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ANLISE DE DNA EM ODONTOLOGIA FORENSE

Analysis of DNA in Forensic Dentistry

Grasiele de Sousa Vieira1, Carlos Alberto Pereira Tavares2, Fernanda Capurucho Horta Bouchardet3
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Especialista em Odontologia Legal - PUC Minas. Ps-graduada em Valorao do Dano Corporal - Universidade de Coimbra, Portugal. 2 Doutor em Imunologia pela USP. Professor Titular do Departamento de Bioqumica e Imunologia da UFMG. 3 Doutoranda em Cincias da Sade Universidade de Coimbra Portugal. Especialista em Odontologia Legal USP. Coordenadora do Curso de Especializao em Odontologia Legal PUC Minas.

Trabalho realizado no Departamento de Odontologia da PUC Minas

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Resumo - Apresentar as tcnicas de DNA utilizadas para a identificao humana, realizadas atravs da anlise de saliva e polpa dentria. Procurou-se demonstrar a aplicabilidade do DNA dentro da Odontologia Legal e ilustrar sua importncia, contrapondo os mtodos utilizados para identificao humana. Nesse contexto, este estudo apresenta-se como oportunidade de consolidao de conceitos e contedos fundamentais do DNA aplicados Odontologia Legal, buscando prestar maiores esclarecimentos s pessoas que esto ingressando em seu estudo. Descritores - Identificao humana, Odontologia legal, DNA.
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INTRODUO H mais de uma dcada a tecnologia do DNA foi utilizada pela primeira vez como mtodo de identificao humana no campo forense. A anlise de DNA contribui de forma importantssima nos processos de identificao humana, principalmente nos casos em que as impresses digitais, exames de arcos dentrios e exames antropomtricos so inviveis de serem realizados, devido decomposio, fragmentao, incinerao ou inexistncia de dados comparativos antemortem. Existem anlises do DNA utilizadas para identificao humana odontolegal atravs da saliva e polpa dentria. Para que estas anlises sejam feitas de forma correta e devidamente validadas, inquestionvel a utilizao tanto dos conhecimentos cientficos quanto dos conhecimentos tecnolgicos. Desta forma, neste estudo, so caracterizados protocolos de coleta, preservao, extrao, quantificao e amplificao do DNA; pois os cirurgies dentistas, quando na qualidade de peritos, devem se familiarizar com os conhecimentos tecnolgicos para a anlise de DNA. Desta forma, a identificao humana

deve ser sempre vista como uma das grandes reas de estudo e pesquisa da Odontologia Legal. O presente trabalho buscou prestar maiores esclarecimentos e aplicabilidade do DNA dentro da Odontologia Legal, ilustrando sua importncia e se contrapondo a outros mtodos utilizados para identificao humana. REVISO DA LITERATURA O DNA uma molcula extremamente longa, formada por duas cadeias de polinucleotdeos enrolados de forma helicoidal e ligados transversalmente atravs de pontes de hidrognio. Cada nucleotdeo constitudo por trs unidades bsicas: uma base nitrogenada, uma molcula de acar (desoxirribose) e um grupamento fosfato (PO4). A adenina e a guanina contm dois anis carbnicos, sendo chamadas de purinas; a citosina e a timina so conhecidas como pirimidinas1. A adenina forma pontes com a timina (ligaes de duas pontes de hidrognio); e a guanina com a citosina (ligaes de trs pontes de hidrognio). Para cada nucleotdeo de adenina existe um de timina (A-T), e para cada nucleotdeo de guanina existe um de citosina (G-C), formando duas

