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CAPITULO XI

METABOLISMO SECUNDARIO

11.1. DEFINICIN Y CARACTERSTICAS DEL METABOLISMO SECUNDARIO 11.1.1. Definicin Los metabolitos secundarios son aquellos compuestos orgnicos sintetizados por el organismo que no tienen un rol directo en el crecimiento o reproduccin del mismo. A diferencia de lo que sucede con los metabolitos primarios, la ausencia de algn metabolito secundario no le impide la supervivencia, si bien se ver afectado por ella, a veces gravemente. Las caractersticas bsicas son: Se producen por rutas anablicas especializadas cuando no hay crecimiento. Significado evolutivo controvertido por ser imprescindibles. Pueden ser una Estrategia para mantener en funcionamiento los sistemas metablicos cuando no hay crecimiento. Son indicativos de diferenciacin y se producen durante la idiofase de los cultivos. En el caso de los microorganismos, los metabolitos secundarios mejor conocidos son los antibiticos. En la trofofase (fase de crecimiento de los microorganismos) no se producen metabolitos secundarios. Es en la idiofase normalmente, cuando se producen (fase en la que el microorganismo no crece, pero sigue metablicamente activo). Para que se produzca el metabolito secundario, primero hay que asegurar unas condiciones ptimas durante la trofofase. Como mecanismo de defensa, la produccin de metabolitos secundarios no se produce inmediatamente despus de la conclusin de la trofofase. Primero, al comienzo de la idiofase, deben hacerse resistentes a sus propios antibiticos. No se conocen bien los factores que disparan la produccin de metabolitos secundarios. Se sabe que el paso de trofofase a idiofase se produce cuando algn

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nutriente del medio es limitante. Suele tratarse de C, N o P. Al faltar algunos de estos factores, se altera la produccin de metabolitos primarios y se originan inductores de enzimas que darn lugar a metabolitos secundarios. Los metabolitos secundarios se definen por las siguientes caractersticas:

a) Productos naturales que tienen una distribucin taxonmica restringida. b) Se forman una vez que el crecimiento se ha detenido. c) Suelen sintetizarse como una mezcla de compuestos qumicamente

relacionados. d) No se encuentran aparentemente relacionados con los productos de las vas biosintticas del tipo II y III. e) Con frecuencia, los metablitos secundarios se producen como un grupo de estructuras estrechamente relacionadas. Por ejemplo, se ha visto que una sola cepa de una especie del Streptomyces produce 32 antibiticos distintos pero relacionados, del tipo antraciclina. f) Los metabolitos secundarios, aparentemente no son esenciales para el crecimiento y la reproduccin. Tienden a producirse cuando el crecimiento est limitado (cultivo continuo). - Se forman por enzimas especficos a partir del metabolismo central. - No son esenciales para el crecimiento o para el metabolismo central. - Son especficos para cada especie, y a veces, de cada cepa.

Los metabolitos secundarios de los Hongos filamentosos son compuestos que poseen estructura qumica muy diferente a la de los metabolitos primarios, como lo son, azucares, aminocidos y cidos orgnicos. Los metabolitos secundarios no son esenciales para el crecimiento en el cultivo de produccin, pero sirven en diversas funciones para la supervivencia en la naturaleza. Estos metabolitos secundarios, encontraste a la naturaleza general de los metabolitos primarios, son producidos por especies de un gnero y para algunas especies por

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determinadas cepas, nicamente. Muchos de los microorganismos que producen metabolitos secundarios poseen una compleja diferenciacin morfolgica.

11.1.2. Caractersticas del metabolismo microbiano secundario La actividad metablica microbiana no tiene siempre como consecuencia la proliferacin celular. Si se considera la actividad metablica de un cultivo microbiano a lo largo de toda la curva de crecimiento, se diferencian aquellos procesos metablicos asociados al crecimiento celular (metabolismo primario) de aquellos que tienen lugar en la fase estacionaria, una vez que ha cesado el crecimiento de la biomasa (metabolismo secundario). Como resultado del metabolismo secundario se producen diferentes tipos de compuestos que reciben, todos ellos, la denominacin de metabolitos secundarios.

