NVEIS CONSTITUTIVOS DE COMPOSTOS FENLICOS PODEM ESTAR RELACIONADOS RESISTNCIA DA CANA-DE-ACAR CIGARRINHA-DAS-RAZES Eduardo Rossini Guimares* Miguel Angelo

lo Mutton** Maria Ins Tiraboschi Ferro*** Jorge Alberto da Silva**** Mrcia Justino Rossini Mutton***** RESUMO: A interao da cigarrinha-das-razes com a cana-de-acar ainda pouco caracterizada e existem poucas informaes sobre variedades resistentes. Os composto s fenlicos esto envolvidos em mecanismos de resistncia do tipo antibiose, mas poucos trabalhos se dedicam ao estudo do papel desses compostos na interao das plantas com insetos sugadores. O trabalho foi conduzido para determinar como a cana-deacar responde infestao de Mahanarva fimbriolata em termos de acmulo de compostos fenlicos. Um experimento foi instalado em condies controladas, em delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 3 x 2 x 4, com 3 gentipos e cana-deaca r, 2 nveis de infestao de ninfas de M. fimbriolata e 4 pocas de amostragem, com 4 repeties. Os gentipos SP80-1816 e RB72454 apresentaram maiores nveis de fenis totais quando submetidos infestao da praga, mas a durao da fase ninfal e a mortalidade das cigarrinhas foram significativamente menores nessas variedades, indicando que o aumento na concentrao de compostos fenlicos pode ter sido causado pela morte e apodrecimento das razes. No foi observada variao nos nveis de fenis totais na variedade SP83-5073 submetida infestao de M. fimbriolata. Entretanto, a mortalidade da cigarrinha-das-razes e a durao da fase de ninfas foram significativa mente maiores nesse gentipo, indicando a existncia de resistncia do tipo antibiose. Anlise s de correlao indicaram que maiores teores iniciais de compostos fenlicos resultam em mortalidade da praga e pode aumentar a durao da fase de ninfa. *Pesquisador da GAtec S/A Gesto Agroindustrial. E-mail: edrossini@gmail.com **Docente do Departamento de Produo Vegetal da Universidade Estadual de So Paulo UNESP FCAV. E-mail: miguel.mutton@fcav.unesp.br ***Docente do Departamento de Tecnologia da Universidade Estadual de So Paulo - U NESP FCAV. E-mail: mitferro@fcav.unesp.br *****Docent of Department of Soils and Crop Science, Texas A&M University, USA. E-mail: jadasilva@ag.tamu.edu *****Docente do Departamento de Tecnologia da Universidade Estadual de So Paulo UNESP FCAV. E-mail: mjrmut@fcav.unesp.br

Nveis Constitutivos de Compostos Fenlicos Podem Estar Relacionados... PALAVRAS-CHAVE: Antibiose; Interao Planta-Praga; Mahanarva fimbriolata; Saccharum spp. CONSTITUENT LEVELS OF PHENOLIC COMPOUNDS MAY BE RELATED TO STRENGTH OF SUGAR CANE TO THE LEAFHOPPER-OF-ROOT ABSTRACT: The interaction of the leafhopper-of-roots with the sugar cane is stil l poorly marked and there is little information on resistant varieties. The phenol ic compounds are involved in resistance mechanisms of the antibiosis type, but few studies are devoted to the studying role of these compounds in the interaction of plants with sucking insects. The study was conducted to determine how the sugar cane respond ed to the infestation of Mahanarva fimbriolata in terms of accumulation of phenolic compounds. An experiment was carried out under controlled conditions in a random ized design in a factorial schedule 3 x 2 x 4, with 3 genotypes and sugar cane, 2 lev els of nymphs infestation of M. fimbriolata and sampling 4 times, with 4 repetitions. T he genotypes SP80-1816 and RB72454 showed higher levels of total phenols when subje cted to an infestation of the pest, but the duration of the nymphal stage and mortali ty of sharpshooters were significantly lower in those varieties, indicating that the i ncrease in the concentration of phenolic compounds may had been caused by death and decay of the roots. It was not observed variation in levels of total phenols in the va riety SP835073 subject to an infestation of M. fimbriolata. However, the mortality of the leafh opperofroots and duration of the stage of nymphs were significantly higher in genotype, indicating the existence of resistance-type antibiosis. Analysis of correlation showed that higher initial levels of phenolic compounds resulting in mortality of the pest c an increase the duration of the nymph stage. KEYWORDS: Antibiosis; Plant-insect interactions; Mahanarva fimbriolata; Saccharum spp. INTRODUO A colheita de cana-de-acar sem a queima prvia da palha tem crescido ano aps ano no Brasil. A cana crua geralmente colhida mecanicamente, e deixa uma camada de palha sobre o solo que favorece a ocorrncia de algumas espcies de insetos-praga e plantas daninhas, ao passo que reduz drasticamente a ocorrncia de outras, especialmente as fotoblsticas positivas.

