Qu causa el cambio de color del agua de azul a amarillo? El pH Qu causa el cambio de color del agua de amarillo a azul?

Cuando hay un exceso de CO2 el pH es muy alto y cuando el O2 es adecuado el pH es normal. Por qu se coloca el recipiente a la luz solar? Por que la luz aporta la energa que se necesita para llevar a cabo la fotosntesis. Qu funcin est realizando la elodea? La elodea la utilizamos como el fotosintetizador ya que esta es una fanergama acutica y as podremos apreciar bien los procesos de la fotosntesis y sus funciones Qu relacin existe entre la elodea y el cambio de coloracin de agua? La elodea es la que desecha el oxigeno al hacer la fotosntesis y con este oxigeno el pH s nivela y cambia de color el agua con indicador En qu proceso participa el bixido de carbono? En la fotosntesis se necesita el CO2 CO2 + H2O + L.S. ----------) C6H12O6 + O2 Cules son las substancias que resultan de la fotosntesis? CO2 + H2O + L.S. ----------) C6H12O6 + O2 GLUCOSA, OXIGENO (DESECHO)

HIPOTESIS: Si se restringe la luz, la planta no podr realizar la fotosntesis por lo cual vernos que no se dar un desprendimiento de oxigeno (O2). INTRODUCCION: La mas importante funcin realizada por los cloroplastos es la fotosntesis, es llevada a cabo en la membrana interna del tilacoideproceso en la que la materia inorgnico es transformada en materia orgnica empleado la energa bioqumica ATP (energa lumnica a energa qumica) obtenida por medio de energa solar, a travs de los pigmentos fotosintticos y la cadena transportadora de electrones de los tilacoides. Otras vas metablicas de vital importancia se realizan en el estoma, son la biosntesis de protenas y replicacin de ADN.

Proceso mediante el cual las plantas verdes utilizan la energa proveniente de la luz y la convierten en energa qumica para realizar sus dems funciones. FASE LUMINOSA: Reaccin de la fotosntesis que requiere luz para dar inicio al proceso se lleva a cabo en la s membranas de los grana. La energa que absorbe la clorofila se transmite a los electrones externos de la molcula, los cuales escapan de la misma y producen la cadena de transporte de electrones en el interior del cloroplasto FASE OBSCURA (reductiva a oxidativa): Despus del proceso de la fase luminosa ocurren varias reacciones mas que no necesitan luz a estos se le llama fase oscura y se realiza en el estroma del cloroplasto. Tiene ligar en la matriz o estroma de los cloroplastos, tanto la energa en forma de ATP como NADPH. La fuente de carbono utilizada es el CO2. La fotosntesis tardo 20 siglos en descubrirse. En IV a.C. Aristteles deca que la planta tenia boquitas en las races y asi se poda alimentar de la tierra. Hasta el siglo XIX se descubri que el CO2, H2O y la luz solar era parte indispensable del proceso de fotosntesis.

MATERIAL: 1 Frasco de vidrio. Agua. 1 Gotero. Indicador azul de bromotimol. Elodea (planta acutica). Reloj. Un popote limpio.

METODOLOGIA:

 Pon agua a hasta la mitad del recipiente de vidrio, agrega varia gotas de azul de bromotimol hasta que el agua est azul. El azul de bromotimol tie el agua de azul cuando en ella se encuentra disuelto el oxgeno.

Empleando el popote burbujea el resultado de tu respiracin. Como resultado de tu respiracin se produce bixido de carbono. Contina burbujeando hasta que el agua cambie al color amarillo. El azul de bromotimol cambia de color cuando en el agua hay bixido de carbono.

Ten la precaucin de no succionar a travs del popote, si por accidente lo llegars a hacer, escupe el agua y enjugatela varias veces con agua limpia. Coloca la rama de elodea en el recipiente con el agua y el azul de bromotimol. Deja el recipiente expuesto a la luz solar directa por 30 min. Despus de que haya transcurrido la hora observa el color del agua del recipiente. Anota tus resultados en la siguiente tabla.