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cadeias que so designadas por complementares. Neste caso, as informaes genticas esto armazenadas sob a forma de cidos nuclicos. Os cidos nuclicos foram descobertos em 1869 por Friedrich Miescher e no incio do sculo XX o bioqumico Kossel evidenciou a existncia de dois tipos de cidos nuclicos: o cido desoxirribonuclico (DNA) e o cido ribonu-clico (RNA). O DNA contm o gene enquanto que o RNA serve como agente intermedirio na atividade do gene. O RNA mensageiro (mRNA) transcrito a partir do DNA e traduzido em seqncias de aminocidos que formam as protenas2. O DNA pode ser extrado de amostras de sangue, esfregaos bucais, saliva, osso, dente, tecidos, rgos, fios de cabelo, smen, urina, entre outros materiais biolgicos3. Ele pode ser encontrado nos cromossomos do ncleo (DNA genmico) e nas mitocndrias (DNA mitocondrial). Os cromossomos so filamentos espiralados de cromatina existente no suco nuclear de todas as clulas. Cada cromossomo formado por uma nica molcula de DNA com vrios milhes de pares de bases. A anlise do DNA mitocondrial para fins forenses fica reservada para tecidos antigos como ossos, cabelos, dentes e em grandes desastres (incndios, exploses, queda de avies) nos quais o DNA nuclear j no oferece mais condies de anlise2,4. No entanto no podemos nos esquecer que nem sempre ser possvel a realizao do exame de DNA, devido ao fato das amostras biolgicas estarem contaminadas, degradadas ou em quantidades to pequenas que no possibilitem seu estudo. DNA genmico/mitocondrial

O DNA genmico encontrado no ncleo de cada clula do corpo humano e representa uma fonte de DNA para a maioria das aplicaes forenses. Sua molcula linear. Neste DNA esto localizados os genes, depositrios das informaes genticas responsveis pelas atividades da clula2. Por outro lado, o interesse nos estudos forenses pelo DNA mitocondrial se deve principalmente ao fato deste apresentar resistncia digesto enzimtica devido a sua estrutura circular, sendo desta forma a anlise desse tipo de DNA excepcional no estudo de tecidos antigos e at arqueolgicos, como ossos, dentes e cabelos. Praticamente todo mtDNA de um indivduo apresenta a mesma seqncia, devido o seu carter monoclonal, porm uma condio chamada de heteroplastia pode existir. Isto devido ao fato que uma mesma pessoa pode apresentar mais de um tipo de mtDNA. Logo a anlise de fios de cabelo pode demonstrar resultados diferentes ou ambguos5. sabido que a mitocndria tem um nmero que varia de 100 a 10.000 cpias por clula, permitindo a anlise de material com quantidade limitada e de amostras de DNA parcialmente degradado6. O DNA mitocondrial apresenta caractersticas nicas que o tornam uma fonte de informao para os estudos forenses: (1) possui alta taxa de mutao7 e (2) apresenta herana uniparental. O DNA mitocondrial passado exclusivamente da me para filhos e filhas, permitindo traar a linhagem materna de uma pessoa. A mitocndria paterna quando presente no citoplasma do ovcito rapidamente marcada para ubiquitinao e imediatamente degradada na grande maioria das vezes8,9 (3) a ausncia de recombinao (genoma haplide) permite que as mutaes sejam

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acumuladas de maneira cronolgica (seqencial) na molcula de DNA mitocondrial; (4) o grande nmero de cpias do DNA mitocondrial em cada clula humana facilita sua obteno para as anlises genticas, e finalmente (5) o DNA mitocondrial mais resistente degradao que o DNA nuclear. Anlise Forense do DNA No Brasil, at maro de 2004, tramitavam na Cmara Federal, trinta e um projetos de lei relacionando o papel do exame de DNA para fins de identificao humana. Percebe-se assim a cobrana da sociedade e a preocupao do Estado em respaldar legalmente a utilizao do DNA para tal fim. Destaca-se o Projeto de Lei PL 417/2003, alterando o artigo 1o da lei 10.054 de 07/12/2000, que insere o DNA para a identificao criminal10. A importncia da Odontologia Legal para a identificao humana, principalmente em casos nos quais pouco resta para se proceder a essa identificao (incndios, exploses, corpos em decomposio ou esqueletizados), levou os odontolegistas, a se familiarizarem com as novas tecnologias da biologia molecular. A competncia para a execuo deste tipo de atividade, na rea odontolgica explicitada pela Lei 5.081/66, em seu artigo 6o, que define as competncias do cirurgio-dentista: I - praticar todos os atos pertinentes Odontologia, decorrentes de conhecimentos adquiridos em curso regular ou em cursos de ps-graduao; IV - proceder percia odontolegal em foro civil, criminal, trabalhista e em sede administrativa. Alm disso, a Resoluo CFO 63/200511 regulamentou, atravs do artigo 64, as reas de atuao do profissional especialista em Odontologia Legal, entre elas:

identificao humana e percia em vestgios correlatos, inclusive de manchas ou lquidos oriundos da cavidade bucal ou nela presentes. E a mesma norma diz em seu art. 63, pargrafo nico: A atuao da Odontologia Legal restringe-se a anlise, percia e avaliao de eventos relacionados com a rea de competncia do cirurgio-dentista podendo se as circunstncias o exigir, estender-se a outras reas, se disso depender busca da verdade, no estrito interesse da justia e da administrao. Assim, constata-se que o Odontolegista um profissional que possui um papel fundamental em vrios casos de identificao humana. Este profissional deve se familiarizar com as tcnicas de tipagem de DNA, pois ele no um mero captador e encaminhador de amostras biolgicas, e quando imbudo das funes percias tem competncia de fazer uso da biologia molecular para esse fim12. Nos dias atuais muitos casos de identificao necessitam de uma abordagem multidisciplinar, porque existe a ausncia ou falta de material padro para ser comparado ou por existir a presena de mais de um tipo de evidncia para ser examinada13. Como exemplo deve ser citado o trabalho que apresentou a abordagem multidisciplinar para se identificar um corpo, cuja cabea foi encontrada seis meses aps o achado do corpo. Foram utilizadas tcnicas antropolgicas, odontologia forense, superpo-sio computadorizada (face/crnio) e a investigao de DNA. O sexo foi determinado pelas caractersticas do crnio como tambm pela amelogenina; a idade foi estimada usando medidas de diviso coronal longitudinal; a superposio computadorizada mostrou uma identificao positiva entre as estruturas faciais da vtima e a cabea

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encontrada; o DNA extrado da polpa dental, ossos e tecidos musculares foram comparados ao perfil gentico das supostas filhas e esposa da vtima. A paternidade foi verificada pela anlise de 11 locus14. Amostras biolgicas para anlise de DNA forense em Odontologia O tecido dental reconhecido como uma fonte rica de DNA para uso em casos de identificao humana. As anlises de DNA de polpa e folculo dentrio tambm so utilizadas em outros casos forenses como, por exemplo, para reconstruir os eventos em casos cujo corpo da vtima foi retirado da cena do crime e incinerado15. Os dentes tm uma importncia fundamental na identificao humana por possuir extraordinria resistncia a putrefao e aos efeitos externos (fsicos - traumatismos, calor, qumicos e biolgicos), mais que qualquer outro tecido humano, preservando assim a identidade gentica individual16. Na prtica forense, o dente tem sido priorizado para anlises genticas devido ao fato da cavidade pulpar, que se constitui em arcabouo formado pelas paredes entre esmalte, dentina e cemento propiciar o meio estvel para o DNA; ou seja, seus componentes celulares so providos de eficiente proteo contra agresses do meio ambiente. A polpa dentaria protegida por este arcabouo pode ser recuperada para extrao do DNA com o uso de limas endodonticas. Outra caracterstica importante o fato do elemento dentrio possuir quantidades suficientes de DNA para permitir a identificao humana, sendo a regio do corpo radicular a que permite a maior recuperao de DNA10,17. Outra amostra biolgica de grande importncia dentro do estudo do DNA forense a saliva. A saliva, ou melhor,

o fluido bucal, composto pelo fluido que contm leuccitos que se infiltram atravs da juno dento gengival e clulas epiteliais descamadas. possvel a anlise de DNA em amostras forenses contendo saliva, no se encontrando diferenas na anlise, sendo comparada da saliva recmcoletada10. Por outro lado, a saliva muito usada como fonte de DNA, devido ao fato de ser coletada sem dor e de maneira no invasiva6. As clulas desprendidas da mucosa oral tm se mostrado tambm uma excelente fonte de DNA de alto peso molecular. Devido a isso, numerosos laboratrios de gentica utilizam as amostras de saliva e de escovao da mucosa oral para investigao de vinculo gentico em crianas de curta idade. Outro fato importante que, atravs das clulas presentes na saliva, possvel isolar o DNA para proceder identificao de criminosos; para elucidao de crimes envolvendo casos de violncia fsica, como abuso sexual de adultos e crianas, homicdios dentre outros. Devido ao fato que quando uma mordida executada, sempre acompanhada pela presena de saliva, ou seja, a saliva do agressor depositada na pele da vtima ou objetos durante a mordida, beijo ou a suco. O DNA salivar se mantm estvel podendo ser recuperado at 48-60 horas aps a salivao sobre a pele cadavrica; logicamente esse tempo depender das condies ambientais e da manipulao que tenha sido sofrido. Sobre a vtima viva o DNA da saliva seca pode ser recuperado por mais de 72 horas2,18. Coleta e processamento das amostras de DNA Para se obter o perfil gentico atravs do DNA necessita-se das seguintes etapas: extrao, quantificao,