En el crecimiento no balanceado, el aumento no balanceado, el aumento del nmero de clulas puede tener lugar en una o dos fases. En el primer caso, tenemos unas curvas de aumento de la biomasa y del crecimiento del nmero de bacterias como se representa en (a) y en el segundo, como en (b).

Esto permite distinguir dos fases de crecimiento: la trofofase (proliferacin celular) y la idiofase (no proliferacin celular). El diagrama (a) puede corresponder a una trofofase

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superpuesta a la idiofase. Cuando son sucesivas, como en (b), la actividad metablica no participa directamente en el desarrollo celular. El acumulo de reservas suele tener lugar de conformidad con el diagrama (a), pero pueden ser reutilizadas despus del agotamiento del sustrato exterior. En cambio, (b) puede representar formacin de polisacridos extracelulares que se arrastran con las clulas, pero que pueden luego separarse por lavado. Otros casos como el del diagrama (b), o intermedios entre (a) y (b), pueden corresponder a diferenciacin celular o produccin de pigmentos.

11.1.3. Relacin de idiofase y trofofase

Como ya antecedimos con lo diagramas, mostramos una relacin que existe entre ello: Trofofase, fase de crecimiento logartmico donde normalmente no se producen los metabolitos secundarios, e idiofase, fase estacionaria donde normalmente se producen los metabolitos secundarios.

Permite comprender mejor la fermentacin industrial de los metabolitos secundarios. Es decir, si nosotros queremos producir un metabolito secundario primero debemos asegurar las condiciones apropiadas durante la trofofase para un buen crecimiento y despus, debemos alterar esas condiciones en el momento adecuado para asegurar una excelente produccin del metabolito secundario.

Este retraso en la formacin de metabolitos secundarios es uno de los principales mecanismos mediante el cual los microorganismos productores de antibiticos evitan el suicidio, puesto que al comienzo de la fase logartmica de crecimiento son sensibles a su propio antibitico, para posteriormente, durante la idiofase, volverse resistentes al antibitico que estn produciendo.

Los factores que ponen en marcha la produccin de metabolitos secundarios al final de la trofofase no se conocen; nicamente se sabe que este mecanismo se dispara normalmente cuando algn nutriente del medio se ha agotado. En algunas ocasiones el nutriente responsable es una fuente de Carbono, en otras, sin embargo es el Nitrgeno o el Fsforo. La explicacin puede ser que al faltar nutrientes se alteren los

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metabolitos primarios y se originen inductores de los enzimas encargados de la sntesis de los metabolitos secundarios. Otra explicacin puede ser que al faltar la fuente de Carbono cesa la represin por catabolito, sintetizndose a partir de este momento los enzimas necesarios para la biosntesis de estos metabolitos secundarios. Cualquiera que sea el mecanismo general por el que se dispara el metabolismo secundario al final de la trofofase, es un hecho que en este punto hay unos cambios muy fuertes en la composicin enzimtica de las clulas, apareciendo los enzimas que estn especficamente relacionados con la formacin de metabolitos secundarios. Sin embargo, e independientemente de este aspecto general del metabolismo secundario, se ha puesto de manifiesto la existencia de sistemas de regulacin que juegan un papel importante en la sntesis de determinados productos industriales. Es importante destacar que el concepto de metabolismo secundario tiene un sentido amplio y no se restringe al mundo microbiano. De hecho, este trmino fue introducido inicialmente por fisilogos vegetales y aplicado posteriormente al mundo microbiano por J.D. BuLock en 1961. Sus trabajos se relacionan con las clsicas investigaciones de Raistrick (1931) sobre la produccin de substancias qumicas poco usuales por hongos. 11.2. TIPOS DE METABOLITOS SECUNDARIOS En la dcada de los aos cuarenta, las investigaciones sobre el metabolismo secundario se centraron particularmente sobre la produccin de substancias txicas para microorganismos patgenos (antibiticos). En la dcada de los sesenta en la produccin de substancias con especiales efectos sobre animales y vegetales (toxinas y promotores del crecimiento).

Considerando especficamente el mundo microbiano, los metabolitos secundarios presentan una enorme variedad de estructuras qumicas. Muchos de ellos suelen ser especficos de algunos grupos microbianos, y el hecho de que algunos tipos de molculas sean caractersticas de determinadas cepas no es inslito. Adicionalmente, los metabolitos secundarios solo son producidos en condiciones fisiolgicas muy especficas. Todos estos factores han llevado a la conclusin de que estos productos no tienen una funcin metablica esencial.

