentar a unio ssea in vivo. A hidroxiapatita que contm flor [FHA, Ca10(PO4)6(OH)2-2xF2x] tem o on flor parcialmente substitudo por hidroxila na hidroxiapatita ou pode ser considerada uma soluo slida de fluorapatita e hidroxiapatita. O efeito do comportamento de sinterizao nas propriedades mecnicas da hidroxiapatita tem sido largamente estudado. Ruys e colaboradores in Qu e Wei (2006) obtiveram densidade de sinterizao de 95% e resistncia flexo biaxial de aproximadamente 80MPa aps a sinterizao da hidroxiapatita comercial a 1150C. A maior densidade de sinterizao (99%) e a resistncia flexo de 200MPa foram obtidas por Jarcho et al. in Qu e Wei (2006) utilizando p de hidroxiapatita no-calcinada. O comportamento durante a sinterizao e as propriedades mecnicas da hidroxiapatita fluoretada foram investigados por Gross e Rodrguez-Lorenzo e Gross e Bhadang. Aps estudos com as hidroxiapatita fluoretadas (FHA) sinterizadas entre 1150 e 1250C observou-se que a concentrao de flor (0,2~0,8 mol F/mol de apatita) no favorvel aos materiais a serem usados como biomaterial devido propriedades mecnicas inadequadas (Qu e Wei, 2006). Qu e Wei (2006) analisaram por difrao de raio X discos de hidroxiapatita contendo flor e -triclcio (-TCP) compactados isostaticamente a frio (IPM) e usinados. As amostras de hidroxiapatita fluoretadas (IPM FHA-0 e IPM FHA-1) foram parcialmente decompostas para -TCP em 1200C, as outras amostras permaneceram com suas estruturas intactas. Aps a sinterizao em temperaturas maiores (1300 e 1400C) foi detectada a presena da fase -TCP nas amostras de FHA-0 e FHA-1. Aparentemente, a estabilidade das amostras melhorou com o aumento da concentrao de flor nas amostras. Em temperaturas de sinterizao relativamente altas tambm ocorreu a decomposio das amostras que no foram submetidas presso isosttica a frio e moagem. Para permitir a incorporao dos ons de flor na estrutura da hidroxiapatita todas as amostras contendo flor foram preparadas a partir da hidroxiapatita pura (FHA-0) atravs do processo de pH cclico. O tamanho das partculas das amostras contendo flor foi significativamente reduzido. O tamanho da partcula do p de FHA foi igual a metade do tamanho daquele da hidroxiapatita pura e, a densidade a verde foi aproximadamente 15% maior. Aps 20h no moinho de bolas, foi possvel a reduo aproximada de 20% no tamanho das partculas contendo flor. Porm, a reduo de 65% no tamanho da FHA-0 foi devido ao maior tamanho inicial da partcula. Densidades a verde semelhantes foram obtidas para todas as

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amostras IPM, inclusive pela IPM FHA-0, alm de terem sido maiores do que quelas sem moagem e compactao isosttica a frio. A compactao isosttica a frio (CIP) um mtodo de compactao de p para obter corpos verdes com densidade uniforme, o processo pode eliminar as fraturas e formao de defeitos detectados na presso uniaxial. Alm disso, a presso isosttica a frio reduz o tamanho dos poros, melhorando assim a densidade sinterizada e as propriedades mecnicas das amostras cermicas. Tanto o moinho de bolas quanto a presso isosttica a frio favorece o aumento na densidade aps a sinterizao das amostras de hidroxiapatita contendo flor. Portanto, a concentrao de flor possui um impacto significativo na estabilidade trmica e na sinterizao das amostras de FHA, sendo extremamente afetada a tenso de flexo biaxial das amostras. Com o aumento da concentrao de flor, as amostras ficaram termicamente estveis, mas com a sinterizao a estabilidade reduziu. Por outro lado, a baixa concentrao de flor das amostras (FHA-0 e FHA-1) decompostas em altas temperaturas de sinterizao apresentou estabilidades trmicas inferiores, resultando em microestruturas porosas, baixa densidade aps sinterizao e menor resistncia tenso de flexo biaxial. Somente as amostras com mdia concentrao de flor como FHA-2 e FHA-3, apresentaram comportamento de sinterizao e propriedades mecnicas balanceadas (QU e WEI, 2006). Os implantes metlicos com a camada de hidroxiapatita obtida com tratamento de plasma-spray exibem propriedades desejveis, como biocompatibilidade e bioatividade e, por isso so usados nas aplicaes clnicas. No entanto, a falha mecnica na interface entre a camada de hidroxiapatita e o substrato metlico indesejvel, o qual pode levar a invalidade do implante recoberto por hidroxiapatita. Por esse motivo, tm sido feitas tentativas para melhorar a adeso e a estabilidade a longo prazo da camada. A melhora da estrutura da camada de hidroxiapatita e composio so obtidas atravs do uso adequado dos parmetros que controlam o spray ou por tratamento trmico. Outra alternativa efetiva formar camadas compostas. Pesquisas recentes mostram que a adeso da camada depositada e a fora coesiva dos implantes com o organismo podem ser aumentadas pela combinao da hidroxiapatita com o titnio e com o emprego da titania TiO2, da zircnia ZrO2 ou da alumina Al2O3, como aditivos de reforo. Alm disso, a transformao de fase induzida pela tenso na zircnia, de tetragonal para a fase monoclnica pode ocorrer durante o tratamento de plasma-spray, o que pode resultar no aumento da resistncia da camada e da tenacidade fratura. Devido adio da segunda fase, mudanas de fase na camada obtida em alta temperatura so

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provveis de acontecer. Por isso, faz-se necessrio compreender a influncia da adio do titnio e da titnia nas propriedades da camada depositada. Por outro lado, a otimizao dos parmetros do plasma-spray para produzir camadas de hidroxiapatita so usualmente baseados na relao entre parmetros de spray e as caractersticas da camada. O titnio e a titnia foram incorporados ao p de hidroxiapatita e depositados por plasma-spray. No somente o titnio, mas tambm o rutilo foram simultaneamente detectados nas partculas compostas, as quais indicam que o titnio severamente oxidado durante o plasma-spray. A camada de TiO2 formada pelas partculas compostas parece ter uma boa biocompatibilidade e induz a nucleao da apatita na camada superficial aps imerso em SBF. Entretanto, a transformao de fase do titnio para xido de titnio pode resultar em uma adeso inferior entre o titnio e a hidroxiapatita. A oxidao do titnio pode ser extremamente reduzida pelo uso atmosfera protetora. A partcula de HA pura contm mais fases amorfas que partcula composta HA/Ti. A adio de titnio hidroxiapatita pode levar a uma transformao de fase do titnio para TiO2 durante o plasma-spray, principalmente com o uso de plasma-spray com alta energia. J a adio de TiO2 pode influenciar a decomposio de HA, porm no h produto da reao qumica entre eles (como CaTiO3). No entanto, a anlise em MEV com EDS mostrou a ocorrncia de interdifuso de elementos entre HA e TiO2, os quais so favorveis ao aumento da fora coesiva de partculas na camada composta. Quando comparada com a camada HA/ TiO2, a camada HA/HA+ TiO2 possui maior percentual de fases decompostas, como triclcio e xido de clcio. O tratamento trmico a 650C por 2 h, melhora a cristalinidade da camada pela transformao de fase amorfa na hidroxiapatita (SUN et al., 2006).

3.4 SBF

3.4.1 HISTRIA DO SBF

Em 1980, Hench e colaboradores mostraram que quando o biovidro era implantado no meio corpreo havia formao de uma camada rica em SiO2 e um filme de fosfato de clcio na superfcie do biovidro, a qual permitiu o desenvolvimento do osso vivo. Os estudos foram

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complementados por outras pesquisas, as quais concluiram que a formao in vivo do filme de fosfato de clcio poderia ser reproduzida em soluo no estado-tampo de trishidroximetilaminometano e cido hidroclrico em pH 7,4. Por outro lado, Kitsugi et al. mostraram que a camada rica em SiO2 no se formava no vidro cermico. Neste caso, ocorria a formao de uma camada de fosfato de clcio na superfcie do biovidro colocado no corpo vivo, permitindo o envolvimento com o osso. Subseqentemente, Kokubo e colaboradores usando microdifrao de raioX, identificaram essa camada de fosfato de clcio como apatita cristalina. Alm disso, em 1990, eles demonstraram que a formao de apatita in vivo na superfcie do vidro cermico poderia ser reproduzida em SBF acelular com concentraes semelhantes a do plasma sanguneo humano, porm no em soluo-tampo de tris. Em anlises da apatita formada na superfcie do biovidro imerso em SBF, por meio de difrao de raioX de filme fino (TF-XRD), espectroscopia de infravermelho de transformao Fourier, microscopia eletrnica de varredura e microscopia eletrnica de transmisso mostraram que a composio e estrutura era semelhante ao osso mineral. Com isto, esperavase que os osteoblastos possussem capacidade para induzir a proliferao e diferenciao e produzir apatita e colgeno na superfcie. Assim, a apatita formada pode envolver a superfcie e formar osso ao redor. Conseqentemente, h reao qumica entre o material e o osso vivo atravs da formao da camada de apatita. Baseado nesses resultados, em 1991 foi proposto que para o material ser envolvido por osso vivo essencial que ocorra a formao de apatita sobre a sua superfcie, alm da formao de apatita in vivo poder ser reproduzida em SBF. Em 2003, Oyane et al. identificaram a diferena que ocorre com o uso do SBFconvencional (TAB. 3.4.1) e do SBF-revisado. No SBF revisado, as concentraes dos ons Cl- foram diminudas para os nveis de plasma sanguneo humano e, a concentrao de HCO3foi aumentada. Porm, o bicarbonato de clcio tem forte tendncia a precipitar-se do SBF supersaturado, no somente em relao apatita, mas tambm calcita. Em 2004, Takadama e colaboradores propuseram modificao no SBF (SBF-n), mediante a diminuio da concentrao dos ons Cl- e HCO3- para o nvel do plasma sanguneo humano, esta proposta era igual quela do SBF-convencional (SBF-c). Esse SBF melhorado foi comparado com o convencional quanto estabilidade e reprodutibilidade na formao de apatita nos materiais sintticos. Os SBF foram testados em 10 institutos de pesquisa. Como resultado foi confirmado que o SBF-convencional no diferente do SBF melhorado quanto estabilidade e reprodutibilidade. Atravs desses testes, o mtodo para preparao do SBF-convencional foi

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cuidadosamente checado e refinado de modo que ele pudesse ser facilmente preparado. Em 2003, foi proposto ao Comit Tcnico ISO-TC150 o SBF-convencional com composio refinada como uma soluo para a capacidade de formao in vitro da apatita nos materiais de implante (Kokubo e Takadama, 2006).

TAB. 3.4.1-Composio qumica do SBF proposta por Kokubo e Takadama (2006).

Reagentes NaCl NaHCO3 KCl K2PO4.3H2O MgCl2.6H2O 1,0M-HCl CaCl2 Na2SO4 Tris* 1,0M-HCl

Quantidades Pureza (%) 8,055g 0,355g 0,225g 0,231g 0,311g 39ml 0,292g 0,072g 6,118g 0-5ml 99,5 99,5 99,5 99,0 98,0 ______ 95,0 99,0 99,0 ______

* Hidroximetil aminometano

3.4.2 CUIDADOS PARA A PREPARAO DO SBF

Visto que o SBF uma soluo supersaturada em relao apatita, um mtodo de preparao inapropriado pode levar precipitao da apatita durante o ensaio. Deve-se sempre verificar que no preparo da soluo, esta permanea transparente e que no haja nenhum depsito de precipitado na superfcie do recipiente. Se alguma precipitao ocorrer, a preparao do SBF deve ser paralisada, a soluo deve ser descartada, a vidraria lavada e, ento faz-se nova preparao do SBF. Aps a dissoluo de cada reagente, o pH da soluo deve ser igual a 2 ou 3, o que ser alterado quando o reagente tris for dissolvido na soluo. Neste momento, a temperatura encontra-se na faixa 36,5C e o pH aumenta para 7,4.

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3.4.3 CONFIRMAO DAS CONCENTRAES INICAS DO SBF

Preparado o SBF, as concentraes dos ons devem ser equivalentes s mostradas na TAB. 3.4.3. Para confirmar essas concentraes so recomendadas anlises qumicas da soluo. Quando um material imerso em SBF por 12, 24 e 120 h, uma camada de apatita pode ser detectada por difrao de raio X e ou microscopia eletrnica de varredura.

TAB. 3.4.3

Concentraes inicas (mM) on Na+ K+ Mg+2 Ca+2 ClHCO3HPO4-2 SO4-2 pH Plasma sanguneo 142,0 5,0 1,5 2,5 103,0 27,0 1,0 0,5 7,2-7,4
KOKUBO, TAKADAMA (2006)

SBF 142,0 5,0 1,5 2,5 147,8 4,2 1,0 0,5 7,40

3.4.4 PRESERVAO DO SBF

O SBF deve ser armazenado em recipiente plstico com tampa e colocado em refrigerador com temperatura de 5 a 10C. O SBF deve ser usado no prazo de 30 dias aps a preparao. Em alguns casos a apatita precipitada uniforme e homogeneamente no SBF e pode ser depositada na superfcie da amostra. Por isso, recomendvel que as amostras sejam colocadas em uma posio que no ocorra precipitao, mas que haja a formao da apatita atravs do processo de adsoro de ons na superfcie da amostra.

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Aps a imerso em 36,5C por diferentes perodos e tempo mximo de quatro semanas no SBF, as amostras so lavadas cuidadosamente em gua pura e secas com secador sem calor. As amostras, uma vez retiradas do SBF e secas, no podem ser novamente imersas (Kokubo e Takadama, 2006).

3.4.5 MODELOS DE FLUDOS BIOLGICOS E ESTERILIZAO

Serro e Saramago (2003) investigaram o efeito dos processos de esterilizao na mineralizao dos implantes de titnio induzidos pela incubao em vrios modelos de fluidos biolgicos. Amostras de titnio foram submetidas a vrios processos de esterilizao usados por materiais de implantes: autoclave a vapor, tratamento com plasma de Ar, descarga de calor e irradiao-. A modificao das superfcies foi avaliada pelas determinaes de ngulo de contato, espectroscopia fotoeltron de raioX (XPS), perfilometria a laser e difrao de raioX. As modificaes mais significantes foram detectadas na molhabilidade: enquanto as amostras tratadas com plasma Ar mostraram-se altamente hidroflicas (ngulo de contato em gua~0), a irradiao- e a esterilizao a vapor induziram um aumento na hidrofobicidade. Depois de esterilizadas, as amostras foram imersas por uma semana em trs diferentes fluidos biolgicos: Soluo salina balanceada de Hank (HBSS), Fluido corpreo simulado de Kokubo (SBF) e um fluido designado por SBF0, com a mesma composio do SBF, porm sem o TRIS. O nvel de mineralizao das amostras de Ti imersas, avaliadas pela anlise do ngulo de contato dinmico, microscopia eletrnica de varredura, espectroscopia dispersiva e XPS, indicaram que os estgios precoces de mineralizao so essencialmente independentes do mtodo de esterilizao. Ao contrrio, a incubao em fluidos atua como papel determinante, SBF0 o meio mais eficiente para a biomineralizao do titnio. A TAB. 3.4.5 mostra as composies inicas das solues de HBSS e SBF junto com a composio do plasma sangneo humano. O pH de ambas as solues SBF foi ajustado para 7,25 pela adio de HCl em temperatura ambiente.