RESULTADOS:

Color Agua + azul de bromotimol.

Azul Agua + azul de bromotimol + bixido de carbono.

Anaranjado Agua + azul de bromotimol + bixido de carbono + elodea + 30 min.+ luz solar.

azul

Al comparar los tubos, el que estaba cubierto no tuvo reacio ya que estaba oculto de la luz y como ya mencionamos es indispensable la luz para otorgarle energa a la planta y as realizar la fotosntesis La muestra que no contena la planta tampoco tubo reaccin ya esta es la que realiza la fotosntesis entonces es esencial para este proceso. La muestra que contena la planta y estaba expuesta al la luz recupero el color azul del indicador que nos muestra que el pH del agua esta normal as que la reaccin de fotosntesis se llevo a cabo. REPLANTAMIENTO DE LA HIPOTESIS: Si se restringe la luz, la planta no podr realizar la fotosntesis por lo cual vernos que no se dar un desprendimiento de oxigeno (O2). DISCUSION: En esta prctica no tuvimos inconveniente y se pudo llevar a cabo correctamente la prctica. CONCLUSIONES: En esta prctica pude apreciar que para poder llevar a cabo la fotosntesis es indispensable la luz ya que es una reaccin enderdnica, es decir, requiere energa y de la luz la obtiene. Pudimos entender que la fotosntesis es un proceso que lleva a cabo los organismos fotosintetizadores para poder producir su alimento el cual es la glucosa. Lo mas importante que nos enseo este tema es que los productores son esenciales para los ecosistemas: alimento, flora, respiracin etc. Para que los productores existan se necesita la fotosntesis para que puedan adquirir la su alimento y la energa necesaria para poder tener un desarrollo adecuado.

DISCUSIONES pues ya que mediante la reaccin o prueba de benedict se logrocomprobar la presencia de glucosa en la hojas de las plantasgerminadas en la luz gracias a la clorofila, lo que cambio en las hojasde las plantas germinadas en la oscuridad ya que en esta no diopositiva la prueba de benedict, esto es porque uno de los muchosfactores para el desarrollo de la clorofila es la luz, adems de

losnutrientes que toma del suelo y pues como una planta germino en laoscuridad esto da lugar a decir que no hubo desarrollo de la clorofila.

Por qu se utiliza el reactivo de benedict?Para demostrar la presencia de glucosa como producto del procesofotosinttico2.- explicar los resultados obtenidos con el reactivo de benedict enlas infusiones de las plantas que se desarrollaron en la oscuridadEstas NO dieron positivo, pues ya que para que halla presencia deglucosa como producto del proceso fotosinttico y que el reactivo debenedict es el encargado de demostrar debe haber desarrollo declorofila que es la encargada de realizar la fotosntesis y pues nohabiendo luz luminosa anteriormente tomada por la planta la reaccines negativa.

Se llevo acabo una infusin con hojas de la planta crecida en laluz, despus se verti 3 ml de esta infusin en un tubo deensaye y se le agrego 1 ml del reactivo de benedict, el reactivo Benedict identificaazcares reductores(aquellos que tienen suOH anomrico libre) como laglucosaque es la que queremosver en esta infusin, la reaccin da positiva cuando toma unacoloracin rojo ladrillo, eso nos da lugar a decir que en lainfusin que preparamos con las hojas crecidas en la luz habaazucares reductores porque al agregarle el reactivo de Benedicttomo una coloracin rojo ladrillo en la parte inferior

El lugol es unasolucindeI 2 , estereactivoreacciona con algunospolisacridoscomo losalmidonesy frente a este, vira al color negro-morado, que es el que queremos identificar con lautilizacin del alcohol pues ya que las hojas contiene almidn.La coloracin que tomo fue la indicada para que la reaccin seapositiva, esto quiere decir que si haba presencia de almidn enesta hoja de la planta germinada en la luz.

