Protocolos para Parametros de Agua

Proyecto RLA/1/010
Mejora de la Gestin de la Contaminacin de Masas de Aguas

Superficiales Contaminadas con Metales, ARCAL

PROPUESTA de un
MAUAL DE PROTOCOLOS
armonizados y evaluados PARA LA
TOMA DE MUESTRA Y EL AALISIS
DE AGUAS Y SEDIMETOS
para la Regin de Latinoamrica y del Caribe

REPORTE FIAL

Mayo de 2009
1
INDICE
1. EL PROYECTO 2
1.1. Objetivo General 3
1.2. Objetivos Especficos 3
2. TALLER DE ELABORACION DE UN MANUAL DE PROTOCOLOS
ARMONIZADOS Y EVALUADOS 6
2.1. Objetivo 6
2.2. Agenda 7
2.3. Conclusiones del Taller 9
2.3.1. Protocolos Consensuados y Evaluados 9
2.3.1.1. Plan Muestreo General (PT-Mu-01) 10
2.3.1.2. Muestreo Agua Superficial (PT-MuA-01) 34
2.3.1.3. Demanda Bioqumica de Oxgeno (DBO
5
) en aguas superficiales (PT-FQ-01) 50
2.3.1.4. Amonio (NH
4
+
) - Mtodo titulomtrico previa destilacin (PT-FQ-02) 65
2.3.1.5. Determinacin de amonio (NH4+) - Mtodo fenato (PT-FQ-03) 69
2.3.1.6. Determinacin de coliformes fecales - Mtodo de Filtracin por
Membrana (PT-FQ-04) 73
2.3.1.7. Determinacin de coniformes fecales - Mtodo del nmero ms probable
(PT-FQ-05) 85
2.3.1.8. Anlisis de Turbiedad o Turbidez (PT-FQ-06) 90
2.3.1.9. Determinacin de Nitratos (NO
3
-
) previa reduccin con cadmio o hidracina
(PT-FQ-07) 94
2.3.1.10. Determinacin de nitratos (NO
3
-
). Mtodo del electrodo de nitrato (PT-FQ-08) 104
2.3.1.11. Determinacin de oxgeno disuelto por el mtodo iodomtrico - modificacin
azida (PT-FQ-09) 109
2.3.1.12. Determinacin de fsforo total - Mtodo del cido Ascrbico (PT-FQ-10) 115
2.3.1.13. Determinacin de fsforo total - Mtodo de molibdato de amonio y cloruro de
estao II (PT-FQ-11) 122
2.3.1.14. Determinacin de fsforo total - Mtodo del molibdovanadato de amonio
(PT-FQ-12) 129
2.3.1.15. Determinacin de slidos totales disueltos secados a 180 C (PT-FQ-13) 136
2.3.1.16. Determinacin de slidos totales suspendidos (PT-FQ-14) 141
2.3.1.17. Nitratos por cromatografa inica (PT-FQ-15) 146
2.3.1.18. Determinacin de pH por medicin potenciomtrica (PT-FQ-16) 150
2.3.1.19. Determinacin de oxgeno disuelto por el mtodo electromtrico (PT-FQ-17) 155
2.3.1.20. Determinacin de solutos ionizables (PT-FQ-18) 160
2.3.1.21 Digestin cida de aguas para anlisis de metales recuperables totales o
2
metales disueltos por GFAAS (PT-DA-02) 166
2.3.1.22. Determinacin de cadmio, cromo, plomo, arsnico y cobre en aguas
superficiales por ICP-OES (PT-MA-01) 169
2.3.1.23. Determinacin de cadmio, cobre, cromo y plomo total en agua superficial
mediante GFAAS (PT-MA-02) 179
2.3.1.24. Determinacin de As, Co, Cr, Cs, Fe, Rb, Sb, Sr, U, Zn en muestras de agua
mediante el anlisis por activacin neutrnica, mtodo del k subcero (PT-MA-04) 187
2.3.1.25. Determinacin de Cadmio por el Mtodo de Espectrometra de Absorcin
Atmica con Aspiracin Directa (PT-MA-05) 194
2.3.1.26. Determinacin de Cromo por el Mtodo de Espectrometra de Absorcin
2.3.1.27. Determinacin de Cobre por el Mtodo de Espectrometra de Absorcin
2.3.1.28. Determinacin de Plomo por el Mtodo de Espectrometra de Absorcin
2.3.1.29. Determinacin de Arsnico Total por el Mtodo de Espectrometra de
Absorcin Atmica con Generacin de Hidruros (PT-MA-09) 213
2.3.1.30. Determinacin de Mercurio total por el mtodo de Espectrometra de
Absorcin Atmica con Generacin de Vapor Atmico de Mercurio -
Vapor Fro (PT-MA-10) 223
2.3.1.31. Pretratamiento y Preparacin de Muestras para anlisis de Sedimentos
(PT-PS-01) 229
2.3.1.32. Digestin cida total de sedimentos utilizando microondas (PT-DS-01) 233
2.3.1.33. Digestin cida total de sedimentos en sistema abierto (PT-DS-02) 236
2.3.1.34. Digestin cida total de slidos en suspensin (PT-DS-03) 239
2.3.1.35. Determinacin de cadmio, cromo, plomo, arsnico y cobre en sedimentos
por ICP-OES (PT-MS-01) 242
2.3.1.36. Determinacin de cadmio, cobre y plomo total en sedimentos mediante
GFAAS (PT-MS-02) 251
2.3.1.37. Determinacin de As, Co, Cr, Cs, Fe, Rb, Sb, Sr, U, Zn en muestras de
sedimentos mediante el anlisis por activacin neutrnica, mtodo del
k subcero (PT-MS-04) 259
2.3.1.38. Determinacin de Cadmio total en muestras de sedimentos por el Mtodo
de Espectrometra de Absorcin Atmica (PT-MS-06) 265
2.3.1.39. Determinacin de Cromo en sedimentos por el Mtodo de Espectrometra de
Absorcin Atmica (PT-MS-07) 269
2.3.1.40. Determinacin de Cobre en sedimentos por el Mtodo de Espectrometra de
3
2.3.1.41. Determinacin de Plomo en sedimentos por el Mtodo de Espectrometra de
2.3.1.42. Determinacin de Arsnico Total en sedimentos por el Mtodo de
Espectrometra de Absorcin Atmica con Generacin de Hidruros (PT-MS-10) 285
2.3.1.43. Determinacin de Mercurio en sedimentos por el mtodo de Espectrometra
de Absorcin Atmica con Generacin de Vapor Atmico de Mercurio - Vapor
Fro (PT-MS-11) 293
4
PROPUESTA DE UN MANUAL DE PROTOCOLOS
ARMONIZADOS Y EVALUADOS PARA LA TOMA DE AGUA Y
SEDIMENTOS

1. EL PROYECTO

El Proyecto ARCAL RLA/1/010 Mejora de la gestin de las masas de agua
que estn contaminadas con metales (ARCAL)

El proyecto propone armonizar protocolos y capacitar los recursos humanos
necesarios para la evaluacin de la calidad del agua y el transporte de metales
en cuerpos de agua superficiales en pases de la regin de Latinoamrica con
problemas de contaminacin con metales (natural o antropognica) aplicando
tcnicas analticas nucleares y complementarias, incluyendo el empleo de
trazadores.

Se trata de un proyecto ARCAL (Acuerdo Regional de Cooperacin para la
Promocin de la Ciencia y Tecnologa Nucleares en Amrica Latina y El Caribe)
que financia el OIEA (Organismo Internacional de Energa Atmica) y que di
comienzo el 1 de enero de 2007, con una duracin de 2 aos.

Participan del mismo, Argentina, Bolivia, Brasil, Chile, Costa Rica, Cuba, El
Salvador, Mxico, Per, Repblica Dominicana, Uruguay y Venezuela. Cada uno
de estos pases ha elegido un ecosistema relevante donde poder desarrollar el
proyecto.

Existen instituciones gubernamentales y no gubernamentales ocupadas de la
gestin del recurso agua en la regin. Los usuarios directos de los productos de
este proyecto sern aquellas instituciones que velan por la calidad y uso
sustentable del recurso hdrico y las dedicadas a la formulacin de leyes,
normas y criterios regulatorios de la calidad del agua. Estos usuarios se
5
beneficiarn con la disponibilidad de protocolos armonizados y con recursos
humanos formados para la evaluacin integral de la calidad del agua y el
transporte de contaminantes en cuerpos de aguas superficiales. As mismo
coadyuvar al desarrollo de normas y criterios en materia de agua de los pases
participantes.

1.1. Objetivo General
Armonizar protocolos y capacitar los recursos humanos necesarios para la
evaluacin de la calidad del agua y el transporte de metales en cuerpos de agua
superficiales en pases de la regin de Latinoamrica y el Caribe con problemas
de contaminacin con metales (natural o antropognica) aplicando tcnicas
analticas nucleares y complementarias, incluyendo el empleo de trazadores.

1.2. Objetivos Especficos

Proponer ndices de calidad del agua (ICA) que puedan ser aplicados en los
pases de la regin.
Desarrollar criterios para el diseo y establecimiento de bases de datos que
permitan soportar modelos de dispersin de contaminantes en aguas
superficiales, sedimentos y biota.
Armonizar y evaluar protocolos; en particular, de diseo muestral, toma de
muestra, medicin, anlisis de resultados y reporte para la evaluacin de la
calidad de los cuerpos de aguas superficiales con elementos ecotxicos,
utilizando tcnicas analticas nucleares, complementarias y trazadores.
Capacitar recursos humanos en la aplicacin de estrategias y tcnicas
quimiomtricas y de modelado de dispersin de contaminantes.

Como resultado de la ejecucin del proyecto se espera:

Mejorar la gestin del recurso agua superficial a nivel regional por el
empleo de ndices de Calidad del Agua armonizados y evaluados.
6
Mejorar la capacidad de prediccin de los modelos utilizados en
evaluacin de la calidad del agua y el transporte de elementos ecotxicos
en cuerpos de agua superficiales.
Mejorar la confiabilidad, reproducibilidad y aplicabilidad de los resultados
para su comparacin, de manera de poder afrontar problemticas
comunes en la regin.
Mejorar las capacidades de los grupos de la regin para asumir nuevos
desafos y sus efectos multiplicadores en la formacin de recursos
humanos, contribuyendo a la sustentabilidad del proyecto.

2. TALLER DE ELABORACION DE UN MANUAL DE PROTOCOLOS
ARMONIZADOS Y EVALUADOS PARA LA TOMA DE MUESTRAS Y
ANLISIS DE AGUA Y SEDIMENTO (SAN SALVADOR, 5 AL 9 DE MAYO
DE 2008)

2.1. Objetivo
En concordancia con el tercer objetivo especfico, se desarroll un Taller
Regional de elaboracin de un Manual de Protocolos Armonizados y Evaluados
para la Toma de Muestras y Anlisis de Agua y Sedimento del 5 al 9 de Mayo de
2008 en San Salvador, El Salvador. En esta reunin se acord evaluar y
consensuar protocolos de tcnicas de muestreo y anlisis de aguas superficiales
y sedimentos; que incluyeron los correspondientes a los parmetros
(indicadores) utilizados por el ndice de calidad de aguas (ICA) consensuado en
el Taller de Ro de Janeiro, para los pases de la regin.

Este taller es producto de la necesidad de proponer protocolos armonizados,
con la finalidad de minimizar los errores de muestreo y anlisis de agua y
sedimento que inciden significativamente sobre la calidad de los datos
ambientales (en particular los correspondientes a los parmetros del ndice de
calidad de agua), para todos los pases de la regin de Latinoamrica y del
Caribe.
7
2.2. Agenda

Lunes, 5 de Mayo

08:00 - 08.30 Inscripcin de participantes

08:30 - 09:00 Apertura de la reunin y bienvenida

Bienvenida, a cargo de Lic. Maribel Quintanilla, Directora de
Cooperacin Multilateral del Ministerio de Relaciones
Exteriores de El Salvador, Enlace Oficial de El Salvador con el
OIEA.
Descripcin del proyecto y del eveno, a cargo de Sra. E.
Zeiller. Oficial Tcnico, OIEA
Inauguracin del Evento, a cargo del Ing. Carlos Jos
Guerrero Contreras, Ministro de Medio Ambiente y Recursos
Naturales de El Salvador.

09:00 - 09:15 Presentacin de las actividades durante el Taller (Sra Deisy
Lopez)
09:15 - 09:30 Presentacin de los participantes
09:30 - 10:00 Aseguramiento de la Calidad de Muestreo. (Lisa Zeiller)
10:00 - 10:30 Caf
10:30 - 12:00 Resumen de las metodologas utilizadas para muestreo
(Representante del grupo de trabajo)
12:00 - 13:30 Almuerzo
13:30 - 15:00 Discusin metodologas muestreo parmetros ndice de calidad
de agua
15:00 - 15:30 Caf
15:30 - 17:00 Contina discusin

Martes, 6 de Mayo

08:30 - 10:00 Presentacin of compilacin medicin de elementos traza
10:00 - 10:30 Caf
10:30 - 12:00 Presentacin resultados ensayo de aptitud de laboratorio
regional (Sr. Luis Muoz)
12:00 - 13:30 Almuerzo
13:30 - 15:00 Discusin resultados ensayo de aptitud de laboratorio regional
15:00 - 15:30 Caf
15:30 - 17:00 Discusin de los mtodos de medicin de elementos traza del
ICA

8
Mircoles, 7 de Mayo

08:30 - 10:00 Presentacin mtodos compilados para la medicin de los 9
parmetros de calidad general del agua (pH, turbidez, etc.).
10:00 - 10:30 Caf
10:30 12:00 Discusin sobre mtodos compilados para la medicin de los 9
parmetros de calidad del agua.
12:00 - 13:30 Almuerzo
15:00 - 15:30 Caf

Jueves, 8 de Mayo

08:30 - 10:00 Trabajo por grupos para redaccin propuestas metodologas
armonizadas. Escribir los protocolos para el muestreo y el
anlisis de los parmetros y elementos traza (1 o 2 mtodos),
incluyendo referencias y estndares internacionales
10:00 - 10:30 Caf
10:30 - 12:00 Contina trabajo por grupos
12:00 - 13:30 Almuerzo
13:30 - 15:00 Presentacin de los resultados del trabajo en grupos y discusin
15:00 -15:30 Caf
15:30 - 17:00 Contina Discusin
19:00 Cena oficial

Viernes, 9 de Mayo

08:30 - 10:00 Redaccin informe Final
10:00 - 10:30 Caf
10:30 - 12:30 Redaccin informe Final
12:30 - 13:30 Almuerzo
13:30 - 15:00 ltima revisin del Manual de protocolos armonizados
15:00 - 15:30 Caf
15:30 - 17:00 Aprobacin del informe final de la reunin. Discusin sobre
futuras acciones en el proyecto. Clausura

A la reunin asistieron profesionales de las instituciones participantes
relacionados con la elaboracin e implementacin de planes de monitoreo, de
anlisis de las muestras y evaluacin de la calidad de los resultados analticos
de los 12 pases participantes del proyecto.
9

2.3. Conclusiones del Taller
La Tabla 1 presenta los procedimientos, formularios o registros
consensuados en este taller.

Tabla 1
Procedimiento Tcnicos
/ Formularios, PT & F
Grupos de procedimientos y
formularios
Nmero (01, 02..)
PT o F DA (Digestin Agua)
PT o F DS (Digestin Sedimentos)
PT o F MA (Metal Agua)
PT o F MS (Metal Sedimentos)
PT o F MuA (Muestreo Agua)
PT o F MuS (Muestreo Sedimentos)
PT o F Mu (Muestreo general)
PT o F FQA (Fisicoqumico Agua)

Ejemplo: Cdigo Procedimiento PT.FQA.04

2.3.1. Protocolos Consensuados y Evaluados
A continuacin se presentan los protocolos que han sido consensuados y
evaluados.
10
2.3.1.1. Plan Muestreo General

PROYECTO ARCAL
RLA/1/010 Mejora de la gestin de las masas de agua que estn contaminadas con metales
Cdigo del procedimiento:
PT-Mu-01
Nombre del procedimiento:
Plan Muestreo General
Fecha de aprobacin:
2008-05-08
Fecha de revisin:
2008-05-08

1. OBJETIVOS
1.1. Establecer los lineamientos generales para planificar una campaa de
muestreo en aguas superficiales (ros, lagos, embalses, arroyos, canales,
estanques y ambientes costeros) y sedimentos.
1.2. Recolectar una parte representativa de una poblacin, que sea lo
suficientemente pequea para ser transportada y lo suficientemente
grande para propsitos analticos
1.3. Garantizar que no se produzcan alteraciones significativas en su
composicin fsica, qumica o biolgica que pudieran alterar su
representatividad.
1.4. Armonizar las actividades de coleccin de muestras de agua y
sedimentos para todos los Grupos de trabajo en Amrica Latina que se
interesen en calcular el ICA (Taller Ro de Janeiro 2007) en aguas y que
quieren mejorar su mtodos de muestreo.

2. ALCANCE
Este procedimiento es aplicable a todos los parmetros seleccionados para
medir el ndice de calidad de agua del proyecto ARCAL RLA 1010 (Mejora
de la Gestin de la Contaminacin de Masas de Agua que estn
contaminadas con Metales).
2.1. PARMETROS DE MEDICIN EN CAMPO
11
pH, Temperatura, Conductividad, Oxgeno Disuelto (OD)
2.2. PARMETROS GENERALES Y ELEMENTALES DE MEDICIN EN
LABORATORIO
Turbiedad y/o Slidos totales suspendidos, Nitratos, In Amonio, Fsforo
total, Demanda Bioqumica de Oxgeno despus de 5 das (DBO5)
Elementos qumicos: Cd, Cr, Pb, Cu, Hg y As
2.3. PARMETROS BIOLGICOS
Coliformes fecales

Nota: temperatura no es un parmetro necesario para calcular el ICA pero es
necesario para establecer factores de correccin en la medicin de otros
parmetros.

3. ACCIONES PREVIAS:
Todos los grupos de trabajo pueden seguir los procedimientos relacionados a
tpicos de muestreo.

4. COLECCIN DE INFORMACIN
Para preparar un PLAN DE MUESTREO se debe coleccionar al menos la
siguiente informacin:
4.1. Objetivo del muestreo
Razn de muestreo y el uso de los resultados que se obtendrn de las
muestras colectadas
Parmetros que van ha ser medidos
Limites de cuantificacin necesarios para decisiones

Nota: La razn del muestreo esta definida por el proyecto RLA1010
12
Nota: Considerar la posibilidad de medir los 15 parmetros de ICA

4.2. Descripcin del cuerpo de agua que va ha ser evaluado
4.2.1. Extensin y volumen de agua: profundidad, caudal y batimetra
4.2.2. Topografa (Cartografa de la regin)
4.2.3. Afluentes y tributarios (ros, canales, acequias etc.)
4.2.4. Fuentes de contaminacin fijas y difusas naturales y
antropognicas (actividades reflejadas en el uso del suelo de la
cuenca: industriales, agrcolas, tursticas, extractivas como la
minera, centros urbanos, escorrenta, etc.)
4.2.5. Informacin sobre la zona de muestreo
4.2.6. Recopilacin de informacin de campaas de muestreo previas y
sus resultados para evaluar:
4.2.7. Variabilidad espacial y temporal
4.2.8. Heterogeneidad debido a: contaminacin de fuentes puntuales y
difusas, topografa, batimetra, caudal, etc.
4.2.9. Accesibilidad de los puntos de muestreo
4.2.10. Tiempo necesario para el traslado y muestreo desde cada
zona de inters

4.3. Mtodos que estn disponibles para las mediciones y el muestreo
4.3.1. Cantidad de agua o sedimento necesarios para medir los
parmetros con una incertidumbre aceptable

4.4. Mtodos no disponibles en bibliografa
4.4.1. Prever desarrollo de mtodos de muestreo y medida
13

5. Consideraciones y decisiones previas
5.1. Seleccin de puntos para muestrear
Para seleccionar los puntos de muestreo se pueden utilizar todas las
informaciones compiladas acordes a la razn del muestreo. Se
recomiendan las siguientes zonas de muestreo:
5.1.1. El origen de la fuente (para obtener informacin de base y la
composicin natural del agua)
5.1.2. Para cada tributario y afluentes importantes, seleccionar dos sitios
de muestreo uno arriba y uno abajo del punto de insercin.
5.1.3. Puntos de fuentes de contaminacin o contaminacin previsible.
5.1.4. El sitio extremo
5.1.5. Cuando el muestreo se realize en cuerpos lnticos tales como
lagos, presas, embalses y esteros, se colectarn las muestras de
afluentes y efluentes

Nota: Si existe estratificacin horizontal o vertical en lagunas o estuarios, se
deben considerar muestras de aguas adicionales.

Hay factores adicionales que influyen en la decisin de la seleccin de los
sitios de muestreo. Estos son factores relacionados con los recursos
econmicos de un proyecto y la logstica de una campaa de muestreo:
5.1.6. Accesibilidad del sitio para humanos y/o vehculos
5.1.7. Disponibilidad de vehculos terrestres y fluviales apropiados
5.1.8. Existencia y accesibilidad de las rutas para transportes (tiempo
necesario entre las zonas seleccionadas)
14
5.1.9. Recursos humanos disponibles con conocimiento y entrenamiento
necesario para las actividades previstas
5.1.10. Calidad y cantidad de recipientes (envases), materiales,
reactivos y equipos indispensables

Nota: Puede ser recomendable seleccionar menos puntos, pero no reducir la
calidad del muestreo.

6. LINEAMIENTOS GENERALES PARA UN MUESTREO REPRESENTATIVO
6.1. Las muestras deben ser representativas de las condiciones que existan
en el sitio a la hora de muestreo y tener el volumen suficiente, para
efectuar con l las determinaciones correspondientes.
6.2. Evitar zonas de embalse o turbulencias no caractersticas del cuerpo de
agua, a menos que sean el objeto de la evaluacin.
6.3. Elegir un punto donde el ro est lo mas regular, accesible y uniforme en
profundidad.
6.4. Restricciones al muestreo
6.4.1. Despus de un perodo de lluvia las muestras se tomarn cuando
el cuerpo de agua haya recuperado sus condiciones hidrolgicas
normales (caudal y cota).
6.4.2. Si el cuerpo de agua no es caudaloso y voluminoso no se debe
muestrear al medio da o con temperatura ambiente elevada (a
menos que este sea el objeto del estudio).
6.5. Considerar varios tipos de cuerpos de agua segn su profundidad

15
Tabla 1
Profundidad del punto de
muestreo (m)
Profundidad de muestreo por debajo
de la superficie (cm)
1,5 entre 20 -50
> 1,5 entre 20 -50 y profundidad media

6.6. Cuando se muestrea un punto aguas abajo de un afluente debe hacerse
a una distancia tal que se haya producido el mezclado completo de las
aguas. Esta distancia depende del caudal de rio, de la temperatura de las
dos corrientes de agua, de la densidad y del flujo de ambos.
6.7. El punto de mezclado se determina en forma precisa utilizando
trazadores conservativos, por ejemplo: conductividad, cloruros, etc.
En caso de no disponer de esta tecnologa, puede estimarse como:
El flujo mayor de las dos corrientes x tiempo estimado de mezcla (entre 3
y 5 minutos).
Ejemplo para 5 minutos y flujo de 1,25 m/s.
Distancia=1,25 (m/s) x 300 s=375 m
Nota: La zona de mezcla completa puede a veces apreciarse directamente
(por ejemplo apreciacin de color, conductividad o temperatura uniformes)
6.8. Elegir la distancia de muestreo desde la orilla del cuerpo de agua: Si es
posible colectar una muestra en el centro del cuerpo de agua y entre 1 y
2.5 m de distancia a ambos lados de la orilla.
6.9. Seleccionar una distancia apropiada para la toma de muestra, corriente
arriba del afluente. si es posible al menos 100m.
6.10. Cuando se trate de cuerpos de bajo flujo que desembocan en el
mar, o en estuarios, considerar la influencia de la contaminacin marina
de la zona costera en ese sector del ro. Esta influencia debe
16
determinarse a partir del seguimiento de trazadores conservativos tales
como: CE, concentracin de cloruros o trazadores radiactivos naturales.
6.11. En caso de no poder seguirse las consideraciones anteriores, se
recomienda tomar los valores presentados en la Tabla 2
Tabla 2
TIPO DE CORRIENTE SEGMENTO A CONSIDERAR
Rio grande (ms de 20 m de ancho) 10 km arriba del sitio de muestreo
Rio mediano (10 a 20 m de ancho) 5 km arriba del sitio de muestreo
Rio pequeo (3 a 9 m de ancho) 3 km arriba del sito de muestreo
Arroyo (menos de 3 m) 1 km arriba del sitio de muestreo

7. Nmero y tipo de muestra
El nmero de muestras a tomar depende de la variabilidad espacial, temporal
(estacional), cotas mxima y mnima del cuerpo de agua en estudio, la clase
de muestreo seleccionado (ver tabla 3), numero de afluentes y fuentes de
contaminacin existentes. El nmero de muestras puede ser el balance
realista y practicable entre un nmero ideal de muestras (estadstico),
usualmente numeroso y un nmero elegido por juicio profesional. El muestreo
simple contiene informacin detallada del punto muestreado y momento de
muestreo. Por el contrario el muestreo compuesto rene informacin
promedio de los sitios muestreados disminuyendo el nmero de muestras
pero perdindose la informacin de los puntos y momentos crticos de
contaminacin.
Tabla 3
Tipos de
muestreo
Definicin
Muestra Simple
Muestra individual tomada en un punto, a una
profundidad y en un tiempo determinado.
Muestra
Compuesta
Muestra obtenida mezclando en un recipiente varias
muestras discretas o simples de volmenes iguales o
17
ponderados
Azaroso
Muestreo realizado sobre el tendido de una malla
imaginaria en la cual se seleccionan nodos al azar
Sistemtico
Muestreo realizado sobre el tendido de una malla
imaginaria en la cual se seleccionan nodos en forma
regular
Juicio
profesional
Muestreo realizado de acuerdo al criterio sostenido
por el profesional responsable

8. CONSIDERACIONES ESTADSTICAS
Hay ms de un modo de calcular el nmero apropiado de muestras. El mas
simple depende de un aceptable nivel de incertidumbre (U), de la desviacin
estndar relativa del sistema (s) y de la desviante de la distribucin de
Student (t), que a su vez depende del nmero de muestras (N) y de la
confiabilidad requerida en la medida (p).
Nota: Observe que el clculo de N es implcito porque depende de t, que a su
vez depende de N.

2
) , (
.
|
|
\
|
U
s t
p
ec1

El valor de s puede estar referido a diferentes consideraciones de la
variabilidad, por ejemplo la variabilidad espacial, temporal o del mtodo de
medida.

Ejemplo para un sitio:
Clculo usando la variabilidad espacial: U=5% , s=5% , p=0.95
N5
Clculo usando la variabilidad del mtodo de medida ICP-MS: U=5%, s=0.1%,
18
p=0.95
N1
En este ejemplo se muestra que se deberan tomar 5 muestras y hacer una
medida para cada una de ellas obtenindose una confiabilidad final del 0.90
(0.95x0.95) dentro de una incertidumbre del 5%.

Si el valor estimado se encuentra entre cerca del lmite de deteccin del
mtodo se debe utilizar un algoritmo de clculo ms complejo, ver
www.acs-envchem.duq.edu/dqopro.htm

9. CONSIDERACIONES PRCTICAS
El nmero de muestras esta dictado por consideraciones prcticas tales
como:
9.1. Recursos disponibles (humanos y econmicos)
9.2. Materiales y reactivos disponibles para tomar, conservar y garantizar la
calidad de muestreo.
9.3. Tiempo necesario para muestrear y transportar
9.4. Capacidad de anlisis del laboratorio
9.5. Tiempo lmite para su procesamiento (maximum holding time MHT)

10. REDUCCIN DEL NMERO DE MUESTRAS
Para reducir el nmero de muestras estimadas sin perder informacin
importante se puede aplicar el juicio profesional. Algunas posibilidades son:
10.1. Reduccin del nmero de sitios y/o puntos de muestreo
o Similar topografa y geologa
o Similares resultados para muchos parmetros
19
10.2. Reduccin del nmero de muestras simples utilizando la tcnica de
muestras compuestas
o Pequea variabilidad en un sitio

Ambas decisiones pueden depender de los resultados de las visitas al campo,
campaa exploratoria o como consecuencia de los resultados de la primera
campaa de muestreo.

11. FRECUENCIA
La frecuencia de muestreo esta relacionada con el perodo de la variabilidad
estudiada. Esta puede ser debida a estaciones del ao, periodos de sequa o
lluvias, cotas mxima y mnima del sistema, frecuencia de volcado de
contaminantes, etc.
El ICA seleccionado en el proyecto RLA 1010 requiere un mnimo de 4
campaas por ao.

12. EQUIPOS de MUESTREO
12.1. Manuales
Si se dispone de una embarcacin sea a motor o a remos, se debe
orientar la proa en contra de la corriente y muestrear desde ella con un
recipiente de acero inoxidable o plstico.
Desde la costa se puede muestrear empleando una vara que suspende
al recipiente.
12.2. Automaticos
Bombas centrfugas o peristltica conectadas a mangueras de silicona de
calidad mdica.

20
SEDIMENTOS
El muestreo y anlisis del sedimento permite muchas veces observar
contaminacin adsorbida en el material particulado en suspensin (MPS) que no
es posible detectar en el agua, debido a sus bajas concentraciones. En este
proyecto se decidi medir en MPS, solamente los elementos trazas.
Los sedimentos pertenecientes al lecho del cuerpo de agua superficial no
requieren una frecuencia estacional de muestreo ya que registran cambios en
perodos de aos o dcadas. Se debe prestar particular atencin a la fraccin de
tamao de partcula arcilla.

13. SELECCIN DE PUNTOS DE MUESTREO
13.1. Para muestreo de MPS los puntos de muestreo deben coincidir
con los de muestreo de aguas.
13.2. Se debe considerar que los puntos elegidos sean accesibles al
muestreo en todas las campaas previstas.
13.3. Para muestrear el lecho se deben elegir zonas de acumulacin de
sedimentos.

14. SELECCIN DEL TIPO DE MUESTREADOR
Para MPS se recomienda filtrar la muestra de agua en el sitio de muestreo
con filtro de 0.45 m de tamao de poro y dispositivo de vaco.
Hay dos tipos de muestreadores utilizados comnmente para tomar muestras
de sedimentos de fondo: draga (grab) y cilndricos (core). Los muestreadores
tipo draga no permiten controlar adecuadamente la ubicacin y profundidad
de la muestra.
Para tomar muestras de sedimentos del lecho se utilizan los colectores
manuales o cilndricos que se cierran al levantarlos.

21
14.1. Muestreadores Dragas
Son recomendados para flujos muy lentos (lagunas, embalses,
etc.).
Son utilizados para tomar muestras de la porcin superficial del
sedimento de fondo y para comparaciones espaciales y temporales. Son
susceptibles a perder las fracciones ms finas del sedimento y dispersar
material frente a la onda de presin generada por el muestreador.
14.2. Colectores Manuales
Se trata de recipientes o cuencos de plstico para colectar
muestras de sedimentos del lecho en su porcin ms superficial.
Son recomendados para cursos pequeos que pueden
muestrearse por vadeo.

14.3. Muestreadores Cilndricos
Se utilizan para tomar muestras de sedimentos de fondo para
comparaciones temporales y espaciales y para estudios estratigrficos.
Pueden o no ser susceptibles a perder las fracciones ms finas del
sedimento y dispersar material frente a la onda de presin generada por
el muestreador y compactar el material.
Nota: en cuerpos de agua con poca profundidad pueden utilizarse tambin
muestreadotes cilndricos para suelos.

15. DETERMINACIN DEL NMERO DE MUESTRAS
El anlisis de MPS debe realizarse para cada muestra de agua tomada.
El anlisis del sedimento en el lecho es una informacin adicional para el
proyecto. Por razones prcticas (demanda de tiempo de muestreo, de
pretratamiento de muestras y anlisis) un nmero elevado de muestras tales
como lo exigira un muestreo estadstico no es econmicamente justificable.

22
16. PRETRATAMIENTO DE MUESTRAS DE SEDIMENTO (MPS O LECHO)
16.1. Los pretratamientos de muestras deben evitar la incorporacin de
contaminantes provenientes de los contenedores y equipos utilizados y
evitar prdidas por evaporacin de los componentes de la muestra o
calentamiento durante las operaciones de molienda y secado.
16.2. El secado del sedimento puede realizarse en estufa a 40C a
temperatura ambiente. En ambos casos debe evitarse la contaminacin
por el aire ambiente y la contaminacin cruzada.
16.3. Para el tamizado de la muestra se deben utilizar tamices de
plstico.
16.4. Para la molienda se deben utilizar morteros de gata o de un
material ausente en el objetivo del estudio (por ejemplo wolframio, titanio,
hierro, xido de circonio, etc)
16.5. Para los ataques qumicos se deben utilizar utensilios de Teflon y
mtodos que eviten contaminacin y prdidas de elementos.
Nota: considerar la posibilidad de incluir blancos de molienda, tamizado y
ataque qumico o en cualquier proceso que pudiese contaminar la muestra

17. CONSIDERACIONES PARA EL MUESTREO DE MEDICIONES EN EL
SITIO
17.1. Seleccionar los elementos de infraestructura, mecnicos y
elctricos necesarios para las mediciones (provisin de energa,
transporte de instrumental, bateras, bombas, agitadores, muestreadores,
recipientes para residuos, etc.)
17.2. Seleccionar los materiales de limpieza adecuados para los
instrumentos de medicin (solventes para lavar los electrodos, materiales
de secado, paos, papeles, etc.).
23
17.3. Seleccionar los estndares de calibracin de los instrumentos de
medicin.
17.4. Decidir si la medida se efctuar por inmersin directa de los
electrodos o con toma de muestras
17.5. Determinar el nmero de mediciones en cada punto
17.6. Considerar los elementos para realizar los blancos de equipo antes
y despus de las mediciones
17.7. Considerar los elementos para el acondicionamiento posterior a las
mediciones del instrumental utilizado (preservacin, embalaje y
transporte)

18. SELECCIN DE PROCEDIMIENTOS
Los procedimientos son dependientes del parmetro a medir, del mtodo de
anlisis y su lmite de deteccin, de la cantidad de muestra necesaria para
alcanzar este lmite, del mtodo y equipo de muestreo.
Tomar conocimiento de los protocolos de muestreo y analisis para cada
parmetro.

19. SELECCIN DE RECIPIENTES
Los recipientes deben ser adecuados para el muestreo de cada parmetro,
mtodo de anlisis y muestreo. Los siguientes puntos pueden ser
considerados:
19.1. Material adecuado al parmetro de medicin, por ejemplo: vidrio
borosilicato, polietileno de alta densidad, tefln.
19.2. Limpiar con un procedimiento apropiado para el mtodo de
muestreo y preservacin
19.3. Tomar en cuenta los problemas de contaminacin y evaporacin
24
19.4. Tamao adecuado para la cantidad de muestra
19.5. Resistencia a la rotura o bien protegido para el transporte
19.6. Resistencia a la temperatura de almacenamiento
La persona responsable para preparar los recipientes debe estar entrenada
con todos los mtodos para garantizar su acondicionamiento.

20. PRESERVACION Y ALMACENAMIENTO
Consideraciones necesarias para la preservacin y almacenamiento son:
20.1. Las muestras requieren almacenamiento a temperatura de 4C y/o
preservacin con qumicos para mantener su integridad durante el
transporte y antes del anlisis en el laboratorio.
20.2. Los preservantes qumicos ms comunes son cido clorhdrico,
ntrico, sulfrico e hidrxido de sodio del grado de pureza analtica
requerida por el mtodo de anlisis. Cumplir los protocolos de
manipulacin adecuados.
20.3. Las preservaciones deben ser adecuadas a los parmetros a
determinar y deben tomar en cuenta los mtodos de anlisis
20.4. Las cajas conservdoras, cooler o coleman usadas para el
transporte de las muestras debern ser apropiadas y de suficiente
tamao para almacenar las muestras tomadas, materiales de empaque y
de enfriamiento (hielo, ice pack, etc).
El personal responsable de la preparacin de los reactivos debe estar
capacitado para todos los procedimientos de preservacin y
almacenamiento.

21. CADENA DE CUSTODIA
La cadena de custodia es un requisito de ISO 17025. Se deben seguir los
procedimientos establecidos en el laboratorio. Es importante que el cdigo de
25
identificacin sea adecuado para las distintas muestras de cada lugar, para
diferentes parmetros, diferentes puntos de muestreo (muestras simples),
diferentes mtodos de preservacin, tipo de muestreo, etc.
Se recomienda que la lista del tipo de muestras a tomar y sus cdigos estn
definidos antes del muestreo.

22. PLANIFICACIN DE LA SECUENCIA Y DEL TIEMPO
La lista de muestras puede ser tambin la base para decidir la secuencia y el
tiempo para el muestreo. En general es importante que
22.1. El tiempo sea suficiente para:
o trasladarse entre los sitios de muestreo
o la operacin de muestreo
o registrar las muestras
22.2. La secuencia sea planificada para evitar
o recorridos innecesarios o repetidos
o problemas de contaminacin

Nota: Si se trata de muestrear un ro se debe avanzar siempre en
contracorriente.

Para la planificacin de la preservacin de las muestras, se debe tener en
cuenta prioritariamente:
22.3. estabilidad de la muestra
22.4. tiempo lmite para su procesamiento (maximum holding time MHT)
22.5. capacidad de almacenamiento y refrigeracin de las muestras en el
laboratorio
22.6. capacidad de anlisis del laboratorio

26
23. Contenido de protocolo de muestreo
El formato de contenido de protocolo de muestreo debe ser fijado antes de la
campaa de muestreo. Informaciones que son esenciales:
Fecha y hora del muestreo
Cdigo del punto de muestreo
Cdigo del muestro (siguiendo la cadena de custodia)
Descripcin clara y definida del punto de muestreo (coordenadas de
ubicacin del punto de muestreo (GPS), fotos, observaciones, etc)
Localidad, distrito, provincia y departamento
Fuentes de contaminacin (si son visibles)
Las condiciones climticas
Responsable del muestreo: datos personales de quien realiz la toma de
muestra
Tipo de muestras (agua, aguas compuestas, sedimentos)
Tipo de equipo o mtodo utilizado para el muestreo
Tipo de preservacin
Resultados de todas las mediciones realizadas en campo
Informaciones en muestras compuestas
Vigilancia y custodia de las muestras (por ejemplo numero de caja
transporte)
Otras observaciones pertinentes en el punto de muestreo
Firmas del personal participante en el proceso de control

Nota: adems completar un formato de campo se recomienda etiquetar las
muestras de modo que permitan la trazabilidad de toda la informacin del
muestreo.

24. ASEGURAMIENTO Y CONTROL DE CALIDAD
27
Aseguramiento y control de calidad (AC y CC) son parte esencial de todo
sistema de monitoreo. Comprende un programa de actividades (capacitacin,
calibracin de equipos y registro de datos) que garantizan que la medicin
cumple normas definidas y apropiadas de calidad con un determinado nivel de
confianza, o puede ser visto como una cadena de actividades diseadas para
obtener datos fiables y precisos.
Las funciones de control de calidad influyen directamente en las actividades
relacionadas con la medicin en campo, la calibracin de los equipos de
campo, registro de datos y la capacitacin. Para garantizar el xito del
programa, es necesario que cada componente del esquema del
aseguramiento y control de calidad se implemente de manera adecuada, para
lo cual debe tenerse en cuenta lo siguiente:
24.1. Asegurarse que los frascos de muestreos cumplan con los
requisitos tcnicos establecidos en el protocolo.
24.2. Enviar toda la documentacin (formatos, cadena de custodia,
etiqueta, oficios, etc) de las muestras asegurando que los datos de
campo no varen en su descripcin.
24.3. Es esencial que el personal de campo este entrenado para aplicar
las metodologas estandarizadas y aprobadas.
Para realizar el control de calidad aplicado al muestreo se requiere considerar
los siguientes blancos y duplicados de acuerdo a las determinaciones analticas:
24.4. Fsico Qumicos
24.4.1. Los blancos de equipo:
Son envases que contienen el agua del enjuague final de la
descontaminacin de los equipos. Una vez analizados, muestran la
efectividad de la limpieza de los equipos de campo. Colecte aquellos
blancos de equipo, despus del muestreo de agua subterrnea o
superficial, que posean la contaminacin ms alta. Uno por da de
muestreo es suficiente.
28
24.4.2. Los blancos de campo
Son envases que contienen agua desionizada llenados, etiquetados,
empaquetados, sellados en la estacin de muestreo y se envian al
laboratorio con las otras muestras. Este tipo de blancos de campo se
utilizan para investigar la contaminacin del laboratorio y durante la
colecta y envo de las muestras. Se requiere un blanco de campo por
cada da de muestreo.
24.4.3. Los blancos viajeros
Son envases que contienen agua desionizada preparados en el
laboratorio y se trasladan junto a los envases que se utilizaran en el
muestreo. Se mantienen en la misma hielera que las otras muestras
en cada fase del proceso de colecta, manejo y envo. Si se encuentran
contaminados, podra ser que la contaminacin ocurriera durante el
transporte de muestra o en el almacenaje en el laboratorio. Se
requiere por lo menos uno para cada envo de muestra.

24.4.4. Las muestras duplicadas
Se usan para verificar la precisin de la colecta de campo o el anlisis
de laboratorio. Cada diez muestras se debe preparar una muestra
duplicada de muestreo, que consiste en llenar dos envases con una
misma muestra de agua extrada del mismo lugar y en el mismo
tiempo. De esta forma se verifica la variabilidad en los resultados
debido al manipuleo, conservacin o contaminacin de las muestras
corrientes.
Tambin colecte una muestra duplicada de una estacin en dnde se
cree que hay niveles altos de un compuesto en particular.

24.5. Microbiolgico
24.5.1. Blanco Viajero:
29
Se coloca agua destilada estril en un envase de muestreo, se realiza
un anlisis de recuento de bacterias hetertrofas, para determinar que
el agua no contiene ningn microorganismo presente.
El blanco viajero se coloca en la misma caja de muestreo con el resto
de frascos, este se mantendr cerrado durante todo el tiempo de
muestreo, para luego ser analizado conjuntamente con las muestras.
Este blanco permite comprobar una posible contaminacin por el
transporte y procedimientos de almacenamiento en campo.
24.5.2. Duplicados de Muestreo:
Cada diez muestras se debe preparar una muestra duplicada de
muestreo, que consiste en llenar dos frascos con una misma muestra
de agua extrada del mismo lugar y en el mismo tiempo. De esta forma
se verifica la variabilidad en los resultados debido al manipuleo,
conservacin o contaminacin de las muestras corrientes.

25. LISTA DE VERIFICACIN DE ACTIVIDADES PARA ELABORAR EL PLAN
DE MUESTREO
Despus de haber considerado todos los puntos del plan de muestreo es
necesario hacer un inventario de las acciones que se necesitan llevar a cabo
a fin de evitar que la posible falta de previsin u olvido provoque el fracaso
parcial o total de la campaa. Para ello es conveniente contar con una lista
de items para tener en cuenta.

