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DETERMINACIN DE PROTENAS- MTODO KJELDAHL

I. OBJETIVOS: Obtener el porcentaje final de protenas de la muestra que analizaremos. Determinacin del contenido en protenas de una muestra por el mtodo de Kjeldahl. Demostrar los conocimientos tericos, relacionados con la determinacin propuesta, que se estudi con anterioridad. II. FUNDAMENTO TEORICO: Las protenas son compuestos altamente polimerizados, que estn formados por aminocidos. Tambin se unen a componentes no proteicos. Las protenas se encuentran entre los nutrientes ms importantes, junto con los lpidos y los carbohidratos. Adems de su funcin energtica (1 g de protena proporciona 4,1 Kcal al organismo), dada su naturaleza nitrogenada, son necesarias para la sntesis de compuestos propios del organismo implicados en la estructura de las membranas junto con los lpidos, como glicoproteidos en funciones de lubrificacin y como nucleidos que posibilitan la sntesis de las protenas propias del organismo, as como la formacin de los cromosomas y la divisin celular. El valor nutritivo de las numerosas protenas alimentarias existentes depende de su digestibilidad, que depende a su vez de la estructura, es decir, de su composicin aminoacdica. El contenido de aminocidos esenciales (de los aproximadamente 30 aminocidos 8 son esenciales para el hombre dado que ste no es capaz de sintetizarlos) determina el

valor biolgico, es decir, el mayor aprovechamiento fisiolgico de una protena por parte del organismo. Los mtodos para la cuantificacin del contenido proteico en alimentos se basan en distintos principios: a) Mtodo de Kjeldahl (determinacin del contenido en nitrgeno). b) Mtodos espectrofotomtricos: b.1) Reaccin qumica del enlace peptdico y posterior medida en el VIS (p.e. mtodo de Biuret en el que se forma un compuesto azul con cobre en medio bsico). b.2) Reaccin qumica de determinados aminocidos de la protena y posterior medida en el VIS (p.e. mtodo de Folin-Ciocalteu cido fosfomolbdico y fosfovolframico- en el que reacciona fundamentalmente la tirosina). b.3) Reaccin qumica con colorantes y posterior medida en el VIS (precipitacin de las protenas y medida del exceso de colorante). b.4) Medida en el UV (determinacin de los aminocidos aromticos triptfano, tirosina y fenilalanina cuyos mximos de absorcin se encuentran en torno a 280 nm). b.5) Medida en el IR cercano (medidas de reflectancia difusa).

En el anlisis de alimentos, el mtodo de Kjeldahl es el que ha alcanzado mayor importancia. Como consecuencia de su estructura a base de aminocidos individuales, el contenido de nitrgeno de las protenas vara slo entre unos lmites muy estrechos (15 a 18% y como promedio 16%). Para la determinacin

analtica del contenido en protena total o protena bruta, se determina por lo general el contenido de nitrgeno tras eliminar la materia orgnica con cido sulfrico (mtodo de Kjeldahl que data de 1883), calculndose finalmente el contenido de protena con ayuda de un factor (en general 6,25). Se asume que el trixido de azufre que se forma durante el tratamiento a altas temperaturas se adiciona como cido de Lewis al grupo NH del enlace peptdico (base de Lewis) de la protena, formndose el correspondiente cido amidosulfnico. El cido amidosulfnico es resistente a una posterior oxidacin y se transforma en sulfato amnico por degradacin. El sulfato amnico se determina a continuacin, tras liberacin del NH3 y destilacin, por medio de una valoracin cido-base.

La degradacin oxidativa acelerada catalticamente de compuestos orgnicos con cido sulfrico a temperaturas comprendidas entre 360 y 410C se denomina tratamiento Kjeldahl. Las transformaciones qumicas que tienen lugar son:

Cn H m Ol N d a bc (2n m / 2 l 1,5a 2,5b)O nCO2 (m / 2 1,5a 0,5b) H 2 O aNH 3 bHNO3 c / 2 N 2 En el tratamiento Kjeldahl de alimentos no se determinan slo
protenas o aminocidos libres, sino tambin cidos nucleicos y sales de amonio. Tambin se determina el nitrgeno ligado de compuestos aromticos, como pirazina, ciclopentapirazina, pirrol y oxazol, as como el nitrgeno orgnico ligado de las vitaminas, tales como la B1 (tiamina), la B2 (riboflavina) y la nicotinamida.

III.

MATERIALES Y EQUIPOS: Materiales: Muestra alimenticia (Schinus molle L.) Reactivos: Acido sulfrico Mezcla catalizadora ( Indicador rojo de metilo + bronce de bromocresol 0.02 N padronizado hidrxido de sodio al 50% concentrado )

IV. PROCEDIMIENTO: 1. primera parte DIGESTION: ligas el restato del bloque digestor, verificando el voltaje correcto. Muestras: Pesar cerca de 0.2g sobre el papel vegetal previamente pesado, colocar juntamente con el papel de pesado en el tubo de digestin. Colocar 0.2g de y 1g de y ml de agitar cuidadosamente el e tubo para mezclar la muestra (en caso de muestras con alto contenido de protenas, el pesado debe ser menor, cerca a un 0.1g). hacer un blanco. Indicar el calentamiento solamente cuando la muestra estuviera lista y colocada en el bloque digestor. La temperatura debe ser en torno se 50C, aumentar lentamente hasta llegar a 400C (no debe aumentar bruscamente) Muestras liquidas:

