MICROBIOLOGA APLICADA

Trabajo final de microbiologa aplicada

M. en C. Alma Bibiana Graciano

Lydia Enith Nava Rivera

INGNIERIA EN BIOTECNOLOGIA

IBIO 5A

Gmez Palacio, Dgo., a 19 de Abril de 2013

Microbiologa aplicada
No existe una categora de ciencia que pueda denominarse aplicada. Existe ciencia y aplicacin de la ciencia ligadas entre s como el fruto y el rbol del que pende.
(Louis Pasteur)

Hablar de la microbiologa aplicada como tal es referirnos al mbito de la microbiologa orientado a la produccin de elementos de inters para la industria mediante procesos en los cuales intervenga, en algn paso, un microorganismo. Por ejemplo, la produccin de: alimentos (fermentacin del vino, pan o cerveza) y suplementos dietticos (como los cultivos de algas, vitaminas o aminocidos); biopolmeros, como el xantano, alginato, celulosa, cido hialurnico, 1

polihidroxialcanatos; bio-remediacin de entornos contaminados o tratamiento de desechos; as como la produccin de principios activos de inters en medicina, como la insulina y hormona del crecimiento o de sustancias implicadas en el diagnstico, como las Taq polimerasas empleadas en PCR cuantitativa.

La microbiologa aplicada se manifiesta en un sin nmero de procesos que van desde la industrial alimentos fermentados como el vino, pan o yogur. No obstante, durante el siglo XX su aplicacin se diversific con el nimo de generar un gran nmero de compuestos qumicos complejos de forma ms sencilla y barata que mediante sntesis orgnica, (la construccin planificada de molculas orgnicas mediante reacciones qumicas); este hecho se debe a la enorme versatilidad metablica de los microorganismos que, frecuentemente, son capaces de producir los compuestos deseados o sus precursores. Por ejemplo, la microbiologa industrial ha sido clave en la produccin de penicilinas, ya naturales, como la penicilina G (esto es, producidas de forma totalmente microbiolgica), ya semisintticas, como la meticilina, que requieren la purificacin de un intermediario que luego ha de modificarse qumica o enzimticamente.

Finalmente, la tecnologa del ADN recombinante ha permitido, con un enfoque de ingeniera gentica, diversificar an ms la disciplina, llegando a producirse Curso de Microbiologa Aplicada

protenas humanos.

humanas

mediante

microorganismos

transformados

con

genes

As que la tarea ms importante de la Microbiologa es explicar la importancia para el hombre, los animales y las plantas de diferentes procesos en los que tienen lugar los microorganismos.

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APLICACIONES DE LA MICROBIOLOGIA

La microbiologa tiene diversos campos de aplicacin tanto para el hombre como dentro de la industria. Principalmente su aplicacin a procesos de produccin de alimentos, qumicos, produccin dentro de la industria farmacutica y como una herramienta importante para la mejora del medioambiente por su utilizacin en la biorremediacin de suelos.

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Microbiologa Industrial
Es la divisin de la microbiologa, que se dedica a la formacin de productos de considerable valor econmico los cuales se obtienen como resultado del metabolismo microbiano, usando como sustrato desechos agrcolas, desechos industriales y productos naturales de bajo costo. Entre los productos obtenidos de fuentes microbianas tenemos: acetona, cidos orgnicos, medicamentos y produccin de enzimas, siendo este ltimo un proceso importante en la industria qumica y el sector alimentario ya que a su vez son utilizadas en la fabricacin de detergentes biolgicos, industrias alimentarias de bebs, amilasas y proteasas en la industria cervecera, industria del cuero, industria papelera, industria fotogrfica.

Otra de las aplicaciones seria la fermentacin industrial para obtener bebidas alcohlicas, fermentacin de la leche para obtener quesos, y productos como el etanol y biocombustibles. Dentro de los microrganismos ms utilizados y que son de inters industrial se encuentran distintos tipos de hongos, levaduras y bacterias.

La microbiologa industrial cultiva microorganismos a gran escala para realizar importantes transformaciones qumicas o para obtener productos comerciales de gran valor. Las transformaciones que se realizan en la microbiologa industrial se suelen llamar fermentaciones, aunque no sean bioqumicamente una fermentacin. Todas estas transformaciones se llevan a cabo dentro de tanques que reciben el nombre de biorreactores o fermentadores industriales.

Microbiologa de Alimentos
Estudia tanto los efectos dainos como los efectos beneficiosos de los microorganismos sobre los alimentos. El papel beneficioso incluye el uso de microorganismos en la preparacin de alimentos tales como quesos, salchichas, yogur, encurtidos, etc. Curso de Microbiologa Aplicada

Por otra parte, los microorganismos son responsables de algunas de las ms serias intoxicaciones alimentarias y causan tambin la descomposicin de una gran variedad de alimentos.

As que al hablar de la relacin entre microorganismos y la industria alimentaria se puede hacer la siguiente clasificacin:

Microorganismos responsables de las caractersticas organolpticas de los alimentos, tales como consistencia, textura, sabor, olor... Microorganismos responsables de sabores extraos o defectos fsicos de los alimentos. Microorganismos patgenos o que liberan toxinas, que pueden provocar enfermedades o intoxicaciones alimentarias.

Microbiologa Agrcola
Los microorganismos tienen un inmenso impacto en la agricultura; algunos pocos actan como patgenos; muchos otros son esenciales para el funcionamiento de los ecosistemas contribuyendo desde aspectos fundamentales como los ciclos biogeoqumicos de los elementos (carbono, nitrgeno, azufre, hierro, entre otros).

Las bacterias y los hongos tienen la capacidad de promover el crecimiento de las plantas mediante asociaciones simbiticas o no simbiticas. Es por esto que la Microbiologa Agrcola estudia el papel de los microorganismos en la formacin y fertilizacin de los suelos, el control de los insectos dainos para las plantas mediante el uso de microorganismos, y los Curso de Microbiologa Aplicada

efectos dainos de los microorganismos sobre las plantas. Otra de las aplicaciones dentro de la microbiologa agrcola seria la utilizacin de algunos microorganismos como biocidas (bioinsecticidas) para luchar contra las plagas que atacan a los cultivos. Algunos atacan al adulto y otros a las larvas, otros producen protenas txicas que los matan. Las ventajas que presentan frente a los insecticidas qumicos tradicionales son -> 1: no se acumulan en la cadena trfica (bioacumulacin), 2 no contaminan aguas ni suelos, y 3 son selectivos, por lo que no tienen efectos negativos sobre otros animales.

Industria farmacutica
La aplicacin de la microbiologa dentro de la industria farmacutica en sintona con la ingeniera gentica en microorganismos son de gran importancia para sintetizar antibiticos sintticos, es decir, ligeramente diferentes de aquellos obtenidos de forma natural. Conjuntamente han llegado a "programar" bacterias con objeto de obtener distintos tipos de drogas que, de otra forma, estos microorganismos no pod ran fabricar. La insulina humana, necesaria para el tratamiento de la diabetes, es un claro ejemplo de esta metodologa, ya que est producida por bacterias en las que se ha introducido, mediante ingeniera gentica, el gen que codifica la sntesis de esta hormona. A diferencia de las hormonas producidas por cerdos y vacas, esta hormona es idntica a la secretada por el pncreas humano. Igualmente, la hormona del crecimiento humano, utilizada para el tratamiento de nios con deficiencias en su produccin, y que de otro modo no podran alcanzar una estatura normal, tambin se obtiene a partir de bacterias en las que se ha insertado una copia del gen humano. Este sistema, como en el caso anterior, tambin presenta ventajas frente a la obtencin de la hormona a partir de cadveres, ya que se evita el riesgo de contaminacin con priones, agentes causantes de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob.

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Otros productos farmacuticos generados a partir de microorganismos manipulados genticamente incluyen, el interfern para el tratamiento de algunas hepatitis y ciertos cnceres, y la eritropoyetina, que se suministra a pacientes sometidos a dilisis para reponer los eritrocitos perdidos durante este proceso.

Microbiologa veterinaria
Se encarga del estudio de los microorganismos que afectan directamente a los animales y los que afectan al hombre por el contacto directo con los animales. Las cuales causan enfermedades infecciosas de varios tipos. La Microbiologa Veterinaria se encarga de la prevencin y control de esas enfermedades. Adems otra de las aplicaciones esta en los propios microorganismos como levaduras, hongos, micro algas y cianobacterias que se utilizan como alimento por su alto contenido en nutrientes (glcidos, protenas, vitaminas, minerales). Se utilizan tanto en alimentacin humana como de animales, algunos ejemplos: Espirulinas (cianobacterias) ricas en esenciales, vitaminas y ac. Grasos poliinsaturados Levadura seca: alto contenido en protenas y vitamina B Micro algas (chlorellay scenedesmus) alto contenido proteico Moho (fusariumgramineam) micro protena QUORN. 7

Microbiologa Mdica
Estudia el diagnstico etiolgico de las enfermedades infecciosas por medio del aislamiento e identificacin de los agentes infecciosos, as como la demostracin de la respuesta inmunolgica (anticuerpos, reaccin cutnea) e n el paciente; adems favorece la seleccin racional del tratamiento antimicrobiano Curso de Microbiologa Aplicada

sobre la base de las pruebas de laboratorio. En el campo de las enfermedades infecciosas, los resultados de las pruebas de laboratorio dependen principalmente de la calidad de la muestra, el tiempo en que se colecta y el cuidado que ello se pone, adems de la eficacia tcnica y la experiencia del personal de laboratorio.5 La microbiologa juega un papel cada vez ms importante en el campo del diagnstico clnico. Nuevos microorganismos reconocidos como patgenos requieren cada vez mejores posibilidades diagnsticas del investigador. Los mtodos clsicos de la microbiologa sern complementados o sustituidos en el futuro por ensayos inmunolgicos y de anlisis gentico altamente especfico.

