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B IOINDICAO, BIOMONITORAMENTO: Aspectos Bioqumicos e Morfolgicos

Profa Dra Josanidia Santana Lima

PhD em Ecologia Paisagstica pela Universidade de Kassel, Alemanha, Professora das disciplinas "Princpios Metodolgicos do Biomonitoramento" do Programa de Ps-Graduao em Cincias Biolgicas e "Poluio Ambiental" na Graduao do Instituto de Biologia da Universidade Federal da Bahia .

1.

Definindo Bioindicao e Biomonitoramento

Na maioria das vezes a avaliao da presena de poluentes no ambiente feita atravs de metodologias que empregam recursos qumicos, fsicos ou fsico-qumicos, atravs do uso de aparelhos, em muitos casos bastante sofisticados e caros. Avaliar o comportamento do poluente no ambiente, ou seja, monitorar a sua ao atravs de organismos vivos um tpico relativamente novo nas cincias ambientais, que tem sido chamado debiomonitoramento ou bioindicao. O fundamento da metodologia o fato de que um estmulo ambiental, como a luz ou a carncia de gua, assim como um estmulo proveniente de um poluente, provocam reaes no organismo vivo causando alteraes em seu funcionamento ou comportamento. Nos mtodos da bioindicao, o comportamento do organismo frente a um agente estressor utilizado na avaliao da qualidade do local, onde esse organismo ocorre.

Mais recentemente, os termos biomonitoramento, biomonitor, bioindicao, bioindicador, ou simplesmente monitoramento, tm sido frequentemente usados na biologia aplicada, ecologia e cincias ambientais. Embora o nmero de publicaes nessa rea tenha crescido enormemente nos ltimos anos, existe uma grande confuso na terminologia. O mais velho relato sobre plantas indicadoras tem mais de 400 anos de idade. Porm, o termo (bio)indicador comeou a ser usado mais frequentemente na literatura biolgica alem a partir dos anos 1960.

O termo biomonitoramento teve nfase na Alemanha no uso de vegetais no monitoramento da poluio atmosfrica. Nos pases de lngua inglesa o termo (bio)monitoramento comeou a ser frequente a partir dos anos 1980. Geralmente, autores alemes usam "bioindicao" e "biomonitoramento" mais ou menos como sinnimos. A diferena entre os dois termos que a indicao parece ser mais espontnea e ativa, enquanto que o monitoramento contnuo e passivo (o indicador faz alguma coisa, o monitor usado para fazer alguma coisa). Cada vez mais autores sugerem diferenas e especificidades. A bioindicao (monitoramento) baseada em reaes visveis do organismo indicador. Estes mtodos so chamados de indicao (monitoramento)

sensitiva. A segunda possibilidade selecionar espcies que acumulem a substncia a ser monitorada, medindo a concentrao da substncia no organismo. Este procedimento chamado de indicao acumulativa.

A bioindicao envolve a decodificao de informaes de biossistemas com o propsito de avaliar uma dada rea (areal) ou domnio. Esta definio no inclui o fator tempo nem a possibilidade de se usar organismos testes. Para alguns autores bioindicador o mesmo que biomonitor. Para esses autores, o biomonitoramento no fornece nenhuma resposta sobre a concentrao da imisso presente. Vale ressaltar que emisso a liberao pela fonte produtora, enquanto que a imisso a concentrao da emisso que atinge o organismo ou objeto, considerando-se, portanto, o que se dilui durante o transporte. Os bioindicadores tambm so definidos como organismos ou comunidades que respondem poluio ambiental, alterando suas funes vitais ou acumulando toxinas. Esta definio pode ser ampliada ao se considerar que bioindicadores so organismos ou comunidades que reagem a alteraes ambientais modificando suas funes vitais e/ou sua composio qumica e com isso fornecem informaes sobre a situao ambiental. Bioindicadores so organismos ou comunidades, cujas funes vitais se correlacionam to estreitamente com determinados fatores ambientais, que podem ser empregados como indicadores na avaliao de uma dada rea. Esta definio inclui conscientemente a indicao de comportamentos naturais, como por exemplo, na agricultura, onde podemos inferir sobre caractersticas de uma regio apenas pela presena ou ausncia de determinadas espcies vegetais. Bioindicao o uso de um organismo (uma parte do organismo ou uma sociedade de organismos) para se obter informaes sobre a qualidade do seu ambiente ou parte dele. Organismos que so capazes de fornecer informaes sobre a qualidade do seu ambiente so bioindicadores. Biomonitoramento a observao contnua de uma rea com a ajuda de bioindicadores, os quais neste caso, devem ser chamados de biomonitores. Normalmente, toda observao contnua possibilita uma avaliao semi-quantitativa dos resultados. Usando uma comparao do dia-a-dia: a diferena entre bioindicao e biomonitoramento a mesma que existe entre uma fotografia e um filme".