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La variedad y complejidad de los procesos metablicos que tienen lugar una vez que se entra en una fase de no proliferacin celular plantean sin duda muchas preguntas de difcil respuesta. Una de ellas, por ejemplo, hace referencia a los procesos de diferenciacin celular que llevan a cabo muchos microorganismos una vez que se encuentran en condiciones de no proliferacin celular como el desarrollo de formas de anabiosis, uno de cuyos ejemplos es el de las esporas bacterianas. En el caso de los bacilos esporulados, la sntesis de cido dipocolinico es concomitante a la formacin de la espora pero parece obvio que este compuesto no entrara en la categora de los metabolitos secundarios. Antes del descubrimiento de los antibiticos, el tipo de metabolitos secundarios que despertaba ms inters era el de aquellas molculas que se producan en cantidades importantes en condiciones de cultivo notablemente sencillas, y que eran fcilmente aislables. No es de extraar que muchos de tales productos se hicieran aparentes por su color o aspecto cristalino. Sin duda, el descubrimiento de la penicilina como compuestos dotado de bioactividad y til para el tratamiento de enfermedades

infecciosas provoc un cambio en el enfoque que los investigadores daban al estudio de los metabolitos secundarios, lo que ha sido la base del conocimiento que hoy da se dispone acerca de la amplsima variedad de molculas estudiadas.

Otro aspecto importante de los metabolitos secundarios es el de si presentan una funcin especfica o, por el contrario, su sntesis se encuentra asociada a distintos procesos celulares. Aunque esto es todava una cuestin abierta, la consideracin de sus propiedades, tal qumicas poco usuales: formas cclicas del pentapptido de las malforminas, o del dodecadepsipptido de la valinomicina; los largos anillos lactnicos de los macrlidos y polienos; los sistemas de unin de los anillos de las giberelinas y el triple enlace de los poliacetilenos. De la gran diversidad estructural de los metabolitos secundarios dan idea las estructuras de la penicilina, la estreptomicina (Figura N 11.1), la avermectina o la eritromicina. Comparacion de la estructuras de la avermectina, producida por Streptomyces avermitilis, y de la eritromicina, producida por el actinomiceto Saccharopolyspora erythraea evidencia una cierta semejanza (Figura N 11.2). Estos dos ltimos compuestos pertenecen al grupo de los polictidos. Se trata de molculas sintetizadas a partir de cidos grasos sencillos por una va que superficialmente se

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asemeja a la de los cidos grasos de cadena larga, pero los productos resultantes presentan una complejidad estructural muy superior al sencillo esqueleto carbonado de los cidos grasos de cadena larga. Figura N 11.1. Estructuras de la penicilina N, una -lactona (a) y de la estreptomicina, un aminociclitol (b).

Fuente: (Crueger, W. and A. Crueger.1993). Figura N 11.2. Estructuras de la ivermectina (a), de la estreptomicina, un antibiotico (b) y de la eritromicina,

Fuente: (Crueger, W. and A. Crueger.1993).

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La ivermectina es un compuesto con actividad antinematodos y antiartropodos, la estreptomicina es un antibiotico (b) Mectina, producida por Streptomyces avermitilis, y la eritromicina, producida por el actinomiceto Saccharopolyspona erythraea evidencian una cierta semejanza estructural, aunque existen notables diferencias responsables tipo de bioactividad. Cuadro 11.1. Metabolitos Microbianos Secundarios Comercializados

Fuente: (Frioni, L. 1999

11.3. FUNCIONES DE LOS METABOLITOS SECUNDARIOS Indudablemente, la investigacin acerca de los metabolitos secundarios est fundamentalmente enfocada hacia su aprovechamiento, y no hacia el papel que realmente desempean dentro del metabolismo microbiano. No obstante en funcin de la informacin colateral disponible, puede realizarse una estima a cerca del papel que desempea este tipo de molculas en las clulas microbianas. Para ello, hay que considerar previamente algunos aspectos que caracterizan a los metabolitos secundarios. En primer lugar, hay que indicar que su biosntesis se deriva de intermediarios o monmeros del metabolismo primario. Esto implica la existencia de enzimas especficos que posibilitan que una de tales molculas, siguiendo una ruta determinada, se transforme en el metabolito secundario en cuestin. Sin duda, la

