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Factores fsicos

Temperatura Desecacin Radiaciones Ondas sonoras Presin hidrosttica Presin osmtica pH

Agentes qumicos
Desinfectantes y antispticos Quimioterpicos de sntesis Antibiticos Metales pesados Halogenuros

Temperatura
Afecta a la velocidad de crecimiento y, por lo tanto al tiempo de generacin, g. Cada bacteria muestra una curva de crecimiento en funcin de la temperatura

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LOS MICROORGANISMOS

Temperatura ptima de crecimiento


Escherichia coli 5 28 37 55
0.1 ml a agar nutritivo

Incubar por 24 h.

Crecimiento

28

37

55

MICROORGANISMOS PSICRFILOS
Crecen entre -5 a 5C. A)Las psicrfilas obligadas tienen temperatura ptima entre 15-18C: Flavobacterium.
Psicrfilo extremo: tiene su ptimo de crecimiento en 4C, y es incapaz de crecer a 14C (se muere de calor!): Polaromonas vacuolata, recientemente aislada en aguas heladas de la Antrtida

B) Las psicrfilas facultativas o psicrotolerantes (tambin llamadas psicrotrofas) soportan temperaturas de refrigeracin, presentan temperatura ptima en torno a los 20-30C y mximas a los 35C.

Adaptaciones bioqumicas en medios fros


Enzimas ms resistentes al fro Sistemas de transporte adaptados a bajas temperaturas; Los fosfolpidos de la membrana celular aumentan la proporcin de cidos grasos insaturados, ello supone que la membrana sigue en su estado semifluido, evitndose su congelacin.

MICROORGANISMOS MESFILOS

Su temperatura ptima de crecimiento es entre 25-40C y mximas entre 35 y 47C. La mayor parte de las Eubacterias pertenecen a esta categora.

MICROORGANISMOS TERMFILOS
Tienen temperatura ptima de crecimiento entre 50-75C y mxima entre 80 y 113C. Las Hipertermfilas o termfilas extremas presentan ptimos cercanos a los 100C, y pertenecen al dominio Archaea.

Los hbitats naturales


Fuentes termales volcnicas terrestres Fuentes termales submarinas: fumarolas hidrotermales asociados a las grandes dorsales ocenicas Los materiales en fermentacin como composta y ensilados pueden alcanzar 65C.

Thermus aquaticus
Brock descubri la eubacteria termfila, en el Parque Nacional de Yellowstone, en EE UU, a ms de 100oC.
De ella se extrae la ADN polimerasa termorresistente (Taq) empleada en la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) automatizada. Pyrococcus furiosus, es una arqueobacteria hipertermfila, que crece muy bien a 100C.

Los hipertermfilos
Con temperatura ptima de crecimiento por encima de los 80C son incapaces de crecer a menos de 37oC: Thermoproteus,

Pyrococcus, Pyrodictium

La arquea Pyrolobus fumarii, habita en las fumarolas hidrotermales submarinas crece a 105C y soporta hasta 113C, y detiene su metabolismo (por fro) a la agradable temperatura de 90C (!!!!!!).

Adaptaciones bioqumicas a altas temperaturas


Enzimas termorresistentes Ribosomas termorresistentes Membranas ricas en cidos grasos saturados, que permiten enlaces hidrofbicos ms fuertes. En Arqueobacterias hipertermfilas los lpidos no tienen steres de cidos grasos con el glicerol, son teres de hidrocarburos unidos al glicerol Algunas bacterias, en vez de la tpica bicapa lpdica, exhiben una monocapa de C40-bifitanil-tetrateres que condicionan una extrema resistencia a agentes ambientales.

Tiempo trmico mortal (TTM)


Transferir 5 ml del medio previamente inoculado (0.5%) a cada tubo, someter a 70C en los tiempos indicados, posteriormente transferir 0.1 ml a una caja de petri con agar nutritivo y observar el crecimiento.