Com frequncia, o conceito Bioindicao usado para definir reaes, dependentes de uma varivel temporal, a um fator ambiental antropognico ou modificado antropicamente, manifestadas atravs de respostas mensurveis provenientes de um objeto ou sistema biolgico. Essas respostas tm que ser comparveis em situaes padronizadas.

O desenvolvimento na rea do monitoramento biolgico, especialmente na Europa, provocou o surgimento de inmeras designaes para mtodos e enfoques que se desenvolveram em conexo com diferentes linhas de pesquisas e aplicaes prticas. Apesar de algumas divergncias, existe uma concordncia entre os autores de que o uso de organismos naturalmente existentes em uma dada rea de pesquisa deve ser chamado de biomonitoramento passivo, enquanto que o biomonitoramento ativo feito com a exposio de organismos na rea a ser avaliada por um tempo definido em condies controladas. Fica claro que existe uma grande diferena entre os mtodos passivos e ativos. Por isso no h dvidas sobre a necessidade dos termos.

Na Alemanha, a VDI Verein Deutscher Ingenieure (Associao de Engenheiros Alemes) estar brevemente editando normas tcnicas (Richtlinien) que pretendem unificar as terminologias usadas no Biomonitoramento/Bioindicao.

A reao sensvel de um organismo frente a qualidade do seu ambiente, que pode ser usada como indicao (monitoramento), pode ser a nvel bioqumico, fisiolgico, morfolgico, comportamental, etc. Todas essas reaes dependem no somente do fator a ser indicado (monitorado), mas tambm do nvel nutricional, disponibilidade de gua, outros fatores ambientais como luminosidade, temperatura, idade do organismo, sexo, fase de desenvolvimento, caractersticas genticas, concorrncia entre indivduos ou espcies, etc. O mesmo deve ser considerado ao se estudar o acmulo de uma certa substncia. A padronizao dos monitores por isso um fator de fundamental importncia em programas de monitoramento. 2. Processos Biolgicos e Reaes a Estressores

A bioindicao se fundamenta no princpio de que os sistemas biolgicos possuem um estado de estabilidade elevada e um equilbrio dinmico. Todo sistema biolgico, independentemente de ser organismo, populao ou comunidade, se adaptou a um complexo de fatores ambientais ao longo da sua evoluo. Na biosfera, ele conquistou um espao e um nicho ecolgico, onde ele encontra as condies necessrias e favorveis sua manuteno e reproduo. Entretanto, alteraes dos fatores ambientais sob influncia de estressores antrpicos levam a outros estados de estabilidade. Os organismos reagem, alguns se adaptam, porm, quando ultrapassam sua capacidade de adaptao, eles podem apresentar sintomas visveis. Neste caso, o reconhecimento da reao do indicador, como um todo, ocorre somente aps o aparecimento de certos danos visveis, como necrose e clorose. O reconhecimento preventivo de danos seria mais vantajoso, especialmente quando os danos podem ser irreversveis, cessando a influncia da fonte poluidora. Parmetros bioqumicos e fisiolgicos sensveis podem indicar o incio do estresse em concentraes ainda baixas de estressores. A biondicao, nos nveis celulares e subcelulares, no perceptvel, porm mensurveI atravs de metodologias da biologia molecular, da fisiologia e da bioqumica.

Os indicadores neste contexto so reaes bioqumicas, morfolgicas e fisiolgicas. Estruturas menores, como organelas isoladas (cloroplastos e mitocndrias) ou reaes bioqumicas e fisiolgicas, so mais sensveis instabilidade ambiental. Seus limites so mais estreitos, elas reagem mais sensivelmente s perturbaes. Alteraes na concentrao de cido ascrbico, protenas, amido, enzimas, produo de O2 de protoplastos isolados de plantas superiores, fluorescncia de clorofila de algas, so alguns exemplos de parmetros que podem ser mensurados no biomonitoramento, fornecendo informaes sobre alteraes da qualidade ambiental.

Quanto terminologia, o termo "danos invisveis" ou "leso fisiolgica" atribuido a perturbaes bioqumicas e fisiolgicas imperceptveis a olho n ou aparentemente invisveis. Outros pesquisadores postulam "desgoverno"

para danos fisiolgicos reversveis, enquanto que os danos irreversveis so chamados de "leses". Ainda foi sugerido o termo "leso latente ou sutil" para efeitos de imisses na silvicultura.