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informacin gentica necesaria acabara perdindose a no ser que su disponibilidad representar algn beneficio para la clula. Por lo que respecta al tipo de reacciones, cuando se comparan las vas biosintticas del metabolismo primario con las del secundario se observa que estas ltimas, si bien utilizan mecanismos de reaccin similares a los de las primeras, tienen tambin caractersticas propias. No tienden a la economa energtica ni a la simplicidad de las vas del metabolismo primario. Como ya ha sido comentado, los metabolitos secundarios presentan una gran diversidad estructural, consecuencia de la diversificacin y ramificacin de sus vas biosintticas. Este hecho, juntamente con el de la regulacin especfica de tales vas, justifica que la clula utilice este metabolismo en su propio beneficio. Considerando la regulacin en s misma, hay que mencionar que la formacin de metabolitos secundarios est sometida a un control general que responde a factores ambientales. Otra caracterstica importante es que el metabolismo secundario tiene una prioridad menor que la del propio crecimiento. Creciendo en medio rico, los microorganismos no producen metabolitos secundarios o, si lo hacen, su produccin es muy reducida. La informacin gentica necesaria para producir metabolitos secundarios solamente se expresa al mximo nivel cuando el crecimiento se halla restringido. La naturaleza de la limitacin del crecimiento tambin afecta al nivel de expresin. Finalmente cabe mencionar que, adems de un sistema de regulacin fisiolgico en funcin de parmetros ambientales, existente tambin mecanismos especficos que regulan la produccin de un metabolito secundario. Por ejemplo, la produccin de cefalosporina en Cephalosporium acremonium se ve incrementada si se aade metionina al medio.

Otros factores que apoyan la hiptesis de que los metabolitos secundarios tienen una funcin til para la clula son los siguientes:

1. La mayora de los metabolitos secundarios son excretados al medio externo. Este hecho puede estar relacionado tanto con la eliminacin de material txico de la clula como con la existencia de una funcin propia de estas molculas, o con ambos a la vez.

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2. La tolerancia que presentan los microorganismos productores a los efectos txicos de estos compuestos (es evidente que los microorganismos productores de antibiticos son resistentes a los mismos). 3. El hecho de que los genes responsables de la biosntesis de metabolitos secundarios se encuentren agrupados juntamente con genes reguladores, sugiere claramente que se trata de un sistema altamente evolucionado que debe de representar un beneficio importante para el microorganismos productor.

Algunos de los papeles que pueden desempear los metabolitos secundarios en la clula microbiana pueden estar integrados en procesos globales de la clula, mientras que otros pueden desempear funciones especficas.

Una de las funciones de tipo global o general sera la de drenar los metabolitos primarios que se acumulan en condiciones de desequilibrio metablico. Esta posibilidad ya fue considerada por Woodruff en 1966. La acumulacin de metabolitos que puede tener lugar como consecuencia de una descoordinacin en la regulacin de las vas metablicas podra resolverse mediante la transformacin de los intermediarios en metabolitos secundarios, en lugar de excretarlos directamente al medio. En este contexto una visin diferente sera la eliminacin del intermediario, sino la activacin de una serie de vas metablicas que permitiran a las vas primarias seguir manteniendo un nivel de actividad (suministrando energa y precursores) que posibilitara el restablecimiento del crecimiento normal cuando se diesen las condiciones adecuadas.

Por lo que respecta a funciones especficas de los metabolitos secundarios, cabe resear las siguientes como ms posibles:

1.

Precursores de componentes estructurales. Al parecer, la estreptomicina es un constituyente de la mureina de streptomyces gryseus. Algunas estructuras de las cubiertas celulares fngicas contienen productos protectores formados por polimerizacin oxidativa de productos tales como el 1,8-dihidroxinaftaleno, proceso equivalente a la lignificacin. Este hecho sugiere que todos estos

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casos podran ser manifestaciones del metabolismo secundario que se han integrado al metabolismo normal de algunos organismos. 2. Captadores de minerales. En este caso, la produccin de compuestos que quelan hierro por parte de microorganismos.

