Alternativas de gar para micropropagao de violeta Africana (Saintpaulia ionantha) A. Sharifi1*, N. Moshtaghi2 and A.

Bagheri2 Centro Acadmico iraniano para a Educao, Cultura e Investigao, Ramo de Mashhad, PO Box 91775-1376, Mashhad, Faculdade de Agricultura, Ferdowsi Universidade de Mashhad, PO Box 91775-1163, Mashhad, Ir.
Aceito 10 de dezembro de 2010

Agar um dos agentes de solidificao mais procurados em cultura de tecidos vegetais. O alto preo do gar grau puro e a superexplorao do mesmo, gera necessidade de se encontrar alternativas de baixo custo. Neste estudo, o meio lquido com o substrato de algodo e combinaes diferentes de amido, smola de trigo, p de batata e gar em dois passos de micropropagao (induo de rebentos e a proliferao), foram investigados. A maior frequncia de regenerao foi encontrada em meio contendo agar (0,8%), a combinao de amido: smola: batata em p (02:01:01) em 9 e 12%, e uma combinao de amido (6%) e gar (0,4%) , mas os nmeros mximos de tiro foram produzidos em meio contendo agar (0,8%), a combinao de amido (6%) e gar (0,4%) e do meio lquido com o substrato de algodo. A melhor proliferao de ramos ocorrem em meio lquido com substrato de algodo. Os resultados mostram que a combinao de amido: smola: batata em p (2:1:1) em 9% e o amido (6%), mais de gar (0,4%) podem ser alternativas adequadas para gar em fase de regenerao, mas o nmero de hastes inferior a gar sozinho. Estas opes so muito mais barato do que gar. A melhor proliferao de ramos pode ser feito em biorreatores ou meio lquido com substrato apropriado como o algodo. Palavras-chave: agente de gelificao, de baixo custo, micropropagao, cultura de lquido.

INTRODUO Na cultura de tecidos vegetais, a composio do meio tais como sais minerais, suplementos orgnicos, reguladores de crescimento e agentes gelificantes afetam as respostas da cultura (Gamborg et al, 1968;. Gamborg e Phillips, 1995). Existem composies de especiais de meios para algumas plantas (Nitsch e Nitsch, 1969; Pierik, 1989). Com base em agentes de gelificao, meios so classificados como slidos, slidos, lquidos e semi semi-lquido. Devido sua estabilidade, elevada clareza, a natureza no txica e resistncia ao seu metabolismo solidificao, o gar normalmente utilizado na cultura de tecidos vegetais (McLachlan, 1985). Recentemente, os pesquisadores tentam encontrar um substrato adequado, em vez de agar, por causa do alto preo do gar puro grau e h algumas dvidas sobre a sua natureza no-txica. Alm disso, o uso exclusivo de agar pode resultar em sobreexplorao dos seus recursos (Jain e Babbar, 2005; Deb e Pongener, 2010). Materiais diferentes, tais como, o amido de vrias fontes (Sorvari e Schieder, 1987; Zimmerman, 1995; Dabai e Muhammad, 2005), amido com baixa concentrao de gelrite (Zimmerman, 1995), a combinao de amido: smola: batata em p (2: . 1:1) (Prakash et ai, 2002), Isubgo (Babbar e Jain, 1998,.. Jain et al, 1997), sagu (Bhattacharya et al, 1994), goma xantana (Babbar e Jain, 2006) e de guar goma (Babbar et ai, 2005,.. Jain et al, 2005) foram usadas como agentes gelificantes alternativos. Hoje em dia, os laboratrios de micropropagao comerciais esto usando alternativa de baixo custo agar em protocolos de rotina. Mesmo meio lquido e micropropagao em bioreactores que eliminam gar contribui de 70% dos custos (Prakash et ai., 2002). Outros pesquisadores avaliaram espuma de poliuretano, p de coco e coco noz de betel em meio lquido (Deb e Pongener, 2010). Este estudo foi realizado para encontrar uma opo de baixo custo para a micropropagao de violeta Africano. MATERIAIS E MTODOS No primeiro passo do presente ensaio, o efeito de gelificao diferentes diferentes (Tabela 1), em meio de Murashige e Skoog (MS1) mdio suplementado com 1 mg / l de N6-benziladenina (BA1), 0,2 mg / l cido naftaleno actico (NAA1), 30 g / l de sacarose e pH = 5,7 foram investigado em induo de brotaes, nmero de brotaes regeneradas, altura e peso seco das plntulas na primeira subcultura. folhas jovens foram cortados em pedaos de 1 1 cm2 como explantes. Na segunda etapa, explantes regenerados foram cortado em quatro pedaos e transferido para o meios contendo gar, uma combinao de amido: smola de batata: p (02:01:01) em 9%, a combinao de amido (6%), mais de gar (0,4%) e substrato de algodo em meio lquido MS contendo 1 mg / l de BA, 0,2 mg / l de NAA, 30 g / l de sacarose e pH = 5,7 para a proliferao filmagem. Ento, o nmero de brotaes, altura plntula e massa seca foram determinados. As culturas foram incubadas a 25 C em 16 horas, a luz do fotoperodo com fria fluorescente branca a 5000 lux. Tabela 1. Meios diferentes, com combinao de amido, semolina, batata em p e gar como agente de gelificao.