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TAB. 3.4.5: Composio inica (mM) de HBSS, SBF e Plasma sanguneo. Serro e Saramago (2003)

HBSS SBF Plasma sanguneo

Na+ 141,5 141,8 142,0

K+ 5,8 5,0 5,0

Ca2+ 1,3 2,5 2,5

Mg2+ 0,8 1,5 1,5

HCO34,2 4,2 27,0

Cl144,9 148,0 103,0

HPO420,8 1,0 1,0

SO420,8 0,5 0,5

As mudanas nas amostras hidroflicas avaliadas atravs da medida do ngulo de contato esttico da gua ocorreram devido aos mtodos de esterilizao. Enquanto a hidrofobicidade de ambas as amostras autoclavadas e irradiadas diminuiu, em relao s amostras originais, as amostras limpas por plasma mostraram-se altamente hidroflicas. A rugosidade mdia da superfcie, Ra, dos substratos foram determinados usando um perfilmetro. Os resultados obtidos pelas amostras esterilizadas foram comparados com quelas no-esterilizadas. A deteco de precipitados de fosfato de clcio na superfcie das amostras de Ti, aps uma semana de imerso em modelos de fluidos biolgicos, uma tarefa difcil devido irreprodutibilidade dos resultados. De fato, uma observao visual simples das amostras depois de incubadas leva a concluso que h diferentes graus de mineralizao e/ou diferentes tipos de precipitados usando as mesmas condies experimentais (Serro e Saramago, 2003). Nas FIG. 3.4.5(a) e (b) so mostradas micrografias da superfcie do Ti antes e depois da imerso em SBF0, respectivamente. A anlise com maior aumento, possvel observar pontos brancos na FIG. 3.4.5(b), e constata-se a existncia de depsitos com vrias formas de acordo como mostrado nas FIG. 3.4.5(c) e (d). Usando um maior aumento da rea ao redor do depsito, possvel observar uma cobertura de filme cuja superfcie mostrada na FIG. 3.4.5(e). Na mesma amplificao, a superfcie de titnio antes da imerso mostrada na FIG. 3.4.5(f). Alguns tipos de depsitos, rodeados por um filme, foram detectados na superfcie de todas as amostras incubadas em SBF0, independente do tratamento de esterilizao. O espectro de EDS obtido nas amostras imersas exibiu picos de clcio e fsforo e contaminao por magnsio. Entretanto, a taxa de Ca/P variou de acordo com a regio analisada. A observao em MEV das amostras imersas em HBSS e em SBF no revelou a presena de depsitos. O espectro de EDS mostrado na FIG. 3.4.5.1(b), do Ti imerso em SBF, no permite a identificao de superfcie contendo clcio ou fsforo. Alm disso, a anlise em XPS das amostras imersas em HBSS e SBF revelou a existncia de pequena quantidade de clcio e fsforo.

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A)

B)

C)

D)

E)

F)

FIG. 3.4.5: Micrografias obtidas por microscopia eletrnica de varredura: A) Ti antes da incubao, B) Ti aps a incubao em SBF0, C) e D) depsitos com diferentes morfologias na superfcie do Ti aps a incubao em SBF0, E) filme na superfcie do Ti aps incubao em SBF0 e F) Ti antes da incubao. Serro e Saramago (2003)

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FIG.3.4.5.1: Espectro EDS. a) depsito na superfcie de Ti depois de imerso em SBF0 e de b) Ti depois de imerso em SBF. Serro e Saramago (2003)

No trabalho de Serro e Saramago foi estudada a influncia dos mtodos de esterilizao e da composio qumica de fluidos biolgicos na mineralizao de materiais de implante de Ti. As modificaes das caractersticas de superfcie, isto a hidrofilicidade, rugosidade e composio qumica induzidas por diferentes mtodos de esterilizao apresentaram concordncia com os resultados de outros trabalhos da literatura. Enquanto, as amostras autoclavadas a vapor e irradiadas mostraram-se mais hidrofbicas devido ao aumento da contaminao com carbono, as amostras limpas com plasma foram altamente hidroflicas, rugosas e menos contaminadas. Alm disso, as diferenas observadas na superfcie no sugerem significativamente diferentes comportamentos de mineralizao. Ao contrrio, comparando a mineralizao das amostras de Ti imersas durante uma semana em HBSS, em SBF e em SBF0, mostrou que a mineralizao aumenta no SBF0, independentemente do mtodo de esterilizao. Comparando HBSS com SBF0, foi possvel observar que este possui maior grau de supersaturao em clcio e fsforo. A nica diferena entre SBF e SBF0 a ausncia do reagente tris no SBF0, o qual permite aumento espontneo do pH e evita os ons de Ca 2+ livres.

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3.4.6 MODIFICAES NA PREPARAO DO SBF

3.4.6.1 PROPOSIO DE MLLER

Mller, L. e Mller, F.A. (2006) estudaram cinco tipos de SBF com composio de 142 Na+, 5 K+, 2,5 Ca2+, 1 Mg2+, 1 SO42-, 1 HPO42- e 136 (Cl- + HCO3-) mmol/l, os quais foram preparados com concentraes de HCO3- entre 5 e 27 mmol/l. As solues de SBF foram preparadas misturando solues concentradas estveis, as quais aumentam a reprodutibilidade dos testes in vitro devido s mudanas insignificantes de pH durante a preparao. A alta estabilidade do SBF neste modo de preparao permite a avaliao da formao de hidroxiapatita na superfcie do material bioativo sem o efeito negativo da precipitao espontnea. Portanto, o uso de solues concentradas oferece um mtodo fcil de preparao do SBF com quantidades inicas diferentes e, assim modificando a composio da camada de Ca-P precipitada na superfcie do material bioativo exposto s solues de SBF. Estas solues so supersaturadas em relao apatita ligeiramente carbonatada. O objetivo do estudo de Mller foi desenvolver um novo mtodo para o preparo do SBF e aumentar a reprodutibilidade do procedimento de teste do SBF. Por isso, a influncia da quantidade de HCO3-na formao da apatita e a supersaturao em relao a diferentes fosfatos de clcio foram avaliadas. Cinco solues de SBF com quantidade variando de 5 a 27 mmol/l e quantidade constante de 136 mmol/l de Cl- + HCO3- foram preparadas a partir de produtos concentrados de KCl (59,64 g/l), NaCl (116,88 g/l), NaHCO3 (45,37 g/l), MgSO4.7H2O (49,30 g/l), CaCl2 (preparado de Ca(OH)2), tris (121,16 g/l), NaN3 (100 g/l) e KH2PO4 (27,22 g/l). A preparao feita com gua destilada para prevenir a precipitao de fosfatos de clcio homogeneamente nucleados ou outras fases e, para minimizar mudanas no pH durante a preparao das solues. Os volumes das solues salinas concentradas para o preparo de 1litro do SBF esto listados na TAB. 3.4.6.1. O pH do plasma sangneo corpreo varia de 7,3 a 7,4 em 37C. J o pH do SBF depende da temperatura e diminui linearmente com o aumento da temperatura.

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TAB. 3.4.6.1 Solues SBF propostas por Mller (2006).

Soluo KCl NaCl NaHCO3 MgSO4.7H2O CaCl2 Tris+HCl NaN3 KH2PO4

SBF5 SBF10 SBF15 SBF20 SBF27 5 60 10 5 25 50 10 5 5 59 18 5 25 50 10 5 5 56 27,8 5 25 50 10 5 5 53,5 37 5 25 50 10 5 5 50 50 5 25 50 10 5

As amostras de titnio comercialmente puro foram atacados com cido clordrico (HCl) e, subseqentemente foram imersas em 10 mol/l de soluo aquosa de NaOH em 60C por 24h, lavadas em gua destilada e secas a 100C. A seguir, as amostras tratadas foram imersas em solues de SBF sob condies estticas em 37C por 2 semanas. A estabilidade das solues de imerso foi avaliada monitorando o tempo dependente do pH, bem como as concentraes do fsforo e do clcio durante a exposio em 37C. Pode-se presumir que, ao diminuir as concentraes dos componentes, ocorre uma precipitao espontnea e, com isso a instabilidade da soluo supersaturada. As mudanas nas concentraes de P e Ca foram insignificantes e no excederam o erro analtico (+ 5%) depois de 14 dias de exposio a 37C. As mudanas de pH com o tempo das solues de SBF armazenadas a 21C foram menores do que 0,15. Por outro lado, o pH variou de 7,3 a 7,62 nas solues de SBF que foram expostas a 37C por diferentes tempos. O aumento mais pronunciado em relao ao pH ocorreu no SBF-20 e no SBF-27 com a maior quantidade de HCO3. Foi observada a formao de camadas biomimticas na superfcie da amostra, duas semanas aps a imerso em SBF. As camadas com tamanho da ordem de nanmetro apresentaram a morfologia na forma de agregados esfricos com dimetro acima de 10 m, caracterstica da camada precipitada do SBF. Clcio, fsforo e uma pequena frao de magnsio e sdio foram encontrados por anlises em EDX. ons Mg2+ e Na+ podem substituir os ons de Ca2+ nas apatitas, as quais esto no agregado com a composio de apatitas

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biolgicas dos ossos humanos, que no so estequiomtricas com indcios de componentes como Mg2+, Na+, CO22-, HPO42-, F- ou Cl-. A proporo molar Ca-P da camada precipitada no titnio tratado quimicamente em SBF5 foi medida como 1,35. Com o aumento da concentrao de HCO3- em SBF, a proporo molar de Ca-P foi de 1,46. Por meio da difrao de raio X identificou-se que na superfcie do titnio pr-tratado e imerso em SBF na temperatura fisiolgica (37C) h formao de hidroxiapatita de baixa cristalinidade. Mller e colaboradores concluram que: a) possvel usar as solues de SBF com diferentes quantidades de ons cloro e bicarbonatos para simular a parte inorgnica do plasma sanguneo humano; b) as solues de SBF foram preparadas pela mistura de solues concentradas estveis, a reprodutibilidade da preparao de SBF e, portanto, os resultados dos testes in vitro puderam ser aperfeioados; c) os graus de supersaturao indicaram que mais provvel ocorrer formao de apatita contendo carbonato do SBF do que a formao da hidroxiapatita estequiomtrica; d) as anlises com difrao de raioX da camada precipitada, indicaram que a quantidade de HCO3- em SBF influencia a composio e estrutura dos fosfatos de clcio obtidos. Com isso, pode-se supor que, ao longo do tempo a concentrao de HCO3- nas solues de teste menor que 20 mmol/l.

3.4.6.2 PROPOSTA DE BARRERE

Barrere et al. (2002) investigaram a cintica da liberao de CO2 em relao composio de SBF fator 5 (SBFx5) e a formao da camada Ca-P. Quanto intensidade inica ou os ons anfteros so consideraes que afetam a solubilidade do gs, influenciam as quantidades de cloreto de sdio e bicarbonatos na liberao de CO2. Depois mudou-se individualmente a concentrao de NaCl ou HCO3- em relao formao de Ca-P imersa em soluo e nas amostras da liga de Ti (Ti-6Al-4V). Barrere e colaboradores prepararam diversos fluidos corpreos simulados, mudando as concentraes salinas conforme mostrado na TAB. 3.4.6.2. Todas as solues foram derivadas da soluo clssica proposta por Kokubo, na qual as concentraes inicas foram multiplicadas por 5. O ponto inicial do experimento ocorre quando o CO2 pra de borbulhar

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(t=0 h). Todos os experimentos foram avaliados em um reator com termostato a 37C com imerso de 24 h. As solues foram agitadas com im magntico.
TAB. 3.4.6.2 Composio (mM) do plasma sangneo humano (HBP), fluido corpreo simulado regular (SBF), solues de referncia (REF) e SBF experimentais (SBFX5). BARRERE (2002) NaCl HBP SBF SBFx5 REF1 REF2 REF3 REF4 SBFx5 (HCO3x0) SBFx5 (HCO3x3) SBFx5 (NaClx0) SBFx5 (NaClx3) 146,7 146,7 733,5 0,0 0,0 733,5 733,5 733,5 733,5 0,0 440,1 MgCl2.6H2O 1,5 1,5 7,5 0,0 0,0 0,0 0,0 7,5 7,5 7,5 7,5 CaCl2.2H2O 2,5 2,5 12,5 0,0 0,0 0,0 0,0 12,5 12,5 12,5 12,5 Na2HPO4.2H2O 1,0 1,0 5,0 0,0 0,0 0,0 0,0 5,0 5,0 5,0 5,0 NaHCO3 27,0 4,2 21,0 0,0 21,0 0,0 21,0 0,0 12,6 21,0 21,0

A formao da camada de Ca-P nas solues SBF altamente concentradas, depende dos mecanismos de liberao do CO2 (REF1, 2, 3 e 4), a qual depende da quantidade de HCO3- e da intensidade inica na soluo devido quantidade de NaCl. Na TAB. 5, encontram-se as composies dos meios usados como referncia (REF). Com base nas curvas de pH x tempo para as vrias solues, observou-se que no caso da soluo REF1 e REF3, o pH inicial foi de 4,06 e 3,75 respectivamente, enquanto que nos casos da soluo REF2 e REF4, o pH inicial foi maior, sendo de 6,29 e 5,99 respectivamente. Essa diferena de pH foi devido capacidade do HCO3- borbulhar. Aumentando a quantidade de HCO3-, os valores iniciais e finais de pH foram maiores. Portanto, o pH inicial foi ligeiramente menor quando a soluo continha mais NaCl. Com isto, houve maior solubilidade do gs CO2 para alta intensidade inica. A precipitao de Ca e P indica o limite de solubilidade ou saturao das solues SBFx5, as quais possuem diferentes concentraes de NaCl e NaHCO3, de acordo com a TAB. 3.4.5. Com a observao visual da precipitao em vrias solues SBFx5, pode-se definir trs grupos. Primeiro, no caso da soluo livre de NaCl, a precipitao ocorre imediatamente no final da adio de CO2 em pH igual a 6. Segundo, a precipitao ocorre em pH igual a 6,8 no

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caso de menor percentual de NaCl e solues contendo HCO3- SBFx5 (NaClx3) e SBFx5 (HCO3-x3) e, no caso de soluo SBFx5 regular. Terceiro, no caso da soluo ser livre de HCO3-, a precipitao ocorre em pH igual a 6,2. As quantidades de NaCl e HCO3- afetam a cintica da precipitao e a estrutura precipitada. A respeito da influncia de NaCl, isto , a intensidade inica, as solues referncia mostraram que a quantidade de CO2 quase igual a intensidade inica. Portanto, no incio dos experimentos, as solues gasosas SBFx5 (NaClx0) possuem maior concentrao de NaCl que as outras solues calcificantes. Em outras palavras, com menor intensidade inica, o nmero de stios de nucleao presentes na soluo maior. O aumento no nmero de stios de nucleao obviamente aumenta a precipitao de Ca-P na soluo. Barrere e colaboradores concluram que o uso de gs acidfero CO2 em soluo de fluido corpreo simulado altamente concentrado permite a formao de uma camada de Ca-P no Ti6Al-4V em tempo inferior a 24 h. Esse mtodo biomimtico impede o tratamento da superfcie do titnio. A cintica da deposio da camada influenciada pela intensidade inica da soluo e, por isso controla a liberao de CO2 e perfil do pH. Portanto, a intensidade inica e a precipitao lenta de Ca-P na soluo SBFx5 favorece a nucleao de Ca-P no Ti-6Al-4V. Alm disso, a presena de HCO3- reduz o tamanho do cristal de apatita da camada, permitindo um melhor ataque ao substrato Ti-6Al-4V. Aps experimentos, dois importantes parmetros podem ser realados no processo de formao do Ca-P biomimtico das solues SBFx5. Primeiro, a precipitao na soluo deve ser demorada para favorecer a nucleao heterognea no Ti-6Al-4V. Segundo, partculas de Ca-P depositadas no substrato devem ter tamanho nanomtrico para permanecer fisicamente aderida no Ti-6Al-4V.

