Incrementos de la fijacin biolgica del nitrgeno mediante la inoculacin combinada de bacterias fijadoras de Nitrgeno atmosfrico.

Un puado de tierra contiene billones de microorganismos, son tantos tipos diferentes que se desconocen las cantidades exactas. Actualmente conocemos algunos de ellos; slo se han descrito formalmente alrededor de 500 microorganismos no-eucariontes, lo que contrasta con las 500 000 especies de insectos ya descritas. Se conoce muy poco de la Microbiologa, a pesar de que es la parte de la Biologa que se proyecta ms ampliamente hacia el mantenimiento de la vida en el planeta (Annimo, 2001 b). De los elementos del suelo el nitrgeno es el ms necesario para el desarrollo y sobre vivencia de las plantas, este es el que presenta ms transformaciones microbiolgicas y por consiguiente el que ms comnmente se encuentra deficiente en el suelo, contribuyendo a la reduccin de los rendimientos agrcolas en todo el mundo (Annimo, 2001 a). Las principales formas de mantener suficiente nitrgeno en el suelo es mediante la aplicacin de fertilizantes nitrogenados y las formas de fijacin biolgicas, pero debido al alto costo de los fertilizantes nitrogenados, la gran cantidad de energa requerida para su produccin y las capacidades subptimas para su transportacin limita su uso en pases subdesarrollados, especialmente en comunidades agrcolas pequeas (Annimo, 2001 a). En el mundo desarrollado la agricultura depende en gran medida del uso de fertilizantes qumicos y pesticidas para mantener sus altas producciones agrcolas, sin tener en cuenta los terribles daos que estos pueden ocasionar ya sea afectando el ciclo global del nitrgeno, contaminando las aguas subterrnea y superficiales, incrementando los riesgos de intoxicaciones qumicas y aumentando los niveles de xido nitroso (N2O) atmosfrico; el cual es un potente gas invernadero. El uso de nitrgeno sinttico en los ltimos 40 aos ha aumentado de 3.5 millones a 80 millones de toneladas, tanto en pases desarrollados como en vas de desarrollo, incrementndose sus costos de produccin a ms de $ 20 billones USD anualmente. Para el ao 2050 la poblacin mundial se espera crezca el doble de la cifra actual de habitantes, de esta proyeccin el 90% debe residir en las regiones tropicales o subtropicales de los pases en desarrollo de Asia, frica y Amrica Latina. Segn estos datos, es razonable esperar que la necesidad de fijacin de N2 para la produccin de alimentos agrcolas para esta fecha tambin duplique la cifra fijada actualmente. Si esta es suministrada por fuentes industriales, su uso se incrementar en 160 millones de toneladas de nitrgeno por ao; lo que requerir quemar ms de 270 millones de toneladas de energa para su produccin, sin tener en cuenta la duplicacin de las fatales consecuencias que pudieran ocasionar (Annimo, 2001 a). Los procesos naturales de fijacin biolgica del N2 (FBN) juegan un importante rol en la activacin de los sistemas agrcolas sustentables por su beneficio ambiental. El incremento de su aplicacin puede mitigar la necesidad del uso de fertilizantes nitrogenados sintticos con su consiguiente efecto benfico al ciclo del nitrgeno, el calentamiento global y el saneamiento de las aguas subterrneas y superficiales. Este proceso depende bsicamente de la accin de los microorganismos en conjunto con las plantas (Annimo, 2001 a). Existen algunas especies de microorganismos que poseen la habilidad de convertir el dinitrgeno atmosfrico (N2) a amonio (NH4+) mediante la accin de la enzima nitrogenasa. Estas especies son denominados diaztrofos y requieren de energa para realizar su metabolismo. Dentro de los diaztrofos capaces de realizar este proceso se encuentran los denominados fijadores de vida libre, los cuales fijan N2 atmosfrico sin la cooperacin de otras formas vivas, siendo la familia Azotobacteriaceae la que agrupa uno de los gneros ms