26. LISTA DE VERIFICACIN DE ACTIVIDADES
Razn del muestreo
Parmetros a muestrear
Procedimientos de muestreo especficos o especiales de cada parmetro
Mapa de los sitios que se van a muestrear
30
Lugar dnde se efectuarn las mediciones (a que distancia del grupo de
muestreo, en que tipo de terreno: llanura, desierto, selva, etc.)
Mapa de las rutas de acceso a los sitios de muestreo
poca del ao en que se realizarn las campaas
Condiciones meteorolgicas de la poca y de la zona (lluvias, nieve,
temperatura ambiente, etc.)
Nmero de muestras que se van a tomar en cada sitio
Lista de codificacin y documentacin de las muestras
Equipos existentes o que es necesario proveer
Periodicidad con que se realizarn las campaas
Horarios en que se efectuarn los muestreos
Infraestructura necesaria (energa, espacios de almacenamiento y
refrigeracin, etc.)
Comodidades para el personal: habitacional (hoteles, refugios, carpas,
etc.), facilidades para la alimentacin higiene y descanso.
Materiales y equipos que se necesitan transportar
Tipos y nmero de vehculos necesarios (terrestres y fluviales)
Tipo de personal que se necesita, cantidad y previsin de entrenamiento.
Elementos especiales de vestimenta para el personal
Medidas de seguridad que deben tomarse

27. REFERENCIAS:
[1] Mudroch A.M. y Azcue J.M., Manual of aquatic Sediment Sampling, Lewis
Publishers, (1995).
[2] Salomons W., Sediments and Water Quality. Sci. Technol. Lett., 6:315-
326, (1985).
[3] Secretara de Comercio y Fomento Industrial (SCFI) Proyecto de Norma
Mexicana PROY-MNX-AA-121-SCFI-2005: Muestreo de aguas naturales
epicontinentales, costeras y marinas, (2005).
31
[4] Protocolo de monitoreo de la calidad sanitaria de los recursos hdricos
superficiales, Direccin de Ecologa y Proteccin del Ambiente, Area de
Proteccin de los Recursos Hdricos, MINISTERIO DE SALUD, Direccin
General de Salud Ambiental DIGESA, Per (2007)
[5] Standard Methods For The Examination Of Water And Wastewater. APHA.
AWWA. WEF. 21th Edition, (2005)
[6] Normas Chilenas:
a) Norma Chilena NCh 411/1. Of.95 Calidad de Agua Muestreo - Parte 1:
Gua para el diseo de programas de muestreo.
b) Norma Chilena NCh 411/2. Of.96 Calidad de Agua Muestreo - Parte 2:
Gua sobre tcnicas de muestreo.
c) Norma Chilena NCh 411/3. Of.96 Calidad de Agua Muestreo - Parte 3:
Gua sobre la preservacin y manejo de las muestras.

Protocolo Cadena de Custodia

32

*Debe registrarse para DBO5 y coliformes
RLA/1/010

Cadena de Custodia
Muestreo de Agua Superficial No._______

PI-
Fecha Aprobacin
30-06-2008
Fecha de Revisin
30-06-2008
GENERALES
Fecha: Ubicacin de la zona (UTM)
Descripcin de la zona:

Identificacin de la(s)
muestra (s):

Hora de muestreo
T del agua (C)

MUESTREO
Preservantes: Si / No Para anlisis de:
Preservante:
Responsable:
Observaciones:

TRANSPORTE
Fecha: No. de Horas: T de Transporte (C) No. de Coleman o conservadora Responsable:
Observaciones:

ANLISIS IN SITU
Fecha Hora T emp. (C) pH C (S/cm) OD (mg/L) Responsable

RECEPCIN EN EL LABORATORIO
Envases en condiciones adecuadas? Si / No Fecha: Hora:
Etiquetas en condiciones adecuadas? Si / No
*T (C) del blanco de transporte
Observaciones:

Identificacin de la
muestra:

Cdigo dado por el
Laboratorio

Observaciones:

Responsable: Firma:
33

Fecha: Ubicacin de la zona (UTM)
Descripcin de la zona:

Identificacin de la(s)
muestra (s):

Hora de muestreo

MUESTREO
Tipo de muestreador:

Tipo de muestreo:
Responsable:
Observaciones:

TRANSPORTE
Fecha: No. de Horas: T de Transporte (C) No. de Coleman o
conservadora
Responsable:
Observaciones:

RLA/1/010

Cadena de Custodia
Muestreo de Sedimento No._______

PI-
Fecha Aprobacin
30-06-2008
Fecha de Revisin
30-06-2008
GENERALES
RECEPCIN EN EL LABORATORIO
Envases en condiciones adecuadas? Si / No Fecha: Hora:
Etiquetas en condiciones adecuadas? Si / No
*T (C) del blanco de transporte
Observaciones:

Identificacin de la
muestra:

Cdigo dado por el
Laboratorio

Observaciones:

Responsable:

Firma:
34
2.3.1.2. Muestreo de Agua Superficial
PROYECTO ARCAL
PT-MuA-01 MUESTREO DE AGUA SUPERFICIAL
Fecha Aprobacin
30-06-2008
Fecha de Revisin
30-06-2008

1. OBJETIVO
Establecer los lineamientos generales para el muestreo de aguas
superficiales que garanticen la representatividad de la muestra (en su
composicin fsica, qumica o biolgica) para su posterior anlisis.

2. ALCANCE
Este procedimiento ser aplicado dentro del marco del proyecto ARCAL
RLA/1/010 de la OIEA, el cual contempla la mejora en la gestin de aguas
contaminadas con elementos ecotxicos Adems podr ser aplicado por el
personal encargado de muestreo de agua, dentro de las actividades de
servicio, investigacin y monitoreo de aguas superficiales en los pases
participantes.

3. PRINCIPIO DEL METODO
La etapa de recoleccin de muestras es de suma importancia. Los resultados
de los mejores procedimientos analticos sern intiles si no se recolectan y
manipulan adecuadamente las muestras American Public Heal Association,
American Waer Works, Association Water Pollution Control Federation 20th
Edition, 1998.

4. EQUIPOS
4.1. EQUIPOS PARA MEDICIN EN CAMPO
Analizadores multipruebas o sondas multiparmetros. (Conductmetro,
35
Oxmetro, Potencimetro, termmetros, etc) para la medicin de pH, T,
OD, CE.

4.2. EQUIPOS DE MUESTREO
4.2.1. Botella de tipo Van-Dorn, Niskin o botellas de laboratorio
adecuados a los parmetros a analizar.
4.2.2. Cubeta de plstico para mezclado de muestras compuestas con
capacidad aproximada de 20 L.
4.2.3. Disco de Secchi.
4.2.4. Sistema de posicionamiento global (GPS).

4.3. PRESERVANTES
Los preservantes qumicos ms comunmente utilizados en anlisis de
agua son:
4.3.1. Acido Ntrico (HNO
3
)
4.3.2. Acido Sulfrico (H
2
SO
4
)
4.3.3. Acido Clorhdrico (HCl)
4.3.4. Alcali (NaOH)
4.3.5. Agentes declorantes (tiosulfato de sodio y otros)
4.3.6. Agente quelante (EDTA)
4.3.7. Refrigeracin a 42 C

4.4. MATERIALES
4.4.1. Bitcora o carpeta de campo.
4.4.2. Lista de chequeo.
4.4.3. Cadenas de custodia.
4.4.4. Tarjetas de consulta rpida para la operacin y calibracin de
equipos de medicin.
4.4.5. Cinta adhesiva.
4.4.6. Cinta mtrica (Wincha).
36
4.4.7. Cuerdas.
4.4.8. Pizeta o Frasco lavador
4.4.9. Pipetas, goteros y/o jeringas.
4.4.10. Cajas conservadoras, cooler, hieleras o coleman.
4.4.11. Baldes o Tinas.
4.4.12. Hielo, refrigerante o Icepack (gel 3M).
4.4.13. Botiqun.
4.4.14. Equipo de proteccin personal (Botas de goma, filtro solar,
gorras, etc.)
4.4.15. Cmara fotogrfica.
4.4.16. Linternas.
4.4.17. Brazo muestreador.
4.4.18. Cronmetro.
4.4.19. Agua destilada.
4.4.20. Preservantes.

5. REACTIVOS Y MATERIALES
5.1. REQUISITOS DE ENVASES Y PRESERVANTES
La funcin de la preservacin radica fundamentalmente en evitar o
disminuir al mximo posible, las reacciones qumicas, fsicas y biolgicas
que se puedan producir durante el transporte y almacenamiento de las
muestras en el periodo transcurrido entre su recoleccin y anlisis. Entre
estas se mencionan: actividad bacteriana, disolucin o precipitacin de
metales, adsorcin, volatilizacin, etc.
Todos los productos qumicos utilizados como preservantes deben ser de
calidad p.a. y dependiendo del tipo de ensayo y analito a determinar,
estos deben ser agregados a los envases, preferentemente como parte
de su preparacin o bien a las muestras inmediatamente despus de la
recoleccin, de manera de comenzar la preservacin desde el mismo
momento del muestreo.
37
Para asegurar el cumplimiento de las condiciones de envases y
preservantes antes sealadas, en la recoleccin de muestras de aguas
superficiales, se deben aplicar los requerimientos indicados en Tabla1, la
que adems indica el volumen mnimo de muestra a recolectar para el
anlisis de cada parmetro de inters.

Tabla 1. Requisitos de Envases y Preservantes.
Parmetro
Tipo de
envase
Volmen
minimo de
muestra
Tipo de
preservante
Condiciones de
almacenamiento
Tiempo mximo de
almacenamiento
Otros
pH P o V 100 ml No requiere Analizar en terreno
2 hrs. con
refrigeracin
Se recomienda
realizar el anlisis en
terreno
O.D. P o V 100 ml No requiere
Analizar en terreno
si se utiliza el
mtodo del
Electrodo
8 hrs. si se utiliza el
mtodo de Winkler

Conductivida
d
P o V 100 ml No requiere Refrigeracin 28 das
Se recomienda
realizar el anlisis en
terreno
Temperatura P o V 100 ml No requiere Tomar en terreno inmediato
Turbiedad P o V 100 ml En terreno
Refrigeracin y
guardar en
oscuridad
24 horas
DBO P o V 500 ml No requiere T 4C, < 24h; preferible<6h
Informar tiempo de
almacenamiento y
temperatura
NO3-N P o V 100 ml
No requiere si
se analiza
dentro de 24h
T 4C, < 24h; preferible<6h
Para periodos mas
largos (48 h) aadir
2mL H2SO4 conc./L y
T=4C
SDT P o V 200 ml No requiere Refrigeracin
preferible 24h;
mx. 7dias

SST P o V 100 ml No requiere T 4C, 24h
38
Fsforo Total
V para [P]
baja

100 ml
1mL HCl
conc./L o
refrigerar sin
aditivo
T 0-10C (sin
aditivo)
Refrigerado = 24h
Acidificado y
refrigerado = 1 mes
Lavar todos los
recipientes de vidrio
con HCl diluido
caliente. No usar
detergentes con
PO4
3
.
Amonio P 100 ml H2SO4 pH<2
pH<2 y
refrigeracin
7d
As P(A) o V(A) 1L HNO3 pH<2 pH<2 1 mes
Pb P(A) o V(A) 1L HNO3 pH<2 pH<2 1 mes
Cd P(A) o V(A) 1L HNO3 pH<2 pH<2 1 mes
Cr P(A) o V(A) 1L HNO3 pH<2 pH<2 1 mes
Cu P(A) o V(A) 1L HNO3 pH<2 pH<2 1 mes
Hg P(A) o V(A) 500mL
HNO3 exento
de Hg pH<2
pH<2 1 mes
Coliformes
totales
P o V estril 200 ml
0,3 ml de
EDTA 15% por
cada 120 ml de
muestra.
Refrigeracin entre
1-4C.
24 hrs.
Llenar el envase
hasta 3/4 de su
capacidad para
permitir la existencia
de cmara de aire.
V: Vidrio. P: Polietileno de Alta densidad.
P(A) o V(A): Envase enjuagado con cido ntrico1+1

5.2. Requisitos de tiempo mximo de almacenamiento y condiciones de
preservacin
Tan importante como que los envases y preservantes destinados a la
recoleccin de muestras sean los correctos, es minimizar el tiempo
transcurrido entre la recoleccin y el anlisis de las muestras, siendo este
un aspecto crtico en el monitoreo de calidad de aguas. En este perodo
estn includos tanto el tiempo de transporte, como el de almacenamiento
al interior de laboratorio en espera de los ensayos; en caso de que ese
tiempo sea prolongado existe riesgo de que ocurran una serie de cambios
en la composicin original de la muestra, dando lugar a resultados
errneos de los ensayos practicados (Tabla1).
39

5.3. REACTIVOS DE CALIBRACION PARA MEDICIONES IN SITU.

Debern ser de acuerdo a los procedimientos XXXXXXX

6. ACCIONES PREVIAS:
6.1. Revisin del itinerario adecuado a la cronologa del muestreo.
6.2. Comprobacin del buen funcionamiento de los equipos de muestreo.
6.3. Revisin y elaboracin de las listas de equipos y materiales.
6.4. Preparacin de reactivos qumicos (preservadores) y estndares de
calibracin en campo.
6.5. Preparacin del blanco viajero.
6.6. Revisin, verificacin y calibracin de equipos de medicin en campo.
Esta tarea se llevar a cabo siguiendo las recomendaciones del
fabricante de cada equipo.
6.7. Revisin y preparacin de recipientes (lavado y etiquetado) de
recipientes.
6.8. Revisin y verificacin de equipos de muestreo.
6.9. Preparacin de cadena de custodia y bitcora de campo.
6.10. Etiquetado de muestras
6.11. Nombre de Institucin/Laboratorio.
6.12. Codificacin de la muestra.
6.13. Georeferenciacin del punto de muestreo (GPS).
6.14. Fecha y hora de muestreo.
6.15. Parmetro a determinar.
6.16. Tipo de muestra.
6.17. Identificacin del responsable del muestreo.

7. DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO
40
Para la toma de muestras de agua superficiales, evitar las reas de
turbulencia excesiva, considerando la profundidad, velocidad de la corriente y
la distancia de separacin entre ambas orillas (Homogeneidad del punto de
muestreo).

Para la toma de muestras de agua superficial, se debe considerar el tipo de
cuerpo de agua:
7.1. CUERPOS DE AGUA LTICOS
7.1.1. Tomar datos de temperatura ambiental, temperatura del ro en el
punto de muestreo, condiciones meteorolgicas, hora, y ubicacin; y
anotarlo en el formato de cadena de custodia (Anexo 12.2).
7.1.2. Ubicarse en el punto de muestreo a travs de una lancha o el
medio adecuado para ello (Puente, brazo muestreador, etc).
7.1.3. De acuerdo a la profundidad, se tomarn muestras de agua
superficial (AS) o de media profundidad, cuando esta sea mayor a
1.5 m. (AMP) (Fig. 1)
7.1.4. Considerando la seccin transversal se tomarn 3 muestras
simples de 5lt. cada una, distribuidas a lo largo de la seccin
transversal, una en el centro y 2 a las orillas.
7.1.5. Homogeneizar las muestras simples recolectadas en una tina para
obtener una muestra compuesta (aproximadamente 15 lts.)
Determinar en esta, lectura de pH, T, y CE (Procedimientos XXXXX)
y reportar los valores obtenidos en la cadena de custodia.
7.1.6. Medir el OD en los 3 puntos de muestreo sobre el ro y reportar los
valores obtenidos en la cadena de custodia.
7.1.7. Se llenarn los frascos (considerando un espacio libre de
seguridad del 1% aproximadamente de la capacidad total) para la
determinacin de cada uno de los parmetros considerados segn el
plan de muestreo y especificaciones del laboratorio previa
preservacin de las muestras (Tabla 1).
41
7.1.8. Tomar el nmero de muestras de acuerdo a lo establecido en el
plan de muestreo y el parmetro a determinar.
7.1.9. Etiquetar y codificar cada una de las muestras.
7.1.10. Cada muestra ser sellada y colocada en una hielera
acondicionada a una temperatura entre 1 y 4 grados Celcius.
7.1.11. Considerar un espacio de alrededor del 1%
aproximadamente de la capacidad del envase (espacio de cabeza)
para permitir el espacio de la muestra.
7.1.12. La caja trmica y/o cooler deber ser sellada con cinta de
embalaje.
7.1.13. Las muestras y el formato de Cadena de Custodia con datos
de campo debern ser transportadas al laboratorio en el menor
tiempo posible.

7.2. CUERPOS DE AGUA LNTICOS
7.2.1. Se proceder de acuerdo a los mismos pasos del punto 7.1.2, con
la diferencia de que no se toma en cuenta una seccin transversal
para la toma de las 3 muestras simples.
7.2.2. Para la toma de muestras en Lagos y pantanos, se evitara la
presencia de espumas superficiales.

Primera Seccin Segunda Seccin
SEGMENTACIN DE LA TRANSVERSAL DEL RIO
50 CM 50 CM
a. AS:20-50 cm
b. AMP.
MS1 MS2 MS
3

42
Figura No. 1 Segmentacin de la Transversal del Ro

7.3. Registros del muestreo

7.3.1. Nombre y firma del muestreador;
7.3.2. Fecha y hora del muestreo;
7.3.3. Localizacin del punto de muestreo;
7.3.4. Identificacin de la muestra;
7.3.5. Hora de muestreo;
7.3.6. Condiciones meteorolgicas;
7.3.7. Nmero y tipo de recipientes;
7.3.8. Volumen de muestra;
7.3.9. Preservadores;
7.3.10. Analitos a determinar;
7.3.11. Anlisis de campo (pH, conductividad y temperatura, OD);
7.3.12. Condiciones de transporte;
7.3.13. Fecha y hora de recepcin;
7.3.14. Condiciones de recepcin;
7.3.15. Nombre y firma de quien recibe, y
7.3.16. Observaciones

8. MUESTREO PARA ANALISIS BACTERIOLOGICO
Las botellas para este propsito, limpias y esterilizadas, deben estar
protegidas hasta el momento en que se necesite llenarla.
La tapa debe estar recubierta con una cubierta de tela, papel resistente o
papel de aluminio para protegerla en el momento del muestreo.
Inmediatamente antes del muestreo la cubierta de papel y la tapa, deben ser
removidos de la botella, evitando contaminarlos.
43
Se llena la botella sin enjuagar y la tapa se coloca inmediatamente. Las
muestras se toman sosteniendo, la botella por la base y sumergindola
hacia abajo, a una profundidad de 0.3 m de la superficie.
La boca de la botella o recipiente se dirige hacia la direccin del flujo de
modo que los puntos del cuello queden haca arriba aproximadamente 45.
El agua, que entra a la botella no debe tener contacto con la mano que
sostiene la botella, si esto ocurre la muestra debe rechazarse.
Si este problema es debido a la turbulencia, se busca un punto donde esto
no ocurra o se usa un objeto para amarrar la botella.
Para la toma de muestras a profundidades especficas, se emplean
dispositivos de muestreo esterilizados.

9. ASEGURAMIENTO Y CONTROL DE CALIDAD
Aseguramiento y control de calidad (AC y CC) son parte esencial de todo
sistema de monitoreo. Comprende un programa de actividades (capacitacin,
calibracin de equipos y registro de datos) que garantizan que la medicin
cumple normas definidas y apropiadas de calidad con un determinado nivel de
confianza, o puede ser visto como una cadena de actividades diseadas para
obtener datos fiables y precisos.
Las funciones de control de calidad influyen directamente en las actividades
relacionadas con la medicin en campo, la calibracin de los equipos de
campo, registro de datos y la capacitacin. Para garantizar el xito del
programa, es necesario que cada componente del esquema del
aseguramiento y control de calidad se implemente de manera adecuada,
para lo cual debe tenerse en cuenta lo siguiente:
9.1. Asegurarse que los frascos de muestreos cumplan con los requisitos
tcnicos establecidos en el presente protocolo.
9.2. Enviar toda la documentacin (formatos, cadena de custodia, etiqueta,
oficios, etc) de las muestras asegurando que los datos de campo no
varen en su descripcin.
44
9.3. Es esencial que el personal de campo este capacitado para aplicar las
metodologas estandarizadas y aprobadas.
Para realizar el control de calidad aplicado al muestreo se requiere
considerar los siguientes blancos y duplicados de acuerdo a las
determinaciones analticas:
9.4. Fsico Qumicos
9.4.1. Los blancos de equipo: Consisten de envases llenos con el agua
final del enjuague de la descontaminacin de los equipos. Una vez
analizados, muestran la efectividad de la limpieza de los equipos de
campo. Colecte los blancos de equipo despus del muestreo del
agua subterrnea o superficial en la estacin con la contaminacin
ms alta. Uno por da del muestreo es suficiente.
9.4.2. Los blancos de campo: Son envases de agua desionizada que se
llenan en la estacin de muestreo, etiquetan, empaquetan, sellan y
se mandan al laboratorio con las otras muestras. Se usan los blancos
de campo para investigar la contaminacin en el laboratorio, y
durante la colecta y envo de las muestras. El laboratorio requiere un
blanco de campo por cada da del muestreo.
9.4.3. Los blancos viajeros: Son envases de agua desionizada
preparados en el laboratorio que se enva con los frascos de
muestreo. Se mantienen en la misma hielera que las otras muestras
en cada fase del proceso de colecta, manejo y envo. Si se
encuentran contaminados, podra ser que la contaminacin ocurriera
durante el transporte de muestra o en el almacenaje en el
laboratorio. Se requiere por lo menos uno para cada envo de
muestra.
9.4.4. Las muestras duplicadas: Se usan para verificar la precisin de la
colecta de campo o el anlisis de laboratorio. Se colectan los
duplicados a la vez que la muestra de la calidad del agua a una
cantidad de una en cada diez o 10% al da, lo que sea ms grande.
45
Colecte una muestra duplicada de una estacin en dnde se cree
que hay niveles altos de un compuesto en particular.

9.5. Microbiolgico
9.5.1. Blanco Viajero: Se coloca agua destilada estril en un frasco de
muestreo, se realiza un anlisis de recuento de bacterias
hetertrofas, para determinar que el agua no contiene ningn
microorganismo presente.
9.5.2. El blanco viajero se coloca en la misma caja de muestreo con el
resto de frascos, este se mantendr cerrado durante todo el tiempo
de muestreo, para luego ser analizado conjuntamente con las
muestras.
9.5.3. Este blanco permite comprobar una posible contaminacin por el
transporte y procedimientos de almacenamiento en campo.
9.5.4. Duplicados de Muestreo: Cada diez muestras se debe preparar
una muestra duplicada de muestreo, que consiste en llenar dos
frascos con una misma muestra de agua extrada del mismo lugar y
en el mismo tiempo. De esta forma se verifica la variabilidad en los
resultados debido al manipuleo, conservacin o contaminacin de las
muestras corrientes.
46

10. REFERENCIAS
[1] Standard Methods For The Examination Of Water And Wastewater.
APHA. AWWA. WEF. 21th Edition, (2005)
[2] Secretara de Comercio y Fomento Industrial (SCFI) (2005). Proyecto de
Norma Mexicana PROY-MNX-AA-121-SCFI-2005: Muestreo de aguas naturales
epicontinentales, costeras y marinas
[3] Protocolo de monitoreo de la calidad sanitaria de los recursos hdricos
superficiales, Direccin de Ecologa y Proteccin del Ambiente, Area de
Proteccin de los Recursos Hdricos, MINISTERIO DE SALUD, Direccin
General de Salud Ambiental DIGESA, Per (2007)
[4] Normas Chilenas:
a) Norma Chilena NCh 411/1. Of.95 Calidad de Agua Muestreo - Parte 1:
Gua para el diseo de programas de muestreo.
b) Norma Chilena NCh 411/2. Of.96 Calidad de Agua Muestreo - Parte 2:
Gua sobre tcnicas de muestreo.
c) Norma Chilena NCh 411/3. Of.96 Calidad de Agua Muestreo - Parte 3:
Gua sobre la preservacin y manejo de las muestras.

11. GLOSARIO
Aguas naturales: Se define como agua natural el agua cruda, subterrnea, de
lluvia, de tormenta, residual y superficial.
Agua de tormenta: Escurrimiento torrencial de agua superficial que fluye
hacia un cauce de agua como resultado de una lluvia intensa.
Bitcora de campo: Cuaderno de campo debidamente foliado e identificado,
en el cual los monitoreadores y/o analistas anotan todos los datos de los
procedimientos que siguen en el anlisis de una muestra, as como todas las
informaciones pertinentes y relevantes a su trabajo en el laboratorio. Es a
47
partir de dichas bitcoras que los inspectores pueden reconstruir el proceso
de anlisis de una muestra tiempo despus de que se llev a cabo
Calibracin: Conjunto de operaciones que establecen, bajo condiciones
especficas, la relacin entre los valores de una magnitud indicados por un
instrumento o sistema de medicin, y los valores representados por una
medida estndar.
Cadena de Custodia: Documento en el cual se lleva el registro de la
informacin que permite identificar las muestras, el sitio de muestreo y los
parmetros fisicoqumicos medidos in situ.
Cuerpos de agua superficiales. Son los lagos, lagunas, estuarios, redes
colectoras con excepcin de los sistemas de drenaje y alcantarillado urbano
o municipal, ros y sus efluentes directos o indirectos, permanentes o
intermitentes, presas, cuencas, cauces, canales, embalses, asequias, y
dems corrientes de agua.
Demanda bioqumica de oxgeno (DBO): Concentracin del oxgeno disuelto
consumido bajo condiciones especificadas por la oxidacin biolgica de la
materia orgnica, inorgnica o ambas, contenidas en el agua.
Ecosistema lntico: son cuerpos de agua cerrados que permanecen en un
mismo lugar sin correr ni fluir, como los lagos, las lagunas, los esteros, los
pantanos, etc.
Ecosistema ltico: sistema de agua corriente como en los ros, arroyos y
manantiales.
Ficha de registro de campo: Es un formato utilizado en la toma de muestras y
contiene la siguiente informacin: cdigo del punto de muestreo, origen de la
fuente, descripcin clara y definida del punto de muestreo, hora y fecha de
muestreo, localidad, distrito, provincia y departamento, coordenadas de
ubicacin del punto de muestreo, datos personales de quien realiz la toma
de muestra, las condiciones climticas y otras observaciones pertinentes en
el punto de muestreo.
48
Muestra Compuesta: Aquella que se obtiene mezclando varias muestras
discretas o simples de volmenes iguales.
Muestra representativa: Una porcin de agua o material que est
estrechamente identificado, lo ms posible en contenido y consistencia con el
gran cuerpo de agua o materia a ser muestreada
Muestra Simple: Muestra individual tomada en una localidad, a una
profundidad y en un tiempo determinado.
Muestreador: Aparato utilizado para tomar una muestra de agua, de manera
intermitente o continua, con el propsito de examinar diversas caractersticas
definidas.
Organismos coliformes fecales (termotolerantes): Comprende todos los
bacilos aerobios o anaerobios facultativos , Gram negativos , no esporulados
que fermentan la lactosa con produccin de cido y gas a 44C 1C en un
plazo de 24 h.
Preservacin de la muestra: Proceso en el cual, por medio de adicin de
productos qumicos o la modificacin de las condiciones fsicas o ambas, se
reducen al mnimo los cambios de las caractersticas de la muestra a
terminar durante el tiempo que transcurre entre el muestreo y al anlisis.
Punto de muestreo: Lugar preciso donde se tomar la muestra.
Red de muestreo: Sistema de zonas de muestreo preestablecidas a fin de
monitorear uno o ms lugares definidos.
Zona de muestreo: Lugar de estudio o sitio de medicin.

12. ANEXOS
12.1. MEDICION Y CALCULO DE CANTIDAD DE AGUA EN LOS
SITIOS DE TOMA DE MUESTRAS.
Para la medicin de caudales se realiza el aforo y batimetra del sitio de
toma de muestras, para ello se divide en tramos el ancho de la seccin
transversal del ro y en cada uno de ellos se miden las velocidades a
49
diferentes profundidades a travs de los molinetes; adems de ello se
reportan los datos de profundidad de cada uno de los tramos del ro.
Entonces el caudal obtenido en un aforo es la suma de los productos del
rea de cada subseccin y la velocidad promedio en la subseccin
respectiva.
Para calcular descargas individuales en cada subseccin se utiliza la
frmula general siguiente:
i
i i
i i
p
d d
V q *
2
) 1 ( ) 1 (
(

=
+

qi = descarga en la subseccin.
Vi= Velocidad promedio de la subseccin
d = distancia de la subseccin al punto del inicio del aforo
pi= profundidad de cada subseccin

La sumatoria de cada descarga nos dar el caudal de toda la seccin.

50
2.3.1.3. Determinacin de la demanda bioqumica de oxgeno
(DBO5) en aguas superficiales

PROYECTO ARCAL
PT-FQ-01
Determinacin de la demanda bioqumica de oxgeno (DBO5) en
aguas superficiales
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Establecer el mtodo de anlisis para la determinacin de la demanda
bioqumica de oxgeno.

2. ALCANCE
Se aplica a muestras de aguas superficiales.

El mtodo se basa en medir la cantidad de oxgeno que requieren los
microorganismos para efectuar la oxidacin de la materia orgnica presente.
La muestra o una dilucin adecuada de la misma es incubada por 5 das a 20
C en la oscuridad y la DBO5 se determina por la diferencia entre el oxgeno
disuelto inicial y el oxgeno disuelto al cabo de los 5 das de incubacin. Para
la determinacin de oxgeno disuelto se puede emplear diferentes mtodos:

a) El mtodo iodomtrico de la modificacin de azida (titulacin)

b) El mtodo de electrodo de membrana.

3.1. INTERFERENCIAS

pH alcalinos o cidos presentes en las muestras.
51
La presencia de cloro residual, metales o compuestos orgnicos
txicos no permiten el desarrollo de las bacterias que degradan la
materia orgnica.

4. EQUIPOS

Debe utilizarse el equipo normal de laboratorio, adems de:

4.1. Balanza analtica.
4.2. Incubadora para DBO controlado por termostato a 20 1C. Eliminar
toda la luz para evitar la posibilidad de produccin fotosinttica de
oxgeno disuelto.
4.3. Electrodo de membrana selectiva al oxgeno, con compensacin
automtica de temperatura y medidor apropiado (Oxmetro [ver 3. (b)])


5.1. REACTIVOS

Utilizar nicamente reactivos de grado analtico reconocido y agua
destilada o de pureza equivalente.

Sulfito de sodio (Na
2
SO
3
)
Cloruro frrico hexahidratado (FeCl
3
.6H
2
O)
Cloruro de calcio anhidro (CaCl
2
)
Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO
4
.7H
2
O)
Fosfato dibsico de potasio (K
2
HPO
4
)
Fosfato monobsico de potasio(KH
2
PO
4
)
Fosfato dibsico de sodio heptahidratado(Na
2
HPO
4
.7H
2
O)
Cloruro de amonio (NH
4
Cl)
Hidrxido de sodio (NaOH)
2-cloro-6 (triclorometil) piridina
52
Glucosa (C
6
H
12
O
6
)
cido glutmico (C
5
H
9
NO
4
)
cido sulfrico concentrado (H
2
SO
4
)
cido ntrico (HNO
3
)

5.2. SOLUCIONES

Solucin de cloruro frrico: Se disuelven 0,25 g de cloruro frrico
hexahidratado en agua destilada hasta completar un litro.
Solucin de cloruro de calcio: Se disuelven 27,5 g de cloruro de calcio
anhidro o su equivalente de sal hidratada en un litro de agua destilada.
Solucin de sulfato de magnesio: Se disuelven 22,5 g de sulfato de
magnesio heptahidratado en un litro de agua destilada.
Solucin amortiguadora de fosfato: Se disuelven 8,5 g de fosfato
monobsico de potasio, 21,75 g de fosfato dibsico de potasio, 1,7 g
de cloruro de amonio y 33,4 g de fosfato dibsico de sodio
heptahidratado (si no hay se sustituye por 20,0 g de fosfato dibsico de
sodio monohidratado 44,6 g de fosfato dibsico de sodio
dodecahidratado). Se ajusta el pH a 7,2 con hidrxido de sodio al 30 %
y se lleva a 1 L.
Solucin cida y alcalina 1N, para neutralizacin de muestras de
desecho alcalinas cidas.
Solucin cida: lentamente y mientras se mezcla, agregar 28 mL de
cido sulfrico concentrado en agua destilada. Diluir a 1 litro
Solucin alcalina: disolver 40 g de hidrxido de sodio en agua
destilada. Diluir a 1 litro.
Inhibidor de nitrgeno, 2-cloro-6(triclorometil) piridina.
Solucin de glucosa-cido glutmico: Secar la glucosa y el cido
glutmico a 103 C por 1 hora. Agregar 150 mg de gl ucosa y 150 mg
de cido glutmico en agua destilada y diluir a 1 litro. Preparar solucin
fresca inmediatamente antes de su uso.
53
Solucin de cloruro de amonio: Disolver 1,15g de cloruro de amonio en
aproximadamente 500 mL de agua destilada, ajustar el pH a 7,2 con
solucin de hidrxido de sodio, y diluir a 1 L. La solucin contiene 0,3
mg N/mL.
Solucin de sulfito de sodio: Disolver 1,575g de sulfito de sodio en
1000 mL de agua destilada. Esta solucin es poco estable, debe
prepararse diariamente.

5.3. MATERIALES

Debe emplearse cristalera normal de laboratorio, as como:

Frascos Winkler de vidrio para incubacin de 300 mL aforo total y con
boca estrecha, reborde y tapn de vidrio esmerilado, de forma cnica.
Contratapa de politetrafloroetileno u otro material plstico para botella
Winkler.

6. ACCIONES PREVIAS

6.1. LIMPIEZA DEL MATERIAL.

Todo material usado en la determinacin debe ser exclusivo para este
tipo de procedimiento. Para el lavado de material remojar durante una
hora en una solucin de cido sulfrico al 10% y enjuagar con agua. Los
detergentes con base de amonaco no deben usarse para la limpieza del
material.
En los casos de que el material presente grasas, enjuagar con acetona
y/o hexano.

6.2. MUESTRAS

54
No se debe agregar ningn preservador a las muestras. Se debe
conservar a 4C previo al anlisis. Reportar la dur acin y la temperatura
de almacenamiento con los resultados. Si el anlisis es comenzado
dentro de 2 horas de la colecta, el almacenamiento en fro es
innecesario.


7.1. Preparacin del agua de dilucin:

Colocar un volumen deseado de agua en un frasco apropiado y agregar
1 mL de cada una de las soluciones de buffer fosfatos, sulfato de
magnesio, cloruro de calcio y cloruro frrico por litro de agua.
Antes de utilizar el agua de dilucin debe llevarse a 20 C. Saturar con
oxgeno disuelto por agitacin en un frasco parcialmente lleno o por
medio de aireacin con aire filtrado y libre de orgnicos.
Alternativamente, almacenar en frascos tapados con algodn y que
sean lo suficientemente grandes como para saturarse con OD. Proteger
la calidad del agua utilizando cristalera limpia, pipetas y botellas.

7.2. Chequeo del agua de dilucin:

Si el agotamiento del oxgeno de un agua excede de 0,2 mg/L, se
obtiene un agua satisfactoria por mejoramiento de la purificacin a partir
de otra fuente. Alternativamente si la inhibicin de la nitrificacin es
usada, almacenar el agua de dilucin, inoculada y en un lugar oscuro a
temperatura ambiental hasta que el consumo de oxgeno est lo
suficientemente reducido para cumplir con el criterio de chequeo del
agua de dilucin. Chequear la calidad del agua de dilucin almacenada
en uso, pero no agregarle el inculo al agua almacenada para
mejoramiento de la calidad. El almacenamiento no es recomendable
55
cuando las DBO no sern determinadas sin inhibicin de la nitrificacin
debido a que los organismos nitrificantes pueden desarrollarse durante
el almacenamiento. Chequear el agua de dilucin almacenada para
determinar si existen remanentes suficientes de amonio despus del
almacenamiento. Si no lo posee agregar solucin de cloruro de amonio
para proveer un total de 0,45 mg de amonio por litro como nitrgeno. Si
el agua de dilucin no ha sido almacenada por el mejoramiento de la
calidad, agregar suficiente material de siembra para producir un
consumo de OD de 0,05 a 0,1 mg/L en 5 das a 20 C. Incubar botellas
de DBO llenas de agua de dilucin durante 5 das a 20 C. Determinar
el oxgeno disuelto inicial y final. El oxgeno disuelto consumido durante
los 5 das a 20 C no debera de ser ms de 0,2 mg /L y preferiblemente
no ms de 0,1 mg/L.

7.3. Chequeo con glucosa-cido glutmico:

Debido a que la prueba de DBO es un bioensayo sus resultados pueden
estar influenciados grandemente por la presencia de txico o por el uso
de un material de siembra muy pobre. Las aguas destiladas con
frecuencia estn contaminadas con cobre; algunos inculos de aguas
residuales son relativamente inactivos. Bajos resultados siempre son
obtenidos con tales inculos y aguas. Peridicamente chequear la
calidad del agua de dilucin, la efectividad de la siembra, y la tcnica
analtica haciendo mediciones de DBO en compuestos orgnicos puros
y en muestras con adiciones conocidas. En general, para las
determinaciones de DBO no se requiere de un inculo adaptado, usar la
solucin de glucosa-cido glutmico como una solucin estndar de
chequeo. La glucosa tiene excepcionalmente un alto y variable rango de
oxidacin, pero cuando es usada con cido glutmico, el rango de
oxidacin es estabilizado y es similar al que se obtiene con muchos
desechos municipales. Alternativamente, si un agua residual contiene
56
un constituyente mayor que contribuya al DBO, usar este compuesto en
lugar de glucosa-cido glutmico. Determinar el DBO a los 5 das a 20
C de una dilucin al 2% de solucin estndar de ch equeo de glucosa-
cido glutmico.

7.4. Inoculacin

7.4.1. Fuente de inculo
Es necesario tener presente una poblacin de microorganismos
capaces de oxidar la materia orgnica biodegradable en la
muestra. Algunas aguas superficiales no contienen suficiente
poblacin microbiana; para tales muestras sembrar el agua de
dilucin por medio de la adicin de poblaciones de
microorganismos. El inculo preferido es el efluente procedente de
los sistemas de tratamiento biolgico para desechos. En donde no
es posible, usar el sobrenadante procedente de las aguas
residuales domsticas despus de sedimentarlas a temperatura
ambiental por lo menos durante 1 hora pero no ms de 36 horas.
Cuando el efluente procedente de tratamiento biolgico es usado,
se recomienda la inhibicin de la nitrificacin.

7.4.2. Control del inculo
Determinar el DBO del material inoculado como para cualquier otra
muestra. Del valor del control del inculo y del conocimiento de la
dilucin del material de siembra (en el agua de dilucin) determinar
el consumo de oxgeno disuelto. Idnticamente hacer diluciones
del inculo tal como la mayor cantidad de resultados en por lo
menos 50% del consumo de oxgeno. Un grfico del consumo de
oxgeno disuelto, en mg/L, versus mL de inculo deberan de
presentar una lnea recta, para la cual la pendiente indica el
consumo de oxgeno disuelto por mL de inculo. El intercepto de
57
eje del oxgeno disuelto, es el consumo de oxgeno causado por el
agua de dilucin y debe ser menor que 0,1 mg/L. Para determinar
el consumo de oxgeno disuelto de una muestra restar el consumo
de oxgeno disuelto del inculo del total de oxgeno disuelto
consumido. El oxgeno disuelto consumido por el agua de dilucin
inoculada debera estar entre 0,6 y 1,0 mg/L.

7.5. Pretratamiento de las muestras

7.5.1. En muestras conteniendo alcalinidad custica o acidez,
neutralizarlas a pH de 6.5 a 7.5 con solucin de cido sulfrico de
hidrxido de sodio, de tal forma que la cantidad de reactivo no diluya
la muestra por ms de 0,5%. El pH del agua de dilucin inoculada no
debe de ser afectada por las diluciones mas bajas de la muestra.

7.5.2. Muestras conteniendo compuestos de cloro residual: si la muestra
ha sido clorada y el cloro residual no es detectable inocular la
muestra con el agua de dilucin. Para muestras en las cuales el cloro
residual no se disipa en un tiempo razonable destruirlo por medio de
la adicin de solucin de sulfito de sodio. Determinar el volumen
requerido de sulfito se sodio en una porcin de muestra neutralizada
de 100 a 1000 mL por medio de la adicin de 10 mL de cido
actico (1:1) o cido sulfrico (1:50), 10 mL de solucin de yoduro
de potasio (10g/100 mL) por porciones de 1000 mL. Titular con sulfito
de sodio hasta el punto de finalizacin utilizando almidn como
indicador. Agregar a la muestra neutralizada el volumen de sulfito de
sodio obtenido en el procedimiento anterior, mezclar y dejar reposar
de 10 a 20 minutos y verificar la presencia de cloro residual en la
muestra.

58
Nota: el exceso de sulfito de sodio reacciona lentamente con
compuestos de cloraminas orgnicas

7.5.3. Muestras conteniendo otras sustancias txicas. Ciertos desechos
industriales, por ejemplo, desechos de industrias metalrgicas,
contienen metales txicos. Tales muestras a menudo requieren
especial estudio y tratamiento.

7.5.4. Muestras supersaturadas con oxgeno disuelto. Muestras
conteniendo ms de 9 mg/L de oxgeno disuelto a 20 C pueden ser
encontradas en las aguas fras o en aguas donde ocurre la
fotosntesis. Para prevenir la prdida de oxgeno durante la
incubacin de tales muestras, reducir el oxgeno disuelto a la
saturacin a 20 C poniendo la muestra a una temper atura cercana a
20 C en un frasco parcialmente lleno y agitando vi gorosamente o
por medio de aireacin con aire comprimido limpio y filtrado.

7.5.5. Ajuste de la temperatura de la muestra. Llevar las muestras a 20
1 C antes de hacer las diluciones.

7.5.6. Inhibicin de la nitrificacin. Si la inhibicin de la nitrificacin es
deseada, agregar 3 mg de 2 cloro-6-(triclorometil) piridina (TCMP) a
cada botella de 300 mL antes de taparlas o de agregar suficiente
cantidad de agua de dilucin para hacer su concentracin final de 10
mg/L. (Nota: El TCMP puro puede disolverse lentamente y puede
flotar en la parte superior de la muestra. Algunas formulaciones
comerciales se disuelven ms fcilmente, pero no en un 100%,
ajustar las dosis). Las muestras pueden requerir inhibicin de la
nitrificacin y esta no solo incluye a los efluentes biolgicamente
tratados, sino tambin a muestras inoculadas con efluentes tratados
59
biolgicamente y aguas de ros. Anotar el uso de inhibidor de
nitrgeno en los resultados.

7.5.7. Tcnica de dilucin. Las diluciones que resultan con un oxgeno
disuelto residual de por lo menos 1 mg/L y un consumo de oxgeno
disuelto de por lo menos 2 mg/L despus de los 5 das de incubacin
produce los resultados ms confiables. Hacer varias diluciones de
muestra preparada para obtener un consumo de oxgeno dentro de
este rango. Se recomienda el uso de cinco diluciones. La experiencia
con muestras particulares permitir el uso de un menor nmero de
diluciones. Un anlisis ms rpido, tal como el DQO, puede
correlacionarse aproximadamente con el DBO y servir como gua en
la seleccin de las diluciones. En ausencia de conocimiento previo,
usar las siguientes diluciones:

Rango de % de
dilucin
Tipo de muestra
0,0 a 1 para desechos industriales fuertes
1 a 5
para aguas crudas y aguas de
desecho sedimentadas
5 a 25
para efluentes tratados
biolgicamente
25 a 100 para aguas de ros contaminados

Preparar cada dilucin en probetas y luego transferirlas a las botellas de
DBO, prepararlas directamente en las botellas de DBO. Cada mtodo
de dilucin puede ser combinado con cualquier tcnica de medicin de
oxgeno disuelto. El nmero de botellas preparadas para cada dilucin
depende de la tcnica de oxgeno disuelto y el nmero de duplicados
deseados.
60
Cuando se utilizan probetas para preparar las diluciones, y cuando la
inoculacin es necesaria, agregar el inculo directamente al agua de
dilucin a cada probeta individualmente antes de la dilucin.
Preparacin de la dilucin directamente en las botellas de DBO.
Utilizando una pipeta volumtrica, agregar el volumen deseado de
muestra individualmente a las botellas de DBO de capacidad
conocida. Agregar cantidades adecuadas de material de inoculacin
a las botellas individuales de DBO al agua de dilucin. Llenar las
botellas con suficiente agua de dilucin, inoculada si es necesario,
de tal manera que el tapn sellador desplace todo el aire sin dejar
burbujas. Para diluciones mayores a 1:100 hacer una dilucin
primaria en una probeta antes de hacer la dilucin final en la botella.
Cuando se utiliza el mtodo de titulacin para mediciones de oxgeno
disuelto, preparar dos botellas de cada dilucin. Determinar el oxgeno
disuelto inicial en una botella. Tapar fuertemente la segunda botella,
hacer sello de agua, e incubar por 5 das a 20 C. Si el mtodo del
electrodo de membrana es utilizado para la medicin del oxgeno
disuelto inicial, preparar solamente una botella para cada dilucin.
Determinar el oxgeno disuelto inicial y reemplazar el contenido
desplazado con agua de dilucin para llenar la botella. Tapar
fuertemente, hacer sello de agua, e incubar por 5 das a 20 C. Lavar el
electrodo de oxgeno disuelto entre cada determinacin para prevenir la
contaminacin cruzada de cada una de las muestras.