3.5 EFEITOS DOS TRATAMENTOS DE SUPERFCIE NA BIOATIVIDADE DO TITNIO

Vanzillotta et al. (2006) determinaram a influncia dos tratamentos da superfcie de amostras de titnio cp na bioatividade in vitro. Chapas de titnio foram submetidas a trs tratamentos de superfcie, incluindo em todas as amostras o ataque com soluo de HCl/H2SO4. As amostras foram divididas em quatro grupos. Grupo A foi o grupo controle, sem tratamento de superfcie; grupo B, C e D foram submetidos ao ataque qumico com

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soluo de HCl/H2SO4 para alterar a morfologia da superfcie. Os grupos C e D foram adicionalmente submetidos ao tratamento de oxidao da superfcie. Para o grupo C, foi empregada a oxidao andica com soluo H3PO4 e, para o grupo D, foi realizada a oxidao trmica seguida pela estabilizao do filme com soluo de NaF. O objetivo da combinao qumica de ataques com oxidao foi para melhorar os tratamentos individualmente (devido ao comportamento bioativo do xido) e juntamente, a osseointegrao devido a rugosidade trazida pela dissoluo do cido. A bioatividade das superfcies do titnio foi avaliada atravs da imerso das amostras em tubos de polipropileno contendo 30 ml de SBF, a 37C durante 1, 2 e 7 dias. Aps cada tempo, a quantidade de clcio em SBF foi determinada usando espectroscopia de absoro atmica (AAS) e, um histograma com a quantidade de clcio x tempo de imerso foi construdo. A espectroscopia de fotoeltron de raioX (XPS) foi usada para caracterizar a camada externa de uma amostra de cada grupo, aps a imerso em SBF por 7 dias. Foi observado que a quantidade de clcio na soluo tem a tendncia de diminuir regularmente quando comparados ao primeiro e stimo dias de todos os tratamentos. A diferena entre as quantidades inicial e final de clcio no SBF devido precipitao do fludo da fase rica em clcio na superfcie do titnio. A menor quantidade de clcio no SBF e a maior precipitao da fase rica em clcio so consideradas um bom indicativo da bioatividade. A quantidade de clcio decresce lentamente quando a soluo est em contato com as amostras no-tratadas (grupo A), enquanto que a queda maior no nvel de clcio ocorre depois de 7 dias para todas as amostras tratadas. Diferenas significantes foram encontradas entre cada tratamento e o grupo A, porm nenhuma diferena foi encontrada entre as amostras tratadas do grupo B ao D. Os autores concluram que os resultados obtidos usando diversas tcnicas de caracterizao indicaram um comportamento semelhante para todas as amostras de Ti com os tratamentos empregados. Uma camada de pequenos glbulos de fosfato de clcio precipitou nas superfcies do titnio aps 7 dias imersos em SBF. Alm disso, para as amostras de titnio no-tratadas, a precipitao da apatita ligada ao osso no foi observada, revelando que o tratamento da superfcie parece ter um papel importante na melhora da bioatividade do titnio in vitro.

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3.6 OSTEOINDUO

Fujibayashi et al. (2004) classificam o titnio como um material osteoindutivo que possui a capacidade de induzir a osteognese. Aps tratamentos qumicos e trmicos, o titnio pode tornar-se bioativo e induzir a formao ssea sem a necessidade adicional de clulas osteognicas ou agentes osteoindutivos. Quatro tipos de implantes de titnio foram implantados por Fujibayashi et al., nos msculos dorsais de cachorros e foram examinados histologicamente aps perodos de 3 e 12 meses. Alm disso, o titnio tratado qumica e termicamente, assim como o titnio puro foram implantados como blocos porosos ou como malha de fibras cilndricas. A formao ssea foi encontrada somente nos implantes de blocos porosos tratados qumica e termicamente e, removidos depois de 12 meses. O estudo mostrou que um metal liso no solvel e no contendo clcio ou fsforo pode ser um material osteoindutivo quando tratado de forma apropriada. Fujibayashi e colaboradores observaram que aps a imerso dos blocos de Ti em SBF, possvel identificar a deposio de apatita aps 7 dias. Por outro lado, mudanas morfolgicas na superfcie no foram observadas nos implantes de titnio no tratados aps imerso em SBF por um perodo de 7 dias. Esses resultados indicam que os implantes tratados qumica e termicamente possuem a capacidade de formar apatita in vitro e capacidade osteocondutiva in vivo. Com base nos resultados obtidos, Fujibayashi e colaboradores concluram que um metal sem nenhum tratamento, que no possui propriedades de dissoluo e no contm clcio nem fsforo, pode transformar-se em um material osteocondutivo quando tratado para possuir micro e macroestruturas especficas. Todos os materiais osteocondutivos que induzem a formao de camada de apatita no corpo podem ter o potencial de serem materiais osteoindutivos quando possurem estrutura porosa especfica. Essa observao pode ajudar a elucidar a natureza da osteoinduo e levar ao advento dos biomateriais osteoindutivos para a regenerao tecidual. 3.7 OSTEOCONDUTIVIDADE DO TITNIO BIOATIVO

Takemoto et al. (2005) analisaram a influncia da estrutura porosa, das propriedades mecnicas dos implantes de titnio bioativos e dos tratamentos qumico e trmico na

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capacidade osteocondutiva dos implantes inseridos no osso de coelhos. Os implantes de titnio bioativos porosos (porosidade de 40%) foram produzidos com o mtodo de plasmaspray e submetidos aos tratamentos qumico e trmico em imerso em soluo 5M de NaOH 60C por 24h, imerso em gua destilada 40C por 8h e aquecimento em 600C por 1h. A porcentagem de contato osso-implante (ndice de afinidade) dos implantes bioativos (BGs) foi significativamente maior do que para os implantes no-tratados (CGs) em todos os tempos ps-implantaes (13,5x10,5; 16,7x12,7; 17,7x10,2; 19,1x7,8 em 2, 4, 8 e 16 semanas, respectivamente). A porcentagem de rea ssea aumenta significativamente nos implantes bioativos (BGs), enquanto que com os implantes no-tratados (CGs) houve decrscimo aps 4 semanas (10,7x9,9; 12,3x13,1; 15,2x9,8; 20,6x8,7 em 2, 4, 8 e 16 semanas, respectivamente). Os resultados sugerem que o titnio bioativo possui propriedades mecnicas e biocompatibilidade adequadas ao uso clnico. A avaliao da bioatividade in vitro do titnio com porosidade foi realizada atravs da imerso em soluo de fluido corpreo simulado (SBF) com pH de 7,40. As amostras foram imersas em 30 ml de SBF por 3-7 dias em 36,5C. As amostras foram examinadas por microscopia eletrnica de varredura (MEV). Foi identificada a presena de apatita na superfcie das amostras, a qual uma caracterstica da bioatividade in vivo. A avaliao das amostras no MEV antes da implantao revelou que na superfcie h uma macroestrutura porosa complexa. Em aumentos elevados os poros da superfcie dos implantes de titnio no-tratados eram pequenos (FIG.3.7a). Alm disso, foram identificados microporos nos implantes de Ti tratados qumica e termicamente (FIG.3.7b). Com a imerso de blocos de titnio fraturados em SBF, foi identificado depsito de apatita nas superfcies aps 3 dias (FIG.3.7c), a qual indica que os implantes de titnio bioativos porosos possuem uma camada de superfcie bioativa homognea por todo o interior dos poros do implante. Por outro lado, no houve mudanas morfolgicas na superfcie dos implantes de Ti no-tratados aps a imerso em SBF por 7 dias.

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FIG. 3.7-(A) Superfcie de titnio poroso no-tratado. B) Superfcie de uma poro central de titnio poroso fraturado e tratado qumica e termicamente. C) Formao de apatita no implante de titnio bioativo poroso depois da imerso em SBF por trs dias. Takemoto et al (2005)

Aps 4 semanas, foi observado osso novo no centro de ambos implantes, bioativo e notratado. Foi encontrado osso novo prximo ao implante. Os implantes bioativos freqentemente apresentam mais contato osso-implante do que os implantes no-tratados. Entre 8-16 semanas aps a implantao, foi observada a presena de osso novo nos implantes

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bioativos, enquanto nos implantes no-tratados uma quantidade pequena de osso foi detectada nos poros. Clulas osteoclsticas multinucleadas foram encontradas ao redor do osso novo e da superfcie do implante nos implantes bioativos. A liga de titnio porosa pode ser coberta com fosfato de clcio pelo mtodo biomimtico, com sucesso, para aumentar a osteocondutividade e a osteoindutividade in vivo. Os tratamentos qumico e trmico so processos simples e econmicos. Outra vantagem que os implantes so imersos em soluo de NaOH, cujo efeito se estende por toda a estrutura irregular do implante. Devido ao tratamento, os implantes de Ti bioativos porosos possuem superfcies bioativas homogneas por todo o interior dos poros do implante. Isto considerado uma vantagem em relao ao mtodo convencional de tratamento com fosfato de clcio por plasma-spray, no qual a camada tende a ser aplicada o mais superficial possvel e resulta em um tratamento inadequado e no-uniforme. Alm disso, os tratamentos qumico e trmico no reduzem o espao dos poros disponveis para o crescimento do osso, por causa de sua pequena mudana da morfologia da superfcie do implante, afetando somente 1 m da superfcie. Os tratamentos qumico e trmico que produzem superfcies bioativas nos poros dos implantes e aumentam a aposio de osso em todo o tempo ps-implantao. J bem conhecido que a camada bioativa melhora a aposio de osso. Entretanto, o material coberto com fosfato de clcio, que possui aposio de osso tende a diminuir com o tempo como resultado de remodelamento sseo. Por outro lado, o ndice de afinidade do titnio poroso bioativo aumentou durante os perodos examinados ps-implantao. Isto confirma a maior estabilidade da camada bioativa dos implantes porosos tratados qumica e termicamente e assegura um perodo longo de fixao ssea. No houve diferena significativa na rea sem crescimento e na profundidade sem crescimento nos perodos de tempo de 2 e 4 semanas. Com o passar do tempo, os implantes bioativos aumentaram a osseointegrao, enquanto os implantes no-tratados no o fizeram. A osseointegrao dos implantes no-recobertos tende a se perder com o tempo, enquanto que com materiais bioativos cobertos a osseointegrao se manteve durante o experimento. Takemoto e colaboradores (2006) investigaram o efeito do tratamento dos implantes com HCl na osteocondutividade dos implantes de titnio bioativos porosos. A osteocondutividade foi avaliada pela implantao in vivo. Em estudos prvios foi observado que o titnio poroso tratado qumica e termicamente por plasma-spray possua osteoindutividade intrnseca e que a formao de osso ocorria aps 12 meses in vivo. Neste trabalho

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otimizaram o tratamento da superfcie e aceleraram a osteoindutividade. Foi desenvolvido um tratamento para cido clordrico (HCl) diludo pelo titnio poroso, o qual removia sdio de uma estrutura porosa formada complexamente e, mais efetivamente do que o tratamento convencional de gua quente. Trs tipos de tratamentos superficiais foram aplicados: a) tratamento trmico e alcalino (AH); b) tratamento alcalino, gua quente e trmico (AH-gua); c) tratamento alcalino, HCl diludo, gua quente e tratamento trmico (AH-HCl). A osteoindutividade dos materiais implantados in vivo foi avaliada em 3, 6 e 12 meses. O implante de Ti bioativo poroso tratado por AH-HCl apresentou maior osteoindutividade, a qual induziu a maior quantidade de formao ssea durante 3 meses. O tratamento com HCl diludo foi realizado para oferecer efeitos tanto qumico, quanto alterao topogrfica na superfcie do titnio, embora no se pode determinar qual o fator predominante. Contudo, adicionando o tratamento de diluio de HCl aos tratamentos qumico e trmico convencionais tem-se a possibilidade de um melhor tratamento superficial dos implantes de titnio poroso. Na FIG. 3.7.1 mostra-se as micrografias das superfcies dos implantes aps a imerso em SBF. A capacidade de formao de apatita foi alta em todos os grupos e uma ilha esferultica representando o depsito de apatita pode ser reconhecida na superfcie de todos os implantes um dia aps a imerso dos blocos de titnio fraturados em SBF. O tamanho das esferulites maior no grupo AH-HCl, j o nmero de esferulites maior no grupo AH-gua. Entre 3 e 7 dias, a superfcie foi quase inteiramente coberta por uma camada de apatita em todos os grupos. A capacidade de formao de apatita no difere entre as reas perifrica e central de alguns implantes.

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FIG. 3.7.1-Micrografias de MEV das superfcies dos implantes aps imerso em SBF por 1, 3 e 7 dias. Notar o maior tamanho de esferulites em grupo AH-HCl e o maior nmero de esferulites no grupo AH-gua. De 3 a 7 dias quase no houve cobertura com uma camada de apatita em todos os grupos. Takemoto et al (2006)

O interior dos poros dos implantes de titnio e o osso formado foram avaliados pela observao das superfcies fraturadas dos implantes (FIG.3.7.2 a-c). Os implantes do grupo AH-HCl com 3 meses ps-implantao apresentaram osso induzido com uma estrutura tridimensional, o qual parecia crescer ao longo das paredes dos poros e em todas as direes (FIG.3.7.2 a). Em algumas reas ao redor do osso induzido foi identificada a presena de depsito de apatita contendo picos de Ca e P (FIG.3.7.2 b). Em outras reas afastadas do osso induzido, ainda que depsito de apatita possa no ser observado, anlises em EDS mostraram pequenos picos de Ca e P na superfcie da camada tratada (FIG.3.7.2 c). Esses pequenos picos de Ca e P tambm foram detectados na superfcie dos implantes AH e AH-gua em 3 meses quando no houve ocorrncia de induo ssea.

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FIG. 3.7.2-Avaliao em MEV dos poros do grupo AH-HCl trs meses aps implantao in vivo. A) Observao do interior da superfcie e o osso induzido. A imagem mostra a estrutura tridimensional do osso induzido crescendo ao longo da superfcie do implante em todas as direes. B) Observao do interior e ao redor do osso induzido. * depsito de apatita contendo picos de Ca e P em anlise de MEV-EDX. C) Observao do interior da superfcie do osso induzido. * 1-Camada tratada; 2- Superfcie fraturada do substrato titnio. Pequenos picos de Ca e P na anlise de MEV-EDX aparecem na superfcie da camada tratada. Notar que os picos de Ca e P aparecem na superfcie de fratura do substrato titnio (controle negativo). Takemoto et al. (2006)

Os implantes AH-HCl possuam superfcie mais

complexa comparada aos outros

implantes, a qual pode ter sido causada pelo ataque com HCl. Os implantes AH-HCl exibiram maior osteoindutividade e induziram o crescimento de osso ectpico in vivo durante 3 meses. Os resultados do estudo de Takemoto e colaboradores indicaram osteoinduo nos materiais, embora no se pode determinar o fator predominante para melhorar essa

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osteoindutividade seguindo o tratamento de superfcie qumica (formao de titnia e remoo de sdio) com HCl ou mudanas de topografia superficial (ataque). Tas (2000) preparou partculas de hidroxiapatita com tamanho nanomtrico (aprox. 50nm), homognea, p cermica de sais de nitrato de clcio tetrahidratado com alta pureza e di-amnio fosfato de hidrognio dissolvido em soluo de fluido corpreo sinttico (SBF) 37C e 7,4 usando tcnica de precipitao qumica. Dois procedimentos de precipitao foram estudados durante a sntese de p de HA via soluo de SBF. O primeiro processo envolveu a adio de volumes pr-determinados de solues diludas de NH4OH na reao, para o ajuste de pH, comeando do perodo de precipitao. Este foi chamado de experimento com adio inicial. O segundo procedimento constitui em contnuas adies de hidrxido de amnio durante o processo de precipitao. Tas considerou que o SBF uma soluo metaestvel estado-tampo semelhante ao plasma sangneo, saturado em relao formao e precipitao de uma fase de fosfato de clcio amorfo (ACP), devido alta taxa de 2,5 de Ca/P. As pequenas variaes na temperatura das solues de SBF foram tambm conhecidas por causa da precipitao espontnea in situ de diferentes fosfatos de clcio como funo do pH da soluo. Portanto, a adio de reagentes externos como Ca(NO3)4H2O e (NH4)2HPO4 ao SBF tambm pode induzir a precipitao. Os resultados qumicos acrescidos na variao da taxa de solues de Ca/P e, com isso a formao de fosfato de clcio origina-se de diferentes composies. P de hidroxiapatita (HA) quimicamente homognea e de tamanho nanometro tem sido sintetizado e apresentado bom comportamento ao ser imerso em soluo de fluido corpreo simulado modificado. Os melhores resultados tm sido obtidos com a imerso em soluo que apresenta as condies fisiolgicas e biomimticas de pH 7,4 e 37C, contendo sais de nitrato de clcio e di-amnio fosfato hidrogenado em quantidades apropriadas pela tcnica de precipitao qumica.