As leses latentes incluem todas as formas de danos que um organismo (bioindicador) possa sofrer, que no possam ser percebidas a olho n. So includas todas as reaes fisiolgicas e bioqumicas reversveis ou irreversveis, independente da consequncia dessas leses, se provocam inibio de crescimento, da vitalidade, alteram a resistncia a parasitas ou outras doenas, bem como a suscetibilidade a fatores ambientais.

Concentraes relativamente baixas de estressores podem ter efeito nocivo ao vegetal do ponto de vista agronmico, sem que necessariamente apaream danos visveis ou que possam ser associados prejuzos econmicos. Porm, em ecossistemas naturais essa situao pode provocar alteraes ainda que de pequena dimenso. A quantidade e qualidade de uma colheita, por exemplo, pode sofrer uma reduo em funo da inibio da fotossntese ou formao de substncias txicas, como o perxido. A atividade da peroxidase pode ser incrementada mesmo quando o estressor se apresente em concentraes ainda baixas. Esse incremento no necessariamente especfico a determinado tipo de estressor.

Atravs da anlise de reaes bioqumicas e fisiolgicas a determinado estressor natural e / ou antropognico, comparando-se com um controle apropriado (por exemplo, plantas expostas em rea no-poluda), pode-se obter informaes importantes sobre o grau de poluio de uma determinada regio, at mesmo sem o aparecimento de danos visveis. importante para a bioindicao que se conhea o maior nmero possvel de critrios e parmetros de aplicao prtica.

Do ponto de vista metodolgico, importante se diferenciar reaes provocadas por fatores antropognicos, daquelas provenientes de fatores ambientais naturais, como pH, temperatura, luminosidade, etc. Para isso fundamental que a metodologia seja padronizada e que as reas impactadas e a rea controle (background) apresentem caractersticas ambientais o mais semelhantes possvel.

2.1. Metabolismo e a Bioindicao

O metabolismo celular ocorre seguindo alguns princpios: altamente econmico; possui propriedades autoreguladoras; ligado a estruturas subcelulares, supracelulares e estrutura molecular; organizado dentro de uma hierarquia estrutural e funcional. Por que ele importante ? Ele disponibiliza estruturas altamente energticas, como o ATP; disponibiliza estruturas redutoras, como o NADPH+, H+ ; disponibiliza elementos intermedirios, como mononucleotdeos, aminocidos, acetil-coenzima A e monossacardeos, usados na sntese de cidos nuclicos, protenas, lipdeos e carboidratos; biosintetiza biomacromolculas com funes especficas, como biocatalisadores, mensageiros, substncias de reserva, elementos estruturais, etc.

com a ajuda das reaes de regulao e controle altamente sintonizadas, que o metabolismo possibilita que as necessidades dos organismos sejam satisfeitas, considerando que existe uma coerncia entre os organismos e o ambiente onde eles vivem. Especialmente os cidos nuclicos (mensageiros de informaes genticas) e as protenas (como enzimas e elementos estruturais) so responsveis pelas atividades metablicas. Por isso, essencial que estas macromolculas trabalhem na velocidade e especificidade corretas. Fatores ambientais e/ou antropognicos adversos podem interferir no funcionamento dessas macromolculas.

O metabolismo regulado por vrias enzimas. Enzimas sensveis podem funcionar como indicadores de sinais (indcios) de alteraes no metabolismo. Alm da quantidade da enzima produzida, os estressores podem influenciar a atividade enzimtica.

Estressores antropognicos podem agir nos nveis molecular e celular, interferindo na organizao, estrutura e composio de biomembranas (alteraes na permeabilidade); na concentrao e atividade de macromleculas (alteraes na concentrao e atividade de enzimas); na produo, incremento ou inibio de substncias, que funcionam como reagentes de proteo ou anti-estresse (prolina, por exemplo); na induo de novo sistema metablico ou alteraes de decurso (processo) de reaes bioqumicas, provocando alteraes na composio celular.

Para se usar sinais de bioindicadores na avaliao de alteraes do estado normal do sistema, se faz necessrio que as oscilaes dos parmetros a serem analisados, sejam conhecidos dentro de um espectro de situao de normalidade. Os bioindicadores devem mostrar reaes proporcionais ou graduais, refletindo o grau de alterao sofrida pelo ambiente. A bioindicao a nvel bioqumico e fisiolgico funciona no reconhecimento precoce do efeito de impactos ambientais. Entretanto importante considerar que normalmente podem ocorrer vrias reaes bioqumicas e fisiolgicas ao mesmo tempo. Abaixo alguns exemplos de reaes que podem ser consideradas como parmetros no monitoramento da qualidade ambiental. A maioria das metodologias foram desenvolvidas em estudos sobre avaliao dos efeitos da poluio atmosfrica na vegetao.