Medir 2ml con pipeta volumtrica. Adicionar los catalizadores en la misma cantidad en 5ml de tubo para mezclar la muestra. Iniciar el calentamiento solamente cuando la muestra estuviera lista y colocada en el bloque digestor la temperatura debe ser alrededor de 50C hasta llegar a 400C (el cambio o debe ocurrir bruscamente pues habr perdida de muestra) El trmino de la digestin es verificado cuando la muestra . Agitar cuidadosamente el

estuviera limpia y verdosa en caliente, limpia y azulada en frio. Retirar los tubos del bloque colocando en el soporte de tubos para su enfriamiento y su posterior titulacin. 2. segunda parte DESTILACION: El nivel de agua en el baln de generacin de vapor debe estar encima del sensor. Completar siempre, colocando funil. Ligar el aparato verificando el voltaje de la red elctrica. Abrir la llave de agua para circulacin en el condensador. Girar el dial de la resistencia hasta 7/8 para el calentamiento del agua del generador de vapor y esperar que hierva. Diluir la muestra que est en el tubo de digestin con 15ml de agua destilada (muestra fra) agua destilada a travs del embudo apropiado y cerrar la llave del

Girar el dial para cero y abrir la llave del embudo del baln generador de vapor. Colocar en erlenmeyer de 125ml contenido de abajo del condensador. Conectar el tubo de protena digerida en el local de encaje. adicionar 50% en el embudo dosador de soda (la llave (2%) con

indicador (verde bromocresol y rojo de metilo) en el soporte

debe estar cerrada)

Abriendo la llave del dosador de soda lentamente (gota a gota) adicionar NaOH 50% hasta neutralizar (la muestra neutra quedara de color oscuro o marrn). termina la neutralizacin, cerrar la llave del embudo de embudo de soda y del baln generador de vapor, inmediatamente girar el dial para 10 iniciar el calentamiento y formacin de vapor. Colectar cerca de 50ml. Del destilado.

Para limpiar el sistema

conectar un tubo digestor limpio

conectando 20 ml. de agua destilada , cerrar la llave generador de vapor , girar el dial hasta 10 y destilar por 5 minutos. Retirar el tubo del lavado procediendo como en el tem 13. El aparato estar listo para nueva destilacin

Terminadas todas las destilaciones, proceder a la ltima destilacin de limpieza con agua destilada, deteniendo el cuidado te agotar la soda de su reservorio, lavndolo tambin con agua destilada. 3. tercera parte TITULACION: Preparar una bureta de 50 ml. con H2SO4 0.02 N factorada Titular cuidadosamente en el erlenmeyer en el que fue colectado el destilado. El punto final de la titulacin ser indicado por la mudanza de color de la solucin. CLCULOS: Muestra = 0.5189g Gasto H2SO4 = 2.8 ml. Gasto blanco = 0.6 ml. Fc = 1.1186943620178 14.007g N 1.4007g N 0.0014007g N 1.0 ml H2SO4 (0.1N) 1.0 ml H2SO4 (0.1N) 17.6 0.6 ml H2SO4 2.8 ml H2SO4 X = 0.00392196 g N 1000 ml de H2O 1000 ml de H2O 1.0 ml de H2O Reacciona con Reacciona con Reacciona con Reacciona con 1.0N 0.1N 0.1N 1.0 ml de N (0.1N) 0.0014007 g de N x g de N x g de N

X = 0.00392196 g N XgN

0.5189g muestra 100 g muestra

X = 0.7558 gN (Cantidad de nitrgeno en la muestra) X = 0.7558 g N x 6.25 = 4.7%


%N = 2.8 ml H2SO4 x 0.1 x 1.0 x 0.014007 x 100 = 0.71 g N x 6.25 = 4.43 % 0.5545g

NOTA: para calcular la cantidad de kilocaloras aportadas por el alimento, simplemente multiplicar el porcentaje de protenas por 4.0 KILOCALORIAS: 4.7 % X 4.0 = 18.8%

V.

CONCLUSIONES: Este conocimiento de este mtodo de determinacin de nitrgeno es de gran importancia dentro del estudio de la composicin de alimentos, ya que conociendo la cantidad de nitrgeno que presenten los alimentos, podremos saber la cantidad proteica que presenta, ya estos estn relacionados ntimamente. No todo el nitrgeno presente en los alimentos son propios de los mismos, sino debemos saber que existen diversos tipos de nitrgeno, que no siempre determinan la cantidad exacta de protenas, habiendo as: protenas brutas por ejemplo. Se logro destruir la materia orgnica y luego por reacciones qumicas convertirla a sulfato de amonio, para la determinacin de cantidad de nitrgeno presente en la muestra y consigo la determinacin de cantidad de protenas.. se logro la determinacin de protenas en una muestra de harina , se pudo experimentar la disolucin el nitrgeno orgnico en inorgnico

dentro de la muestra para poder la cantidad de protenas en trminos de contenido de nitrgeno. Este mtodo es algo complicado de realizar pero se observo que es un mtodo verstil para la determinacin de protenas y preciso para lo que viene a ser resultados proximales .

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS: www.labconco.com catlogo general de Kjeldahl Systems de Labconco http://www.monografias.com/trabajos/alimentos/alimentos.shtml La ciencia de los alimentos, Norman N. Potter1 edicin 1973. Editorial Edux S.A. 1978Mxico D.F. Tcnicas de laboratorio para el anlisis de alimentos, D. Pearson Editorial Acribia, S.A. Zaragoza, Espaa. Anlisis de los alimentos. R. Matissek, F.M. Schnepel y Steiner. Ed. Acribia. Lecciones de Bromatologa. F. Moreno Martn y M.C. Torre Boronat. Universidad de Barcelona.