3.8 SUPERFCIE DE TITNIO OXIDADA ANODICAMENTE

Yang et al (2004) estudaram o efeito da oxidao andica do titnio em soluo de H2SO4 combinada com tratamentos trmicos na capacidade de formar apatita. A oxidao andica foi

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empregada para mudar a estrutura e a bioatividade do titnio, formando anatsio e rutilo na superfcie metlica. As amostras foram caracterizadas por difrao de raio X e microscopia eletrnica de varredura. Os resultados mostraram que as superfcies metlicas do titnio foram cobertas por anatsio e/ou rutilo. No fluido corpreo simulado (SBF), o titnio anodicamente oxidado sob certas condies induz a formao de apatita na superfcie. Durante o perodo de induo da formao de apatita a quantidade de anatsio ou de rutilo aumenta devido oxidao andica. Posteriormente, o metal foi submetido ao tratamento trmico em 600C por 1h, para induzir a formao de apatita em SBF. A quantidade de anatsio ou rutilo foi aumentada pelo tratamento trmico. Os resultados mostraram que a capacidade de induo para formar apatita no titnio poder ser obtida pela oxidao em conjunto com o tratamento trmico. No trabalho realizado por Yang et al., aps a oxidao andica e subseqente tratamento trmico, o titnio foi imerso em 30 ml de SBF com concentraes inicas aproximadas ao do plasma sangneo humano, por 3 e 6 dias. Os resultados obtidos por Yang e colaboradores mostraram que quando o titnio oxidado anodicamente em 1M de soluo de H2SO4, as superfcies tornam-se porosas em voltagens de 90 a 180V e a descarga eltrica ocorre quando a voltagem maior do que 105V. A porosidade e o tamanho dos poros aumentam com o aumento da voltagem de 155 para 180V (FIG. 3.8). Depois do titnio ser oxidado em 1M de soluo de H2SO4 em voltagem de 90 a 180V e aps o tratamento trmico, comparou-se a morfologia da superfcie com titnio sem tratamento trmico e, com isso a morfologia da superfcie do material no teve mudana aps o tratamento trmico.

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FIG. 3.8-Morfologia da superfcie do titnio e oxidados anodicamente em (A) sem tratamento, (B) 90V, (C) 155V, (D) 180V em 1 M H2SO4 por 1 min. Yang et al. (2004)

Quando as amostras de titnio foram oxidadas anodicamente em 155V em solues de H2SO4 com concentraes de 0,5-3,0M, a superfcie apresentou poros e a descarga eltrica ocorreu em todos os casos. O tamanho dos poros e a porosidade da estrutura aumentaram com o aumento da concentrao de 0,5 a 1,0M e, no mudaram com o aumento da concentrao de 1,0 para 3,0M (FIG. 3.8.1). Em todas as superfcies dos materiais anatsio e rutilo foram formados. Aps a oxidao das amostras de titnio em soluo 1,0M em diferentes voltagens, elas foram imersas em SBF por 3 dias. A apatita foi encontrada nas amostras oxidadas em 155 e 180V, enquanto que em 90V no houve formao de apatita. Aps a imerso das amostras em SBF por 6 dias, no foi observada apatita na superfcie oxidada em 90V, ao contrrio, as superfcies de Ti oxidadas em 155 e 180V apresentaram-se recobertas completamente por apatita (FIG. 3.8.2). Aps o tratamento trmico e a imerso em SBF por 3 dias, todos as amostras de Ti induziram a formao de apatita na superfcie. Ao comparar com as amostras sem tratamento, o Ti oxidado em 90V tambm induziu a formao de apatita, aps tratamento trmico. Os resultados so mostrados na FIG. 3.7.5.

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FIG. 3.8.1-Superfcie das amostras de Ti oxidadas anodicamente em H2SO4 com voltagem de 155V: (A) 0,5M, (B) 1M, (C) 3M por 1 min. Yang et al. (2004)

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FIG. 3.8.2-Morfologia da superfcie das amostras de Ti imersas em SBF por 6 dias aps serem oxidadas anodicamente em 1M H2SO4 (A) 90V, (B) 155V, (C) 180V por 1 min. Yang et al. (2004)

Yang e colaboradores concluram que a oxidao andica com soluo de H2SO4 um processo eficiente para preparar o Ti bioativo, o qual conveniente para os casos em que h necessidade de aplicao de cargas logo aps a cirurgia. Uma determinada quantidade de Ti de anatsio e/ou rutilo na superfcie oxidada foi requerida para a formao da apatita. Strnad et al. (2000) estudaram a formao da camada de fosfato de clcio nas superfcies das amostras de Ti com deposio de hidroxiapatita por plasma-spray (PSHA) e jateadas. As amostras foram imersas em fluido corpreo simulado com concentrao de ons semelhante ao do plasma sangneo humano. A superfcie PSHA induziu a formao de camadas de superfcies de fosfatos de clcio, enquanto a precipitao do fosfato de clcio no Ti cp jateado no foi detectada. A avaliao histolgica aps testes in vivo demonstrou que os implantes com uma camada de PSHA permitiu o crescimento de tecido sseo nas reentrncias com profundidade acima de 1mm sem formao significativa de fibras teciduais intermedirias. Strnad e colaboradores selecionaram reentrncias de 0 a 1mm em amostras de Ti para investigar o crescimento de tecido sseo. As amostras de implantes cilndricos de Ti no revestidos e implantes de Ti com camada de PSHA foram implantados em tbia de ces.

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Procurou-se no estudo obter estabilidade primria e contato direto do osso superfcie do implante. As interfaces foram histologicamente avaliadas. Os implantes com a camada de PSHA e os implantes de Ti cp imersos em SBF foram avaliados em testes in vitro, mediante anlise da superfcie de discos de implantes e pela determinao das mudanas nas concentraes dos ons do SBF com respeito ao perodo de exposio. As amostras imersas em SBF foram usinadas com titnio cp, grau 3, em forma de discos com dimetro de 10mm e espessura de 1mm. As amostras no-cobertas foram jateadas com partculas de alumina (tamanho de 100m). As amostras cobertas foram preparadas com deposio plasmtica de hidroxiapatita na superfcie do titnio cp jateado mencionado anteriormente. Foram avaliados os parmetros de rugosidade de ambas as amostras, jateadas e PSHA. As amostras foram imersas em SBF com pH 7,40 e em 36,5C. As mudanas na concentrao das amostras foram determinadas por espectroscopia de adsoro atmica e com um pHmetro. Aps a imerso em SBF, a superfcie das amostras foram analisadas em microscopia eletrnica de varredura com EDS e por difrao de raioX. Os implantes recobertos com PSHA foram imersos em SBF. Verificou-se a transferncia de ons de clcio e fosfato da soluo, bem como a deposio de cristais esferulticos de fosfato de clcio na superfcie. Durante os primeiros dias houve queda nas concentraes dos ons de clcio e fosfato na soluo e, o processo apresentou estabilidade aps 10 a 12 dias. 10 dias aps a imerso observou-se que a superfcie da amostra havia sido coberta por uma camada de aglomerados de fosfato de clcio. A natureza da camada cristalina precipitada foi determinada pela anlise em difrao de raioX. As amostras de titnio cp jateadas no exibiram decrscimo na concentrao de clcio e fosfato aps exposio ao SBF, mesmo depois de 50 dias. Nas anlises das superfcies das amostras com microscpio eletrnico no foi possvel identificar a presena de clcio ou fsforo. Strnad e colaboradores concluram que implantes cobertos com PSHA exibem maior tolerncia do que os implantes de Ti cp para condies desfavorveis durante a cicatrizao, como na interface das reentrncias ou na instabilidade primria do implante. Os implantes cobertos com hidroxiapatita por plasma-spray mostraram uma alta porcentagem de contato sseo quando as reentrncias foram menores do que 1mm. No caso dos implantes de Ti jateados, o preenchimento das reentrncias com fibras teciduais foi observado em grande parte da superfcie das reentrncias com profundidade de 0,3mm.

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3.9 SUPERFCIE DE TITNIO TRATADA COM SOLUO DE CLCIO

Hamada et al. (2002) pesquisaram o efeito da modificao da superfcie do titnio com solues de clcio e tratamento hidrotrmico em autoclave. Os efeitos do tratamento hidrotrmico na estrutura da superfcie do Ti foram estudados por difratometria de raio X de filme fino (TF-XRD) e espectroscopia de fotoeltron de raio X (XPS). Alm disso, os efeitos na precipitao de apatita na superfcie do Ti em soluo de Hank, assim como em fluido corpreo simulado (SBF) foram investigados. Hamada e colaboradores modificaram as superfcies de Ti utilizando gua destilada, soluo aquosa de CaO e soluo aquosa de CaCl2. Aps a imerso durante 30 dias, os discos foram rinsados com gua destilada, secos e pesados. Foram determinadas as mudanas nas massas por unidade de superfcie de rea antes e aps a imerso. Foram preparadas quatro chapas para a medida da mudana de massa. A microscopia eletrnica de varredura foi usada para analisar a morfologia dos precipitados aps a deposio de ouro. As amostras foram tratadas em 600C por 30 min sob condies a vcuo de aproximadamente 10Pa para aumentar a cristalinidade dos precipitados na superfcie do Ti e analisados usando TF-XRD. Os difratogramas obtidos por Hamada e colaboradores das amostras de Ti no-modificado e Ti modificado em gua, imersos em solues de CaO e CaCl2 com e sem tratamento hidrotrmico so mostrados na FIG. 3.9.

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FIG. 3.9-Difratograma das amostras de Ti no-modificada e Ti modificada em gua e solues de CaO e CaCl2 com e sem tratamento hidrotrmico. Autoclave indica modificao com tratamento hidrotrmico. Hamada et al.(2002)

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Picos do TiO2 (anatsio) foram detectados nas amostras de titnio modificadas em solues de CaO e CaCl2. Esses picos no foram observados no titnio modificado em gua. Isto , o titnio reagiu com as solues contendo ons de clcio, resultando na formao de TiO2; o qual reagiu com gua em menor grau. O pico fraco detectado no espectro obtido foi da superfcie de titnio modificada em soluo de CaCl2 sem tratamento hidrotrmico, o qual indica que a superfcie de xido era fina. Os resultados indicaram que o tratamento hidrotrmico aumenta a sntese do titanato de clcio durante a modificao e forma uma camada espessa na superfcie modificada contendo titanato de clcio. Por outro lado, picos foram detectados no espectro da superfcie modificada do titnio em soluo de CaCl2 sem tratamento hidrotrmico e, picos fracos foram observados com tratamento. A anlise em MEV das amostras de Ti imersas na soluo Hank mostrou significativa precipitao na superfcie do Ti modificada com tratamento hidrotrmico em soluo de CaO aps imerso em soluo de Hank por 30 dias. Mostrou tambm precipitao nas amostras imersas em gua com tratamento hidrotrmico e, em solues de CaO e CaCl2 sem o tratamento, o qual no tinha diferena morfolgica daquele com tratamento hidrotrmico em CaO, mas houve diferena na rea coberta pela precipitao. Observou-se tambm que no houve precipitao nas amostras em gua sem tratamento hidrotrmico e no houve precipitao em soluo de CaCl2 com tratamento hidrotrmico. Aps a imerso em soluo de Hank, a massa do titnio modificado com tratamento hidrotrmico em gua e em soluo de CaO aumentou mais do que as sem tratamento. Alm disso, com tratamento hidrotrmico em soluo de CaCl2, a massa aumentou menos do que a sem o tratamento hidrotrmico. Isto , a camada de superfcie modificada foi dissolvida em soluo de Hank. Os possveis efeitos do tratamento hidrotrmico na superfcie modificada so os seguintes: a) a modificao em gua mostrou um ligeiro aumento na espessura da camada da superfcie, em ambos os casos, com e sem tratamento hidrotrmico e, o aumento da espessura no caso com tratamento hidrotrmico foi menor do que aqueles sem o tratamento; b) a modificao da superfcie das amostras em soluo CaO tambm mostrou um ligeiro aumento de espessura no caso com tratamento hidrotrmico; c) modificao em soluo de CaCl2 mostrou significativo aumento da espessura no caso sem tratamento, porm houve aumento da espessura com tratamento.

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Com relao aos dados de mudana de massa antes e depois da imerso em soluo de Hank, a precipitao da apatita foi melhorada pelo tratamento hidrotrmico em soluo de CaO. Esta melhora pode ter sido causada por 3 fatores: 1) o aumento na espessura da camada de superfcie modificada; 2) o aumento na camada sintetizada de titanato de clcio e 3) aumento no xido de clcio contido na camada modificada de superfcie. Embora, no haja uma explicao clara sobre a causa da precipitao pela espessa camada de superfcie, presume-se que a camada de superfcie mais espessa pode conter mais ons de clcio, os quais podem ser percebidos na soluo de Hank. Hamada e colaboradores concluram que o tratamento hidrotrmico da superfcie modificada do Ti mais efetivo para induzir a precipitao in vitro do que naquelas sem o tratamento hidrotrmico e, a superfcie modificada hidrotermicamente tratada pode apresentar melhor resultado em termos de conduo ssea. Portanto, a otimizao do tratamento hidrotrmico com temperatura e presso pode levar ao desenvolvimento de outras microestruturas da superfcie com grande condutividade ssea.

3.10 EFEITOS DA IMPLANTAO DE FLOR NO TITNIO

Cooper et al. (2006) determinaram o efeito da modificao do teor de on flor na diferenciao osteoblstica em implantes de Ti cp jateados com TiO2 e a formao ssea interfacial por pesquisas in vitro e in vivo. Clulas mesenquimais humanas foram cultivadas em discos de Ti cp jateados por TiO2 tratadas em solues com e sem on flor. A adeso celular, proliferao e expresso gnica osteoblstica foram medidas em microscopia eletrnica de varredura. Aps 24h, no houve diferena na adeso celular entre as superfcies testadas. Alm disso, a superfcie tratada com flor apresentou grande proliferao e crescimento da expresso de protena ssea e morfognica BMP-2. O contato osso-implante formado nas amostras jateadas com TiO2 e tratadas com soluo contendo flor e a superfcie apenas jateada com TiO2 foi de 55,45% e 34,21%, respectivamente. O tratamento com incorporao de on flor na superfcie jateada por TiO2 aumentou a diferenciao osteoblstica in vitro e a formao ssea interfacial in vivo. Semelhante investigao in vitro e in vivo demonstra que a modificao com flor aumenta a diferenciao osteoblstica e a formao ssea interfacial.

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O objetivo do trabalho de Cooper et al. foi determinar o efeito da modificao da superfcie do Ti jateada com TiO2 e tratada com solues contendo ons flor na osteognese medida no ensaio de cultura de clula e identificar o grau de formao ssea na interface do implante endsseo. O tratamento do implante jateado com TiO2 com on flor aumentou a adeso e diferenciao osteoblstica das clulas mesenquimais humanas e aumentou significativamente o contato osso-implante em relao aos implantes de Ti cp jateados com TiO2. A avaliao morfolgica no MEV da superfcie do implante modificada com on flor, no indicou mudana morfolgica da superfcie em relao submetida ao tratamento convencional de jateamento com TiO2. Na caracterizao com MEV observou-se um empacotamento denso de pites uniformemente distribudos na superfcie. Aps 24h, a adeso das clulas na superfcie dos grupos tratados com flor exibiu maior proliferao celular do que nas superfcies que no receberam tratamento com flor. Aps 72h, a adeso celular na superfcie jateada apresentou pouca atividade proliferativa em relao superfcie jateada com ou sem modificao do on flor. Uma tendncia de menor proliferao com aumento do tratamento com flor foi notada em 24h e pode refletir precocemente a diferenciao. Cooper et al. concluram que a superfcie de Ti cp jateada com TiO2 modificada com soluo contendo on flor aumentou a diferenciao osteoblstica, aumentou a expresso gnica osteoblstica em meio de cultura e, apresentou maior formao ssea na superfcie do implante modificado com flor, durante o perodo de cicatrizao. Os resultados indicaram vantagens potenciais com a modificao da superfcie dos implantes de Ti cp tratados com solues contendo fluoreto e houve aumento da rea ativa.