importantes utilizados en la biofertilizacin a diferentes cultivos. El gnero Azotobacter es uno de los microorganismos utilizados como biofertilizantes que ms se aplica e investiga en Cuba. Sus propiedades beneficiosas se ponen de manifiesto en una gran variedad de hortalizas, granos y viandas (Mayea et al., 1998). FAO (1995) reporta que este se considera de menor importancia agrcola por incorporar modestas cantidades de nitrgeno al suelo, Bhattacharya y Chaudhuri (1993) reportan que es capaz de fijar de 20 a 30 kg. de N ha-1 ao, pero tanto Azotobacter como Azospirillum en determinadas condiciones su efecto beneficioso no se debe solamente a la cantidad de N2 atmosfrico fijado, sino a la capacidad de producir vitaminas y sustancias estimuladoras del crecimiento (cido indolactico, cido giberlico, citoquininas y vitaminas) que influyen directamente en el desarrollo vegetal (Rodelas, 2001). Impacto ambiental de la aplicacin de fertilizantes nitrogenados.

El uso de nitrgeno sinttico en los ltimos 40 aos ha aumentado de 3.5 millones a 80 millones de toneladas, tanto en pases desarrollados como en vas de desarrollo, incrementndose sus costos de produccin a ms de $ 20 billones USD anualmente (Hardy, 1993, citado en Annimo, 2001 a). En este periodo, el ciclo global del N2 se ha visto afectado por el incremento irracional de la fijacin de N2 mediante procesos industriales, es decir, mediante la aplicacin de fertilizantes nitrogenados; pero su impacto ambiental aun est por calcularse. La contribucin de la fijacin de N2 al ciclo global de este elemento no ha cambiado en los ltimos aos, teniendo un balance aproximado con el proceso de desnitrificacin, el cual convierte el nitrgeno combinado en N2 atmosfrico. En la actualidad la fijacin no ocurre eficientemente debido a que es inhibida por la presencia de nitrgeno mineral en el medio (Vitouseck y Matson, 1993, citado en Annimo, 2001 a). Segn estos autores, alrededor del 50 % de los fertilizantes nitrogenados aplicados a los cultivos es absorbido por las plantas, el otro 50 % o ms es almacenado en el suelo para la nutricin de los cultivos subsiguientes; pero una gran parte de este es transformado en N2 atmosfrico mediante los procesos de desnitrificacin de los microorganismos y otra gran parte es lixiviado a capas inferiores donde contaminan las aguas subterrneas y el manto fretico en forma de nitratos (NO3). En Iowa el incremento del contenido de NO3 en aguas subterrneas desde 1950 a 1980 ha sido paralelo al incremento del uso de fertilizantes nitrogenados. El xido nitroso (N2O) es otro gran factor contaminante producto al excesivo uso de fertilizantes nitrogenados, este conjuntamente con el CO2, metano (CH4) y los clorofluorcarbonos es un gas invernadero causante en gran medida del calentamiento global. La energa reflectiva por mole del N2O es alrededor de 180 veces la de CO2, lo que lo convierte en un potente gas invernculo. El N2O troposfrico ha aumentado potencialmente en la dcada del 80, conjuntamente con el incremento sustancial de la aplicacin de fertilizantes sintticos. Por otro lado la desnitrificacin del NO3 produce cerca del 90 % de N2 y 10 % de N2O, al aumentar la cantidad de nitrgeno en el suelo producto de su uso indiscriminado, aumenta este proceso de desnitrificacin y por consiguiente los niveles de toxicidad en la atmsfera. Hoy da la cantidad global de este compuesto se encuentra fuera de balance, excediendo de un 3040 %, su concentracin en la atmsfera tambin se incrementa 0.25 % por ao (Vitouseck y Matson, 1993, citado en Annimo, 2001 a). Esto demuestra que la produccin de fertilizantes nitrogenados no solamente interviene en el agotamiento de la energa natural y el combustible fsil, sino tambin genera grandes cantidades de CO2 en su produccin y contribuye sustancialmente al calentamiento global potencial.