Microbiologa del Agua

Es muy importante que el agua para consumo humano y para otros usos est pura y libre de bacterias patgenas. La Microbiologa del Agua se ocupa de obtener aguas de ptima calidad y utiliza microorganismos con el fin de regenerar las aguas de desecho y hacerlas tiles. Algunos de los anlisis realizados para mantener la calidad en el agua son: Anlisis microbiolgico del agua Los coliformes, incluyendo E.coli, son miembros de la familia Enterobacteriaceae. Estos constituyen el 10% de los microorganismos intestinales de los seres humanos y otros animales de sangre caliente. Se utilizan ampliamente como organismos indicadores de contaminacin fecal en el agua. Cuando estas bacterias no se detectan en un volumen especfico en el agua, sta se considera potable o adecuada para el consumo humano. Este grupo incluye Enterobacterae rogenes y Klebsiella pneumoniae. Para analizar la presencia de coliformes totales y coliformes fecales existen diversas pruebas, entre stas tenemos: Filtracin por membrana Es el mtodo ms comn y preferido para evaluar las caractersticas microbiolgicas del agua. Se pasa la muestra de agua por un filtro de membrana. El filtro con las bacterias atrapadas se transfiere a la superficie de un medio slido Curso de Microbiologa Aplicada

o a un soporte absorbente, conteniendo el medio lquido deseado. El uso del medio apropiado permite la deteccin rpida de los coliformes totales, coliformes fecales y estreptococos fecales. Prueba de presencia-ausencia (P-A) Esta prueba puede emplearse para coliformes. Es el mtodo ms simple para determinar coliformes fecales. Se utiliza una muestra de agua (100ml) con caldo de lactosa, de lauriltriptosa e indicador prpura de bromo cresol. Esta prueba se basa en la suposicin de que no debe haber coliformes en el agua potable. Una prueba positiva ocasiona la produccin de cido (color amarillo) y constituye una presuncin positiva que requiere confirmacin. Prueba Colilert Se utiliza para analizar otros coliformes as tambin como E. coli. En esta prueba se aade una muestra de agua de 100ml a un medio especializado. Si hay coliformes, el medio adquiere un color amarillo en 24 horas a 35 C. Esto ocurre debido a la hidrlisis de ONPG (o-nitrofenil-B-D-galactopiransido). Para comprobar la presencia de E. coli, se observa el medio con luz UV. Si la prueba es negativa para la presencia de coliformes, se considera al agua aceptable para el consumo humano. Otros microorganismos indicadores de contaminacin fecal en agua salobre y de mar son los enterococos fecales. En aguas saladas, estas bacterias mueren a una velocidad ms lenta que los coliformes fecales, siendo indicadores ms seguros de una contaminacin reciente.

Microbiologa aplicada al control de calidad de medicamentos y cosmticos

Uno de los aspectos ms importantes del control de calidad de productos de esta naturaleza es el anlisis microbiolgico dirigido a la enumeracin de la poblacin microbiana total incluyendo hongos filamentosos (mohos) y levadura s y a la bsqueda de grmenes patgenos tales como: Salmonella, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, etc.

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Ambiental Biorremediacin
La biorremediacin es una tecnologa emergente que utiliza organismos vivos (plantas, algas, hongos y bacterias) para absorber, degradar o transformar los contaminantes y retirarlos, inactivarlos o atenuar su efecto en suelo, agua y aire. Se pueden emplear diversos organismos en los procesos de biorremediacin. Los ms usados son los microorganismos (tanto bacterias, como algas y hongos) y las plantas (en procesos llamados fitorremediacin), pero tambin se pueden utilizar otros seres vivos tales como los nemtodos (vermiremediacin). Entre los microorganismos destacan especialmente las bacterias, los seres vivos con mayor capacidad metablica del planeta. Las bacterias pueden degradar prcticamente cualquier sustancia orgnica. Si la sustancia se degrada completamente se habla de mineralizacin; este es el proceso ideal, pero no siempre ocurre. Algunas sustancias no son degradadas sino transformadas en otras (biotransformacin). La biotransformacin puede ser peligrosa, ya que la nueva sustancia formada puede ser tan nociva o ms que la de partida. Finalmente hay sustancias que no son degradadas y se las denomina recalcitrantes. stas se acumulan durante mucho en el medio ambiente, especialmente si adems son resistentes a procesos fsico/qumicos como la radiacin ultravioleta o la oxidacin. Las bacterias adems pueden eliminar los contaminantes en ambientes donde hay oxgeno (llamados aerbicos), pero tambin en ambientes sin oxgeno (llamados anaerbicos), ya que pueden respirar otras sustancias diferentes al oxgeno (aceptores de electrones), como por ejemplo el nitrato, el sulfato, el hierro (III), el manganeso, el selenio y un largo etctera. Destacan las bacterias del gnero Pseudomonas, Rhizobium 10

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Eliminacin de metales pesados Biodegradan hidrocarburos Mineralizan herbicidas, pesticidas, insecticidas Eliminacin de S orgnico en combustibles fsiles y policlorofenoles Tratamiento de residuos urbanos e industriales: fabricacin de compost y biogs 11

Biominera
Es el uso de microorganismos en diferentes aspectos de la explotacin de los minerales. Recin en la dcada del 40 se descubri la existencia de bacterias que revolucionaron la definicin de lixiviacin (extraccin) como un proceso catalizado biolgicamente. La biolixiviacion: es una tecnologa que usa bacterias especficas para extraer (lixiviar) metales de los minerales. Biohidrometalurgia: Presencia de agua y ciertos microorganismos. Bioflotacin: tecnologa avanzada para depurar las aguas residuales textiles . Las bacterias mineras logran hacer solubles los minerales. Los microorganismos realizan esta tarea como parte de sus procesos metablicos, simplemente alimentndose de los minerales (son quimioauttrofos). Las bacterias ms conocidas usadas en esta disciplina son las siguientes: Acidithiobacillus ferrooxidans Acidithiobacillus thiooxidans Acidithiobacillus caldos Leptospirillum ferrooxidans

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Microbiologa espacial
La microbiologa espacial es el estudio de los microorganismos presentes en el espacio extraterrestre, en las estaciones espaciales y en las naves espaciales. El desarrollo de los microorganismos en el espacio viene de las naves espaciales, en un principio se pensaba que las naves estaban esterilizadas y estaban libre de microorganismos pero posteriormente se descubri que haba microorganismos que haban sobrevivido e incluso proliferado. 12

Tambin hay que tener en cuenta que las naves (esterilizadas en un principio), se iban poblando de microorganismos desde su despegue, hasta su salida al espacio, donde, tras su paso por las distintas capas de la atmsfera, se iban quedando microorganismos anclados a la superficie de la nave espacial. Pese a los esfuerzos de esterilizacin para reducir la carga biolgica indeseada en las naves espaciales, varios estudios recientes han demostrado que diversas comunidades microbianas son capaces de llegar vivas al momento del lanzamiento. La naturaleza estril de las instalaciones de montaje de las naves espaciales hace que slo las especies ms resistentes, como la E. Coli, sobrevivan.

Microbiologa Blica (Guerra Biolgica)

Consiste en el uso intencional de microorganismos vivientes o sus productos txicos, para causar dao e incluso la muerte al hombre, animales y/o plantas. El 10 de Abril de 1972 la Organizacin de las Naciones Unidas firm un convenio sobre la prohibicin del desarrollo, produccin y almacenamiento de armas biolgicas.

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Esterilizacin, tipos y su importancia en la microbiologa

No se puede hablar de esterilizacin sin considerar el concepto de microorganismo. El hecho de que existan distintos tipos de microorganismos en el medio ambiente, crea grandes dificultades en los estudios bacteriolgicos, cuando es necesario obtener las especies microbianas en estado de pureza, ya que tanto el instrumental como los medios de cultivo son invadidos con suma facilidad por los microbios del medio ambiente. Con el fin de subsanar estos inconvenientes se practica la esterilizacin.