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amplificao e anlise da regio estudada. O sucesso na anlise do DNA est diretamente relacionado ao tipo de amostra colhida e de como foram preservadas. Desta forma, deve-se prestar bastante ateno quanto tcnica empregada na coleta e documentao do vestgio, bem como sua quantidade e modo como foi manuseado, embalado e preservado devido ao fato de serem pontos crticos para este tipo de exame17. DISCUSSO A odontologia legal de suma importncia nos casos de identificao humana, oferecendo informaes importantes durante a investigao criminal. Freqentemente os odontolegistas utilizam elementos comparativos anteriores morte como, por exemplo, o pronturio odontolgico, radiografias dos dentes e seios da face, para realizar a identificao. Quando se encontram apenas ossadas, estes profissionais conseguem algumas informaes tais como: etnia, idade estimada, descendncia, sexo, estatura do corpo; porm no conseguem nomear o indivduo. Na odontologia legal o exame de DNA pode ser usado juntamente com tcnicas tradicionais, obtendo-se timos resultados para identificar corpos em alto estado de decomposio13. A anlise de DNA contribui de forma importantssima nos processos de identificao humana, principalmente nos casos em que a decomposio, fragmentao, incinerao ou inexistncia de dados comparativos antemortem impossibilitem a utilizao de outros mtodos forenses19. Na qualidade de perito, o odontolegista entra em contato com diferentes tipos de materiais biolgicos, em especial com os dentes e a saliva, que podem possibilitar a extrao do DNA. Quando

a amostra biolgica corretamente coletada e preservada, o DNA pode permanecer por vrios anos em condio de estudo. Para que estas anlises sejam feitas de forma correta e devidamente validadas, o perito deve seguir protocolos de coleta, preservao, extrao, quantificao e amplificao do DNA. No entanto, nem sempre ser possvel a realizao do exame de DNA, devido ao fato das amostras biolgicas poderem estar contaminadas, degradadas ou em quantidades to pequenas que no possibilitem seu estudo. Outro fator que muitas vezes impossibilita a utilizao do exame de DNA o baixo nmero de institutos pblicos capazes de realizar este exame, tendo como conseqncia seu alto custo. Os casos de identificao necessitam da abordagem multidisciplinar. Isso acontece por que existe a ausncia ou falta de material padro para ser comparado ou por existir a presena de mais de um tipo de evidncia para ser examinada13. E para o maior grau de certeza da identificao humana. CONCLUSES Calcado na anlise e na discusso de trabalhos publicados sobre anlise de DNA na identificao humana em Odontologia Legal, este estudo mostrou que: 1. A anlise de DNA contribui de forma importantssima nos processos de identificao humana, principalmente nos casos em que as impresses digitais, exames de arcos dentrios e exames antropomtricos so inviveis de serem realizados; 2. Os odontolegistas, quando na qualidade de peritos, devem se familiarizar com os conhecimentos da anlise do DNA;

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3. H necessidade de aumentar sua utilizao para identificao humana em casos forenses. 4. Em algumas situaes o exame de DNA no pode ser realizado. 5. O ideal sempre a abordagem multidiscipli-nar.
ABSTRACT - This work must by objective present a revision of literature describing the used DNA techniques for the human identification, made to traverse the analysis of saliva and dental pulp. One looked for to demonstrate the applicability of the DNA within the Forensic Dentistry and to illustrate his importance, opposing the methods used for human identification. In that context, this study presents like opportunity of consolidation of concepts and fundamental contents of the applied DNA the Forensic Dentistry, looking for to lend greater elucidations the people than are entering their study. DESCRIPTORS - Human identification, Forensic dentistry, DNA

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