2.1.1. Biomembranas A alterao da permeabilidade de membranas leva a alteraes no transporte e na concentrao de ons inorgnicos e substncias moleculares, que regulam a atividade enzimtica. A maioria das reaes bioqumicas ocorrem em reas limitadas por membranas. Para influenciar reaes bioqumicas e fisiolgicas, o estressor tem que ser capaz de penetrar a estrutura membranar na forma ativa. Com alteraes do balano osmtico ocorre o transporte anormal de gua e ons atravs das membranas. As alteraes e danos subsequentes no metabolismo celular ocorrem como resultado do efeito do poluente ou seus metablitos, como toxina citoplasmtica especfica, sobre as enzimas e intermedirios.

2.1.2. Fotossntese A fotossntese pode reagir muito sensivelmente a alteraes de fatores ambientais. A fotossntese usada como parmetro para comprovar reaes a estressores, especialmente poluio do ar.Vrios autores afirmam que o SO2 provoca alteraes no comportamento da fotossntese, como: alteraes

no-especficas da integridade da membrana; inibio do metabolismo do O2 e do transporte de eltrons do fotossistema II; efeitos mais ou menos especficos de diferentes enzimas so algumas delas.

2.1.2.1. Fluorescncia do Cloroplasto Pigmentos que absorvem luz nos comprimentos entre 400 e 700 nm so mediadores da atividade fotossinttica. Cloroplastos intactos emitem espontaneamente luz, denominada fluorescncia. A propriedade da fluorescncia usada como indicador na avaliao de danos em vegetais submetidos a situao de estresse por poluio atmosfrica. A fluorescncia do cloroplasto est diretamente ligada a processos primrios da fotossntese, por isso a propriedade da emisso de fluorescncia dos cloroplastos tomada como indicador da qualidade ambiental.

2.1.2.2. Assimilao de CO2 Pode ocorrer a inibio da fixao do CO2, como consequncia da concorrncia entre o CO2 e o SO2-3 pela ligao no centro ativo da enzima ribulosebifosfatocarboxilase. Concentraes elevadas de SO2 inibem a fotossntese em inmeras plantas. Ao mesmo tempo, h um estmulo na produo de enzimas hidrolticas, como protenase e peptidase, responsveis pelo processo de envelhecimento.

2.1.3. Pigmentos Fotossintticos A descolorao de folhas o sinal mais evidente do efeito de imisses cidas na vegetao. Tais alteraes podem ser analisadas cromatograficamente ou com espectrofotmetro (usando extratos com acetona, ou outros solventes, e comprimentos de onda entre 645 e 663 nm). Alteraes no teor de clorofila j foram observadas por vrios autores em lquens e em plantas superiores. Reduo ou incremento no teor de clorofila, degradao de clorofila a e b, incremento no teor de feofitina so reaes observadas como consequncia do efeito de diferentes poluentes, como o SO2, por exemplo. O parmetro clorofila, em conexo com a avaliao do efeito de imisses atmosfricas, problemtico em funo da sua falta de especificidade: ele pode variar a depender do tipo de poluente, da espcie vegetal, da fase de desenvolvimento do vegetal, da composio atmosfrica, etc. O comportamento clorofila a/b muito utilizado como um ndice de avaliao. Entretanto ele parece ser mais significativo com poluentes em concentraes muito elevadas.

2.1.4. Protenas, Aminocidos, Poliaminas A determinao da concentrao de protenas solveis na avaliao da ao de estressores na vegetao um parmetro que pode funcionar na bioindicao. Como motivos das alteraes na concentrao das protenas, podem ser citados a reduo na sntese de novo e/ou aumento na quebra de aminocidos. A identificao de alteraes na concentrao de protenas de estresse e seus metablitos uma possibilidade de se reconhecer precocemente danos nos vegetais. Os vegetais podem reagir, produzindo novos tipos de protenas, como resultado de expresso gentica diferenciada. Plantas superiores acumulam o aminocido prolina em situao de estresse (estresse hdrico, SO 2, salinidade, etc). A prolina uma "substncia compatvel", ou seja, substncia osmoticamente ativa, que mesmo em concentraes elevadas, no influencia na atividade de enzimas citoplasmticas, tendo por isso uma reao de proteo. A alanina acumuladora e tem sua produo elevada, em alguns vegetais, em situao de estresse. Poliaminas como a putrecina, espermidina e espermina so usadas na avaliao do efeito de oznio. Putrecina, em

situao de estresse, se acumula. Esta estrutura fortemente bsica deve ter alguma funo protetora que leva estabilizao de determinadas macromolculas, equilbrio inico e regulao de pH.