En los prximos 50 aos ser necesario un incremento sin precedentes en la produccin agrcola para satisfacer los niveles de insumos calricos y proteicos para el abastecimiento a la gran poblacin mundial; pero tambin es imperativo la bsqueda de nuevos mtodos de produccin agronmicamente y ecolgicamente sustentables para proteger el entorno que soportar tal explosin demogrfica (Annimo, 2001 a). Azotobacter sp. diaztrofo no simbitico.

Las bacterias aerobias de vida libre fijadoras de N2 ms conocidas se encuentran formando parte de las familias Azotobacteriaceae, Spirillaceae y Bacillaceae. Del gnero Azotobacter se han descrito varias especies: Azotobacter chroococcum (Beijerinck 1901), A. vinelandii (Lipman 1903), A. agilis (Beijerinck; Winograsky 1938) y A. paspali (Dbereiner 1966); sin embargo no todas tienen caractersticas perfectamente definidas (Martnez, 1986; Mayea et al., 1998; Itzigsohn et al., 2000). Segn Gonzlez y Lluch (1992) los microorganismos del gnero Azotobacter se describieron por primera vez por Beijerinck en 1901, desde este momento hasta nuestros das, estas bacterias han llamado la atencin de numerosos investigadores por su importancia tanto terica como prctica. La morfologa de Azotobacter ha sido y es, uno de los apartados de estudio ms atractivo de este gnero bacteriano. As, la citologa de estas bacterias no solo se altera por las condiciones ambientales, sino que ms bien vara de una forma extrema. Winogradski en 1938 observ que la presencia en el medio de cultivo de compuestos carbonados como el n-butanol daba lugar a la formacin de clulas vegetativas normales, pero en funcin del periodo de incubacin se originaban clulas cocoides denominadas quistes. Pochon y Tchan en 1948, consideraron a estos quistes como formas de reposo. Ms tarde Socolofsky y Wyss en 1962, demostraron la caracterstica de resistencia de estas formas qusticas. Produccin de sustancias fisiolgicamente activas y aplicacin prctica de Azotobacter sp. Desde el punto de vista histrico, es Azotobacter el microorganismo que de una forma ms amplia ha sido utilizado en la agricultura. Las primeras aplicaciones de estas bacterias datan de 1902, alcanzando una amplia utilizacin durante las dcadas del 40, 50 y 60, particularmente en los pases de Europa del Este (Gonzlez y Lluch, 1992). La aplicacin prctica de la inoculacin de este diazotrfo ha sido positiva, observndose notables incrementos en los rendimientos en diferentes cultivos, principalmente en cereales. Estos resultados obtenidos, especialmente con la inoculacin de Azotobacter chroococcum y Azospirillum brasilense, no deben atribuirse exclusivamente a la ganancia de N2 por las plantas, ya que estos microorganismos en determinadas condiciones su efecto beneficioso se debe fundamentalmente a la capacidad de solubilizar fosfatos y sintetizar sustancias estimuladoras del crecimiento vegetal, tales como, vitaminas y hormonas vegetales que intervienen directamente sobre el desarrollo de las plantas (Gonzlez y Lluch, 1992; De Troch, 1993; Pozzon, Giogetti y Martnez, 1993; Baldani, 1997; Mayea et al., 1998; Velazco y Castro, 1999; Burdman, 2000; Itzigsohn, 2000; Rodelas, 2001). De este modo A. chroococcum sintetiza tiamina de 50100 mg g-1 de sustancia celular seca; cido nicotnico de 200600 mg g-1 de sustancia celular seca y cido pantotnico y biotina; cido indolactico (AIA); cido giberlico y citoquininas (Rodelas, 2001). Segn Gonzlez y Lluch (1992) la produccin de estas sustancias por Azotobacter, se ve