7.5.8. Determinacin del oxgeno disuelto inicial. Si las muestras
contienen material que reacciona rpidamente con el oxgeno
disuelto, determinar el oxgeno disuelto inicial inmediatamente
despus de llenar la botella con la muestra diluida. Si el consumo
rpido de oxgeno disuelto inicial es insignificante, el perodo de
tiempo entre la preparacin de la dilucin y la medicin del oxgeno
disuelto inicial no es crtico, pero no debe exceder los 30 minutos. La
61
determinacin de oxgeno disuelto puede ser realizado segn las
metodologas sealadas anteriormente (3. Principio del mtodo)

7.5.9. Blanco del agua de dilucin. Usar un blanco del agua de dilucin
como un control de calidad aproximado en el agua de dilucin no
inoculada. El consumo de oxgeno disuelto no debe de ser mayor de
0.2 mg/L y preferiblemente no ms de 0.1 mg/L. Descartar toda el
agua de dilucin que tenga un oxgeno disuelto mayor a 0.2 mg/L .

7.5.10. Incubacin. Incubar a 20 1 C las botella s de DBO conteniendo
las diluciones deseadas, controles de inoculacin, blancos del agua
de dilucin, y chequeos con glucosa-cido glutmico. Hacerles sello
de agua a las botellas.

7.5.11. Determinacin del oxgeno disuelto final: Despus de 5 das de
incubacin determinar el oxgeno disuelto en las diluciones de las
muestras, blancos y chequear como en 7.5.8.

8. CALCULOS Y EXPRESION DE RESULTADOS
8.1. Cuando el agua de dilucin no est inoculada:
P
D D
L / mg , DBO
2 1
5

=

8.2. Cuando el agua de dilucin est inoculada:
P
f ) B B ( ) D D (
L / mg , DBO
2 1 2 1
5

=

donde;

D
1
= OD de la muestra diluida inmediatamente despus de la preparacin,
mg/L
D
2
= OD de la muestra diluida despus de 5 das de incubacin a 20 C, mg/L
62
P = fraccin volumtrica decimal de muestra usada,
B
1
= OD del control del inculo antes de la incubacin, mg/L
B
2
= OD del control del inculo despus de la incubacin, mg/L
f = Cantidad de inculo en la muestra diluida para sembrar el control del
inculo
inculo de control el en inculo de
diluida muestra la en inculo de
f
%
%
=

Si el material de inoculacin es agregado directamente en las botellas de la
muestra en la de control del inculo:

inculo de control el en inculo de volumen
diluida muestra la en inculo de volumen
f =

Reportar los resultados como DBO
5
Carbonceo si se ha inhibido la
nitrificacin.
Si ms de una dilucin de la muestra cumple con el criterio de un oxgeno
disuelto residual de por lo menos 1 mg/L y el consumo de oxgeno disuelto es
de por lo menos 2 mg/L y no hay evidencia de toxicidad a concentraciones
mayores de muestra la existencia de una anormalidad obvia, promediar los
resultados en un rango aceptable.
En esos clculos, no hacer correcciones para el consumo de oxgeno disuelto
por la dilucin del blanco del agua de dilucin durante la incubacin. Esta
correccin es innecesaria si el agua de dilucin cumple con el criterio del
blanco estipulado arriba. Si el agua de dilucin no cumple con ese criterio, las
correcciones apropiadas son difciles y los resultados pueden volverse
dudosos.

8.3. PRECISIN Y SESGO DE LOS RESULTADOS

63
No existen mediciones para establecer el sesgo del procedimiento de
DBO. El chequeo con la glucosa-cido glutmico tiene por objetivo ser un
punto de referencia para la evaluacin de la calidad del agua de dilucin,
efectividad del inculo, y de la tcnica analtica.

8.3.1. Lmites de control
Cada laboratorio, puede establecer su lmite de control por medio de
la realizacin de un mnimo de 25 chequeos con glucosa-cido
glutmico sobre un perodo de varias semanas o meses y calculando
el promedio y la desviacin estndar. Usar la media y 3
desviaciones estndar como lmite de control para futuros chequeos
de glucosa-cido glutmico. Si los lmites de control estn fuera del
rango de 198 30.5, reevaluar los lmites de control e investigar la
fuente del problema. Si el DBO medido por el chequeo de glucosa-
cido glutmico est fuera del rango de control aceptado, rechazar
las pruebas hechas con ese inculo y con esa agua de dilucin.

8.3.2. Rango de trabajo y lmite de deteccin
El rango de trabajo es igual a la diferencia entre el oxgeno disuelto
inicial (de 7 a 9 mg/L) y el oxgeno disuelto residual mnimo de 1
mg/L multiplicado por el factor de dilucin. El lmite de deteccin ms
bajo de 2 mg/L es establecido por los requerimientos de un mnimo
de disminucin de oxgeno disuelto de 2 mg/L

9. REFERENCIAS

[1] Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. Method
5210 B 20
th
Edition. 2000. American Public Health Association, American Water
Works Association, Water Environment Federation.

64
[2] NMX-AA-028-SCFI-2001 - Secretara de la Economa de DGN de
los Estados Unidos Mexicanos, Anlisis de aguas-Determinacin de la
demanda bioqumica de oxgeno en aguas naturales, residuales
(DBO5) y residuales tratadas.
65
2.3.1.4. Determinacin de amonio (NH4+). Mtodo titulomtrico
previa destilacin
PROYECTO ARCAL
PT-FQ-02
Determinacin de amonio (NH4
+
).
Mtodo titulomtrico previa destilacin.
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Describir el procedimiento para cuantificar el contenido de amonio utilizando
el mtodo titulomtrico previa destilacin.
2. ALCANCE
Este procedimiento es aplicable para el anlisis de muestras de aguas
superficiales. Es usado especialmente para concentraciones de NH
3
-N
mayores de 5 mg/L.
El pH de la muestra se ajusta a 9,5 con buffer borato para evitar la hidrlisis
de los cianatos y los compuestos orgnicos de nitrgeno. El destilado es
recogido en cido brico para ser valorado posteriormente con solucin de
cido sulfrico.
4. EQUIPOS
4.1. Aparato de destilacin
Utilizar un baln de destilacin de borosilicato de 800-2000 mL de
capacidad, acoplado a un condensador. Colocar en el extremo de ste
una tubuladura lateral que debe quedar sumergida por debajo de la
superficie del recipiente que contiene la solucin de cido brico.
4.2. Medidor de pH.
5.1. REACTIVOS
66
Utilizar nicamente reactivos de grado analtico reconocido y agua libre
de amonio para preparar todas las soluciones, para el lavado de la
cristalera y la dilucin de la muestra.

Tetraborato de de sodio. Na
2
B
4
O
7.
10H
2
0
Hidrxido de sodio. NaOH
Tiosulfato de sodio. Na
2
S
2
O
3
.5H
2
O
Indicador rojo de metilo.
Azul de metileno. C
6
H
18
CIN
3
S.H
2
O
Acido brico. H
3
BO
3

Acido sulfrico. H
2
SO
4

5.2. SOLUCIONES

Solucin de tertraborato de sodio 0,025 M. Disolver 9,5 g de Na
2
B
4
O
7
.
10 H
2
O en un litro de agua.
Solucin amortiguadora de borato. Adicionar 88 mL de NaOH 0,1 N a
aproximadamente 500 mL de solucin de borato de sodio 0,025 M y
diluir a 1L.
Hidrxido de sodio 6N. Disolver lentamente 240 g de NaOH en 1 L de
agua. CUIDADO: Usar equipo de proteccin personal.
Reactivo para eliminar el cloro. Disolver 3,5 g de tiosulfato de sodio en
agua y diluir a 1 litro. Preparar semanalmente. Use 1 mL de reactivo
para remover 1mg/L de cloro residual en 500 mL de muestra.
Mezcla de indicadores: Disolver 200 mg del indicador rojo de metilo en
100 mL de alcohol etlico o isoproplico al 95 %. Disolver 100 mg de
azul de metileno en 50 mL de alcohol etlico o isoproplico al 95 %,
mezclar ambas disoluciones. Preparar mensualmente.
67
Solucin indicadora de cido brico. Disolver 20 g de H3BO3 en agua
y agregar 10 mL de la mezcla de indicadores y diluir a 1L. Preparar
mensualmente.
Solucin estndar de cido sulfrico 0,02 N.

5.3. MATERIALES
Debe emplearse cristalera normal de laboratorio.
6. ACCIONES PREVIAS
No corresponde
7.1. Acondicionamiento del sistema de destilacin.
Colocar 500 mL de agua libre de amonio en un beaker y adicionar 20
mL de la solucin amortiguadora de borato. Ajustar el pH a 9,5 con
solucin de hidrxido de sodio 6 N y trasvasar al baln de destilacin.
Adicionar unas cuentas de vidrio o perlas de ebullicin e iniciar el
proceso de destilacin. Desechar la solucin obtenida.
7.2. Preparacin de la muestra.
Se toman 500 mL de muestra libre de cloro o una porcin diluida de la
muestra. Si la concentracin de amonio es menor a 100 g/L, usar un
volumen de muestra de 1000 mL. Si es necesario, neutralizar a pH 7
con cido o base diluidos usando el pH metro.
Adicionar 25 mL de la solucin amortiguadora de borato y ajustar el pH
a 9,5 con solucin de hidrxido de sodio 6 N usando el pH metro.
Transferir la solucin al baln de destilacin y aadir unas cuentas de
vidrio o perlas de ebullicin. Conectar ste al aparato de destilacin.
7.3. Destilacin.

Destilar la muestra, cuidando que la temperatura del condensador no
pase de 29 C. Recolectar el condensado en un erlen meyer de 500 mL
68
con la punta de la tubuladura lateral sumergida en 50 mL de solucin
indicadora de cido brico.
La destilacin se completa cuando se hayan recolectado 300 mL de
destilado aproximadamente, incluyendo los 50 mL de la solucin
indicadora de cido brico.
Retirar el erlenmeyer de la tubuladura lateral.
Preparar un blanco con 500 mL de agua y darle el mismo tratamiento
que a la muestra.
7.4. Determinacin de amonio.
Titular con solucin de cido sulfrico 0,02 N, hasta que la solucin vire
de un verde esmeralda a morado.


) (
280 ) (
/
3
mL muestra
B A
L mgH

=

donde;
A = Volumen (mL) de H
2
SO
4
empleado en la valoracin de la muestra.
B = Volumen (mL) de H
2
SO
4
empleado en la valoracin del blanco.

9. REFERENCIAS

[1] Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 20
th.
Edition. 2000. Method 4500-NH
3
B. American Public Health Association,
American Water Works Association, Water Environment Federation.

69
2.3.1.5. Determinacin de amonio (NH
4
+
). Mtodo fenato

PROYECTO ARCAL
PT-FQ-03
Determinacin de amonio (NH4
+
).
Mtodo fenato.
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Describir el procedimiento para cuantificar el contenido de amonio utilizando
el mtodo de fenato.
2. ALCANCE
Se aplica para el anlisis de muestras de aguas superficiales y es lineal hasta
0,6 mg NH
3
-N/L.
La reaccin entre el amonio, el hipoclorito y el fenol produce un compuesto de
color azul intenso llamado indofenol, el cual absorbe a 640 nm con un
recorrido de luz de 1 cm. La reaccin es catalizada por el nitroprusiato de
sodio.
3.1. INTERFERENCIAS:
Las interferencias causadas por el calcio y el magnesio se eliminan
acomplejndolos con citrato, lo que evita que precipiten a valores de pH
alto. Si existe sulfuro de hidrgeno (H2S) se remueve acidificando la
muestra con cido clorhdrico diluido a pH 3 y agitando vigorosamente,
hasta que el olor no se detecte.

4. EQUIPOS
4.1. Espectrofotmetro de rango visible para medir a 640 nm.

70
5.1. REACTIVOS
Utilizar nicamente reactivos de grado analtico reconocido y agua libre de
amonio para preparar todas las soluciones, para el lavado de la cristalera y la
dilucin de la muestra.

Fenol. C
6
H
6
O
Nitroprusiato de sodio. C
5
FeN
6
Na
2
O . 2H
2
O
Citrato trisdico. C
6
H
5
Na
3
O
7.
2H
2
O
Hipoclorito de sodio NaClO
Cloruro de amonio. NH
4
Cl
Etanol. C
2
H
6
OH

5.2. SOLUCIONES
Solucin de fenol. Mezclar 11,1 mL de fenol lquido ( 89 %) con etanol al
95 % hasta llegar a un volumen final de 100 mL. CUIDADO: Preparar en
un lugar con la ventilacin apropiada para evitar sobreexposicin y con
equipo de proteccin personal.
Solucin de nitroprusiato de sodio, 0,5%. Disolver 0,5 g de nitroprusiato
de sodio en 100 mL de agua desionizada. Almacenar en botella mbar
mximo por un mes.
Solucin de citrato alcalino: Disolver 200 g de citrato trisdico y 10 g de
hidrxido de sodio en agua desionizada. Diluir a 1L.
Hipoclorito de sodio, solucin comercial al 5 % aproximadamente: Esta
solucin se descompone lentamente despus de haber roto el sello de la
botella. Reemplazar cada dos meses.
Solucin oxidante: Mezclar 100 mL de la solucin de citrato alcalino con
25 mL de la solucin de hipoclorito de sodio. Preparar inmediatamente
antes de utilizar.
71
Solucin patrn de Amonio: Disolver 3,819 g de NH
4
Cl anhidro
(previamente desecado a 100 C por 2 h) en agua y diluir a 1 L. 1 mL = 1
mg N = 1,22 mg NH
3
.
Solucin estndar de amonio: Usar la solucin patrn de amonio y el
agua para preparar la curva de calibracin en el intervalo apropiado de la
muestra.

5.3. MATERIALES
Debe emplearse cristalera normal de laboratorio a dems de:
Cubetas de vidrio o cuarzo de 1 cm.

6. ACCIONES PREVIAS
No corresponde.
Tomar 25 mL de la muestra y colocar en un erlenmeyer de 50 mL. Agregar en el
siguiente orden y agitar despus de cada adicin: 1 mL de la solucin de fenol,
1 mL de la solucin de nitroprusiato de sodio y 2,5 mL de la solucin oxidante.
Cubrir la boca del erlenmeyer con papel parafina y dejar que el color se
desarrolle a temperatura ambiente, en un lugar con luz tenue como mnimo 1 h.
El color es estable por 24 h.
Medir la absorbancia de las muestras por duplicado a 640 nm.
Preparar un blanco y al menos 5 estndares a partir de la solucin stock de
amonio. Realizarles el mismo tratamiento que las muestras.

Realizar una curva de calibracin graficando los valores de absorbancia
versus concentracin de los estndares.
Calcular las concentraciones de las muestras interpolando los valores de
absorbancia en la curva de calibracin.
72

9. REFERENCIAS

[1] Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, Method
4500-NH
3
F. 20
th
Edition 2000. American Public Health Association, American
Water Works Association, Water Environment Federation.
73
2.3.1.6. Determinacin de coliformes fecales. (Mtodo de
Filtracin por Membrana)
PROYECTO ARCAL
PT-FQ-04
Determinacin de coliformes fecales
(Mtodo de Filtracin por Membrana)
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Detectar y enumerar organismos coliformes fecales y Escherichia coli
presuntiva en agua, despus de una filtracin a travs de una membrana
celulsica, su subsecuente cultivo en un medio diferencial lactosado y el
clculo de sus nmeros en la muestra.
2. ALCANCE
Se aplica a todo tipo de agua superficial, exceptuando aguas salinas con altos
contenidos de diatomeas, aguas con alta turbidez, aguas cloradas o cuando
nmeros grandes de otros organismos puedan interferir con el crecimiento.
La seleccin de las pruebas empleadas en la deteccin y confirmacin de los
grupos de organismos coliformes, incluyendo Escherichia coli puede verse
como parte de una secuencia continua. El grado de confirmacin en una
muestra en particular depende parcialmente de la naturaleza del agua y de las
razones para llevar a cabo el examen. En la prctica, la deteccin en agua de
E. coli presuntiva da usualmente una indicacin satisfactoria de
contaminacin fecal.

El mtodo se basa en la filtracin de una muestra directa o una alcuota de la
muestra a travs de una membrana de celulosa que retiene los organismos,
colocando la membrana ya sea en un medio de cultivo selectivo o en un
cojinete absorbente saturado con un medio lquido. La membrana se incuba
durante 24 h a 44 1C para la presencia de organ ismos coliformes fecales.
74
Se lleva a cabo la cuenta directa de las colonias caractersticas desarrolladas
sobre la membrana, y algunas de estas colonias se resiembran para pruebas
confirmativas para produccin de gas e indol. Finalmente, se hace el clculo
del nmero de organismos coliformes fecales que pueden estar presentes en
100 mL de muestra.

4. EQUIPOS
4.1 Autoclave.
4.2 Bomba o sistema de vaco.
4.3 Balanza analtica.
4.4 Campana de Flujo Laminar (Opcional).
4.5 Equipo para filtracin con membrana.
4.6 Horno de aire caliente para esterilizacin con calor seco.
4.7 Incubador o bao de agua, controlado termostticamente a 35 C 37 C.
4.8 Incubador o bao de agua, controlado termostticamente a 44,0 C 0,1
C.
4.9 Medidor de pH.

5.1 REACTIVOS
Cepas para los controles bacterianos positivo (Escherichia coli ATCC
25952) y negativo (Enterobacter aerogenes ATCC 13048).
cido Roslico, (C
19
H
14
O
3
)
Agua destilada.
Benzal al 1 %
Cloruro de sodio (NaCl)
Etanol 95%.
Fosfato monobsico de potasio, (KH
2
PO
4
)
Cloruro de magnesio, (MgCl
2
.6H
2
O).
Hidrxido de sodio (NaOH).
75
Caldo soya tripticasena (TSB)
Agar soya tripticasena (TSA)
Reactivo de kovacs
Caldo laurel triptosa manitol con triptofano
Medio m-FC. (Composicin para 1 L.)
o Triptosa 10,0 g
o Peptona proteosa No. 3 o polipeptona 5,0 g
o Extracto de levadura 3,0 g
o Cloruro de sodio (NaCl) 5,0 g
o Lactosa 12,5 g
o Sales biliares No. 3 o mezcla de sales biliares 1,5 g
o Azul anilina 0,1 g
o Agua para llevar a 1 000 mL

Rehidratar en agua conteniendo 10 mL de cido roslico (aurina) (C
19
H
14
O
3
)
al 1 % en NaOH 0,2 N. Calentar el medio hasta su punto de ebullicin, quitar
inmediatamente del calor enfriar y distribuir en volmenes convenientes en
cajas de Petri. No esterilizar en autoclave. El pH final debe ser 7,4 0,2.
El medio debe almacenarse entre 2 y 10C y cualquie r porcin no utilizada
debe desecharse despus de 96 h.
Si dispone de la presentacin comercial del medio de cultivo (lo mas
recomendable), rehidratar el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones
del proveedor.

NOTAS:

Este medio puede solidificarse mediante la adicin de 1,2 % al 5 % de agar
(m/m) antes de la ebullicin.
El reactivo de cido roslico (C
19
H
14
O
3
) se descompondr si se esteriliza en
autoclave. La solucin patrn debe almacenarse en la oscuridad entre 2 y
76
10C y debe desecharse despus de 2 semanas, o ante s si su color cambia de
rojo oscuro o caf oscuro
5.2 SOLUCIONES
Agua destilada.
Solucin de fosfato: Disolver 34 g de fosfato monobsico de potasio
en 500 mL de agua. Ajustar a pH 7,2 0,5 con solucin de hidrxido
de sodio 1 M y aforar a 1000 mL con agua.
Solucin de cloruro de magnesio: Disolver 81,1 g de MgCl
2
.6H
2
O en
1000 mL de agua.
Solucin amortiguadora de fosfato: Aadir 1,25 mL de solucin de
fosfato y 5,0 mL de solucin de cloruro de magnesio a 1000 mL de
agua. Distribuir en volmenes convenientes y esterilizar en autoclave
a 121 1 C durante 15 min a una presin manomtri ca de 0,098 066
MPa. (15 lb/inch
2
, a nivel del mar).

5.3 MATERIALES
Erlenmeyer de 250 ml para la preparacin de medios de cultivo
Pipetas graduadas de 1, 2 y 10 ml
Placas de Petri de 48 mm de dimetro
Filtros de nitrocelulosa cuadriculados estriles de 0,45 0,02 m de
dimetro de poro.
Pads estriles de 47 mm de dimetro
Pinzas de punta plana.
Cajas petri estriles
Mechero Bunsen

6 ACCIONES PREVIAS
6.1 Los reactivos deben ser de grado analtico.
6.2 El material de vidrio deber ser de uso exclusivo para determinaciones
microbiolgicas y ser lavado con una solucin de Extran neutro al 2 %.
77
6.3 Las soluciones, material de vidrio y equipo que se utilicen para el anlisis,
debe ser esterilizado en un autoclave a 121C, dura nte 15 minutos a una
presin manomtrica de 0,098 066 MPa (15 lb/pulg
2
, a nivel del mar).

7 DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO
7.1 Preparacin de las diluciones de las cepas control
Efectuar diluciones de las cepas control tomando 1 mL de la suspensin
bacteriana en TSB, y transferirlo a un tubo de ensayo que contenga 10
mL de solucin amortiguadora de fosfato-cloruro de magnesio estril (esta
dilucin corresponde a la 1x10
-1
). Proseguir con las diluciones,
homogenizando cada vez la suspensin con la ayuda del agitador vortex
hasta las diluciones 1x10
-8
para E. Coli y 1x10
-5
para E. aerogenes.

7.2 Esterilizacin de equipos y del rea de trabajo
Realizar la esterilizacin del rea de trabajo y de los equipos de
laboratorio del rea de microbiologa de acuerdo con las normas internas
de trabajo.

7.3 Siembra de cepas control
Un da antes del anlisis sembrar una asada de las cepas control en 10
mL de caldo TSB, contenido en un tubo de ensayo. Incubar de 18 a 24 h
a 35 + 1 C.

7.4 Preparacin de cajas con caldos de cultivo

Preparar el caldo m-FC, dejarlo enfriar antes de verterlo en las cajas
Petri, para evitar la formacin de gotas de condensacin.
Colocar los pads en las cajas estriles en condiciones aspticas (cerca
del mechero o en la campana de flujo laminar); posteriormente dosificar 2
mL de caldo m-FC.
78

7.5 Preparacin de las diluciones de las cepas control.
Efectuar diluciones de las cepas control tomando 1 mL de la suspensin
bacteriana en TSB, y transferirlo a un tubo de ensayo que contenga 10
mL de solucin amortiguadora de fosfato-cloruro de magnesio estril (esta
dilucin corresponde a la 1x10
-1
).
Proseguir con las diluciones, homogenizando cada vez la suspensin con
la ayuda del agitador vortex, hasta las diluciones 1x10
-5
.

7.6 Preparacin de diluciones para la muestra.
Si la muestra est muy turbia, proviene de un cuerpo de agua sin
tratamiento o de los pasos iniciales de un tratamiento, preparar diluciones
para la muestra de la misma manera que para las cepas control.
Las diluciones que se siembran son la 1x10
-1
, 1x10
-2
y 1x10
-3
(estas
diluciones pueden variar, va a depender de la carga bacteriana que se
sospeche haya en la muestra). Para las muestras con un alto contenido
de materia en suspensin, filtrar utilizando un prefiltro de 0,8 a 1 m.
Si la muestra por el contrario es casi transparente o proviene de los pasos
finales de tratamiento, sembrar directamente 100 mL. Cuando se espere
un contenido alto de bacterias, puede tomarse una muestra ms pequea
(20 mL).

NOTA:
El volumen de muestra o la dilucin elegida para la siembra es aquella en que
se sospecha que se tendr un nmero de colonias que podrn ser contadas y
no se superponen entre unas y otras (entre 10 y 100 colonias). Para muestras
muy contaminadas usar la tcnica de tubos mltiples de fermentacin.

7.7 Filtracin de muestras, controles y blancos

79
Armar el equipo de filtracin en ambiente estril (mecheros encendidos).
Colocar la membrana estril con ayuda de las pinzas de punta plana
flameada. La cuadrcula de la membrana debe quedar visible.

Colocar el embudo con cuidado y sujetarlo con las pinzas.

Colocar aproximadamente 20 mL de solucin amortiguadora de fosfatos-
cloruro de magnesio estril dentro del vaso del equipo de filtracin y filtrar
con ayuda de vaco. Este es el blanco antes de iniciar la filtracin de
muestras.

Apagar la bomba de vaco, retirar la membrana y colocarla en la caja Petri
con el medio segn sea el caso.

Agitar vigorosamente la muestra y verter 100 mL en el embudo, o bien
tomar 1 mL de la dilucin elegida y colocarlo en 20 mL de la solucin
amortiguadora estril. Filtrar con ayuda del vaco, enjuagar el embudo con
la membrana an en su lugar con una porcin de 20 mL de la solucin
amortiguadora estril y filtrar totalmente hasta sequedad.

Retirar la membrana con la ayuda de unas pinzas y ponerla en una caja
Petri que contenga un pad estril saturado previamente con caldo m-FC.
Tener cuidado de que no se formen burbujas de aire entre la membrana y
el pad, si esto sucede, golpear suavemente la caja contra una superficie.
Para evitar cualquier crecimiento confluente, verter cualquier exceso de
medio antes de colocar la membrana en el pad.

Enjuagar el embudo con 200 mL de solucin amortiguadora y filtrar, antes
de trabajar con otra dilucin o muestra. Tambin se puede desinfectar el
equipo de filtracin pasando una torunda de algodn impregnada con
etanol al 70 % en la superficie interna del embudo y flamear al mechero
80
con cuidado. Durante la filtracin, no es necesario desinfectar el porta
membranas a menos que se contamine.

No alternar la filtracin de muestras contaminadas con muestras de agua
tratada en el mismo equipo, a menos que se desinfecte. Primero filtrar
todas las muestras de agua cloradas y aquella de las que se esperan
resultados negativos y despus las muestras contaminadas. Se sugiere
utilizar un equipo de filtracin para todas las muestras cloradas y otro para
las muestras contaminadas.

Para los controles bacterianos positivo (Escherichia coli ATCC 25952) y
negativo (Enterobacter aerogenes ATCC 13048), filtrarlos por duplicado al
final del procedimiento, antes del ltimo blanco. Seguir los mismos pasos
que para la filtracin de las muestras.

Colocar posteriormente las membranas con E. coli en caldo m-FC (Control
positivo para coliformes fecales).

Por ltimo, filtrar el blanco final despus de haber desinfectado o
enjuagado el vaso con 200 mL de solucin amortiguadora.

7.8 Incubacin de las membranas
Incubar las membranas que contienen Caldo m-FC a 44,0 0,2 C entre 15
y 24 h para organismos coliformes fecales.

7.9 Examen de las membranas
Las membranas deben examinarse inmediatamente despus de la
incubacin. Contar como organismos coliformes fecales presuntivos todas
las colonias independientemente del tamao, que muestren un color azul
marino despus de su incubacin a 44 C en caldo m- FC.

81
NOTAS:

Los blancos de reactivos no deben presentar contaminacin, y la morfologa
colonial o inhibicin del crecimiento deben corresponden a las cepas control
positivo y negativo en el medio de cultivo respectivo.

Las colonias que presentan las caractersticas mencionadas en Caldo m-FC
indican resultados presuntivos de Coliformes Fecales; dado que no se detecta
la produccin de gas. Esto puede ser suficiente para agua cruda, agua residual
o parcialmente tratada, pero para agua potable o cuando el cliente as lo
indique por algn estudio especial se llevarn a cabo las pruebas
confirmativas.

7.10 Pruebas confirmativas

7.10.1 Produccin de gas e indol.
Para confirmar los resultados, elegir una colonia de las aisladas en
medio mFC y sembrar en una placa con TSA, Incubar de 18 a 24
horas a 35 1 C.
Resembrarla en Caldo lauril triptosa manitol con triptofano
contenido en tubos de ensayo que tengan campanas de
fermentacin Durham invertidas e incubar a a 44,0 0,2 C por 24
2 h.
Examinar los tubos para determinar la presencia o ausencia de
gas.
La produccin de gas confirma la presencia de coliformes
fecales.
Realizar la prueba de indol colocando a cada tubo en donde se
haya detectado la produccin de gas, dos o tres gotas del reactivo
de Kovacs.
82
La formacin de un anillo rojo en la superficie del cultivo
confirma la presencia de E. coli presuntiva.

7.11 Prueba de oxidasa.
De las colonias positivas para la produccin de gas, tomar una asada
del cultivo en TSA y realizar la prueba de la oxidasa.
Las bacterias clasificadas dentro de los grupos coliformes totales y
fecales son oxidasa negativas.

8 CALCULOS Y EXPRESION DE RESULTADOS
A partir del nmero de colonias caractersticas contadas en las membranas y
tomando en cuenta los resultados de las pruebas confirmativas, calcular el
nmero de coliformes fecales presentes en la muestra, expresando el
resultado como unidades formadoras de colonias (UFC) por 100 mL de la
muestra de acuerdo con la siguiente frmula:
Sin dilucin:

muestra de filtrado Volumen
mL por contadas coliformes Colonias 100

Con dilucin:

s
n n n
i
s
V
F V n F V n F V n

C *
) ( ... ) ( ) (
2 2 2 1 1 1
+ + + +
=

83
donde;

C
s
es el nmero de unidades formadoras de colonias en el volumen de
referencia Vs de la muestra.
N
i
es la suma de las colonias en todas las cajas o membranas
contadas filtradas/siembras de dilucin F
1
.
n
1
es el nmero de cajas contadas para una dilucin particular F
1
.
V
1
es el volumen de dilucin de la muestra F
1
en la placa i.
F
1
es la dilucin usada para la porcin de muestra V
1

V
s
es el volumen de referencia seleccionado para expresar la
concentracin de los microorganismos en la muestra.
Nota
La cuenta final as obtenida es el promedio ponderado de las cuentas de
cada una de las placas.

9 REFERENCIAS

9222 B. 20
th
Edition. 2000. American Public Health Association, American
[2] EPA 821-R-02-02. Method 1603: Escherichia coli(E. coli) in Water by
Membrane Filtration Using Modified membrane Thermotolerant
Escherichia coli Agar (Modified mTEC). Septiembre 2002.
[3] NMX-AA-102-SCFI-2006 Calidad del Agua Deteccin y Enumeracin de
Organismos Coliformes, Organismos Coliformes Termolerantes y y
Escherichia coli Presuntiva Mtodo de Filtracin en Membrana.
[4] L.A. Teixeira & Filhos S/C Litda. PA-AG 014 02: Determinao de
coliformes totais e fecais em guas. 2004.
84
[5] Instituto Tecnolgico de Toluca, Laboratorio de Investigacin en
Ingeniera Ambiental. LIIA-PT-16: Procedimiento para la Deteccin y
Enumeracin de Organismos Coliformes, Organismos Coliformes
Termolerantes y y Escherichia coli Presuntiva Mtodo de Filtracin en
Membrana. 2007.
85
2.3.1.7. Determinacin de coniformes fecales. (Mtodo del
nmero ms probable)
PROYECTO ARCAL
PT-FQ-05
Determinacin de coniformes fecales
(Mtodo del nmero ms probable)
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Fecha de revisin:
2008-05-02

1 OBJETIVO
Este procedimiento describe un mtodo de anlisis microbiolgico para la
determinacin cuantitativa de bacterias coliformes fecales, empleando el
mtodo de tubos mltiples de fermentacin (NMP) en todo tipo de agua.

2 ALCANCE
Se aplica a todo tipo de agua. La seleccin de las pruebas empleadas en la
deteccin y confirmacin de los grupos de organismos coliformes puede verse
como parte de una secuencia continua. El grado de confirmacin en una
muestra en particular depende parcialmente de la naturaleza del agua y de las
razones para llevar a cabo el examen.

3 PRINCIPIO DEL METODO
El mtodo se basa en el enriquecimiento de las muestras de agua con caldo
lactosado y EC incubados entre 44,5 C 0,2 C durante 24 h.
4 EQUIPOS
4.1 Autoclave
4.2 Campana de Flujo Laminar (Opcional)
4.3 Horno de aire caliente para esterilizacin con calor seco
4.4 Incubador o bao de agua, controlado termostticamente
4.5 Medidor de pH

86
5 REACTIVOS Y MATERIALES
5.1 REACTIVOS
Los reactivos deben ser grado analtico.
Fosfato monobsico de potasio. KH
2
PO
4

Sulfato de magnesio. MgSO
4
.7H
2
O.
NaOH
Caldo lactosado.
Caldo EC

5.2 SOLUCIONES
Agua de dilucin.
Solucin de Fosfato: Disolver 34 g de fosfato monobsico de potasio
en 1000 mL de agua. Ajustar a pH 7,2 0,5 con solucin de hidrxido
de sodio 1 mol/L y aforar a 1 000 mL con agua Tipo 1.
Solucin de sulfato de magnesio heptahidratado: Pesar 50,00 g de
MgSO
4
.7H
2
O y disolver a 1 L con agua Tipo 1.
Mezclar 1,25 mL de la solucin de fosfato y 5 mL de la solucin de
sulfato de magnesio heptahidratado y aforar a 1 L con agua Tipo 1.
Esterilizar a 121 C por 15 minutos.
Caldo lactosado sencillo: Rehidratar el medio de acuerdo a las
indicaciones del fabricante.
Caldo EC: Rehidratar el medio de acuerdo a las indicaciones del
fabricante.
Hidrxido de sodio 1mol/L.

5.3 MATERIALES
Asas de metal con un mnimo de 3mm de dimetro.
Gradilla para tubo de ensayo de 180 mm x 20 mm.
Pipetas bacteriolgicas esterilizadas de 1 mL y 10 mL.
Tubos de ensayo de 180 x 20 mm.
87
Tubos de fermentacin Durham

6 ACCIONES PREVIAS
El material de vidrio deber ser de uso exclusivo para determinaciones
microbiolgicas y ser lavado con una disolucin de Extran neutro al 2 %.
Las soluciones, material de vidrio y equipo que se utilicen para el anlisis,
deben ser esterilizados en un autoclave a 121C, a 15 psi durante 15 min.

7.1 Esterilizacin de equipos y del rea de trabajo.
Realizar la esterilizacin del rea de trabajo y de los equipos de
laboratorio del rea de microbiologa de acuerdo con las normas internas
de trabajo.

7.2 Preparacin de diluciones para la muestra.
Si la muestra es muy turbia, proviene de un cuerpo de agua sin
tratamiento o de los pasos iniciales de un tratamiento, preparar diluciones
para la muestra. Las diluciones que se siembran son la 1x10
-1
, 1x10
-2
y
1x10
-3
(estas diluciones pueden variar, va a depender de la carga
bacteriana que se sospeche haya en la muestra). Para las muestras con
un alto contenido de materia en suspensin, filtrar utilizando un prefiltro
de 0,8 m a 1 m.
Si la muestra por el contrario es casi transparente o proviene de los pasos
finales de tratamiento, sembrar directamente 10 mL. Cuando se espere
un contenido alto de bacterias, puede tomarse una muestra ms
pequea.

7.3 Determinacin del nmero ms probable de coliformes fecales.
7.3.1 Prueba presuntiva
De la muestra de ensayo de agua tratada, se toman 5 porciones de
10 mL cada una empleando pipetas estriles graduadas de 10 mL y
88
se transfieren a todos los tubos de ensayo que contengan 10 mL de
caldo lactosado (con tubos invertidos onifo en su interior) y se
mezcla el contenido. Cuando se analiza agua no tratada, se inoculan
porciones de la muestra y sus diluciones respectivas.
Se incuban los tubos entre 35 0,5C y 37 C durante 24 2 h . Al
cabo de 24 h se examina cada tubo inoculado y si no se ha
producido gas, se reincuban y se examinan nuevamente al cabo de
48 3 h. La formacin de gas dentro de las 48 h constituyen una
prueba presuntiva positiva y la ausencia de gas constituye una
prueba negativa.

7.3.2 Prueba confirmativa
A partir de cada uno de los tubos gas positivo en caldo lactosado (en
la prueba presuntiva), se inoculan, con una asa, los tubos que
contienen el caldo EC. Los tubos de caldo EC se incuban en bao
de agua a temperatura de 44,5 0,2 C durante 24 2 h.
Los tubos sembrados se colocaran en bao de agua dentro de los
30 minutos despus de la inoculacin y se mantendrn sumergidos
a un nivel por encima del medio de cultivo. La produccin de gas en
un tubo de fermentacin dentro de 24 h o menos se considera una
reaccin positiva indicando coliformes de origen fecal. Cuando no se
produce gas la reaccin se considera negativa.

Los tubos considerados como positivos en la prueba confirmativa se llevan a
la tabla del NMP que corresponda (segn el numero de tubos utilizados) los
resultados de NMP de coliformes fecales se expresan por 100 mL.

9 REFERENCIAS
89
9221 E. 20
th
. Edition. 2000. American Public Health Association, American
[2] Norma Cubana 93-01-128. 1998. Determinacin del Nmero Ms
Probable de Coliformes totales y fecales.

90
2.3.1.8. Anlisis de Turbiedad o Turbidez
PROYECTO ARCAL
PT-FQ-06
Anlisis de Turbiedad o Turbidez
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Fecha de revisin:
2008-05-02

1 OBJETIVO
Describir el procedimiento para determinar la turbiedad o turbidez utilizando el
mtodo nefelomtrico.

2 ALCANCE
Se limita al anlisis de muestras de aguas superficiales.

La turbiedad en el agua es causada por la materia coloidal o suspendida
(materia orgnica, materia inorgnica, organismos microscpicos, etc.). Es
una expresin de la propiedad ptica que causa que la luz sea dispersada y
absorbida, en lugar de ser transmitida en una lnea recta a travs de la
muestra.
Las lecturas son realizadas empleando un turbidmetro, calibrado con un
patrn de referencia de formazina.
3.1 INTERFERENCIAS
La presencia de residuos flotantes y materia fina de rpida sedimentacin.
Burbujas de aire, suciedad en los recipientes de vidrio y las celdas de
medicin, as como efectos de vibracin que alteran la visibilidad
superficial de la muestra pueden conducir a resultados falsos.
El color verdadero por ejemplo, el color del agua debido a las sustancias
disueltas que absorben luz puede causar medidas de turbidez baja,
aunque este efecto generalmente no es significativo en aguas tratadas.
91

4 EQUIPOS

4.1 Turbidmetro
El equipo debe cumplir como mnimo las siguientes caractersticas:
Angulo de la luz aceptada por el detector.- Centrado a 90
0
al paso de
luz incidente y no exceda 30 de los 90.
Detector y sistema de filtro. - El detector y el sistema de filtro, si es
usado, debe tener una respuesta del pico espectral entre 400 nm y 600
nm.
Distancia atravesada por la luz incidnte y la luz dispersada dentro del
tubo de muestra. - En total no debe exceder los 10 cm.
Fuente de luz. - Lmpara de tungsteno que opera a una temperatura
entre 2200 K y 3000 K.
4.2 Balanza analtica con una precisin menor de 0,1 mg.

5.1 REACTIVOS
Utilizar nicamente reactivos de grado analtico reconocido.
Agua libre de turbiedad: Pasar agua destilada y/o desionizada a travs
de un filtro de membrana de tamao de poro de 0,45m.
Sulfato de hidracina (NH
2
)
2
H
2
SO
4

Hexametilentetramina (CH
2
)
6
N
4

5.2 SOLUCIONES
Solucin estndar primaria de formazina (4000 UNT).
92
Solucin I: Disolver 1,000 g de sulfato de hidracina en agua y llevar a
100 mL en un matraz aforado. Cuidado: El sulfato de hidracina es
cancergeno, evite inhalacin, ingestin y contacto con la piel. La
suspensin de formazina puede contener sulfato de hidracina residual.

Solucin II: Disolver 10,00 g de hexametilentetramina en agua y llevar
a 100 mL en un matraz aforado.
Mezclar 5 mL de la Solucin I y 5 mL de la Solucin II. Dejar en reposo
por 24 h a 25 3 C. Tranferir esta solucin a un frasco mbar para su
almacenamiento. Esta solucin es estable hasta 1 ao cuando es
almacenada apropiadamente.

Juego de soluciones estndar de turbidez.
A partir de la solucin estndar primaria de 4000 UNT, obtener las
soluciones de turbidez en el rango de inters. Deben prepararse
diariamente.

5.3 MATERIALES
Celdas de vidrio o plstico incoloro, transparente y limpias.

6 ACCIONES PREVIAS
Las muestras deben de analizarse lo antes posible despus del muestreo y
en un periodo no mayor de 24 h, mientras permanezcan en el laboratorio
deben conservarse refrigeradas a 4 C.

93
Si la muestra se encuentra refrigerada esperar que alcance la temperatura
ambiente antes de que se realice el ensayo.
Seguir las instrucciones del manual de operacin del equipo para la
calibracin del mismo.
Agite la muestra. Espere que desaparezcan las burbujas de aire y coloque la
muestra en la celda cuidadosamente.
Leer la turbidez de la muestra. Se recomienda tomar 3 lecturas,
homogeneizando entre cada una de ellas.

Leer la turbiedad directamente del instrumento en Unidades Nefelomtricas
de Turbiedad (UNT).
8.1 CONTROL DE CALIDAD
La diferencia entre las rplicas no debe ser mayor que 2% para lecturas
menores a 100 UNT y 3% para lecturas mayores 100 UNT.

9 REFERENCIAS
2130 B. 20
th
[2] U.S. Environmental Protection Agency. Mtodo 180.1: Determination of
Turbidity by Nephelometry. 1993
[3] NMX-AA-038-SCFI-2001: Anlisis de Agua Determinacin de Turbiedad
en aguas naturales, residuales y residuales tratadas. 2001.
[4] L.A. Teixeira & Filhos S/C Litda. PA-AG 014 02: Determinao de Turbidez em
guas. 2008

94
2.3.1.9. Determinacin de Nitratos (NO
3
-
) previa reduccin con
cadmio o hidracina
PROYECTO ARCAL
PT-FQ-07
Determinacin de Nitratos (NO3
-
) previa reduccin con cadmio o hidracina.
Fecha de aprobacin:
2008-05-08
Fecha de revisin:
2008-05-08

1 OBJETIVO
Determinar la concentracin de nitratos en agua por espectrofotometra,
utilizando dos mtodos de reduccin: reduccin con cadmio cuperizado, o con
sulfato de hidracina.

2 ALCANCE
Este procedimiento se utiliza para el anlisis de muestras de aguas
superficiales.
El mtodo de reduccin con cadmio cuperizado es recomendable para la
cuantificacin de nitratos en muestras que contienen entre 0,01 y 1 mg de
N/L.
El mtodo de reduccin con sulfato de hidracina se recomienda para
determinar concentraciones entre 0,01 y 10 mg N/L.


3.1 Reduccin con cadmio cuperizado
El in nitrato se reduce cuantitativamente a nitrito (NO
2
-
) en presencia de
cadmio granulado, tratado con sulfato de cobre y empacado en una
columna de vidrio.

95
3.2 Reduccin con sulfato de hidracina
El in nitrato (NO
3
-
) es reducido espontneamente a nitrito (NO
2
-
) con
sulfato de hidracina.