2.1.5. Fitormnios Os fitormnios participam de processos de envelhecimento, mas tambm de reaes resultantes da ao de estressores antrpicos. cido abscsico um fator de envelhecimento tpico, que tem sua concentrao aumentada em situaes de seca, salinidade, estresse osmtico, deficincia nutricional, etc. Etileno outro hormnio que alm de participar dos processos de amadurecimento e envelhecimento, como queda de folhas e frutos, possivelmente sofre influncia de estressores antrpicos, uma vez que j se observou aumento na sua concentrao em situao de estresse. Tratamentos com etileno induzem a sintomas de estresse. J foi observado que estressores provocam aumento de etileno e cido abscsico e queda na concentrao de citoquinina. A relao entre estresse e metabolismo hormonal no bem conhecida. Reconhece-se entretanto que plantas submetidas a estresse mostram sintomas de envelhecimento precoce.

2.1.6. Enzimas Algumas enzimas funcionam como indicadoras da influncia de estressores antropognicos. Reaes bioqumicas e fisiolgicas a estressores podem ser monitoradas atravs de alteraes da atividade de determinadas enzimas, como a peroxidase, glucosidase e amilase. Normalmente estressores em baixas concentraes estimulam a atividade enzimtica. Em elevadas concentraes ocorre a inibio da atividade. Perturbaes no metabolismo a nvel enzimtico provocam, entre outras reaes, reduo no teor de protenas, como consequncia da reduo na sua sntese ou na decomposio acentuada. Como resultado tem-se uma liberao reforada de aminocidos. Neste caso h um acrscimo das enzimas responsveis pelo metabolismo dos aminocidos. Os aminocidos so rapidamante convertidos em prolina ou glutamina. Alteraes na atividade enzimtica dependem da concentrao do estressor e das condies ambientais locais.

2.1.7. Acmulo de Substncias Txicas - As substncias txicas absorvidas pelos organismos podem ser transformadas (oznio), incorporadas (NOx, SO2) ou acumuladas (metais pesados) no decorrer do metabolismo. Em situao de normalidade a maioria dessas substncias ocorrem em concentraes bem baixas, como os micronutrientes (metais pesados) ou o cloro. O acmulo delas pode ser usado como um indicador de poluio ambiental. A determinao de enzimas (como a esterase, malatodehidrogenase e peroxidase) ou outro componente bioqumico pode funcionar como parmetro na avaliao da influncia de metais pesados no estresse vegetal.

2.1.8. Metabolismo Mineral - O estado nutricional do vegetal pode influenciar direta ou indiretamente o efeito de estressores. Vegetais bem nutridos so menos sensveis ao estresse provocado pelo SO2, por exemplo. Dos sais que provocam estresse (como o NaCl, CaCl2 e MgCl2), o cloreto deve receber a maior importncia, uma vez que o on Cl- interfere significativamente no transcurso de processos fisiolgicos. O estado de deficincia mineral pode ser induzido tambm atravs de alteraes da atividade de determinadas enzimas. Estas alteraes podem ser, por sua vez, resultantes da ao de estressores.

Uma vez que o estado nutricional do vegetal interfere na sua resposta ao estressor, a influncia que substratos padronizados e solues nutritivas usados nas metodologias de biomonitoramento do ar podem exercer nas respostas dos vegetais, no pode ser negligenciada no momento da interpretao dos resultados. Evidentemente que se faz necessrio padronizar o experimento. Usar o substrato proveniente de cada ponto de observao traria dificuldades de interpretao ainda maiores.

2.1.9. Carboidratos Alteraes na concentrao de carboidratos j foram observadas em programas de avaliao de impacto ambiental, especialmente no estudo do efeito de estresse provocado pelo SO2. Concentraes mais elevadas de carboidratos devem ser vistas, em princpio, como um mecanismo protetor do metabolismo vegetal. Por isso, a determinao de carboidratos, mesmo que na forma de carboidratos totais, tem sido empregada como parmetro no biomonitoramento da qualidade ambiental.

2.1.10. Lipdeos - Em situao de poluio atmosfrica, observou-se alteraes na composio de cidos gordos. Especialmente a miristina e a palmitina apresentaram reduo na concentrao em Taxus baccata, enquanto que cidos gordos insaturados, como cido linoleico e cido linolnico aumentaram significativamente suas concentraes. Em folhas de tabaco foi observado aumento na concentrao de cido linolnico como fator de estresse.