influenciada por el estado fisiolgico de la bacteria y por la edad de los cultivos, habindose demostrado que la presencia de nitrgeno combinado modifica la produccin de auxinas y giberelinas. Concretamente la presencia de nitrato inhibe la liberacin de auxinas, mientras que en sentido contrario incrementa la produccin de giberelinas. La adicin de exudados radicales de ciertos cereales colonizados por Azotobacter, determinan aumentos significativos en la produccin de auxinas, giberelinas y citoquininas, siendo este efecto ms evidente cuando los exudados se obtienen de plantas de ms de 30 das de crecimiento. Varios son los cultivos en los cuales la aplicacin de Azotobacter chroococcum como biofertilizante ha resultado satisfactoriamente positiva. Rodrguez y Blanco (1994) realizaron un trabajo experimental en condiciones semicontroladas en viveros de caf (Coffeea arabica), demostrando que con el uso de Azotobacter chroococcum hay una mejor uniformidad en las posturas de este cultivo, as como un mayor vigor de las mismas, las cuales en el momento de la extraccin del vivero hacia el campo presentaban un color uniforme en su sistema radicular, caractersticas de posturas sanas, vigorosas y con alto valor ecolgico. En este sentido Gonzlez et al. (1994) al analizar los resultados de la inoculacin de 8 cepas de Azotobacter sobre los parmetros de crecimiento y desarrollo de vitroplantas de pia (Anana comosa), cv Cayena lisa, durante la fase de adaptacin demostraron que en sentido general todas las cepas estudiadas estimularon el crecimiento de las vitroplantas, con valores significativamente superiores al testigo, lo que permite acortar el periodo de adaptacin de las mismas. En el cultivo de la yuca (Manihot esculenta) Roque et al. (1994) al analizar la respuesta a la fertilizacin nitrogenada y su combinacin con biofertilizantes en el clon CMC-40 en suelo Ferraltico Rojo hidratado, demostraron que los mejores resultados se obtuvieron con la combinacin biofertilizante-fertilizacin mineral, destacndose Azotobacter como biofertilizante. Los mximos rendimientos en la primera cosecha oscilaron entre 43 y 46 t ha1, se alcanzaron al aplicar 100 kg. ha-1 de N con Azotobacter y fosforina individualmente o combinados. Segn Gonzlez y Lluch (1992), con el uso de inoculantes mixtos de Rhizobium / Azotobacter y Rhizobium / Azospirillum, se han obtenido incrementos en la nodulacin de ciertas leguminosas. Sin embargo, estos tipo de inoculantes deben prepararse con ciertos requisitos previos, entre los que se destaca una relacin celular adecuada, ya que la preparacin aleatoria de estos puede originar efectos negativos sobre la nodulacin y desarrollo de las plantas. Ms del 15% del total de 150 000 ha de leguminosas inoculadas con Rhizobium spp. en South frica han sido coinoculadas con Azospirillum brasilense. En el periodo 1999-2000, este porcentaje se ha incrementado alrededor del 50% (Burdman et al., 2000). Segn estos autores experimentos de campo han demostrado incrementos en los rendimientos de 15-30 % en leguminosas coinoculadas, valores superiores a lo obtenido con la inoculacin de Rhizobium solo. Estos resultados coinciden con los citados por Okon y Vanderleyden (1997), los cuales en investigaciones realizadas sobre la inoculacin con Rhizobium y Azospirillum reportan un efecto positivo para diversos tipos de leguminosas, incluyendo una temprana nodulacin, incrementos en el nmero de ndulos, altas cantidades de fijacin de N2 y un mejoramiento en general del desarrollo de sistema radical. Segn Burdman et al. (2000), la estimulacin de la nodulacin posterior a la inoculacin de Azospirillum puede estar dada por un incremento en la induccin de races laterales, la densidad de los pelos radicales y las ramificaciones de dichos pelos; pero tambin por la diferenciacin de un nmero mayor de clulas epidrmicas dentro del pelo radical infectado. No obstante estos resultados, la respuesta de la inoculacin combinada de Rhizobium /

Azospirillum puede tanto estimular como inhibir la formacin de ndulos y el crecimiento en un sistema simbitico dado, dependiendo del nivel de concentracin de inculo y el engranaje de la inoculacin. Segn reportes por estos autores, la inoculacin de cereales con niveles relativamente altos de Azospirillum inhibe ligeramente el crecimiento de las races. Autor: Controlbiologico