Meio A B C D E F G H I J K L M N O

Composio 12% (amido 2: Semolina 1: Batata em p 1) 9% (amido 2: Semolina 1: Batata em p 1) 9% (amido 1: Semolina 1: Batata em p 1) lquido Semi 6% (amido 2: Semolina 1: Batata em p 1) lquido Semi 6% (amido 1: Semolina 1: Batata em p 1) lquido Semi 6% (amido 2: Smola 1: batata em p 1) + 2 g / l de agar 6% (Amido 1: Smola 1: batata em p 1) + 2 g / l de agar 6% (amido 2: Smola 1: batata em p 1) + 4 g / l de agar 3% (amido 2: Smola 1: batata em p 1) + 4 g / l de agar 3% (Amido 1: Smola 1: batata em p 1) + 4 g / l de agar lquido semi 9% Amido 6% Amido + 4 g / l de agar 3% de amido + 4 g / l de agar 9 g / l de agar slido meio lquido com substrato de algodo

Grau de Solidificao slido slido semi - lquido semi - lquido semi - lquido semi - lquido semi - lquido semi-slido semi-slido semi - lquido semi-slido slido semi-slido slido lquido

RESULTADOS E DISCUSSO Houve diferenas entre os meios com base no grau solidifico. Meios com a composio de A, B, G e N eram slidos, C, D, E, F, G e J eram meios lquidos e semi; H, I, K, M eram os meios semi-slido (Tabela 1). Duas semanas aps a cultura, alguns dos explantes tornaram-se castanho e morreram. Aps 3 semanas, observaram-se sinais de regenerao em explantes verdes e inflamado. Brotaes em todos os tratamentos eram normais. Meios contendo A, B e N tinham frequncia mxima de regenerao (100%, Figura 1). Os explantes em meios contendo M, N e O composies que produziram a maior quantidade (12, 12.7 e 11.3 rebentos, respectivamente) seguido de B, I, J, K e L meios (Figura 2). Meios contendo composies de amido, semolina e batata em p, exceto B mdio produziram alguns nmeros. Embora, o meio A e B eram slidos tiveram frequncia mxima de regenerao, mas a produo em nmero no meio foi baixa (5 brotos por explante) e em meio B era de 10 brotos por explante. Por outro lado, meio lquido (O) teve baixa induo de parte area (36,7%), mas a produo de parte area era muito mais (11,3 brotos por explante). As plntulas em O meio tinha o peso seco mximo e altura (95,8 mg e 14,3 mm, respectivamente), enquanto que esses parmetros foram as mesmas nos pontos A, B, I, J, K, L, M e N mdia (Figuras 3 e 4). A induo da parte area e seu crescimento so fortemente influenciadas pela consistncia fsica do meio. Aparentemente, a viscosidade do meio e do seu componente desempenham um papel importante na regenerao violeta Africano. Meio contendo elevada (12%) e de baixo (6 e 3%) percentagem de amido, smola de trigo e de batata em p combinao tanto em relao (2:01:01 e 1:01:01) no eram adequados, mas pela adio de agar, para que essas combinaes, a frequncia da regenerao foi aumentada, enquanto que, o crescimento do broto de regenerado foi melhor em meio lquido. Talvez a baixa produo de filmagem em combinao amido foi devido ao efeito inibitrio