FUNDAMENTO: - La hidrlisis cida por accin del HCl a 100C produce una hidrlisis totaldel almidn y forma glucosa, maltosa, e isomaltosa. - La hidrlisis enzimtica por accin de la enzima alfa amilasa

produce unahidrlisis parcial produciendo maltosa, glucosa y dextrina lmite que es unacadena ramificada y para poder romperla se necesita de -1-6 glucosidasa

E n l a h i r o m p i m i q u e m a n t a l m i d n m a l t o s a ,

d r l i s i s c i d a s e p r o d u c e u n e n t o t o t a l d e l o s e n l a c e s i e n e n u n i d o a l o s m o n m e r o s d e l y s e f o r m a g l u c o s a , i s o m a l t o s a

Hidrolisis enzimtica de un polisacrido vegetal (almidon)

EQUIPO: No. 8

INTRODUCCIN: La fuente principal de la energa metablica es la glucosa, que es almacenada intracelularmente en forma de polmeros. El homopolisacrido ms comn de la glucosa en las plantas y hongos es el almidn. En las clulas vegetales el almidn se encuentra en forma de granos y es una combinacin de amilosa y amilopectina. La amilosa que constituye del 20 al 30 % de la mayor parte de los almidones, es un polmero de estructura helicoidal no ramificada de glucosa y conectadas por enlaces glucosdicos (1- 4). La amilopectina que se encuentra en un 80- 70 % al igual que la amilosa est formada por radicales de glucosa conectadas por enlaces glucosdicos (1- 4), sin embargo la molcula esta ramificada. En la cadena principal se asientan cadenas laterales unidas mediante un enlace (1- 6). Por trmino medio la cadena se va ramificando cada 25 radicales de glucosa. ESTRUCTURA DEL ALMIDN En las plantas existe la hidrolasa conocida como - amilasa que ataca a la molcula a partir de los extremos y libera paulatinamente molculas de glucosa, de dos en dos, en forma de maltosa. En virtud de este ataque a partir del extremo no tarda en aparecer azcar reductor. La amilosa se hidroliza casi por completo y la amilopectina solo en un 50%, ya que la actividad enzimtica se detiene al llegar a los puntos de ramificacin, la degradacin prosigue en el caso de que acte la amilasa que corta en la uniones (1- 6). Almidn.

Es un hidrato de carbono complejo (C6H10O5), inodoro e inspido, en forma de grano o polvo. El almidn es el principal carbohidrato de reserva en la mayora de las plantas. En las hojas el

almidn se acumula en los cloroplastos, donde es un producto directo de la fotosntesis. En los rganos de almacenamiento, se acumula en los amiloplastos, en los cuales se forma despus de la translocacin de sacarosa u otro carbohidrato provenientes de las hojas.

En los vegetales, el almidn se encuentra en uno o ms granos amilceos en un plastidio. La cantidad de almidn en diversos tejidos depende de muchos factores genticos y ambientales. El almidn se acumula a la luz del da cuando la fotosntesis excede las tasas combinadas de respiracin y translocacin, despus parte de l desaparece por la noche.

Se presentan dos tipos de almidn en la mayora de los granos amilceos: amilosa y amilopectina, ambos compuestos por unidades de d-glucosa unidas por enlaces -1, 4. Las uniones -1, 4 hacen que las cadenas de almidn se enrollen en forma de hlices. La amilopectina consta de molculas muy ramificadas, cuyas ramas se localizan entre el C-6 de una glucosa de la cadena principal y el C1 de la primera glucosa en la cadena que forma la rama (enlaces -1, 6). Las amilosas son ms pequeas y contienen de cientos a miles de unidades de glucosa, numero que depende de la especie y las condiciones ambientales.

La formacin de almidn ocurre sobre todo por un proceso que implica la donacin repetida de unidades de glucosa provenientes de un azcar nucleotidico similar al UDPG y que se denomina difosfoglucosa de adenosina, ADPG.

Hidrlisis del almidn.