3.3 Determinacin de nitrito por espectrofotometra.
El nitrito obtenido por cualquiera de los dos mtodos de reduccin
descritos anteriormente es determinado espectrofotomtricamente por
diazotizacin con sulfanilamida y posterior copulacin con N (1 Naftol)
etilendiamina dihidrocloruro, para formar un compuesto coloreado cuya
intensidad es proporcional a la concentracin de nitrato.

3.4 Interferencias

Las muestras cuyo color absorben en el rango fotomtrico utilizado
pueden interferir. Las concentraciones del in sulfito menores de 10 mg/l
causa variaciones en la concentracin de nitratos y nitritos en un 10%
aproximadamente.

4 EQUIPOS

4.1 Espectrofotmetro ultravioleta visible.
4.3 Estufa.
4.4 Medidor de pH.

5.1 REACTIVOS
96

desionizada o de pureza equivalente.

5.1.1 Mtodo de reduccin con cadmio cuperizado

Grnulos de cadmio cuperizado
cido clorhdrico concentrado (HCl)
cido fosfrico (H
3
PO
4
)
Sulfanilamida (NH
2
C
6
H
4
SO
2
NH
2
)
N (1 Naftol) etilendiamina dihidrocloruro (C
10
H
7
NHCH
2
NH
2
. 2HCl)
Cloruro de amonio (NH
4
Cl)
Sal sdica del cido etilendiaminotetractico (EDTANa
2
)
Sulfato de cobre pentahidratado (CuSO
4
.5H
2
O)
Hidrxido de amonio concentrado (NH
3
OH)
Nitrito de sodio (NaNO
2
)
Nitrato de sodio (NaNO
3
)
Cloroformo (CHCl
3
)

5.1.2 Mtodo de reduccin con sulfato de hidracina
cido fosfrico concentrardo (H
3
PO
4
)
Etilendiamina dihidrocloruro (1- naftol) (C
10
H
7
NHCH
2
NH
2
.2HCl)
Hidrxido de sodio (NaOH)
Nitrato de potasio (KNO
3
)
Sulfanilamida (NH
2
C
6
H
4
SO
2
NH
2
)
Sulfato de cobre pentahidratado (CuSO
4
.5H
2
O)
Sulfato de hidracina (N
2
H
4
H
2
SO
4
.H
2
0)
Nitrito de sodio (NaNO
2
)
Nitrato de sodio (NaNO
3
)
97
Cloroformo (CHCl
3
)

5.2 SOLUCIONES
5.2.1 Mtodo de reduccin con cadmio cuperizado
Grnulos de cadmio cuperizado: Lavar 25 g de grnulos de
cadmio, de un tamao entre 20 y 100 mesh con cido clorhdrico 6
N y enjuagarlos con agua. Colocar el cadmio en 100 mL de la
solucin de sulfato de cobre al 2 % por 5 minutos o hasta que
palidezca parcialmente el color azul de la solucin. Decantar y
repetir la operacin con sulfato de cobre fresco hasta iniciar el
desarrollo de un precipitado coloidal de color caf. Lavar con agua
y retirar todo el cobre precipitado.

Reactivo de color: Agregar a 800 mL de agua desionizada 100 mL
de cido fosfrico concentrado al 85% v/v y 10 g de sulfanilamida.
Despus de la disolucin completa de la sulfanilamida, aadir 1 g
de etilendiamina dihidrocloruro N (1- Naftol). Diluir con agua hasta
1 litro. Envasar en botella mbar y refrigerar. Esta solucin es
estable por 1 mes. Si la solucin se colorea, se debe descartar. La
presencia de coloracin rosada indica contaminacin.

Solucin cloruro de amonio-EDTA: Disolver 13 g de cloruro de
amonio y 1,7g de EDTANa
2
en un volumen de aproximadamente
900 mL. Ajustar a pH 8,5 con amonaco, enrasar a un litro en
matraz aforado.

Solucin de sulfato de cobre: Disolver 20 g de sulfato de cobre en
500 mL de agua y completar el volumen a 1 litro en matraz
aforado.

98
Solucin patrn de nitrato. 100 mg NO
3
-
-N/L: Secar nitrato de
potasio a 105C por 24 horas. Disolver 0,7218 g de la sal en agua
y diluir a 1 litro. Preservar con 2 mL de cloroformo
1mL = 100 g NO
3
N.

Solucin intermedia de nitrato. 10 mg/L: Diluir 100 mL de solucin
estndar de nitrato a 1 litro con agua. Preservar con 2 mL de
cloroformo.
1mL = 10 g NO
3
-
-N.

Solucin patrn de nitritos. 250 mg N /L: Pesar 1,232 g de nitrito de
sodio secados previamente a 105 C durante 24 horas , y disolver
en aproximadamente 800 mL de agua, aadir 1 mL de cloroformo.
Enrasar a 1 litro y mezclar. Refrigerar.
1mL = 250 g N.

Solucin intermedia de nitrito. 50 mg N /L: Diluir 50 mL de la
solucin estndar de nitrito a 250 mL con agua en matraz aforado.
Preparar cuando vaya a ser usada.
1 mL = 50 g N.

Solucin de trabajo de nitrito: Diluir 10 mL de la solucin intermedia
de nitritos a 1 L con agua en matraz aforado. Preparar cuando
vaya a ser usada.
1 mL = 0,50 g N.

5.2.2 Mtodo de reduccin con sulfato de hidracina

Reactivo formador de color: Agregar a 500 mL de agua 200 mL de
cido fosfrico concentrado al 85% v/v y 10 g de sulfanilamida.
Despus de la disolucin completa de la sulfanilamida, aadir 0.8 g
99
de etilendiamina dihidrocloruro N (1- Naftol). Diluir con agua hasta
1 litro. Envasar en botella mbar y refrigerar. Esta solucin es
estable por 1 mes.

Solucin patrn de nitrato, 100 mg NO
3
-
-N/L: Secar nitrato de
potasio a 105C por 24 horas. Disolver 0,7218 g de la sal en agua
desionizada y diluir a 1 litro. Preservar con 2 mL de cloroformo
1mL = 100 g NO
3
-
-N.

Solucin intermedia de nitrato.10 mg NO
3
-
-N /L: Prepararla a partir
de la solucin patrn de nitrato.
1mL = 10 g NO
3
N

Solucin patrn de hidrxido de sodio 10 N: Disolver 400 g de
hidrxido de sodio en 750 mL de agua y diluir a 1 litro con agua.

Solucin intermedia de hidrxido de sodio 1,0 N: Tomar un
volumen de 100 mL de la solucin patrn de hidrxido de sodio y
llevar a 1 litro con agua.

Solucin patrn de sulfato de cobre: Disolver 2,5 g de sulfato de
cobre pentahidratado en agua y diluir hasta 1 litro.

Solucin diluida de sulfato de cobre: Tomar 20 mL de la solucin
patrn de sulfato de cobre y diluir con agua hasta 2 litros.

Solucin patrn de sulfato de hidracina: Disolver 27.5 g de sulfato
de hidracina en 400 mL de agua y diluir hasta 1 litro. Esta solucin
es estable por 6 meses. PRECAUCION: Su ingestin es txica.

5.2.3 MATERIALES
100
Debe emplearse cristalera normal de laboratorio, as como Celdas
de vidrio o cuarzo de 1 cm de paso ptico.

6 ACCIONES PREVIAS
Si el almacenamiento es necesario, guardar las muestras por 24 horas a 4
C. Para almacenajes mas prolongados conservar con 2 ml de H
2
SO
4

concentrado y a 4C.

NOTA

- Cuando la muestra es conservada con cido, el nitrato y el nitrito no se
pueden determinar como especies individuales.


7.1 Reduccin con cadmio cuperizado
7.1.1 Preparacin de la columna de reduccin
Insertar un tapn de lana de vidrio o algodn en la base de la
columna de reduccin y llenar con agua.
Aadir suficientes grnulos de cadmio cuperizado para empacar
una columna de 18,5 cm. Mantener el nivel de agua por encima de
los grnulos de cadmio cuperizado para evitar burbujas de aire.
Lavar la columna con 200 mL de solucin de cloruro de amonio-
EDTA. Activar la columna hacindole pasar, a velocidad de 7 a 10
mL/min. 100 mL o ms de una disolucin compuesta por 25% de
estndar de 1,0 mg de N-NO
3
-
-/L y 75% de solucin de cloruro de
amonio-EDTA.
7.1.2 Tratamiento de la muestra
101
Ajustar el pH (si fuera necesario) entre 7 y 9 usando pHmetro y
cido clorhdrico o hidrxido de sodio diluidos. Esto asegura un pH
de 8,5, despus de aadir la solucin de cloruro de amonio-EDTA.

7.1.3 Reduccin de la muestra
A 25 mL de muestra o una porcin diluida previamente llevada a 25
mL, adicionar 75 mL de la solucin de cloruro de amonio-EDTA y
mezclar.
Verter la muestra mezclada en la columna y ajustar el flujo a una
velocidad entre 7 mL/min. a 10 mL/min. Descartar los primeros 25
mL y colectar el resto en el matraz de la muestra original.
No es necesario lavar la columna entre muestras y muestra; pero si
no va a ser reutilizada durante varias horas o por algn tiempo,
verter 50 mL de solucin diluida de cloruro de amonio-EDTA en la
columna y dejarla pasar a travs del sistema. Almacenar la
columna de cadmio cuperizado en esta solucin y no permitir que
se seque.

7.1.4 Desarrollo del color y medicin
Tan pronto como sea posible y no ms de 15 min despus de la
reduccin, aadir 2,0 mL de reactivo de color a 50 mL de la
muestra reducida y mezclar. Entre 10 min y antes de las 2 h medir
la absorbancia a 543 nm contra un blanco de reactivos.
NOTA: Si la concentracin de NO
3
-
excede el intervalo de la curva
(aproximadamente 1 mg NO
3
-
N- / L), usar el sobrante de muestra reducida
para hacer una dilucin apropiada y analizar nuevamente.

7.1.5 Preparacin de la curva de calibracin
102
Utilizando la solucin intermedia de NO
3
-
-N, preparar los
estndares en el rango entre 0,05 a 1,0 mg NO
3
-
-N/L en
volumtricos de 100 mL. Proceda de igual forma que la muestra
(reduccin de la misma).
Comparar un estndar de nitrito de igual concentracin a uno de
nitrato reducido y verifique la eficiencia de la columna. Reactivar
los grnulos cadmio cuperizado cuando la eficiencia de reduccin
est aproximadamente por debajo del 75 %.

7.2 Mtodo de reduccin con sulfato de hidracina
Tomar 500 l de la muestra y adicionar 1 ml de NaOH, 1 mL de agua
desionizada, 500 l de sulfato de cobre y 500 l de hidrazina. Dejar
reposar la muestra por hora y luego agregar 500 l de colorante y 500
l de agua. Los patrones deben ser preparados a partir de la solucin
intermedia de nitrato en un rango de 1 a 7 mg/L. Leer los espectros de
cada muestra en el espectrofotmetro uv- visible a una longitud de onda
de 520 nm.

Para ambos mtodos:

Obtener una curva de calibracin graficando la absorbancia contra la
concentracin de N-NO
3
de los estndares.
Calcular la concentracin de la muestra directamente de la curva de
calibracin.
Reportar como miligramos de N por litro (la suma de N-NO
3
-
ms N-NO
2
-
) a
menos que la concentracin de N-NO
2
- se determine y reste separadamente.
Hacer una grfica con los valores de la curva de calibracin y asegurarse de
obtener el coeficiente de correlacin aceptable.
103
Calcular la concentracin de la muestra por medio de la ecuacin de la recta
obtenida de la curva de calibracin representada por la siguiente ecuacin:

Y = mX + b

Donde:
m = pendiente
b = ordenada al origen
Y = absorbancia
X = concentracin (mg N-NO
3
-/L).
Reportar mg N-NO
3
-/L con la precisin correspondiente.

9 REFERENCIAS
4500 NO
3
E y G. 20
th
Edition. 2000. American Public Health Association,
American Water Works Association, Water Environment Federation.
[2] Secretara de la Economa de DGN de los Estados Unidos Mexicanos,
Anlisis de aguas- Determinacin de nitratos en aguas naturales, potables,
residuales y residuales tratadas. NMX-AA-079-SCFI-200.
104
2.3.1.10. Determinacin de nitratos (NO
3
-
). Mtodo del electrodo
de nitrato
PROYECTO ARCAL
PT-FQ-08
Determinacin de nitratos (NO3
-
).
Mtodo del electrodo de nitrato.
Fecha de aprobacin:
2008-05-08
Fecha de revisin:
2008-05-08

1 OBJETIVO
Determinar la concentracin de nitratos en agua, en el rango de 0,14 a 1400
mg NO
3
-
- N /L, utilizando el mtodo del electrodo de nitrato.

2 ALCANCE:
Se aplica para el anlisis de muestras de aguas superficiales in situ o llevadas
al laboratorio.

El electrodo de in NO
3
-
es un sensor selectivo que desarrolla un potencial a
travs de una membrana delgada, porosa, inerte, que se mantiene en
posicin en un intercambiador inico en un lquido inmiscible con agua. El
electrodo responde a la actividad del in NO
3
-
entre aproximadamente 10
-5
y
10
-1
M (0,14 a 1400 mg NO
3
-
- N/L).

3.1 INTERFERENCIAS
Los iones cloruros y bicarbonato interfieren cuando su proporcin en peso
frente a NO
3
-
-

N es > 10 o > 5, respectivamente. Los iones potencialmente
interferentes pero que no se encuentran en niveles significativos en las
aguas potables son: NO
2
-
, CN
-
, S
2
-
, Br
-
, I
-
, ClO
3
-
y ClO
4
-
. Se han
observado respuestas errticas del electrodo cuando el pH no se
mantiene constante; se recomienda que est en un rango entre 3 y 9 para
105
el funcionamiento ptimo del mismo. Dado que el electrodo responde a la
actividad de NO
3
-
ms que a su concentracin, la fuerza inica debe ser
constante en todas las muestras y patrones.

Para minimizar estos problemas se utiliza una solucin buffer que
contenga:

Ag
2
SO
4
, que remueve los iones Cl
-
, Br
-
, I
-
, S
-2
y CN
-

Al
2
(SO
4
)
3
, que forma complejos con los cidos orgnicos presentes
Acido sulfmico, que remueve el NO
2
-
pH=3 que elimina el HCO
3
-
, mantiene el pH y la fuerza inica constante.

4 EQUIPOS

4.1 Electrodo selectivo para determinacin de nitrato
4.2 Medidor de pH/mV, (resolucin de 0,1 mV) o multmetro compatible con el
electrodo.
4.3 Agitador magntico.

5.1 REACTIVOS
Nitrato de sodio. NaNO
3
o Nitrato de potasio. KNO
3

Sulfato de amonio. (NH
4
)
2
SO
4

Sulfato de aluminio. Al
2
(SO
4
)
3
.18H
2
O
Sulfato de plata. Ag
2
SO
4

106
cido brico. H
3
BO
3

cido sulfmico H
2
NSO
3
H
Cloroformo CHCl
3

5.2 SOLUCIONES
Agua exenta de nitratos: Utilizar agua bidestilada o destilada,
desionizada de la mxima pureza para preparar todas las soluciones y
diluciones.
Solucin estndar de nitrato, 1000 mg/L NO
3
-
: Secar NaNO
3
o KNO
3

en una estufa a 105 C durante 24 h. Disolver 1.37 g de NaNO
3
o 0.7218
g de KNO
3
en agua y diluir a 1000 mL en matraz aforado. Preservar la
solucin de KNO
3
con 2 mL de CHCl
3
/L. La solucin es estable por un
perodo de 6 meses
Solucin buffer: Disolver 17,32 g de Al
2
(SO
4
)
3
.18H
2
O, 3,43 g de
Ag
2
SO
4
, 1,28 g de H
3
BO
3
y 2,52 g de H
2
NSO
3
H, en aproximadamente
800 mL de agua. Ajustar el pH a 3 agregando lentamente solucin de
NaOH 0,1 N. Diluir a 1000 mL y guardar en botella de vidrio color mbar.
Solucin de NaOH 0,1N: Disolver 4 g de NaOH en un vaso de
precipitado, con aproximadamente 500 mL de agua, posteriormente
transferir cuantitativamente la solucin a un matraz aforado de 1000 mL y
completar el volumen con agua.
Solucin de llenado del electrodo de referencia: Disolver 0.53 g de
(NH
4
)
2
SO
4
en agua y diluir a 100 mL.

5.3 MATERIALES
Pastilla magntica (magnetos)
Termmetro.

107
6 ACCIONES PREVIAS
Si la muestra va a ser llevada al laboratorio, se recomienda recolectarla en
envase de plstico (polietileno o equivalente) o vidrio de un volumen mnimo
de 100 mL, sin cmara de aire y cerrar hermticamente. Analizar lo antes
posible o refrigerar. El tiempo mximo de conservacin recomendado es de
48 h.

7.1 Preparacin del electrodo
Llenar el electrodo con la solucin de relleno hasta justo debajo del orificio
de llenado. Agitarlo suavemente hacia abajo (como un termmetro) para
eliminar las burbujas de aire. Previo al primer uso, o luego de un perodo
largo de almacenamiento, sumergir la membrana de nitrato en un
estndar de nitrato durante 30 minutos.

7.2 Preparacin de la curva de calibracin
Por dilucin seriada del estndar de nitrato de 1000 mg/L, preparar los
estndares de 100 y 10 mg/L. Agregar 10 mL de solucin buffer por cada
10 mL de estndar. Preparar estndares de composicin similar a la
muestra, si estas tienen una fuerza inica superior a 0,1 M.
Colocar la solucin ms diluida (10 mg/L) en el agitador magntico y
agitar a velocidad constante. Colocar el electrodo en la solucin (con el
medidor en el modo de mV) y cuando se estabiliza la lectura registrarla.
Colocar la solucin intermedia (100 mg/L) en el agitador magntico y
agitar a velocidad constante. Introducir el electrodo en la solucin (con el
Poner la solucin ms concentrada (1000 mg/L) en el agitador magntico
y agitar a velocidad constante. Colocar el electrodo en la solucin (con el
108
Graficar las lecturas en mV vs el logaritmo de las concentraciones.
Extrapolar la curva hasta 1.0 mg/L.
Chequear la calibracin cada dos horas. Asumiendo que no hubo
cambios en la temperatura ambiente, sumergir el electrodo en el estndar
intermedio. Luego que la lectura se estabiliza, se compara con la lectura
original registrada de la solucin intermedia. Si la diferencia es mayor a
0.5 mV o la temperatura ambiente cambi hacer nuevamente la curva de
calibracin.
Preparar la curva de calibracin diariamente.

7.3 Medicin de la muestra
Agregar en un vaso limpio y seco de 150 mL, 10 mL de la muestra y 10
mL de solucin Buffer, colocar en el agitador magntico. Luego de
enjuagar el electrodo en agua exenta de nitratos, secar y sumergirlo en la
solucin. Cuando se estabiliza, registrar la lectura en mV.

Determinar la concentracin directamente de la curva de calibracin.
Los resultados se expresan en mg NO
3
-N/L
8.1 Precisin
Dentro del rango del mtodo se espera una precisin de 0,4 mV, que
corresponde al 2,5% en concentracin.

9 REFERENCIAS
4500 D. 20
th
Edition, 2000. American Public Health Association, American
Water Works Association, Water Environment Federation
109
2.3.1.11. Determinacin de oxgeno disuelto por el mtodo
iodomtrico (modificacin azida)
PROYECTO ARCAL
PT-FQ-09
Determinacin de oxgeno disuelto por el mtodo iodomtrico (modificacin azida)
Fecha de aprobacin:
2008-05-08
Fecha de revisin:
2008-05-08

1 OBJETIVO
Determinar el oxgeno disuelto (OD) por el mtodo iodomtrico (modificacin
azida)

2 ALCANCE
Se aplica para analizar el oxgeno disuelto en aguas superficiales.

El mtodo yodomtrico es el mtodo ms preciso y confiable de los anlisis
titulomtricos para la determinacin de OD. Est basado en la adicin de una
solucin de manganeso divalente, seguida de la adicin de un lcali fuerte a
la muestra en una botella de vidrio tapada. El OD oxida rpidamente una
cantidad equivalente del precipitado de hidrxido manganoso divalente
disperso a un hidrxido con estado de valencia mayor. En presencia de iones
yoduro en una solucin cida, el manganeso oxidado se revierte al estado
divalente, con liberacin de yoduro equivalente al contenido original de OD.
El yoduro es entonces titulado con una solucin estndar de tiosulfato.
El punto final de la titulacin puede ser detectado visualmente, con un
indicador de almidn.
Los anlisis experimentales pueden alcanzar una precisin de 50 g /L con
110
una deteccin visual del punto final y una precisin de 5 g/L con la
deteccin electromtrica del punto final.
La modificacin de azida es usada para muestras de agua superficiales,
especialmente si las muestras contienen mas de 50 g NO
2
-
-N/L y no mas de
1 mg de hierro ferroso/L. Otros materiales oxidantes y reductores podran
estar ausentes. Si 1mL de solucin de KF es adicionado antes de que la
muestra sea acidificada y no haya retraso en la titulacin, el mtodo es
aplicable en presencia de 100 a 200 mg hierro frrico/L.
La modificacin de azida, remueve efectivamente la interferencia causada
por los nitritos, que son muy comunes en efluentes tratados biolgicamente,

4 EQUIPOS

4.1 Balanza analtica

5.1 REACTIVOS
Sulfato de manganeso. MnSO
4
.4H
2
O, MnSO
4
.2H
2
O, MnSO
4
.H
2
O
Yoduro de sodio o Yoduro de potasio. NaI o KI
Azida de sodio. NaN
3

cido sulfrico concentrado. H
2
SO
4

Almidn soluble. (C
6
H
10
O
5
)n
cido saliclico C
7
H
6
O
3

Tiosulfato de sodio. Na
2
S
2
O
3
.H
2
O
111
Biyodato de potasio. KH(IO
3
)
2

Hidrxido de sodio o Hidrxido de potasio NaOH o KOH

5.2 SOLUCIONES:
Solucin sulfato manganoso tetrahidratado: Disolver 480 g de MnSO
4

.4 H
2
O, o 400 g de MnSO
4
.2 H
2
O 364 g MnSO
4
x. H
2
O en agua
destilada, filtrar y diluir a 1 L.
La solucin de sulfato manganoso no deber dar color con el almidn
cuando es adicionado a una solucin acidificada de KI.

Solucin lcali-yoduro-azida:

Para muestras saturadas o de menor saturacin. Disolver 500 g de
NaOH ( 700 g de KOH), 135 g de NaI ( 150 g KI) en agua destilada y
diluir a un litro. Aadir 10 g de NaN3 disueltos en 40 mL de agua
destilada. Las sales de sodio y potasio pueden ser utilizadas en forma
intercambiada. Este reactivo no debe dar color con el almidn cuando es
diluida y acidificada.

Para muestras sobresaturadas: Disolver 10 g de NaN
3
en 500 ml de
agua destilada. Aadir 480 g de NaOH y 750 g de NaI, y agitar hasta
disolucin. Se producir una turbidez blanca debida al carbonato de sodio
pero que no es perjudicial.

Acido sulfrico concentrado: Un mililitro es equivalente a
aproximadamente 3 mL de reactivo lcali-yoduro-azida.

Solucin de almidn: Disolver 2 g de almidn soluble y 0,2 g de cido
saliclico como preservante en 100 mL de agua destilada caliente.

112
NOTA

- Se ha probado que sin preservante y guardndolo a la refrigeradora
da buenos resultados para que no se descomponga tan rpidamente.

Solucin estndar de Tiosulfato de Sodio 0,025 M: Disolver 6.205 g de
Na
2
S
2
O
3
.5 H
2
O en agua destilada. Aadir 1,5 mL de NaOH 6N 0,4 g
de NaOH slido y diluir a 1 litro. Estandarizar con solucin de biyodato
de potasio 0,0021 M.

Solucin estndar de biyodato de potasio 0,0021 M. Disolver 812,4 mg
de KH(IO
3
)
2
en agua destilada y diluir a 1 litro.

Para la estandarizacin:

Disolver aproximadamente 2 g de KI libre de yodato en un frasco
erlenmeyer con 100 a 150 mL de agua destilada, aadir 1 mL de H
2
SO
4

6N unas pocas gotas de H
2
SO
4
concentrado y 20 mL de solucin
estndar de biyodato. Diluir a 200 mL y titular el yodo liberado con la
solucin estndar de tiosulfato, adicionando almidn cerca del punto final
de la titulacin cuando un color amarillo plido es alcanzado. Cuando las
soluciones tienen igual fuerza, se requieren 20 mL de tiosulfato de sodio
0,025 M . Si no es as, ajustar la solucin de Na
2
S
2
O
3
a 0,025 M.

5.3 MATERIALES

Frascos Winkler

6 ACCIONES PREVIAS
113
Se debe evitar durante la toma de muestra la incorporacin de burbujas de
aire en la botella y la presencia de sustancias oxidantes o reductoras.

A la muestra colectada en un frasco de 250 a 300 mL, aada 1 mL de
MnSO
4
, seguido por 1 mL de solucin lcali-yoduro-azida. Si la pipeta es
sumergida dentro de la muestra enjuagarla antes de regresarla al frasco del
reactivo. Alternativamente mantenga la punta de la pipeta justo arriba de la
superficie del lquido cuando se estn aadiendo los reactivos. Tapar
cuidadosamente para evitar burbujas de aire y mezclar invirtiendo el frasco
varias veces. Cuando el precipitado haya sedimentado lo suficiente
(aproximadamente la mitad del volumen del frasco) dejar que el
sobrenadante aclare arriba del floculo de MnSO
4
, aadir 1 mL de H
2
SO
4

concentrado. Tapar nuevamente y mezclar por inversin hasta que la
solucin est completa. Titular un volumen correspondiente a 200 mL de la
muestra original despus de la correccin por prdida de muestra por
desplazamiento de los reactivos. As para un total de 2 mL (1 mL de cada
reactivo) en un frasco de 300 mL, titular 200 x 300/(300-2) = 201 mL.
Titular con solucin de Na
2
S
2
O
3
0,025 M hasta la aparicin de un color
amarillo plido. Aadir unas pocas gotas de solucin de almidn y continuar
la titulacin hasta la primera desaparicin del color azul. Si el punto final es
sobrepasado titule de retroceso con solucin de biyodato 0,0021 M aadido
gota a gota por la adicin de un volumen medido de muestra tratada.
Corregir la cantidad de solucin de biyodato o de muestra. No tomar en
cuenta las recoloraciones siguientes que aparecen por efecto cataltico de
nitritos o trazas de sales frricas que no fueron complejadas con el fluoruro.

Para 200 mL de muestra, 1 mL de Na
2
S
2
O
3
0,025 M es = 1 mg de OD/L.
114

8.1 PRECISIN Y SESGO DE LOS RESULTADOS
El OD puede ser determinado con una precisin, expresada como una
desviacin estndar, de cerca de 20 g/L en agua destilada y cerca de 60
g/L en aguas de desecho y en efluentes secundarios. En presencia de
interferentes apreciables hasta con las modificaciones apropiadas, la
desviacin estndar puede ser tan alta como 100 g/L.

9 REFERENCIAS
[1] Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 20
th
Edition. 4500-B. 2000. American Public Health Association, American Water
[2] Secretaria de la Economa. Anlisis de agua-NMX-AA-012-SCFI-2001
Determinacin de oxgeno disuelto en aguas naturales, residuales y residuales
tratadas-Mxico.

115
2.3.1.12. Determinacin de fsforo total. (Mtodo del cido
ascrbico)

PROYECTO ARCAL
PT-FQ-10
Determinacin de fsforo total
(Mtodo del cido ascrbico)
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Fecha de revisin:
2008-05-02

1 OBJETIVO
Describir el procedimiento para cuantificar los niveles de fsforo total
utilizando el mtodo colorimtrico del cido ascrbico.

2 ALCANCE
Este procedimiento se limita al anlisis de muestras de aguas superficiales.
La concentracin mnima detectable es de aproximadamente 10 g/L.

El ortofosfato reacciona con molibdato de amonio, el tartrato potsico de
antimonio y produce fosfomolibdato de antimonio, este se reduce con cido
ascrbico a un complejo de color azul. Los complejos presentan absorcin de
radiacin a la cual se le puede aplicar la Ley de Beer para realizar la
determinacin del fsforo total. La intensidad del color azul en el intervalo de
trabajo es directamente proporcional a la concentracin de fsforo total.

3.1 INTERFERENCIAS
A partir de 0,1 mg/L de arsnico hay interferencia en la determinacin. El
cromo hexavalente y el nitrito interfieren.
116
El sulfuro y el silicato no interfieren a concentraciones entre 1 y 10 mg
P/L. Altas concentraciones de hierro causan precipitaciones y prdidas de
fsforo.

4 EQUIPOS

4.1 Placa calefactora.
4.2 Espectrofotmetro rango visible.
4.3 Balanza Analtica con una precisin menor de 0,1 mg.
4.4 Equipo de filtracin.
4.5 Microondas.
4.6 Cronmetro.

5.1 REACTIVOS

Molibdato de amonio (NH
4
)
6
Mo
7
O
24

cido ascrbico C
6
H
8
O
6

Tartrato potsico de antimonio K(SbO)C
4
H
4
O
6

Fosfato monobsico de potasio KH
2
PO
4

Fenolftalena C
20
H
14
O
4

Hidrxido de sodio libre de fosfatos. NaOH
cido sulfrico concentrado H
2
SO
4

cido ntrico concentrado HNO
3

117
cido clorhdrico concentrado HCl
Persulfato de amonio (NH
4
)
2
S
2
O
8
o Persulfato de potasio K
2
S
2
O
8

5.2 SOLUCIONES
cido sulfrico 2,5 M: Se diluye 70 mL de cido sulfrico concentrado
con agua desionizada a un volumen final de 500 mL.
Solucin de tartrato potsico de antimonio: Se disuelve 1,3715 g de
tartrato potsico de antimonio en 400 mL de agua desionizada. Se lleva
a un volumen final de 500 mL en matraz aforado. Se almacena en un
frasco de vidrio.
Solucin de molibdato de amonio: Se disuelve 20 g de molibdato de
amonio en 500 mL de agua desionizada (requiere calentamiento). Se
almacena en un frasco de vidrio.
Solucin de cido ascrbico 0,1 M: Se disuelve 1,76 g de cido
ascrbico en 100 mL de agua desionizada, esta solucin es estable por
una semana almacenada a 4 C.
Reactivo combinado: Se mezcla las siguientes soluciones para
preparar 100 mL del reactivo combinado:
o 50 mL de cido sulfrico 2,5 M
o 5 mL de solucin de tartrato potsico de antimonio
o 15 mL de solucin de molibdato de amonio
o 30 mL de cido ascrbico

NOTA

- Se mezcla despus de agregar cada reactivo. Se permite a los
reactivos alcanzar la temperatura ambiente antes de mezclarse. Se
deben mezclar en el orden dado. Si se forma turbidez mezclar y se deja
118
hasta que la turbidez desaparezca. El reactivo tiene una estabilidad de
4 horas.
Solucin estndar de fsforo 50 mg P/L: Se disuelve 219,5 mg de
fosfato monobsico de potasio anhidro (previamente secado por 2 h en
estufa a 105 C) en agua desionizada. Se lleva a 1 L. Se con serva en
una botella de plstico oscuro y se refrigera.
Solucin de trabajo de 2,5 mg P / L: Se diluye 50 mL de la solucin
estndar de fsforo a un volumen final de 1 L con agua desionizada.
Solucin de fenolftalena: Se pesa 0,05 gramos de fenolftalena y se
diluye a 100 mL con etanol.
Hidrxido de sodio 10 M.
Hidrxido de sodio 1 M
cido sulfrico 1 M

5.3 MATERIALES

Filtros Whatman nmero 42 o equivalente
Embudo de espiga larga

6 ACCIONES PREVIAS
La muestra se recolecta en botella plstica o de vidrio. El equipo se debe
lavar con detergente libre de fosfatos. La muestra se debe mantener a 4 C.
Si no se puede realizar el anlisis inmediatamente, conserve con 1 mL de
cido clorhdrico concentrado o cido sulfrico concentrado, para mantener el
pH < 2.
La cristalera se debe lavar con cido ntrico 1 + 1 o con cido clorhdrico
diluido caliente, y enjuagado con agua bidestilada o desionizada.
119

7.1 Digestin tradicional
Se toman 50 mL de muestra y se colocan en un erlenmeyer. Se adiciona
1 mL de cido sulfrico 5,5 M y 0,4 g de persulfato de amonio o 0,5 g de
persulfato de potasio. Se digiere la muestra sobre una placa de
calentamiento aproximadamente por un perodo de 30 a 40 min hasta un
volumen de 10 mL. Si hay presencia de compuestos organofosforados, el
tiempo de digestin puede incrementarse hasta por 2 h.
Si hay presencia de slidos despus de la digestin la muestra se debe
filtrar en papel filtro Whatman nmero 42 o equivalente. Se trasvasa la
muestra a un matraz aforado de 50 mL, (nota: se utilizan
aproximadamente 25 mL de agua desionizada para hacer el trasvase y el
lavado).
Se agregan 2 gotas de solucin de fenolftalena, posteriormente se
agrega hidrxido de sodio 10 M hasta que cambie a un color rosa. En
esta etapa es posible que aparezca la presencia de un precipitado que no
se debe filtrar debido a que puede indicar presencia de fosfato de calcio.
Se adiciona cido sulfrico 1 M gota a gota hasta la desaparicin del color
rosado (alcanzar la neutralidad). Se contina con la etapa de desarrollo
de color respectivo.
Se adicionan 8 mL del reactivo combinado y se afora a 50 mL, se agita
vigorosamente y se mide entre 10 y 30 min despus de mezclado y se lee
en espectrofotmetro visible a una longitud de onda 880 nm. Si la muestra
presenta color o turbiedad se utiliza la misma muestra como blanco
agregando 8 mL del reactivo combinado. La absorbancia del blanco de la
muestra se debe sustraer de la absorbancia de la muestra.
120
Segn la capacidad del equipo, se preparan patrones en un intervalo de
concentraciones de 0,15 mg P / L hasta 1,30 mg P / L. El nmero de
patrones depender de la decisin de cada laboratorio.
Para ello, se mide el volumen apropiado del patrn de la solucin de
trabajo de 2.5 mg/L y se lleva a un volumen final de aproximadamente 50
mL con agua desionizada. Se aplica el proceso de digestin apropiado,
desarrollo de color y lectura.

NOTAS:
-Tanto las muestras como los patrones deben ser analizadas con el mismo
tiempo de desarrollo de color y medicin.
- Es necesario tener ms de un blanco de reactivos si el tiempo de operacin as
lo requiere.

Se determina la curva de calibracin Absorbancia vs concentracin. Se
interpola la absorbancia de la muestra. Se debe ajustar la concentracin por
dilucin con la siguiente frmula:

mg P/L = f x C
n

donde;
mg P/L = Concentracin de fsforo de la muestra

f = factor de dilucin
C
n
= ???

121
Se deben preparar enriquecidos de muestras por cada lote, se considera
el anlisis en control cuando el porcentaje de recuperacin est entre 90 y
110%.

9 REFERENCIAS

[1] EPA 365-1 Determination of Phosphorus by Semi-Automated Colorimetric
4500 P E. 19
a
122
2.3.1.13. Determinacin de fsforo total. (Mtodo de molibdato de
amonio y cloruro de estao II)

PROYECTO ARCAL
PT-FQ-11
(Mtodo de molibdato de amonio y cloruro de estao II)
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Fecha de revisin:
2008-05-02

1 OBJETIVO
utilizando el mtodo de reduccin con cloruro de estao mediante la
determinacin espectrofotomtrica.
2 ALCANCE
La concentracin mnima detectable es de aproximadamente 3 g P/L.

El ortofosfato se compleja con molibdato de amonio. El mtodo se basa en la
formacin de cido molibdofosfrico que es reducido por el cloruro de estao
II para formar un compuesto de molibdeno de coloracin azul intensa. Los
complejos presentan absorcin de radiacin a la cual se le puede aplicar la
Ley de Beer para realizar la determinacin del fsforo total. La intensidad del
color azul entre los rangos de trabajo es directamente proporcional a la
concentracin de fsforo total.

3.1 INTERFERENCIAS
La presencia de slice, arsenato, fluoruro, torio, bismuto, sulfuro,
tiosulfato, tiocianato o exceso de molibdato, as como concentraciones
123
superiores a 100 mg /L de hierro II. La interferencia de sulfuro se puede
eliminar al adicionar agua de bromo. La dureza clcica no es una
interferencia para concentraciones inferiores a 1000 mg/L al igual que los
iones de aluminio, hierro III, magnesio, bario, estroncio II, litio, sodio,
potasio, amonio, cadmio, manganeso, plomo, mercurio I y II, estao II,
cobre, nquel, plata, uranio IV, circonio IV, bromuro, carbonato, clorato,
hipoclorito, cianuro, yodato, silicato, nitrato, nitrito, sulfato, sulfito,
tetraborato, selenato. Si se utiliza cido ntrico los cloruros interfieren a
una concentracin superior a 75 mg/ L.

4 EQUIPOS
4.1 Equipo para calentamiento.
4.2 Espectrofotmetro de rango visible para leer a 690 nm, si el equipo no es
capaz de leer a esa longitud de onda, utilizar 650 nm para soluciones
acuosas, con algo de reduccin de la sensibilidad y precisin.
4.3 Balanza analtica con una precisin menor de 0.1 mg.
4.5 Microondas (si se realizara digestin de muestra por este mtodo).
4.6 Cronmetro.
4.7 Bao de agua.

5.1 REACTIVOS
Molibdato de Amonio. (NH
4
)
6
Mo
7
O
24
.4H
2
O
124
Cloruro de Estao II dihidratado. SnCl
2
.2H
2
O
Gricerol.
Fosfato monobsico de potasio. KH
2
PO
4

Fenolftalena. C
20
H
14
O
4

Etanol. C
2
H
5
OH
cido Sulfrico concentrado. H
2
SO
4

cido Ntrico concentrado. HNO
3

cido Clorhdrico concentrado. HCl

5.2 SOLUCIONES
Solucin de molibdato de amonio (Reactivo I):
o Se disuelve 12,5 gramos de (NH
4
)
6
Mo
7
O
24
x 4H
2
O en 90 mL de
agua desionizada (requiere calentamiento para su disolucin
completa).
o Se adiciona lentamente a 200 mL de agua desionizada 140 mL de
H
2
SO
4
concentrado (CUIDADO: se adiciona lentamente para evitar
un sobrecalentamiento peligroso).
Se permite deja enfriar ambas soluciones y luego se mezclan. La
mezcla se lleva a un volumen final de 500 mL. Se almacena en botella
de plstico oscuro y se refrigera para su conservacin.
Solucin de cloruro de estao (Reactivo II). Se disuelven 2,5 gramos
de SnCl
2.
2H
2
O en 100 mL de glicerol. Se calienta la mezcla en un
bao de agua y se agita para apresurar la disolucin. Se almacena en
botella de plstico y se refrigera para su conservacin.
Solucin intermedia de 150,0 mg P/L: Se disuelven 329,2 mg de
KH
2
PO
4
anhidro (se deseca la sal dos horas a 105 C) en a gua
desionizada. Se lleva a 500 mL. Se conserva en una botella de plstico
oscuro y se refrigera.
125
Solucin de trabajo de 15,0 mg P/L: Se mide 5 mL de la solucin
intermedia de fosfato y se agrega en un matraz aforado de 50 mL, se
lleva a volumen con agua desionizada. Se almacena en una botella de
plstico oscuro bajo refrigeracin por un tiempo no superior a un mes.
Hidrxido de sodio 10 molar.
Hidrxido de sodio 1 molar
cido sulfrico 1 molar

5.3 MATERIALES
Filtros Whatman N 42 o equivalente

6 ACCIONES PREVIAS

La muestra se recoge en botella plstica o de vidrio previamente lavados con
detergente libre de fosfatos. La muestra se debe mantener a 4 C. Si no se
puede realizar el anlisis inmediatamente, conserve con 1 mL de cido
clorhdrico concentrado o cido sulfrico concentrado, para mantener el pH <
2.
La cristalera se debe lavar con cido ntrico 1 + 1 (o con cido clorhdrico
diluido caliente) y enjuagar con agua bidestilada o desionizada.

7.1 Digestin tradicional:
126
Se toman 50 mL de muestra y se coloca en un erlenmeyer. Se adiciona 1
mL de cido sulfrico concentrado y 5 mL de cido ntrico concentrado.
Se digiere la muestra sobre una placa de calentamiento hasta un volumen
de 1 mL y se contina hasta la decoloracin (indica la remocin de NO
2

del HNO
3
).
Despus de digerida la muestra, se permite que alcance la temperatura
ambiente. Se trasvasa cuantitativamente a matraces aforados de 100 mL,
si hay presencia de slidos despus de la digestin la muestra se debe
filtrar en papel filtro cualitativo Whatman N 42 o equivalente. Se debe
procurar no utilizar un exceso de agua de lavado en el trasvase. Se
agregan 2 gotas de solucin de fenolftalena, posteriormente se agrega
hidrxido de sodio 10 M hasta que cambie a un color rosa, en esta etapa
es posible que aparezca la presencia de un precipitado que no se debe
filtrar debido a que puede indicar presencia de fosfato de calcio. Se
adiciona cido sulfrico 1 M gota a gota hasta la desaparicin del color
rosado (alcanzar la neutralidad).

7.2 Digestin por microondas
Se toman 50 mL de muestra. Se adiciona 5 mL de cido ntrico
concentrado, se programa la temperatura del microondas con
incrementos constantes por 25 minutos hasta un mximo de 150 C, la
presin y la temperatura de seguridad se selecciona segn las
instrucciones del fabricante.
filtrar en papel filtro cualitativo Whatman N 42 o equivalente. Se debe
procurar no utilizar un exceso de agua de lavado en el trasvase. Se
agregan 2 gotas de solucin de fenolftalena, posteriormente se agrega
hidrxido de sodio 10 M hasta que cambie a un color rosa, en esta etapa
127
es posible que aparezca la presencia de un precipitado que no se debe
filtrar debido a que puede indicar presencia de fosfato de calcio. Se
adiciona cido sulfrico 1 M gota a gota hasta la desaparicin del color
rosado (alcanzar la neutralidad).
Una vez que la muestra alcance la temperatura ambiente, se agregan en
el siguiente orden, con rapidez y con agitacin 4 mL de la solucin de
molibdato de amonio y 10 gotas de solucin de cloruro de estao II, se
agita vigorosamente y se afora a volumen final. La lectura de la muestra
se realiza despus de 10 minutos, pero antes de los 12 minutos en
espectrofotmetro visible a una longitud de onda de 690 nm.
Segn la capacidad del equipo se preparan patrones en un intervalo de
concentraciones de 0,003 mg P / L hasta 1 mg P / L. El nmero de
patrones depender de la decisin de cada laboratorio.
Para ello, se mide el volumen del patrn de la solucin de trabajo de 15
mg P/L y se lleva a un volumen final de aproximadamente 50 mL con
agua desionizada. Se aplica el proceso de digestin apropiado, desarrollo
de color y lectura.

NOTAS
- Tanto las muestras como los patrones deben ser analizadas con el mismo
- Es necesario tener ms de un blanco de reactivos si el tiempo de
operacin as lo requiere

Se determina la curva de calibracin absorbancia vs concentracin. Se
interpola la absorbancia de la muestra, se debe ajustar la concentracin por
128

muestra de mL
Vf x Cn
: L / P mg muestra la de in Concentrac

Donde:
Cn = Concentracin de la muestra leda en la curva de calibracin (mg/L)
Vf = Volumen final de la muestra despus de la digestin realizada (100 mL)
mL de muestral = Alcuota de muestra utilizada para la digestin (50 mL)

Se deben preparar enriquecidos de muestras por cada lote, se considera el
anlisis en control cuando el porcentaje de recuperacin est entre 90 y
110%.