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ESTERILIZACIN
Esterilizacin significa la eliminacin de toda forma de vida de un medio o material, lo que se lleva a cabo generalmente por medios fsicos, por ejemplo, filtracin, o por muerte de los organismos por calor, productos qumicos u otra va. Esta definicin excluye por lo tanto cualquier tcnica que resulte solamente en un dao a los microorganismos o atenuacin de la actividad de cualquier tipo La razn fundamental para efectuar la esterilizacin en Microbiologa Industriales para evitar la competicin por los nutrientes en medios de cultivo y permitir as que el cultivo de microorganismos especficos que se utilizan en un proceso de fermentacin de los rendimientos esperados en biomasa y/o metabolitos especficos. CONTROL DE MICROORGANISMOS MEDIANTE AGENTES FSICOS CALOR Cuando aumenta la temperatura por el lmite de supervivencia del microorganismo, se producen cambios en l y muere. Se pueden utilizar dos tipos de calor: CALOR HMEDO Posee mayor poder de esterilizacin. Podemos aplicarlo mediante varios mtodos:

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Vapor a presin. Utiliza el calor del vapor de agua sometido a presin. Es uno de los mtodos ms eficaces de esterilizacin. Se realiza en unos aparatos especiales denominados autoclaves, parecidos a una olla a presin. La resistencia calienta el agua hasta 100. El vapor sale por el conducto al exterior. Cerramos la espita y se produce presin en el interior. El sistema contina calentndose hasta que se obtiene una atmsfera de presin. Se alcanzan los 120 durante 20 minutos y se produce la esterilizacin de cualquier objeto que haya en el interior.

Tindalizacin. Mtodo propuesto por Tyndall, que consiste en el tratamiento de un objeto a 100C durante 30 minutos 3 das. Es un mtodo de esterilizacin. Se utiliza para la esterilizacin de azcares que caramelizan por encima de 100. Se Curso de Microbiologa Aplicada

lleva a cabo en el autoclave. La diferencia es que la espita se mantiene abierta, por lo que no se genera presin en el interior, y por eso slo se consiguen 100; no ms. CALOR SECO

Horno Pasteur. Es un horno elctroco donde se alcanzan temperaturas de 200C. Garantiza la esterilidad de cualquier objeto que permanezca de 2 a 3 horas a 160. Se esterilizan as aquellos objetos que se deterioran si son humedecidos, o objetos que no se mezclan con el agua, como esptulas, tubos de vidrio. Incineracin. Mtodo de esterilizacin empleado para esterilizar el asa de siembra. Tambin se usa para esterilizar materiales biolgicos (las ranas y ratas). PASTEURIZACIN Es un tratamiento trmico que elimina los microorganismos patgenos de alimentos como la leche, el zumo y derivados. No es un mtodo de esterilizacin, ya que garantiza la destruccin de los microorganismos patgenos, pero no de los microorganismos que no son patgenos; estn presentes en los alimentos pasteurizados. Hay dos mtodos de pasteurizacin de la leche: 15

A 62.8 C durante 30 minutos A 71.7 C durante 15 segundos Entre los microorganismos patgenos ms importantes y ms resistentes destacan Mycobacterium tuberculosis y Coxiellabuinetti. La leche pasteurizada contiene microorganismos no patgenos. Debe ser mantenida en refrigeracin (4C) para retrasar el crecimiento de los microorganismos existentes. UHT: ULTRA HIGH TEMPERATURE Se lleva la leche a 148.9C durante 1-2 segundos. S es un tratamiento de esterilizacin. Se puede conservar a T ambiente durante mucho tiempo. Ej. Pascual. ESTERILIZACIN POR FILTRACIN Hay determinados agentes que son termolbiles; para esterilizar estos agentes se emplea la filtracin. Suelen ser soluciones de enzimas, antibiticos... FILTROS DE MEMBRANA Curso de Microbiologa Aplicada

Son steres de celulosa constituidos por una matriz, acetato de celulosa, por ejemplo, con poros de un determinado dimetro. Eligiendo un poro de 0.45-0.22 eliminamos las bacterias que pueda haber en estas soluciones. Los virus no los podemos eliminar por este mtodo, pero eso no es un problema, ya que siempre van unidos a clulas. Para filtrar el lquido, lo sometemos a presin, con una jeringa si se trata de un volumn pequeo, o con un quitasato si el volumen es mayor. FILTROS HEPA 16 HEPA: Aire particulado de alta eficacia. Son filtros de vidrio empleados para esterilizar el aire que penetra en habitaciones especiales como quirfanos, etc. Tambin se emplean en cmaras de flujo laminar aparatos con forma cbica (urna). Tienen una superficie donde se hacen las operaciones microbiolgicas. El aire que penetra en la cmara pasa por los filtros HEPA, de manera que la superficie queda estril.

ESTERILIZACIN POR RADIACIONES De las radiaciones electromagnticas empleamos dos tipos para la esterilizacin en Microbiologa: Radiacin ionizante y radiacin ultravioleta.

RADIACIN ULTRAVIOLETA El mximo de absorcin de los cidos nucleicos es a 265 nm. La luz UV provoca dmeros de pirimidina en el ADN y si no se reparan, la clula muere. La luz UV tiene poca energa y bajo poder de penetracin; no se considera un esterilizante. Se emplea para disminuir la poblacin microbiana en superficies de quirfanos, produccin de frmacos, campanas de flujo laminar. CONTROL DE MICROORGANISMOS MEDIANTE AGENTES QUMICOS ALCOHOLES Disuelven lpidos, tienen accin detergente... El ms empleado es el etanol (7090%). Se emplea como antisptico de piel y heridas, y como desinfectante de objetos como termmetros bucales, etc.

ALGENOS Y DERIVADOS Curso de Microbiologa Aplicada

Yodo. Es el que tiene mayor capacidad germicida de todos. Se emplea en forma de tintura de yodo en agua o alcohol. Es el betadine, antisptico de heridas y piel. Tiene capacidad antimicrobiana, antivrica y anti fngica. Cloro. Desinfectante de agua de piscinas, de agua potable.. En forma de hipoclorito sdico se emplea como desinfectante en el hogar, en restaurantes... Perxido de hidrgeno. El agua oxigenada oxida las clulas y las destruye. Se emplea como antisptico de la piel. Ozono. Es muy oxidante, se emplea como desinfectante de aguas potables. Glutaldehido y formaldehido. Son esterilizantes. Destruyen formas vegetativas de bacterias, hongos y virus. Se emplean al 2-4% en solucin acuosa. Se usan para esterilizar material ptico (en clnica, para esterilizar endoscopios). El formaldehido se emplea ms como fumigante. Sus vapores destruyen esporas presentes en conducciones de aires contaminados. Quimioesterilizadores gaseosos. Muchos de los utensilios que se emplean en clnica y en laboratorio estn hechos de plsticos modernos como el polipropileno (jeringas, viales, recipientes para muestras de sangre y orina...) No se pueden esterilizar por calor, porque se derretiran. Se utilizan quimioesterilizadores gaseosos, que son grandes recipientes o habitaciones cerradas hermticamente por donde se hacen pasar gases esterilizantes) que aseguran la esterilizacin de los materiales. 17

Importancia de la esterilizacin en la microbiologa

Un laboratorio de microbiologa es un lugar convenientemente habilitado donde se puede habilitar, manejar y examinar microorganismos. Este tipo de trabajo debe ser llevado a cabo con una buena tcnica asptica y por tanto se requiere un ambiente limpio y ordenado. Cuando manejamos cualquier tipo de muestra debemos evitar que microorganismos ajenos a nuestros cultivos y presentes en el ambiente se introduzcan en ellos contaminndolos, o que los microorganismos de la muestra nos contaminen a nosotros. Por ello se debe trabajar en condiciones de estabilidad. En el laboratorio de microbiologa encontraremos esta condiciones bien en campanas de seguridad biolgica o bien la proximidad de la llama de un mechero de alcohol o de gas. Aunque los microorganismos que se manipulan no se han considerados patgenos todos los cultivos de todos los microorganismos deben ser manejados con precaucin por su potencial patogenicidad. En resumen, nunca debe olvidarse la necesidad de cumplir estos 2 requisitos bsicos: -Restringir la presencia de los microorganismos en estudio a sus recipientes y medios de cultivo para evitar el riesgo de contaminarse uno mismo o a un compaero y - evitar que los microorganismos ambientales (presentes en piel, pelo, aire, ropa, etc.) contaminen nuestras muestras.

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CONSERVACIN DE UN MEDIO RECIN ELABORADO

El medio de cultivo reconstituido tiene una vida til limitada. Si no se emplea de inmediato, debe almacenarse bajo condiciones apropiadas para garantizar su utilidad durante un periodo de tiempo. El almacenamiento a 4C es el mejor para la mayora de los medios, s in embargo, aquellos que contienen Tioglicolato, deben guardarse a temperatura ambiente.