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Guimares, Mutton, Ferro, Silva e Mutton 359 A cigarrinha-das-razes Mahanarva fimbriolata (Stl, 1854) (Hemiptera: Cercopidae) um exemplo de praga que tem ganhado importncia com o sistema de colheita sem queima prvia da palhada. As fmeas adultas ovipositam sob o colcho de palha prximo base dos colmos. Quando as ninfas eclodem de seus ovos, a camada de material orgnica as protege contra a desidratao e exposio direta luz solar (GARCIA; BOTELHO; PARRA, 2006). As ninfas de M. fimbriolata alimentam-se principalmente d o contedo xilemtico de razes jovens e tenras (MENDONA; MENDONA, 2005). Como a seiva do xilema pobre em energia e aminocidos, grandes quantidades precisa m ser sugadas para atender s necessidades nutricionais desses insetos (FEWKES, 1969 ). A resistncia de plantas a insetos-praga envolve muitos fatores e compostos que podem estar presentes no hospedeiro constitutivamente ou serem produzidos aps a induo de uma resposta (NUTT; O SHEA; ALLSOPP, 2004). Os compostos fenlicos constituem um grupo de metablitos secundrios que exerce papis importantes nas plantas, como a proteo contra estresses ambientais (HAHLBROCK; SCHEEL, 1989). Em insetos-praga, esses compostos podem atuar como inibidores digestivos ou produtores de radicais livres (APPEL, 1993). O cido clorognico, um derivado do cido cinmico, e a rutina, um glicosdeoflavonide, so modelos no estudo das defesas de plantas contra herbivoria devido s suas amplas ocorrncias em vegetais superiores e conhecida toxicidade para insetos praga. A oxidao do cido clorognico produz quinonas que se ligam covalentemente s protenas e, conseqentemente, limitam sua disponibilidade como alimento (FRIEDMAN, 1997). Essa oxidao tambm pode resultar na produo de espcies reativas de oxignio (radical superxido e H2O2), as quais danificam lipdios, protenas e cidos nuclicos (APPEL, 1993; SUMMERS; FELTON, 1994). A caracterizao dos tipos e quantidades de compostos fenlicos que so produzidos em resposta infestao de insetos importante para o conhecimento da interao planta-praga, alm de ser de grande utilidade no desenvolvimento de novas estratgia s de controle e em programas de melhoramento de plantas que buscam resistncia genotpica . A resposta fisiolgica da cana-de-acar a M. fimbriolata ainda pouco caracterizada. Neste trabalho determinamos como a cana-de-acar responde infestao de ninfas de cigarrinha-das-razes em termos de produo de compostos fenlicos em tecidos foliares e radiculares. 2 MATERIAL E MTODOS O experimento foi conduzido em casa de vegetao localizada no Departamento de Tecnologia da Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias de Jaboticabal, e durante sua realizao a temperatura oscilou entre 22 e 33C e a umidade relativa do ar foi mantid a entre 50 e 60% por microasperso automatizada. As variedades SP80-1816, RB72454 e Revista em Agronegcios e Meio Ambiente, v. 1, n.3, p. 357-365, set./dez. 2008 - I SSN 1981-9951