3.

Estrutura Morfolgica e a Bioindicao

Na histria da bioindicao, reaes morfolgicas de vegetais a influncias antrpicas foram reconhecidas precocemente. J em meados do sculo XIX, na regio belgo-inglesa, prximo a uma fbrica de soda, foram observados danos provocados pelas emisses. Em 1850 j existiam publicaes na Europa sobre danos em pinheiros provocados por emisses atmosfricas. Atualmente danos visveis provocados por emisses so conhecidos e reconhecidos em toda cidade industrial, a no ser que medidas de controle das emisses j tenham sido adotadas.

Alteraes morfolgicas em plantas superiores so sintomas usados na bioindicao, em funo da facilidade do trabalho e a descomplicao na identificao e avaliao das alteraes. No so necessrios laboratrios especializados. Diferentes indicadores morfolgicos para diferentes fatores de estresse j foram testados, de forma que possvel se realizar uma indicao a longo ou curto prazos, com concentraes baixas ou elevadas de poluentes.

Muitos trabalhos j foram e continuam a ser realizados, se concentrando na padronizao de indicadores, na definio da infra-estrutura necessria ao desenvolvimento da pesquisa, e na avaliao dos resultados sobre o efeito da combinao de diferentes poluentes e a influncia de

fatores paralelos. Em alguns pases os indicadores morfolgicos so usados em uma rede de monitoramento nacional. Na Holanda, esta rede funciona desde 1969; no Japo, desde 1973, na Alemanha, desde incio dos anos 70. Na Califrnia, j em 1955, foi realizado um programa que buscava a comprovao de danos provocados por smog fotoqumico em pomares, rvores frutferas e ervas daninhas.

3.1. Alteraes Morfolgicas usadas na Bioindicao

1.

Alteraes Macroscpicas

3.1.1.1. Clorose A descolorao de folhas considerada como reao no-especfica a diferentes estressores: colorao amarelada nas bordas ou em determinada regio da folha (normalmente provocada por emisses contendo cloro); colorao avermelhada, em forma de manchas (comumente associada a emisses ricas em SO2); colorao amarronzada ou bronzeada (caracterizando um estgio anterior a apresentao de necroses); colorao prateada (facilmente atribuda a presena de oznio). A descolorao de musgos de troncos de rvores ou lquens, que ficam expostos no caule de rvores, muito usada como parmetro no monitoramento ativo da poluio do ar.

3.1.1.2. Necrose A avaliao quantitativa da necrose feita estimando-se o percentual da rea foliar atingida. O percentual do tecido morto usado como um indicador de danos. s vezes a necrose bem especfica a um determinado poluente. Necrose em forma de pontos ou de manchas observada como reao de bioindicadores como o tabaco, variedade Bel-W3; Urtica urens, Begonia semperflorens ePhaseolus vulgaris ao oznio. Podem ser diferenciados os seguintes tipos de necrose: necrose intercostal, quando se refere morte do tecido entre as nervuras, frequentemente provocada pela presena de SO2; necrose lateral, bem caracterstica nos bordos das folhas; necrose acicular, com ocorrncia frequente em pinheiros, que apresentam necroses marrom escuro nas extremidades. Este dano visvel associado presena de SO2. Necrose em frutos, como consequncia de estresse provocado pela presena de SO2, tambm j foi observada. Antes da necrose se manifestar, normalmente se observa uma descolorao das folhas para verde escuro, quando o agente estressor o SO2; em forma de manchas com brilho metlico, quando o estressor o oznio. Os sais de cloro provocam a clorose antes da necrose.

3.1.1.3. Queda Foliar Geralmente ocorre aps o aparecimento de necrose ou clorose. A queda foliar significa uma limitao da rea de assimilao, inibindo o crescimento. A idade da folha pode ser determinada, marcando-se a folha e esta sendo observada periodicamente.

3.1.1.4. Alteraes de rgos - Forma anormal de folhas aps radiao ou outro estresse; reduo ou aumento da configurao das flores, alterao dos rgos reprodutivos, mudana de sexo e outras anomalias, posio e nmero de galhos, forma da copa, crescimento foliar e radicular anormais, baixa na taxa de fertilidade e reduo no desenvolvimento de plen, so algumas das reaes a estressores j observadas. Geralmente as alteraes no so especficas a determinado poluente, ou, existe dificuldade em se associar o efeito a um poluente especfico, quando no se tratar de experimentos controlados. Alongamento de acculas em pinheiros em funo de compostos nitrosos (proximidade a fbrica de fertilizante, por exemplo), bem como encurtamento provocado por SO2, j foram observados. Reduo do tamanho da folha em regies submetidas a emisses industriais cidas comumente reportado em programas de biomonitoramento do ar.