Lo que ocurre en los medios naturales es difcil de predecir, pero probablemente es una situacin intermedia entre los casos referidos del cultivo continuo y discontinuo. Hay que tener en cuenta que los metabolitos secundarios pueden ser destruidos por otros organismos que se desarrollen simultneamente. Es comnmente aceptado que la formacin de verdaderos metabolitos secundarios nunca tiene lugar ni al principio ni a la mitad de la fase logartmica de crecimiento; sin embargo, en ciertos microorganismos de inters industrial tiene lugar cierta produccin de metabolito secundario en estas etapas. Esto es consecuencia de que en este tipo de organismos los mecanismos de regulacin se hallan alterados. Ello sugiere que en el organismo salvaje la sntesis del metabolito secundario est reprimida.

11.4. REGULACIN DEL METABOLISMO SECUNDARIO 11.4.1. Relacion del metabolismo Primario y Secundario

Es evidente que el metabolismo secundario debe estar relacionado con el primario. La distincin entre trofofase e idiofase tiene precisamente como objeto resaltar esta conexin. Destacan los siguientes puntos: A. ABSORCIN DE LA LUZ

La mayora de las esporas de actinomicetos y hongos contienen pigmentos que, al absorber la energa luminosa, protegen al material gentico de las reacciones qumicas inducidas por la luz. La presencia de pigmentos tambin es frecuente en clulas vegetativas, donde pueden funcionar protegindolas bien de la radiacin o de

radicales txicos producidos en reacciones aerbicas. En este contexto, es interesante

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resaltar que algunas espiroquetas solamente producen pigmentos cuando crecen aerbicamente. B. INDUCCION ENZIMATICA: A lo largo de los estudios sobre el papel que el triptfano juega como estimulador de la biosntesis de alcaloides por Claviceps (Cornezuelo del centeno) se puso de manifiesto que la induccin enzimtica juega un papel importante en la produccin de metabolitos secundarios. Si bien el triptfano es un precursor en la biosntesis de estos alcaloides, no es un factor limitante; ya que su efecto estimulador se debe en gran parte a la induccin de la sntesis de los enzimas que dan lugar a la sntesis de los alcaloides. Existen tres razones que han llevado a esta conclusin: (i) Los anlogos del triptfano, que no se incorporan a la molcula del alcaloide, es decir, que no son precursores, estimulan la produccin de los alcaloides. (ii) El triptfano se debe aadir durante la trofofase ya que si se aade durante la idiofase tiene poco efecto. (iii) El triptfano aadido es absorbido por la clula durante la fase de crecimiento y alcanza su mayor concentracin intracelular justo antes de la sntesis de los alcaloides. Otro efecto de induccin similar es el de la metionina en la biosntesis de cefalosporina por Cephalosporium acremonium. A pesar de que la metionina provee azufre al antibitico, la estimulacin de la formacin de cefalosporina C se debe a un efecto de induccin. Se lleg a esta conclusin ya que la metionina debe aadirse durante la trofofase; adems, la metionina puede ser reemplazada por su anlogo norleucina que no tiene azufre en su molcula, por lo que su efecto no puede ser debido al hecho de aportar azufre. La induccin tambin juega un papel muy importante en determinar la relacin entre los componentes de la mezcla que se produce en una fermentacin. Por ejemplo, en la

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fermentacin para la produccin de estreptomicina se produce estreptomicina y mansido estreptomicina. La conversin de mansido estreptomicina en estreptomicina se cataliza mediante el enzima a-D-manosidasa que es inducido por manano. En primer lugar, hay que indicar que su biosntesis se deriva de intermediarios o monmeros del metabolismo primario. Esto implica la existencia de enzimas especficos que posibilitan que una de tales molculas, siguiendo una ruta determinada, se transforme en el metabolito secundario en cuestin. Sin duda, la informacin gentica necesaria acabara perdindose a no ser que su disponibilidad representar algn beneficio para la clula.

Por lo que respecta al tipo de reacciones, cuando se comparan las vas biosintticas del metabolismo primario con las del secundario se observa que estas ltimas, si bien utilizan mecanismos de reaccin similares a los de las primeras, tienen tambin caractersticas propias. No tienden a la economa energtica ni a la simplicidad de las vas del metabolismo primario. Los metabolitos secundarios presentan una gran diversidad estructural, consecuencia de la diversificacin y ramificacin de sus vas biosintticas.

