UNIVERSIDAD PARTICULAR DE CHICLAYO

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MDICA

DOCENTE

: Lic. Granados Silva Guillermo.

ALUMNO

: Jimenez Lluen James Deng.

CURSO

: Microbiologa.

CICLO

: IV ciclo.

Pimentel, Mayo 2013.

PRCTICAS DE MICROBIOLOGA
OBJETIVOS: 1. Iniciacin en las tcnicas del estudio de microorganismos: Tincin y morfologa. MATERIAL: Cristal violeta. Lugol. Alcohol acetona. Safranina Microscopio. Aceite de inmersin. Porta y cubre objeto. Mechero. Centrifuga. Tubo de ensayo 13 x 100mm. Muestra patolgica.

MARCO TEORICO: El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea. El modo ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes. Si se desea simplemente aumentar el contraste de las clulas para la microscopa, son suficientes los procedimientos que usan un solo colorante llamado de tincin simple. Sin embargo, a menudo se utilizan mtodos que no tien de igual modo todas las clulas, es el proceso denominado tincin diferencial. Uno muy usado en microbiologa es la tincin Gram. Basndose en su reaccin a la tincin Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos: gram positivas y gram negativas. Esta tincin tiene gran importancia en taxonoma bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.

Mientras que las bacterias gram negativas son constantes en su reaccin, los microorganismos gram positivos pueden presentar respuestas variables en ciertas condiciones (son gram lbiles). Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias gram positivas pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y en consecuencia, se tien por la safranina apareciendo como gram negativas. Anlogo efecto se produce en ocasiones por cambio en el medio del organismo, o por ligeras modificaciones en la ejecucin de la tcnica. Por este motivo, es preciso atenerse, en la prctica, al procedimiento establecido. Para explicar el mecanismo de la tincin de gram se han propuesto varias hiptesis fundadas en la naturaleza qumica de las paredes celulares de los microorganismos. Aqu puedes ver las diferencias estructurales y qumicas de los dos tipos de pared bacteriana:
Pared Gram + capa densa y uniforme de 200 a 800 A) cidos teicoicos polisacridos protenas (pocas veces) glicopptido (50% del peso seco) Pared Gram capa interna delgada de 20 a 30 A cubierta por capas externas de densidad menor) lipopolisacridos lipoprotenas protenas glicopptido (10% del peso seco)

El mecanismo de la tincin Gram:

Productos que se utilizan

Reaccin y coloracin de las bacterias GRAM + GRAM Clulas color violeta

1) Cristal violeta 2) Lugol solucin iodada 3) Alcohol

Clulas color violeta

Se forma el complejo CV-I. Las Se forma el complejo CV-I. Las clulas continan teidas de clulas continan teidas de color violeta. color violeta. Se deshidratan las paredes Eliminacin por extraccin de celulares. Se contraen los grasas de las paredes poros. Disminuye la celulares. Aumenta la permeabilidad. El complejo CV- porosidad. El complejo CV-I se I no sale de las clulas que separa de la clula. continan teidas de color violeta. Clulas decoloradas; se tien de color rosado.

4) Safranina Clulas no decoloradas; quedan teidas de color violeta.

PROCEDIMIENTO Al tener la muestra se coloca en un tubo de ensayo de 13 x 1000 mm. Y se calibra con otro tubo para proceder a centrifugar. Se centrifuga por espacio de 5 minutos por 3000 rpm, luego se procede a decantar para elimina el exceso de orina y utilizar el sedimento. En un portaobjeto se coloca una gota del sedimento y se procede a colocar la laminilla cubre objeto y observar en fresco al microscopio, se enfoca con objetivo de 10 x luego se cambia a objetivo de 40x para observar la muestra. En otro portaobjeto bien limpio se coloca una gota del sedimento de orina que previamente se centrifugo. Con el asa se extiende la muestra o con ayuda del tubo de ensayo.

Luego se fija la extensin por el calor, calentando suavemente a la llama del mechero hasta que se seque.

Luego se coloca la muestra sobre un soporte para proceder a la Coloracin: a) b) c) d) e) f) g) h) 2 minuto en cristal violeta (colorante inicial). Lavar con agua corriente. Agregar 3 minuto lugol o iodo (mordiente) lavar con agua corriente. Se decolora con alcohol acetona (decolorante). Se lava con agua destilada. 1 minuto en safranina (colorante de contraste). se lava con agua corriente, se seca suavemente y sin frotar.

Una vez que la preparacin est totalmente seca, poner una gota muy pequea de aceite de cedro y observar al microscopio con el objetivo de inmersin.

OBSERVACIN.
MUESTRA N 1: Se observ gran nmero de bacterias y la presencia de muchos leucocitos lo cual indica que hay un proceso infeccioso en la via urinaria.

MUESTRA N 2: Se logr observar cmo se tieron las bacterias con la coloracin Gram la cuales se pudieron observar sin ninguna dificultad.