deste composto, especialmente em baixa concentrao. Powell e Uhrig (1987) relataram que alguns agentes de solidificao tem substncias inibidoras que afetam a morfognese. No entanto, Prakash (1993) utilizaram combinao de amido, smola de trigo e de batata em p, numa proporo de 02:01:01, como uma alternativa para o gargar em micropropagao gengibre e crcuma. Zimmerman (1995), Stanley (1995) e Kodym e Zapata (2001) utilizaram o amido com baixa concentrao de gelrite para a propagao de ma, pra, framboesa, banana e cana de acar. Eles relataram que proliferao de ramos neste meio foi melhor do que gar. Dabai e Muhammad (2005) introduziu amido de mandioca como um agente de solidificao potencial em meios de cultura microbiolgicos. Estes resultados mostram que, gar o melhor agente de gelificao para a induo de parte area em violeta Africano, mas devido ao alto preo do presente composto, a combinao de amido, smola de trigo e de batata em p ou combinao de amido e gar podem ser alternativas de baixo custo. Na etapa de proliferao, meio lquido com substrato de algodo foi o melhor, e as plntulas cresceram normalmente e rpido. Meios contendo gar proliferaram o mesmo nmero de brotos como meio lquido, mas as mudas eram menores. Outros dois meios (combinao de amido, smola de trigo, batata em p e combinao de amido e de gar) no foram adequados para a proliferao violeta Africana (Tabela 2). Estes resultados sugerem que podemos proliferar violeta Africano em biorreatores facilmente. Biorreatores so utilizados para a propagao de ma, crisntemo, caf, alho, ginseng, uva, lilium, phalaenopsis, batata, morango e cana de acar (Etienne e Berthouly, 2002;. Paek et al, 2005). Os Brotos produziram razes espontaneamente na primeira passagem e no dependeram de agente de gelificao. Os pesquisadores usaram com sucesso substrato diferente, como floresta titter, musgo, espuma de poliuretano, p de coco e coco noz de betel em meio lquido como alternativa para o agar (Temjensangba e Deb, 2005; Deb e Temjensangba, 2006; Deb e Pongener, 2010). Durante a ltima dcada, os esforos para encontrar uma alternativa adequada para o gar foi aumentada e foram investigadas diferentes substncias. Amido como a gelificao foi o agente mais barato, tem capacidade de gelificao inferior, deficiente clareza e metabolizvel, o que leva ao amolecimento dos meios de propagao. Combinao de amido, smola de trigo e de batata em p, e amido com agar em relao exacta ir melhorar as caractersticas de amido como agente de gelificao. Alm disso, a utilizao de biorreactores em todo ou parte do processo de micropropagao em violeta Africana ir diminuir o custo de produo de 70%. Alm disso, os explantes ficam no mesmo recipiente e apenas o meio fresco adicionado ao sistema, a intervalos regulares e propgulos proliferadas so sada dos vasos. Tabela 2. Efeito da composio do meio em nmero de brotaes, altura e peso seco de plntulas na proliferao passo.

Figura 3. O efeito da composio do meio sobre o peso seco de brotaes em primeiro subcultura.

Figura 4. O efeito da composio do meio na altura de plantas de brotos em primeira subcultura.

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