3.1.2. Alteraes Microscpicas - A utilizao de alteraes ao nvel anatomo-citolgico na indicao precoce de estresse ambiental no tem sido muito bem sucedida. Na maioria das vezes as alteraes microscpicas apareceram ao mesmo tempo que as macroscpicas, que so mais facilmente estudadas. Por isso alteraes estruturais microscpicas quase no so usadas na bioindicao. A anatomia, entretanto, contribuiu no esclarecimento do processo da formao de necroses, e possibilita reconhecer estruturas morfolgicas que podem ser usadas como indicadoras de reao do vegetal a situao de estresse. Alguns exemplos so: alteraes no tamanho da clula, como a reduo no tamanho das clulas da epiderme foliar; alteraes de estruturas subcelulares, como a tumefao de tilacides, em consequncia de estresse provocado pelo SO2; destruio do sistema de membranas do cloroplasto; formao de estruturas cristalinas no cloroplasto, a exemplo de feijoeiros expostos a emisses ricas em compostos clorados; granulao do plasma e liquefao de cloroplastos em rvores estressadas por imisses ricas em SO2 e Cl; solubilizao do plasma da parede celular em consequncia da ao de cidos como o SO2; alterao do grau xeromrfico foliar, resultando na alterao do nmero de estmatos, espessura cuticular, plos, espessura foliar, grau de suculncia (relao peso fresco/peso seco) e entre outros exemplos a estrutura da madeira, como o desaparecimento do anel anual so caractersticas que podem ser empregadas na avaliao da qualidade ambiental.

4.

Problemas na Avaliao de Alteraes Morfolgicas

Existem algumas especificidades inerentes ao vegetal que podem dificultar o uso de alteraes morfolgicas como parmetro na bioindicao da qualidade ambiental. A disponibilidade de pessoal experiente pode reduzir os riscos de se atribuir erradamente certas caractersticas "normais" a efeitos de aes antropognicas. importante distinguir entre influncias climticas, do solo, estgio de desenvolvimento, estgio nutricional, influncia da estao do ano, etc, de influncias antropognicas. Esta preocupao tem validade no somente quando se tratar da observao de alteraes morfolgicas, mas qualquer outro tipo de resposta do

biomonitor/bioindicador que esteja sendo observada. Para que as informaes fornecidas pelos biomonitores sejam realmente confiveis e conclusivas, se faz necessrio excluir a possibilidade de que tais respostas sejam provenientes de alteraes "normais" frente ao comportamento de fatores ambientais. Uma srie de fatores locais podem provocar sintomas semelhantes queles provocados por estressores antropognicos. Deve se considerar, por exemplo, que a ocorrncia de pragas e doenas podem provocar tais sintomas, a no ser que a influncia antropognica tenha alterado a elasticidade do sistema, facilitando a ocorrncia de pragas e doenas. Somente informaes sobre o histrico da rea em avaliao pode esclarecer esta situao.

Existe uma sensibilidade diferenciada de alguns vegetais a depender da idade (estgio de desenvolvimento) do vegetal: o rabanete mais sensvel ao SO2 com folhas ainda jovens. Na fase mais adulta o efeito do SO2 reduzido a 12%. Cereais, ao contrrio, so mais sensveis quando mais velhos. O perodo do dia e a poca do ano exercem influncia na intensidade do metabolismo, especialmente quando se tratar do efeito de SO2. Durante o dia as folhas so mais sensveis. Pinheiros mostram-se mais sensveis a emisses atmosfricas durante a primavera e vero do que no outono e inverno. Existem diferenas individuais e predisposio, aqui importante a realizao de testes que assegurem o resultado intencionado. Pode acontecer que o bioindicador se adapte ao estressor e com isso apresente uma falsificao nos resultados. Dai a importncia de se usar vrios indivduos nos experimentos.