9 REFERENCIAS
[1] EPA 365-1 Determination of Phosphorus by Semi-Automated Colorimetric.
[2] Norma Mexicana NMX-AA-029-SCFI-2001. Determinacin de Fsforo Total
en aguas naturales, residuales y residuales tratadas. Mtodo de Prueba.
4500 P C. 20
th
[4] MAQA-1. Determinacin de Fsforo Total. Centro de Investigacin en
Contaminacin Ambiental, UCR. Costa Rica. Versin 9.
129
2.3.1.14. Determinacin de fsforo total. (Mtodo de molibdato de
amonio y cloruro de estao II)

PROYECTO ARCAL
PT-FQ-12
(Mtodo del molibdovanadato de amonio)
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Fecha de revisin:
2008-05-02

1 OBJETIVO
utilizando el mtodo colorimtrico del molibdovanadato de amonio.

2 ALCANCE
La concentracin mnima detectable es de aproximadamente 200 g/L
utilizando celdas de 1 cm.

El ortofosfato en presencia de molibdato de amonio y vanadato forma el cido
vanadomolibdofosfrico. Los complejos presentan absorcin de radiacin a la
cual se le puede aplicar la Ley de Beer para realizar la determinacin del
fsforo total. La intensidad del color amarillo entre los rangos de trabajo es
directamente proporcional a la concentracin de fsforo total.

3.1 INTERFERENCIAS
La presencia de slice, arsenato, fluoruro, torio, bismuto, sulfuro, tiosulfato,
tiocianato o exceso de molibdato. Concentraciones superiores a 100 mg /L de
hierro II. La interferencia de sulfuro se puede eliminar al adicionar agua de
130
bromo. La dureza clcica no es una interferencia para concentraciones
inferiores a 1000 mg/L al igual que los iones de aluminio, hierro III, magnesio,
bario, estroncio II, litio, sodio, potasio, amonio, cadmio, manganeso, plomo,
mercurio I y II, estao II, cobre, nquel, plata, uranio IV, circonio IV, bromo,
carbonato, clorato, hipoclorito, cianuro, yodato, silicato, nitrato, nitrito, sulfato,
sulfito, tetraborato, selenato. Si se utiliza cido ntrico los cloruros interfieren a
una concentracin superior a 75 mg / L.

4 EQUIPOS
4.1 Equipo de calentamiento (placa calefactora o hot plate)
4.2 Espectrofotmetro de rango visible
4.3 Balanza analtica con una precisin menor de 0,1 mg
4.4 Equipo de filtracin
4.5 Microondas
4.6 Cronmetro
5.1 REACTIVOS

Molibdato de amonio (NH
4
)
6
Mo
7
O
24
.4H
2
O
Metavanadato de amonio NH
4
VO
3

Fosfato monobsico de potasio KH
2
PO
4

Fenolftalena C
20
H
14
O
4

Etanol C
2
H
5
OH
131
cido sulfrico concentrado H
2
SO
4

cido ntrico concentrado HNO
3

cido clorhdrico concentrado HCl

5.2 SOLUCIONES
Reactivo molibdo-vanadato: Este reactivo se prepara mezclando la
Solucin A con la Solucin B y diluyendo a 1 L.

Solucin A: Se disuelve 25 gramos de molibdato de amonio en 300 mL
de agua desionizada (requiere calentamiento).

Solucin B: Se disuelve 1,25 gramos de metavanadato de amonio en
300 mL de agua (se debe calentar). Se enfra la solucin B a
temperatura ambiente, se agrega 330 mL de cido clorhdrico
concentrado. Se enfra a temperatura ambiente.
Solucin estndar de fsforo 50 mg P/L: Se disuelve 219,5 mg de
fosfato monobsico de potasio anhidro (previamente secada a 105
o
C)
en agua desionizada. Se lleva a 1 L. Se conserva en una botella de
plstico oscuro y se refrigera.
Hidrxido de sodio 10 molar.
Hidrxido de sodio 1 molar
cido sulfrico 1 molar

5.3 MATERIALES
Debe emplearse cristalera normal de laboratorio, as como
132
Filtros Whatman Nmero 42 o equivalente

6 ACCIONES PREVIAS
La muestra se recoge en botella plstica o de vidrio previamente lavados con
detergente libre de fosfatos. La muestra se debe mantener a 4 C. Si no se
puede realizar el anlisis inmediatamente, conserve con 1 mL de cido
clorhdrico concentrado o cido sulfrico concentrado, para mantener el pH <
2.
La cristalera se debe lavar con cido ntrico 1 + 1 (o con cido clorhdrico
diluido caliente) y enjuagar con agua desionizada o de pureza equivalente.


7.1 Digestin tradicional:
Se toman 50 mL de muestra y se colocan en un erlenmeyer. Se adiciona
1 mL de cido sulfrico concentrado y 5 mL de cido ntrico concentrado.
Se digiere la muestra sobre una placa calefactora hasta un volumen de 1
mL y se contina hasta la decoloracin (indica la remocin de NO
2
del
HNO
3
).
filtrar en papel filtro Whatman nmero 42 o equivalente. Se debe procurar
no utilizar un exceso de agua de lavado en el trasvase. Se agregan 2
gotas de solucin de fenolftalena, posteriormente se agrega hidrxido de
sodio 10 M hasta que cambie a un color rosa, en esta etapa es posible
que aparezca la presencia de un precipitado que no se debe filtrar debido
a que puede indicar presencia de fosfato de calcio.
133

7.2 Digestin por microondas
Se toman 50 mL de muestra. Se adiciona 5 mL de cido ntrico
concentrado, se programa la temperatura con incrementos constantes por
25 minutos hasta un mximo de 150 C, la presin y la temperatura de
seguridad se selecciona segn las instrucciones del fabricante.
filtrar en papel filtro Whatman nmero 42 o equivalente. Se debe procurar
no utilizar un exceso de agua de lavado en el trasvase. Se agregan 2
gotas de solucin de fenolftalena, posteriormente se agrega hidrxido de
sodio 10 M hasta que cambie a un color rosa, en esta etapa es posible
que aparezca la presencia de un precipitado que no se debe filtrar debido
a que puede indicar presencia de fosfato de calcio.
Una vez que se permite que la muestra alcance la temperatura ambiente,
se afora la muestra al volumen final de 100 mL.
Se toman 25 mL de la muestra y se vierten en un matraz aforado de 50
mL. Se adiciona 10 mL del reactivo vanadato-molibdato y se lleva a la
marca de aforo. La lectura de la muestra se puede realizar despus de 10
minutos debido a que el complejo es estable durante varios das. La
lectura se realiza en espectrofotmetro visible equivalente.
Dependiendo de la concentracin de las muestras se selecciona la
longitud de onda como se presenta en la Tabla 1.
Tabla 1. Seleccin de longitud de onda segn rango de trabajo
Rango de trabajo
(mg P/L)
Longitud de onda
(nm)
1 5 400
2 10 420
134
4 18 470

Segn las concentraciones de las muestras se preparan patrones como
se indica en la tabla I. El nmero de patrones depender de la decisin de
cada laboratorio.
Para ello, se mide el volumen del patrn de la solucin de trabajo de 50
mg P /L y se lleva a un volumen final de aproximadamente 50 mL con
agua desionizada. Se aplica el proceso de digestin apropiado, desarrollo
de color y lectura.

NOTAS
- Tanto las muestras como los patrones deben ser analizadas con el mismo
- Es necesario tener ms de un blanco de reactivos si el tiempo de operacin
as lo requiere.

Se determina la curva de calibracin absorbancia vs concentracin. Se
interpola la absorbancia de la muestra, se debe ajustar la concentracin por

muestra de mL
Vf x Cn
: L / P mg muestra la de in Concentrac

Donde:
Cn = Concentracin de la muestra leda en la Curva de calibracin (mg/L)
Vf = Volumen final de la muestra despus de la digestin realizada
mL de muestral = Alcuota de muestra utilizada para la digestin
135

Se deben preparar enriquecidos de muestras por cada lote, se considera
el anlisis en control cuando el porcentaje de recuperacin est entre 90 y
110%.

9 REFERENCIAS
[1] Norma Mexicana NMX-AA-029-SCFI-2001. Determinacin de Fsforo Total
en aguas naturales, residuales y residuales tratadas. Mtodo de Prueba.
4500 P C. 20
th
. Edition 2000.American Public Health Association, American
136
2.3.1.15. Determinacin de slidos totales disueltos secados a
180 C
PROYECTO ARCAL
PT-FQ-13
Determinacin de slidos totales disueltos secados a 180
0
C
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Fecha de revisin:
2008-05-02

1 OBJETIVO
Cuantificar los niveles de slidos totales disueltos mediante la determinacin
gravimtrica.

2 ALCANCE
Se aplica al anlisis de muestras de aguas superficiales.

La muestra de agua homogenizada (por agitacin) se filtra a travs de un filtro
de fibra de vidrio. El filtrado se evapora a sequedad en un recipiente de peso
conocido y el residuo es secado a 180 2 C hasta conseguir un peso
constante. El incremento en el peso del recipiente representa los slidos
disueltos totales.

3.1 INTERFERENCIAS
Las aguas con alta dureza y alcalinidad pueden requerir secado prolongado y
rpido pesado debido a las propiedades higroscpicas.
Si parte de la muestra se adhiere en las paredes del recipiente de recoleccin
o en los materiales de anlisis, se debe indicar en el reporte de resultados.

4 EQUIPOS
137

4.1 Estufa que opere entre los 180 2 C.
4.2 Sistema de filtracin al vaco.
4.3 Balanza analtica con una precisin menor de 0,1 mg
4.4 Agitador magntico

5.1 REACTIVOS
Utilizar nicamente agua desionizada o de pureza equivalente.

5.2 MATERIALES
Filtros de fibra de vidrio de 47 mm de dimetro, Whatman grado
934AH, Gelman tipo A/E, Millipore tipo AP40, E-D Scientific
Specialities grado 161 o productos equivalentes.
Embudo con filtro de fibra de vidrio o Embudo Gooch.
Kitasato
Cpsulas de porcelana con capacidad de 100 a 150 mL.
Pinzas
Desecador

6 ACCIONES PREVIAS
La muestra se debe recolectar en un recipiente de plstico resistente
(polietileno) o vidrio. El tiempo mximo de almacenamiento de la muestra es
de 7 das, por lo que se debe procurar realizar el anlisis dentro de las 24
horas despus del muestreo.
138
Se debe mantener en refrigeracin una temperatura de 4 C.
Antes de realizar el anlisis la muestra se debe llevar a temperatura ambiente
y homogenizar con agitacin.
Se debe controlar el buen estado del desecante.

7.1 Preparacin de las cpsulas de porcelana
Lavar con agua destilada o desionizada y rotular antes de ingresarlas a la
estufa.
Secar en la estufa durante 1 hora a 180 C.
Retirar las cpsulas de la estufa y colocarlas en un desecador hasta que
sea necesario. Se pesan inmediatamente antes de usar.

7.2 Seleccin del filtro y el tamao de la muestra
El volumen de la muestra deber contener entre 2,5 y 200 mg de residuo
seco. Si la filtracin completa de la muestra requiere ms de 10 minutos,
incremente el tamao del filtro o disminuya el volumen de muestra.

7.3 Anlisis de la muestra.
Agitar la muestra en agitador magntico y tomar un volumen de muestra
dado y aplicar vaco. Lavar sucesivamente el filtro tres veces con 10 mL
de agua. Desechar los lavados y continuar la succin durante 3 minutos.
Despus de haber hecho la filtracin completa, se procura eliminar la
mxima cantidad de agua posible.
Transferir cuantitativamente el filtrado a la cpsula de evaporacin
previamente pesada y colocarla en una estufa o en un bao de vapor
hasta la evaporacin de la muestra. Si es necesario, adicionar sucesivas
139
porciones de la muestra en la cpsula de porcelana. La muestra
evaporada es secada por al menos 1 hora a 180 C.
Retirar la cpsula y colocarla en el desecador hasta alcanzar la
temperatura ambiente. Pesar.
Repetir el ciclo de secado, enfriado, desecado y pesado hasta que se
obtenga un peso constante, haya un cambio de peso de al menos el 4%
del valor inicial o hasta que la prdida de peso sea inferior a 0,5 mg.


V
B A
L Totales Disueltos Slidos mg
1000 ) (
/

=

donde;

A = Peso del residuo seco + cpsula en mg.
B= Peso de la cpsula en mg
V = volumen de la muestra en mL

Las determinaciones de duplicados no deben diferir en ms del 5 % del
peso promedio.

9 REFERENCIAS
140
2540 C. 20
th
Edition 2000. American Public Health Association, American Water
Works Association, Water Environment Federation
[2] Norma Mexicana. NMX-AA-034-SCFI-2001

141
2.3.1.16. Determinacin de slidos totales suspendidos

PROYECTO ARCAL
PT-FQ-14
Determinacin de slidos totales suspendidos
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Fecha de revisin:
2008-05-02

1 OBJETIVO
Cuantificar los niveles de slidos totales suspendidos mediante la
determinacin gravimtrica.

2 ALCANCE
Se aplica al anlisis de muestras de aguas superficiales.

La muestra de agua homognea y representativa se hace pasar a travs de
un filtro de fibra de vidrio previamente pesado. El filtro y el residuo retenido se
secan en una estufa entre 103 a 105C hasta peso co nstante. El incremento
en el peso del filtro representa los slidos totales suspendidos.

3.1 INTERFERENCIAS
Las aguas con alta dureza pueden requerir secado prolongado y rpido
pesado debido a las propiedades higroscpicas.
Cualquier partcula o aglomerados de material no homogneo que no se
quiera incluir en el resultado final, se deben descartar.

4 EQUIPOS
142

4.1 Estufa que opere entre los 103 - 105 C.
4.2 Sistema de filtracin al vaco.
4.3 Balanza analtica con una precisin menor de 0,1 mg.
4.4 Licuadora.
4.5 Agitador magntico.

5.1 REACTIVOS
Utilizar nicamente agua desionizada o de pureza equivalente.
5.2 MATERIALES
Filtros de fibra de vidrio de 47 mm de dimetro, Whatman grado
934AH, Gelman tipo A/E, Millipore tipo AP40, E-D Scientific
Specialities grado 161 o productos equivalentes.
Embudo con filtro de vidrio o Embudo Gooch.
Kitasato
Desecador

6 ACCIONES PREVIAS
La muestra se debe recolectar en un recipiente de plstico resistente
(polietileno) o vidrio.
Si la muestra contiene grasas y aceites, dispersar con una licuadora antes de
realizar el anlisis.
143
El tiempo mximo de almacenamiento de la muestra es de 7 das, se debe
procurar realizar el anlisis dentro de las 24 horas despus del muestreo.
Se debe mantener en refrigeracin a una temperatura de 4 C.
La muestra se debe llevar a temperatura ambiente antes del anlisis.
Si parte de la muestra se adhiere en la superficie del recipiente de recoleccin
o en los materiales de anlisis, se debe indicar en el reporte de resultados.
Se debe controlar el buen estado del desecante.

7.1 Preparacin del filtro
Colocar el filtro en el embudo. Aplicar vaco y lavar el mismo con tres
porciones sucesivas de 20 mL de agua. Continuar la succin para que se
seque parcialmente.
Se remueve el filtro y se coloca en un soporte (cpsula de porcelana o
vidrio reloj) y se introduce en una estufa a 103-105 C durante al menos 1
hora.
Retirar el filtro de la estufa y colocarlo (junto con el soporte) en el
desecador por un perodo de 2 horas hasta que se enfren.
Repetir el ciclo de secado, enfriado, desecado y pesado hasta que se
obtenga un peso constante, haya un cambio de peso de al menos el 4%
del valor inicial o hasta que la prdida de peso sea inferior a 0, 5 mg.

7.2 Seleccin del filtro y el tamao de la muestra
El volumen de la muestra a analizar deber contener entre 2 y 200 mg de
residuo seco. Si el volumen filtrado cubre una porcin mnima del filtro,
incrementar el volumen de muestra hasta 1 litro. Si la filtracin completa
144
de la muestra requiere ms de 10 minutos, incrementar el tamao del
filtro o disminuir el volumen de muestra.

7.3 Anlisis de la muestra
Montar el equipo de filtracin y comenzar a succionar. Humedecer el filtro
con un pequeo volumen de agua.
Se aplica agitacin magntica constante a un volumen dado de muestra y
se filtra a travs del embudo (la toma del volumen debe realizarse en la
parte media entre la pared del recipiente y el remolino).
Lavar el filtro tres veces con porciones de 10 mL de agua y continuar
succionando despus que se ha terminado de filtrar para secar
parcialmente el filtro.
Retirar cuidadosamente el filtro para evitar la prdida de muestra y
conservar la integridad del filtro. Se coloca sobre el soporte.
Colocarlo en la estufa a 103-105
0
C durante 1 hora. Enfriar en un
desecador para alcanzar un balance de temperatura y pesar. Repetir el
ciclo de secado, enfriado, desecado y pesado hasta que se obtenga un
peso constante, haya un cambio de peso de al menos el 4% del valor
inicial o hasta que la prdida de peso sea inferior a 0,5 mg.


V
B A
L Totales s Suspendido Slidos mg
1000 ) (
/

=
donde;

A = Peso del filtro + residuo seco en mg
145
B = Peso del filtro en mg
V = Volumen de muestra en mL

Las determinaciones de duplicados no deben diferir en ms del 5 % del
peso promedio.

9 REFERENCIAS
2540 D. 20
th
Edition 2000. American Public Health Association, American Water
Works Association, Water Environment Federation
[2] Norma Mexicana. NMX-AA-034-SCFI-2001

146
2.3.1.17. Nitratos por cromatografa inica

PROYECTO ARCAL
PT-FQ-15
Nitratos por cromatografa inica
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Fecha de revisin:
2008-08-06

1 OBJETIVO
Cuantificar el contenido de nitratos mediante cromatografa inica.

2 ALCANCE
Se aplica para el anlisis de muestras de aguas superficiales.

Al pasar a travs de una columna de intercambio aninico, utilizando una fase
mvil, los aniones se separan por diferencia de carga, peso molecular y por
su afinidad con la columna, y son detectados generalmente mediante un
detector de conductividad la diferencia producida entre la fase mvil y los
analitos que se analizan. Este mtodo tiene la ventaja de necesitar poca
cantidad de muestra.

3.1 INTERFERENCIAS:

4 EQUIPOS
4.2 Bao ultrasnico.
4.3 Bomba de vaco.
147
4.4 Cromatgrafo Inico.

5.1 REACTIVOS
Nitrato de sodio (NaNO3).
Reactivos para preparar la fase mvil de acuerdo al equipo que se use.

5.2 SOLUCIONES
Solucin estndar de nitrato, 1000 mg/L NO
3
-
: Secar NaNO
3
en una
estufa a 105 C durante 24 h. Disolver 1.37 g de Na NO
3
en agua y diluir a
1000 mL en matraz aforado. Preservar la solucin de KNO
3
con 2 mL de
CHCl
3
/L. La solucin es estable por un perodo de 6 meses.

Solucin intermedia de nitrato. 150 mg/L: Diluir 150 mL de solucin
estndar de nitrato a 1 litro con agua. Preservar con 2 mL de cloroformo.

Prepare una curva de calibracin de al menos siete patrones
(incluyendo el blanco) en el mbito de linealidad del mtodo, a partir de la
disolucin intermedia de nitrato. El mbito de linealidad del mtodo
depende del equipo que se emplee y de las condiciones propias de cada
laboratorio.

5.3 MATERIALES

148
Filtros de acetato de celulosa, dimetro de poro de 0,20 m y 0,45 m,
ambos de 47 mm de dimetro.

6 ACCIONES PREVIAS
La muestra debe analizarse lo antes posible despus del muestreo.
Almacenar a una temperatura superior al punto de congelacin, pero inferior
a 4 C.
La muestra debe filtrarse para evitar la formacin de tapones en las lneas de
flujo, vlvulas de chequeo, columna y detector.
Contar siempre con un mnimo de 400 mL de fase mvil en el reservorio para
evitar la entrada de aire al sistema y por tanto el deterioro de la columna.

Preparar la fase mvil y fltrela a travs de un filtro millipore o similar de 0,20
m 0,45 m.
Desgasificar la fase mvil por 60 min utilizando un bao ultrasnico.
Estabilizar el cromatgrafo de intercambio inico de acuerdo con el
procedimiento del equipo.
Preparar la curva de calibracin.
Filtrar las muestras en un filtro millipore o similar de 0,20 m 0,45 m.
Si la lnea base se ha logrado estabilizar, proceder a inyectar en primer lugar
el blanco, luego el resto de los patrones y finalmente las muestras y controles
respectivos.

Se determina la curva de calibracin rea vs concentracin, mediante
mnimos cuadrados simples. Se interpola el rea de la muestra, se debe
ajustar la concentracin por dilucin, con la siguiente frmula:

149
rea = m

C + b
Donde;
m = pendiente de la curva
C = concentracin en mg/L
b = intercepto

El control de calidad consiste en analizar una muestra enriquecida o
fortificada por cada lote de 10 muestras que se analicen. El
enriquecimiento se realiza con la disolucin patrn intermedio preparada.
Una vez que la muestra se ha enriquecido se procede a analizarla, luego
se calcula el porcentaje de recuperacin y se evala este valor en un
grfico de control. En caso de que este valor incumpla con los lmites
especificados para el anlisis, repita el control y si la situacin prevalece
ser necesario repetir el lote completo de anlisis junto con los controles
pertinentes. Es importante revisar tambin las tendencias de los datos
registrados en los grficos control.

9 REFERENCIAS:
[1] Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. Mtodo
4110 C. 21
a
. Edicin. 2005. American Public Health Association, American Water

150
2.3.1.18. Determinacin de pH por medicin potenciomtrica

PROYECTO ARCAL
PT-FQ-16
Determinacin de pH por medicin potenciomtrica
Fecha de aprobacin:
2008-05-08
Fecha de revisin:
2008-05-08

1. OBJETIVO
Determinar la actividad de los iones hidrgeno (H
+
) en cuerpos de agua por
medicin potenciomtrica, haciendo uso de un electrodo de vidrio y un
electrodo de referencia un electrodo combinado, previa calibracin del
instrumento con soluciones estndares de pH.

2. ALCANCE
Este mtodo de ensayo establece la metodologa para el anlisis de pH en
cuerpos de agua medida en campo.

La base del principio electromtrico en la medicin de pH es la determinacin
de la actividad del in hidrgeno por mediciones potenciomtricas usando
un electrodo estndar de hidrgeno y un electrodo de referencia. La
determinacin del pH en el agua es una medida de la tendencia de la acidez
o de la alcalinidad. No mide el valor de la acidez o alcalinidad

3.1. INTERFERENCIAS:
El electrodo de vidrio est relativamente libre de interferencia de color,
turbiedad, materia coloidal, oxidantes, reductores o elevada salinidad a
excepcin del error de sodio a pH>10. En caso de requerirse, este error
151
puede ser reducido utilizando un electrodo especial con bajo error de
sodio
Lugar monitoreado en presencia de aceites o material particulado puede
causar interferencia en la lectura. Esta interferencia puede ser removida
lavando el electrodo con detergente suave y enjuagando varias veces con
agua destilada y/o aplicando un lavado con HCl + agua (1+9) de ser
necesario.
El problema ms frecuente que puede causar un conjunto combinado de
electrodos es una obstruccin en el diafragma. Si esto ocurre, como lo
indica una desviacin persistente se debe remojar el electrodo en
solucin de hidrxido de amonio.

4. EQUIPOS
4.1. pH metro porttil o de campo
4.2. Electrodo de vidrio
4.3. Electrodo de referencia de calomelano, plata cloruro de plata u otro
electrodo de referencia con un potencial constante.
4.4. Termmetro o sensor de temperatura con compensacin automtica.

5.1. REACTIVOS
Durante el anlisis se deben utilizar solamente reactivos de calidad para
anlisis (p.a.), y agua destilada o desionizada.
Tampn (Buffer) pH 4.00.
5.2. MATERIALES
Debe emplearse cristalera normal de laboratorio, tales como: probeta,
pizeta o frasco lavador
152

6. ACCIONES PREVIAS
6.1. Si los electrodos se han almacenado secos durante un largo perodo, la
membrana de vidrio debe remojarse en una solucin de 3 M de KCl
durante 12 a 24 horas antes de usarse.
6.2. El ajuste y calibracin del instrumento a utilizar deber realizarse segn
el manual del equipo.
6.2.1. Verificar la calibracin del instrumento en el laboratorio y siempre
antes de cada uso en el campo (Tabla 1).
6.2.2. Seleccionar los reactivos (tampn o buffers), cuidando que se
encuentren entre 1 y 2 unidades respecto del pH a medir en las
muestras.
6.2.3. Confirmar la compensacin de temperatura de estndares y
muestras.
6.2.4. Al verificar la calibracin del instrumento la lectura obtenida debe
estar dentro de 0,1 unidades de pH

7.1. Repetir en el campo la verificacin de la calibracin del equipo segn
item 6.
7.2. Enjuagar los electrodos con agua para anlisis grado reactivo, secar con
un papel suave e introducir al cuerpo de agua superficialmente
previniendo los lugares o sectores con turbulencia.
7.3. Registrar el valor de pH entregado por el instrumento, cuando se alcance
una lectura estable.
7.4. Registrar la temperatura a la que se efectu la medicin.
7.5. Si la temperatura difiere 2C de la solucin buffer, la medicin de pH
debe ser corregida mediante un ajuste electrnico (automtico o manual)
y compensar la diferencia de temperatura. Remitirse a las instrucciones
del manual de operaciones.
153
7.6. Para el control de calidad analtica por cada punto de muestreo realizar la
lectura por duplicado (precisin mnima 90%, es decir un CV de 10%)
7.7. Si no se puede medir el pH en la corriente, deber medirse en el
recipiente utilizado para tomar muestras de agua. Las precauciones que
deben tomarse cuando se usa un recipiente para hacer mediciones de
pH en el terreno son las mismas que las especificadas en los item 7.1 al
7.6

El resultado se lee directamente en el equipo y debe expresarse como pH a
25C. Para medidas que no se hayan llevado a cabo a 25,0 0,1C debe
indicarse el mtodo de correccin junto con la temperatura real medida.

9. REFERENCIAS:
[1] Standard Methods For The Examination Of Water And Wastewater. APHA.
AWWA. WEF. 21th Edition 2005, Part. 4500H
+
-B Electrometric Method.
[2] Environmental Protection Agency. Methods For Chemicals Analisys Of
Water And Wastewater. 2th ed. Cincinnati, EPA 1983, 150.1

10. ANEXO

154
Tabla 1: Variacin del pH en soluciones tampn (Buffer)

pH 4,0 pH 7,0 pH 10,0
Temp.
(C)
pH Temp.
(C)
pH Temp.
(C)
pH
0 4,01 0 7,10 0 9,24
5 4,00 5 7,07 5 9,17
10 4,00 10 7,04 10 9,10
15 4,00 15 7,02 15 9,05
20 4,00 20 7,00 20 9,00
25 4,00 25 6,98 25 8,98
30 4,01 30 6,97 30 8,91
35 4,02 35 6,96 35 8,88
40 4,03 40 6,96 40 8,84
45 4,04 45 6,95 45 8,81
50 4,06 50 6,95 50 8,79
55 4,08 55 6,95 55 8,76
60 4,10 60 6,96 60 8,74
70 4,12 70 6,96 70 8,70
80 4,16 80 6,98 80 8,66
90 4,21 90 7,00 90 8,63
155
2.3.1.19. Determinacin de oxgeno disuelto por el mtodo
electromtrico

PROYECTO ARCAL
PT-FQ-17
Determinacin de oxgeno disuelto por el mtodo electromtrico
Fecha de aprobacin:
2008-05-08
Fecha de revisin:
2008-05-08

1. OBJETIVO:
Determinar la cantidad de oxgeno que est disuelta en el agua y ser un
indicador de cun contaminada est el agua y cun bien puede dar soporte
esta agua a la vida vegetal y animal.

2. ALCANCE:
Este procedimiento es vlido para analizar el oxgeno disuelto (OD) en
cuerpos de agua mediante electrodo de membrana.

En el mtodo electromtrico los electrodos de membrana sensible al oxgeno,
ya sean galvnicos o polarizados estn constituidos por dos electrodos de
metal en contacto con un electrolito soporte, separado de la disolucin de
muestra por medio de una membrana selectiva. En la celda del oxmetro, en
el ctodo, ocurre la reduccin del oxgeno, mientras que en el nodo ocurre
la oxidacin del metal. La diferencia bsica entre el sistema galvnico y el
polarizado es que en el primero la reaccin en el electrodo ocurre
espontneamente, mientras que en el segundo es necesario aplicar un
potencial externo para polarizar el electrodo indicador.
Generalmente se utilizan membranas de polietileno y fluorocarbn que son
permeables al oxgeno molecular y relativamente rugosas.

156
3.1. INTERFERENCIAS
La entrada de aire atmosfrico dentro de las muestras puede causar
medidas errneas del instrumento.
Las pruebas basadas en difusin estn sujetas a errores negativos por la
formacin de capas como los xidos de hierro, los cuales impiden la
difusin del oxgeno.
La hidrazina, aminas, cido sulfhdrico e hidrgeno, que pasen a travs
de la membrana causan errores negativos.

4. EQUIPOS
4.1. Medidor de oxgeno disuelto con electrodo de membrana sensitiva al
oxgeno, de tipo galvnico o polarizado (oxmetro)
4.2. Balanza analtica 0,001g

5.1. REACTIVOS
5.1.1. Cloruro de cobalto (CoCl2)
5.1.2. Sulfito de sodio (Na2SO3)

5.2. SOLUCIONES
5.2.1. Disolucin saturada de cloruro de cobalto. Pesar aproximadamente
4,5000,001 g de cloruro de cobalto y disolver en 10 mL de agua.
5.2.2. Disolucin estndar de concentracin nula de oxgeno disuelto
(OD). Pesar 5,000 0,001 g de sulfito de sodio, aforar a 100 mL con
agua y aadir 2 gotas de la disolucin saturada de cloruro de cobalto
(item 5.2.1).
5.3. MATERIALES
Debe emplearse cristalera normal de laboratorio, tales como: probeta, pizeta
o frasco lavador
157

6. ACCIONES PREVIAS
6.1. Verificar la calibracin del medidor de oxgeno disuelto segn
especificaciones del fabricante.
6.2. La estandarizacin cero de OD consiste en la inmersin del electrodo en
la disolucin estndar de concentracin nula de oxgeno (item 5.2.2). La
lectura debe estar en cero mg/L de OD, de no ser as, ajustar el
instrumento a cero.
6.3. Ajustar el instrumento a la presin atmosfrica.

7.1. Repetir en campo la verificacin de la calibracin del equipo segn item
6.
7.2. Enjuagar la celda del oxmetro con agua para anlisis grado reactivo e
introducir al cuerpo de agua, tomando en cuenta la profundidad y el lugar
de lectura de campo previniendo efectuar en lugares o sectores con
turbulencia.
7.3. Registrar el valor de OD entregado por el instrumento, cuando se alcance
una lectura estable y el orificio de la celda est sumergido en el cuerpo
de agua.
7.4. Registrar la temperatura a la que se efectu la medicin. El Porcentaje
de Saturacin del Oxgeno Disuelto depende de la temperatura del agua
y la elevacin del sitio donde se toma la muestra de agua. Determine la
altitud (elevacin) o la presin atmosfrica haciendo uso de la Tabla 1,
remitirse al item 10, para determinar el factor de correccin.
7.5. Si la temperatura difiere 2C de la solucin estndar, la medicin de CE
debe ser corregida mediante un ajuste electrnico automtico (remitirse a
las instrucciones del manual de operaciones) manualmente (segn
Tabla1) y compensar la diferencia de temperatura.
lectura por triplicado (precisin mnima 90%, es decir un CV de 10%)
158

El resultado se lee directamente en el equipo y el OD debe expresarse en
mg/L a 25C. Para medidas que no se hayan llevado a cabo a 25,0 0,1C
debe indicarse el mtodo de correccin junto con la temperatura real medida.

9. REFERENCIAS:
APHA. AWWA. WEF. 21th Edition 2005, Part. 4500-OG
[2] Environmental Protection Agency. Methods For Chemicals Anlisis Of
Water And Waste Water. 2th ed. Cincinnati, EPA, 360.1

10. ANEXO

Tabla 1: Determinacin del factor de correccin para OD en funcin de la presin
atmosfrica (mm de Hg) o altitud (m)
Presin Atmosfrica
(mmHg)
Altitud Equivalente (m) Factor de Correccin
775 165 1.02
760 0 1.00
745 166 0.98
730 334 0.96
714 516 0.94
699 695 0.92
684 875 0.90
669 1059 0.88
654 1247 0.86
638 1453 0.84
623 1651 0.82
608 1853 0.80
593 2061 0.78
578 2273 0.76
562 2507 0.74
547 2731 0.72
159
532 2962 0.70
517 3200 0.68

NOTA
El Pocentaje de Saturacin es la cantidad de oxgeno disuelto en la muestra
de agua comparada con la cantidad mxima que podra estar presente a la
misma temperatura. Por ejemplo, se dice que el agua est saturada en un
100% si contiene la cantidad mxima de oxgeno a esa temperatura. Una
muestra de agua que est saturada en un 50% solamente tiene la mitad de la
cantidad de oxgeno que potencialmente podra tener a esa temperatura. A
veces, el agua se supersatura con oxgeno debido a que el agua se mueve
rpidamente. Esto generalmente dura un perodo corto de tiempo, pero puede
ser daino para los peces y otros organismos acuticos. Los valores del
Porcentaje de Saturacin del OD de 80-120% se consideran excelentes y los
valores menores al 60% o superiores a 125% se consideran malos.
160
2.3.1.20. Determinacin de solutos ionizables

PROYECTO ARCAL
PT-FQ-18
Determinacin de solutos ionizables
Fecha de aprobacin:
2008-05-08
Fecha de revisin:
2008-05-08

1. OBJETIVO
Determinar la concentracin de solutos ionizables presentes en cuerpos de
agua.

2. ALCANCE
Este mtodo de ensayo establece la metodologa para el anlisis de
conductividad (CE) en cuerpos de agua medida en campo.

La conductividad elctrica es una medida de la corriente conducida por los
iones presentes en el agua y depende de:
- concentracin de los iones
- naturaleza de los iones
- temperatura de la solucin
- viscocidad de la solucin
3.1. INTERFERENCIAS
Las lecturas repetibles requieren que la celda del conductmetro est
protegida de la suciedad, movimientos bruscos y de temperaturas de
congelacin.
161
Los valores medidos de CE pueden verse afectados por contaminacin
de la muestra en presencia de materias en suspensin de tamao
considerable, de aceites o grasas

4. EQUIPOS
4.1. Conductmetro porttil o de campo
4.2. Celda de conductividad
4.3. Termmetro o sensor de temperatura con compensacin automtica.

5.1. REACTIVOS
Durante el anlisis se deben utilizar solamente reactivos de calidad para
anlisis (p.a.), y agua destilada o desionizada (0,1S/cm). Para calibrar
el equipo puede hacer uso del item 5.1.1 5.1.2.
5.1.1. Solucin estndar de KCl 0.01M
Disolver 0.7456 0,001 g de cloruro de potasio (KCl), secado
previamente 2 horas a 105C, en agua calidad reactivo y aforar a 1L a
25C 77F. Esta solucin estndar de referencia a 25C 77F tiene
una conductividad de 1412 1 s/cm. Preservar dicha solucin en
frasco de vidrio de borosilicato.
5.1.2. Solucin comercial de calibracin de conductividad 1413 S/cm a
25C 77F.

5.2. MATERIALES
Debe emplearse cristalera normal de laboratorio, tales como: probeta,
pizeta o frasco lavador

6. ACCIONES PREVIAS
162
6.1. El ajuste y calibracin del instrumento a utilizar deber realizarse segn
el manual del equipo.
6.2. Verificar la calibracin del instrumento en el laboratorio y siempre antes
de cada uso en campo.
6.3. La verificacin de calibracin de un (1) punto deber realizarse haciendo
uso de solucin de KCl de conductividad conocida (p.ej. 1413 uS/cm)
en el orden de la medicin a efectuarse a una temperatura dada (Tabla
1).
6.4. La limpieza de la celda de conductividad se lleva a cabo con agua
destilada o desionizada (0,1S/cm).
6.5. Se debe confirmar la compensacin de temperatura de estndares y
muestras.
6.6. Al verificar la calibracin del instrumento la lectura obtenida debe estar
dentro de 10% de error relativo.

7. DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO:
7.1. Repetir en campo la verificacin de la calibracin del equipo segn item
6.
7.2. Enjuagar la celda del conductmetro con agua para anlisis grado
reactivo, secar con un papel suave e introducir al cuerpo de agua
superficial previniendo los lugares o sectores con turbulencia.
7.3. Registrar el valor de CE entregado por el instrumento, cuando se alcance
una lectura estable y el orificio de la celda est sumergido en el cuerpo
de agua.
7.4. Registrar la temperatura a la que se efectu la medicin.
7.5. Si la temperatura difiere 2C de la solucin estndar, la medicin de CE
debe ser corregida mediante un ajuste electrnico automtico (remitirse a
las instrucciones del manual de operaciones) manual (Tabla1, Anexo) y
compensar la diferencia de temperatura.
lectura por duplicado (precisin mnima 90%, es decir un CV de 10%).
163

El resultado se lee directamente en el equipo y la CE debe expresarse en
S/cm a 25C. Para medidas que no se hayan llevado a cabo a 25,0 0,1C
debe indicarse el mtodo de correccin junto con la temperatura real medida.
8.1. Ejemplos:
8.1.1. Ejemplo 1:
CE (25C) = 25,2 S/cm
Temperatura de medida 25,0C
8.1.2. Ejemplo 2:
CE (25C) = 1413 S/cm
Correccin segn Tabla 1: Conductividad Electrica 0,01M KCl (EPA,
120.1)
8.1.3. Ejemplo 3
CE (25C) = 480 S/cm
Correccin mediante un sistema de compensacin de temperatura

9. REFERENCIAS:
APHA. AWWA. WEF. 21th Edition 2005, Part. 2510-B
[2] Environmental Protection Agency. Methods For Chemicals Analisys Of
Water And Waste Water. 2th ed. Cincinnati, EPA, 120.1

10. ANEXO

164
Tabla 1.-Conductividad elctrica 0.01 M KCl

C F S/cm
0 32.0 776
5 41.0 896
10 50.0 1020
15 59.0 1147
16 60.8 1173
17 62.6 1199
18 64.4 1225
19 64.4 1225
20 68.0 1278
21 69.8 1305
22 71.6 1332
23 73.4 1359
24 75.2 1386
25 77.0 1413
26 78.8 1440
27 80.6 1467
28 82.4 1494
29 84.2 1521
30 86.0 1548
31 87.8 1575
165

Tabla 2: Calidad del agua en funcin de la concentracin (mg/L) de OD

Nivel de OD (mg/L) Calidad del Agua
0,0 - 4,0 Mala Algunas poblaciones de peces y macroinvertebrados
empezarn a bajar.
4,1 - 7,9 Aceptable
8,0 - 12,0 Buena
>12,0 Repita la prueba. El agua puede airearse artificialmente.

A 20 C (temperatura ambiente) y presin atmosfrica estndar (nivel del
mar), la cantidad mxima de oxgeno que puede disolverse en agua dulce es
9 mg/L. Si la temperatura del agua est por debajo de 20 C, puede haber
ms oxgeno disuelto en la muestra. En general, un nivel de oxgeno disuelto
de 9-10 mg/L se considera muy bueno.
166
2.3.1.21. Digestin cida de aguas para anlisis de metales
recuperables totales o metales disueltos por GFAAS

PROYECTO ARCAL
PT-DA-02

Digestin cida de aguas para anlisis de metales recuperables totales
o metales disueltos por GFAAS
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Es la digestin cida de muestras de aguas superficiales y subterrneas para
su posterior anlisis por espectrometra de absorcin atmica por horno de
grafito (GFAAS).
2. ALCANCE
A las muestras preparadas por este procedimiento, se les puede determinar
los siguientes metales:
Cadmio Plomo Cromo - Cobre
El mtodo es aplicable a metales recuperables totales y para metales
disueltos (ver Procedimiento PT-DA-01).
4. EQUIPOS
4.1. Plancha calefactora o equivalente, ajustable y capaz de mantener una
temperatura de 90-95C.
5.1. MATERIALES
5.1.1. Vasos de precipitacin de tamaos adecuados o equivalentes.
5.1.2. Vidrios de reloj o equivalentes.
5.1.3. Membranas filtrantes de acetato de celulosa de 0,45 m de tamao
de poro.
5.1.4. Papel de filtro y embudos de filtracin.
5.1.5. Probetas graduadas o equivalentes.
167
5.2. REACTIVOS
Se deben emplear reactivos de grado analtico en todos los ensayos. A
menos que se especifique lo contrario, se debe lograr que todos los
reactivos cumplan con lo dispuesto en las especificaciones del Comit de
Reactivos Analticos de la American Chemical Society (ACS). Se pueden
usar otros grados de reactivos en la medida que sean de suficiente
pureza para permitir su uso sin perder la exactitud de las
determinaciones.
5.2.1. Agua grado reactivo.
5.2.2. Solucin de cido ntrico concentrado. Se debe analizar el cido
para determinar el grado de pureza. Si el valor del blanco de
reactivos es menor al lmite de deteccin del mtodo, puede usarse
el cido correspondiente.
6. ACCIONES PREVIAS
6.1. Todas las muestras se deben haber colectado de acuerdo al
procedimiento de muestreo del presente manual.
6.2. Todos los contenedores de las muestras deben haber sido prelavados
con detergentes, cidos y agua.
6.3. Para el muestreo de metales recuperables totales, todas las muestras
deben acidificarse en el momento de la calefaccin con solucin de cido
ntrico concentrado (5 mL/litro de muestra).
6.4. Para el muestreo de metales recuperables totales o disueltos, ver
Procedimiento PT-DA-01.
7. DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO (para metales recuperables totales)
7.1. Transferir una alcuota de 100 mL de una muestra bien mezclada a un
vaso de precipitacin.
7.2. Agregar 3 mL de solucin de cido ntrico concentrado. Cubrir el vaso
con un vidrio de reloj o equivalente.
7.3. Calentar la muestra sobre plancha calefactora o equivalente en forma
cuidadosa y suave hasta reducir el volumen a 5 mL, tomando la
precaucin que la muestra no llegue a sequedad.
168
7.4. Retirar el vaso y dejar enfriar. Agregar 3 mL de solucin de cido ntrico
concentrado.
7.5. Aumentar la temperatura de la plancha para que comience el reflujo de la
muestra. Continuar hasta que el digesto sea de color suave y que no
cambie con el tiempo.
7.6. Cuando la digestin se complete, evaporar hasta un volumen de 3 mL,
no permitiendo que ninguna porcin del fondo se seque.
7.7. Agregar 10 mL de agua reactivo para permitir la solubilizacin de
cualquier residuo que pudiera haberse producido.
7.8. Retirar el vaso de la plancha y lavar las paredes del mismo y el vidrio de
reloj con agua reactivo. Si es necesario, filtrar o centrifugar la muestra
para eliminar cualquier residuo que pueda permanecer y que interfiera
con la determinacin posterior.
Nota: acondicionar el papel de filtro y el embudo con cido ntrico para
eliminar posibles impurezas.
7.9. Ajustar el volumen final a 100 mL con agua reactivo, quedando la
muestra ya preparada para su anlisis.
9. REFERENCIAS
[1] Norma EPA 3020.
169
2.3.1.22. Determinacin de cadmio, cromo, plomo, arsnico y
cobre en aguas superficiales por ICP-OES

PROYECTO ARCAL
PT-MA-01

Determinacin de cadmio, cromo, plomo, arsnico y cobre en aguas
superficiales por ICP-OES
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar cadmio, arsnico, cromo, cobre y plomo por espectrometra de
emisin atmica por plasma inductivo con deteccin ptica (ICP-OES).
2. ALCANCE
El mtodo se aplica para la determinacin de metales en aguas, ya sean
superficiales, subterrneas o residuales. Se aplica a los siguientes analitos,
que se detallan a continuacin:

Analito
mbito de concentracin de trabajo
(mg/L)
Arsnico 0,02 1
Cadmio 0,003 1
Cromo 0,005 1
Cobre 0,005 1
Plomo 0,02 1

Este mtodo puede adaptarse a otros analitos, que no estn cubiertos en el
alcance de este procedimiento.
Este mtodo describe la tcnica para la determinacin simultnea o
secuencial de elementos traza en solucin.
170
La base es la medida de la emisin atmica por una tcnica espectroscpica
ptica.
Se nebulizan las muestras y se transporta el aerosol producido a la antorcha
del plasma donde ocurre la excitacin.

