UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS

PR-REITORIA DE PESQUISA E PS-GRADUAO

PROGRAMA INSTITUCIONAL DE INICIAO CIENTFICA

REA DO CONHECIMENTO: PROGRAMA: Ttulo do Projeto: ( ) PIBIC

( ) EXATAS PIBIC-Af ( )

( )HUMANAS PIVIC ( X )

(X)VIDA

Cartilagem auricular bovina tratada em soluo alcalina: desenvolvimento, avaliao da biocompatibilidade em ratos e uso em hernioplastia de bovinos. Nome do Grupo de Pesquisa Cadastrado no Diretrio de Grupos de Pesquisa do CNPq: Produo e Sanidade Animal Orientador: Prof. Dr. Rogrio Elias Rabelo Unidade Acadmica/Departamento: Curso de Medicina Veterinria (UFG/ Campus Jata)

PLANO DE TRABALHO
Edital N 36/2012
Perodo 2013/2014 Ttulo do Plano de Trabalho: Estudo da biocompatibilidade do uso de cartilagem auricular bovina tratada em soluo alcalina em hernioplastia de bovinos. Aluno: Marina Franco Vieira Matrcula: 103232 INCIO: Agosto de 2013 TRMINO: Julho de 2014 PLANO DE TRABALHO 1. Introduo Na clnica cirrgica de pequenos e grandes animais o grande desafio para o cirurgio veterinrio a obteno de tecidos viveis para promover a reparao e restaurao das estruturas comprometidas, em casos em que h perda tecidual, como por exemplo, os defeitos na parede abdominal. Nestes casos, o mtodo ideal que se promova a aproximao de tecidos do prprio paciente. Porm, em situaes em que no seja possvel essa

reconstruo, o uso dos biomateriais tem sido apontado como alternativa (RABELO et al., 2006; VULCANI et al., 2008). Os implantes biolgicos tm sido utilizados em diversos procedimentos de correo cirrgica na Medicina Veterinria. Apesar do uso consagrado, muitas so as dvidas a serem esclarecidas sobre os biomateriais, principalmente no que se refere ao comportamento histopatolgico e imunoistoqumico destes, aps implantao. Fatores como a antigenicidade dos implantes, resposta inflamatria, estrutura das fibras colgenas por ocasio da fibroplasia, aderncias ps-cirrgicas, com danos funcionalidade do rgo ou estruturas adjacentes e a rejeio, comumente relatadas, so alguns aspectos que ainda necessitam de estudos complementares. 2. Objetivos O presente sub-projeto tem por finalidade o estudo da biocompatibilidade da cartilagem auricular bovina tratada em soluo alcalina utilizada como bioimplante na hernioplastia de bovinos leiteiros jovens portadores de hrnias umbilicais. 3. a. Metodologia Obteno do biomaterial As cartilagens auriculares sero obtidas em abatedouros frigorficos inspecionados, sendo os animais de mesma raa, idade e mesmo grupo contemporneo e enviadas, sob refrigerao ao laboratrio de prticas veterinrias da Universidade Federal de Gois Campus Jata. Aps limpeza e identificao, ser colhido um fragmento da cartilagem para exames histolgicos e testes de resistncia mecnica. Em seguida, sero enviadas ao Laboratrio de Bioqumica e Biomateriais (LBB) do Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo, USP, Campus de So Carlos, SP, onde se efetuar o tratamento alcalino desse material. 3.2 Avaliao da biocompatibilidade da cartilagem auricular bovina tratada em soluo alcalina como bioimplante na correo de hrnias umbilicais em bovinos Sero utilizados 12 bovinos da raa Holands, portadores de hrnias umbilicais, com idade variando de 8 a 12 meses, que recebero os implantes na parede abdominal. O properatrio dos animais a serem submetidos interveno cirrgica constar de jejum hdricoalimentar de 14 horas. No procedimento pr-anestsico ser administrado clorpromazina na dose de 0,1mg/Kg por via intravenosa. Aps 15 minutos, ser aplicado tiopental a 2,5% na dose de 6 a 10mg/kg. Os animais sero, ento, intubados e a anestesia geral mantida com halotano 2,5% V. Em rea coberta previamente lavada e desinfetada com soluo de

