Aspectos

Cristiane da S. D. Furtado, Ana Paula G. Mellagi, Anamaria J. Vargas, Fernando P. Bortolozzo, Ivo Wentz, Mari L. Bernardi UFRGS FAVET - SETOR DE SUNOS, Av. Bento Gonalves, 9090, CEP 91540-000, Porto Alegre RS

Relevantes

na

Avaliao

da

Morfologia

Espermtica

do

Suno

O exame de morfologia espermtica faz parte da avaliao qualitativa do ejaculado e permite a determinao da freqncia de cada uma das anormalidades espermticas e do percentual total de alteraes na amostra de smen. utilizado como indicativo do potencial fecundante do ejaculado, pois as alteraes interferem na capacidade de movimentao e fecundao do espermatozide, de acordo com a localizao do defeito. Este exame uma ferramenta fundamental para o descarte do ejaculado e at mesmo do reprodutor (Bortolozzo et al., 2005). A morfologia espermtica deve ser avaliada periodicamente ou quando o smen apresentar suspeita de alteraes morfolgicas. No exame so avaliadas e registradas as alteraes presentes em cada estrutura, separadamente. Os defeitos podem ocorrer em um dos segmentos da clula espermtica ou em mais de uma estrutura, simultaneamente. Quando a clula apresenta mais de um defeito em regies distintas, apenas o defeito mais severo considerado. Ao final, feita a soma das alteraes observadas e o total obtido no deve ultrapassar o limite aceitvel. Um alto percentual de defeitos pode representar alteraes durante a espermatognese ou no trnsito e maturao no epiddimo, ou mesmo, manipulao inadequada do ejaculado. O exame de morfologia espermtica deve ser efetuado nos seguintes casos:

Machos que sero introduzidos no plantel da Central de IA (coletar uma amostra da 4a-6a coleta, evitar concluses em exames realizados nas primeiras coletas da vida do doador); Em todos os reprodutores do plantel, sistematicamente, a cada 50-60 dias; Quando for observada queda continuada da motilidade (2 ou mais ejaculados em seqncia); Quando no exame de motilidade houver suspeita de um aumento excessivo do nmero de espermatozides com anormalidades; Quando o macho for afastado temporariamente do regime de coleta; Em machos que apresentaram quadro de hipertermia

Material necessrio: A amostra de smen a ser avaliada deve ser enviada ao laboratrio em um frasco de vidro com tampa de borracha, em soluo formol-citrato (Quadro 1). A remessa do material ao laboratrio deve ser imediata, pois, apesar da fixao das clulas, o tempo deletrio para a qualidade da amostra devido aglutinao espermtica. Deve-se ter cuidado ao manipular a soluo de formol, evitando que entre em contato com o material de processamento de smen na Central de Inseminao Artificial, pois uma substncia espermicida. Quadro 1. Composio da soluo formol-citrato. Citrato de Sdio 2H2O - 2,9gl Formaldedo 35% - 4,0ml gua destilada q.s.p. - 100ml

Preparao da amostra: -Preparar frascos com 3 a 4ml de soluo formol-citrato previamente aquecida entre 32 e 35C; -Acrescentar 2 a 3 (200-300microlitros) gotas de smen, de acordo com a concentrao do ejaculado, at obter amostra de aspecto turvo. O excesso de smen na amostra pode prejudicar a avaliao por causar aglutinao espermtica. -Homogeneizar.

Limites aceitveis de alteraes morfolgicas dos espermatozides: considerado smen normal aquele com nmero de clulas espermticas morfologicamente anormais dentro dos limites aceitveis. No manual para exame androlgico e avaliao de smen animal (CBRA, 1998) as alteraes morfolgicas totais devem ser inferiores a 20%. Quando individualizadas por regio do espermatozide, devem ser considerados os limites apresentados no Quadro 2. importante salientar que, mesmo quando os parmetros morfolgicos encontram-se dentro dos limites aceitveis, o resultado do exame no permite estabelecer o nvel de real fertilidade do ejaculado (Rodrguez-Martnez & Eriksson, 2000).