Este hecho, juntamente con el de la regulacin especfica de tales vas, justifica que la clula utilice este metabolismo en su propio beneficio. Considerando la regulacin en s misma, hay que mencionar que la formacin de metabolitos secundarios est sometida a un control general que responde a factores ambientales.

Otra caracterstica importante es que el metabolismo secundario tiene una prioridad menor que la del propio crecimiento. Creciendo en medio rico, los microorganismos no producen metabolitos secundarios o, si lo hacen, su produccin es muy reducida. La informacin gentica necesaria para producir metabolitos secundarios solamente se expresa al mximo nivel cuando el crecimiento se halla restringido. La naturaleza de la limitacin del crecimiento tambin afecta al nivel de expresin. Finalmente cabe mencionar que, adems de un sistema de regulacin fisiolgico en funcin de parmetros ambientales, existente tambin mecanismos especficos que regulan la produccin de un metabolito secundario.

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Por lo que respecta a la cintica de produccin de un metabolito secundario, una vez que se inicia su sntesis la produccin es una funcin lineal con respecto al tiempo. En la Figura N 11.3, se representa la cintica de produccin de edeina, un compuesto producido por una cepa de Bacillus brevis.

Figura N 11.3. Crecimiento y produccin de edeina por clulas de Bacillus brevis

Fuente: (Pezacka, E. y Harland G. W. 1996)

La duracin de la etapa de produccin vara en funcin de la naturaleza del metabolito secundario, del organismo y del medio. Generalmente el periodo de produccin del metabolismo secundario oscila entre una mitad y el doble del tiempo de la fase de crecimiento exponencial. Usualmente, los procesos de sntesis de corta duracin corresponden a sistemas bacterianos, mientras que los de larga duracin corresponden tanto a sistemas bacterianos como a microorganismos eucariotas.

A ttulo de ejemplo, la produccin de edeina reseada en la figura 11.3 dura 5 horas, despus de 8 de crecimiento, mientras que la sntesis de enterotoxina estafiloccica se lleva a cabo durante un periodo de 13 horas que sucede a otro de 5 horas de crecimiento. En actinomicetos y mohos, la relacin entre el periodo de crecimiento vegetativo y el del metabolismo secundario para la produccin de la actinomicina, eritromicina, metamicina, estreptomicina alcaloides de la ergolina y cido kkico son

respectivamente 1:2, 1:2,4, 1:1,5, 1:2, 1:1,25 y 1:2.

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En algunos ejemplos parece que el propio producto final de la sntesis secundaria inhibe la formacin del metabolito secundario. Tal es el caso del cloranfenicol y del 6metasaliclato. Por otra parte, cuando el metabolito secundario procede de un precursor que es intermediario comn con la biosntesis de un metabolito primario, este timo inhibe la formacin del metabolito secundario. El caso mejor estudiado es la inhibicin de la sntesis de penicilina por la lisina en Penicillium chrysogenum. Figura N 11.4.

Figura N 11.4. Via de sntesis de la lisina y la bencilpenicilina en Penicillium chrysogenum

Fuente: (Pares I.F. y A. Jurez, 1997).

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Teniendo en cuenta que muchos otros metabolitos secundarios se producen por una ramificacin de vas biosintticas primarias, el inconsecuencia del cese de la represin feedback que tiene lugar al no sintetizarse ms el metabolito primario. El metabolismo secundario y la diferenciacin celular estn mucho ms influidos por la presencia de determinados iones metlicos que el crecimiento vegetativo. As, manganeso, hierro y zinc son respectivamente metales clave para el metabolismo secundario de bacterias del gnero Bacillus, actinomicetos y hongos. Hay que mencionar que, en algunos casos, el metal induce la produccin del metabolito (por ejemplo, el manganeso induce la produccin de bacilina en Bacillus subtilis o el hierro la de estreptomicina por Streptomyces antibioticus) mientras que, en otros, la reduce (por ejemplo, el zinc inhibe la produccin de griseofulvina por Penicillum griseofulvum). Un mismo metal puede tener actividad inductora frente a un metabolito e inhibidora frente a otro. Tambin hay que considerar la existe de molculas que ejercen sobre la produccin de ciertos metabolitos secundarios. Por ejemplo ,el factor A(2-isocaprioloil-3-R-

hidroximetil-p-butirolactona)es un regulador pleitropico que ejerce un control positivo sobre la biosntesis de estreptomicina en algunas especies de estreptomicetos. Tal como se comento anteriormente, la metionina aadida inicialmente al medio incrementa la formacin de cefalosporina en Cephalosporium. Tambin el triptofano induce la produccin de alcaloides de la ergolina por Claviceps.