Se debe emplear una tcnica de correccin de fondo para compensar la
contribucin del fondo variable para la determinacin de elementos traza.
Esta contribucin de fondo debe medirse en forma adyacente a las lneas del
analito durante el anlisis.

La posicin que se selecciona para la medicin del fondo, a ambos lados de
la lnea analtica, se determina por la complejidad del espectro adyacente a la
lnea del analito.

La posicin debe estar libre de interferencias espectrales y debe reflejar el
mismo cambio en la intensidad de fondo que ocurre a la longitud de onda de
medicin.

Las interferencias pueden caracterizarse en dos tipos; interferencias
espectrales e interferencias no espectrales.

Interferencias espectrales

Incluyen la emisin de luz desde otras fuentes espectrales diferentes al
analito de inters. Incluyen la superposicin de lneas espectrales directas, el
ensanchamiento de lneas espectrales distintas, los efectos de la
recombinacin ion-tomo, la emisin de bandas moleculares y luz esprea
proveniente de la emisin de elementos a altas concentraciones. Estos
inconvenientes se evitan o eliminan seleccionando longitudes de onda
analticas. Adems se debe hacer uso de la correccin de fondo provista por
el software del instrumento y de los factores de correccin interelementos
cuando se requiera.
171

Interferencias no espectrales

Pueden ser provocadas por las propiedades fsicas de la muestra. Los
cambios en la viscosidad y la tensin superficial pueden ocasionar errores
significativos. Esto sucede frecuentemente cuando las muestras contienen
ms de un 10 % en volumen de cido o ms de 1500 mg/L de slidos
disueltos y se analizan con soluciones estndar de calibracin que contienen
menos del 5 % en volumen de cido. Estos factores se compensan
habitualmente por dilucin de la muestra. Las interferencias qumicas
causadas por otros motivos pueden provocar errores. Esto debe tenerse en
cuenta por una seleccin muy adecuada de las lneas analticas y de la
correccin de fondo.

Para ms detalle, se debe consultar la norma 200.7 de la EPA.
4. EQUIPOS
4.1. Espectrmetro de emisin atmica por plasma inductivo.
4.2. Equipo refrigerador para el espectrmetro.
4.3. Equipo purificador de agua.
5.1. MATERIALES
5.1.1. Matraces aforados, clase A, de 50, 100 y 1000 mL.
5.1.2. Pipetas automticas de punta descartable, de volumen variable
entre 10 y 100 L, de volumen variable entre 100 y 1000 L, de
volumen variable entre 50 y 250 L y de volumen variable entre 1000
y 5000 L.
5.1.3. Botellas de plstico de 125 mL.
5.1.4. Jeringas de filtracin.
5.1.5. Filtros de acetato de celulosa de 0,45 m para usar con jeringas.
5.1.6. Tubos descartables de plstico de 15 y 50 mL.
5.1.7. Botellas de plstico de alta densidad de 125 mL.
5.2. REACTIVOS
172
5.2.2. Solucin estndar de arsnico de 1000 mg/L, calidad ultrapura.
5.2.3. Solucin estndar de cadmio de 1000 mg/L, calidad ultrapura.
5.2.4. Solucin estndar de cromo de 1000 mg/L, calidad ultrapura.
5.2.5. Solucin estndar de cobre de 1000 mg/L, calidad ultrapura.
5.2.6. Solucin estndar de plomo de 1000 mg/L, calidad ultrapura.
5.2.7. Solucin de cido ntrico concentrado, calidad ultrapuro.
5.2.8. Solucin de cido ntrico (0,2 % V/V). Preparar con 2 mL de
solucin de cido ntrico concentrado (5.2.7.) diluidos a 1000 mL con
agua grado reactivo (5.2.1.).
5.2.9. Argn, calidad UAP, (ultra alta pureza).
5.2.10. Nitrgeno, calidad UAP, (ultra alta pureza).
5.2.11. Soluciones estndar de control de procedimiento: material
certificado. Provisto por una empresa acreditada. Posee fecha de
vencimiento.
5.2.12. Materiales de referencia certificados, provistos por el National
Water Research Institute (NWRI), el NIST, o de calidad similar.

Soluciones estndar mixtas
Se utilizan las siguientes combinaciones recomendadas por la EPA
5.2.13. Solucin estndar mixta I: cadmio y plomo.
5.2.14. Solucin estndar mixta II: cobre.
5.2.15. Solucin estndar mixta III: arsnico.
5.2.16. Solucin estndar mixta IV: cromo.
5.2.17. Solucin estndar mixta I de 50 mg/L: Pipetear 5,00 mL de cada
una de las siguientes soluciones estndar de 1000 mg/L: cadmio y
plomo en un matraz aforado de 100 mL, y diluir hasta el aforo con
solucin de cido ntrico 0,2 % V/V. Almacenar en botella de plstico
de 125 mL. Preparar mensualmente.
173
5.2.18. Solucin estndar mixta II de 50 mg/L: Pipetear 5,00 mL de cada
una de las siguientes soluciones estndar de 1000 mg/L: cobre en un
matraz aforado de 100 mL, y diluir hasta el aforo con solucin de
cido ntrico 0,2 % V/V. Almacenar en botella de plstico de 125 mL.
Preparar mensualmente.
5.2.19. Solucin estndar mixta III de 50 mg/L: Pipetear 5,00 mL de cada
una de las siguientes soluciones estndar de 1000 mg/L: arsnico en
un matraz aforado de 100 mL, y diluir hasta el aforo con solucin de
una de las siguientes soluciones estndar de 1000 mg/L: cromo en

Soluciones estndar de calibracin
5.2.21. Estndar de calibracin de 0,03 mg/L: Pipetear 30 L de cada
una de las cuatro soluciones estndares mixtas de 50 mg/L en un
matraz aforado de 50 mL, y diluir hasta el aforo con solucin de cido
ntrico 0,2 % V/V. Almacenar en tubo de polipropileno de 50 mL.
174

Blanco de calibracin
5.2.27. Solucin 5.2.8.

Blanco de filtro
5.2.28. Es agua grado reactivo que se hace pasar por el filtro de acetato
de celulosa. Usar slo si se necesit el uso de los filtros para la
muestra.

6. ACCIONES PREVIAS
6.1. Las muestras deben estar libres de slidos en suspensin previo a la
aspiracin.
175
6.2. Las muestras deben tratarse antes del anlisis, si se sospecha la
presencia de slidos en suspensin o sedimentados.
6.3. Las muestras se filtran por medio de filtros con jeringa.
6.4. Las muestras deben conservarse a bajas temperaturas (4C).
6.5. Las soluciones estndar de control de performance se utilizan tal cul las
entrega el proveedor.
Operacin del equipo

7.1. Preparar el equipo de ICP de acuerdo a las instrucciones que figuran
en el manual de instrucciones del instrumento.
7.2. La siguiente tabla describe los parmetros operativos para cada uno
de los analitos.

Analito Longitud de onda (nm)
Arsnico 188,98
Cadmio 228,80
Cromo 267,72
Cobre 324,75
Plomo 220,35

Estas longitudes de onda son recomendadas por su sensibilidad y
aceptacin. Se pueden sustituir por otras longitudes de onda, si se
considera que hay interferencias espectrales.
7.3. Antes de comenzar el uso del instrumento, proceder a estabilizar el
plasma durante 20 minutos.
7.4. Llevar a cabo una alineacin ptica empleando la lmpara de Hg
provista con el equipo.
7.5. Verificar la alineacin de la antorcha del plasma y de la ranura de
entrada del espectrmetro, si se llev a cabo un mantenimiento del
sistema de introduccin de las muestras.
176
7.6. En el muestreador automtico, se colocan los tubos de plstico de 50
mL, conteniendo el blanco de calibracin y las soluciones estndares
de calibracin, comenzando por la solucin ms diluida. Se programa
el equipo y se lleva a cabo la calibracin correspondiente.
7.7. Purgar la caera con cada estndar o blanco a una velocidad de 4
mL/min durante un mnimo de 15 segundos. Luego dejar estabilizar
durante otro mnimo de 15 segundos.
7.8. Enjuagar con agua reactivo durante 30 segundos antes de cada
estndar para minimizar cualquier efecto de memoria del estndar
previo. Emplear tres integraciones de los estndares o muestras para
reducir el error aleatorio.
7.9. Todas estas operaciones, una vez programadas, el equipo las lleva a
cabo en forma automtica.
7.10. A continuacin del estndar ms concentrado, aspirar agua reactivo
(limpieza), luego un blanco de calibracin, y a posteriori dos
soluciones estndar de control de procedimiento.
7.11. Si la calibracin y los valores de las muestras de control de
procedimiento estn dentro de los lmites aceptables, continuar con el
anlisis de las muestras. Si no lo estn, proceder a tomar las acciones
correctivas.
7.12. Las muestras se cargan en el muestreador automtico.
7.13. El blanco de filtracin se incluye como una muestra para verificar la
ausencia de contaminantes por el proceso de filtracin. Asegurar que
la lista de muestras en el software coincida con la posicin correcta
en el tray del muestreador.
7.14. El equipo prepara automticamente la curva de calibracin, y en base
a esta curva de calibracin, el equipo efecta los clculos
correspondientes a las muestras ingresadas.
7.15. Se ingresan por computadora los factores de dilucin de cada muestra
y el instrumento automticamente calcula la concentracin correcta.
177
7.16. En el caso que la curva de calibracin que calcula el equipo no sea
satisfactoria (mal coeficiente de correlacin por alguna lectura errnea
de un estndar de calibracin), el analista la puede construir con un
paquete estadstico en forma manual.
Expresar el resultado de cada analito en g/L en base a la curva de
calibracin.
Control de Calidad:
Medir duplicados en el 10 % de los casos, como mnimo. Los resultados
deben estar dentro del valor previamente calculado para cada analito, que a
su vez depende de la zona de la curva de calibracin en la cul se encuentra
su valor. El valor no es el mismo a bajas concentraciones como a altas
concentraciones. Verificar el cumplimiento del grfico de control para
duplicados.
Introducir en el anlisis cada 10 muestras, como mnimo, un estndar de
calibracin de 0,70 mg/L, para determinar si se produjo alguna variacin
instrumental. El resultado debe estar dentro del 5% del valor esperado. Si
esto no se produce, terminar el anlisis de las muestras, corregir el problema
y recalibrar el instrumento.
Antes de finalizar el anlisis, reanalizar una o ms muestras. Los resultados
deben coincidir entre s dentro del 5%. Si esto no se produce, hay que
reanalizar todas las muestras analizadas despus del ltimo control
aceptable del estndar de calibracin de 0,7 mg/L.
Hay que analizar los dos estndares de control de procedimiento con cada
corrida. Esto permite verificar la exactitud.
Los resultados deben estar dentro del 95 % del lmite de confianza que viene
suministrado por el proveedor para las muestras estndar de control de
procedimiento.
178
Verificar el cumplimiento del grfico de control para las muestras estndar de
control.
Si los resultados de las muestras estndar de control de performance no
estn comprendidos dentro del 95 % del lmite de confianza, se repite el
anlisis para los estndares en cuestin. Si este procedimiento falla, se
deben preparar nuevamente los estndares de calibracin y reanalizarse.
Si todava los resultados caen fuera del lmite, se debe controlar que se
hayan seguido en forma adecuada las condiciones analticas, y se deben
efectuar las correcciones y ajustes necesarios.
Si todava existe una falla, se chequea el instrumento por la eventualidad de
algn dao. Deben analizarse nuevamente los estndares de calibracin.
Si esta solucin falla, el mtodo se considera invlido y no se informan los
resultados hasta que la situacin se clarifique. Hay que llamar al soporte
tcnico del instrumento.
Los lmites de deteccin, los estudios de repetibilidad y de recuperacin se
deben encontrar documentados en el laboratorio.
9. REFERENCIAS
[1] Norma EPA 200.7.

179
2.3.1.23. Determinacin de cadmio, cobre, cromo y plomo total
en agua superficial mediante GFAAS

PROYECTO ARCAL
PT-MA-02

Determinacin de cadmio, cobre, cromo y plomo total en agua
superficial mediante GFAAS
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar la concentracin total de cadmio, cobre, cromo y plomo en
muestras de agua superficial, utilizando espectrometra de absorcin atmica
con horno de grafito (GFAAS).
2. ALCANCE
Este mtodo se aplica a muestras de agua superficial y a determinaciones
de Cd, Cr y Pb cuando se requieran lmites de cuantificacin, por debajo de
0,030 mg/L y de Cu por debajo de 0,050 mg/L.
Dichas muestras han tenido el tratamiento preliminar de digestin cida
siguiendo el Procedimiento PT-DA-02.
El principio se basa en la absorcin de luz por tomos a una especfica
longitud de onda. La espectrometra de absorcin atmica electrotrmica
utiliza para la atomizacin un horno de grafito.
Un volumen de la muestra se deposita en un atomizador (horno de grafito) y
se incrementa la temperatura controlada antes de la atomizacin, para
remover el solvente y concomitantes. La alcuota introducida en el tubo de
grafito se atomiza dentro de un tiempo corto, dando lugar a una seal cuya
rea (absorbancia integrada) es proporcional a la masa del analito en la
solucin medida.
El uso de fuentes de luz especiales y de la seleccin de la longitud de onda
permite la determinacin especfica de los elementos individuales.
Interferencias
180
Las interferencias pueden deberse a la absorcin molecular cuando los
componentes de la matriz se volatilizan durante la atomizacin, dando lugar a
una banda ancha de absorcin.
Otra interferencia proviene de los efectos de la matriz y qumicos.
Algunas interferencias especficas son:
Cadmio: Absorcin severa no especfica y scattering de la luz en la
atomizacin, causada por los componentes de la matriz. El exceso de cloruro
puede causar volatilizacin prematura de cadmio.
Cromo: Bajas concentraciones de calcio y/o fosfato pueden causar
interferencias. A concentraciones por debajo de 200 mg/L, el efecto del calcio
es constante y elimina el efecto del fosfato.
El uso del corrector de fondo y de los modificadores de matriz, minimizan las
interferencias en la determinacin de estos analitos.

4. EQUIPOS
4.1. Espectrmetro de absorcin atmica, provisto de un corrector de fondo.
4.2. Horno de grafito capaz de alcanzar la temperatura especificada y
requerida. Seguir las instrucciones del fabricante para considerar los
tiempos y temperaturas de secado, pirlisis y atomizacin.
4.3. Lmparas de ctodo hueco o de descarga elctrica del elemento a
determinarse.
4.4. Muestreador automtico (opcional)
4.5. Es recomendable, un sistema de registro de datos, de tal manera que se
tenga un registro permanente del proceso y que, cualquier problema con
el anlisis (incompleta atomizacin, perdidas durante la pirlisis, cambios
en la sensibilidad, forma del pico obtenido, etc), pueda ser fcilmente
reconocido.
4.6. Balanza analtica, de sensibilidad igual o mayor a 0,1 mg.
181
5.1. MATERIALES
5.1.1. Pipetas calibradas clase A para medicin de volmenes iguales o
mayores a 1 mL.
5.1.2. Micropipetas calibradas de los rangos de volumen necesarios, para
mediciones de volumen menores de 1 mL, con puntas de buena
calidad y de un solo uso.
5.1.3. Material de uso habitual en el laboratorio: matraces aforados,
vasos de precipitados, puntas de micropipeta, etc, limpio, lavado con
solucin de HNO3 1:1, enjuagado con agua grado reactivo.
5.2. REACTIVOS
5.2.3. Aire comprimido.
Soluciones estndar primarias
Las soluciones estndar primarias puede ser preparadas de metales de
alta pureza, xidos o sales no higrscpicas usando agua pura. Estas
soluciones son preparadas con una concentracin de 1000 mg/L.
Es posible utilizar soluciones estndar comerciales de 1000 mg/L.
Cuando se usa metales para la preparacin, es necesaria la limpieza del
metal (especialmente alambre) para la preparacin de los estndares.
Algunas formas de preparar las soluciones estndar primarias son:

5.2.5. Solucin estndar de cadmio: Disolver 1.000 g de cadmio metlico
(mnimo 99,99 %) en 20 mL de HNO3 1:1 y diluir a 1 L con agua
grado reactivo.
5.2.6. Solucin estndar de cobre: Disolver 1.000 g de cobre electroltico
grado reactivo.
182
5.2.7. Solucin estndar de cromo: Disolver 1.923 g de trixido de Cr,
CrO3 (mnimo 99,99 %) en agua grado reactivo, acidificar con
solucin de cido ntrico ultrapuro, y diluir a 1 L con agua grado
reactivo.
5.2.8. Solucin estndar de plomo: Disolver 1.599 g de nitrato de plomo
Pb(NO3)2 (mnimo 99.99 %) en agua grado reactivo, acidificar con
10 mL de solucin de cido ntrico ultrapuro, y diluir a 1 L con agua
grado reactivo.
Se preparan diluyendo la solucin estndar primaria del metal con los
mismos cidos y concentracin que la muestra. Los estndares de
calibracin deben ser frescos y preparados cada vez que se realiza el
anlisis de un lote de muestras.
Modificadores de matriz
5.2.9. El uso de Pd y Mg(NO3)2 como modificadores de matriz, se
recomienda para la determinacin de Cd y Cu: Se disuelven 300 mg
de paladio en polvo, en solucin de cido ntrico concentrado (1 mL
de HNO3 y si fuera necesario, agregar 0.1 mL de HCl concentrado).
Disolver 200 mg de Mg(NO3)2 en agua pura. Verter las dos
soluciones juntas y diluir a 100 mL con agua grado reactivo.
5.2.10. El uso de NH4H2PO4 y Mg(NO3)2 como modificadores de matriz
se recomienda para la determinacin de Cd y Pb: La solucin de
fosfato de amonio, NH4H2PO4 al 40%, se prepara disolviendo 40 g
del reactivo en agua grado reactivo y diluir a 100 mL.
5.2.11. El uso de Mg(NO3)2 como modificador de matriz , se recomienda
para la determinacin de Cr.
5.2.12. Es posible tambin el uso de soluciones estndar primarias
comerciales de dichos modificadores de matriz.
Blancos
183
5.2.13. Se requiere el uso de dos tipos de blancos: El blanco de
calibracin para establecer la curva analtica y el blanco reactivo
utilizado para identificar posible contaminacin de los reactivos, o del
material utilizado durante la preparacin de la muestra.
5.2.14. El blanco de calibracin se prepara acidificando el agua grado
reactivo a la misma concentracin de los cidos utilizados para los
estndares de calibracin y muestras.
5.3. El blanco reactivo, debe contener todos los reactivos en el mismo
volumen como se us en la preparacin de las muestras.
6. ACCIONES PREVIAS
6.1. Se requiere digestin cida antes del anlisis debido a que algunas
muestras pueden ser complejas y contener material suspendido que
debe ser sometido a solubilizacin.
6.2. Los bajos lmites de cuantificacin que se alcancen con este mtodo
dependern del equipo (tipo de espectrmetro y horno de grafito, la
fuente de energa, el grado de expansin elctrica de la seal) y de la
matriz de la muestra.
6.3. Referirse al manual del equipo para detalles de operacin optima.
6.4. Tomar en cuenta los efectos de posibles interferencias por el uso de
diluciones, modificadores de matriz o la aplicacin del mtodo de
adicin estndar.
6.5. Trabajar en un laboratorio limpio para prevenir la contaminacin de las
muestras.
7.1. Obtener la curva de calibracin respectiva utilizando el blanco de
calibracin y los estndares, acidificados adecuadamente y
conteniendo los modificadores de matriz respectivos en las cantidades
siguientes: 5 g de Pd + 3 g de Mg(NO3)2 para la determinacin de
Cd y Cu; 15 g de Mg(NO3)2 para la determinacin de Cr y 50 g de
NH4H2PO4 + 3 g de Mg(NO3)2 para la determinacin de Cd y Pb.
184
7.2. Las muestras (incluyendo el blanco reactivo) que han sido
previamente digeridas para liberar todo el plomo y cadmio presente,
que puede estar formando parte de la materia suspendida o coloidal.
(Procedimiento PT-DA-02), son diluidas a un volumen adecuado.
7.3. Agregar a las muestras para anlisis y blanco reactivo los
modificadores de matriz en las mismas cantidades que los indicados
para los estndares de calibracin.
7.4. Debido a las diferencias entre los modelos y formas de operacin de
los espectrmetros, no se dan instrucciones de operacin detalladas y
se debern seguir las dadas por el fabricante.
7.5. Sin embargo, se puede indicar, de una manera general lo siguiente:
Inyectar una alcuota ya sea del estndar de calibracin, cuando se va
a preparar la curva o de la muestra cuando se va a realizar la
determinacin del analito, dentro del horno y aplicar el proceso de
descomposicin y de atomizacin.
7.6. La siguiente tabla sugiere las longitudes de onda, condiciones de
pirolisis y atomizacin para cada uno de los analitos que se
determinar:
Tabla 1.
Condiciones de determinacin para los analitos de inters

Elemento
Longitud
de onda
(nm)
T de pirlisis
(C)
T de atomizacin
(C)
Cd 228,8 700 1400
Cr 357,9 1500 2300
Cu 324,8 1200 1900
Pb 283,3 850 1500
185
7.7. Si se observa que la concentracin de la muestra es mayor que la
concentracin del mayor estndar, sta deber ser diluida con la
misma matriz cida y reanalizada.
8.1. Clculos para la preparacin de la soluciones de calibracin a partir de
un estndar primario comercial:
est
dl dl
est
C
V C
V

= mL
8.2. Clculos para determinar la concentracin del analito (g/L).
dl e
F C C =
donde;
C
e
Concentracin del elemento en la muestra original (g/L),
C Concentracin del elemento en la solucin de la muestra (g/L),
leda directamente o usando la curva de calibracin.
F
di
Factor de dilucin: Volumen de aforo de la solucin de la muestra
(mL) / volumen de la alcuota tomada para dilucin (mL).
C
dl
Concentracin a la que se quiere diluir el estndar (g/L)
V
dl
Volumen de aforo de la dilucin (mL)
C
est
Concentracin del estndar (g/L)

8.3. Expresin del resultado
Los resultados sern expresados en mg/L o g/L acompaado de la
incertidumbre expandida a un nivel de confianza del 95%
aproximadamente.
Control de Calidad:
Establecer y mantener un sistema de registro para documentar la calidad de
los datos generados.
186
Establecer los lmites de deteccin para evaluar el nivel de ruido del
instrumento y los cambios de respuesta en el tiempo para cada analito,
analizando una serie de blancos reactivos.
Estos lmites en g/L, se estiman calculando el promedio de las desviaciones
estndar de tres corridas y en das no consecutivos del blanco reactivo con 7
mediciones por da.
Esta medicin debe realizarse al menos cada tres meses.
Con cada lote de muestras, se deben analizar por lo menos un blanco.
Realizar el anlisis por lo menos por triplicado.
Con cada lote de muestras, se debe analizar por lo menos un material de
control, que pueden ser muestras fortificadas con un volumen conocido del
analito en anlisis o un material de referencia certificado.
Es necesario establecer un criterio de aceptacin de los resultados
obtenidos. Para muestras fortificadas el lmite debe ser 20% del valor
fortificado.
9. REFERENCIAS
[1] Standard Method for the examination of water and wastewater American
Health Association Ed. 21 th 2005 3113 A
Health Association Ed. 21 th 2005 3113 B
[3] Environmental Protection Agency, EPA Mtodo 7010 2. SW-845.
[4] Bernhard Welz, Michael Sperlling. Atomic Absorption Spectrometry. 3era.
Edicin. WILEY-VCH.
187
2.3.1.24. Determinacin de As, Co, Cr, Cs, Fe, Rb, Sb, Sr, U, Zn en
muestras de agua mediante el anlisis por activacin
neutrnica, mtodo del k subcero

PROYECTO ARCAL
PT-MA-04

Determinacin de As, Co, Cr, Cs, Fe, Rb, Sb, Sr, U, Zn en muestras de
agua mediante el anlisis por activacin neutrnica, mtodo del k
subcero
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar la concentracin multielemental en muestras de agua superficial,
utilizando el anlisis por activacin neutrnica, basado en el mtodo del
ksubcero (k
0
- NAA).
2. ALCANCE
Este mtodo se aplica a muestras de agua superficial y a la determinacin de
As, Co, Cr, Cs, Fe, Rb, Sb, Sr, U, Zn.
El anlisis por activacin neutrnica instrumental (AANI) es una tcnica
analtica nuclear, que utiliza el proceso de transformacin de un nucleido
cualquiera en otro artificialmente radiactivo, mediante la captura de un
neutrn y la posterior medicin de la actividad inducida, para el anlisis
multielemental cualitativo y cuantitativo de elementos mayores, menores y
traza en muestras geolgicas, biolgicas, arqueolgicas, ambientales, etc.
El mtodo de anlisis por activacin comparativo ha sido el ms utilizado por
varias dcadas. Este consiste en la irradiacin simultnea y en la misma
posicin de la muestra y un comparador que contiene cantidades
exactamente conocidas de cada uno de los elementos que interesa analizar.
El mtodo del k
0
, es un mtodo paramtrico, que utiliza un solo comparador
para la determinacin multielemental en la muestra y requiere un
conocimiento exacto de los parmetros que caracterizan la facilidad de
irradiacin.
188
4. EQUIPOS
4.1. Fuente de neutrones con flujos trmicos del orden de 10
13
n.cm
-2
. s
-1
.
4.2. Sistema de Espectrometra Gamma de alta resolucin constitudo por:
Detector semiconductor de Ge-Hiperpuro, con preamplificador incorporado.
Fuente de alta Tensin
Amplificador adecuado
Convertidor analgico digital.
4.3. Sistema intercambiador de medicin de muestras
4.4. Balanza analtica de sensibilidad igual o mayor a 0.1 mg
4.5. Polietileno (PE) de buena calidad para irradiacin.
4.6. Cpsulas de PE para envo de muestras a irradiacin
4.7. Fuente patrn de 152Eu
4.8. Contenedor de Pb
4.9. Material de laboratorio limpio, guantes de polietileno.
4.10. Horno digestor de microondas.
4.11. Prensa hidrulica

5.1. MATERIALES
5.1.1. Micropipeta calibrada y puntas de un solo uso
5.2. REACTIVOS
Reactivos Analticos de la ACS. Se pueden usar otros grados de reactivos
en la medida que sean de suficiente pureza para permitir su uso sin
perder la exactitud de las determinaciones.
5.2.2. Solucin estndar de Na de 10000 mg/L.
5.2.3. Solucin estndar de Co de 1000 mg/L.
5.2.4. Solucin estndar de Mo de 1000 mg/L.
189
5.2.5. Solucin estndar de Au de 500 mg/L.
5.2.6. Materiales de referencia certificados conteniendo los analitos de
inters.
5.2.7. Papel de filtro Whatman 42 de 12.5 cm.
6. ACCIONES PREVIAS
6.1. La manipulacin de muestras y material se realiza con guantes y en
laboratorio limpio.
6.2. Preparacin de los comparadores de Na
Se depositan aproximadamente con micropipeta, 1000 g de solucin
estndar primaria de Na , en discos de papel filtro y se pesan.
Se evapora el disco de papel filtro, hasta secado bajo lmpara IR a
temperatura controlada.
Se prensa el disco seco, se empaca en bolsitas de PE previamente
lavado con HNO
3
al 10%.
6.3. Preparacin de monitores de flujo
De igual manera que en la preparacin del comparador de Na, se
depositan con micropipeta, 15 g de solucin de Au, 350 g de solucin
de Mo y 120 g de solucin de Co.
Se evapora el disco de papel filtro, hasta secado bajo lmpara IR a
temperatura controlada
Se prensa el disco seco, se empaca en bolsitas de PE previamente
lavado con HNO
3
al 10%.
6.4. Calibracin del sistema de espectrometra gamma
Se utiliza una fuente de
152
Eu u otra adecuada para la calibracin. Esta
se coloca sobre el detector que se usara para las mediciones.
Se mide la fuente por 30 minutos y se calibra utilizando las energas de
122 keV, 344.3 keV, 778.9 keV y 1408 keV, en caso de utilizarse
152
Eu.
190
7.1. Las muestras se preparan pesando aproximadamente 100 mL de
muestra en vaso Pirex para ser pre-concentrados en un horno digestor
de microondas a 85
o
C y luego se toman 200 L de muestra pre-
concentrada y se depositan en papel de filtro Whatman 42 para ser
evaporado en lmpara infrarroja a temperatura controlada.
7.2. Los filtros secos son prensados como pastillas de 13 mm de dimetro,
luego es embolsado, codificado y acondicionado en viales de polietileno
para irradiacin.
7.3. Se acondicionan en las cpsulas para irradiacin alternadamente
comparadores, muestras, monitores de flujo, blancos y materiales de
referencia preparados de igual forma que las muestras.
7.4. Se enva la cpsula a irradiar por 5 h, a una potencia de 10 MW y un flujo
de neutrones trmicos de aprox. 3.0 10
13
n. cm
2
s
-1
.
7.5. Medir y registrar la tasa de dosis de la cpsula irradiada
aproximadamente a 25 cm y colocarla en el tacho de plomo anexo a la
estacin de envo. En caso superar los 0.5 mSv transportar en
contenedor de plomo a la campana radioqumica.
7.6. Abrir la cpsula dentro de la campana y retirar los envases del estndar y
la muestra verificando la integridad de los mismos.
7.7. Transportar en el contenedor de plomo, las muestras, comparadores al
laboratorio de mediciones de espectrometra gamma.
7.8. Medir las muestras, materiales de referencia y comparadores de sodio
utilizando el detector de Ge (HP), de eficiencia relativa adecuada y con
una buena resolucin para el pico de la fuente utilizada en la calibracin
del espectrmetro gamma.
7.9. Evaluar los espectros.
7.10. Calcular la concentracin de los elementos de inters.
7.11. Documentar la informacin en formatos preparados para ello.
8.1. Clculo de la concentracin en g/L

191
Se emplea el rea de los siguientes radionclidos:
192

56
As 559 keV
60
Co 1173 y 1332.5 keV
51
Cr 320 keV
134
Cs 796 keV
59
Fe 1099 y 1291 kev
239
Np (U) 277 keV
86
Rb 1076 keV
124
Sb 1690 keV
88m
Sr 388 keV
95
Zn 1115 keV

Calcular la concentracin
i
del elemento i en una muestra x aplicando
el mtodo de k
0
segn la convencin de Hgdahl:
) (
) (
, 0
, 0
,
,
,
,
x
p
x
p
x o
p o
p esp
x esp
i
Q F
Q F
K
K
T
T
+
+
=

Donde x y p denota la muestra y el estndar respectivamente y T
esp
es igual:

) (
,
) , (
g w S
H C D C
T
i n
c x esp

=

d
t
e D

=

( )
i
t
e
C

1

l
r
t
t
H =

193
Donde; ti, td son los tiempos de irradiacin, decaimiento
respectivamente, es la constante de decaimiento = 0.693/periodo de
semidesintegracin; es la eficiencia del detector para la energa
medida, Q() es la razn de la integral de resonancia a la seccin eficaz
como funcin de y F es la relacin de flujo trmico sobre flujo
epitrmico.
8.2. Expresin de Resultados.
La concentracin calculada se expresa en trminos de g.L
-1
con la
incertidumbre expandida.
9. CONTROL DE CALIDAD
9.1. Las muestras se analizan en duplicado
9.2. Por cada corrida de muestras se analiza como mnimo un material de
referencia certificado.
9.3. Por cada corrida de muestra se analiza un blanco de reactivos.
9.4. Participar en ensayos de aptitud o rondas de intercomparacin en matriz
agua por lo menos una vez al ao
10. REFERENCIAS
10.1. Knoll G.F. Radiation Detection and Measurement 2
nd
Edition 1989.
10.2. G. Erdtmann Nuclear Activation and Radioisotope Methods of Analyses.
10.3. IAEA-TECDOC-564 Practical Aspects of Operating a Neutron Activation
Analyses Laboratory. Documento Tcnico del Taller Regional. Tpicos
selectos sobre Aplicaciones del Mtodo de k-sub cero y otros mtodos
Paramtricos en Anlisis por Activacin Neutrnica.
10.4. Frans De Corte. The k
0
-Standardization Method, 1987.
194
2.3.1.25. Determinacin de Cadmio por el Mtodo de
Espectrometra de Absorcin Atmica con Aspiracin
Directa
PROYECTO ARCAL
PT-MA-05

Determinacin de Cadmio por el Mtodo de Espectrometra de
Absorcin Atmica con Aspiracin Directa
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar cadmio total por espectrometra de absorcin atmica.
2. ALCANCE
Se aplica a cualquier agua superficial y corresponde a la concentracin de
metales determinados en una muestra no filtrada.
3.1. Una fraccin de muestra previamente digerida, es aspirada hacia una
llama Aire-Acetileno posicionada en el paso ptico de un espectrmetro
de absorcin atmica. La muestra es atomizada bajo estas condiciones.
3.2 La poblacin de tomos al estado elemental absorbe radiacin
caracterstica proveniente una fuente de emisin de lneas atmicas de
cadmio, la relacin entre potencia incidente y potencia transmitida es una
medida de la concentracin del elemento en la muestra.
4. EQUIPOS
4.1. Balanza Analtica, de sensibilidad igual o mayor a 0.1 mg.
4.2. Campana, con sistema de extraccin de gases.
4.3. Espectrmetro de absorcin atmica, dotado con quemador aire-
acetileno y corrector de deuterio (o correctores de acuerdo a equipo
utilizado).
4.4. Fuente de emisin de lneas atmicas de cadmio.
195
4.5. Plancha calefactora con regulacin de temperatura o digestor de micro
ondas (opcional).
5.1. MATERIALES
5.1.1. Material de uso habitual en laboratorio (ej. vasos de precipitado,
pipetas, matraces y otros).
5.2. REACTIVOS
5.2.2. Solucin de cido clorhdrico concentrado, calidad ultrapuro.
5.2.4. Solucin estndar de cadmio de 1000 mg/L.
5.2.6. Acetileno, calidad UAP, (ultra alta pureza).
Soluciones estndares de calibracin
5.2.7. Preparar una serie de soluciones de calibracin en el rango ptimo,
a partir de diluciones apropiadas de la solucin estndar de cadmio
de 1000 mg/L.
5.2.8. Almacenar en envases de polietileno de alta densidad
debidamente etiquetados. La condicin de acidez final para los
estndares es solucin 1% HNO3 V/V. Se exige para la curva de
calibracin un r0.995.
5.2.9. Solucin blanco trmino cero: la solucin trmino cero debe ser
preparada con agua grado reactivo y en un medio 1% HNO3 V/V.
6. ACCIONES PREVIAS
6.1. Las muestras que contienen material particulado o materia orgnica,
generalmente requieren pretratamiento antes del anlisis
espectroscpico. Estas se deben someter a un pretratamiento previo de
digestin para liberar todo el cadmio presente, que puede estar formando
parte de la materia suspendida o coloidal. Se recomienda utilizar el
procedimiento PT-DA-01.
196
6.2. La aplicacin de la variante metodolgica de omitir la digestin en
muestras con turbiedad < 1UNT, no es aplicable en la determinacin de
Cd por el mtodo de aspiracin directa, debido al nivel exigido de LDM
para este parmetro. Por tanto, para la determinacin de Cd en agua
potable utilizando la metodologa propuesta, es imprescindible realizar el
tratamiento de preconcentracin.
Preconcentracin por evaporacin
6.3. Transferir 250 mL de muestra previamente digerida a un vaso de
precipitacin de tamao adecuado.
6.4. Adicionar 5ml de solucin de HNO
3
concentrado, calentar en plancha
calefactora hasta desprendimiento de vapores rojizos. Continuar el
calentamiento a temperatura controlada hasta asegurarse el
desprendimiento de exceso de HNO
3
[estado pastoso]. Evitar que la
muestra se seque.
6.5. Enfriar y disgregar las sales con 2,5ml de solucin de HCl concentrado.
6.6. Transferir cuantitativamente a un matraz aforado de 25ml y aforar con
agua p.a. grado reactivo exenta de Cd.
6.7. Llevar junto a las muestras, por cada set de anlisis, un blanco de
reactivo con la cantidad de cidos y agua utilizados en al anlisis de las
muestras.
7.1. Encender el espectrmetro y verificar las presiones de aire y acetileno,
ajustando si procede.
7.2. Verificar que el extractor de gases se encuentra en correcto
funcionamiento.
7.3. Posicionar y encender la fuente de emisin de lneas atmicas de
cadmio; esperar a que la fuente se estabilice
7.4. Ajustar la energa de la fuente respecto del detector de acuerdo al
manual del equipo.
7.5. Ajustar la longitud de onda principal y abertura del monocromador de
acuerdo a las especificaciones establecidas en el manual de
197
operaciones del equipo. Longitud de onda principal 228 nm y abertura
del slit 0,7 nm).
7.6. Continuar con el ajuste y calibracin, de acuerdo a instrucciones del
fabricante del equipo.
7.7. Una vez ajustadas las condiciones, calibrar el instrumento
procediendo como sigue:
7.8. Realizar autozero aspirando el blanco termino cero de la curva de
calibracin.
7.9. Calibrar empleando un nmero adecuado de estndares como mnimo
blanco y tres concentraciones en el rango de trabajo,
recomendndose 5 puntos.
7.10. Verificar la calibracin despus de la lectura de cada seis muestras. Si
la calibracin permanece constante continuar con la lectura de las
siguientes muestras. Si la calibracin ha variado, recalibrar y chequear
la lectura de las muestras anteriores.
Lectura de las muestras
7.11. Una vez calibrado el instrumento, determinar la concentracin de las
muestras de acuerdo al siguiente protocolo:
7.12. Aspirar el blanco reactivo del set de anlisis que ha sido sometido al
mismo proceso de las muestras y registrar la concentracin de los
analitos.
7.13. Aspirar las muestras en estudio en secuencia de seis en seis,
verificando la calibracin y la estabilidad del cero entre lotes de
muestra.
7.14. Repetir las lecturas en caso de que sea necesario.
7.15. Aspirar agua grado reactivo entre muestra y muestra para evitar
contaminacin cruzada.
Control de calidad analtica
7.16. Por cada set de anlisis, llevar de forma paralela a las muestras, los
siguientes controles:
198
7.17. Un blanco reactivo preparado a partir de agua para anlisis grado
reactivo exenta de cadmio.
7.18. Un ensayo duplicado de una muestra elegida al azar.
7.19. Un ensayo de un estndar de concentracin conocida cercana al valor
normado.

Cd (mg/L) = (Lect - Bco) x D
donde:
Cd (mg/L) = concentracin de Cd, expresada en mg de Cd por litro de
agua
Lect = lectura de la muestra en mg/L
Bco = lectura blanco reactivo sometido al mismo proceso de las muestras
D = factor de dilucin o concentracin
9. REFERENCIAS
APHA. AWWA. WEF. 21
th
Edition 2005, Part. 3111-B; Direct Air Acetylene
Flame Method .

199
2.3.1.26. Determinacin de Cromo por el Mtodo de
Directa

PROYECTO ARCAL
PT-MA-06

Determinacin de Cromo por el Mtodo de Espectrometra
de Absorcin Atmica con Aspiracin Directa
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar cromo total por espectrometra de absorcin atmica.
2. ALCANCE
cromo, la relacin entre potencia incidente y potencia transmitida es una
4. EQUIPOS
utilizado).
4.4. Fuente de emisin de lneas atmicas de cromo.
200
ondas (opcional).
5.1. MATERIALES
5.2. REACTIVOS
5.2.4. Solucin estndar de cromo de 100 mg/L. Disolver 0,1923 g de
CrO3 en agua, acidificar con 10 mL de solucin de HNO3
concentrado y diluir a 1000 mL con agua destilada 1,00 mL = 100
microgramos Cr.
5.2.5. Oxido nitroso.
5.2.7. Preparar una serie de soluciones de calibracin en el rango de 0,2
a 3,0 mg/L, a partir de diluciones apropiadas de la solucin estndar
de cromo de 100 mg/L.
6. ACCIONES PREVIAS
6.1. ver Procedimiento PT-MA-05.
6.2. Transferir 250 mL de muestra previamente digerida a vaso precipitado y
calentar en plancha de calentamiento para disminuir el volumen de la
201
solucin, evitando que se seque la muestra. Debe evitarse la ebullicin
violenta que puede provocar prdidas del analito.
6.3. Enfriar y diluir a 25 mL con agua.
6.4. En caso de aparecer sales, disgregar primero con 2,5 mL de solucin de
HCl concentrado y despus diluir a 25 mL.
reactivo con la cantidad de cidos y agua utilizados en al anlisis de las
muestras.
funcionamiento.
cobre; esperar a que la fuente se estabilice
manual del equipo.
operaciones del equipo. Longitud de onda principal 357,87 nm.
calibracin.
202
analitos.
muestra.
reactivo exenta de cobre.
normado.

Cr (mg/L) = (Lect - Bco) x D
donde:
Cr (mg/L) = concentracin de Cr, expresada en mg de Cr por litro de agua
203
9. REFERENCIAS
APHA. AWWA. WEF. 21
th
Flame Method.

204
2.3.1.27. Determinacin de Cobre por el Mtodo de
Directa
PROYECTO ARCAL
PT-MA-07

Determinacin de Cobre por el Mtodo de Espectrometra de Absorcin
Atmica con Aspiracin Directa
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar cobre total por espectrometra de absorcin atmica.
2. ALCANCE
Ver Procedimiento PT-MA-05.
4. EQUIPOS
utilizado).
4.4. Fuente de emisin de lneas atmicas de cobre.
ondas (opcional).
5.1. MATERIALES
5.2. REACTIVOS
205
5.2.4. Solucin estndar de cobre de 100 mg/L. Disolver 0,100 g de cobre
metlico en 2 ml de solucin de HNO3 concentrado, aadir 10 mL de
solucin de HNO3 concentrado y diluir a 1000 mL con agua.
5.2.7. Preparar una serie de soluciones de calibracin en el rango ptimo
de 1 a 5 mg/L, a partir de diluciones apropiadas de la solucin
estndar de cobre de 100 mg/L.
6. ACCIONES PREVIAS
6.1. Ver Procedimiento PT-MA-05.
6.2. Para muestras con bajo contenido de cobre se hace necesario realizar
una etapa de preconcentracin. Pueden aplicarse la concentracin por
evaporacin y mediante extraccin con APDC.
precipitacin, y calentar en plancha calefactora para disminuir el volumen
de la solucin, evitando que se seque la muestra. Debe evitarse la
ebullicin violenta que puede provocar prdidas del analito.
6.4. Enfriar y aforar a 25 mL con agua.
HCl concentrado y aforar a 25 mL.
206
funcionamiento.
manual del equipo.
calibracin.
analitos.
207
muestra.
normado.