Escherichia coli

10

15

20

25

30

Es el tiempo mnimo requerido para que mueran todas las bacterias de una determinada suspensin a 70C.

Tiempo de reduccin decimal (Valor D)

Punto trmico mortal


Punto trmico mortal (PTM) 55oC 60oC 120oC Especies

Escherichia coli Mycobacterium tuberculosis


Endosporas de especies muy resistentes de Bacillus.

Es la temperatura mnima que mata a todas las bacterias en 10 min.

Punto trmico mortal


0.1 ml a agar nutritivo

Escherichia coli

37

50

60

70

80

92

Incubar por 24 h.

Transferir 5 ml del caldo previamente inoculado (0.5%) con el microorganismo de prueba, a cada tubo, someter a la temperatura indicada por 10 min, posteriormente transferir 0.1 ml a una caja de petri con agar nutritivo y observar el crecimiento.

La inactivacin por calor


Microorganismo
Clulas vegetativas, de bacterias, levaduras y mohos Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium tuberculosis Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis La mayora de esporas de bacterias patgenas esporas del patgeno Clostridium botulinum esporas de Clostridium y Bacillus esporas de Clostridium y Bacillus
o

condiciones
80 C , 58oC , 59oC , 65oC , 60oC , 100oC , 100oC , 100oC , 120oC , 5-10 min 30 min 20 min 2 min 60 min pocos min 5,5 horas muchas horas 15 minutos

Hay desnaturalizacin de protenas y a la fusin de lpidos de membrana, se rompen muchos enlaces dbiles, sobre todo los puentes de hidrgeno entre grupos -C=O y H2-N-. Estos enlaces se rompen ms fcilmente en atmsfera saturada de vapor de agua, debido a que las molculas de agua pueden desplazar a los puentes de hidrgeno

Tindalizacin
Nombre en honor de John Tyndall Es un mtodo que consiste en someter el material a varios ciclos (normalmente 3 4) de dos fases sucesivas cada uno: 1) En la primera fase el material se calienta a una temperatura entre 50 y 100C, durante 1 2 horas 2) En la segunda fase el material se incuba en una estufa, a 30-37C durante 24 horas.

Pasteurizacin
En honor a Louis Pasteur, que la introdujo en los aos 1860.
Es un mtodo que consiste en tratar los fluidos a 63oC durante 30 min, con un enfriamiento a 5C y envasado rpido

Pasteurizacin instantnea
Conocida por sus siglas en ingls HTST, de high temperature-short time se logra calentando a 72C durante slo 15 segundos, enfriamiento a 5C y envasado inmediato.
El nmero de bacterias viables desciende un 9799%. Los potenciales patgenos que pueda llevar la leche (Brucella, Salmonella, Mycobacterium tuberculosis, Streptococcus) son eliminados fcilmente.

organismos termodricos

Son los organismos que resisten las condiciones de pasteurizacin

Y los organismos termorresistentes cuales son?

PASTEURIZACIN DE LECHE BRONCA


Leche bronca (Lb)

someter a 65 x 30 (80C X 5)

someter a 4 x 5

leche pasteur izada

Recuento de bacterias coliformes Recuento de bacterias mesoflicas aerobias Recuento de organismos termodricos

RECUENTO DE ORGANISMOS COLIFORMES

Colonias de 1-2 mm de dimetro, de color rosa mexicano por fermentacin de lactosa y un precipitado del mismo color alrededor de la colonia

RECUENTO DE MESOFLICOS AEROBIOS


Leche bronca (Lb) 10-2 y 10-4 Leche pasteurizada (Lp) sin diluir y 10-1 Leche alpura sin diluir y 10-1

Transferir 1 ml por duplicado y agregar 15 ml de agar cuenta estndar

Incubar a 37C x 24-48 h

Conservacin de microorganismos utilizando la temperatura

Tarea: Congelacin Liofilizacin

EFECTO DEL PH
Neutrfilas, si crecen de modo ptimo en torno a la neutralidad (entre pH 6 y 8). Acidfilas, si crecen normalmente entre pH 0 y 6. Alcalfilas, si crecen entre pH 8 y pH 14.
Escherichia coli puede crecer bien entre pH 6 y pH 8, pero su pH interno es siempre 7.6 o muy cercano a ese valor