11.4.2. Gentica del metabolismo secundario (Superproduccin de metabolitos secundarios)

Una caracterstica bastante extendida entre las bacterias es que los genes que codifican los enzimas de vas metablicas secundarias se encuentran normalmente agrupados. Es tambin destacable que lo genes responsables de la produccin de un antibitico suelen localizarse junto a los que codifican los mecanismos de resistencia al mismo. Si bien en organismos eucariotas los qenes que codifican los enzimas de una va metablica secundaria pueden hallarse en diferentes cromosomas. Por lo que respecta a la modificacin de la produccin de metabolitos secundarios, se han obtenido mutantes altamente productores. Bien a partir de tratamientos mutagnicos. A titulo de ejemplo, el rendimiento en la produccin de penicilina pas de

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5mg/l en 1941 a 10000mg/l en 1946 debido a los avances en la tcnica del cultivo sumergido. Desde 1946 hasta 1970, el rendimiento sigui aumentando hasta 10000 mg/l en funcin de la seleccin de mutantes super productores. La seleccin de mutantes tambin se ha utilizado eficazmente para obtener cepas que produzcan un solo metabolito secundario a partir de cepas salvajes que producen una mezcla de productos relacionados.

De ello por ejemplo se puede determinar:

La presencia de histaminas en los vinos. Se ha observado que no todas las especies de levaduras producen histamina en el curso de la fermentacin alcohlica del mosto. Las ms alcoligenas, con excepcin del gen. Schizosaccharomyces, tienen una capacidad muy reducida de produccin de histamina.

La histamina del mosto tiene como nutriente nitrogenado un valor muy limitado para las levaduras, aunque especies del gen. Candida asimila imidazoles durante la fase logartmica de crecimiento. Figura N 11.5. Figura N 11.5. Sntesis de histamina a partir del aminocido histidina.

Fuente: (Matissek, R., F. M. Schnepel y G. Steiner. 1998)

11.4.3. Rutas metablicas de los metabolitos secundarios En el siguiente esquema simplificado se muestra la interconexin existente entre el metabolismo primario y secundario, en este caso los metabolitos secundarios se dividen a grandes rasgos y considerando nicamente los grupos de mayor importancia

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en tres grupos: compuestos terpenicos, compuestos fenlicos y compuestos fenlicos y compuestos con nitrgeno. Figura N 11.6. Figura N 11.6. Interconexin existente entre el metabolismo Primario y Secundario.

Fuente: (Sauer U, Eikmanns BJ. 2005).

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En

el

tambin

puede

distinguirse

que

las

siguientes

rutas:

ruta del MEP (metileritritolfaosfato), ruta del MVA (cido mevalnico), ruta del cido malnico y la ruta del cido siquimico (en ingles shikimico). Es igual de importarte la participacin de aminocidos tanto alifticos como aromticos, ya que son la fuente biosintetica principal de nitrgeno. Cada una de estas vas est relacionada de la siguiente manera con el metabolismo primario: La ruta del cido siquimico, es originada por el fosfoenolpiruvato y la eritrosa-4fosfato, su vez este cido es precursor de los aminocidos aromticos. La ruta MEP se origina del piruvato y del gliceraldehido-3-fosfato. Los aminocidos alifticos son obtenidos a partir del ciclo de krebs (ciclo del cido ctrico). Las rutas malnica y mevalnica, a partir de la Acetil Acetil-CoA. La ruta MEP se origina del piruvato y del gliceraldehido-3-fosfato.