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Los medios deben mantenerse preferiblemente en sitios oscuros, ya que la luz puede afectar algunos de sus componentes. Para evitar la desecacin se aconseja que se guarden en bolsas plsticas bien cerradas. Las placas Petri almacenadas as, deben mantenerse con el fondo hacia arriba. Dado que los medios almacenados en refrigeracin, cuando pasan a temperatura ambiente tienden a formar agua de condensacin en la superficie, se recomienda poner los platos Petri en la incubadora a 35C por 2 horas, colocndolos con el fondo hacia arriba para obtener una superficie seca. Esto es particularmente importante para que el agua no afecte la individualidad de las colonias en el aislamiento o en los casos de pruebas de sensibilidad a los antibiticos en los que el exceso de agua puede afectar la dilucin de las colonias y por ende la lectura del halo de inhibicin. Cada lote preparado de medio de cultivo se prueba antes de su uso rutinario, por eficiencia o calidad, mediante la inoculacin de microorganismos cuyo comportamiento conocemos, tanto para reacciones positivas como negativas. Puede utilizarse para ello cepas bacterianas domsticas o cepas control comerciales (ATCC ).

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MEDIOS DE CULTIVO

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

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Agar cerebro corazn

Medio de enriquecimiento Es un medio rico en nutrientes, adecuado para el cultivo de varios microorganismos exigentes entre los cuales se encuentran distintos tipos de bacterias, hongos y levaduras; microorganismos tales como estreptococos y el neumococo. Mantiene los mismos principios que el caldo para el cultivo de estreptococos y otras bacterias exigentes.

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Caractersticas:
Medio slido, color mbar.

Siembra: De acuerdo a los fines de empleo. Incubacin: El tiempo, la temperatura y la atmsfera de incubacin,
sern las ptimas y dependern del microorganismo que se est investigando. Si se aade al medio 10% de sangre desfibrinada se puede emplear para el cultivo y aislamiento de Histoplasma Capsulatum, y con la adiccin de antibiticos en medio se pude emplear tambin en el aislamiento de otros hongos. Con el agregado de 20 l de Penicilina y 40 g/ml de estreptomicina, se utiliza este medio para el aislamiento de hongos patgenos. En ocasiones se usan placas con agar sangre para pruebas generales de sensibilidad. Sin embargo, no debe usarse para la determinacin de reacciones hemolticas ya que este medio lleva una alta concentracin de dextrosa y puede dar reacciones atpicas. Frmula g/L
Fuente de carbono, nitrgeno, y vitaminas.

Instrucciones 16.0 g 8.0 g 5.0 g 2.5 g 5.0 g 2.0 g 13.5 g pH final: 7.4 0.2 Disolver 52 g de polvo en un litro de agua destilada. Calentar a ebullicin hasta su disolucin total. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121C.

Peptona de casena Infusin de cerebro corazn Peptona de carne

Otorga capacidad buffer.

Fosfato disdico
Mantiene el balance osmtico Es el hidrato de carbono fermentable Agente solidificante

Cloruro de sodio Dextrosa AgarAplicada Curso de Microbiologa

Agar Citrato de Simmons

Medio diferencial Es un medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias en base a su capacidad de utilizar el citrato. Este medio es recomendado para el estudio de enterobacterias a partir de muestras clnicas, de agua y alimentos.

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Caractersticas:
Medio slido, color Verde. inocular partir de un cultivo puro, sembrar un inculo ligero por estra slo en la superficie inclinada del medio. A 35-37 C, durante 24-48 horas, en aerobiosis. Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 das de incubacin. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico.

Siembra:

Incubacin:

Resultados:
Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad indicativo de la produccin de citrato permeasa. Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color. Frmula g/L
nica fuente de nitrgeno. Sistema buffer. Mantiene el balance osmtico nica fuente de carbono. Cofactor enzimatico.

Instrucciones 1.0 1.0 5.0 2.0 0.2 0.08 15.0 pH final: 6.9 0.2 Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos. Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar en posicin inclinada.

Fosfato Dibsico de Amonio Fosfato Dipotsico Cloruro de Sodio Citrato de Sodio Sulfato de Magnesio

Indicador de pH. Agente solidificante

Azul de Bromotimol Agar Bacteriolgico

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Agar dextrosa de Sabouraud

Medio selectivo para hongos Es un medio para el cultivo y mantenimiento de levaduras y de hongos patgenos y no patgenos, en especial aquellos asociados con infecciones de piel. Aumenta su selectividad mediante la adicin de 0.05 g/L de cloranfenicol. Este medio es tambin utilizado para la determinacin microbiolgica en cosmticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos.

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Caractersticas:
Medio slido.

Siembra: De acuerdo a los fines de empleo. Incubacin: El tiempo, la temperatura y la atmsfera de incubacin,
sern las ptimas y dependern del microorganismo que se est investigando. Con la adicin de cicloheximida, estreptomicina y penicilina, se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos.

Frmula g/L
Fuente de carbono, nitrgeno, y vitaminas.
Es el hidrato de carbono fermentable Agente solidificante

Instrucciones 5.0 5.0 40.0 15.0 pH 5.6 0.2

Suspender 65 g del medio en un litro de agua destilada. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y hervir durante un minuto. Evitar el sobrecalentamiento. Esterilizar en autoclave a 121C (15 lb de presin) durante 15 minutos.

Digerido Pancretico de Tejido Animal Peptona de Casena Dextrosa Agar Bacteriolgico

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Registro de resultados:

Agra Lisina y Hierro

Medio diferencial

A: Reaccin acida. Color amarillo K: Reaccin alcalina. Color violeta R: Reaccin alcalina: color rojo K/K: Descarboxilacin lisina K/A: Fermentacin glucosa. Descarboxilacin lisina R/A: Desaminacin lisina. Fermentacin glucosa A: cido K: alcalino

K: alcalino El Agar de Hierro y Lisina es un medio utilizado para la diferenciacin de microorganismos entricos en base a su capacidad para desaminar/ descarboxilar la lisina y de producir cido sulfhdrico. Este medio tambin es conocido como LIA

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Caractersticas:
Medio slido, color Violeta. A partir de una colonia aislada sembrar el medio por picadura en el fondo y por estra en la superficie.

Siembra:

Incubacin: a 35 2C durante 18 a 48 horas

Este medio es especialmente recomendado para la identificacin de bacilos que fermentan rpidamente la lactosa.

Resultados:

*Proteus, Providenza y algunas cepas de Morganella spp; producen cultivos con superficie roja sobre fondo amarillo. Tabla A) : Resultados de la prueba LIA a distintos microrganismos. Microorganismos Proteus mirabilis ATCC 43071 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Salmonella enteritidis ATCC 13076 Providencia spp. Citrobacter freundii Morganella spp.* Edwarsiella spp. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Escherichia coli ATCC 25922 Color en el pico de flauta Rojo Prpura Prpura Rojo Prpura Rojo Prpura Prpura Prpura Color en la base del tubo Amarillo Prpura Prpura Amarillo Amarillo Amarillo Prpura Prpura Prpura Ennegrecimiento del medio Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo

Curso de Microbiologa Aplicada

Fuente de carbono y nitrgeno. Vitaminas y cofactores de crecimiento. Fuente de energa

Sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. Indicadores de la produccin de H2S.

Frmula g/L

Instrucciones

Peptona de gelatina Extracto de levadura Glucosa Lisina Citrato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Prpura de bromocresol Agar

5.0 3.0 1.0 10.0 0.5 0.04 0.02 15.0 pH final: 6.9 0.2

Indicador de pH. Agente solidificante.

Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber unos 15 minutos. Calentar cuidadosamente, agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolucin completa. Distribuir y esterilizar a 121C durante 15 24 minutos. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la puncin.

Agar MacConkey

Medio selectivo, diferencial e inhibidor Medio para el cultivo y aislamiento de microorganismos Gram negativos a partir de muestras clnicas, de alimentos, agua, productos lcteos y productos farmacuticos. En este medio se aslan y diferencian bacilos entricos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de la lactosa. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo. Caractersticas: Medio slido, color rojo prpura. Siembra: Inocular las placas por estra o con hisopo, asegurndose de que con cualquiera de los dos mtodos se tengan colonias aisladas. Incubacin: Incubar las placas a 35 0.2C durante 18 a 24 hrs. Si no hay desarrollo a las 24 hrs, reincubar las placas por 24 horas ms. Este medio es especialmente recomendado para la identificacin de bacilos que fermentan rpidamente la lactosa.

Curso de Microbiologa Aplicada

Resultados: Los microorganismos lactosa positiva dan colonias de color rosa con o sin zona de precipitado alrededor. Los microorganismos lactosa negativos dan colonias incoloras o de color muy claro. Frmula g/L
Nutrientes para el desarrollo. hidrato de carbono fermentable Son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. Agente solidificante. Indicador de pH. Mantiene el balance osmtico.

Instrucciones

Peptona Plu ripeptona Lactosa Mezcla de sales biliares Cristal violeta Agar Rojo neutro Cloruro de sodio

17.0 3.0 10.0 1.5 0.001 13.5 0.03 5.0 pH final: 7.1 0.2
Escherichia coli O157:H7: cepa enterohemorrgica de la bacteria E. coli y una causa de intoxicacin alimentaria debido a la produccin de verotoxina.

Suspender 50 g del polvo por litro de 25 agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta disolver. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.

Agar MacConkey con sorbitol

Medio selectivo, diferencial e inhibidor

Medio utilizado para facilitar el aislamiento de Escherichia coli 0157 H7 a partir de heces, alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.

Caractersticas:
Medio slido, color rojo prpura.

