HOMOGENIZACION DE MUESTRAS DE ALIMENTOS PNT-AL-001 Basado en el Bacterial Analytical Manual (FDA, 2003) 1.

Definicin: Para obtener resultados confiables en un recuento o nmero ms probable es primordial obtener muestras bien homogeneizadas, para ello existen diversos equipos, el ms conocido es el Stomacher, creado en 1971 por Stomacher Colwell, dentro de sus ventajas se encuentran: 1. Se suprime la necesidad de limpiar y guardar los recipientes de la mezcladora. 2. Durante los tiempos normales de funcionamiento (generalmente dos minutos) no se produce aumento de calor, por lo que no se afecta la viabilidad de los microorganismos. 3. Los homogeneizados se pueden guardar en refrigeracin en las bolsas del stomacher para ser utilizadas posteriormente. 4. La intensidad del ruido no es desagradable como el de las mezcladoras mecnicas. Cuando no se cuenta con el Stomacher puede utilizarse un homogenizador o licuadora con una velocidad de hasta 8.000 r.p.m que permita una buena homogeneizacin del producto, sin embargo su desventaja es que para cada muestra se requiere frascos y cuchillas estriles. Dependiendo de la muestras existen consideraciones que deben considerarse, a continuacin se hace una breve descripcin. Para productos secos y duros (por ejemplo frutos secos y granos en general), puede ser necesario picar o triturar la muestra del laboratorio, en este caso para evitar un incremento en la temperatura que pueda destruir los microrganismos no triture por ms de un minuto. Para muestras lquidas no viscosas: antes de realizar la dilucin mezcle por agitacin manual para garantizar que los microrganismos se distribuyan uniformemente. Para productos heterogneos (mezclas de alimentos), el muestreo debera hacerse por componente con relacin a sus proporciones en el producto final. Alimentos con alto contenido de grasa: el uso de un diluyente con la adicin de 1g/l a 10g/l de Tween 80, puede mejorar el proceso de emulsin durante la suspensin. La muestra se puede calentar a temperaturas inferiores a 40C durante 5 minutos para mejorar la homogenizacin de la muestra.

2. Materiales: Homogenizador Pipetas de 1.0 ml de vidrio estriles o pipetas automticas con capacidad de 1 ml (1000 l) Pipeteador Frascos de dilucin con capacidad de 150 mL- 250 ml que contengan 90 o 99 ml de agua de dilucin Tubos tapa rosca de 16 x 150 mm que contengan 9 mL de agua de dilucin Instrumentos para preparar las muestras: cuchillos, tenedores, pinzas, tijeras, cucharas (estriles). 3. Equipos Balanza con sensibilidad 0.1 g 4. Reactivos Agua de dilucin (Agua peptonada-bufferada) 5. Procedimiento

HOMOGENIZACION DE MUESTRAS DE ALIMENTOS PNT-AL-001 Basado en el Bacterial Analytical Manual (FDA, 2003)

El trabajo de las muestras debe iniciarse lo antes posible despus de su recoleccin, sino se puede, se deben mantener en refrigeracin (mximo 4oC) sin exceder de 24 horas. Si la muestra est congelada, descongelarla en el envase original. Nota 1: nunca use horno microondas para la descongelacin de los productos, el mejor mtodo es descongelar en refrigeracin. En muestras lquidas la dilucin 10-1 se prepara midiendo 11 ml de la muestra en un frasco de dilucin que contenga 99 ml del diluyente, sosteniendo la pipeta en un ngulo de 45 grados sobre la parte interior del cuello del frasco (Puede utilizarse 10 g de alimento y 90 ml de agua de dilucin). Esta es la dilucin 10-1 Para muestras slidas pesar 11 g del total de la muestra y llevar a un frasco de dilucin que contenga 99 ml del diluyente, tratando de tomar de la superficie e interior del alimento, para tomar la muestra del alimento utilice utensilios estriles. Tambin pueden usarse 10 g de alimento y 90 mL del agua de dilucin. Guardar una contramuestra para eventuales verificaciones, en condiciones de refrigeracin, congelacin o medio ambiente de acuerdo a las caractersticas de almacenamiento del producto. Agitar el frasco vigorosamente, dejar en reposo de 2 a 5 minutos. Transferir un mililitro de la dilucin 10-1 a un tubo que contenga 9 mL del diluyente para obtener la dilucin 10-2. Con otra pipeta mezclar cuidadosamente la dilucin, pipeteando 10 veces, transferir un mililitro a otro tubo que contenga 9 mL del diluyente para obtener la dilucin 10-3. Repetir estos pasos hasta obtener el nmero de diluciones deseadas, cada dilucin sucesiva disminuir 10 veces la concentracin.

El rango de diluciones preparadas y sembradas puede modificarse en funcin a la cifra de microorganismos esperada, de todos modos siempre debe sembrarse tres diluciones distintas y consecutivas. Nota 2. Tenga en cuenta que hay alimentos que por su textura o composicin absorben rpidamente agua por lo que la homogenizacin se debe hacer en el menor tiempo, ya que si no se tapan las pipetas, ejemplos de estos alimentos son: harina de trigo, condimentos deshidratados, pan. Se pueden hacer diluciones 1/50 0 1/100 para obtener una suspensin que se pueda usar, cuando se hacen diluciones mayores se debe incrementar el nmero de placas inoculadas para distribuir 0.1 g de la muestra cuando se esperan recuentos bajos. Nota 3. Para productos cidos se usa un diluyente con adicin de un indicador de pH para determinar si una vez se ha incorporado la muestra, la dilucin vira a cido, se debe ajustar a la neutralidad usando NaOH 0.1N (esto se verifica por el reversin del indicador de pH).