La hidrlisis implica la ruptura de un enlace mediante la adicin en medio del mismo de los elementos del agua. Los polisacridos de la dieta se metabolizan mediante hidrlisis a monosacridos.

La mayora de los pasos de la degradacin de almidn a glucosa pueden ser catalizados por tres enzimas distintas, si bien hay otras ms que se necesitan para completar el proceso. Las tres primeras enzimas son una -amilasa, -amilasa y almidn fosforilasa. Al parecer solo la -amilasa puede atacar grnulos de almidn intactos, por lo que cuando participan la -amilasa y la almidn fosforilasa, es probable que acten sobre los primeros productos liberados por la -amilasa. La amilasa ataca de manera aleatoria enlaces 1,4 en las molculas de amilosa y amilopectina, al principio creando huecos al azar en los granos de almidn y liberando productos que aun son

grandes. En cadenas de amilosa no ramificadas, el ataque repetido por la -amilasa produce maltosa, un disacrido que contiene dos unidades de glucosa. Sin embargo, la -amilasa no puede atacar los enlaces 1,6 localizados en los puntos de ramificacin de la amilopectina, por lo que la digestin de amilopectina cesa cuando aun quedan dextrinas ramificadas con cadenas de longitud corta. Muchas -amilasas son activadas por Ca+, lo cual es una de las razones por las que el calcio es un elemento esencial.

La -amilasa hidroliza al almidn en -maltosa; la enzima acta primero solo sobre los extremos no reductores. La -maltosa cambia con rapidez, por mutarrotacin, para formar las mezclas naturales de isomeros y . La hidrlisis de amilosa por la -amilasa es casi completa, pero la degradacin de amilopectina es incompleta porque no son atacados los enlaces de los puntos de ramificacin. La actividad de ambas amilasas implica la incorporacin de una molcula de H2O por cada enlace roto, por lo que son enzimas hidrolasas. Las reacciones hidrolticas no son reversibles, de modo que no se pueden detectar sntesis de almidn por amilasas. Las amilasas estn diseminadas en diversos tejidos pero son mas activas en las semillas que estn germinando, ricas en almidn. Es probable que la -amilasa tenga ms importancia que la -amilasa para la hidrlisis de almidn. Gran parte de la -amilasa se localiza dentro de los cloroplastos, muchas veces unida a los granos de almidn que atacara. Acta tanto en el da como por la noche aunque, por supuesto, durante la luz de da hay produccin neta de almidn por la fotosntesis.

La amilopectina solo es degradada parcialmente por la accin del almidn fosforilasa. La reaccin procede de manera consecutiva a partir del extremo no reductor de cada cadena principal o cadena ramificada hasta a unos residuos de glucosa de las uniones -1,6 de las ramificaciones, por lo que de nuevo que dan dextrinas. La amilosa, que tiene pocas ramificaciones, se degrada casi por completo, por eliminacin repetida de unidades de glucosa a partir del extremo no reductor de la cadena. La almidn fosforilasa esta ampliamente distribuida en la planta y a veces resulta difcil determinar que enzima digiere la mayor parte del almidn en las clulas de inters.

OBJETIVO

Comprobar que las amilasas producidas por semillas de maz hidrolizan al almidn, dando como producto final unidades de maltosa siendo este uno de los mecanismos que la semilla utiliza para obtener energa necesaria para germinar.

El alumno estudiara las diferencias en la actividad amiloltica, dependiendo de los estados de germinacin en las semillas y de sus requerimientos energticos.

Se aplicara el mtodo de Nelson-Simogy para la determinacin de reductores totales.

Determinaremos la actividad enzimtica de las semillas de maz, dependiendo de su tiempo de germinacin.