3.11 EFEITOS DA TITNIA NA FORMAO DOS COMPOSTOS BIOATIVOS

Lee e colaboradores (2006) estudaram os efeitos das caractersticas da titnia na formao da apatita bioativa, para melhorar a nucleao preferencial do fosfato de clcio pela interao entre o on clcio no fluido corpreo e a superfcie de xido carregada negativamente. O filme de xido de titnio poroso carregado negativamente para aplicaes por implantes foi sintetizado por processo eletroqumico em soluo de cido sulfrico contendo cido

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fosfrico como um aditivo. Caracterizao microestrutural, identificao de fase e anlise das condies qumicas do filme de TiO2 andico foram executadas e avaliaes biolgicas foram realizadas em fluido corpreo simulado. O resultado do processo de anodizao mostrado na FIG. 3.11. Para a fabricao da camada de TiO2, uma corrente constante andica de 35mA/cm2 foi aplicada na amostra de titnio, onde o potencial andico foi aumentado gradualmente com o tempo. Na FIG. 3.11A, a camada de TiO2 foi menos porosa do que aquela do filme andico formada em potenciais altos e, a estrutura celular no foi nucleada quando se iniciava a anodizao. Mas, em potencial maior do que 90V, a formao da estrutura celular inicia-se e cresce com a evoluo do gs e com o incio da chama. O aspecto da estrutura celular mostrado na FIG. 3.11B. Sob potencial constante de 180V, o tamanho do poro e a espessura aumentou gradativamente com o tempo andico, como pode ser visto na FIG. 3.11C.

FIG. 3.11-Curva corrente x voltagem com tempo para transformar a anodizao sob controles galvanoesttico e potencioesttico, mostrando variao de morfologias de superfcies (A, B, C) durante anodizao em mistura de 1,5 M H2SO4/0,3 M H3PO4. Lee et al. (2006)

No processo de anodizao, a estrutura e a morfologia dos xidos andicos podem variar atravs do controle dos parmetros processo, como as composies eletrolticas. Para observar os efeitos da concentrao do cido fosfrico com aditivo na microestrutura do filme andico de TiO2, a anodizao foi executada em 180V por 30 min em vrias solues eletrolticas. As variaes de morfologia com concentraes de cido fosfrico so mostradas na FIG. 3.11.1. Como comparao, a morfologia do Ti puro atacado mostrado na FIG. 3.11.1a. Do resultado na FIG. 3.11.1, fica claramente sugerido que a morfologia da superfcie da camada andica de TiO2 dependente em composio eletroltica e tambm os tamanhos de clula e de poro foram gradativamente aumentados com a concentrao de cido fosfrico

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em eletrlise. Essa diferena em morfologias na titnia andica pode ser afetada pela compatibilidade bioativa.

FIG. 3.11.1 - Imagens de MEV das superfcies das amostras aps ataque em HF/HNO3 (a), e anodizao em 1,5 M H2SO4/0,3 M (b), 1,5 H2SO4/ 0,6 M (c) e mistura de 1,5 M H2SO4/ 0,9 M H3PO4 (d). Lee et al. (2006)

Mostra-se na FIG. 3.11.2 o difratograma do filme de TiO2 andico formado em vrias concentraes de cido fosfrico. O espectro de difrao de raio X mostrou picos relativos s fases de anatsio e do substrato de titnio. O filme andico formado em mistura de H2SO4/H3PO4 apresentou reduo gradativa dos picos de difrao de anatsio e do titnio com a concentrao de cido fosfrico. Esse dado indica que durante a anodizao com cido fosfrico com maior concentrao, a camada andica cresce mais rapidamente e facilmente incorpora espcies qumicas da eletrlise. Os nions incorporados podem agir como interruptores da formao de anatsio. Portanto, as intensidades dos picos de raio X do titnio e do anatsio apresentam pequena reduo.

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FIG. 3.11.2 - Modelo de difrao de raio X dos filmes de titnia andica com concentrao de cido fosfrico. Lee et al. (2006)

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A avaliao da bioatividade dos filmes de TiO2 andicos formados em mistura de H2SO4 e H3PO4 foi analisada em soluo de fluido corpreo simulado. Aps a imerso em SBF 37C por 20 dias, a superfcie do filme andico foi observada em MEV com espectroscopia de energia dispersiva (EDS) e foi comparada com a amostra somente atacada em mistura de HNO3/HF e imerso em SBF. A FIG. 3.11.3 mostra as morfologias do titnio atacado e a superfcie andica de TiO2 aps imerso em SBF por 20 dias. As imagens de MEV mostram os precipitados de hidroxiapatita na superfcie de todas as amostras. Os precipitados apareceram em todos dos filmes de xido andico. Porm, na camada formada na mistura de H2SO4/0,9M H3PO4, como pode-se observar na FIG. 3.11.3 d, existe maior nmero de partculas do composto de Ca-P.

FIG. 3.11.3 - Micrografias das amostras imersas em SBF por 20 dias aps ataque somente em HF/HNO3 (a), anodizao com mistura de solues de 1,5 M H2SO4/ 0,3 M H3PO4 (b), 1,5 M H2SO4/ 0,6 M H3PO4 (c) e 1,5 M H2SO4/ 0,9 M H3PO4 (d). Lee et al. (2006)

O filme de xido andico formado em alta concentrao de cido fosfrico apresentou maior precipitao de compostos bioativos Ca-P do que o filme andico formado em cido fosfrico diludo. Para examinar os elementos qumicos das partculas precipitadas na camada de TiO2 durante o teste de imerso em SBF, foram realizadas anlises em EDS. Aps a imerso por 30 dias em SBF, os compostos precipitados no filme andico obtido com a mistura de H2SO4/0,9M H3PO4 so mostrados na FIG. 3.11.4. Com as anlises de EDS (FIG.3.11.4), pode-se constatar que as partculas precipitadas com dimetro aprox. de 10m so compostos ricos em Ca-P-O. Esses resultados indicaram que mais ons fosfato so incorporados no filme de xido durante a anodizao com alta concentrao de cido

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fosfrico, e como estas partculas possuem carter inico sobre o filme andico, h aumento do potencial para ocorrer a precipitao de compostos ricos em Ca-P-O no filme andico.

FIG. 3.11.4-Micrografias e perfis lineares de partculas precipitadas na superfcie da camada andica formada em mistura de H2SO4/0,9MH3PO4 e imersas em SBF por 30 dias. As anlises de EDS sugerem que os precipitados so compostos ricos em Ca. Lee et al. (2006)

As camadas de TiO2 andicas para aplicaes em implantes podem ser fabricadas por mtodo eletroqumico. As caractersticas da superfcie e as propriedades bioativas dos filmes de TiO2 influenciam na bioatividade. A morfologia da superfcie do filme andico de TiO2 dependente da composio e concentrao do eletrlito usado na anodizao, e a estrutura celular do filme andico aumenta com a concentrao de cido fosfrico do eletrlito. O filme de xido andico obtido no tratamento eletroqumico com o cido sulfrico contendo alta concentrao de cido fosfrico, a quantidade de espcies de fosfatos incorporadas na camada de xido andico maior em comparao a baixa concentrao de cido fosfrico na soluo. Nas anlises qumicas com XPS, as espcies com fosfatos incorporados apresentaram sob a forma de HPO4-, PO4-, PO3-. Os locais carregados negativamente na superfcie andica do xido de titnio agem como locais preferenciais de nucleao de fosfato de clcio devido atrao do on clcio do fluido biolgico, o xido andico formado na maior concentrao de cido fosfrico representou maior capacidade de precipitao do composto bioativo Ca-P do que o filme andico formado em cido fosfrico diludo. Os resultados da anlise de EDS mostraram que os precipitados em SBF so compostos ricos em clcio.

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3.12 RUGOSIDADE E MOLHABILIDADE

3.12.1 RUGOSIDADE

Desde que Brnemark et al. descreveram o mecanismo e os efeitos da osseointegrao, h quase quatro dcadas, diversas pesquisas biomdicas e de materiais tm procurado encontrar a morfologia ideal da superfcie de implante dentrio capaz de garantir uma longa permanncia de ancoragem ao tecido sseo (VANZILLOTTA et al., 2006). Segundo Brnemark et al., (1977), a osseointegrao consiste em uma conexo estrutural e funcional direta entre o tecido sseo e a superfcie de um implante submetido ao carregamento. O desenvolvimento da interface osso-implante depende das interaes diretas da matriz ssea e dos osteoblastos (clulas produtoras de tecido sseo) com os biomateriais. Alm disso, a ligao celular parece ser muito sensvel s variaes na superfcie quanto composio qumica e topografia do titnio (forma e rugosidade) comercialmente puro (FENG et al., 2004). Caractersticas superficiais como: energia da superfcie, rugosidade, topografia e composio qumica e pH so condies importantes que devem ser analisadas nas interaes do implante com o tecido sseo do hospedeiro (NAYAB et al., 2005). O processo de crescimento de clulas sobre a superfcie do implante depende da variao da rugosidade, por exemplo, nos implantes com superfcie no estado como usinada apresentam proliferao e crescimento das clulas, preferencialmente, ao longo das marcas de usinagem. Trata-se de uma rugosidade com forte direcionalidade. Em contrapartida, nas superfcies submetidas ao tratamento para mudana da morfologia e rugosidade observa uma menor direcionalidade quanto rugosidade e, conseqentemente uma melhor interao das clulas na superfcie dos implantes. Outro aspecto a ser considerado em relao ao efeito da microestrutura superficial na adeso celular o tipo de clula. Existem clulas com caractersticas de rugofilia, cujas superfcies rugosas so preferidas, como osteoblastos, macrfagos, clulas epiteliais e leuccitos e, clulas que so mais atradas por superfcies lisas, como clulas gengivais (fibroblastos). Quanto menor a direcionalidade da rugosidade, melhor o comportamento das clulas na superfcie dos implantes (ELIAS et al., 2004). Diversas pesquisas tm sido desenvolvidas na rea odontolgica, para modificar a morfologia da superfcie de implantes com o intuito de melhorar a rugosidade superficial, aumentar a biofixao endssea, favorecer a cintica do processo de neoformao ssea e

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obter sucesso na osseointegrao. Entre esses procedimentos pode-se citar: a) deposio de uma camada de hidroxiapatita, b) ataque cido, c) jateamento com partculas de xido de titnio (TiO2), d) microranhuras, e) oxidao andica, f) implantao inica (VANZILLOTTA et al., 2006) e g) jateamento seguido de imerso em cido (ELIAS et al., 2004). Informaes pr-clnica a respeito de jateamento com posterior ataque cidos em implantes de Ti comercialmente puros indicaram que a extenso da formao ssea nesta superfcie maior do que nos implantes comercialmente puros usinados, sem tratamento superficial (COOPER et al., 2006). Portanto, a importncia do tratamento da superfcie do implante comprovada a partir de estudos, os quais demonstraram que o mecanismo de osseointegrao de implantes apenas usinados, inicia-se ao seu redor e, no sobre a sua superfcie. Por isso, a cicatrizao no local desses implantes ocorre a partir de um processo de mineralizao gradativo em direo ao implante (SENNERBY e ERICSON, DELIGIANI et al. in ELIAS, 2004). A superfcie de um implante somente usinado no indutora, necessitando a deposio de materiais bioativos, os quais facilitaro a formao de pontes de clcio e fsforo (ELIAS et al., 2004). Durante a cicatrizao, mudanas biolgicas ocorrem na interface osso-implante sendo dependentes das propriedades da camada de xido inicial (ELIAS, LIMA e FIGUEIRA, 2005). No estudo realizado por Elias, Lima e Figueira (2005) implantes usinados foram submetidos aos tratamentos de superfcie atravs de imerso em tipos diferentes de cidos; jateamento seguido de cido; oxidao e tratamento com laser. As amostras foram observadas no MEV antes e aps os tratamentos e, as morfologias das superfcies comparadas aos implantes com tratamentos semelhantes. O nmero de implantes usinados que so comercializados tem sido reduzido drasticamente nos ltimos anos, pois possuem superfcies heterogneas e sulcos orientados provenientes das ferramentas de usinagem. Isto no favorece a adeso de clulas na superfcie do biomaterial e, conseqentemente, reduz a ligao satisfatria osso-implante. O objetivo do tratamento da superfcie dos implantes aumentar a rugosidade da superfcie para induzir a proliferao de clulas responsveis pela osseointegrao. A empresa Conexo Sistema de Prtese produz o implante Master Screw Porous com essas caractersticas de superfcie anisotrpica. No tratamento com cidos, a rugosidade do implante torna homognea, ocorre aumento da rea superficial ativa e, com isso melhora a bioadeso das clulas. A essas caractersticas damos o nome de superfcie isotrpica, pois no possvel identificar uma orientao preferencial das microcavidades, porosidades e sulcos. Esse tratamento consiste em imergir as

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amostras em banhos de solues contendo HCl/H2SO4, HF/HNO3 e HNO3. Um exemplo de implante comercial com este tratamento o Master Porous , da empresa Conexo Sistemas de Prteses. Outro tratamento por jateamento de partculas slidas na superfcie do implante. Essas partculas podem ser constitudas de xido de alumnio, xido de titnio, xido de silcio, cloreto de sdio e hidroxiapatita. A rugosidade obtida com o jateamento depende do tamanho das partculas, a distncia de jateamento, velocidade de rotao da pea, presso do equipamento, tempo de jateamento, resistncia mecnica das partculas e da pea. A empresa Conexo fornece o implante Master Porous, com esse tratamento superficial. No tratamento eletroqumico (oxidao), solues cidas e bsicas so empregadas em diferentes temperaturas, as quais permitem a incorporao de ons de clcio, flor e fsforo. O objetivo deste processo aumentar a espessura da camada de xido e simultaneamente modificar a morfologia, composio qumica, cristalinidade e rugosidade superficial. Com este tratamento mudanas na espessura, estrutura de microporos e cristalinidade ocorrem, melhorando assim, o comportamento biomecnico dos implantes. Portanto, a formao ssea e, conseqentemente a osseointegrao sero influenciadas por essas mudanas relacionadas s caractersticas da superfcie do xido (Sul in Elias, Lima e Figueira, 2005). Os implantes comercializados atualmente com essas caractersticas so o TiUnite produzidos pela empresa Nobel Biocare, Gotemborg Sucia e o Master Vulcano produzido pela Conexo. A rugosidade influenciada pelos parmetros envolvidos no tratamento de oxidao, como tipo de soluo, concentrao e temperatura do processo (Elias et al. e Sul in Elias, Lima e Figueira, 2005). No tratamento com laser observa-se macrorugosidades na superfcie do implante e, no h a formao de microrugosidades. A superfcie tratada com laser apresenta caracterstica tpica de estrutura bruta de fuso, os cristais possuem a superfcie lisa e ocorre unio entre eles. A desvantagem desse processo a criao de regies com baixa rugosidade, dificultando a adeso das clulas mecanicamente. Os implantes que possuem superfcie como usinada ou tratadas com laser apresentam caractersticas morfolgicas anisotrpicas. Os valores dos parmetros de rugosidade so importantes para analisar a adeso, a adsoro e o espalhamento das clulas. Os parmetros de rugosidade mais utilizados so os nmeros de picos por unidade de comprimento (Pc); o valor mdio aritmtico dos desvios do perfil da rugosidade em relao a uma linha mdia (Ra ou Sa); o valor mdio quadrtico da rugosidade (Rq ou Sq); o valor mdio de cinco rugosidades unitrias medidas entre o ponto mais baixo e o mais alto do perfil (Rz); rugosidade mxima (Rmx); distncia mdia entre