Cu (mg/L) = (Lect - Bco) x D

donde:
Cu (mg/L) = concentracin de Cu, expresada en mg de Cu por litro de
agua
9. REFERENCIAS
APHA. AWWA. WEF. 21
th
Flame Method.
208
2.3.1.28. Determinacin de Plomo por el Mtodo de
Directa
PROYECTO ARCAL
PT-MA-08

Determinacin de Plomo por el Mtodo de Espectrometra
de Absorcin Atmica con Aspiracin Directa
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determina plomo total por espectrometra de absorcin atmica.
2. ALCANCE
Este mtodo de ensayo es aplicable a cualquier agua superficial y
corresponde a la concentracin de metales determinados en una muestra no
filtrada.
Ver Procedimiento PT-MA-05.
4. EQUIPOS
utilizado).
4.4. Fuente de emisin de lneas atmicas de plomo.
ondas (opcional).
5.1. MATERIALES
209
5.2. REACTIVOS
5.2.4. Solucin estndar de plomo de 100 mg/L. Disolver 0,100 g de
plomo metlico en 2 ml de solucin de HNO3 concentrado, aadir 10
mL de solucin de HNO3 concentrado y diluir a 1000 mL con agua.
estndar de plomo de 100 mg/L.
6. ACCIONES PREVIAS
6.1. Ver Procedimiento PT-MA-05.
6.2. Para muestras con bajo contenido de plomo se hace necesario realizar
una etapa de preconcentracin. Pueden aplicarse la concentracin por
evaporacin y mediante extraccin con APDC.
precipitacin, y calentar en plancha calefactora para disminuir el volumen
de la solucin, evitando que se seque la muestra. Debe evitarse la
ebullicin violenta que puede provocar prdidas del analito.
6.4. Enfriar y aforar a 25 mL con agua.
210
HNO3 concentrado y aforar a 25 mL.
funcionamiento.
plomo; esperar a que la fuente se estabilice.
manual del equipo.
calibracin.
211
analitos.
muestra.
normado.

Pb (mg/L) = (Lect - Bco) x D

donde:
Pb (mg/L) = concentracin de Pb, expresada en mg de Pb por litro de
agua
9. REFERENCIAS
212
APHA. AWWA. WEF. 21
th
Flame Method.
213
2.3.1.29. Determinacin de Arsnico Total por el Mtodo de
Espectrometra de Absorcin Atmica con Generacin de
Hidruros

PROYECTO ARCAL
PT-MA-09

Determinacin de Arsnico Total por el Mtodo de
Hidruros
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar arsnico total mediante espectrometra de absorcin atmica con
generacin de hidruros.
2. ALCANCE
Se aplica a toda agua superficial y corresponde a la concentracin de
arsnico en una muestra ya digerida.
3.1 El arsnico presente en una fraccin de muestra previamente digerida,
es reducido a arsina mediante reaccin con borohidruro de sodio en
medio cido. La arsina generada es conducida por un gas de arrastre
hacia una celda de cuarzo posicionada en el paso ptico de un
espectrmetro de absorcin atmica. La celda se encuentra a una
temperatura aproximada de 1000C. La arsina, en estas condiciones, y a
travs de mecanismos combinados [descomposicin trmica y
reacciones con radicales hidrgeno] es atomizada.
caracterstica proveniente de una fuente de emisin de lneas atmicas
de arsnico, la relacin entre potencia incidente y potencia transmitida es
una medida de la concentracin del elemento en la muestra.
4. EQUIPOS
214
4.3. Espectrmetro de absorcin atmica, dotado con quemador y con
generador de hidruros y corrector de deuterio [u otro corrector de
acuerdo a equipo utilizado).
4.4. Fuente de emisin de lneas atmicas de arsnico.
4.5. Sistema generador de hidruros continuo o discontinuo.
4.6. Celda de cuarzo y soporte de celda.
ondas (opcional).
5.1. MATERIALES
5.2. REACTIVOS
5.2.4. Solucin estndar comercial de arsnico de 1000 mg/L.
5.2.6. Argn o nitrgeno
5.2.7. Borohidruro de sodio (NaBH4)
5.2.8. Yoduro de potasio (KI)
5.2.9. Hidrxido de sodio
5.2.10. Indicador fenolftalena
5.2.11. Solucin de cido sulfrico concentrado, calidad ultrapuro.
5.2.12. Solucin de NaBH4 1 4%; la concentracin depender del
sistema de generacin empleado. Pesar la cantidad requerida para
1L de solucin (el reactivo es corrosivo en contacto con la piel).
Disolver con solucin de NaOH (0,5 -1% m/v). Una vez disuelto,
filtrar a travs de filtro rpido de alta pureza. Descartar el filtro y
215
transferir el filtrado a un matraz aforado de 1000 ml. Aforar con
solucin de NaOH (0,5 -1% m/v).
5.2.13. Solucin de KI 20% m/v: Pesar 20g. de KI, disolver y diluir a 100
mL con agua grado reactivo exenta de arsnico. Proteger de la
oxidacin por efecto de la luz.
5.2.14. Preparar una serie de soluciones de calibracin en el rango
ptimo de trabajo, a partir de diluciones apropiadas del estndar de
1000 mg As (III)/L 1% v/v H2SO4.
5.2.15. Por cada 100 ml de solucin adicionar 10 ml de solucin de KI
(20% m/v). Agitar y dejar reposar aproximadamente 30 minutos.
5.2.16. Cubrir debidamente el matraz para evitar la oxidacin por efecto
de la luz. La condicin de acidez final para estndares es 20% v/v
HCl. Preparar diariamente. Se exige para la curva de calibracin un
r0.995.
preparada con agua grado reactivo exenta de arsnico y en un medio
20 % HCl v/v, adicionando 10 ml de solucin de KI (20% m/v).
Proteger de la oxidacin por efecto de la luz. Preparar diariamente.
6. ACCIONES PREVIAS
Ensayo de las muestras:
digestin para liberar todo el arsnico presente que puede estar
formando parte de la materia suspendida o coloidal. Para muestras de
agua potable, transparentes, incoloras e inodoras, con turbiedad < 1
UNT, puede obviarse el pretratamiento de digestin para analizar por
FAAS con lectura directa. Para esta condicin, luego que la muestra se
recolecta, se acidifica a pH<2 con solucin de HNO
3
concentrado [1,5ml
HNO
3
/L es usualmente adecuado para agua potable] y se analiza sin
216
necesidad de digestin. Antes de aplicar esa modalidad como rutina, y
sobre todo en muestras sin historial, es necesario analizarlas con o sin
digestin, se manera que haya evidencia que los resultados obtenidos
sean comparables.
6.2. El procedimiento analtico para la modalidad sin digestin solo permite
obviar esta operacin, por tanto, deber considerarse cada uno de los
pasos descritos en la preparacin de las muestras para la lectura final.
La aplicacin de esta variante metodolgica est supeditada a lograr,
bajo las condiciones operativas y disposicin de instrumental adecuado,
llegar a los niveles exigidos de LDM para este parmetro. Si ello no es
posible, an cuando la muestra tenga turbiedad < 1 UNT, se deber
aplicar el tratamiento de preconcentracin de muestras descrito ms
adelante.
6.3. Si se requiere digestin de la muestra, proceder por alguna de las
alternativas que siguen para luego continuar con el procedimiento.
6.4. Los volmenes de muestra a ensayar dependen de la concentracin
esperada para el analito, por lo que para su definicin se deber tener
en consideracin esta variable.

Digestin en plancha calefactora. Sin preconcentracin.

6.5. Transferir el volumen seleccionado de la muestra preservada a un vaso
de precipitado de tamao adecuado.
6.6. Adicionar 5 mL de solucin de HNO
3
concentrado y calentar en plancha
calefactora hasta desprendimiento de vapores rojizos. Continuar el
calentamiento a temperatura controlada hasta asegurarse el
desprendimiento del exceso de HNO
3
muestra se seque.
6.7. Enfriar y disgregar las sales con 10 mL de solucin de HCl concentrado.
6.8. Transferir cuantitativamente a un matraz aforado de 100 mL.
6.9. Adicionar 10ml de solucin de KI [prerreduccin de As(V) a As(III)].
217
6.10. Aforar y mezclar con agua p.a. grado reactivo exenta de arsnico.
6.11. Proteger de la oxidacin por efecto de la luz.
reactivo con la cantidad de cidos, KI y agua utilizados en al anlisis de
las muestras.
6.13. Llevar, por cada set de anlisis, un estndar a travs toda la
marcha analtica a fin de evaluar la recuperabilidad en el procedimiento.
Digestin en plancha calefactora. Con preconcentracin inicial.
6.14. Transferir los 250 mL de la muestra preservada a un vaso de
precipitados de tamao adecuado.
6.15. Adicionar 5ml de solucin de HNO
3
concentrado, calentar en
plancha calefactora hasta desprendimiento de vapores rojizos. Continuar
el calentamiento a temperatura controlada hasta asegurarse el
desprendimiento de exceso de HNO
3
muestra se seque.
6.16. Enfriar y disgregar las sales con 5ml de HCl.
6.17. Transferir cuantitativamente a un matraz aforado de 50ml.
6.18. Adicionar 10 mL de solucin de KI [prerreduccin de As(V) a
As(III)].
6.19. Aforar y mezclar con agua grado reactivo exenta de arsnico.
6.20. Proteger de la oxidacin por efecto de la luz.
reactivo con la cantidad de cidos, KI y agua utilizados en al anlisis de
las muestras.
6.22. Llevar, por cada set de anlisis, un estndar a travs toda la
marcha analtica a fin de evaluar la recuperabilidad en el procedimiento.

Digestin con Microondas:
6.23. Ajustar el programa de acuerdo a las condiciones de la matriz de
la muestra.
218
6.24. Transferir al recipiente de digestin el volumen adecuado de
muestra, teniendo presente el efecto de las diluciones sobre el LDM.
6.25. Aplicar el programa.
6.26. Ajustar la muestra de acuerdo a las condiciones finales descritas
en los procedimientos descriptos anteriormente, dependiendo si se
requiere o no preconcentracin inicial.
Ajuste y calibracin del instrumento:
7.1. Encender el espectrmetro y verificar las presiones de aire, acetileno y
nitrgeno o argn, ajustando si procede.
7.2. Verificar que el extractor de gases se encuentre en correcto
funcionamiento.
7.3. Chequear con una fuente de emisin que emita luz visible [Cu, Mn],
que el haz est pasando central a al ranura del quemador.
7.4. Posicionar el soporte de la celda de cuarzo en el paso ptico del
espectrmetro y ajustar que el haz pase por el interior de la celda,
siguiendo las instrucciones proporcionadas en el manual del
instrumento [generador de hidruros].
7.5. Posicionar y encender la fuente de emisin de lneas atmicas de As.
Esperar a que la fuente se estabilice.
7.6. Ajustar la longitud de onda principal [193,7nm] y la abertura del
monocromador de acuerdo a las especificaciones establecidas en el
manual de operaciones del equipo.
7.7. Ajustar la energa de la fuente respecto al detector de acuerdo a las
instrucciones descritas en el manual del equipo.
7.8. Ajustar los flujos de encendido y encender el instrumento.

Sistema manual o automtico de generacin de hidruros [generacin
discontinua].

219
7.9. De acuerdo las instrucciones indicadas en el manual de operaciones
del generador, adicionar el volumen de estndar requerido y aplicar el
programa.
7.10. Ajustar el flujo de gas portador [Ar o N
2
].
7.11. Encender el corrector de absorcin no especfica.
7.12. Verificar la sensibilidad analtica empleando el estndar de calibracin
recomendado en el manual de operaciones del equipo.
7.13. Construir la curva de calibracin empleando un numero adecuado de
estndares, como mnimo blanco y tres concentraciones del rango de
trabajo, recomendndose 5 puntos.
7.14. Verificar la calibracin despus de la lectura de cada 6 muestras. Si la
calibracin permanece constante, continuar con las lecturas de las
siguientes muestras, si la calibracin ha variado, recalibrar y chequear
las lecturas de las muestras anteriores.
7.15. Una vez calibrado el instrumento, determinar la concentracin de
7.16. Aspirar el blanco y realizar auto -cero
7.17. Aspirar las muestras en estudio, en secuencia de 6 en 6, verificando la
calibracin y la estabilidad del cero, entre lotes de muestras. Repetir
las lecturas en caso que sea necesario.
7.18. Aspirar agua para anlisis grado reactivo exenta de As entre muestra
y muestra con el propsito de evitar contaminacin cruzada.
7.19. Para el control de calidad analtica por cada set de anlisis llevar en
forma paralela a las muestras, los siguientes controles:
7.19.1. Un blanco reactivo preparado a partir de agua para anlisis
grado reactivo exenta de As.
7.19.2. Un ensayo duplicado de una muestra elegida al azar
(precisin mnima 80%; RSD 20%)
7.19.3. Un ensayo de un estndar de concentracin conocida,
cercana al valor medido (exactitud mnima 85-115% como
recuperacin del estndar).
220
Sistema de Generacin Continua de Hidruros:
7.20. Encender y ajustar el equipo de acuerdo a las instrucciones descritas
en el manual del equipo y ajustar las condiciones (longitud de onda
principal 193,7 nm y abertura del monocromador slit 0,7 nm).
7.21. Ajustar el flujo de gas (Ar o N
2
) en el sistema de generacin continua
(FIAS)
7.22. Ajustar las velocidades de flujo del reactivo reductor y muestra de
acuerdo a las especificaciones indicadas en el manual del generador
de hidruros (FIAS)
7.26.1. Aspirar el blanco y realizar auto -cero
7.26.2. Aspirar las muestras en estudio, en secuencia de 6 en 6,
verificando la calibracin y la estabilidad del cero, entre lotes de
muestras. Repetir las lecturas en caso que sea necesario.
7.26.3. Aspirar agua grado reactivo exenta de As entre muestra y
muestra con el propsito de evitar contaminacin cruzada.
grado reactivo exenta de As
221
7.27.2. Un ensayo duplicado de una muestra elegida al azar
(precisin mnima 80%; RSD 20%)
7.27.3. Un ensayo de un estndar de concentracin conocida,

As (mg/L) = (Lect - Bco) x D

donde:
As (mg/L) = concentracin de As, expresada en mg de As por litro de
agua

8.1. Si la muestra no acusa presencia de As, se debe informar como el LDM
<0,001 mg/L.
8.2. La posible presencia de materia orgnica constituye un interferente, que
se remueve por digestin de la muestra.

Interferencias:

8.3. No se puede establecer un mecanismo nico de eliminacin de
interferentes, no obstante se recomienda aplicar los siguientes criterios:
8.3.1. Identificar la naturaleza de la interferencia
222
8.3.2. La posible presencia de materia orgnica constituye un
interferente, que se remueve por digestin de la muestra.
8.3.3. Si la interferencia es de carcter fsico y se manifiesta en el
transporte del hidruro, revisar mangueras a fin de evitar fugas,
reacciones de hidrlisis o cualquier efecto que pudiese producirse
debido a la naturaleza del medio de transporte.
8.3.4. Si la interferencia es de carcter fsico y se manifiesta durante la
atomizacin, verificar la limpieza de la celda de cuarzo. Verificar los
niveles de los otros elementos susceptibles de generar hidruros
voltiles y realizar el anlisis con adicin estndar.

9. REFERENCIAS
9.1. Standard Methods For The Examination Of Water And Wastewater.
APHA. AWWA. WEF. 21
th
Edition 2005, Part. 3114-B; Arsenic and
Selenium by Hydride Generation/Atomic Absorption Spectrometry.
9.2. Taller Regional Para La Elaboracin del Manual de protocolos
Armonizados y Evaluados Para La Toma de Muestras y Anlisis de
Aguas y Sedimentos. ARCAL RLA /1/10. El Salvador, 5 9 de Mayo del
2008.
223
2.3.1.30. Determinacin de Mercurio total por el mtodo de
Vapor Atmico de Mercurio (Vapor Fro)

PROYECTO ARCAL
PT-MA-10

Determinacin de Mercurio total por el mtodo de
Vapor Atmico de Mercurio (Vapor Fro)
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar mercurio total mediante espectrometra de absorcin atmica con
generacin de Vapor Atmico de Hg (Vapor Frio).
2. ALCANCE
Este mtodo de ensayo es aplicable a cualquier agua superficial y
corresponde a la concentracin de mercurio determinada en una muestra no
filtrada.
El mercurio presente en una fraccin de muestra previamente digerida, es
reducido a vapor atmico de mercurio, mediante reaccin con cloruro estanoso
en medio cido, o aplicando el procedimiento de generacin continua usando
solucin de boro hidruro de sodio como agente reductor.

El vapor atmico generado es conducido por un gas de arrastre hacia una celda
de cuarzo posicionada en el paso ptico de un espectrofotmetro de absorcin
atmica. La celda se encuentra a temperatura ambiente, la relacin entre
potencia incidente y potencia transmitida es una medida de la concentracin del
elemento en la muestra.

4. EQUIPOS
4.1. Balanza analtica, de sensibilidad igual o mayor a 0,1mg.
224
4.3. Espectrmetro de absorcin atmica, provisto de generador de vapor frio,
celdas con ventanas de cuarzo y accesorios necesarios.
4.4. Fuente de ignicin, de lneas atmicas de mercurio.
4.5. Sistema Generador de Vapor Fro.
4.6. Plancha calefactora o equivalente, con regulacin de temperatura o bao
termoregulado.
5.1. MATERIALES
5.1.1. Material de uso habitual de laboratorio [ej. vasos de precipitado,
matraces, pipetas, y otros].
5.1.2. Recipiente de reaccin, matraz erlenmeyer de 250ml, incorporando
tubo de aireacin.
5.2. REACTIVOS
5.2.1. Durante el anlisis se deben utilizar solamente reactivos de calidad
para anlisis (p.a.), y con agua para anlisis grado reactivo.
5.2.4. Estndar comercial de Hg de 1000 mg/L
5.2.6. Acetileno
5.2.7. Borohidruro de sodio
5.2.9. Soluciones estndares de calibracin: preparar una serie de
soluciones de calibracin en el rango ptimo de trabajo, a partir de
diluciones apropiadas del estndar de 1000 mg Hg/L 10% v/v HCl.
Preparar diariamente. Se exige para la curva de calibracin un r
0.995.
5.2.10. Solucin blanco trmino cero: la solucin trmino cero debe
ser preparada con agua para anlisis grado reactivo exenta de
mercurio y en un medio 10 % HCl v/v. Preparar diariamente.
225
5.2.11. Como agente reductor se utiliza una solucin acuosa de
NaBH4 al 0.2% en NaOH al 0.05%, debindose preparar cada vez
que es utilizado.
5.2.12. Se pesan 0.5 gr de NaOH disolvindolo en agua Mili Q para
luego aadir 2 gr de NaBH4, posteriormente se filtra y se afora a 1 L.

6. ACCIONES PREVIAS
6.1. Para la toma, transporte y almacenamiento de las muestras se
recomienda utilizar recipientes de vidrio en lugar de plstico si la muestra
se almacenar por ms de 15 das.
6.2. En vista que el mercurio se puede perder rpidamente desde las
muestras, se recomienda utilizar HNO3 como preservante y as mantener
el pH < 2,0.
Ensayo de las muestras:
digestin para liberar todo el mercurio presente que puede estar
formando parte de la materia suspendida o coloidal. Para muestras de
agua potable, transparentes, incoloras e inodoras, con turbiedad < 1
UNT, puede obviarse el pretratamiento de digestin para analizar por
FAAS con lectura directa. Para esta condicin, luego que la muestra se
recolecta, se acidifica a pH<2 con HNO3 65% m/v [1,5ml HNO3/L es
usualmente adecuado para agua potable] y se analiza sin necesidad de
digestin. Antes de aplicar esa modalidad como rutina, y sobre todo en
muestras sin historial, es necesario analizarlas con o sin digestin, de
manera que haya evidencia que los resultados obtenidos sean
comparables. El procedimiento analtico para la modalidad sin digestin
solo permite obviar esta operacin, por tanto, deber considerarse cada
uno de los pasos descritos en la preparacin de las muestras para la
lectura final. La aplicacin de esta variante metodolgica est supeditada
226
a lograr, bajo las condiciones operativas y disposicin de instrumental
adecuado, llegar a los niveles exigidos de LDM para este parmetro.

7.1. Encender el computador, el espectrmetro de absorcin atmica y el
sistema de anlisis de inyeccin de flujo FIAS, de acuerdo a las
referencias descritas en el manual de operaciones de su equipo.
7.2. Alinear la posicin de la celda de cuarzo y optimizar la intensidad de la
seal ajustando la posicin de la lmpara y la longitud de onda (253.7
nm).
7.3. Abrir el programa que pone a disposicin el equipo utiizado, encender la
lmpara de mercurio y dejar estabilizar por un tiempo aproximado de 30
minutos para aumentar su energa, encender luego la celda (100C).
7.4. Encender el extractor de aire.
7.5. Ajustar las mangueras y dejar por un tiempo prudente el funcionamiento
de las bombas para el lavado con agua de calidad para anlisis.
7.6. Llenar los contenedores con la solucin de cido clorhdrico al 10% y
solucin de boro hidruro (0.2% en 0.05% de NaOH).
7.7. Ajustar la presin del argn entre 320 y 400 kpa.
7.8. Ajustar la velocidad de flujo sobre 100 ml/min
7.9. Calibrar el equipo con las soluciones estndares de concentracin de 10
y 20 g/L de mercurio. Construir la curva de calibracin empleando un
numero adecuado de estndares, como mnimo blanco y tres
concentraciones del rango de trabajo, recomendndose 5 puntos.
7.10.1. Aspirar el blanco y realizar auto cero
227
7.10.3. Aspirar agua para anlisis grado reactivo exenta de Hg entre
muestra y muestra con el propsito de evitar contaminacin cruzada.
7.10.4. Para el control de calidad analtica por cada set de anlisis
llevar en forma paralela a las muestras, los siguientes controles:
7.10.4.1. Un blanco reactivo preparado a partir de agua para anlisis
grado reactivo exenta de Hg.
7.10.4.2. Un ensayo duplicado de una muestra elegida al azar
(precisin mnima 80%; RSD 20%).
7.10.4.3. Un ensayo de un estndar de concentracin conocida,
7.11. Interferencias
No se puede establecer un mecanismo nico de eliminacin de
interferentes, no obstante se recomienda aplicar los siguientes
criterios:
7.11.1. Identificar la naturaleza de la interferencia.
transporte del vapor atmico de mercurio, revisar mangueras a fin de
evitar fugas, reacciones de hidrlisis o cualquier efecto que pudiese
producirse debido a la naturaleza del medio de transporte.
atomizacin, verificar la limpieza de la celda de cuarzo. Si existe
interferencia de matriz, realizar el anlisis con adicin estndar.


mg Hg/L = (Lect - Bco) x D

donde:
228
mg Hg/L = concentracin de Hg, expresada en mg de Hg por litro de
agua.
Lect = lectura de la muestra en mg/L.
Bco = lectura blanco reactivo sometido al mismo proceso de las muestras.

8.1. Si la muestra no acusa presencia de Hg, se debe informar como el LDM
<0,001 mg/L.

9. REFERENCIAS
9.1. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. APHA.
AWWA. WEF. 21TH Edition 2005, Part 3000. Cold-Vapor Atomic
Absorption Spectrometry Method 3112 B.
2008.
229
2.3.1.31. Pretratamiento y Preparacin de Muestras para anlisis
de Sedimentos

PROYECTO ARCAL
PT-PS-01

Pretratamiento y Preparacin de Muestras para anlisis de Sedimentos
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Pretratamiento y preparacin de las muestras de sedimentos para el anlisis
qumico.
2. ALCANCE
Se aplica a todas las muestras de sedimentos que sern analizados y
comprende todas las etapas desde la recepcin de las muestras hasta su
digestin cida, sin incluir esta etapa.
Comprende las etapas de secado y preparacin fsica de las muestras de
sedimentos.
4. EQUIPOS
4.1. Balanza de aproximadamente 200 kg de capacidad.
4.2. Estufa de secado de muestras con conveccin de aire.
6. ACCIONES PREVIAS

Secado de muestras

7.1. Las tcnicas de secado deben ser apropiadas para todos los anlisis
subsiguientes que se realizarn.
230
7.2. Es importante la etapa de secado porque las concentraciones de los
contaminantes se informan sobre base seca.
7.3. La etapa de secado proporcionar una manera de calcular el contenido
de agua por pesada de la muestra antes y despus del secado.
7.4. Esta etapa de secado se har en estufa provista de un sistema interior
que minimice la contaminacin de las muestras durante este proceso.
7.5. La temperatura de secado se fijar en 50 C y esta etapa finalizar
cuando el peso se mantenga constante.

Fraccionamiento de muestras
7.6. Los sedimentos constituyen una mezcla de partculas de diferente
tamao. Por tal motivo, es crtico poder maximizar la homogeneidad de
una muestra seleccionada para el anlisis.
7.7. Se debe comenzar con una muestra representativa que sea lo
suficientemente grande para poder incorporar todo el mbito de tamaos
de partculas presentes en el punto de muestreo.
7.8. Esto es importante ya que el proceso de homogeneizacin est enfocada
en una mezcla exhaustiva de la muestra. Toda la etapa de mezclado
debe realizarse en contenedores especiales y con herramientas no
contaminantes. Se puede emplear, si se dispone de ello, de
mezcladores comerciales para tamao de muestras muy grande para
ser manipuladas manualmente.
7.9. A continuacin, se procede a realizar el submuestreo de las muestras.
7.10. Para muestras secas, se emplea la tcnica de cuarteo que produce
submuestras de menor volumen a partir de un volumen inicial grande.
7.11. La muestra se apila en forma de cono y se va separando en cuartos.
Se separan dos cuartos y el resto se recombina, se vuelve a formar la
pila y se cuartea nuevamente. Se repite este procedimiento hasta lograr
una masa adecuada de submuestra.

Preparacin de las muestras

231
Este proceso es de gran importancia para lograr resultados
experimentales bien representativos.
El objetivo es preparar una muestra de tal manera que se preserve la
distribucin original de los analitos al momento del muestreo y que se
prevenga la introduccin de elementos extraos y que puedan contaminar
las muestras.
Una homogeneizacin adecuada implica que todas las partculas
minerales presentes en el sedimento, estn igualmente representadas en
la submuestras.
De acuerdo a la masa de submuestra requerida para el anlisis, se
obtiene un tamao de partcula adecuado para el trabajo.
Generalmente se puede trabajar con tamaos de partcula menores que
malla #150 o menores que 0,10 mm.
Este proceso de preparacin requiere de equipos provistos con elementos
de molienda que no aporten ningn tipo de contaminacin posterior.
Hay que realizar al finalizar este procedimiento un test de homogeneidad
para garantizar que toda la submuestra que llega al laboratorio qumico
sea homognea.

Preparacin de las muestras
7.12. Este proceso es de gran importancia para lograr resultados
experimentales bien representativos.
7.13. El objetivo es preparar una muestra de tal manera que se preserve la
distribucin original de los analitos al momento del muestreo y que se
prevenga la introduccin de elementos extraos y que puedan
contaminar las muestras.
7.14. Una homogeneizacin adecuada implica que todas las partculas
minerales presentes en el sedimento, estn igualmente representadas
en la submuestras. De acuerdo a la masa de submuestra requerida para
el anlisis, se obtiene un tamao de partcula adecuado para el trabajo.
7.15. Generalmente se puede trabajar con tamaos de partcula menores
que malla #150 o menores que 0,10 mm. Este proceso de preparacin
232
requiere de equipos provistos con elementos de molienda que no
aporten ningn tipo de contaminacin posterior.
7.16. Hay que realizar al finalizar este procedimiento un test de
homogeneidad para garantizar que toda la submuestra que llega al
laboratorio qumico sea homognea.

9. REFERENCIAS
IAEA-TECDOC-1360

233
2.3.1.32. Digestin cida total de sedimentos utilizando
microondas

PROYECTO ARCAL
PT-DS-01

Digestin cida total de sedimentos utilizando microondas
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Es la digestin cida de sedimentos con horno de microondas para anlisis
de metales por tcnicas espectroscpicas.
2. ALCANCE
Este mtodo se aplica a la digestin cida asistida con horno de microondas
de muestras de sedimentos para los siguientes analitos:
Arsnico Cromo Cadmio Cobre Plomo Mercurio
Este mtodo se basa en la descomposicin cida de muestras de sedimento
con horno de microondas y se considera un mtodo muy rpido y
multielemental. Los digestos producidos por este mtodo son adecuados
para analizar elementos por espectrometra de absorcin atmica por llama
(FAAS), por espectrometra de absorcin atmica por vapor fro (CVAAS),
por espectrometra de absorcin atmica por horno de grafito (GFAAS) y por
espectrometra de emisin atmica por excitacin por plasma inductivo (ICP-
OES). Permite valores altos de recuperacin para los analitos citados.
4. EQUIPOS
4.1. Balanza analtica de 160 g de capacidad con precisin de 0,0001 g.
4.2. Horno de microondas con tubos de Tefln con sensores de temperatura
con exactitud de 2C a la temperatura final de 180 C.
5.1. MATERIALES
5.1.1. Pipetas graduadas de tamaos adecuados.
234
5.1.2. Matraces aforados de polipropileno de 50 mL.
5.1.3. Papel de filtro cualitativo o equivalente.
5.1.4. Embudos de polipropileno.
5.2. REACTIVOS
5.2.5. Solucin de cido fluorhdrico concentrado. Se debe analizar el
cido para determinar el grado de pureza. Si el valor del blanco de
5.2.6. Perxido de hidrgeno. Se debe analizar para determinar el grado
de pureza. Si el valor del blanco de reactivos es menor al lmite de
deteccin del mtodo, puede usarse el cido correspondiente.
6. ACCIONES PREVIAS
7.1. Pesar alrededor de 0,5000 g de muestra con aproximacin de 0,0001 g y
transferir al recipiente de Tefln del horno de microondas.
7.2. Agregar 9,0 mL de solucin de cido ntrico concentrado y 3,0 mL de
solucin de cido fluorhdrico concentrado. Esta operacin debe hacerse
bajo campana de extraccin de humos.
235
Nota: se puede agregar hasta 0,5 mL de perxido de hidrgeno antes de
colocar el tubo en el horno a microondas, tomando la precaucin de
adicionarlo en porciones pequeas, ya que pueden producirse reacciones
violentas.
7.3. Cerrar hermticamente el vaso y colocarlo en el horno a microondas, de
acuerdo a los manuales de cada instrumento.
7.4. La temperatura de la muestra debera alcanzar los 180 C 5C en
aproximadamente 5 minutos y permanecer a esa temperatura durante 10
minutos.
7.5. Al finalizar el ciclo del horno, dejar enfriar los recipientes durante 5
minutos antes de retirarlos del horno. Verificar que no haya ocurrido
prdidas de peso durante el proceso, considerando aceptable una
prdida de hasta el 1 % del peso de la muestra original ms los reactivos.
7.6. Si el digesto presenta partculas que pueden interferir con las
determinaciones analticas, se pueden centrifugar o filtrar.
7.7. Diluir a volumen en un matraz de polipropileno de 50 mL usando solucin
de cido ntrico 0,28 M.
9. REFERENCIAS
Norma EPA 3052.
236
2.3.1.33. Digestin cida total de sedimentos en sistema abierto

PROYECTO ARCAL
PT-DS-02

Digestin cida total de sedimentos en sistema abierto
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Es la digestin cida de sedimentos a sistema abierto para anlisis de
metales por ICP-OES.
2. ALCANCE
Este mtodo se aplica a la digestin cida total de muestras de sedimentos
para los siguientes analitos a ser determinados por ICP-OES:
Arsnico Cromo Cadmio Cobre Plomo
Este mtodo se basa en la descomposicin total de la muestra con una
combinacin de cidos que permite valores altos de recuperacin para los
analitos citados.
4. EQUIPOS
4.2. Plancha calefactora o equivalente, ajustable y con posibilidad de
termostatizar.
5.1. MATERIALES
5.1.1. Vasos de precipitacin de Tefln adecuados o equivalentes.
5.1.2. Tapa de vasos de tefln o equivalentes.
de poro.
5.1.4. Pipetas graduadas de tamaos adecuados.
5.1.5. Matraces aforados de polipropileno de 50 mL.
5.2. REACTIVOS
237
5.2.3. Solucin de cido clorhdrico concentrado. Se debe analizar el
5.2.4. Solucin de cido perclrico concentrado. Se debe analizar el
5.2.5. Solucin de cido fluorhdrico concentrado. Se debe analizar el
6. ACCIONES PREVIAS
7.1. Pesar alrededor de 0,5000 g de muestra con aproximacin de 0,0001 g y
transferir al recipiente de Tefln del horno de microondas.
7.2. Agregar 10 mL de solucin de cido ntrico concentrado, cubrir el vaso
con la cubierta adecuada y calentar la solucin a 70C durante 3 horas.
238
7.3. Agregar 5 mL de solucin de cido perclrico concentrado y calentar la
muestra a 90C durante 15 horas.
7.4. Agregar 5 mL de cido ntrico concentrado, 5 mL de solucin de cido
perclrico concentrado y 5 mL de solucin de cido fluorhdrico
concentrado y calentar a 70 C para llegar casi a s equedad.
7.5. Disolver el residuo con 5 mL de solucin de cido clorhdrico concentrado
y 5 mL de solucin de cido fluorhdrico concentrado y calentar a 70 C
durante 15 horas.
7.6. Llevar la solucin casi a sequedad 3 veces y redisolver cada vez con 10
mL de solucin de cido ntrico 0,28 M.
7.7. Una vez terminada esta etapa, transferir a un matraz de polipropileno de
50 mL y diluir con solucin de cido ntrico 0,28 M.
9. REFERENCIAS
Goossens, Jan; Moens, Luc; Dams, Richard: Inductively coupled plasma
mass spectrometric determination of heavy metals in soils and sludge
candidate reference materials; Analytica Chimica Acta 304 (1995). 307-315.
239
2.3.1.34. Digestin cida total de slidos en suspensin

PROYECTO ARCAL
PT-DS-03

Digestin cida total de slidos en suspensin.
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Es la digestin cida de slidos en suspensin para anlisis de metales por
ICP-OES.
2. ALCANCE
Este mtodo se aplica a la digestin cida total de de slidos en suspensin
para los siguientes analitos a ser determinados por ICP-OES:
Arsnico Cromo Cadmio Cobre Plomo
Est basado en la descomposicin total de la muestra con una combinacin
de cidos que permite valores altos de recuperacin para los analitos citados.
Es aplicable a metales en suspensin.
Metales en suspensin: son los metales retenidos por un filtro de membrana
de 0,45 m de poro. Se debe filtrar la muestra a travs del filtro en el
momento de la coleccin de la muestra, separar la fraccin lquida y
preservar los filtros con los slidos en suspensin.
4. EQUIPOS
4.2. Plancha calefactora o equivalente, ajustable y con posibilidad de
termostatizar.
5.1. MATERIALES
5.1.1. Vasos de precipitacin de Tefln adecuados o equivalentes.
5.1.2. Vidrios de reloj o equivalentes.
240
de poro.
5.1.4. Papel de filtro y embudos de filtracin.
5.1.5. Probetas graduadas o equivalentes.
5.2. REACTIVOS
5.2.3. Solucin de cido clorhdrico concentrado. Se debe analizar el
6. ACCIONES PREVIAS
7.1. Transferir el filtro de membrana que contiene el material insoluble a un
vaso de precipitacin de 150 mL y agregar 4 mL de solucin de cido
ntrico concentrado.
7.2. Cubrir el vaso con un vidrio de reloj y calentar suavemente sobre plancha
calefactora. El cido disolver la membrana muy rpidamente.
7.3. Aumentar la temperatura de la plancha y digerir el material particulado.
241
7.4. Cuando el cido se haya evaporado, enfriar el vaso y agregar 3 mL
adicionales de solucin de cido ntrico. Cubrir y seguir el calentamiento
hasta que la digestin sea completa, lo que generalmente se indica por
un color muy dbil del digesto.
7.5. Evaporar casi a sequedad (2 mL), enfriar, agregar 10 mL de solucin de
cido clorhdrico (1+1) y 15 mL de agua grado reactivo y calentar
suavemente durante 15 minutos para disolver cualquier precipitado o
material insoluble.
7.6. Dejar enfriar, lavar bien las paredes del vaso y el vidrio de reloj con agua
grado reactivo y filtrar la muestra para remover cualquier partcula que
puede obturar el nebulizador.
7.7. Ajustar el volumen a 50 mL con agua grado reactivo.

La muestra est preparada para su posterior anlisis.
9. REFERENCIAS
EPA 200.7
242
2.3.1.35. Determinacin de cadmio, cromo, plomo, arsnico y
cobre en sedimentos por ICP-OES

PROYECTO ARCAL
PT-MS-01

Determinacin de cadmio, cromo, plomo, arsnico y cobre en
sedimentos por ICP-OES
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar la concentracin de cadmio, arsnico, cromo, cobre y plomo en
digestos de sedimentos por espectrometra de emisin atmica por plasma
inductivo con deteccin ptica (ICP-OES).
2. ALCANCE
Se aplica a metales en sedimentos, que han sido digeridos por el
procedimiento de digestin total. Se aplica a los siguientes analitos, que se
detallan a continuacin:

Analito
mbito de concentracin de trabajo
( g/g)
Arsnico 2 100
Cadmio 0,3 100
Cromo 0,5 100
Cobre 0,5 100
Plomo 2 100

Este mtodo puede adaptarse a otros analitos, que no estn cubiertos en el
alcance de este procedimiento.
Este mtodo describe la tcnica para la determinacin simultnea o
secuencial de elementos traza en solucin.
243
La base es la medida de la emisin atmica por una tcnica espectroscpica
ptica.
Se nebulizan los digestos y se transporta el aerosol producido a la antorcha
del plasma donde ocurre la excitacin.
Se debe emplear una tcnica de correccin de fondo para compensar la
contribucin del fondo variable para la determinacin de elementos traza.
Esta contribucin de fondo debe medirse en forma adyacente a las lneas del
analito durante el anlisis.
La posicin que se selecciona para la medicin del fondo, a ambos lados de
la lnea analtica, se determina por la complejidad del espectro adyacente a la
lnea del analito.
La posicin debe estar libre de interferencias espectrales y debe reflejar el
mismo cambio en la intensidad de fondo que ocurre a la longitud de onda de
medicin.
Las interferencias pueden caracterizarse en dos tipos; interferencias
espectrales e interferencias no espectrales. (ver Procedimiento PT-MA-01.)

4. EQUIPOS
4.1. Espectrmetro de emisin atmica por plasma inductivo.
4.2. Equipo refrigerador para el espectrmetro.
4.3. Equipo purificador de agua.
5.1. MATERIALES
5.1.1. Matraces aforados, clase A, de 50, 100 y 1000 mL.
5.1.2. Pipetas automticas de punta descartable, de volumen variable
entre 10 y 100 L, de volumen variable entre 100 y 1000 L, de
volumen variable entre 50 y 250 L y de volumen variable entre 1000
y 5000 L.
5.1.3. Botellas de plstico de 125 mL.
5.1.4. Jeringas de filtracin.
5.1.5. Filtros de acetato de celulosa de 0,45 m para usar con jeringas.
244
5.1.6. Tubos descartables de plstico de 15 y 50 mL.
5.2. REACTIVOS
5.2.2. Solucin estndar de arsnico de 1000 mg/L, calidad ultrapura.
5.2.3. Solucin estndar de cadmio de 1000 mg/L, calidad ultrapura.
5.2.4. Solucin estndar de cromo de 1000 mg/L, calidad ultrapura.
5.2.5. Solucin estndar de cobre de 1000 mg/L, calidad ultrapura.
5.2.6. Solucin estndar de plomo de 1000 mg/L, calidad ultrapura.
5.2.8. Solucin de cido ntrico (0,2 % V/V). Preparar con 2 mL de
solucin de cido ntrico concentrado (5.2.7.) diluidos a 1000 mL con
agua grado reactivo (5.2.1.).
5.2.10. Nitrgeno, calidad UAP, (ultra alta pureza).
5.2.11. Soluciones estndar de control de procedimiento: material
certificado. Provisto por una empresa acreditada. Posee fecha de
vencimiento.
5.2.12. Materiales de referencia certificados, provistos por el National
Water Research Institute (NWRI), el NIST, o de calidad similar. Estas
muestras slidas se deben digerir de acuerdo al procedimiento para
digestin de muestras de sedimentos. Se sugiere digerir tres
muestras de sedimentos certificados para poder validar la
metodologa analtica.
Soluciones estndar mixtas
Se utilizan las siguientes combinaciones recomendadas por la EPA
5.2.13. Solucin estndar mixta I: cadmio y plomo.
5.2.14. Solucin estndar mixta II: cobre.
5.2.15. Solucin estndar mixta III: arsnico.
5.2.16. Solucin estndar mixta IV: cromo.
5.2.17. Solucin estndar mixta I de 50 mg/L: Pipetear 5,00 mL de cada
una de las siguientes soluciones estndar de 1000 mg/L: cadmio y
245
plomo en un matraz aforado de 100 mL, y diluir hasta el aforo con
solucin de cido ntrico 0,2 % V/V. Almacenar en botella de plstico
de 125 mL. Preparar mensualmente.
una de las siguientes soluciones estndar de 1000 mg/L: cobre en un
matraz aforado de 100 mL, y diluir hasta el aforo con solucin de
5.2.19. Solucin estndar mixta III de 50 mg/L: Pipetear 5,00 mL de cada
una de las siguientes soluciones estndar de 1000 mg/L: arsnico en
una de las siguientes soluciones estndar de 1000 mg/L: cromo en
246
Blanco de calibracin
5.2.27. Solucin 5.2.8.
Blanco de filtro
5.2.28. Es agua grado reactivo que se hace pasar por el filtro de acetato
de celulosa. Usar slo si se necesit el uso de los filtros para la
muestra.
6. ACCIONES PREVIAS
6.1. Las muestras deben estar libres de slidos en suspensin previo a la
aspiracin.
6.2. Las muestras deben tratarse antes del anlisis, si se sospecha la
presencia de slidos en suspensin o sedimentados.
6.3. Las muestras se filtran por medio de filtros con jeringa.
247
6.4. Las muestras deben conservarse a bajas temperaturas (4C).
6.5. Las soluciones estndar de control de performance se utilizan tal cul las
entrega el proveedor.
Operacin del equipo

7.1. Preparar el equipo de ICP de acuerdo a las instrucciones que figuran
en el manual de instrucciones del instrumento.
7.2. La siguiente tabla describe los parmetros operativos para cada uno
de los analitos.

Analito Longitud de onda
(nm)
Arsnico 188,98
Cadmio 228,80
Cromo 267,72
Cobre 324,75
Plomo 220,35

Estas longitudes de onda son recomendadas por su sensibilidad y
aceptacin. Se pueden sustituir por otras longitudes de onda, si se
considera que hay interferencias espectrales.
7.3. Antes de comenzar el uso del instrumento, proceder a estabilizar el
plasma durante 20 minutos.
7.4. Llevar a cabo una alineacin ptica empleando la lmpara de Hg
provista con el equipo.
7.5. Verificar la alineacin de la antorcha del plasma y de la ranura de
entrada del espectrmetro, si se llev a cabo un mantenimiento del
sistema de introduccin de las muestras.
7.6. En el muestreador automtico, se colocan los tubos de plstico de 50
mL, conteniendo el blanco de calibracin y las soluciones estndares
248
de calibracin, comenzando por la solucin ms diluida. Se programa
el equipo y se lleva a cabo la calibracin correspondiente.
7.7. Purgar la caera con cada estndar o blanco a una velocidad de 4
mL/min durante un mnimo de 15 segundos. Luego dejar estabilizar
durante otro mnimo de 15 segundos.
7.8. Enjuagar con agua reactivo durante 30 segundos antes de cada
estndar para minimizar cualquier efecto de memoria del estndar
previo. Emplear tres integraciones de los estndares o muestras para
reducir el error aleatorio.
7.9. Todas estas operaciones, una vez programadas, el equipo las lleva a
cabo en forma automtica.
7.10. A continuacin del estndar ms concentrado, aspirar agua reactivo
(limpieza), luego un blanco de calibracin, y a posteriori dos
soluciones estndar de control de procedimiento.
7.11. Si la calibracin y los valores de las muestras de control de
procedimiento estn dentro de los lmites aceptables, continuar con el
anlisis de las muestras. Si no lo estn, proceder a tomar las acciones
correctivas.
7.12. Las muestras se cargan en el muestreador automtico.
7.13. El blanco de filtracin se incluye como una muestra para verificar la
ausencia de contaminantes por el proceso de filtracin. Asegurar que
la lista de muestras en el software coincida con la posicin correcta
en el tray del muestreador.
7.14. El equipo prepara automticamente la curva de calibracin, y en base
a esta curva de calibracin, el equipo efecta los clculos
correspondientes a las muestras ingresadas.
7.15. Se ingresan por computadora los factores de dilucin de cada muestra
y el instrumento automticamente calcula la concentracin correcta.
7.16. En el caso que la curva de calibracin que calcula el equipo no sea
satisfactoria (mal coeficiente de correlacin por alguna lectura errnea
249
de un estndar de calibracin), el analista la puede construir con un
paquete estadstico en forma manual.