Siembra: Siembra en superficie.

aerbica.

La infeccin conduce frecuentemente a una diarrea hemorrgica y ocasionalmente a una falla renal (Sndrome urmico hemoltico), esto especialmente en infantes y ancianos. La transmisin se da travs de la va fecal oral, asociada a comer alimentos crudos, carne contaminada y a nadar o beber en aguas contaminadas.

Incubacin: durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera

La frmula es similar al Agar Mac Conkey pero la lactosa ha sido reemplazada por sorbitol. Resultados: E. coli 0157 H7 no fermenta el sorbitol dando colonias transparentes mientras que la mayora de E. coli la fermenta, dando colonias rosadas.

Curso de Microbiologa Aplicada

Nutrientes para el desarrollo. hidrato de carbono fermentable Son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. Agente solidificante. Indicador de pH. Mantiene el balance osmtico.

Frmula g/L

Instrucciones

Peptona Sorbitol Mezcla de sales biliares No3 Cristal violeta Agar Rojo neutro Cloruro de sodio

20.0 10.0 1.5 0.001 15.0 0.03 5.0 pH final: 7.1 0.2 Suspender 51,5 g de polvo en 1 litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos, llevar a ebullicin hasta disolucin total. Esterilizar por autoclave a 121C por 15 minutos. 26

Agar verde brillante

Medio de enriquecimiento, altamente selectivo Utilizado para el aislamiento de Salmonella spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a partir de muestras clnicas, alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria. No se recomienda para el aislamiento de Shigella spp. Es de un valor excepcional cuando se investiga un gran nmero de muestras de heces o alimentos, por su alta capacidad de diferenciacin de las colonias sospechosas.

Caractersticas:
Medio slido, color verde Sembrar en superficie por estriado a partir de una dilucin del material a investigar o de un cultivo previo en un medio de enriquecimiento selectivo, como Selenito caldo o Tetrationato caldo. Para el tratamiento de materia fecal se recomienda hacer cultivo primario en medios menos selectivos, como Salmonella Shigella agar , o Mac Conkey agar.

Siembra:

Incubacin:: durante 24 horas a 35-37C.

Curso de Microbiologa Aplicada

colonias tpicas de Salmonella aparecen como colonias de color rosa a blanco, opacas rodeadas por el rojo brillante del medio. Los pocos microorganismos que crecen en este medio que son fermentadores de lactosa o sacarosa, son fcilmente identificables debido a la formacin de colonias amarillas- verdes rodeadas de una intensa zona de color amarilla-verdosa. Frmula g/L
Fuente de carbono y nitrgeno. Vitaminas y cofactores de crecimiento. Mantiene el balance osmtico.
Hidratos de carbono fermentables.

Resultados: Las

Instrucciones 10.0 3.0 5.0 10.0 10.0 0.08 0.0125 20.0 pH final: 6.9 0.2 Suspender 58 g de polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullicin durante 2 o 3 minutos. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121C durante 15 minutos. Secar la superficie del medio por unos minutos en la estufa.

Pluripeptona Extracto de levadura Cloruro de sodio Lactosa Sacarosa Rojo fenol Verde brillante Agar

27

Indicador de pH.

Agente selectivo Agente solidificante.

Agar nutritivo
Medio comn Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.

Caractersticas:
Medio slido, color mbar claro a medio ligeramente opalescente. En superficie por estria por la tcnica de pour plate, segn el uso a que se destine.

Siembra:

Curso de Microbiologa Aplicada

Incubacin: En aerobiosis, a 35-37 C durante 24 horas.

El Agar Nutritivo se encuentra descrito en los Mtodos Estndar de la APHA y de la AOAC (Association of Oficial Analytical Chemists) para el anlisis de agua, leche y sus derivados, alimentos y otros materiales. Frmula g/L
Fuente de carbono, nitrgeno y vitaminas.

Instrucciones 5.0 3.0 15.0

Suspender 23 g de polvo por litro de agua destilada. Mezclar y dejar reposar 5 28 y minutos. Calentar suavemente agitando hervir 1 o 2 minutos hasta su disolucin. Distribuir y esterilizar a 121C durante 15 minutos.

Peptona de Gelatina Extracto de Carne Agar Bacteriolgico

Agente solidificante.

pH final: 6.8 0.2

Agar E.M.B

Medio diferencial El Agar Eosina y Azul de Metileno es un medio utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos entricos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Este medio tambin es conocido como Agar EMB por sus siglas en ingls.

Caractersticas:
Medio slido, color verde En superficie, por estriado a partir de un inculo poco denso, para obtener colonias aisladas. En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.

Siembra:

Incubacin: de 24 a 48 horas a 35-37 C, en aerobiosis..

La diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Las colonias de Salmonella y Shigella son translcidas, de color mbar o incoloras. Los coliformes que utilizan la lactosa y/o sacarosa producen colonias de color azul a negro con centros obscuros y brillo metlico.

Resultados:

Curso de Microbiologa Aplicada

Otros coliformes como Enterobacter presentan colonias mucosas de color rosa. Las cepas de Enterococcus faecalis son parcialmente inhibidas. Frmula g/L Peptona
Fuente de nitrgeno.
Hidratos de carbono fermentables.

Instrucciones 10.0 5.0 5.0 2.0 13.5 0.4 0.065 pH final: 7.2 0.2 Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos; mezclar, calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos 29 hasta su disolucin. Esterilizar en autoclave a no ms de 121C durante 15 minutos. Enfriar a 45C y distribuir agitando suavemente.

Lactosa Sacarosa Fosfato dipotsico Agar Eosina

Sistema buffer
Agente solidificante.

Indicador de pH.

Azul de metileno

Agar estafilococo 110

Medio selectivo, diferencial e inhibidor Medio para el aislamiento y diferenciacin presuntiva de estafilococos, en base a la produccin de pigmentos, la fermentacin de manitol y la hidrlisis de gelatina, a partir de alimentos y otras muestras.

Caractersticas:
Medio slido, color mbar claro, opalescente con precipitado.

Siembra: Directa, en superficie, por estriado o por extensin.

.

Incubacin: Durante 48 horas, a 35-37 C, en aerobiosis. Resultados:

Curso de Microbiologa Aplicada

-Fermentacin de manitol: agregar unas gotas de prpura de bromocresol a las zonas donde se encuentran las colonias sospechosas y en una zona de la placa donde no hay desarrollo bacteriano. Comparar el color desarrollado entre estas dos zonas.

Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento bacteriano. El medio sin desarrollo de microorganismos permanece sin cambio. Prueba negativa: no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento bacteriano y la zona sin inocular. -Hidrlisis de la gelatina: cubrir la placa 5 ml de una solucin saturada de sulfato de amonio y colocar en estufa, a 35-37 C, en aerobiosis durante 10 minutos. Positiva: halo transparente alrededor de las colonias.

30

Negativa: ausencia de halo transparente alrededor de las colonias.

Nutrientes para el desarrollo del Mo. Sustrato de la enzima gelatinasa

Hidratos de carbono fermentables. Inhibe el desarrollo de flora acompaante excepto Staphylococcus spp. Sistema buffer Agente solidificante.

Frmula g/L

Instrucciones

Extracto de levadura Triptena Gelatina Lactosa D-Manitol Cloruro de sodio Fosfato dipotsico Agar

2.5 10.0 30.0 2.0 10.0 75.0 5.0 15.0

pH final: 7.0 0.2 Suspender 149 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121C. Verter en placas y mezclar para dispersar el precipitado.

Agar sal y manitol

Medio selectivo, diferencial e inhibidor Utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos. Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir de muestras

Curso de Microbiologa Aplicada

clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros materiales de importancia sanitaria..

Caractersticas:
Medio slido, color rojo. Sembrar en superficie por el mtodo de estra a partir de un inculo denso de la muestra.

Siembra:

31

Incubacin: De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin durante 3 das a 32 C, en aerobiosis.

Resultados:
-Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo. -Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color. -Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o prpura. Frmula g/L
fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales Hidratos de carbono fermentable.
Agente selectivo que inhibe el desarrollo de flora acompaante. Indicador de pH.

Instrucciones 1.0 10.0 10.0 75.0 15.0 0.025 pH final: 7.4 0.2 Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121C durante 15 minutos.

Extracto de carne Pluripeptona d-Manitol Cloruro de sodio Agar Rojo de fenol

Curso de Microbiologa Aplicada

Agar salmonella shigella (SS)

Medio selectivo y diferencial e inhibidor Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.

32

Caractersticas:
Medio slido, color rojo naranja

Siembra: Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo. Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar E.M.B. o de agar Mac Conkey. Incubacin: Durante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
La diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas.

Resultados: Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes. La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formacin de sulfuro de hierro. Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo, o algn otro medio de enriquecimiento.

Curso de Microbiologa Aplicada

Frmula g/L
fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales Hidratos de carbono fermentable.
Agente selectivo que inhibe el desarrollo de bacilos Gram positivos.