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sulcos (Sm); o valor da rugosidade mdia dos picos que esto acima da rea de contato mnima do perfil (Rpk) e o valor da rugosidade mdia dos valores que esto abaixo da rea de contato do perfil (Rvk). De acordo com Wennerberg e Albrektsson in Elias, 2005 os implantes como usinados possuem rugosidade entre 0,5 e 1,0mm; os implantes tratados com cido apresentam rugosidade mdia entre 0,54 e 1,97mm; os jateados possuem valores de rugosidade variando entre 0,84 e 2,12mm e os implantes com a superfcie oxidada apresentam Ra acima de 2,00mm. Alm disso, implantes tratados superficialmente com cidos tm sua rugosidade modificada e a superfcie torna-se isotrpica. Isto, j no ocorre com implantes tratados com jateamento, no qual h mudana simultnea na rugosidade e na energia superficial devido s tenses residuais compressivas. A rugosidade est associada a um importante fator que a osseointegrao, a qual pode ser medida pelo torque de remoo. Por isso, quanto mais adequada a rugosidade, maior a resistncia remoo do implante (Elias et al., 2005). De acordo com Oshida e Lim (2001) a ligao de clulas s superfcies de titnio biocompatveis um importante parmetro na rea clnica de implante mdico e odontolgico. Uma importante considerao reservada aos implantes tem sido a produo de superfcies que promovem respostas desejveis nas clulas e tecidos em contato com os implantes. Esses pesquisadores estudaram trs materiais de titnio (titnio comercialmente puro-Ticp; Ti6Al4V e TiNi), os quais foram tratados mecanicamente, quimicamente, mecanoquimicamente e termicamente para formar superfcies cncavas com diversas rugosidades. Usando quatro meios diferentes (gua destilada; 1% de soluo aquosa de NaCl; uma suspenso de neutrfilos humanos e uma suspenso de clulas de ligadas a osteoblastos MG63), foram medidos ngulos de contato iniciais. Seis leituras (trs gotas de cada medida por dois observadores) foram coletadas de cada material e para cada meio. A correlao de coeficientes foi usada para comparaes pelos grupos. Como resultado, observou-se que, estatisticamente, o titnio cp no obteve diferenas significativas nos ngulos de contato entre os quatro meios; o ngulo de contato aumentou linearmente com a rugosidade mdia, isto quando os ngulos foram maiores que 45 e, o ngulo de contato diminuiu linearmente com a rugosidade, quando os ngulos foram menores que 45. A unio das clulas superfcie do titnio uma considerao importante na rea clnica odontolgica. O principal fator dos responsveis pelo desenho dos implantes a produo de superfcies que promovem desejveis respostas nas clulas e tecidos em contato com os

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implantes. Comportamentos celulares, tais como adeso, mudana morfolgica, alterao funcional e proliferao so extremamente afetadas pelas propriedades da superfcie, como a hidrofilicidade, rugosidade, carga, energia livre e morfologia. A resposta tecidual ao implante dental pode envolver fatores tais como tamanho, forma, topografia da superfcie e relativo movimento interfacial, bem como fatores qumicos associados com a composio e estrutura do implante. O primeiro fator deve ser considerado como a compatibilidade morfolgica. Os segundo e terceiro fatores so bem documentados como compatibilidade mecnica e compatibilidade biolgica, respectivamente. Essas trs compatibilidades so exigidas para se obter com sucesso um sistema de implante funcional. As propriedades da superfcie dos biomateriais atuam como papel fundamental no processo de adeso das clulas adjacentes. A adeso celular e seu espalhamento no biomaterial so, entre outros fatores, dependente da molhabilidade da superfcie do material. Medidas de molhabilidade do material, expressa pelo ngulo de contato na presena de diferentes lquidos, um ndice de citocompatibilidade. A modificao da superfcie do titnio tem sido muito estudada a fim de melhorar a aposio ssea, adeso tecidual e migrao de clulas osteoblsticas. Com a superfcie qumica do titnio modificada, diferentes taxas de ligao celular foram observadas. Porm, respostas bioqumicas das clulas em relao a outras propriedades superficiais, como espessura do xido, topografia da superfcie ou mudanas dinmicas podem ocorrer aps a implantao do implante. Os biomateriais usados dentro do organismo devem entrar em contato com clulas relacionadas aos tecidos. Por esta razo, eles devem ser naturalmente inofensivos ao organismo. Alm disso, eles devem possuir um efeito biolgico capaz de fornecer circunstncias favorveis s propriedades e funes das clulas no local do implante. A superfcie atua com um papel fundamental nas interaes biolgicas por quatro razes. Primeira, a superfcie do biomaterial a nica parte em contato com o meio. Segundo, a regio superficial do biomaterial quase sempre diferente na morfologia e na composio do volume. Diferenas surgem do rearranjo molecular, reao de superfcie e contaminao. Terceiro, para biomateriais que no liberam substncias txicas, as caractersticas da superfcie comandam a resposta biolgica. Quarto, algumas propriedades superficiais como topografia afetam a estabilidade mecnica da interface tecido-implante. Portanto, os mtodos de preparao de superfcie de implante pode significativamente afetar a resultante das propriedades da superfcie e subseqentemente as respostas biolgicas que ocorrem nessa superfcie. Recentes pesquisas mostraram que o sucesso ou o fracasso de

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implantes odontolgicos podem ser relacionados no somente s propriedades qumicas da superfcie do implante, mas tambm natureza micro-morfolgica. Do ponto de vista in vitro, a resposta de clulas e tecidos em superfcies de implantes pode ser afetada macroscopicamente pela topografia ou geometria da superfcie, bem como pela superfcie morfolgica ou rugosidade microscopicamente. Essas caractersticas afetam, incontestavelmente, a resposta de clulas e tecidos a vrios tipos de biomateriais. De todas as respostas celulares, considera-se a adeso celular a mais importante reposta necessria para o desenvolvimento de uma interface rgida osso-implante. Macroscopicamente (rugosidade >10m), a rugosidade influenciada pelas propriedades mecnicas da interface osso-titnio, bloqueio mecnico da interface e a biocompatibilidade do material. Microrugosidades superficiais promovem significativamente melhor aposio ssea do que superfcies lisas resultando em maior porcentagem de osso em contato com o implante. Essas microrugosidades superficiais podem influenciar as propriedades mecnicas da interface, a distribuio de tenso e tambm o remodelamento sseo. Aumentando a rea de contato e o bloqueio mecnico do osso em relao superfcie microrugosa, pode haver diminuio de concentrao de tenso resultando em reduo da reabsoro ssea. Diversos estudos de implantes odontolgicos clnicos tm focalizado o sucesso dos implantes endsseos na variedade de caractersticas superficiais. Na tentativa de melhorar a quantidade e a qualidade da interface osso-implante, inmeras modificaes na superfcie dos implantes foram realizadas. Para se obter compatibilidade morfolgica a superfcie do implante de titnio necessita ser alterado. Essas superfcies podem ser tratadas com mtodos aditivos (criando uma textura convexa na superfcie), assim como no processo de spray de plasma que aumenta a rea superficial. Elas tambm podem ser modificadas atravs de mtodos subtrativos (criando uma textura cncava na superfcie), assim como imerso em cido, ataque cido, jateamento de partculas para alterar a textura, bem como aumentar a rea superficial. O desenvolvimento e o uso dessas modificaes na superfcie tm sido baseados na teoria de que a osseointegrao satisfatria pode ser obtida com o aumento da topografia e da rugosidade da superfcie do implante (LIM e OSHIDA, 2001).

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3.12.2 MOLHABILIDADE

A molhabilidade mede a energia das superfcies atravs do ngulo de contato de lquidos com a superfcie. Os valores do ngulo de contato indicam se a superfcie hidroflica ou hidrofbica. Elias et al., (2005) observaram que as superfcies oxidadas em contato com gua destilada ou soluo salina so mais hidroflicas do que as superfcies tratadas com cido ou jateadas. Nos testes in vitro e in vivo foram observados que a rea da superfcie de titnio, onde ocorre o espalhamento de osteoblastos humanos, aumenta com a molhabilidade da superfcie (Georgi, Grinnel e Groth in Elias, 2005). Outros estudos mostraram que quanto maior a molhabilidade da superfcie maior a proliferao de clulas, principalmente de osteoblastos. Alm disso, os fibroblastos possuem maior adeso e espalhamento na superfcie hidroflica que na hidrofbica (Webb, Hlady e Tresco in Elias, 2005). Kamei e Mitsuhashi (2000) estudaram as superfcies hidrofbicas e hidroflicas de um nico cristal de dixido de titnio em relao ao controle da molhabilidade de sua superfcie pelo tratamento mecnico-qumico. O controle da molhabilidade em uma superfcie com posies arbitrrias de superfcies slidas extremamente interessante no ponto de vista da cincia e da tecnologia. Recentemente, foi descoberto que uma posio controlada com alta velocidade de transio hidroflica para hidrofbica era possvel em superfcies de um nico cristal de anatsio-TiO2, aplicando um novo mtodo de frico molhado. Esse novo modelo de tratamento de superfcie mecnico-qumico proporcionou a troca da superfcie hidroflica com ngulo de contato de 3 para uma superfcie com ngulo de 80 durante 1 minuto, em posies arbitrrias na superfcie. Conseqentemente, comportamentos hidrofbicos podem ser realizados em superfcies hidroflicas. O filme de anatsio TiO2 mostrou um ngulo de contato de 81 antes da irradiao de UV. Esta irradiao foi realizada utilizando uma lmpada de 200W de Hg-Xe com fibra tica associada e 20 min. de irradiao UV, que resultou em uma superfcie homognea hidroflica do filme. Duas gotculas de gua foram difundidas no filme, ambas mostrando idnticos ngulos de contato de 3. A difuso da gua com ngulo de contato de 3 e a gotcula de gua com ngulo de contato de 80 foram observadas lado-a-lado na mesma superfcie. Isso foi previamente avaliado ao perodo de armazenagem de duas a trs semanas no escuro, o qual era necessrio

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para uma completa reconverso de superfcies de TiO2 de hidroflico para hidrofbico. Porm, esse novo mtodo frico molhado fornece posio controlada, bem como reconverso na superfcie hidrofbica. O ngulo de contato inicial do filme era de 81, durante 20 min. de irradiao UV voltada para a superfcie hidroflica com ngulo de contato de 3. A mudana da superfcie hidrofbica para hidroflica no TiO2 foi atribuda formao e extino do grupo hidroxil da superfcie. Precisamente, a irradiao UV causou reduo de ons Ti de Ti4+ para Ti3+ e a produo de vacncias de oxignio nas superfcies TiO2. Subseqente adsoro dissociativa de vapor de gua ambiente nessas vacncias de oxignio resultou na formao de um grupo hidroxil na superfcie (transio hidrofbica para hidroflica). A remoo desses grupos hidroxis da superfcie defeituosa de TiO2 (transio hidrofbica para hidroflica) pode ser atribuda a reoxidao de TiO3+ na superfcie durante a armazenagem no escuro. A fora mecnica usada no processo de frico molhado foi em torno de 5000 N/m2, muito forte para causar defeitos superficiais na superfcie TiO2, a qual pode facilitar a adsoro do grupo hidroxil. O mtodo de frico molhado apresenta potencial para desenvolvimento da nova tecnologia. Atravs desse processo consegue-se o controlar localmente o ngulo de contato da gua na superfcie doTiO2. Molhabilidade constitui-se o ngulo de contato entre um lquido e um substrato. A molhabilidade de uma superfcie amplamente dependente da energia de superfcie e influencia o grau de contato com o meio fisiolgico; aumentando a molhabilidade, aumenta a interao entre a superfcie do implante e o meio biolgico. A molhabilidade na superfcie de biomateriais avaliada para atuar sobre a ligao de clulas. Essa ligao celular no estgio inicial afetada pelas propriedades fsicas e qumicas, incluindo a molhabilidade. Com isso, pode-se concluir que a ligao celular ao material est intimamente relacionada molhabilidade da sua superfcie. Por essa razo que o foco do desenvolvimento dos biomateriais tem encontrado meios de controle da molhabilidade da superfcie do material e a ligao com tecidos do local do implante. Portanto, com baixo ngulo de contato (maior a molhabilidade), a taxa de ligao celular ser alta, enquanto que com menos ligao celular, o ngulo de contato alto e, conseqentemente a molhabilidade ser menor (LIM e OSHIDA, 2001). Oshida e colaboradores investigaram as mudanas de ngulos de contato em alguns biomateriais pr-oxidados incluindo Titnio comercialmente puro, Ti6Al4V, NiTi, Ni puro, ao inoxidvel 316L e liga Co-Cr. Todos os materiais foram oxidados a 300C por 30 minutos

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em puro oxignio. Utilizando 1% de soluo NaCl, um mtodo de gotejamento foi empregado para medir os ngulos de contato e, mudanas nestes em funo do tempo foram medidas. Alteraes nos ngulos de contato em funo do tempo indicam que todos os materiais testados podem ser classificados dentro de trs grupos; (i) baixo ngulo de contato inicial com baixa taxa de alterao para o Ni puro e a liga Ti6Al4V, (ii) alto ngulo de contato inicial com baixa taxa de alterao para o ao inoxidvel 316L e a liga Co-Cr e (iii) alto ngulo de contato com alta taxa de alterao para o Ti cp e NiTi. Com isso, pode-se dizer que a energia de superfcie, determinada pelas medidas de ngulos de contato, est relacionada estrutura cristalina do filme de xido da superfcie. O objetivo do trabalho de Lim e Oshida era elucidar a relao entre a superfcie rugosa e a medida de ngulo de contato em diversas superfcies de titnio trabalhadas mecnica e quimicamente. Alm disso, esclarecer o efeito da molhabilidade dos materiais de titnio em culturas de clulas, com a molhabilidade sendo expressa pelos ngulos de contato na amostra atravs de quatro meios diferentes (gua destilada, 1% de soluo de cloreto de sdio, uma suspenso de neutrfilos humanos e uma suspenso de clulas MG-63 ligadas a osteoblastos).

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4 MATERIAIS E MTODOS

O presente estudo foi dividido nas seguintes etapas: 1) Preparao da soluo Kokubo antecedida pela anlise bibliogrfica das diferentes composies das solues propostas, inclusive a importncia da gua Milli-Q obtida por osmose reversa, praticamente isenta de ons metlicos que agiriam como agentes nucleantes de precipitao. A prtica da preparao adequada desta soluo tem-se mostrado de fundamental relevncia. 2) Determinao da rugosidade e da molhabilidade das superfcies antes da imerso na soluo SBF. A rugosidade e a tenso superficial tm forte influncia na nucleao e no crescimento dos cristais precipitados. A molhabilidade foi medida com gua destilada (controle) e soluo de fluido corpreo simulado (SBF). 3) Imerso das amostras de implantes de titnio com a incorporao de clcio, fsforo e flor na superfcie. importante a busca contnua de informaes sobre a influncia e o comportamento dos ons clcio e flor e do radical fosfato na superfcie dos implantes dentrios, bem como, nas pastilhas e discos de titnio. 4) Caracterizao das superfcies dos corpos de prova pela observao no MEV, antes e aps a imerso na soluo Kokubo. 5) Caracterizao das amostras aps imerso, precipitao e secagem, por Difrao de raios X e microanlise com EDS.