MATERIAL

1 mortero

1 bistur

1 bao de agua hirviendo

6 tubos de centrifuga

5 pipetas graduadas de 10 ml

1 embudo de filtracin de 5 cm de dimetro

1 caja de Petri de 9 cm

1 tripi con tela de asbesto

1 mechero

25 tubos de ensayo de 15X150

1 centrifuga

1 espectrofotmetro

1 gasa

30 semillas de maz

METODOLOGA

La preparacin de las semillas de maz, se llevara a cabo cinco das anteriores a la prctica. Se desinfectaran 10 semillas de maz en cloro (hipoclorito de sodio) durante 20 minutos y las enjuagaremos muchas veces con agua hervida; posteriormente las semillas las pondremos a germinar en un frasco limpio, en el frasco se pondr una capa de algodn, las semillas, y se humedecer el algodn. Despus el mismo procedimiento de germinacin se aplicara a otras cuantas semillas limpias pero tres das antes de la prctica.

Para empezar la practica se ponen a remojar en agua 2 semillas de maz de ningn da de germinacin; despus se seleccionaron un par de semillas de 5, de 3 y 0 das de germinacin, entonces se les quita el embrin y el escueto, para que solo nos quede el endospermo almidonoso. Una vez limpios los maces prepararemos un extracto enzimtico de los respectivos das de germinacin; lo anterior se har macerando el endospermo de 2 semillas de 5 das de germinacin, en un mortero de con 5 ml de succinato con pH 5. Se hizo el mismo procedimiento con las semillas de 3 y 0 das de germinacin, los productos obtenidos de los macerados se colocaran en tubos de centrfuga, lavando el mortero con el amortiguador en cada uno de los tres casos para centrifugar a 3000 rpm durante 20 minutos. Despus de centrifugar se separara el

sobrenadante de cada tubo; para ser colocadas en los tubos numerados del 7 al 12, segn la relacin del formato siguiente.

tubo #

dias de germinacion

ml extracto diluido

0.25

0.25

0.25

10

0.25

11

0.25

12

0.25

El ultimo paso de la practica ser la determinacin de los reductores totales, que se llevara a cabo con las diluciones de los extractos enzimticos de la semilla de diferentes tiempos de germinacin; aqu se realizan las reacciones con los diferentes reactivos (I y II) y la determinacin de azucares reductores totales que obtuvimos con la hidrlisis enzimtica del almidn; tambin realizaremos la curva patrn. Estas reacciones fueron de acuerdo a la tabla.

RESULTADOS

Anotaremos las lecturas espectrofotomtricas de cada tubo en la tabla siguiente.

TUBO

DENSIDAD OPTICA (nm)

MUESTRA

DUPLICADO

MEDIA

0.

0.086

0.090

0.088

0.377

0.212

0.2945

0.297

0.292

0.2945

0.339

0.259

0.299

0.464

0.505

0.4845

Determinaremos la concentracin de maltosa en los tubos 1 al 6 correspondientes a la curva patrn, de acuerdo con la ecuacin:

(Volumen inicial)(Concentracin inicial) = (Volumen final)(Concentracin final)

(Tubo x)(500 g/ml) = (Patrn maltosa + Agua)( X )

Se anota la concentracin en la columna X de la tabla siguiente y en la columna Y se anotan las lecturas espectrofotomtricas obtenidas en los tubos 1 a 6.

Tabla 1. VALORES PARA CURVA PATRON

TUBO #

[Maltosa g/mL]

Densidad ptica (520 nm)

125

0.088

333.33

0.2945

750

0.2945

2000

0.299

0.4845

Se trazara la grafica con los datos de las columnas X y Y. Debido a que los datos se presentan como una recta, se ajustan de ser necesario.

En el siguiente cuadro anotaremos los resultados obtenidos de las lecturas de densidad ptica de los tubos problema (7-12).

DIAS

TUBOS

PROBLEMA

DENSIDAD OPTICA (nm)

MUESTRA

DUPLICADO

MEDIA

1.229

0.833

1.031

0.990

1.218

1.104

1.252

0.989

1.120

10

0.844

1.106

0.975

11

1.071

1.200

1.1355

12

1.114

1.164

1.139

Tomando en consideracin los datos de la curva patrn donde Y ha sido corregida Y y recordando nuevamente que y=0.0873x-0.0621; se calcula la concentracin de maltosa de los diferentes das de germinacin.

