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MODE D'EMPLOI MILIEUX EN BOITES DE PETRI PRETS A LEMPLOI

PA-212097.06 Rv. : Sep 2011

BD Brilliant Green Agar


APPLICATION
La BD Brilliant Green Agar (glose au vert brillant) est un milieu extrmement slectif servant lisolation des salmonelles autres que S. Typhi dans les fces et diverses autres matires.

PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE


Mthode microbiologique. Lutilisation de la Brilliant Green Agar pour isoler les Salmonella a dans un premier temps t dcrite par Kristensen et al. 1 Par la suite, Kauffmann a modifi ce milieu,2 qui sest avr capable de faciliter lensemencement dinoculums concentrs dans les environnements cliniques et non cliniques. Ce milieu est cit dans la Pharmacope amricaine (USP) au chapitre du dnombrement des microorganismes, dans la Pharmacope europenne, ainsi que dans plusieurs manuels de microbiologie mdicale. En outre, il est employ lors du contrle sanitaire des produits laitiers. 3-8 Dans la BD Brilliant Green Agar, les lments nutritifs sont fournis par lextrait de levure et par deux peptones. Le lactose, le saccharose et le rouge de phnol sont la base du systme de diffrenciation, qui exclue les fermentants du lactose et/ou du saccharose (p. ex. E. coli), tandis que les salmonelles ne produisent pas dacide partir de ces sucres. Le vert brillant est lagent slectif qui inhibe les flores prsentes.

REACTIFS
Formule* par litre deau purifie BD Brilliant Green Agar Extrait de levure 3,0 g Peptone de protose Bacto 10,0 Lactose 10,0 Saccharose 10,0 Chlorure de sodium 5,0 Rouge de phnol 0,08 Glose 20,0 Vert brillant 12,5 mg pH 6,9 +/- 0,2 *Ajuste et/ou complmente en fonction des critres de performance imposs.

PRECAUTIONS
. A usage professionnel uniquement. Ne pas utiliser les botes de Ptri qui montrent des signes de contamination microbienne, de dcoloration, de desschement, de fissuration ou tout autre type de dtrioration. Consulter le document MODE DEMPLOI GENERAL pour connatre les procdures de manipulation aseptique, les risques biologiques, ainsi que les mthodes dlimination des produits utiliss.

STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION


Ds rception, conserver les botes de Ptri dans lobscurit entre 2 et 8 C, dans leur emballage dorigine, jusquau moment de leur utilisation. Ne pas congeler ni surchauffer. Les botes peuvent tre ensemences jusqu leur date de premption (voir tiquette sur lemballage) et incubes pendant le dlai dincubation recommand. Des botes provenant dune pile ouverte de 10 botes sont utilisables pour une semaine lorsquelles sont conserves entre +2 et +8 C dans un endroit propre.
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CONTROLE DE QUALITE PAR LUTILISATEUR


Inoculer les chantillons reprsentatifs avec les souches suivantes (pour plus dinformations, voir le document MODE DEMPLOI GENERAL ). Incuber les botes de Ptri en arobie entre 35 et 37 C pendant 18 48 heures.

Souches Escherichia coli ATCC 25922 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Proteus mirabilis ATCC 12453 Salmonella Abony DSM 4224 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Non inocul

Croissance
Croissance nulle moyenne, colonies de couleur jaune jaune-vert, auroles jaunes Croissance nulle lgre, colonies de couleur tirant sur le jaune avec ou sans auroles jaunes Inhibition partielle 10 100 colonies de couleur tirant sur le blanc, auroles rouges Croissance bonne importante, colonies de couleur tirant sur le blanc, auroles rouges Couleur tirant sur le marron vert olive