A diversidade de fatores que podem influenciar as respostas dos vegetais deixa claro que no possvel concluses absolutamente quantitativas em trabalhos que abordem aspectos morfolgicos de respostas a estressores. Mais importante do que a descorberta de novos indicadores e novos sintomas a padronizao, que possibilita a comparao dos resultados e a reprodutibilidade do experimento. Mais importante do que a exatido do indicador a confiabilidade, ou seja, uma avaliao crtica da possibilidade de erros. 5. Biomonitoramento da Poluio do Ar na Bahia

No final de 1995, foi iniciado um Programa de Biomonitoramento do Ar na regio do Plo Petroqumico de Camaari-Ba (PPC), uma cooperao entre a Universidade Federal da Bahia e a CETREL S.A., Empresa de Proteo Ambiental responsvel pelo monitoramento ambiental da regio industrial do Plo Petroqumico de Camaari. Hortalias, foram cultivadas em casa de vegetao do Instituto de Biologia e expostas nas estaes de monitoramento do ar, seguindo metodologias usadas na Europa, especialmente na Alemanha. O musgo Sphagnum sp, padronizado internacionalmente, foi utilizado para "validar" os resultados. O objetivo principal do monitoramento realizado durante um ano foi analisar o acmulo de metais pesados na vegetao. Os dados obtidos com os biomonitores foram compatveis com os dados provenientes das anlises fsicoqumicas, sendo que os vegetais, especialmente oSphagnum sp, acumularam concentraes consideravelmente mais elevadas do que as medies fsico-qumicas. Entre os metais foram analisados o cobre e o arsnio, que mostraram concentraes mais elevadas nas estaes mais prximas de uma indstria beneficiadora de cobre. Alm da reduo da biomassa observada especialmente no coentro (Coriandrum sativum) e no capim-santo (Cymbopongon citratus), tambm foram observados sintomas, especialmente no hortel (Plectranthus

amboinicus), como alteraes na concentrao de amido e necroses escurecidas nas bordas das folhas e prateadas entre as nervuras, tidos na literatura cientfica como indicadores de impactos provocados pelo SO2 e oznio. Outros sintomas, que podem ser considerados indicadores da ao do SO2e oznio so observados na vegetao que ocorre naturalmente na regio, especialmente aquela prxima indstria beneficiadora de cobre. Mais recentemente respostas fisiolgicas e bioqumicas de Phaseolus vulgaris (feijo carioquinha) foram empregadas na avaliao dos efeitos das emisses do PPC na vegetao (Fernandes, 1999). Atualmente, a Mangifera indica (mangueira) vem sendo utilizada no biomonitoramento passivo das emisses do PPC. A tabela 01 mostra informaes fornecidas por bioindicadores/biomonitores sobre efeitos das emisses atmosfricas na vegetao do PPC.

Tabela 01: Informaes sobre efeitos das emisses atmosfricas do Plo Petroqumico de Camaari-BA (PPC) fornecidas por Bioindicadores/Biomonitores

Bioindicador/ Biomonitor

Monitora-mento

Concluses

Fontes

Sphagnum sp. eCoriandrum sativum Ativo

acumulo de arsnio proporcional ao inputatmosfrico reduo na taxa de desenvolvimento Lima et al. (1997a)

Cymbopongon citratus

Ativo

vegetal relacionada ao acmulo de cobre o biomonitor acumula sensivelmente mais

Lima et al. (1997b)

Sphagnum sp.

Ativo

cobre, nquel e chumbo do que os filtros deHi-Vol as concentraes de cobre analisadas foram

Lima e Santana (1998)

Cymbopongon citratus Ativo

evidentemente mais elevadas nas proximidades da indstria beneficiadora de cobre

Klumpp, Domingos e Lima (1998)

Mangifera indica Passivo

acmulo de protenas solveis totais e prolina, degradao de clorofilas e carotenides Almeida et al. (1998)

Plectranthus amboinicus Ativo

alterao no teor de amido em folhas Oliveira et al. (1998)

Phaseolus vulgaris

Ativo

Alteraes no comportamento fisiolgico e bioqumico (rea foliar, catalase, cido

ascrbico, protenas solveis totais concentrao de S e N, amido)

Fernandes (1999)

6. Bibliografia Consultada

ARNDT, U; Nobel, W; Schweizer, B (1987): Bioindikatoren: Mglichkeiten, Grenzen und neue Erkenntnisse, Ulmer.

ELLENBERG, H et al. (1991): Biological Monitoring Signal from the environment. Vieweg

MARKERT, B (1993): Plants as Biomonitors: indicators for heavy metals in the terrestrial environment. VHC

SCHUBERT, R (1991): Bioindikation in terrestrischen kosystemen. Fischer Verlag

STEUBING, L. (1982): Problems of Bioindication and the necessity of standardization. In: Steubing L. & Jger (eds): Monitoring of Air Pollutants by plants. Junk publishers

http://www.ecoterrabrasil.com.br/home/index.php?pg=temas&tipo=temas&cd=89# , maio 2000

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