Los datos se registran en la siguiente tabla.

TUBO #

DIAS

[MALTOSA g]

0.0279

0.0342

0.0356

10

0.0230

11

0.0370

12

0.0373

En la siguiente grafica se encuentra la concentracin de maltosa por los das de germinacin de las semillas.

DISCUSIN

En esta prctica se intento tener el mejor rendimiento respecto a los resultados. Creemos que nuestros resultados hubieran estado ms precisos si la extraccin del almidn no hubiera presentado algunas dificultades para obtener el endospermo. Esto lo pensamos ya que en las semillas de 0 y 3 das el endospermo presentaba partes ms duras, que hacan ms difcil la extraccin total.

Otra cuestin a destacar, es la parte en que hacemos la segunda incubacin (reactivo 1), pues por un descuido el agua hirvi y se derramo un poco, provocando que a algn tubo le entrase agua y alterara una absorbancia; esto se nota pues el mismo nmero de tubo pero del duplicado da una lectura ms coherente.

Por tanto con nuestros resultados y el texto consultado se demuestra que la actividad enzimtica en la semilla es mayor si el tiempo de germinacin es mayor.

CONCLUSIN

En esta prctica se esperaba y se observo la actividad enzimtica de la amilasa sobre el almidn. Observamos que al tener ms tiempo de germinacin una semilla, mayor es la actividad enzimtica de la amilasa. En los granos de cero das se manifest una actividad de la enzima muy baja, despus existe un incremento en su actividad al usar de semillas de tres das y por supuesto que la mayor actividad se registro en las semillas de 5 das. Todas estas reacciones nos dejan una produccin de maltosa, por accin de la hidrlisis enzimtica de la amilasa sobre el almidn; esto nos sugiere que si la enzima trabaja mucho, sera porque haba mucho almidn para hidrolizar y poder producir maltosa.

En resumen y conclusin, la actividad enzimtica es directamente proporcional a la produccin de maltosa, todo esto con respecto a los das de germinacin que tengan las semillas (entre mas das de germinacin tenga las semillas, mas almidn habr, entonces, la actividad enzimtica ser mucho mayor.)

CUESTIONARIO

1.- CUAL ES LA ESTRUCTURA DEL ALMIDON?

Hidrlisis enzimtica de un polisacrido vegetal 3

2.- QUE ES UN AZUCAR REDUCTOR?

Cuando en una determinacin cuantitativa de los monosacridos se realiza frecuentemente, basndose en su observacin en disoluciones alcalinas mediante Cu2+, Ag+ o ferricianuros, se origina una mezcla de azucares -cidos. Los azucares son capaces de reducir, a tales oxidantes se les denomina azucares reductores.

Se puede definir tambin a un azcar reductor como cualquier carbohidrato que tiene libre un grupo carbonio y es susceptible de participar en otra oxidacin.

3.- QUE TIPO DE ENLACES HIDROLIZAN LAS AMILASAS?

-Amilasa, (14) glucan 4-glucanohidrolasa

-Amilasa, (14) glucan maltodeshidrogenasa

4.- QUE AMILASAS SE ENCUENTRAN EN LOS ORGANISMOS ANIMALES?

-D-glucopiranosa

-Amilasa, (14) glucan 4-glucanohidrolasa

BIBLIOGRAFA

SALISBURY, B. FRANK

Fisiologa Vegetal, Ed. Iberoamericana, 1994.

MATHEWS, C. K. Y VAN HOLDE, K. E.

Bioqumica, McGraw Hill Interamericana, 2. Ed., Espaa, 1998.

BRITNNICA CD 2000 DELUXE

Encyclopdia Britannica, Inc.

WHITE, A., HANDLER, P., SMITH, E., HILL, R., LEHMAN, R.

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MICROSOFT EXCEL 2002 (10.2614.2625)