Bacterias oxidantes del azufre

aislada de una planta de tratamiento de aguas residuales, en su interior se observan abundantes grnulos de azufre b) Bacterias oxidantes del azufre en un arroyito, abundante presencia de azufre elemental en las precipitaciones blancas

BACTERIAS DEL CIDO ACTICO


Son bacterias que pertenecen a las Proteobacterias del grupo Alfa y a los gneros: Gluconobacter Acetobacter Realizan la oxidacin incompleta del etanol y de azcares produciendo:

Acido actico Resisten valores de pH menor a 5

Hbitat de las Crenarqueota

Crenarqueota Hipertermfilo

alcalfilas obligadas
Tienen ptimos de pH en torno a 10-11.
Bacillus alcalophilus , cuyo pH interno es de 9. Su hbitat tpico son suelos carbonatados y lagunas alcalinas Natronobacterim gregoryi, Estos organismos tienen gran inters industrial, de ellos se obtienen enzimas hidrolticas como proteasas y lipasas que se usan como aditivos en detergentes

Efecto de la presin osmtica

30 %

ACTIVIDAD DE AGUA

Efecto de la presin osmtica


A) En medios hipotnicos (con una aw>aw del citoplasma) es la pared celular la que ejerce todo el papel: su rigidez se opone a la entrada de agua, y por lo tanto, evita que la membrana citoplsmica tienda a sufrir una presin de turgencia excesiva. B) En medios hipertnicos (cuando la aw del exterior es menor que la del citoplasma). Las bacterias poseen mecanismos compensatorios por los que tienden a aumentar la osmolaridad interior por encima de la del medio (para garantizar la entrada de agua del ambiente y mantener su metabolismo), aumentando la concentracin de un soluto compatible, lo cual se puede lograr por varios posibles mecanismos:

MECANISMOS
Bomba de iones al antiporte K+/H+. interior:potasio (K+), por un sistema de

Molcula orgnica osmticamente activa: el glutamato, la glutamina y la trehalosa Sustancias osmoprotectoras: Prolina: Salmonella typhimurium y Staphylococcus aureus Betana (glicnbetana), un derivado trimetilado de la glicocola: Cianobacterias y en algunas Gram-positivas. Colina :Escherichia coli Ectona: Enterobacterias.

Los Osmfilos
son microorganismos especializados que viven en medios hipertnicos. Entre los osmfilos existen dos grupos: los sacarfilos y los halfilos.
Uno de los mejores ejemplos de microorganismos sacarfilos no es una bacteria, sino las levaduras, que viven en jugos vegetales, nctares, zumos, etc. Utilizan como solutos compatibles polioles como el sorbitol, el ribitol.

Los Halfilos
Halfilos moderados: suelen ser bacterias marinas (ej.: Vibrio fischeri) que viven en 3.5% de NaCl, y que ven inhibido su crecimiento a concentraciones mayores o menores de sales con una aw equivalente a la de agua de mar, as como concentraciones determinadas de iones Na+. Halfilos extremos (hiperhalfilos), representados paradigmticamente por las arqueas del gnero Halobacterium, que viven en concentraciones saturantes de sales (salitrales, lagunas salinas). Usan como soluto compatible el K+, concentrndolo a partir del medio donde viven, hasta que el citoplasma queda prcticamente saturado con l (4 a 7 M). Halotolerantes (como por ejemplo, Staphylococcus aureus), pero la inmensa mayora de los procariotas viven a valores de actividad de agua de 0.98

EFECTO DE LAS RADIACIONES ELECTROMAGNTICAS


Radiacin electromagntica radiacin infrarroja (IR) radiacin visible ultravioleta (UV) rayos X rayos rayos csmicos (longitudes de onda, en nm) 800-106 380-800 13,6-380 0.14-13.6 0.001-0.14 < 0.001