Nveis Constitutivos de Compostos Fenlicos Podem Estar Relacionados... SP83-5073, que apresentam reaes distintas cigarrinha-das-razes, foram plantadas em bandejas de isopor de 64 clulas (5 x 10 cm) contendo o substrato comercial Plantm ax HT (Eucatex). Para o plantio foram utilizados toletes de uma gema. As plntulas foram transferidas para vasos com capacidade de 15 litros contendo solo de textura mdia, corrigido com calcrio dolomtico e fertilizado de acordo com as recomendaes do boletim 100 para cana-de-acar. O transplantio foi realizado aos 27 dias aps o plantio. Foi utilizado o delineamento experimental inteiramente casualizado, em arranjo fatorial 3 x 2 x 4, sendo 3 gentipos de cana-de-acar, 2 nvei s de infestao da praga (controle e 10 ninfas planta-1) e 4 pocas de amostragem. Quatr o repeties experimentais foram utilizadas. Os dados foram submetidos anlise de varincia e a comparao de mdias foi realizada atravs do teste de Tukey (5% de probabilidade). Foram realizadas anlises de correlao entre os nveis de compostos fenlicos e a mortalidade e durao da fase ninfal de M. fimbriolata. 2.1 CRIAO DE INSETOS E INFESTAO Os vasos foram cobertos com 65 gramas de pontas e folhas de cana-de-acar picadas e secadas ao sol por 48h (70-80% de massa seca, correspondentes a 9 t ha -1), com o objetivo de manter as condies de umidade e temperatura do solo, simulando a cobertura de palha que ocorre no campo. A cobertura foi realizada 17 dias ante s da infestao de ninfas de M. fimbriolata. As ninfas do inseto foram produzidas no Laboratrio de Tricograma do Departamento de Entomologia, Fitopatologia e Zoologia Agrcola da Esalq-USP como descrito por Garcia, Botelho e Parra (2006). A infestao foi realizada quando as ninfas atingiram os 21 dias de idade, utilizando-se pincis n.o 4, aos 94 dias aps o plantio de cana-de-acar, no nvel de 10 ninfas por planta, alm do controle no infestado. Juntamente com as ninfas transferiu-se tambm a espuma, em abundncia, para efeito de proteo dos insetos. Para evitar o efeito dos adultos, que so sugadores de folhas e poderiam se acasalar e realizar oviposies ao acaso, os vasos foram cobertos com tela de nilon imediatamente aps a infestao. Atravs de monitoramento dirio, os adultos encontrados eram registrados e instantaneamente mortos. 2.2 EXTRAO E ANLISE DE COMPOSTOS FENLICOS Amostras de razes jovens ( 10 g) foram cuidadosamente lavadas, secadas com papel toalha e mantidas congeladas em nitrognio lquido at as anlises. Subamostras (4 g) foram picadas em pedaos de aproximadamente 50 mm e agitadas em 30 mL de metanol acidificado (1% HCl) por 12h a 4C. O extrato foi filtrado em papel Revista em Agronegcios e Meio Ambiente, v. 1, n.3, p. 357-365, set./dez. 2008 - I SSN 1981-9951

Guimares, Mutton, Ferro, Silva e Mutton 361 Whatman # 42 e diludo 15 x. A anlise de compostos fenlicos totais foi realizada conforme descrito por Silva e colaboradores (2005). 2.3 DURAO DA FASE NINFAL E TAXA DE MORTALIDADE A presena de adultos na tela de nilon foi monitorada diariamente. Sempre que encontrados, a quantidade e o nmero de dias aps a infestao eram registrados. A durao da fase ninfal foi determinada atravs de mdia ponderada pelo nmero de adultos, conforme a frmula: m que: Yna = Nmero de adultos encontrados no dia Zn n+n = Nmero de dias aps a infestao (DAI) + 21 (idade das ninfas no momento da infestao) Para a determinao da taxa de mortalidade (TM), a cobertura de palha foi removida e o nmero de ninfas contado nas amostragens de razes. O nmero de adultos encontrados no monitoramento dirio foi adicionado ao nmero de ninfas, e a taxa de mortalidade (%) foi obtida atravs da frmula: em que: TM (%) = Taxa de mortalidade NN = Nmero de ninfas NA = Nmero de adultos 3 RESULTADOS E DISCUSSO As variedades SP80-1816 e RB72454 acumularam compostos fenlicos em resposta infestao de cigarrinhas (Figura 1B). A taxa de mortalidade e a durao da fase ninfal foram significativamente menores nesses gentipos, confirmando sua susceptibilidade cigarrinha (Figura 2). Os nveis constitutivos desses compostos foram maiores na variedade SP835073, porm no houve efeito da infestao da praga no teor de fenis nessa variedade (Figuras 1A, 1B). Revista em Agronegcios e Meio Ambiente, v. 1, n.3, p. 357-365, set./dez. 2008 - I SSN 1981-9951

Nveis Constitutivos de Compostos Fenlicos Podem Estar Relacionados... Silva e colaboradores (2005) mostraram que nveis mais elevados de fenis parecem estar envolvidos com alguma tolerncia da variedade SP86-42 a M. fimbriolata, porm estes autores no apresentam dados de biologia do inseto para sustentar a hiptese. Na presente pesquisa, a taxa de mortalidade e a durao da fase ninfal foram significativamente mais altas na variedade SP83-5073, indicando a possibilidade do envolvimento de um mecanismo de resistncia do tipo antibiose (Figura 2). Estudos anteriores demonstraram que h diferenas nos teores e nos tipos de compostos fenlicos em gentipos de cana-de-acar resistentes e suscetveis a um coleptero-praga de razes (NUTT; O SHEA; ALLSOPP, 2004). No presente estudo, as variedades SP80-1816 e RB72454 mostraram acumular fenis nas razes quando atacadas por ninfas de M. fimbriolata. Por serem suscetveis, possvel que o prprio dano causado pela praga tenha sido responsvel pela produo de fenis das razes. Durante a morte celular, o contedo do vacolo, rico em compostos fenlicos e proteinases, liberado. medida que as proteinases desdobram outras protenas, so liberados aminocidos aromticos (fenilalanina, tirosina e triptofano), os quais tm peso sobre o teor de fenis (BUCHANAN; GRUISSEM; JONES, 2000). Figura 1. Mdias dos teores de compostos fenlicos totais nos diferentes tratamentos . Letras maisculas comparam mdias dentro de tratamentos e letras minsculas comparam mdias entre tratamentos. Existem tambm relatos de que plantas que acumulam maiores teores de fenol favorecem o desenvolvimento de pragas (GHUMARE; MUKHERJEE, 2003; Revista em Agronegcios e Meio Ambiente, v. 1, n.3, p. 357-365, set./dez. 2008 - I SSN 1981-9951