Instrucciones

Pluripeptona Extracto de carne Lactosa Mezcla de sales biliares Citrato de sodio Tiosulfato de sodio Citrato frrico Agar Verde brillante Rojo neutro

5.0 5.0 10.0 8.5 8.5 8.5 1.0 13.5 0.00033 0.025
pH final: 7.0 0.2 Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar. 33 Calentar a ebullicin durante 2o3 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.

Deteccin produccin de H2S. Agente solidificante.

Indicador de pH.

Agar Mueller Hinton (MH)

Medio selectivo y diferencial Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente por El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Adems es til con el agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.

Caractersticas:
Medio slido, color mbar.

Siembra: Consultar las referencias apropiadas para la tcnica de

susceptibilidad en placa por el mtodo de difusin.

Incubacin: Consultar en la seccin prueba de sensibilidad a los

Antimicrobianos, la metodologa apropiada.

Curso de Microbiologa Aplicada

Consultar en la seccin prueba de sensibilidad a los antimicrobianos, la metodologa apropiada.

Resultados:

Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es til para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. Instrucciones Suspender 37 g del medio Infusin de carne 300.0 deshidratado en un litro de agua Peptona cida de casena 17.5 34 destilada. Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Calentar con agitacin Almidn 1.5 frecuente y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121C durante 15 minutos. Enfriar a 45-50C y distribuir a cajas de Petri (o agregar los suplementos que se Agar 15.0 desee) hasta un nivel de 4 mm sobre una superficie horizontal (25-30 ml en placas de 9 cm de dimetro). pH final: 7.3 0.1 Frmula g/L

Fuente de nitrgeno, vitaminas, carbn y aminocidos. Absorbe cualquier metabolito txico

Agente solidificante.

Caldo tetrationato

Medio de enriquecimiento, selectivo Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella spp. a partir de heces, orina, alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.

Caractersticas:
Suspensin blanco lechosa. Puede realizarse la siembra partiendo de un caldo de preenriquecimiento o en forma directa conservando la proporcin 1:10.

Siembra:

Incubacin: Durante 12-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis. Resultados: observar la presencia de desarrollo indicada por la turbidez
del medio.

Curso de Microbiologa Aplicada

Provee los nutrientes necesarios

Suprime el crecimiento de coliformes e inhibe el desarrollo de bacterias Gram positivas.

Frmula g/L

Instrucciones

Peptona Sales biliares

5.0 1.0
Suspender 46 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Mezclar vigorosamente y llevar a ebullicin. Enfriar a 45C o menos. No esterilizar. Agregar 20 ml de solucin yodurada. Mezclar y distribuir35 10 ml por tubo, en tubos estriles. No debe calentarse luego de agregar la solucin yodada. El medio base puede mantenerse a 4C , dura varios meses, pero una vez agregada la solucin iodada debe usarse en el mismo da.

Neutraliza y absorbe metabolitos txicos

Carbonato de calcio Tiosulfato de sodio

10.0 30.0

Permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato reductasa, como ser la Salmonella spp.

pH final: 8.4 0.2

Solucin iodo yodurada Yodo Yoduro de potasio Agua 6.0 5.0 20.0

Registro de resultados: A: Reaccin acida. Color amarillo A/A: Fermentacin 3 azucares K: Reaccin alcalina. Color roja naranja K/A: Fermentacin de la glucosa Burbujas: Produccin de gas K/K: No hay fermentacin de los 3 Precipitado negro: Formacin H2S A: cido K: alcalino

Agar TSI
Agar TSI
Medio diferencial

El Agar-hierro-triple azcar es un medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.

Caractersticas:
Medio slido, color rojo. A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.

Siembra:

Incubacin: A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.

Esta prueba se recomienda para la identificacin de patgenos entricos gram negativos.

Curso de Microbiologa Aplicada

Resultados:
Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa. Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo no es fermentador de azcares. La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas. El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico. Tabla B) : Resultados de la prueba TSI a distintos microrganismos.

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Microorganismo E. coli ATCC 25922 K. pneumoniae ATCC 700603 P. mirabilis ATCC 43071 S. typhimurium ATCC 14028 S. enteritidis ATCC 13076 S. flexneri ATCC 12022 P. aeruginosa ATCC 27853 E. coli ATCC 25922 K. pneumoniae ATCC 700603
Nutrientes para el desarrollo.

Pico/Fondo A/A A/A K/A K/A K/A K/A K/K A/A A/A
Frmula g/L

Produccin de gas + + + + + + 3.0 20.0 5.0 10.0 10.0 1.0 0.2 0.2 0.025 13.0

Produccin decido sulfhdrico + + + Instrucciones

Extracto de carne Pluripeptona

Mantiene el balance osmtico.

Cloruro de sodio Lactosa

Hidratos de carbono fermentable

Sacarosa Glucosa Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Rojo de fenol Agar

Es la fuente de iones 3+ Fe
Proporciona el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Indicador de pH. Agente solidificante.

Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitacin frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolucin total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.

Curso de Microbiologa Aplicada pH final: 7.3 0.2

Medio MIO

Medio de enriquecimiento Agar diferencial, TSI El medio para Movilidad, Indol y Ornitina es usado para la identificacin de Enterobacteriaceae en base a su movilidad, actividad de ornitina decarboxilasa y produccin de indol.

37

Caractersticas:
Medio semislido, color prpura transparente a ligeramente opalescente. A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, inocular por puncin profunda con asa recta.

Siembra:

Incubacin: En aerobiosis, durante 18-24 horas a 35-37 C.

El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo.

Resultados:
-Movilidad: Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento ms all de la lnea de siembra. Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra. -Ornitina decarboxilasa: Resultado positivo: color prpura. Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violceo en la superficie del medio. -Prueba del indol: La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina. Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador. Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.

Curso de Microbiologa Aplicada

Tabla C) : Resultados de la prueba MIO a distintos microrganismos.

Microorganismo E. coli ATCC 25922 K. pneumoniae ATCC 700603 P. mirabilis ATCC 43071 E. coli ATCC 25922

Crecimiento Bueno Bueno Bueno Bueno

Movilidad + + +

Indol + +

Ornitina decarboxilasa + + +
Instrucciones

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Frmula g/L
Hidratos de carbono fermentable. Nutrientes para desarrollo y triptfano sustrato de la enzima triptofanasa para la prueba indol. Sustrato para la deteccin de la enzima ornitina descarboxilasa. Agente solidificante. Indicador de pH.

Dextrosa Extracto de levadura Peptona Triptena Clorhidrato de L-ornitina Agar Prpura de bromocresol

1.0 3.0 10.0 10.0 5.0 2.0 0.02 pH final: 6.5 0.2
Suspender 31 g del polvo en un litro de agua destilada. Calentar a ebullicin hasta completa disolucin. Distribuir en tubos y esterilizar 15 minutos a 121C.

Medio SIM
Agar TSI
Medio diferencial, de enriquecimiento Medio destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Caractersticas:
Medio semislido, color mbar A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin profunda con aguja de inoculacin recta (no usar asa con anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de

Siembra:

Curso de Microbiologa Aplicada

profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en lnea recta.

Incubacin: Durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.

Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich. El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo.

Resultados:
-Movilidad: Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento ms all de la lnea de siembra. Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra. - Produccin de SH2: Resultado positivo: Ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el medio. Resultado negativo: El medio permanece sin cambio de color. . -Prueba del indol: Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador. Resultado negativo: sin cambio de color.

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Tabla D): Resultados de la prueba SIM a distintos microrganismos.

Microorganismo E. coli ATCC 25922 K. pneumoniae ATCC 700603 P. mirabilis ATCC 43071 S. typhimurium ATCC 14028 S. enteritidis ATCC 13076 S. flexneri ATCC 12022

Movilidad + + + + -

Indol + -

Produccin de cido sulfhdrico + + + -

*En las bacterias aerobias estrictas, que slo crecen en superficie, la movilidad puede ser difcil de observar. *Algunas bacterias productoras de melanina como M. morganii, pueden dar un color parduzco, que no debe confundirse con el color negro debido a la produccin de cido sulfhdrico.

Curso de Microbiologa Aplicada

Sustrato para la enzima triptofanasa. Nutrientes para desarrollo

Frmula g/L

Instrucciones

Triptena Peptona Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Agar

20.0 6.1 0.2 0.2 3.5

Es la fuente de iones 3+ Fe
Proporciona el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Agente solidificante.

pH final: 7.3 0.2

Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar hasta disolver; calentar agitando y hervir durante un minuto. Distribuir unos 4 ml en tubos de hemlisis y esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos. Solidificar en posicin vertical. 40

Base de agar Urea

Base de agar Urea
Medio diferencial, de enriquecimiento Christensen Agar TSIMedio (Urea Agar Base); Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad uresica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.

Caractersticas:
Medio semislido, color amarillo A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, estriar la superficie del pico de flauta. Algunos microorganismos pueden requerir mayor tiempo de incubacin. *Se recomienda no punzar la capa profunda para controlar el color.