METHODE
Matriel fourni BD Brilliant Green Agar (botes de Ptri Stacker de 90 mm). Produit soumis contrle microbiologique. Matriel non fourni Les milieux de culture auxiliaires, ractifs et matriel de laboratoire requis. Types dchantillons Echantillons fcaux de patients susceptibles dtre infects par des espces de Salmonella (voir galement la section CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE ), matires animales ou alimentaires. Mode opratoire du test Strier directement lchantillon ou ensemencer le milieu avec une petite quantit de croissance bactrienne issue dun milieu denrichissement liquide tel quun bouillon de culture au ttrathionate. Il est recommand dajouter un ou deux milieux moins slectifs, en particulier lorsque la population recherche est faiblement reprsente dans la matire. Diluer par striation et incuber les botes de Ptri en arobie entre 35 C et 37 C pendant 42 48 heures. Observer les rsultats sur les botes de Ptri aprs 18 24 heures, puis aprs 42 48 heures. Rsultats Gnralement, les organismes isols sur la BD Brilliant Green Agar prsentent la morphologie suivante : Organismes Rsultats Salmonella (autres que S. Typhi Colonies de couleur blanche rouge cernes de zones et S. Paratyphi) rouges S. Typhi et S. Paratyphi Croissance nulle ou traces de croissance Espces de Shigella Croissance nulle ou traces de croissance Escherichia coli, Klebsiella et Colonies de couleur jaune tirant sur le vert, cernes de zon jaune-vert Enterobacter Colonies de couleur blanche ou rouge cernes de zones Proteus rouges Croissance nulle ou traces de croissance Pseudomonas Bactries Gram-positives Croissance nulle ou traces de croissance

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CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE


La BD Brilliant Green Agar est un milieu extrmement slectif servant lisolation des Salmonella, y compris au sein de matires fortement contamines, notamment les fces.5-9 Il convient densemencer avec lchantillon ou la matire des milieux moins slectifs destins lisolement des Salmonella, ainsi quune bote de Ptri MacConkey II Agar. Bien que certaines souches puissent sy dvelopper, la BD Brilliant Green Agar nest pas prvue pour lisolement des Salmonella de type Typhi et S. Paratyphi. Il est certes possible de procder divers tests diagnostiques directement dans ce milieu, mais, pour obtenir une identification complte, il convient demployer des tests biochimiques et srologiques faisant appel des cultures pures.

REFERENCES
1. Kristensen, M., V. Lester, and A Jurgens. 1925. On the use of trypsinized casein, brom thymol blue, brom cresol purple, phenol red and brilliant green for bacteriological nutrient media. Brit. J. Exp. Pathol. 6: 291. 2. Kauffmann, F. 1935. Weitere Erfahrungen mit den kombinierten Anreicherungsverfahren fr Salmonellabacillen. Z. Hyg. Infektionskr. 117: 26. 3. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc. 1999. The U.S. Pharmacopeia 24/The national formulary 19-1999. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. 4. Council of Europe, 2002. European Pharmacopoeia, 4th edition, and Supplement 4.2. 2002. European Pharmacopoeia Secretariat. Strasbourg/France. 5. Flowers, R.S., W. Andrews, C.W. Donelly, and E. Koenig. 1993. Pathogens in milk and milk products, p. 103-212. In: R.T. Marshall (ed.). Standard methods for the examination of dairy 6. products, 16th ed. American Public Health Association, Washington DC, USA. 7. Osborn, W.W., and J.L. Stokes. 1955. The determination of Salmonellae in foods. Food and Drug Laboratories, Ottawa, Canada. 8. MacFaddin, J. 1985. Media for the isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria. Williams and Wilkins, Baltimore, USA. 9. Bopp, C. A., F. W. Brenner, P. I. Fields, J. G. Wells, and N. A. Stockbrine. 2003. Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

CONDITIONNEMENT
BD Brilliant Green Agar No rf. 212097 Milieux en botes de Ptri prts lemploi, 20 units

INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES Pour plus dinformations, contacter le reprsentant local de BD.

Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com http://www.bd.com http://www.bd.com/europe/regulatory/
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