Guimares, Mutton, Ferro, Silva e Mutton 363 BENINGER et al., 2004). No presente estudo foram encontrados mais sintomas de estresse nas variedades suscetveis, que tambm acumularam maiores quantidades de compostos fenlicos. As larvas de um lepidptero desenvolveram-se melhor em ramos intactos de plantas previamente atacadas de Betula pubescens, indicando uma susc etibilidade sistmica induzida (LEMPA et al., 2004). Figura 2. Correlaes entre os teores de compostos fenlicos totais, taxa de mortalida de e durao da fase ninfal da cigarrinha-das-razes. Kudo (2003) relatou menor susceptibilidade herbivoria em Salix miyabeana com teores constitutivamente elevados de compostos fenlicos. Correlaes significativas foram encontradas entre a rigidez de folhas e a concentrao de fenis, explicando em parte a maior tolerncia de gentipos com elevadas concentraes desses compostos. Essa correlao no foi estudada em razes de cana-de-acar, porm possvel que a morfologia das razes tenha influncia na reao das variedades dessa planta cigarrinhad asrazes, independentemente de sua relao com o teor de compostos fenlicos. A cigarrinha Philaenus spumarius, assim como a M. fimbriolata, alimenta-se princ ipalmente da seiva xilemtica. A saliva secretada por essa espcie forma uma estrutura envolve nte entre o estilete e o tecido vegetal, a qual contm compostos derivados de tanino e outros fenilpropanides (CREWS et al., 1998). possvel que fenis oriundos do tanino tenham algum peso nos nveis superiores desses compostos observados nas variedades SP80-1816 e RB72454 sob infestao de cigarrinhas, o que refora a hiptese de que o acmulo de fenis nesses gentipos susceptveis esteja mais relacionado alimentao das ninfas do que a um mecanismo de defesa base de fenis. Revista em Agronegcios e Meio Ambiente, v. 1, n.3, p. 357-365, set./dez. 2008 - I SSN 1981-9951

Nveis Constitutivos de Compostos Fenlicos Podem Estar Relacionados... 4 CONCLUSES O acmulo de compostos fenlicos nas variedades SP80-1816 e RB72454 quando infestadas com M. fimbriolata pode estar relacionado morte e decomposio de tecidos das razes atacadas pelos insetos. A taxa de mortalidade relativamente baixa e a d urao da fase ninfal nesses gentipos confirmam sua susceptibilidade cigarrinha-das-razes . Os nveis de compostos fenlicos constitutivamente altos na variedade SP835073 podem estar envolvidos num mecanismo de resistncia do tipo antibiose, resultando em maior mortalidade e durao da fase ninfal. Novas investigaes podem confirmar a resistncia da variedade SP83-5073 s cigarrinhas e determinar o papel dos compostos fenlicos na interao dessa praga com a cana-de-acar. O teor de compostos fenlicos totais no um parmetro preciso para identificar a resistncia genotpica de cana-de-acar cigarrinha-das-razes. AGRADECIMENTOS Fundao de Amparo a Pesquisa de So Paulo (processo 2005/03333-4) e Syngenta Proteo de Cultivos Ltda., pelo apoio financeiro para a conduo dos experimentos. Capes, pela bolsa de doutoramento e Sandwich (processo 272905-9). REFERNCIAS APPEL, H. M. Phenolics in ecological interactions: the importance of oxidation. Journal of Chemical Ecology, v. 19, p. 1521-1552, 1993. BENINGER, C. W. et al. A flavanone and two phenolic acids from Chrysanthemum morifolium with phytotoxic and insect growth regulating activity. Journal of Chemical Ecology, v. 30, p. 589-606, 2004. BUCHANAN, B.; GRUISSEM, W.; JONES, R. Biochemistry and molecular biology of plants. Rockville: American Society of Plant Physiologists, 2000. CREWS, L. J. et al. Xylem feeding by spittlebug nymphs: some observations by optical and cryo-scanning electron microscopy. American Journal of Botany, v. 85, n. 4, p. 449-460, 1998. FEWKES, D. W. The biology of sugar cane froghoppers. In: WILLIAMS, J. R. et al. (Ed.) Pests of sugar cane. Amsterdam: Elsevier Publishing, 1969. p. 281-307. Revista em Agronegcios e Meio Ambiente, v. 1, n.3, p. 357-365, set./dez. 2008 - I SSN 1981-9951

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