4.1 PREPARAO DA SOLUO SBF

A soluo SBF usada no presente trabalho foi a convencional, proposta por Kokubo, com composio qumica mostrada na TAB. 4.1 (KOKUBO e TAKADAMA, 2006), pois a mais utilizada segundo a literatura. Os reagentes utilizados para a preparao da soluo Kokubo foram adquiridos na representante MERCK-Hexgono Qumica e Equipamentos Ltda-Rio de Janeiro. A vidraria usada para a produo e armazenamento da soluo, assim com o pHmetro de mesa e um termmetro para ser colocado em estufa foram obtidos da Elzividros- Rio de Janeiro.
TAB. 4.1-Quantidades e purezas dos reagentes para preparao de 1000 ml de SBF. Kokubo e Takadama (2006)

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Reagentes NaCl NaHCO3 KCl K2PO4.3H2O MgCl2.6H2O 1,0M-HCl CaCl2 Na2SO4 Tris* 1,0M-HCl

Quantidades Pureza (%) 8,055g 0,355g 0,225g 0,231g 0,311g 39ml 0,292g 0,072g 6,118g 0-5ml 99,5 99,5 99,5 99,0 98,0 ______ 95,0 99,0 99,0 ______

* Hidroximetil aminometano

Antes da preparao da soluo SBF, toda a vidraria utilizada foi lavada com detergente Extran 5% v/v e rinsada com gua Milli-Q. O detergente Extran foi adquirido na MERCKHexgono Qumica. Aps a pesagem dos reagentes mostrados na TAB. 4.1, em uma balana analtica com preciso de 0,0001g fez-se a dissoluo dos reagentes em um litro de soluo. A dissoluo foi realizada temperatura de 37 C e com agitao moderada. A gua usada em todas as etapas do processo foi proveniente do sistema de filtros e osmose reversa Milli-Q. Neste processo purifica-se a gua at o grau ultrapura (praticamente livre de ons). importante o monitoramento do pH durante toda a dissoluo dos constituintes, evitando assim precipitaes prematuras. Um pHmetro calibrado foi usado. O pH at a dissoluo do sulfato de sdio foi mantido em 1,25 e, aps a adio lenta do reagente tris, o pH foi elevado para 7,65. A seguir fez-se o gotejamento de HCl para ajustar o pH em 7,4. O reagente (tris) tambm foi adicionado para o ajuste do pH. Um importante indicativo do sucesso da preparao da soluo Kokubo a manuteno da limpeza e ausncia de cristais ou precipitados em suspenso aps encubao em estufa 37C. A soluo de SBF preparada foi armazenada em frascos de polietileno previamente limpos, de acordo com o padro de lavagem para todo o material e sua conservao foi feita em geladeira. Para testar o desempenho da soluo, um cilindro de titnio com a superfcie tratada (por anodizao) foi mantido imerso em SBF 37C, durante 21 dias. Aps lavagem e secagem foi analisado no MEV para verificar a ocorrncia de precipitao na sua superfcie. Havendo precipitao, conclui-se que a soluo preparada est apta a ser usada, como mostrado na FIG. 4.1. A

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preparao da soluo de SBF foi realizada no laboratrio de cermica do Centro Brasileiro de Pesquisas Fsicas (CBPF-Rio de Janeiro).

FIG. 4.1-Precipitado de SBF no cilindro de titnio anodizado.

4.2 PREPARAO DAS SUPERFCIES DOS IMPLANTES E PASTILHAS DE TITNIO

Foram usados 48 implantes, que foram divididos em quatro grupos: 12 usinados sem tratamento da superfcie (usinada); 12 com ataque cido convencional; 12 com tratamento de anodizao e 12 tratados com Flor (NaF). Foram usadas 30 pastilhas com 2,0mm de espessura: 6 unidades sem tratamento (usinada) com a superfcie semelhante ao implante dentrio comercial (Conexo Sistema e Prteses, So Paulo); 9 tratadas com ataque cido (Conexo Sistema e Prtese); 9 com tratamento obtido por anodizao (Conexo Sistema e Prtese) e 6 tratadas com NaF.

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4.3 CARACTERIZAO DA RUGOSIDADE, MORFOLOGIA E MOLHABILIDADE

Nesta etapa duas amostras de cada grupo foram analisadas no microscpio eletrnico de varredura, Jeol JSM-5800 LV (IME-Rio de Janeiro). A rugosidade foi determinada na lateral das pastilhas, pois no centro existem marcas profundas das ferramentas de usinagem que podem fornecer valores dos parmetros da rugosidade sem significncia em relao ao corpo dos implantes. O rugosmetro usado foi Perthometer Concept com apalpador mecnico de capacidade de 50 m e apalpador a laser com capacidade de 250 m (UFF-Volta Redonda). A rugosidade ou textura primria pode ser definida como o conjunto de desvios ou irregularidades na superfcie do material. Os parmetros determinados para a quantificao da rugosidade foram: Ra, Rq, Rz, Rmax, Rt, R3z, Pt. i) Ra representa a rugosidade mdia aritmtica (m), cuja medida a mdia aritmtica das reas acima da linha mdia do perfil, dentro do percurso de medio lm. ii) Rq a rugosidade mdia quadrtica, cuja medida a mdia quadrtica das reas acima da linha mdia do perfil, dentro do percurso de medio lm. iii) Rz a rugosidade mdia total, a qual compreende a mdia aritmtica das alturas das asperezas Zi medidas em cada comprimento amostral do perfil. Corresponde mdia aritmtica dos 5 valores de rugosidade parcial, sendo que rugosidade parcial (Zi) a soma dos valores absolutos das ordenadas dos pontos de maior afastamento, acima e abaixo da linha mdia, existentes dentro de um comprimento de amostragem (cutoff). iv) Rmax a rugosidade mxima, a qual a altura mxima dos picos, ou o maior valor das rugosidades parciais (Zi) encontrada dentro do comprimento de avaliao (lm). v) Rt a profundidade total da rugosidade, a qual corresponde distncia vertical entre o pico mais alto e o vale mais profundo dentro do comprimento de avaliao, independentemente dos valores de rugosidade parcial. vi) R3z a rugosidade mdia do 3 pico e vale, define-se como a mdia aritmtica dos valores de rugosidade parcial (3Zi) correspondentes a cada um dos cinco mdulos (cutoff). vii) Pt a frao de contato determinada na profundidade do vale, est definida como a porcentagem da rea de contato gerada pelo truncamento dos picos para uma certa profundidade que tambm pode ser expressa em porcentagens considerando o valor de percurso (lm) como sendo 100%.

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Para determinar a molhabilidade das pastilhas e discos de titnio foi usado o gonimetro Ram-Hart, Inc. modelo NRL A 100 (UFRJ-Rio de Janeiro). Fez-se o emprego de uma seringa para liberar volumes iguais (2,0l) do lquido na superfcie das amostras. Determinouse o ngulo de contato da gua destilada e da soluo SBF com as amostras. As pastilhas de titnio possuam 2,0 mm de espessura. Foram determinadas trs medidas em cada amostra. Foram calculados os desvios padres dos valores de ngulos de contato encontrados.

4.4 IMERSO EM SBF

Nesta fase as amostras foram imersas em soluo SBF. As amostras foram colocadas em recipientes com tampas (tubos Falcon) contendo 30 ml de soluo, em posies prdeterminadas pela literatura (inclinadas e encostadas na parede do tubo), depois foram fechados e colocados em banho-maria temperatura de 37C 1C, durante trs tempos. Um grupo ficou imerso por 10 dias; o segundo permaneceu imerso por 20 dias e, o terceiro grupo ficou por 30 dias. Esses procedimentos foram realizados no laboratrio de biomateriais do IME, com o equipamento da Quimis Q-215-1 de banho-maria para manter a temperatura estvel. Com os perodos de imerso usados, houve a formao de um precipitado, o qual indicativo de benefcio para o crescimento sseo sobre as amostras com superfcie bioativa, isto , formao de uma interface indutora de hidroxiapatita. Os dados obtidos foram comparados com os da literatura.

4.5 ANLISE POR DIFRAO DE RAIOS X E OBSERVAO NO MEV

Aps a imerso em soluo SBF, os implantes e pastilhas foram caracterizados por difrao de raios X e analisados no MEV acoplado com microsonda EDS. As amostras imersas durante 10 dias foram submetidas difrao de raio X na Companhia Siderrgica Nacional (CSN), em Volta Redonda, com o equipamento da Siemens-modelo D5000. As amostras imersas em SBF durante 20 e 30 dias foram analisadas pela difrao de Raios-X no CBPF (Rio de Janeiro) com o modelo XPert PRO-Panalytical. Os parmetros utilizados para a difrao foram: mtodo de Bragg-Bretano; rotina de raio rasante ( 1); varredura de 20 a

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60; passo de tempo de 1,0 segundo; anodo de cobre; voltagem de 40 kV; corrente de 30mA e filtro de Nquel, na CSN e, no CBPF foram utilizados os mesmos parmetros, exceto a corrente que foi de 40mA, no havia filtro, mas sim um monocromador e a medida foi -2. Com base nos difratogramas obtidos foi possvel qualificar a presena de compostos e fases que foram adsorvidos pelo titnio. Este resultado extremamente relevante porque necessrio conhecer a qualidade do precipitado formado para este induzir a formao ssea ao redor do material implantado, garantindo assim o sucesso da osseointegrao.

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5 RESULTADOS

5.1 RUGOSIDADE

O primeiro resultado obtido foi o de rugosidade realizado antes da imerso das amostras de pastilhas de titnio, em soluo de SBF. Mostra-se na FIG. 5.1 o perfil de rugosidade da superfcie da pastilha. Na TAB. 5.1 so mostrados os resultados obtidos na quantificao dos parmetros de rugosidade determinados nas amostras polida, com tratamento superficial com cido, com tratamento NaF e com a superfcie anodizada.
TAB. 5.1-Valores dos parmetros de rugosidade e desvio padro calculado.

Parmetros: (m) Ra Rq Rz Rmax. Rt Pt R3z

Pastilhas Usinadas 0,73 0.03 0,93 0,04 4,63 0,37 5,64 0,94 5,81 0,82 6,73 0,50 2,93 0,16

Pastilhas com cido 1,03 0,07 1,32 0,10 6,45 0,79 9,27 2,48 9,59 2,86 19,79 2,54 4,25 0,11

Pastilhas NaF 0,80 0,03 1,06 0,05 6,04 0,56 7,13 0,68 7,77 0,87 13,29 3,33 3,66 0,16

Pastilhas Anodizadas 0,83 0,03 1,09 0,06 5,18 0,26 7,48 1,21 7,53 1,14 14,85 1,14 3,25 0,14

Mostram-se na FIG. 5.1 os perfis das morfologias das amostras submetidas aos diferentes tratamentos superficiais. Atravs das morfologias pode-se qualificar que os maiores nveis de rugosidade, apresentadas acima na TAB. 5.1, so os correspondentes aos tratamentos com cido e anodizao. Esta constatao pode ser comprovada pelos valores apresentados na TAB. 5.1. Por outro lado, as amostras com o tratamento com NaF e a pastilha polida, apresentaram nveis de rugosidade menores. Neste trabalho, esperava-se encontrar medidas de rugosidade altas nas superfcies anodizadas e inferiores nas amostras apenas polidas (usinadas).

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A)

B)

C)

D)

FIG. 5.1-Perfis de rugosidade das amostras. A) Superfcie usinada; B) Superfcie com cido ; C) Superfcie NaF e D) Superfcie anodizada.

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5.2 MOLHABILIDADE

Para caracterizar a molhabilidade das amostras determinou-se o ngulo de contato das superfcies com gua destilada e com a soluo SBF das amostras polidas e submetidas aos tratamentos superficiais com cido, anodizado e com soluo NaF. Foram usadas amostras das pastilhas antes da imerso na soluo SBF. Os resultados obtidos so mostrados na TAB. 5.2. De acordo com esses resultados verifica-se que as superfcies com cido e tratadas com soluo NaF indicaram ser menos hidroflicas que as amostras polidas e anodizadas, ou seja, possuem menor molhabilidade. O contrrio observado nas amostras polidas e anodizadas, onde h baixo ngulo de contato, alta molhabilidade. Dentre os valores encontrados usando a soluo SBF, a superfcie com maior ndice de molhabilidade foi a anodizada. A maior molhabilidade da superfcie Vulcano pode ser associada presena das porosidades que absorveram lquido.
TAB. 5.2-Valores de ngulos de contato.

Pastilhas gua Destilada SBF Usinada 91,6 7,9 91,9 0,5 cido 110,9 2,0 102,2 0,7 NaF 85,7 8,8 120,7 1,3 Anodizada 72,6 14,8 67,9 4,2
.

5.3 DIFRAO DE RAIOX

Os resultados da difrao de raio X dos discos de titnio foram separados em dois grupos. O primeiro grupo compreende as amostras de titnio que no foram imersas no SBF e o segundo grupo formado por pastilhas que foram imersas no SBF durante 20 e 30 dias. As amostras possuam as morfologias superficiais semelhantes aos implantes. As pastilhas imersas por 10 dias no apresentaram indcios de depsito inico, por isso no foram realizadas suas difraes de raioX.

87

Grupo 1-amostras no imersas em soluo SBF (FIG. 5.3) As amostras com superfcies anodizada e com flor apresentaram fases significativas de Rutilo (TiO2) e hidreto de titnio (TiH). Alm disso, a superfcie anodizada tambm apresentou picos de nitreto de titnio (TiN) e xido de clcio (CaO). Esses resultados favorecem a osseointegrao independentemente da imerso em soluo SBF. Pois, existe a presena do Rutilo, principal xido de titnio que apresenta caractersticas biocompatveis. Por outro lado, a pastilha como usinada no apresentou qualquer fase diferente do que se esperava. Atravs do difratograma verifica-se que a osseointegrao deve ser mais lenta devido ausncia de fases bioativas.

Vulcano
800
1400
TiH

NaF

1200

600

Y Intensidade

1000
TiN

400
Rutilo TiH

Y Intensidade

800 600 400 200

Rutilo Ti

CaO

200

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

0 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65

X 2

X 2

Usinado
12000 10000 8000 6000 4000 2000
Ti C

Y Intensidade

0 -5 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65

X 2

FIG. 5.3 - Difratograma das pastilhas de titnio com tratamentos superficiais antes da imerso em SBF.

88

Grupo 2-amostras imersas no SBF por 20 e 30 dias. Nas FIG. 5.3.1 e FIG. 5.3.2 so mostrados os espectros de difrao de raioX das amostras tratadas com cido, flor e anodizada e as no tratadas (usinadas) aps a imerso em soluo SBF. Determinados picos que eram esperados no foram identificados. No foi encontrado nenhum vestgio de deposio inica, principalmente, nas superfcies das amostras tratadas com cido e com flor imersas por 20 e 30 dias no fludo corpreo simulado. Alm disso, o pico correspondente a 2=50, aproximadamente, tambm no foi determinado nas amostras imersas por 20 e 30 dias em SBF. Deve-se enfatizar que a espessura da camada formada com o tratamento superficial e com a suposta deposio inica da ordem de micrometros, ou seja, muito fina, podendo assim no ser excitada pelo raio X. Comparando os espectros, observa-se que no existe diferena significativa entre as fases encontradas nos diversos tratamentos e entre as intensidades dos picos. Apenas na amostra com tratamento de anodizao foi detectada a fase de anatsio (TiO2). Na superfcie polida no se esperava encontrar nenhuma fase alm do rutilo, no entanto foram detectadas outras fases, como cloreto de magnsio (MgCl2) e xido de magnsio (MgO). A superfcie que apresentou maior nmero de fases de deposio inica foi a com cido, com significativa intensidade de MgCl2, MgO e NaOH (hidrxido de sdio). Logo aps, aparecem a superfcie anodizada com a fase anatsio e a amostra com flor.
2000 1900 1800 1700 1600 1500 1400 1300 1200 1100 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 15 20 25 30

Usinado 20 dias SBF

Ti

1200 1100 1000 900

cido 20 dias SBF

MgO

Ti

Y Intensidade

Y Intensidade

800 700

MgCl 2

MgO

500 400 300 200 100 0

K

MgCl 2

35

40

45

50

55

60

65

15

20

25

30

35

40

NaOH

600

45

50

55

60

65

X 2
NaF 20 dias SBF
1000 900 800 700
MgCl 2
NaOH

X 2
Anodizado 20 dias SBF
MgO

1400 1300 1200 1100 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 15 20 25 30
K Anatsio

Ti MgO

600 500 400 300 200 100 0 15 20 25 30 35 40

K

Y Intensidade

Y Intensidade

MgCl 2 Ti

45

50

55

60

65

X 2

35

40

45

50

55

60

65

70

X 2

FIG. 5.3.1-Difratograma das pastilhas de titnio com tratamentos superficiais e imersas por 20 dias em soluo SBF.