Las relaciones existentes entre estas rutas y los grupos de metabolitos secundarios son las siguientes: Los compuesto terpenoides se biosintetizan por las rutas MEP o MVA Los compuestos fenlicos por la ruta del cido siquimico, a partir los aminocidos actuar solas o combinarse de las siguientes maneras: ruta cido siquimico-aminocidos aromticos-ruta cido malonico. Los compuestos de nitrgeno fundamentalmente provienen de los aminocidos aromticos y/o alifticos. En el siguiente esquema se muestra de manera ms detallada los metabolitos secundarios y las rutas metablicas que le dan origen. Sin embargo, en este caso ya se detallan algunos ejemplos de grupos de metabolitos, los cuales desarrollare detalladamente en futuras entradas. Figura N 11.7.

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Figura N 11.7. Metabolitos Secundarios y las rutas metablicas que le dan origen.

Fuente: (Torrenegra, R. D. y Baquero J.E. 2003)

11.5. MACROMOLCULAS ESPECIFICAS COMO METABOLITOS SECUNDARIOS De los 100.000 productos naturales producidos por microorganismos y plantas y

alrededor de 50.000 son producidos por microorganismos. De los 12.000 antibiticos conocidos el 55% son producidos por bacterias filamentosas del gnero Streptomyces, 11% de otras bacterias filamentosas, 12% de bacterias no filamentosas y 22% por hongos filamentosos. Familias de metabolitos secundarios:

POLIQUTIDOS TERPENOS AMINOCIDOS

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A. POLIQUTIDOS

Est presente en bacterias, hongos y en plantas. Sirve nicamente para la produccin de metabolitos secundarios. Parte del malonil-CoA que forma el primer paso en la sntesis de cidos grasos. Ejemplos: Griseofulvina (antibitico producido por Penicillium griseofulvum) Aflatoxinas (toxinas producidas por Aspergillus flavus y por A. parasiticus) Ocratoxinas (toxinas producidas por algunos tipos de Aspergillus y de Penicillium) Lovastatina (producida por A. terreus). Figura N 11.8.

Figura N 11.8. Estructuras qumicas de micotoxinas producidas por Aspergillus y Penicillium

Fuente: (Daza, P. 2001)

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B. TERPENOS

Se inician a partir del Acetil-CoA. Produce tanto metabolitos primarios (carotenos, esteroles) como secundarios. Ejemplos:

Ciertos carotenos. Toxinas como la toxina T2 y los tricotecenos (producidos por alguna especie de Fusarium).

Ahora ya es posible distinguir como aminocidos alifticos precursores al triptfano, lisina y a la ornitina y como aminocido aromticos a la fenilamina y a la tirosina. A la par ya podemos reconocer nuevos intermediarios como el cido glico, cido cinmico y los isoprenoides. Ahora bien, los grupos de metabolitos secundarios que ahora se presentan de manera ms detallada pueden ser reordenados segn la clasificacin anterior de la siguiente manera: Compuestos terpenoides: Terpenos y esteroides Todos los terpenoides, tanto los que participan del metabolismo primario como los ms de 25.000 metabolitos secundarios, [son derivados del compuesto IPP (Isopentenil difosfato o "5-carbono isopentenil difosfato") que se forman en la va del cido mevalnico. Es un grupo grande de metabolitos con actividad biolgica importante. Compuestos fenlicos: Compuestos fenlicos como los fenilpropanoides y sus derivados. Los ms de 8.000 compuestos fenlicos que se conocen estn formados o bien por la va del cido shikmico o bien por por la va del malonato/acetato. Incluyen a los fenilpropanoides, lignanos, cumarinas, taninos galicos, antraquinonas, flavonoides y taninos condensados. Figura N 11.9.

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Figura N 11.9. Productos finales del Metabolismo Secundario.

Fuente: (Brook, G. F.; J. Butel y S. A. Morse. 2005) Compuestos con nitrgeno: Compuestos con nitrgeno: Compuestos nitrogenados o alcaloides. Los alrededor de 12.000 alcaloides que se conocen, se incluye a los: Alcaloides indlicos, quinolnicos, pirrolidinicos, tropanicos, pirrodizilinicos, piperidinicos y quinolizidinicos; protoalcaloides isoquinoleicos y benzilisoquinoleicos.

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Figura N11.10.

Formacin de metabolitos secundarios por la va del cido

shikmico o por la va del mevalonato.

Fuente: (C.K. Mathews, K.E. Van Holde y K.B. Ahern, 2002).

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