Alteraes morfolgicas dos espermatozides: As alteraes na morfologia espermtica podem ser classificadas de acordo com sua origem (Quadro3) ou de acordo com a localizao da alterao.

Gota

citoplasmtica:

Durante a espermatognese, fisiologicamente, ocorre a formao de uma gota junto ao colo. Esta estrutura um resduo do processo de formao do espermatozide, sendo conhecido como gota citoplasmtica proximal. Ao longo do trnsito espermtico pelo epiddimo, a gota migra para o final da pea intermediria, passando a se chamar gota citoplasmtica distal, at se desprender da pea intermediria e ser perdida (Figura 1). As gotas podem ser encontradas em todos os ejaculados e esto presentes em maior nmero na frao inicial do ejaculado. A ocorrncia de gota citoplasmtica , geralmente, indicativo de problemas durante a maturao e trnsito no epiddimo. No entanto, no so consideradas de grande importncia em sunos, pois nessa espcie no esto correlacionadas com a fertilidade. Entretanto, cabe salientar que a ocorrncia de gota citoplasmtica proximal superior a 5%, especialmente em smen diludo e resfriado, pode reduzir o potencial fecundante da amostra (Leidlet al., 1999). A ocorrncia elevada desta anormalidade pode indicar degenerao ou hipoplasia testiculares ou disfuno epididimria. Apresena da gota citoplasmtica proximal considerada normal e transitria em machos jovens (idade inferior a 12 meses) e tende a desaparecer quando o reprodutor atinge a estabilidade na produo espermtica, por volta de 12 meses de idade. O mesmo ocorre nos processos degenerativos quando em fase de involuo, ao contrrio dos casos de hipoplasia testicular nos quais a gota persiste. A coleta excessiva dos machos pode levar a um aumento no percentual de gotas e a reduo do nmero de coletas minimiza sua ocorrncia. Alm disso, estresse trmico, quadros febris e alteraes nutricionais podem resultar no aumento de espermatozides com esta alterao.

Quadro 2. Limites aceitveis de defeitos espermticos em amostras de smen suno. Alteraes de acrossoma - 5% Alteraes de cabea - 5% Alteraes de colo - 5% Gota protoplasmtica proximal (GPP) - 10% Alteraes da pea intermediria - 5% Gota protoplasmtica distal (GPD) * Alteraes de cauda - 10% Total de alteraes - 20% * Sem significado patolgico em sunos, no sendo computada no total de clulas alteradas. Adaptado de CBRA (1998) Cabea: As formas anormais da cabea podem ser diversas, por exemplo, alongadas, arredondadas, ter estreitamento prximo ao colo, ser maiores ou menores que o normal (Figura 2). A alta freqncia de anormalidades de cabea est geralmente relacionada com casos de degenerao e hipoplasia testiculares. Quadro 3. Classificao das alteraes espermticas As alteraes observadas podem ter diversas etiologias, de acordo com a estrutura e forma de apresentao. As anormalidades na morfologia espermtica podem ser classificadas em: Anormalidades primrias: de origem intra-gonadal, causadas por falhas na espermatognese. So alteraes que os espermatozides sofrem durante a espermatognese e so indicativos de processos patolgicos. Anormalidades secundrias: alteraes de origem extra-gonadal, geradas durante a maturao e transporte no epiddimo. So originadas no epiddimo, aps as clulas terem completado a transio de espermatcito secundrio para clula espermtica, portanto, ocorrem aps a formao dos espermatozides. Anormalidades tercirias: alteraes ocorridas depois da ejaculao, geradas mais freqentemente durante a manipulao do smen. Este tipo de defeito originado durante a manipulao e processamento do ejaculado devido ao manuseio inadequado. A influncia na capacidade fecundante do ejaculado depende do tipo e da localizao do defeito e da freqncia das alteraes, podendo resultar na reduo do potencial de fertilidade da amostra. O choque trmico durante a coleta e diluio uma das causas mais comuns de formao de cauda dobrada ou enrolada. Este problema resolvido mantendo-se todo material aquecido durante o processamento e diluio do ejaculado.