Expresar el resultado de cada analito en g/L en base a la curva de
calibracin.
Control de Calidad:
Medir duplicados en el 10 % de los casos, como mnimo. Los resultados
deben estar dentro del valor previamente calculado para cada analito, que a
su vez depende de la zona de la curva de calibracin en la cul se encuentra
su valor. El valor no es el mismo a bajas concentraciones como a altas
concentraciones. Verificar el cumplimiento del grfico de control para
duplicados.
Introducir en el anlisis cada 10 muestras, como mnimo, un estndar de
calibracin de 0,70 mg/L, para determinar si se produjo alguna variacin
instrumental. El resultado debe estar dentro del 5% del valor esperado. Si
esto no se produce, terminar el anlisis de las muestras, corregir el problema
y recalibrar el instrumento.
Antes de finalizar el anlisis, reanalizar una o ms muestras. Los resultados
deben coincidir entre s dentro del 5%. Si esto no se produce, hay que
reanalizar todas las muestras analizadas despus del ltimo control
aceptable del estndar de calibracin de 0,7 mg/L.
Hay que analizar los dos estndares de control de procedimiento con cada
corrida. Esto permite verificar la exactitud.
Los resultados deben estar dentro del 95 % del lmite de confianza que viene
suministrado por el proveedor para las muestras estndar de control de
procedimiento.
Verificar el cumplimiento del grfico de control para las muestras estndar de
control.
250
Si los resultados de las muestras estndar de control de performance no
estn comprendidos dentro del 95 % del lmite de confianza, se repite el
anlisis para los estndares en cuestin. Si este procedimiento falla, se
deben preparar nuevamente los estndares de calibracin y reanalizarse.
Si todava los resultados caen fuera del lmite, se debe controlar que se
hayan seguido en forma adecuada las condiciones analticas, y se deben
efectuar las correcciones y ajustes necesarios.
Si todava existe una falla, se chequea el instrumento por la eventualidad de
algn dao. Deben analizarse nuevamente los estndares de calibracin.
Si esta solucin falla, el mtodo se considera invlido y no se informan los
resultados hasta que la situacin se clarifique. Hay que llamar al soporte
tcnico del instrumento.
Los lmites de deteccin, los estudios de repetibilidad y de recuperacin se
deben encontrar documentados en el laboratorio.
9. REFERENCIAS
9.1 Norma EPA 200.7.
251
2.3.1.36. Determinacin de cadmio, cobre y plomo total en
sedimentos mediante GFAAS

PROYECTO ARCAL
PT-MS-02

Determinacin de cadmio, cobre y plomo total en sedimentos mediante
GFAAS
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar la concentracin total de cadmio, cobre y plomo en muestras de
sedimentos, utilizando espectrometra de absorcin atmica con horno de
grafito (GFAAS).
2. ALCANCE
Se aplica a muestras de sedimentos y a determinaciones de Cd, Cu y Pb
cuando se requieran lmites de cuantificacin, por debajo de 0,030 mg/L y de
Cu por debajo de 0,050 mg/L.
Dichas muestras han tenido el tratamiento preliminar de digestin cida
siguiendo el PT-DS-01.
El principio se basa en la absorcin de luz por tomos a una especfica
longitud de onda. La espectrometra de absorcin atmica electrotrmica
utiliza para la atomizacin un horno de grafito.
Un volumen de la muestra se deposita en un atomizador (horno de grafito) y
se incrementa la temperatura controlada antes de la atomizacin, para
remover el solvente y concomitantes. La alcuota introducida en el tubo de
grafito se atomiza dentro de un tiempo corto, dando lugar a una seal cuya
rea (absorbancia integrada) es proporcional a la masa del analito en la
solucin medida.
El uso de fuentes de luz especiales y de la seleccin de la longitud de onda
permite la determinacin especfica de los elementos individuales.

252
Interferencias
Las interferencias pueden deberse a la absorcin molecular cuando los
componentes de la matriz se volatilizan durante la atomizacin, dando lugar a
una banda ancha de absorcin.
Otra interferencia proviene de los efectos de la matriz y qumicos.
Algunas interferencias especficas son:
Cadmio: Absorcin severa no especfica y scattering de la luz en la
atomizacin, causada por los componentes de la matriz. El exceso de cloruro
puede causar volatilizacin prematura de cadmio.
El uso del corrector de fondo y de los modificadores de matriz, minimizan las
interferencias en la determinacin de estos analitos.

4. EQUIPOS
4.1. Espectrmetro de absorcin atmica, provisto de un corrector de fondo.
4.2. Horno de grafito capaz de alcanzar la temperatura especificada y
requerida. Seguir las instrucciones del fabricante para considerar los
tiempos y temperaturas de secado, pirlisis y atomizacin.
4.3. Lmparas de ctodo hueco o de descarga elctrica del elemento a
determinarse.
4.4. Muestreador automtico (opcional)
4.5. Es recomendable, un sistema de registro de datos, de tal manera que se
tenga un registro permanente del proceso y que, cualquier problema con
el anlisis (incompleta atomizacin, perdidas durante la pirlisis, cambios
en la sensibilidad, forma del pico obtenido, etc), pueda ser fcilmente
reconocido.
4.6. Balanza analtica, de sensibilidad igual o mayor a 0,1 mg.

5.1. MATERIALES
253
5.1.1. Pipetas calibradas clase A para medicin de volmenes iguales o
mayores a 1 mL.
5.1.2. Micropipetas calibradas de los rangos de volumen necesarios, para
mediciones de volumen menores de 1 mL, con puntas de buena
calidad y de un solo uso.
5.1.3. Material de uso habitual en el laboratorio: matraces aforados,
vasos de precipitados, puntas de micropipeta, etc, limpio, lavado con
solucin de HNO3 1:1, enjuagado con agua grado reactivo.
5.2. REACTIVOS

Soluciones estndar primarias
Las soluciones estndar primarias puede ser preparadas de metales de
alta pureza, xidos o sales no higroscpicas usando agua pura. Estas
soluciones son preparadas con una concentracin de 1000 mg/L.
Es posible utilizar soluciones estndar comerciales de 1000 mg/L.
Cuando se usa metales para la preparacin, es necesaria la limpieza del
metal (especialmente alambre) para la preparacin de los estndares.
Algunas formas de preparar las soluciones estndar primarias son:

5.2.5. Solucin estndar de cadmio: Disolver 1.000 g de cadmio metlico
grado reactivo.
5.2.6. Solucin estndar de cobre: Disolver 1.000 g de cobre electroltico
grado reactivo.
254
5.2.7. Solucin estndar de plomo: Disolver 1.599 g de nitrato de plomo
Pb(NO3)2 (mnimo 99.99 %) en agua grado reactivo, acidificar con
10 mL de solucin de cido ntrico ultrapuro, y diluir a 1 L con agua
grado reactivo.

Se preparan diluyendo la solucin estndar primaria del metal con los
mismos cidos y concentracin que la muestra. Los estndares de
calibracin deben ser frescos y preparados cada vez que se realiza el
anlisis de un lote de muestras.

Modificadores de matriz
5.2.8. El uso de Pd y Mg(NO3)2 como modificadores de matriz, se
recomienda para la determinacin de Cd y Cu: Se disuelven 300 mg
de paladio en polvo, en solucin de cido ntrico concentrado (1 mL
de HNO3 y si fuera necesario, agregar 0.1 mL de HCl concentrado).
Disolver 200 mg de Mg(NO3)2 en agua pura. Verter las dos
soluciones juntas y diluir a 100 mL con agua grado reactivo.
5.2.9. El uso de NH4H2PO4 y Mg(NO3)2 como modificadores de matriz
se recomienda para la determinacin de Cd y Pb: La solucin de
fosfato de amonio, NH4H2PO4 al 40%, se prepara disolviendo 40 g
del reactivo en agua grado reactivo y diluir a 100 mL.
5.2.10. Es posible tambin el uso de soluciones estndar primarias
comerciales de dichos modificadores de matriz.

Blancos
5.2.11. Se requiere el uso de dos tipos de blancos: El blanco de
calibracin para establecer la curva analtica y el blanco reactivo
255
utilizado para identificar posible contaminacin de los reactivos, o del
material utilizado durante la preparacin de la muestra.
5.2.12. El blanco de calibracin se prepara acidificando el agua grado
reactivo a la misma concentracin de los cidos utilizados para los
estndares de calibracin y muestras.
5.3. El blanco reactivo, debe contener todos los reactivos en el mismo
volumen como se us en la preparacin de las muestras.

6. ACCIONES PREVIAS
6.1. Los bajos lmites de cuantificacin que se alcancen con este mtodo
dependern del equipo (tipo de espectrmetro y horno de grafito, la
fuente de energa, el grado de expansin elctrica de la seal) y de la
matriz de la muestra.
6.2. Referirse al manual del equipo para detalles de operacin optima.
6.3. Tomar en cuenta los efectos de posibles interferencias por el uso de
diluciones, modificadores de matriz o la aplicacin del mtodo de
adicin estndar.
6.4. Trabajar en un laboratorio limpio para prevenir la contaminacin de las
muestras.

7.1. Obtener la curva de calibracin respectiva utilizando el blanco de
calibracin y los estndares, acidificados adecuadamente y
conteniendo los modificadores de matriz respectivos en las cantidades
siguientes: 5 g de Pd + 3 g de Mg(NO3)2 para la determinacin de
Cd y Cu y 50 g de NH4H2PO4 + 3 g de Mg(NO3)2 para la
determinacin de Cd y Pb.
7.2. Las muestras (incluyendo el blanco reactivo) que han sido
previamente digeridas para liberar todo el plomo y cadmio presente,
que puede estar formando parte de la materia suspendida o coloidal.
(Procedimiento PT-DA-02), son diluidas a un volumen adecuado.
256
7.3. Agregar a las muestras para anlisis y blanco reactivo los
modificadores de matriz en las mismas cantidades que los indicados
para los estndares de calibracin.
7.4. Debido a las diferencias entre los modelos y formas de operacin de
los espectrmetros, no se dan instrucciones de operacin detalladas y
se debern seguir las dadas por el fabricante.
7.5. Sin embargo, se puede indicar, de una manera general lo siguiente:
Inyectar una alcuota ya sea del estndar de calibracin, cuando se va
a preparar la curva o de la muestra cuando se va a realizar la
determinacin del analito, dentro del horno y aplicar el proceso de
descomposicin y de atomizacin.
7.6. La siguiente tabla sugiere las longitudes de onda, condiciones de
pirolisis y atomizacin para cada uno de los analitos que se
determinar:
Tabla 1. Condiciones de determinacin para los analitos de inters

7.7. Si se observa que la concentracin de la muestra es mayor que la
concentracin del mayor estndar, sta deber ser diluida con la
misma matriz cida y reanalizada.

8.1. Clculos para la preparacin de la soluciones de calibracin a partir de
un estndar primario comercial:
est
dl dl
est
C
V C
V

= mL
Elemento
Longitud de onda
(nm)
T de pirlisis
(C)
T de atomizacin
(C)
Cd 228,8 700 1400
Cu 324,8 1200 1900
Pb 283,3 850 1500
257
8.2. Clculos para determinar la concentracin del analito (g/g).
W
F V C
C
dl
e

=
donde;
C
e
= Concentracin del elemento en la muestra original (g/g).
C = Concentracin del elemento en la solucin de la muestra (g/mL),
leda directamente o usando la curva de calibracin.
V = Volumen de la solucin de aforo de la muestra (mL).
W = masa de muestra (g)
F
di
= Factor de dilucin: Volumen de aforo de la solucin de la muestra
(mL) / volumen de la alcuota tomada para dilucin (mL).

8.3. Expresin del resultado
Los resultados sern expresados en g/g acompaado de la
incertidumbre expandida a un nivel de confianza del 95%
aproximadamente.
Control de Calidad:
Establecer y mantener un sistema de registro para documentar la calidad de
los datos generados.
Establecer los lmites de deteccin para evaluar el nivel de ruido del
instrumento y los cambios de respuesta en el tiempo para cada analito,
analizando una serie de blancos reactivos.
Estos lmites en g/g, se estiman calculando el promedio de las desviaciones
estndar de tres corridas y en das no consecutivos del blanco reactivo con 7
mediciones por da.
Esta medicin debe realizarse al menos cada tres meses.
258
Con cada lote de muestras, se deben analizar por lo menos un blanco.
Realizar el anlisis por lo menos por triplicado.
Con cada lote de muestras, se debe analizar por lo menos un material de
control, que pueden ser muestras fortificadas con un volumen conocido del
analito en anlisis o un material de referencia certificado.
Es necesario establecer un criterio de aceptacin de los resultados
obtenidos. Para muestras fortificadas el lmite debe ser 20% del valor
fortificado.
9. REFERENCIAS
Health Association Ed. 21
th
2005 3113 A
Health Association Ed. 21
th
2005 3113 B
[3] Environmental Protection Agency, EPA Mtodo 7010 2. SW-845.
[4] Bernhard Welz, Michael Sperlling. Atomic Absorption Spectrometry. 3
era
.
Edicin. WILEY-VCH.

259
2.3.1.37. Determinacin de As, Co, Cr, Cs, Fe, Rb, Sb, Sr, U, Zn en
muestras de sedimentos mediante el anlisis por activacin
neutrnica, mtodo del k subcero

PROYECTO ARCAL
PT-MS-04

Determinacin de As, Co, Cr, Cs, Fe, Rb, Sb, Sr, U, Zn en
muestras de sedimentos mediante el anlisis por activacin
neutrnica, mtodo del k

subcero
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar la concentracin multielemental en muestras de sedimentos,
utilizando el anlisis por activacin neutrnica, basado en el mtodo del
ksubcero (k
0
- NAA).
2. ALCANCE
Se aplica a muestras de sedimentos y a la determinacin de As, Co, Cr, Cs,
Fe, Rb, Sb, Sr, U, Zn.
El anlisis por activacin neutrnica instrumental (AANI) es una tcnica
analtica nuclear, que utiliza el proceso de transformacin de un nucleido
cualquiera en otro artificialmente radiactivo, mediante la captura de un
neutrn y la posterior medicin de la actividad inducida, para el anlisis
multielemental cualitativo y cuantitativo de elementos mayores, menores y
traza en muestras geolgicas, biolgicas, arqueolgicas, ambientales, etc.
El mtodo de anlisis por activacin comparativo ha sido el ms utilizado por
varias dcadas. Este consiste en la irradiacin simultnea y en la misma
posicin de la muestra y un comparador que contiene cantidades
exactamente conocidas de cada uno de los elementos que interesa analizar.
El mtodo del k
0
, es un mtodo paramtrico, que utiliza un solo comparador
para la determinacin multielemental en la muestra y requiere un
conocimiento exacto de los parmetros que caracterizan la facilidad de
irradiacin.
260
4. EQUIPOS
4.1. Fuente de neutrones con flujos trmicos del orden de 1013 n.cm-2. s-1.
4.2. Sistema de Espectrometra Gamma de alta resolucin constitudo por:
4.3. Detector semiconductor de Ge-Hiperpuro, con preamplificador
incorporado.
4.4. Fuente de alta Tensin
4.5. Amplificador adecuado
4.6. Convertidor analgico digital.
4.7. Balanza analtica de sensibilidad igual o mayor a 0,1 mg
4.8. Sistema neumtico de transferencia de muestras
4.9. Polietileno (PE) de buena calidad para irradiacin.
4.10. Cpsulas de PE para envo de muestras a irradiacin
4.11. Fuente patrn de 152Eu
4.12. Contenedor de Pb
4.13. Material de laboratorio limpio, guantes de polietileno.
5.1. MATERIALES
5.1.1. Micropipeta calibrada y puntas de un solo uso
5.2. REACTIVOS
5.2.2. Solucin estndar de Na de 10000 mg/L.
5.2.3. Solucin estndar de Co de 1000 mg/L.
5.2.4. Solucin estndar de Mo de 1000 mg/L.
5.2.5. Solucin estndar de Au de 500 mg/L.
261
5.2.6. Materiales de referencia certificados conteniendo los analitos de
inters.
5.2.7. Celulosa
6. ACCIONES PREVIAS
6.1. La manipulacin de muestras y material se realiza con guantes y en
laboratorio limpio.
6.2. Preparacin de los comparadores de Na
Se pesa aproximadamente 50 mg de celulosa en los viales de irradiacin
previamente lavados con HNO
3
al 10%.
Se depositan con micropipeta calibrada 0,250 mL de solucin estndar
de sodio sobre la celulosa y se pesa.
Los viales conteniendo el comparador de Na, se secan bajo lmpara IR,
se tapan y sellan para ser acondicionados en las cpsulas de irradiacin.
6.3. Preparacin de monitores de flujo
De igual manera que en la preparacin del comparador de Na, se
depositan en viales de irradiacin conteniendo celulosa 15 g de solucin
de Au, 350 g de solucin de Mo y 120 g de solucin de Co.De igual
manera que en la preparacin del comparador de Na, se depositan con
micropipeta, 15 g de solucin de Au, 350 g de solucin de Mo y 120 g
de solucin de Co.
6.4. Calibracin del sistema de espectrometra gamma
Se utiliza una fuente de
152
Eu u otra adecuada para la calibracin. Esta
se coloca sobre el detector que se usara para las mediciones.
Se mide la fuente por 30 minutos y se calibra utilizando las energas de
122 keV, 344.3 keV, 778.9 keV y 1408 keV, en caso de utilizarse
152
Eu.
7.1. Las muestras y materiales de referencia se preparan pesando
aproximadamente 200 mg de muestra en viales de PE para irradiacin,
previamente lavados en solucin de HNO
3
al 10% y rotulados.
262
7.2. Se sellan los viales
7.3. Se acondicionan en las cpsulas para irradiacin alternadamente
comparadores, muestras, monitores de flujo, blancos y materiales de
referencia preparados.
7.4. Se enva la cpsula a irradiar por 1200 segundos, usando el sistema
neumtico de transferencia de muestras a una potencia de 10 MW y un
flujo de neutrones trmicos de aprox. 3.0 10
13
n. cm
2
s
-1
.
7.5. Medir y registrar la tasa de dosis de la cpsula irradiada
aproximadamente a 25 cm y colocarla en el tacho de plomo anexo a la
estacin de envo. En caso superar los 0,5 mSv transportar en
contenedor de plomo a la campana radioqumica.
7.6. Abrir la cpsula dentro de la campana y retirar los envases del estndar y
la muestra verificando la integridad de los mismos.
7.7. Transportar en el contenedor de plomo, las muestras, comparadores al
laboratorio de mediciones de espectrometra gamma.
7.8. Medir las muestras, materiales de referencia y comparadores de sodio
utilizando el detector de Ge (HP), de eficiencia relativa adecuada y con
una buena resolucin para el pico de la fuente utilizada en la calibracin
del espectrmetro gamma.
7.9. Evaluar los espectros
7.10. Calcular la concentracin de los elementos tomando como base las
formulas expresadas en el punto 8.
7.11. Documentar la informacin en los formatos
8.1. Clculo de la concentracin en g/g

Se emplea el rea de los fotopicos de los siguientes radionclidos:
263

56
As 559 keV
60
Co 1173 y 1332.5 keV
51
Cr 320 keV
134
Cs 796 keV
59
Fe 1099 y 1291 kev
239
Np (U) 277 keV
86
Rb 1076 keV
124
Sb 1690 keV
88m
Sr 388 keV
95
Zn 1115 keV

Calcular la concentracin
i
del elemento i en una muestra x aplicando
el mtodo de k
0
segn la convencin de Hgdahl:
) (
) (
, 0
, 0
,
,
,
,
x
p
x
p
x o
p o
p esp
x esp
i
Q F
Q F
K
K
T
T
+
+
=

Donde x y p denota la muestra y el estndar respectivamente y T
esp
es igual:

) (
,
) , (
g w S
H C D C
T
i n
c x esp

=

d
t
e D

=

( )
i
t
e
C

1

l
r
t
t
H =

Donde; ti, td son los tiempos de irradiacin, decaimiento
respectivamente, es la constante de decaimiento = 0.693/periodo de
semidesintegracin; es la eficiencia del detector para la energa
264
medida, Q() es la razn de la integral de resonancia a la seccin eficaz
como funcin de y F es la relacin de flujo trmico sobre flujo
epitrmico.
8.2. Expresin de Resultados
La concentracin calculada se expresa en trminos de g.g
-1
con la
incertidumbre expandida.
9. CONTROL DE CALIDAD
9.1. Las muestras se analizan en duplicado
9.2. Por cada corrida de muestras se analiza como mnimo un material de
referencia certificado.
9.3. Por cada corrida de muestra se analiza un blanco de reactivos.
9.4. Participar en ensayos de aptitud o rondas de intercomparacin en matriz
agua por lo menos una vez al ao
10. REFERENCIAS
10.1. Knoll G.F. Radiation Detection and Measurement 2
nd
Edition 1989.
10.2. G. Erdtmann Nuclear Activation and Radioisotope Methods of Analyses.
10.3. IAEA-TECDOC-564 Practical Aspects of Operating a Neutron Activation
Analyses Laboratory. Documento Tcnico del Taller Regional. Tpicos
selectos sobre Aplicaciones del Mtodo de k-sub cero y otros mtodos
Paramtricos en Anlisis por Activacin Neutrnica.
10.4. Frans De Corte. The k
0
-Standardization Method, 1987.

265
2.3.1.38. Determinacin de Cadmio total en muestras de
sedimentos por el Mtodo de Espectrometra de Absorcin
Atmica

PROYECTO ARCAL
PT-MS-06

Determinacin de Cadmio total en muestras de sedimentos
por el Mtodo de Espectrometra de Absorcin Atmica
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar la concentracin de cadmio total por espectrometra de absorcin
atmica.
2. ALCANCE
Se aplica a cualquier sedimento y corresponde a la concentracin de metales
determinados en una muestra previamente digerida.
3.2. La poblacin de tomos al estado elemental absorbe radiacin
cadmio, la relacin entre potencia incidente y potencia transmitida es una
4. EQUIPOS
4.1. Balanza Analtica, de sensibilidad igual o mayor a 0,1 mg.
utilizado).
4.4. Fuente de emisin de lneas atmicas de cadmio.
5.1. MATERIALES
266
5.2. REACTIVOS
5.2.3. Solucin estndar de cadmio de 1000 mg/L.

5.2.6. Preparar una serie de soluciones de calibracin en el rango ptimo,
a partir de diluciones apropiadas de la solucin estndar de cadmio
de 1000 mg/L.
6. ACCIONES PREVIAS
6.1. Las muestras deben ser digeridas como se indica en el procedimiento
PT-DS-01.
6.2. Aforar la muestra digerida a volumen predeterminado.
funcionamiento.
cadmio; esperar a que la fuente se estabilice
267
manual del equipo.
operaciones del equipo. Longitud de onda principal 228 nm y abertura
del slit 0,7 nm).
calibracin.
analitos.
muestra.
268

normado.

Cd ( g/g) = ((Lect - Bco) x D) / m

donde:
Cd (g/g) = concentracin de Cd, expresada en g de Cd por gramo de
sedimento
m = masa de muestra analizada (en gramos)
9. REFERENCIAS
APHA. AWWA. WEF. 21
th
Flame Method.

269
2.3.1.39. Determinacin de Cromo en sedimentos por el Mtodo
de Espectrometra de Absorcin Atmica

PROYECTO ARCAL
PT-MS-07

Determinacin de Cromo en sedimentos por el Mtodo de
Espectrometra de Absorcin Atmica
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar cromo total en muestras de sedimentos por espectrometra de
absorcin atmica por llama.
2. ALCANCE
Este procedimiento es valido para la determinacin de cromo en muestras de
sedimentos procesadas segn PT-DS-01.
cromo, la relacin entre potencia incidente y potencia transmitida es una
4. EQUIPOS
utilizado).
4.4. Fuente de emisin de lneas atmicas de cromo.
ondas (opcional).
270
5.1. MATERIALES
pipetas, matraces aforados y otros).
5.2. REACTIVOS
5.2.4. Solucin estndar de cromo de 100 mg/L. Disolver 0,1923 g de
CrO3 en agua, acidificar con 10 mL de solucin de HNO3
concentrado y diluir a 1000 mL con agua destilada 1,00 mL = 100
microgramos Cr.
5.2.5. Oxido nitroso.

5.2.7. Preparar una serie de soluciones de calibracin en el rango de 0,2
a 3,0 mg/L, a partir de diluciones apropiadas de la solucin
estndar de cromo de 100 mg/L.
estndares es solucin 1% HNO
3
V/V. Se exige para la curva de
preparada con agua grado reactivo y en un medio 1% HNO
3
V/V.
6. ACCIONES PREVIAS
6.1. El material empleado en el anlisis debe ser lavado con detergente
neutro y agua corriente. Enjuagar con agua destilada. Lavar despus con
una mezcla 1:1 de cido ntrico y agua destilada.
6.2. Las muestras de sedimento deben someterse a un tratamiento previo de
digestin para liberar todo el analito presente. Para el procesamiento de
las muestras y blanco referirse al procedimiento PT-DS-01.
271
7.1. Encender el espectrmetro y verificar las presiones de xido nitroso y
acetileno, ajustando si procede.
funcionamiento.
manual del equipo.
calibracin.

272
analitos.
muestra.

normado.

Cr ( g/g) = ((Lect - Bco) x D) / m

donde:
Cr (g/g) = concentracin de Cr, expresada en g de Cr por gramo de
muestra.
Lect = lectura de la muestra en g/mL
273
m = masa de muestra (en gramos)
9. REFERENCIAS
APHA. AWWA. WEF. 21
th
Flame Method.

274
2.3.1.40. Determinacin de Cobre en sedimentos por el Mtodo

PROYECTO ARCAL
PT-MS-08

Determinacin de Cobre en sedimentos por el Mtodo de
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar la concentracin de cobre total en sedimentos por espectrometra
de absorcin atmica por llama.
2. ALCANCE
Este mtodo de ensayo es aplicable a cualquier muestra de sedimentos
procesados por el procedimiento PT-DS-01.
Una fraccin de muestra, directamente o previamente digerida, es aspirada
hacia una llama de aire-acetileno, posicionada en el paso ptico de un
espectrmetro de absorcin atmica. La muestra en estas condiciones es
atomizada.
La poblacin de tomos al estado elemental absorbe radiacin caracterstica
proveniente de una fuente de emisin de lneas atmicas de cobre; la
relacin entre potencia incidente y potencia transmitida es una medida de
concentracin del elemento en muestra.
4. EQUIPOS
utilizado).
4.4. Fuente de emisin de lneas atmicas de cobre.
275
ondas (opcional).
5.1. MATERIALES
5.2. REACTIVOS
5.2.4. Solucin estndar de cobre de 100 mg/L. Disolver 0,100 g de cobre
metlico en 2 ml de solucin de HNO3 concentrado, aadir 10 mL de
solucin de HNO3 concentrado y diluir a 1000 mL con agua.

estndar de cobre de 100 mg/L.
calibracin un r0,995.
6. ACCIONES PREVIAS
digestin para liberar todo el analito presente. Para el procesamiento de
276
funcionamiento.
manual del equipo.
calibracin.

analitos.
277
muestra.

normado.

Cu ( g/g) = ((Lect - Bco) x D) / m

donde:
Cu (g/g) = concentracin de Cu, expresada en g de Cu por gramo de
muestra
m =masa de muestra (en gramos)
9. REFERENCIAS
278
APHA. AWWA. WEF. 21
th
Flame Method.
279
2.3.1.41. Determinacin de Plomo en sedimentos por el Mtodo

PROYECTO ARCAL
PT-MS-09

Determinacin de Plomo en sedimentos por el Mtodo de
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar plomo en muestras de sedimentos por espectrometra de
absorcin atmica por llama.
2. ALCANCE
Se aplica a la determinacin de Pb en muestras de sedimentos procesadas
segn el procedimiento PT-DS-01.
Una fraccin de muestra, directamente o previamente digerida, es aspirada
hacia una llama de aire-acetileno, posicionada en el paso ptico de un
espectrmetro de absorcin atmica. La muestra en estas condiciones es
atomizada.
La poblacin de tomos al estado elemental absorbe radiacin caracterstica
proveniente de una fuente de emisin de lneas atmicas de plomo; la
relacin entre potencia incidente y potencia transmitida es una medida de
concentracin del elemento en muestra.
4. EQUIPOS
utilizado).
4.4. Fuente de emisin de lneas atmicas de plomo.
280
ondas (opcional).
5.1. MATERIALES
5.2. REACTIVOS
5.2.4. Solucin estndar de plomo de 100 mg/L. Disolver 0,100 g de
plomo metlico en 2 ml de solucin de HNO3 concentrado, aadir 10
mL de solucin de HNO3 concentrado y diluir a 1000 mL con agua.

estndar de plomo de 100 mg/L.
calibracin un r0,995.
6. ACCIONES PREVIAS
6.1. El material empleado en el anlisis debe ser lavado con detergente
neutro y agua corriente. Enjuagar con agua destilada. Lavar despus con
una mezcla 1:1 de cido ntrico y agua destilada.
281
digestion para liberar todo el analito presente. Para el procesamiento de
funcionamiento.
plomo; esperar a que la fuente se estabilice.
manual del equipo.
calibracin.

282
analitos.
muestra.

normado.

Pb ( g/g) = ((Lect - Bco) x D) / m

donde:
Pb (g/g) = concentracin de Pb, expresada en g de Pb por gramo de
muestra
283
9. REFERENCIAS
APHA. AWWA. WEF. 21
th
Flame Method.
284
2.3.1.42. Determinacin de Arsnico Total en sedimentos por el
Mtodo de Espectrometra de Absorcin Atmica con
Generacin de Hidruros

PROYECTO ARCAL
PT-MS-10

Determinacin de Arsnico Total en sedimentos por el
Mtodo de Espectrometra de Absorcin Atmica con
Generacin de Hidruros
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
Numero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar arsnico total mediante espectrometra de absorcin atmica con
generacin de hidruros.
2. ALCANCE
Se aplica a todo sedimento y corresponde a la concentracin de arsnico en
una muestra previamente digerida.
3.1. El arsnico presente en una fraccin de muestra previamente digerida,
es reducido a arsina mediante reaccin con borohidruro de sodio en
medio cido. La arsina generada es conducida por un gas de arrastre
hacia una celda de cuarzo posicionada en el paso ptico de un
espectrmetro de absorcin atmica. La celda se encuentra a una
temperatura aproximada de 1000C. La arsina, en estas condiciones, y a
travs de mecanismos combinados [descomposicin trmica y
reacciones con radicales hidrgeno] es atomizada.
caracterstica proveniente de una fuente de emisin de lneas atmicas
de arsnico, la relacin entre potencia incidente y potencia transmitida es
una medida de la concentracin del elemento en la muestra.
4. EQUIPOS
285
4.3. Espectrmetro de absorcin atmica, dotado con quemador y con
generador de hidruros y corrector de deuterio [u otro corrector de
acuerdo a equipo utilizado).
4.4. Fuente de emisin de lneas atmicas de arsnico.
4.5. Sistemas generador de hidruros continuo o discontinuo.
4.6. Celda de cuarzo y soporte de celda.
ondas (opcional).
5.1. MATERIALES
5.2. REACTIVOS
5.2.4. Solucin estndar comercial de arsnico de 1000 mg/L.
5.2.7. Borohidruro de sodio (NaBH4)
5.2.8. Yoduro de potasio (KI)
5.2.10. Indicador fenolftalena
5.2.11. Solucin de cido sulfrico concentrado, calidad ultrapuro.
5.2.12. Solucin de NaBH4 1 4%; la concentracin depender del
sistema de generacin empleado. Pesar la cantidad requerida para
1L de solucin (el reactivo es corrosivo en contacto con la piel).
Disolver con solucin de NaOH (0,5 -1% m/v). Una vez disuelto,
filtrar a travs de filtro rpido de alta pureza. Descartar el filtro y
transferir el filtrado a un matraz aforado de 1000 ml. Aforar con
solucin de NaOH (0,5 -1% m/v).
286
5.2.13. Solucin de KI 20% m/v: Pesar 20g. de KI, disolver y diluir a 100
mL con agua grado reactivo exenta de arsnico. Proteger de la
oxidacin por efecto de la luz.

5.2.14. Preparar una serie de soluciones de calibracin en el rango
ptimo de trabajo, a partir de diluciones apropiadas del estndar de
1000 mg As (III)/L 1% v/v H2SO4.
5.2.15. Por cada 100 ml de solucin adicionar 10 ml de solucin de KI
(20% m/v). Agitar y dejar reposar aproximadamente 30 minutos.
5.2.16. Cubrir debidamente el matraz para evitar la oxidacin por efecto
de la luz. La condicin de acidez final para estndares es 20% v/v
HCl. Preparar diariamente. Se exige para la curva de calibracin un
r0,995.
preparada con agua grado reactivo exenta de arsnico y en un medio
20 % HCl v/v, adicionando 10 ml de solucin de KI (20% m/v).
Proteger de la oxidacin por efecto de la luz. Preparar diariamente.
6. ACCIONES PREVIAS
recomienda utilizar recipientes de plstico.
PT-DS-01
Ajuste y calibracin del instrumento:
7.1. Encender el espectrmetro y verificar las presiones de aire, acetileno y
nitrgeno o argn, ajustando si procede.
7.2. Verificar que el extractor de gases se encuentre en correcto
funcionamiento.
287
7.3. Chequear con una fuente de emisin que emita luz visible [Cu, Mn],
que el haz est pasando central a al ranura del quemador.
7.4. Posicionar el soporte de la celda de cuarzo en el paso ptico del
espectrmetro y ajustar que el haz pase por el interior de la celda,
siguiendo las instrucciones proporcionadas en el manual del
instrumento [generador de hidruros].
7.5. Posicionar y encender la fuente de emisin de lneas atmicas de As.
Esperar a que la fuente se estabilice.
7.6. Ajustar la longitud de onda principal [193,7nm] y la abertura del
monocromador de acuerdo a las especificaciones establecidas en el
manual de operaciones del equipo.
7.7. Ajustar la energa de la fuente respecto al detector de acuerdo a las
instrucciones descritas en el manual del equipo.
7.8. Ajustar los flujos de encendido y encender el instrumento.

Sistema manual o automtico de generacin de hidruros [generacin
discontinua].

7.9. De acuerdo las instrucciones indicadas en el manual de operaciones
del generador, adicionar el volumen de estndar requerido y aplicar el
programa.
7.10. Ajustar el flujo de gas portador [Ar o N
2
].
7.11. Encender el corrector de absorcin no especfica.
288
7.16. Aspirar el blanco y realizar auto -cero
7.17. Aspirar las muestras en estudio, en secuencia de 6 en 6, verificando la
calibracin y la estabilidad del cero, entre lotes de muestras. Repetir
las lecturas en caso que sea necesario.
7.18. Aspirar agua para anlisis grado reactivo exenta de As entre muestra
y muestra con el propsito de evitar contaminacin cruzada.
grado reactivo exenta de As.
7.19.2. Un ensayo duplicado de una muestra elegida al azar (precisin
mnima 80%; RSD 20%)
7.19.3. Un ensayo de un estndar de concentracin conocida, cercana al
valor medido (exactitud mnima 85-115% como recuperacin del
estndar).

Sistema de Generacin Continua de Hidruros:
7.20. Encender y ajustar el equipo de acuerdo a las instrucciones descritas
en el manual del equipo y ajustar las condiciones (longitud de onda
principal 193,7 nm y abertura del monocromador slit 0,7 nm).
7.21. Ajustar el flujo de gas (Ar o N
2
) en el sistema de generacin continua
(FIAS)
7.22. Ajustar las velocidades de flujo del reactivo reductor y muestra de
acuerdo a las especificaciones indicadas en el manual del generador
de hidruros (FIAS)
289
7.26.3. Aspirar agua grado reactivo exenta de As entre muestra y
muestra con el propsito de evitar contaminacin cruzada.
grado reactivo exenta de As
mnima 80%; RSD 20%)
estndar).

As ( g/g) = ((Lect - Bco) x D) / m

donde:
290
As (g/g) = concentracin de As, expresada en g de As por gramo de
muestra

8.1. Si la muestra no acusa presencia de As, se debe informar como el LDM
<0,1 g/g.

Interferencias:

8.3. No se puede establecer un mecanismo nico de eliminacin de
interferentes, no obstante se recomienda aplicar los siguientes criterios:
8.3.1. Identificar la naturaleza de la interferencia
transporte del hidruro, revisar mangueras a fin de evitar fugas,
reacciones de hidrlisis o cualquier efecto que pudiese producirse
debido a la naturaleza del medio de transporte.
atomizacin, verificar la limpieza de la celda de cuarzo. Verificar los
niveles de los otros elementos susceptibles de generar hidruros
voltiles y realizar el anlisis con adicin estndar.

291
9. REFERENCIAS
9.1. Standard Methods For The Examination Of Water And Wastewater.
APHA. AWWA. WEF. 21th Edition 2005, Part. 3114-B; Arsenic and
Selenium by Hydride Generation/Atomic Absorption Spectrometry.
2008.

292
2.3.1.43. Determinacin de Mercurio en sedimentos por el
mtodo de Espectrometra de Absorcin Atmica con
Generacin de Vapor Atmico de Mercurio (Vapor Fro)

PROYECTO ARCAL
RLA/1/010 Mejora de la gestin de las masas de agua que estn contaminadas con
metales
PT-MS-10

ombre del procedimiento:
Determinacin de Mercurio en sedimentos por el
mtodo de Espectrometra de Absorcin Atmica con
Generacin de Vapor Atmico de Mercurio (Vapor
Fro)
Fecha de aprobacin:
2008-05-02
umero de revisin:
ninguna
Fecha de revisin:
2008-05-02

1. OBJETIVO
Determinar mercurio total mediante espectrometra de absorcin atmica con
generacin de Vapor Atmico de Hg (Vapor Frio).
2. ALCANCE
Se aplica a cualquier sedimento y corresponde a la concentracin de
mercurio determinada en una muestra previamente digerida.
El mercurio presente en una franccin de muestra previamente digerida, es
reducido a vapor atmico de mercurio, mediante reaccin con cloruro
estannoso en medio cido, o aplicando el procedimiento de generacin
contnua usando solucin de boro hidruro de sodio como agente reductor.
El vapor atmico generado es conducido por un gas de arrastre hacia una
celda de cuarzo posicionada en el paso ptico de un espectrofotmetro de
absorcin atmica. La celda se encuentra a temperatura ambiente, la
relacin entre potencia incidente y potencia transmitida es una medida de la
concentracin del elemento en la muestra.

4. EQUIPOS
4.1. Balanza analtica, de sensibilidad igual o mayor a 0,1mg.
293
4.3. Espectrmetro de absorcin atmica, provisto de generador de vapor frio,
celdas con ventanas de cuarzo y accesorios necesarios.
4.4. Fuente de ignicin, de lneas atmicas de mercurio.
4.5. Sistema Generador de Vapor Fro.
4.6. Plancha calefactora o equivalente, con regulacin de temperatura o bao
termoregulado.

5.1. MATERIALES
5.1.1. Material de uso habitual de laboratorio [ej. vasos de precipitado,
matraces, pipetas, y otros].
5.1.2. Recipiente de reaccin, matraz erlenmeyer de 250ml, incorporando
tubo de aireacin.
5.2. REACTIVOS
5.2.1. Durante el anlisis se deben utilizar solamente reactivos de calidad
para anlisis (p.a.), y con agua para anlisis grado reactivo.
5.2.4. Estndar comercial de Hg de 1000 mg/L
5.2.6. Acetileno
5.2.7. Borohidruro de sodio
5.2.9. Soluciones estndares de calibracin: preparar una serie de
soluciones de calibracin en el rango ptimo de trabajo, a partir de
diluciones apropiadas del estndar de 1000 mg Hg/L 10% v/v HCl.
Preparar diariamente. Se exige para la curva de calibracin un r
0,995.
preparada con agua para anlisis grado reactivo exenta de mercurio
y en un medio 10 % HCl v/v. Preparar diariamente.
294
5.2.11. Como agente reductor se utiliza una solucin acuosa de NaBH
4

al 0,2% en NaOH al 0,05%, debindose preparar cada vez que es
utilizado.
5.2.12. Se pesan 0,5 gr de NaOH disolvindolo en agua Mili Q para
luego aadir 2 gr de NaBH
4
, posteriormente se filtra y se afora a 1 L.

6. ACCIONES PREVIAS
recomienda utilizar recipientes de plstico.
PT-DS-01.
7.1. Encender el computador, el espectrmetro de absorcin atmica y el
sistema de anlisis de inyeccin de flujo FIAS, de acuerdo a las
referencias descritas en el manual de operaciones de su equipo.
7.2. Alinear la posicin de la celda de cuarzo y optimizar la intensidad de la
seal ajustando la posicin de la lmpara y la longitud de onda (253.7
nm).
7.3. Abrir el programa que pone a disposicin el equipo utiizado, encender la
lmpara de mercurio y dejar estabilizar por un tiempo aproximado de 30
minutos para aumentar su energa, encender luego la celda (100C).
7.4. Encender el extractor de aire.
7.5. Ajustar las mangueras y dejar por un tiempo prudente el funcionamiento
de las bombas para el lavado con agua de calidad para anlisis.
7.6. Llenar los contenedores con la solucin de cido clorhdrico al 10% y
solucin de boro hidruro (0.2% en 0.05% de NaOH).
7.7. Ajustar la presin del argn entre 320 y 400 kpa.
7.8. Ajustar la velocidad de flujo sobre 100 ml/min
7.9. Calibrar el equipo con las soluciones estndares de concentracin de 10
y 20 g/L de mercurio. Construir la curva de calibracin empleando un
295
numero adecuado de estndares, como mnimo blanco y tres
concentraciones del rango de trabajo, recomendndose 5 puntos.
7.10.3. Aspirar agua para anlisis grado reactivo exenta de Hg entre
muestra y muestra con el propsito de evitar contaminacin cruzada.
grado reactivo exenta de Hg.
mnima 80%; RSD 20%).
estndar).
7.12. Interferencias:
No se puede establecer un mecanismo nico de eliminacin de
interferentes, no obstante se recomienda aplicar los siguientes
criterios:
7.12.1. Identificar la naturaleza de la interferencia.
transporte del vapor atmico de mercurio, revisar mangueras a fin de
evitar fugas, reacciones de hidrlisis o cualquier efecto que pudiese
producirse debido a la naturaleza del medio de transporte.
296
atomizacin, verificar la limpieza de la celda de cuarzo. Si existe
interferencia de matriz, realizar el anlisis con adicin estndar.


Hg( g/g) = ((Lect - Bco) x D) / m

donde:
g Hg/g = concentracin de Hg, expresada en g de Hg por gramo de
muestra.
Lect = lectura de la muestra en mg/L.
Bco = lectura blanco reactivo sometido al mismo proceso de las muestras.
m = masa de muestra (en gramos)

8.1. Si la muestra no acusa presencia de Hg, se debe informar como el LDM
<0,001 mg/L.

9. REFERENCIAS

9.1. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. APHA.
AWWA. WEF. 21TH Edition 2005, Part 3000. Cold-Vapor Atomic
Absorption Spectrometry Methd 3112 B.
297
2008.

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