Siembra:

Incubacin: En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 C. Resultados:

Urea positivo: Rojo-Rosado Urea negativo: Amarillo

Curso de Microbiologa Aplicada

Microorganismo Proteus mirabilis ATCC 43071 K. pneumoniae ATCC 700603 Escherichia coli ATCC 25922 S. flexneri ATCC 12022 S. typhimurium ATCC 14028 Proteus mirabilis ATCC 43071

Actividad uresica Positiva Positiva dbil Negativa Negativa Negativa Positiva

Color del medio Rojo-Rosado Rojo-Rosado Amarillo Amarillo Amarillo Rojo-Rosado

41

*Bacterias que hidrolizan lentamente la urea, como ser Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter, viran al color rojo-rosado de todo el medio de cultivo luego de varios das de incubacin. *No calentar o sobrecalentar el medio de cultivo porque la urea se descompone facilmente. Frmula g/L Instrucciones

Sustrato para la enzima triptofanasa. Nutrientes para desarrollo

Mantiene el balance osmtico Sistema buffer Indicador de pH

Agente solidificante.

Suspender 24 g de polvo en 950 ml de agua destilada. Dejar Glucosa 1.0 reposar 2 minutos. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 Cloruro de sodio 5.0 minutos. Enfriar a 50C y agregar Fosfato monopotsico 2.0 50 ml de una solucin de urea al Rojo de fenol 0.012 40% previamente esterilizada por filtracin o cloroformo. Fraccionar en tubos de hemlisis y solidificar Agar 15.0 en pico de flauta con fondo profundo. pH final: 6.8 0.2

Triptena

1.0

Base de caldo Urea

Base de agar Urea
Medio diferencial

Agarutilizado TSI Medio para diferenciar microorganismos que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., enterobacterias, Salmonella y Shigella a partir de muestras clnicas.

Caractersticas:
Medio lquido, color rosa salmn

Curso de Microbiologa Aplicada

A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, por agitacin en el medio utilizando asa recta

Siembra:

Incubacin: En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 C. Resultados:

Urea positivo: Rojo cereza Urea negativo: Permanece del mismo color.

42
Bacterias rea + rpida: Proteus y Providencia Bacterias rea + retardada: Klebsiella, Citrobacter y Enterobacter. Bacterias rea negativa: Escherichia coli, Salmonella, Shigella

Rpida

Retardada

Frmula g/L

Instrucciones

Urea Extracto de levadura Fosfato disodico Fosfato monopotsico Rojo de fenol

20.0 0.1 9.5 9.1 0.01

Suspender 3,87 gramos del medio en 100 ml de agua destilada sin calentamiento. Cuando el polvo se disuelve, se esteriliza por filtracin. Dispensar cantidades de 0,5 a 2 ml en tubos estriles pequeas. No esterilizar en autoclave. No deje que hierva el medio.

pH final: 6.8 0.2

Curso de Microbiologa Aplicada

Emulsin yema de huevo Base de agar Urea

Medio selectivo

Agar TSI para el aislamiento de Staphylococcus aureus coagulasa positivo. Medio utilizado

Caractersticas:
Medio slido, color mbar turbio

43

Siembra: Se siembra la placa con el inculo Incubacin: a 37C durante 24 horas

Las colonias Staphylococcus aureus aparecen de un color negro y brillante de unos 5mm de dimetro, aunque podran aparecer levaduras de color blanco, algunos bacilos de color marrn y micrococos con aspecto pardo-negro. *Para preparar la emulsin de yema de huevo se debe desinfectar la superficie de la cscara, romper la misma aspticamente y separar las yemas intactas en un cilindro graduado estril y diluir al 50% en solucin salina estril. Las placas preparadas deben ser utilizadas dentro de las siguientes 24h. Frmula g/L Instrucciones Suspender los ingredientes en el agua destilada. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver completamente.

Resultados:

Digerido pancretico de casena Extracto de carne Extracto de levadura Cloruro de litio Agar Glicina Piruvato de sodio

10 g 5g 1g 5g

Agua destilada

Esterilizar en autoclave a 121C (15 lb de presin) durante 15 minutos. Enfriar entre 45C y 50C y agregar 12g 10 mL de solucin de telurito de potasio al 1% esterilizado por 10g filtracin y 50 mL de una emulsin de yema de huevo. Mezclar completa y suavemente, colocar 20 mL de medio 950 ml por cada placa y dejar solidificar.

20g

pH final: 6.8 0.2 Curso de Microbiologa Aplicada

Base de agar Brucella Base de agar Urea

Medio selectivo y de enriquecimiento

Agarrecomendado TSI Medio para el aislamiento y cultivo de Brucella spp. Con la adicin de sangre, el medio se usa para el aislamiento y cultivo de Brucella spp. y de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes, a partir de una gran variedad de muestras clnicas. Tambin es til para observar reacciones de hemlisis.

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Caractersticas:
Medio slido, color mbar Por inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo.

Siembra:

Incubacin: A 35-37 C, hasta 72 horas, en atmsfera con 5-10 % CO2.

El agregado de sangre al medio de cultivo, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemlisis. Este medio, puede ser tambin selectivo, si es suplementado con antibiticos, ej: Bacitracina 25.000 U/l, Polimixina B 6.000 U/l, cicloheximida 100 mg/l.

Resultados:
Microorganismo B. abortus ATCC 11192 S. aureus ATCC 25923 S. pyogenes ATCC 19615 S. pneumoniae ATCC 6305 S. pneumoniae ATCC 49619 Crecimiento Moderado-Abundante Abundante Abundante Abundante Abundante Hemlisis -Beta Beta Alfa Alfa

Curso de Microbiologa Aplicada

Frmula g/L

Instrucciones

Triptena Peptona de carne Glucosa Extracto de levadura Cloruro de sodio Bisulfito de sodio Agar

Suspender 43 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Mezclar 10.0 vigorosamente, calentar con agitacin frecuente y hervir 1.0 durante 1 minuto para disolver el 2.0 polvo. Esterilizar por autoclave a 121 C durante 15 minutos. 5.0 Nota: si se quiere suplementar con sangre, agregarla aspticamente, 0.1 al medio de cultivo estril, fundido 15 y enfriado a 45-50 C. pH final: 7.0 0.2

10.0

45

Agar extracto de malta Base de agar Urea

Medio de enriquecimiento

Agar TSIaislamiento y recuento de hongos y levaduras a partir de diversas muestras. Para cultivo,

Caractersticas:
Medio slido, color mbar Sembrar el medio de cultivo por estra en la superficie o adicionar la muestra para la tcnica de vaciado en placa.

Siembra:

Incubacin: Incubar hasta 5 das a 25 2C.

El bajo pH (4.6) evita el crecimiento de las bacterias. Cuando se usa para recuento de mohos y levaduras, puede ajustarse el medio de cultivo una vez esterilizado y enfriado a 45C, con una solucin estril de cido tartrico al 5% para obtener un pH aproximado de 3.5.

Curso de Microbiologa Aplicada

Frmula g/L

Instrucciones

Peptona Maltosa Glicerol Dextrosa Agar

.78 12.75 2.35 2.75 15.0

Suspender los ingredientes en el agua destilada. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver completamente. Esterilizar en autoclave a 121C (15 lb de presin) durante 15 minutos. Enfriar entre 45C y 50C.

46

pH final: 4.6 0.2

Caldo lactosado Base de agar Urea

Medio diferencial y de enriquecimiento

Agar TSI Se recomienda como prueba presuntiva para investigar la presencia de bacterias del
grupo coliforme en agua, productos lcteos, etc. Actualmente tambin est indicado para el preenriquecimiento no selectivo en la bsqueda de Salmonella spp. a partir de alimentos

Caractersticas:
Medio lquido, color mbar claro, transparente sin precipitado

Siembra: -Para investigar la presencia de bacterias coliformes, si se trata

de volmenes pequeos de muestra (1ml), sembrar en caldo simple concentracin, si se trata de volmenes grandes (10ml) sembrar en caldo doble concentracin.

-Cuando se emplea como preenriquecimiento no selectivo en la bsqueda de Salmonella spp a partir de alimentos, se siembra 25 g ml de alimento en 225 ml de caldo.

Incubacin: -Para bacterias coliformes : a 35-37 C durante 24-48 horas,

en aerobiosis.

Curso de Microbiologa Aplicada

-Para preenriquecimiento de Salmonella spp.: a 35-37 C durante 24 horas, en aerobiosis. Se lo usa tambin como medio de preenriquecimiento, porque permite recuperar clulas injuriadas, diluye sustancias txicas o inhibitorias y favorece el desarrollo de Salmonella con respecto a otras bacterias.

Resultados:
Microorganismo Escherichia coli ATCC 25922 K. pneumoniae ATCC 700603 Citrobacter freundii E. faecalis ATCC 29212 P. aeruginosa ATCC 27853 Salmonella typhimurium ATCC 14028
Frmula g/L

Crecimiento Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno

Produccin de gas + + + 47

Instrucciones

Extracto de carne Peptona Lactosa

Suspender 13 g por litro de agua destilada. Mezclar bien y distribuir 5.0 en tubos con campanitas de Durham. Esterilizar en autoclave 5.0 durante 15 minutos a 121C. pH final: 6.9 0.2

3.0

Medio XLD Base de agar Urea

Medio de enriquecimiento y diferencial

Agar El agar TSI XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es utilizado para el aislamiento y diferenciacin de patgenos entricos Gram negativos, especialmente del gnero Shigella.