89

1600 1500 1400 1300 1200 1100

Usinado 30 dias SBF

Ti MgO

1300 1200 1100 1000 900

cido 30 dias SBF

Ti MgO

Y Intensidade

Y Intensidade

1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
K MgCl 2

800 700 600 500 400 300 200 100 0 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65

MgCl 2

X 2

X 2

NaF 30 dias SBF

1600 1500 1400 1300 1200 1100
Ti

Y Intensidade

1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
MgCl 2

Y Intensidade

MgO

1700 1600 1500 1400 1300 1200 1100 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0 15 20

Anodizado 30 dias SBF

MgO

Ti MgCl 2

Anatsio

25

30

35

40

NaOH
45 50

55

60

65

X 2

X 2

FIG. 5.3.2 -Difratograma das pastilhas de titnio com tratamentos superficiais e imersas por 30 dias em soluo SBF.

90

5.4 ANLISE NO MICROSCPIO ELETRNICO DE VARREDURA Na FIG. 5.4 encontram-se as morfologias das superfcies como recebidas de implantes e pastilhas. A) B)

C)

D)

FIG. 5.4 Morfologia das superfcies como recebidas de : A) Implante usinado; B) Implante anodizado; C) Pastilha tratada com cido e D) Pastilha anodizada.

A) Primeiramente, utilizaram-se implantes comerciais sem tratamento superficial (usinada) e com tratados com cido, anodizao e implantes no comerciais tratados com flor. Esses implantes foram observados no MEV (FIG. 5.4.1), acoplado a microsonda EDS, aps a imerso por 10, 20 e 30 dias em SBF. No foi possvel identificar na superfcie dos implantes a presena significativa de precipitados aps a imerso em soluo SBF, exceto na superfcie anodizada imersa por 20 dias em SBF. Nesta superfcie, houve elevada concentrao de precipitados, inclusive com a morfologia de cristais, como observado na FIG. 5.4.1 G.

91

A)

B)

C)

D)

E)

F)

G)

H)

FIG. 5.4.1-Morfologia das superfcies dos implantes de titnio com tratamentos superficiais: A) Usinado 10 dias imerso em SBF (aumento 5000x); B) cido 10 dias imerso em SBF (aumento 2000x); C) NaF 10 dias imerso em SBF (aumento 4000x); D) Anodizado 10 dias imerso em SBF (aumento 2000x); E) NaF 20 dias imerso em SBF (aumento 2000x); F) Anodizado 20 dias imerso em SBF (aumento 1000x); G) Anodizado 20 dias imerso em SBF (aumento 1000x) e H) cido 30 dias imerso em SBF (aumento 1000x) .

92

B) Na segunda etapa, foram analisadas pastilhas submetidas aos mesmos tratamentos superficiais dos implantes e usinadas. As amostras foram imersas em SBF. As pastilhas analisadas por difrao de raioX no foram as mesmas observadas no MEV. Mostra-se na FIG. 5.4.2 as morfologias das superfcies das pastilhas imersas em SBF durante diferentes tempos. Observa-se baixa deposio nas superfcies tratadas com flor, cido e anodizadas aps a imerso por 10 dias em SBF e na superfcie NaF imersa por 20 dias. Por outro lado, as amostras com superfcies cidas e anodizadas imersas por 30 dias apresentaram significativa deposio de ons. Na FIG. 5.4.3 encontram-se os resultados do EDS realizado nas pastilhas anodizadas imersas por 10 e 30 dias em soluo SBF. Na amostra imersa por 10 dias observase elevada quantidade de oxignio, fsforo e clcio, o que pode ser atribuda ao tratamento superficial previamente realizado, j que no ocorreu precipitao significativa. A ausncia de oxignio e fsforo e a presena de clcio na pastilha imersa por 30 dias, podem comprovar o depsito de ons na superfcie dessa amostra.

93

A)

B)

C)

D)

E)

F)

FIG. 5.4.2 - Morfologia das superfcies das pastilhas de titnio com tratamentos superficiais: A) NaF 10 dias imersa em SBF (aumento 1000 x); B) cido 10 dias imersa em SBF (aumento 1000 x); C) Anodizado 10 dias imersa em SBF (aumento 1000 x); D) NaF 20 dias imersa em SBF (aumento 1000 x); E) cido 30 dias imersa em SBF (aumento 3000 x) e F) Anodizado 30 dias imersa em SBF (aumento 3000 x).

94

A)

B)

FIG. 5.4.3-EDS das superfcies das pastilhas de titnio com tratamento de anodizao: A) imersa por 10 dias em SBF; B) imersa por 30 dias em SBF.

95

6 DISCUSSO

Comparando-se os dados das TAB. 6.1 e TAB. 6.2 referentes aos resultados deste trabalho e de outro mencionado na reviso bibliogrfica (ELIAS et al., 2004), pode-se observar que, enquanto os resultados apresentados na TAB. 6.2 referentes s superfcies tratadas com cido mostraram uma maior homogeneidade e menor nvel de rugosidade e, as superfcies tratadas por anodizao apresentaram maior rugosidade, o contrrio foi observado no presente trabalho. As amostras com tratamento superficial com cido mostraram menor homogeneidade e maior rugosidade e, as superfcies tratadas por anodizao no apresentaram uma significativa homogeneidade e rugosidade (TAB. 6.1). Essa diferena nos resultados das amostras com cido deste trabalho e ataque cido devido s diferenas nos cidos utilizados, na concentrao desses cidos e nos tempos usados para cada tratamento superficial. Enquanto, no estudo de Elias et al. (2004), os cidos escolhidos para realizar o tratamento da superfcie da amostra foi HNO3 + HCl, neste trabalho o tratamento com cido recebeu os seguintes: HNO3 + HF + H2SO4 . A anlise dos parmetros de rugosidade foi enfocada no valor de Rz, o qual considerado o mais relavnte por estar representando a rugosidade mdia (Ra) e quadrtica (Rq). As elevadas medidas de rugosidade encontradas nas pastilhas com cido facilitam as aderncias dos ons dissolvidos na soluo SBF sobre a superfcie da amostra e, principalmente de fibronectina. Atualmente, o valor de Ra das amostras de implantes comerciais aps os tratamentos com cidos varia de 0,5 a 1m. Quanto ao tratamento de anodizao observam-se valores de rugosidade muito semelhantes entre os estudos de Elias e este. Os valores da rugosidade obtidos com o tratamento de anodizao, associados presena de clcio e fsforo na superfcie facilitam a osseointegrao do titnio. A significativa quantidade de clcio e fsforo foi comprovada no EDS mostrado na FIG. 5.4.3 Assim como, encontrado nos estudos de Serro e Saramago (2003), na FIG. 3.4.5.1 Alm disso, pode-se verificar que as amostras que no receberam qualquer tratamento (usinadas) tiveram os valores de rugosidades aritmtica e quadrtica menores comparados aos outros tratamentos.

96

TAB. 6.1-Parmetros de rugosidade.

Rugosidade (m) Usinado cido NaF Ra 0,73 0,03 1,03 0,07 0,80 0,03 Rq 0,93 0,04 1,32 0,10 1,06 0,05 Rz 4,63 0,37 6,45 0,79 6,04 0,56
TAB. 6.2-Parmetros de rugosidade.

Anodizado 0,83 0,03 1,09 0,06 5,18 0,26

Rugosidade (m) Usinado Ataque cido Ra 0,65 0,11 0,51 0,03 Rq 0,81 0,17 0,71 0,05 Rz 6,09 0,37 5,09 0,26

Jateamento Eletroqumico 0,75 0,05 0,87 0,14 0,98 0,08 1,12 0,18 5,55 0,31 5,14 0,69

ELIAS et al., 2004

O comportamento dessas amostras pode ser comprovado atravs das anlises dos perfis de rugosidade mostrados nas FIG. 6.1 e FIG. 6.2 e com a anlise das micrografias obtidas no pelo microscpio eletrnico de varredura. Na FIG. 5.4.2 E e F possvel observar que as morfologias das superfcies das pastilhas tratadas com cido e oxidadas imersas por 30 dias em SBF apresentaram depsitos. Na FIG. 3.11.4, segundo Lee et al. (2006), as anlises de EDS sugerem que os precipitados so compostos ricos em clcio. Por outro lado, as amostras imersas por 10 dias (B e C) no revelaram a presena desses precipitados da mesma forma ocorrendo no estudo de Serro e Saramago (2003) conforme mostrado na FIG. 3.4.5.

a-Usinado

b-cido

d-Anodizado c-NaF FIG. 6.1-Perfil da rugosidade das amostras analisadas.

97

FIG. 6.2-Perfil da superfcie de discos de titnio. A) Usinado, B) Ataque cido, C) Jateada e com ataque cido e D) Aps tratamento eletroqumico. Elias et al., 2004

De acordo com a FIG. 3.11.4 pode-se observar uma significativa semelhana entre os resultados encontrados naquele estudo e neste trabalho em relao s micrografias e os perfis da superfcie anodizada e imersa por 30 dias em SBF. As partculas precipitadas da FIG. 3.11.4 possuem morfologia muito similar encontrada neste trabalho, como observado na FIG. 5.4.1B. Alm disso, as imagens de MEV, na FIG. 3.11.3a mostraram que amostras imersas em SBF por 20 dias e aps ataque cido tambm apresentaram morfologias semelhantes s verificadas neste trabalho, como visto na FIG. 5.4.2E. Assim como observado na FIG. 3.11.3c, onde nota-se uma similaridade com a FIG. 5.4.2F. Com relao molhabilidade pode-se observar que os ngulos de contato das amostras analisadas com gua destilada tiveram valores maiores do que os obtidos em trabalhos anteriores (Elias et al. 2005). As TAB. 5.2 e TAB.6.3 mostram os valores encontrados neste trabalho e em trabalho anteriormente citado, respectivamente. Comparando os valores de molhabilidade (TAB. 5.2) das superfcies tratadas com cido, com flor, anodizadas e no tratadas verifica-se que as superfcies tratadas com flor e cido so menos hidroflicas que as superfcies no tratadas e as anodizadas, as quais possuem baixos ngulos de contato. O mesmo ocorrendo com as medidas de ngulos de contato usando a soluo SBF como lquido. No entanto, de acordo com o estudo de Elias et al. (2005), pode-se observar que as superfcies oxidadas em contato com gua destilada ou soluo salina so mais hidroflicas do que as superfcies tratadas com cido ou jateada (TAB. 6.3). Ao comparar as duas Tabelas percebe-se que no ocorre uma uniformidade nos valores, principalmente nos obtidos pelas superfcies anodizadas. A diferena no comportamento passa a ser menor quando analisadas as medidas do ngulo de contato da superfcie com sangue humano.

98

TAB. 6.3-Valores de ngulos de contato.

Superfcies cido Jateamento Oxidao

gua Destilada NaCl DMSO Sangue 71,0 1,3 68,7 2,5 44,4 1,6 61,6 0,7 65,0 4,3 52,5 2,6 34,0 0,9 61,8 0,1 36,7 3,7 38,3 2,1 25,3 1,3 55,6 0,3
Elias et al., 2005

As pastilhas de titnio com tratamentos superficiais e usinadas foram submetidas difrao de raio X. Os resultados mostraram que apenas a superfcie anodizada apresentou anatsio (TiO2) em um dos picos. No estudo de Sul et al. (2005), utilizando implante oxidado em cido actico e outro implante oxidado em uma mistura eletroltica contendo ons de magnsio (MgTiO), observou-se a presena das fases de anatsio e de rutilo, como mostrado FIG. 6.3. No ensaio de difrao de baixo ngulo, Sul e colaboradores utilizaram o difratmetro XPert PRO-MRD, Philips Ltda., Holanda, com intervalo de 0,02 e medidas entre 20 e 60, usando fonte de radiao de Cu-K, acelerao de voltagem de 35kV e corrente de 25mA. O equipamento usado e as condies de ensaio foram semelhantes ao do presente trabalho.

FIG. 6.3-Difratograma da superfcie dos implantes tratados com cido actico (TiO) e tratado com soluo contendo magnsio (MgTiO). A=fase anatsio e R=fase rutilo. Sul et al., 2005.

Segundo Lee et al. (2006), o espectro de difrao de raioX mostrou picos relativos s fases de anatsio e do substrato de titnio (FIG. 3.11.2). O filme andico formado em mistura de H2SO4/H3PO4 apresenta a reduo gradativa dos picos de difrao de anatsio e do titnio

99

com concentrao de cido fosfrico. A fase de anatsio tambm pode ser observada neste trabalho, conforme as Figs. 5.3.2 e 5.3.3. Ao se observar os difratogramas (FIG. 5.3.2) das pastilhas imersas em SBF, pode-se verificar a presena constante das fases de MgO, MgCl2 e NaOH nas amostras tratadas e usinada. Com isso, comprova-se que houve deposio inica na superfcie dessas amostras aps a imerso em SBF. Os espectros de difrao de raio X obtidos no presente trabalho foram realizados com o objetivo de verificar a adsoro ou deposio de ons nas superfcies de titnio tratadas de diferentes formas (usinada, com cido, flor e anodizada). Mesmo sendo a camada de deposio extremamente fina, esperava-se encontrar alguma fase, exceto nas pastilhas usinadas, as quais no possuem rugosidade capaz de facilitar a aderncia dos ons da soluo. Em relao s micrografias, pode-se afirmar que houve uma semelhana significativa entre as morfologias encontradas neste trabalho e nos estudos apresentados na reviso bibliogrfica, principalmente naquelas referentes aos tratamentos de anodizao e com cido imersos por 20 e 30 dias em soluo SBF. J, em relao aos resultados das morfologias de amostras imersas por 10 dias em SBF, foi encontrada pequena semelhana com resultados da literatura, pois neste trabalho no houve significativa presena de precipitados na superfcie dos implantes e das pastilhas. O contrrio pode ser verificado no estudo de Takemoto e cols., onde observa-se a formao de apatita no implante de Ti aps imerso em SBF por 3 dias (FIG. 3.7C). Da mesma forma, no estudo de Yang e cols. encontram-se indcios de precipitao na superfcie de amostras de Ti imersas por 6 dias em SBF (FIG. 3.8.2).

100

CONCLUSO

Com base nos resultados obtidos no presente pode-se concluir: a) Entre os trs tratamentos superficiais estudados e da amostra no tratada, as superfcies com melhor resultado de deposio de ons da soluo SBF foram anodizada e a com cido; b) Apesar dos tempos de imerso (10, 20 e 30 dias) terem sido relativamente baixos, obteve-se um resultado significativamente positivo no que se refere aos tratamentos de anodizao, com cido e com NaF, as quais apresentaram indcios de deposio de ons aps a imerso em SBF; c) Os resultados das amostras imersas por 10 dias em soluo SBF no foram positivos no que se refere presena de precipitados; d) Faz-se necessria a busca de outros mtodos, como de XPS, para se comprovar a qualidade do precipitado encontrado na superfcie das amostras imersas em SBF. e) No se pde determinar todos os picos apresentados na difrao de raioX das pastilhas imersas por 20 e 30 dias em SBF. Alm disso, as pastilhas imersas por 10 dias no apresentaram indcios de depsito inico, por isso no foi realizada a difrao de raioX, j que semelhante aos resultados encontrados nas pastilhas no imersas.

101

REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS

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