hipoclorito de sdio a 0,5%, os bovinos sero contidos em decbito dorsal em mesa adaptada. Aps tricotomia e lavagem com gua e sabo, realizar-se- antissepsia com iodopovidine. Ser feita inciso de pele e isolamento do o saco hernirio. Aps essa conduta, ser realizada a amputao do saco hernirio, preconizando uma dimenso mdia, de 15 cm de comprimento no eixo crnio caudal e 10 cm de dimetro no sentido latero-lateral do anel hernirio. Paralelamente a esse procedimento, o biomaterial (cartilagem auricular) ser hidratado em soluo de cloreto de sdio a 0,9% esterilizada. Essa hidratao ser realizada por um perodo de cinco minutos. Posteriormente o biomaterial ser utilizado na parede abdominal para fins de correo da hrnia. O biomaterial ser fixado no local do defeito abdominal por meio de sutura em padro separado simples nas extremidades (pontos de reparo). Em seguida, ser promovida a sutura visando fixao do implante na fscia do msculo reto abdominal, sendo preconizada sutura em padro contnua simples, sendo empregado fio de poliamida. O espao morto ser abolido com fio absorvvel, seguida da dermorrafia. Os animais sero mantidos em baias individuais, contendo gua, feno e rao vontade, sendo essas higienizadas e sua cama (maravalha de madeira) trocada a cada dois dias. Para amenizar o estresse dos animais, os mesmos sero diariamente, soltos por um perodo de 40 minutos em piquete com rea sombreada e monitorada pela equipe de pesquisadores. No ps-operatrio ser realizada antibioticoterapia parenteral e analgesia. Tambm ser realizada limpeza da ferida com soluo de iodopovidine e curativos locais. Para fins de avaliao do comportamento do implante sero realizadas avaliaes clnicas dirias, ultrassonogrficas do stio de implantao, histolgicas e imunohistoqumicas. Os animais sero alocados aleatoriamente em quatro grupos, que diferiro em funo do dia da retirada de fragmento do implante e do tecido adjacente. O grupo 1 (G1) ter a retirada aos sete dias ps implantao; o G2 aos 14; G3 aos 21 e G4 aos 35 dias ps operatrio. Os animais sero submetidos biopsia para retirada do espcime clnico, com metodologia anestsica similar ao protocolo preconizado por ocasio da implantao da cartilagem auricular. Avaliao clinica Todos os animais sero avaliados sistematicamente a cada 24 horas, utilizando mtodos semiolgicos. Ser verificado frequncias cardaca e respiratria, temperatura retal e grau de desidratao. No local da cirurgia sero verificados: inflamao, enfisema, abscesso, infeco e deiscncia da ferida utilizando escores previamente estabelecidos.

Avaliao ultrassonogrfica do stio do implante Ser utilizada a ultrassonografia para determinao do comportamento do tecido biolgico implantado aos 3, 13, 25 e 35 dias ps-implantao. Ser considerada a presena de edema, abscessos, hematomas, granulomas, fistulas, rea de no coaptao do implante; integrao do implante e rejeio do biomaterial pelo paciente. Avaliao histopatolgica e imunoistoqumica das amostras retiradas dos bovinos Os fragmentos retirados cirurgicamente sero fixados em soluo de formalina (10%), tamponada com fosfato (pH 7,2) por pelo menos 24 horas. Aps esse perodo, o material ser processado para incluso em parafina. Sero feitos cortes seriados de 5 m de espessura e colorao com hematoxilina-eosina (HE), Tricrmio de Gomori e Von-Kossa, sendo os cortes avaliados sob microscopia ptica e graduados por um patologista no conhecedor de suas identidades, com graduaes de alteraes histolgicas. A anlise microscpica ser acrescida de dados objetivos obtidos por meio de histometria. De cada corte histolgico sero escolhidos 20 campos aleatrios para a contagem celular. Os espcimes clnicos colhidos por ocasio das bipsias sero preparados e avaliados por meio de imunoistoqumica (OLIVEIRA, 2006), sendo analisadas as citocinas do processo inflamatrio. A citocina IFN - ser avaliada de forma semi-quantitativa e classificada em quatro graus: ausente, leve, moderado e intenso. Sero contadas um total de 1000 clulas, entre positivas e negativas em 10 campos, ou at completar 1000 clulas de cada espcime nas reas adjacentes s membranas. Ser utilizado microscpio de luz em objetiva de imerso, conforme a classificao do grau com o critrio que segue: Ausente (-) 0% a 0,99% clulas positivas Leve (+) 1,0% a 20,0% clulas positivas Moderado (++) 21,0% a 49,0% clulas positivas Intenso (+++) > 50% clulas positivas

4. Atividades

Etapas e Cronograma de Execuo do Plano de Trabalho A x S x x x 2013 O N x x x x x x x D x J x F x 2014 M A M J x x x x J x

Levantamento Bibliogrfico Obteno das cartilagens bovinas Avaliao Histolgica e teste de resistncia Implantao das cartilagens Retirada dos implantes Preparao das lminas com as amostras retiradas Leitura das Lminas Tabulao dos dados e anlise estatstica Publicao dos dados Relatrio Final e Prestao de contas

x x x x x

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5.

Resultados Esperados na Execuo Espera-se elucidar, em parte, questionamentos relacionados aos biomateriais de

origem biolgica, esclarecendo, principalmente, aspectos relacionados s intercorrncias pscirrgicas como as possveis aderncias e reaes de hipersensibilidade culminando na rejeio do implante. A proposta apresentada poder servir como opo na correo de enfermidades consideradas, na maioria das vezes, de difcil resoluo, bem como desmistificar o problema junto aos mdicos veterinrios acerca dos biomateriais.

6. Bibliografia 1. OLIVEIRA, M.Q. Biocompatibilidade da membrana fibrosa da casca de ovo Gallinea

galle gallus domesticas: estudo experimental em ratos. Tese (Programa de ps graduao em imunologia), Universidade Federal da Bahia, Salvador-BA, 2006, 192p. 2. RABELO, R. E.; GOMES, F.A.S.; SANTANA, F.J.F.; SILVA, L.A.F; LIMA, C.R.O.;

GARCIA, E.C.; SILVA, M.AM. Reparao do tendo calcneo comum em ces por meio de implante heterlogo conservado em glicerina a 98%. Cincia Animal Brasileira, suppl.1. Braslia, p. 205-207, 2006. 3. VULCANI, V.A.S.; MACORIS, D.G.; PLEPIS, A.M.G. Membranas biolgicas

homlogas preservadas em soluo alcalina seguida de liofilizao, glicerina a 98% e por liofilizao para implantao em equinos. Cincia Rural, Santa Maria, v.38, n.5, p.13291334, ago, 2008.