Cabea Destacada: O colo da clula espermtica uma das estruturas mais frgeis. Uma alta freqncia de cabea destacada pode ser um indicativo de uma disfuno do epiddimo ou hipoplasia testicular. No entanto, cabe salientar que, em casos de avaliao de smen por colorao em lmina, a cabea destacada pode ser artefato decorrente de problema na preparao do esfregao. O mesmo pode acontecer no preparado mido, quando a lamnula pressionada com fora sobre a lmina contendo a gota de smen. Pea Intermediria: Alteraes isoladas na pea intermediria so raras, mas so geralmente observadas associadas a outras anormalidades, por exemplo, alteraes de cabea. Cauda dobrada e cauda enrolada (defeito de pea intermediria e cauda): Alteraes na forma da pea intermediria e cauda podem ter diversas causas. Estas patologias so mais freqentemente originadas no epiddimo, cuja natureza no foi totalmente elucidada, ou durante a ejaculao devido secreo alterada das glndulas acessrias. A ocorrncia de doenas, quadros febris e deficincia nutricional tambm pode gerar anormalidades de cauda. Estas anormalidades podem ser classificadas como tercirias quando so resultado de choque trmico durante a coleta ou diluio (Figura 1). Alteraes de Acrossoma: O acrossoma uma estrutura fundamental no processo de fecundao, pois esta estrutura possui enzimas que participam do processo de fecundao. Portanto, alteraes nessa estrutura so consideradas graves, pois resultam em perda da capacidade fecundante da clula (Figura 3). Os defeitos acrossomais podem ser tanto primrios quanto tercirios. As anormalidades decorrentes de falha na espermatognese podem ter como causa doena, reao vacinal, constipao ou carncias vitamnicas. Outra causa o intervalo prolongado entre coletas. No raramente, estas anormalidades so tercirias, devido a fatores prejudiciais como envelhecimento, congelamento ou descongelamento, flutuaes de temperatura, pH ou osmolaridade durante o processamento. Tambm pode ocorrer dano ao acrossoma quando a soluo fixadora utilizada, mais freqentemente soluo formol-citrato, foi preparada de forma inadequada ou est estocada h muito tempo. Consideraes Finais: A fertilidade de um plantel depende diretamente da qualidade do smen, principalmente quando adotado o sistema de inseminao artificial. Portanto, a correta tomada de decises sobre aquisio e manuteno de reprodutores no plantel inclui, obrigatoriamente, adoo de um protocolo de avaliao qualitativa e quantitativa do smen. Desta forma, recomenda-se que o exame de morfologia espermtica seja realizado a cada ciclo espermatognico (60 dias aproximadamente) como forma de monitoramento da qualidade seminal dos reprodutores.

Referncias bibliogrficas: BORTOLOZZO, F.P.; WENTZ, I.;FERREIRA, F.M.; BENNEMAMM, P.E.; BERNARDI, M.L. Exame do ejaculado. In: Bortolozzo, F.P; Wentz, I.; Bennemamm, P.E.; Bernardi, M.L.; Wollmann, E. B.; Ferreira, F.M.; Borchardt Neto, G. Suinocultura em ao. Inseminao artificial na suinocultura tecnificada. Porto Alegre, 2005, cap. 7. p. 69-87. CBRA. Manual para exame androlgico e avaliao do smen animal/ Colgio Brasileiro de Reproduo Animal. 2. ed. Belo Horizonte: CBRA, 1998, 49p. LEIDL, W.; STOLLA, R.; SCHEFELS, W.;SCHAD, C. Morphology of sperm. Description, classification and assessment. Part 2. Boar (Sus scrofa f. domestica). Software distributed by Minitub of America, Inc.,Version 7. July 1999. RODRGUEZ-MARTNEZ, H., ERIKSSON, B. Evaluacin del semen de verraco y su relacin con fertlidad. In: Simpsio Internacional Minitub, 3., 2000. Flores da cunha-RS, p. 13-33.