Caractersticas:
Medio solido, color rojo Las muestras se siembran directamente en la placa. Pueden ser enriquecidas con caldo Tetrationato o caldo Selenito

Siembra:

Incubacin: Incubar a 35-37C durante 24 horas

Curso de Microbiologa Aplicada

Resultados:
Las colonias sospechosas de Shigella sobre el agar XLD son transparentes y parecen rojas por el color del medio. Este gnero bacteriano al no fermentar la xilosa, la lactosa, ni la sacarosa, no da lugar a que el rojo fenol vire a amarillo. Como estos microorganismos tampoco tienen la capacidad de alcalinizar el medio por la descarboxilacin de la lisina, no se produce color rojo prpura alrededor de las colonias. Las colonias tpicas de la Salmonella son de color rojo con el centro negro debido a la produccin de H2S. Mientras que las de E. coli son grandes, amarillas con o sin precipitado de bilis

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Frmula g/L

Instrucciones

Xilosa L-Lisina Lactosa Sacarosa Cloruro de sodio Extracto de Levadura Rojo fenol Desoxicolato de Sodio Tisulfato de Sodio Citrato Ferrico de Amonio Agar

3.75g 5g 7.5g 7.5g 2.5g 3g 0.08g 2.5g 6.8g 0.8g 15g pH final: 7.4 0.2 Suspender 57 g de medio en un litro de agua destilada. Mezclar vigorosamente. Calentar con agitacin suave hasta que el medio llegue a ebullicin. Evitar el sobrecalentamiento ya que puede provocar la precipitacin del medio. Este medio NO se puede esterilizar por autoclave. Enfriar a una temperatura entre 45-50C en un bao de mara y verter en placas de Petri estriles.

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Base de Agar Pseudomonas Base de agar Urea

Medio diferencial e inhibidor Medio de cultivo utilizado para el aislamiento, la deteccin y la diferenciacin de especies Agar TSI de Pseudomonas spp. en base a la produccin de piocianina. Conocido tambin como medio King A.

Caractersticas:
Medio slido, color blanco-amarillo transparente A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, del cual se sospeche la presencia de Pseudomonas spp., tomar una colonia y estriar la superficie del medio.

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Siembra:

Incubacin: Durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

Si no se observa crecimiento, reincubar a 25-30 C, o dejar a 22 C y observar diariamente hasta 7 das.

Resultados:
-Un resultado positivo es por observacin de los pigmentos piocianina y/o piorrubina. -La produccin de piocianina se observa como una zona color azul, azul-verdoso que rodea la colonia, o que se extiende en todo el medio de cultivo debido a la difusin del pigmento. -La produccin de piorrubina se observa como una zona de color rojo alrededor de la colonia o que se extiende en todo el medio de cultivo debido a la difusin del pigmento.

Cepa P. aeruginosa P. fluorescens P. putida P. mallei P. stutzeri S. maltophilia B. cepacia Escherichia coli

Crecimiento Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno

Produccin de Fluorescena + + + -

Produccin de Piocianina + -

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Frmula g/L

Instrucciones

Peptona de gelatina Sulfato de potasio Cloruro de magnesio

20.0 10.0 1.4

Agar

15.0

Suspender 46.4 g del polvo en un litro de agua destilada. Agregar 10 ml de glicerina. Calentar con agitacin constante para homogeneizar el producto. Llevar a ebullicin para que se disuelva por completo. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 50 121 C.

pH final: 7.4 0.2

Agar chocolate Base de agar Urea

Medio selectivo, diferencial e inhibidor La Base de Agar Gelosa Chocolate es un medio utilizado con varios suplementos Agar TSI para el aislamiento y cultivo de Neisseria gonorrhoeae y otros microorganismos fastidiosos. Este medio tambin es conocido como Base de Agar GC.

Caractersticas:
Medio slido, color chocolate Procesar las muestras y sembrar las placas inicialmente en forma de Z y posteriormente estriando. en atmsfera aerbica enriquecida con CO2 a 35 2C por 18 a 24 y hasta 48 horas y observar el crecimiento.

Siembra:

Incubacin: Incubar Resultados:

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Frmula g/L

Instrucciones

Mezcla de peptonas Almidn de Maz Cloruro de sodio Fosfato Dipotsico Fosfato Monopotsico

15.0g 1.0g 5.0g 4.0g 1.0g

Suspender 7.2 g del medio en 100 mL de agua purificada para obtener una base de doble concentracin, mezclar y dejar reposar durante 5 minutos, calentar con agitacin frecuente hasta completar la disolucin del polvo y hervir durante un minuto. Por otro lado, preparar 100 mL de una solucin de hemoglobina al 2% adicionando gradualmente agua a 2 g de hemoglobina seca para obtener una solucin uniforme. Esterilizar ambas soluciones en autoclave a 121 C durante 15 minutos. Enfriar las soluciones a una temperatura de 45-50 C, mezclar y agregar los dems ingredientes dependiendo del medio que se desee preparar. Homogenizar y vaciar en placas Petri estriles.

51

Agar

10.0g

pH final: 7.2 0.2

Agar base sangre

Base de agar Urea
Medio diferencial y de enriquecimiento Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos Agar TSI microorganismos. Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observacin de reacciones de hemlisis. Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate.

Caractersticas:
Medio slido, color mbar y preparado con 5% de sangre de carnero: rojo cereza.

Curso de Microbiologa Aplicada

Por inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo. El tiempo, temperatura y atmsfera de incubacin, dependern del microorganismo que se quiera aislar. *El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemlisis.

Siembra:

Incubacin:

Resultados:

52 Crecimiento Abundante Abundante Abundante Abundante Abundante

Frmula g/L

Microorganismos E. coli ATCC 25922 S. aureus ATCC 25923 S. pyogenes ATCC 19615 S. pneumoniae ATCC 6305 S. pneumoniae ATCC 49619

Hemlisis -Beta Beta Alfa Alfa

Infusin de msculo de corazn Peptona Cloruro de sodio Agar pH final: 7.3 0.2

375.0 10.0 5.0 15.0

Instrucciones: Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar perfectamente hasta obtener una suspensin homognea. Calentar con agitacin frecuente y hervir 1 minuto. Esterilizar 20 minutos a 121C. Enfriar a 45-50C agregar sangre desfibrinada al 5%. Homogeneizar y distribuir en placas. Preparacin de la placa de Agar Sangre: aadir en forma asptica un 5% de sangre estril desfibrinada a temperatura ambiente, el agar debe estar a 45C. Preparacin de Agar Chocolate: despus de aadir la sangre y agitando frecuentemente se mantiene el medio de cultivo a 80C por 10 minutos hasta que adq uiera un color pardo chocolatado.

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Bibliografa
Betty A. Forbes, Diagnostico Microbiologico 12a, Buenos Aires: ed. Medica Panamericana S.A., 2009. Evelyn Rodrguez Cavallini, an os Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de Laboratorio., Costa Rica: Editorial de la Universidad de Costa Rica, 2005.

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Referencias
MICROBIOLOGIA APLICADA, Manual de Laboratorio, COMPOSICION Y PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO; URL: http://www.azc.uam.mx/cbi/quimica/microbiologia/ap_a.pdf Dra. Ana Lilia Garca Prez, Instituto Nacional de Angiologa y Ciruga Vascular; Biotica y Microbiologa, (2002). URL: http://bvs.sld.cu/revistas/ang/vol4_1_03/ang04103.htm Microbiologa, Subdisciplinas y otras disciplinas relacionadas, (2008). URL: http://micromahli.blogspot.mx/ Laboratorios Britania S.A., 2010. URL: http://www.britanialab.com/productos.php Procedimientos de control de calidad ,2007 http://www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/US/L007492%2808%29%280307%29_ES.pdf MCD LAB , S.A. de C.V.. PRODUCTO. AGAR DEXTROSA SABOURAUD. URL: http://www.mcd.com.mx/pdfs/AGAR%20DEXTROSA%20SABORAUD.pdf MCD LAB , S.A. de C.V.. PRODUCTO. AGAR DEXTROSA. URL: SABOURAUD.http://www.mcd.com.mx/pdfs/agar_hierro_lisina.pdf La microbiologa y su objetivo. URL: http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema_1_objetivo _micro_e_historia.pdf

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Dr. Pedro F. Mateos; Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de Salamanca; GENERALIDADES Y DESARROLLO HISTORICO DE LA MICROBIOLOGIA. URL: www.itescam.edu.mx/principal/sylabus/fpdb/recursos/r3949.DOC MCD LAB, S.A. de C.V., URL: http://www.mcd.com.mx/catalogo.htm Universidad de los Andes, Departamento de microbiologa Agrcola, (2007) URL: http://cimic.uniandes.edu.co/LineasInvestigacion/microbiologia_agricola.htm MICROBIOLOGIA APLICADA, Manual de Laboratorio, COMPOSICION Y PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO; URL: http://www.azc.uam.mx/cbi/quimica/microbiologia/ap_a.pdf

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