PRUEBA DE COOMBS Directa e Indirecta Fundamento: Ambas pruebas de Coombs emplean un antisuero llamado reactivo de Coombs, que contiene

anticuerpos de animales inmunizados dirigidos contra IgG, IgM, y/o complemento humano. Estos anticuerpos se unen a los antgenos que estn en la superficie de los glbulos rojos (Directo), y/o busca anticuerpos circulantes libres (Indirecto), causando aglutinacin de las clulas. Esta aglutinacin observada corresponde a un resultado positivo, y la ausencia de aglutinacin es un resultado negativo. Coombs Directa: Objetivo La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar anticuerpos que ya se han fijado a la superficie de los glbulos rojos. Material y Reactivos Tubos de hemlisis. Goteros. Gradilla. Centrfuga. Suero de Coombs (Verde Directa, Amarilla Indirecta). Solucin Fisiolgica.

Antes de empezar el Procedimiento: El reactivo que esta refrigerado deber atemperarse a temperatura ambiente, , a temperatura de 25 c. La muestra para el procedimiento ser sangre entera con anticoagulante (EDTA). Procedimiento: Tomar 4 gotas de la muestra y hacer 3 lavados con solucin salina. Despus de los tres lavados, hacer una suspensin al 5% (Una gota del lavado y 19 de solucin salina). Luego tomar una gota de la suspensin al 5% y llevarla a otro tubo. A este ltimo tubo aadirle 2 gotas del suero de Coombs (Verde). Centrifugar 1 minuto a 2500 3000 rpm. Despus de centrifugar observar el botn en el fondo del tubo y con ligeros movimientos desprender el botn y homogeneizar en busca de aglutinacin. De haber Aglutinacin la Prueba es Positiva.

 En caso de no haber Aglutinacin dejar reposar 5 minutos a temperatura ambiente. Centrifugar nuevamente a 2500 3000 rpm. Despus de centrifugar observar el botn en el fondo del tubo y con ligeros movimientos desprender el botn y homogeneizar en busca de aglutinacin. De haber Aglutinacin la Prueba es Positiva. Si es homognea es Negativo. Coombs Indirecta: Objetivo Busca anticuerpos circulantes libres contra una serie de glbulos rojos estandarizados, (En nuestro caso frente a una muestra de Grupo O y Rh Positivo y un Hto.: de 40 a 50). Material y Reactivos Tubos de hemlisis. Goteros. Gradilla. Centrfuga. Suero de Coombs (Verde Directa, Amarilla Indirecta). Solucin Fisiolgica.

Antes de empezar el Procedimiento: El reactivo que esta refrigerado deber atemperarse a temperatura ambiente, , a temperatura de 25 c. La muestra para el procedimiento ser suero del paciente. Procedimiento: Tomar 4 gotas de una muestra que sea Grupo O y Rh Positivo con un Hematocrito entre 40 y 50 y hacer 3 lavados con solucin salina. Despus de los tres lavados, hacer una suspensin al 5% (Una gota del lavado y 19 de solucin salina). Luego en un tubo tomar una gota de la suspensin al 5% con 2 gotas de suero a estudiar y una gota de Suero de Coombs (Amarillo). Llevar al Bao Mara durante 45 60 minutos. Despus del Bao Mara verificar aglutinacin o hemlisis. De no haber aglutinacin se procede a hacer tres lavados con solucin salina, cada lavado de 1 minuto a 2500 3000 rpm. Despus del ltimo lavado decantar lo mejor posible y aadirle 2 gotas del suero de Coombs. Centrifugar 1 minuto a 2500 3000 rpm.

 Despus de centrifugar observar el botn en el fondo del tubo y con ligeros movimientos desprender el botn y homogeneizar en busca de aglutinacin. De haber Aglutinacin la Prueba es Positiva. En caso de no haber Aglutinacin dejar reposar 5 minutos a temperatura ambiente. Centrifugar nuevamente a 2500 3000 rpm. Despus de centrifugar observar el botn en el fondo del tubo y con ligeros movimientos desprender el botn y homogeneizar en busca de aglutinacin. De haber Aglutinacin la Prueba es Positiva. Si es homognea es Negativo. Interferencias con la Prueba de Coombs Prueba de Coombs (+) Ampicilina Anfotericina B Bencilpenicilina Clorpromacina Clorpropramida Etosuximida Fenacetina Fenilbutazona Fenitona Hidralazina Indometacina Isoniazida Levodopa Metildopa Quinidina Quinina Rifampicina Tolbutamina