La Radioactividad es una reaccin nuclear de descomposicin espontnea, es decir un nclido inestable se descompone en otro ms estable emitiendo una radiacin

(2 P y 2 N)

(e-)

RADIACIONES ELECTROMAGNTICAS


Neutrones
Papel Cuerpo Humano Acero Plomo Cemento

FOTOPRODUCTOS DEL ADN OCASIONADOS POR LA LUZ UV


Los fotoproductos generados por la luz UV en el ADN derivan principalmente de alteraciones en las bases pirimdIcas (citosina, timina):
a) b) Dmeros de pirimidina: anillo ciclobutano Fotoproducto de la endospora: 5-timinil-5,6-dihidrotimina

c)

Hidratos de pirimidina

EFECTOS DE LAS ONDAS SONORAS


Las ondas sonoras audibles para los humanos poseen un rango de frecuencias entre los 9 kilociclos y los 20 kilociclos/segundo. las ondas supersnicas (hasta los 200 Kc/seg) las ultrasnicas (desde 200 hasta 2000 Kc/seg).
Efecto sobre las clulas : Desintegracin

Mecanismo de accin
El paso del sonido a travs de un lquido produce cambios de presin alternantes, por los sucesivos frentes de ondas, que a grandes frecuencias originan cavidades (burbujas de gases disueltos) de unos 10 m de dimetro (fenmeno de cavitacin). Dichas cavidades van aumentando de tamao y terminan colapsando violentamente, dando lugar a enormes presiones locales (de hasta 1000 atmsferas o 10 Tm/cm2). Efecto en la clula Desintegracin Se forman perxidos Hay despolimerizacin de macromolculas Fraccionamiento del ADN.

USOS
Son ms sensibles las Gram-negativas y ms resistentes las Gram-positivas. Uso en el laboratorio de de los supra- y ultrasonidos: sonicacin o disrupcin ultrasnica de clulas para obtener extractos celulares en un aparato llamado generador de ultrasonidos que opera en un rango de frecuencias desde 9 hasta 100 Kc/seg.

EFECTO DE LA PRESION HIDROSTATICA


La mayor parte de las especies bacterianas de hbitats continentales no pueden crecer cuando son sometidas a altas presiones de 600 Kg/cm2
Accin sobre las clulas disminucin de la capacidad de las enzimas de unirse a sus respectivos sustratos interferencia en la divisin celular: las bacterias se alargan, se filamentan, pero sin produccin de tabique transversal.

BACTERIAS QUE SOPORTAN ALTAS PRESIONES


Bacterias barotolerantes Crecen a la presin atmosfrica, pero aguantan hasta unas 500 atmsferas. Su hbitat son las aguas ocenicas, entre los 2000 y los 4000 metros de profundidad. Bacterias barfilas Crecen ptimamente a ms de 400 atmsferas. Y se subdividen en barfilas moderadas (facultativas) y barfilas extremas (obligadas): Las barfilas moderadas pueden crecer a presin atmosfrica, aunque su ptimo est a unas 400 atmsferas. Habitan profundidades entre los 5000 y 7000 metros.

Las barfilas extremas


Presentan ptimos de crecimiento a muy altas presiones (por encima de 600-700 atmsferas), y son incapaces de crecer a presin atmosfrica. Se han aislado a ms de 10000 metros de profundidad a 2-3oC. Gneros:

usos
Aplicacin prctica de las altas presiones a bacterias barosensibles: La llamada prensa de French es un aparato de laboratorio que permite aplicar grandes presiones y brusca descompresiones, lo que logra la rotura mecnica de las bacterias, con objeto (al igual que la sonicacin) de obtener extractos libres de clulas.

ANTISPTICOS

Desinfectantes y esterilizantes

APLICACIONES INDUSTRIALES DE LOS DESINFECTANTES