Manejo y cuidado del microscopio.

El microscopio, de micro- (pequeo) y scopio (ver), es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn de microscopio y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin. Resea histrica del microscopio: El microscopio fue inventado hacia los aos 1610, por Galileo, segn los italianos, o por Zacharias Jansen, en opinin de los holandeses. La palabra microscopio fue utilizada por primera vez por los componentes de la Accademia dei Lincei, una sociedad cientfica a la que perteneca Galileo y que publicaron un trabajo sobre la observacin microscpica del aspecto de una abeja. Sin embargo, las primeras publicaciones importantes en el campo de la microscopa aparecen en 1660 y 1665, cuando Malpighi prueba la teora de Harvey sobre la circulacin sangunea al observar al microscopio los capilares sanguneos y Hooke publica su obra Micrographia. En 1665 Robert Hooke observ con un microscopio un delgado corte de corcho y not que el material era poroso. Esos poros, en su conjunto, formaban cavidades poco profundas a modo de cajas a las que llam clulas. Hooke haba observado clulas muertas. Unos aos ms tarde, Marcelo Malpighi, anatomista y bilogo italiano, observ clulas vivas. Fue el primero en estudiar tejidos vivos al microscopio. A mediados del siglo XVII un comerciante holands, Anton Van Leeuwenhoek, utilizando microscopios simples de fabricacin propia describi por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glbulos rojos. El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna preparacin cientfica, puede considerarse el fundador de la bacteriologa. Tallaba l mismo sus lupas sobre pequeas esferas de cristal, cuyos dimetros no alcanzaban el milmetro (su campo de visin era muy limitado, de dcimas de milmetro). Con estas pequeas distancias focales alcanzaba los 275 aumentos. Observ los glbulos de la sangre, bacterias y protozoos; examin por primera vez los glbulos rojos y descubri que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no revel sus mtodos secretos y a su muerte, en 1723, 26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal Society de Londres. Durante el siglo XVIII continu el progreso y se lograron objetivos acromticos por asociacin de vidrios flint y crown obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados por Dollond. De esta poca son los estudios efectuados por Newton y Euler. En el siglo XIX, al descubrirse que la dispersin y la refraccin se podan modificar con combinaciones adecuadas de dos o ms medios pticos, se lanzan al mercado objetivos acromticos excelentes. Durante el siglo XVIII el microscopio sufri diversos adelantos mecnicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso aunque no se desarrollaron mejoras pticas. Las mejoras ms importantes de la ptica surgieron en 1877 cuando Abbe publica su teora del microscopio y, por encargo de Carl Zeiss, mejora la microscopa de inmersin sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de 2000. A principios de los aos 1930 se haba alcanzado el lmite terico para los microscopios pticos, no consiguiendo estos aumentos superiores a 500X o 1000X. Sin embargo, exista un deseo cientfico de observar los detalles de estructuras celulares (ncleo, mitocondria, etc.). El microscopio electrnico de transmisin (T.E.M.) fue el primer tipo de microscopio electrnico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000 X. Fue desarrollada por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrnico de barrido (SEM). El microscopio es sin duda el elemento ms importante en cualquier laboratorio para las ciencias biolgicas. Permite ver clulas, bacterias, virus, microorganismos en general, que a simple vista es imposible. Con el microscopio se han descubierto enfermedades que serian imposible de detectar y que a la vez han podido ser curadas porque se sabe cmo actan las bacterias o virus.

La importancia del microscopio en el desarrollo del profesional qumico tambin es muy importante, gracias al microscopio se nos ha permitido observar el "corazn" mismo de la materia: los tomos. El microscopio compuesto u ptico utiliza lentes para ampliar las imgenes de los objetos observados. El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido a la longitud de onda de la luz visible que impone limitaciones. El microscopio ptico puede ser monocular, y consta de un solo tubo. La observacin en estos casos se hace con un solo ojo. Es binocular cuando posee dos tubos. La observacin se hace con los dos ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor percepcin de la imagen, ms cmoda la observacin y se perciben con mayor nitidez los detalles. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes o cortados en lminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas:

El sistema mecnico est constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes que permiten el movimiento para el enfoque. Comprende el pie, el tubo, el revlver, el asa, la platina, el carro, el tornillo macromtrico y el tornillo micromtrico. Estos elementos sostienen la parte ptica y de iluminacin, adems permite los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto. El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular El tubo. Tiene forma cilndrica y est ennegrecido internamente para evitar las molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los oculares. El revlver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo, la cual se nota por el ruido de un pin que lo fija. La columna, llamada tambin asa o brazo, es una pieza colocada en la parte posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porcin superior y por el extremo inferior se adapta al pie. La platina. Es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u objeto que se va a observar. Presenta un orificio en el eje ptico del tubo que permite el paso de los rayos luminosos a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares. Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la preparacin con movimiento ortogonal de adelante hacia atrs y de derecha a izquierda. El tornillo macromtrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin. El tornillo micromtrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y ntido de la preparacin. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm. que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.
El sistema ptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas. Est formado por los oculares y los objetivos. Los oculares: estn constituidos generalmente por dos lentes, dispuestas sobre un tubo corto. Los oculares generalmente ms utilizados son los de: 8X, 1OX, 12.5X, 15X. La X se utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos. Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revlver y producen aumento de las imgenes de los objetos y organismos y, por tanto, se hallan cerca de la preparacin que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos: o Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices que indican el aumento que producen, la abertura numrica y otros datos. El nmero de objetivos vara con el

tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos ms frecuentemente utilizados son: 6X, 1OX, 20X, 45X y 60X. o El objetivo de inmersin est compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a travs de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparacin, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 1 OOX y se distingue por uno o dos crculos o anillos de color negro que rodea su extremo inferior. El sistema de iluminacin comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin a travs del microscopio. Comprende los siguientes elementos: El espejo. Tiene dos caras: una cncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara cncava se emplea de preferencia con iluminacin artificial, y la plana, para iluminacin natural (luz solar). Modernamente se prescinde del espejo en la fabricacin de microscopios, ya que stos traen incorporada una lmpara colocada en el eje del microscopio. Condensador. El condensador est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparacin. El condensador se halla debajo de la platina. El condensador puede deslizarse sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo que determina su movimiento ascendente o descendente. Diafragma. Generalmente, el condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura y controla la calidad de luz que debe pasar a travs del condensador. Todos los microscopios cuentan con dos funciones principales para su funcionamiento adecuado, el poder de resolucin y su amplificacin, este ltimo es la porcin del tamao de la imagen observada con el microscopio sobre el tamao real del objeto. Algunos microscopios amplifican un objeto no ms de 1000 veces. El poder de resolucin es una medida de la capacidad para distinguir un objeto de otro y se define como la distancia mnima entre 2 objetos para que sean percibidos como objetos separados. Los mejores microscopios pticos tienen un poder de resolucin de 120nm o 0.12 m y el ojo humano tiene un poder de resolucin de aproximadamente 0.1 mm o 100 m. El poder de resolucin depende de la calidad de los lentes y la longitud de onda de la luz que ilumina, cuanto menor sea la longitud de onda, mayor ser la resolucin. La longitud de onda que se emplea en un microscopio ptico es de 400-700 nm. El objetivo es el grupo de lentes ms importante del microscopio ya que forma la primera imagen del objeto y el ocular no hace ms que ampliar esta imagen. Del objetivo depende el poder de resolucin, cuando el poder de resolucin no es lo suficientemente buena, se pueden utilizar los objetivos de inmersin, estos son soluciones que tienen un ndice de refraccin mayor a la del aire, por ejemplo el aceite de cedro (n=1.515). Estas soluciones se colocan en medio del objetivo y el cubreobjetos, es decir, encima del cubreobjetos que contiene la muestra en estudio. Normas para el cuidado y manejo del microscopio. Cuidados. 1. Para transportar el microscopio se recomienda sujetarlo por el brazo y el pie del microscopio. 2. Se debe desplazar de manera vertical. 3. Mueva con mucho cuidado cualquier componente del microscopio. 4. Si hay descomposturas suspenda su uso y llvelo con un tcnico especializado. 5. Evite el contacto con el polvo, la grasa, el aceite, la humedad y sobretodo evite los golpes. 6. Utilice papel de ceda fina especial o gamuzas para la limpieza de sus partes ms expuestas al intemperie o al usuario. 7. Para eliminar la grasa que queda en los lentes del microscopio, se puede utilizar gamuza impregnada dbilmente con xilol, empleando despus una gamuza seca para eliminar el disolvente que quede impregnado en los lentes. 8. Despus de manejar el microscopio, gurdelo en una funda de plstico, dentro de una caja y en un lugar aislado de polvo. Manejo.

1. El brazo debe estar hacia el observador. 2. El observador debe situarse a espaldas de cualquier foco potente de luz, ya que con esto se reduce la fatiga visual. 3. La parte inferior del portaobjetos, al colocarlo sobre la platina, debe estar totalmente seca. 4. Seleccionar al inicio de la observacin el objetivo de menor aumento, y al terminar, situar el mismo objetivo en el revlver. 5. Escuchar un ruido de pin, ya que este nos avisa cuando el objetivo es puesto de manera adecuada en su lugar (algunos microscopios no tienen este ruido). 6. Para poder efectuar el primer enfoque, el objetivo tiene que estar cerca de la muestra sin tocarla. El desplazamiento del tubo ptico se efectuar de abajo hacia arriba. Bibliografa: Curtis, Helena. Barnes N. Sue, Biologa, editorial mdica panamericana, 6 ed., Mxico 2001 pp.: 118 y 119. Solomon Eldra pearl, Ville Claude, Biologa de Ville, Mc Graw Hill interamericana, 4 ed., Mxico 1998, pp. 82. Cuello, Josep. Hernndez, Miguel, Prcticas de biologa Editorial Fontalba, Barcelona Espaa 1978, pp. 21-22 y 28.

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