OPTIMIZACIN DE BIOPROCESOS CON MICROORGANISMOS: Un caso de estudio en la produccin de Polihidroxibutirato a partir de lactosuero J. M. Naranjoa, C. A. Cardonab, J.C.

Higuitab
a. Estudiante Doctorado Ingeniera Automtica Universidad Nacional de Colombia sede Manizales (jmnaranjova@gmail.com) b. PhD Profesor Universidad Nacional de Colombia Sede Manizales

INTRODUCCIN La Microbiologa industrial o biotecnologa microbiana es la rama de la microbiologa orientada a la produccin de elementos de inters industrial mediante procesos en los cuales intervenga en algn paso un microorganismo. Aunque existen muchos microorganismos en el mundo, solo un pequeo grupo son de inters industrial pues deben cumplir con ciertas caractersticas como: ser genticamente estables, alta velocidad de crecimiento y cortos tiempos de fermentacin, uso de sustratos de bajo costo, altos rendimientos al producto deseado y fcil extraccin del producto del medio de cultivo. Los procesos que utilizan microorganismos se pueden dividir en tres grandes etapas: pretratamiento materia prima, fermentacin y separacin. En trminos prcticos, las limitantes de las fermentaciones estn dadas por los controles metablicos de los microorganismos y las rutas metablicas que su batera enzimtica les permita realizar. Esto determina el tipo y cantidad de sustrato que es capaz de asimilar, la cantidad de producto obtenido (metabolito o biomasa celular) y las caractersticas del producto para su etapa de separacin (si es un metabolito intra o extracelular, y sus propiedades fisicoqumicas). La ingeniera de procesos es una herramienta de diseo, anlisis y mejora de los procesos industriales. En la etapa de diseo conceptual permite a priori saber qu alternativa tecnolgica es la ms viable desde el punto de vista tcnico, econmico y ambiental. Sin embargo, en procesos biotecnolgicos, especialmente en las biorefineras que utilizan microorganismos, no se ha planteado un anlisis desde el punto de vista de ingeniera de procesos para determinar cules es la alternativa de mejora de proceso ms conveniente de acuerdo a los diferentes contextos econmicos y grado de desarrollo tcnico al que se tiene acceso. Cuando se habla de mejora en la etapa de fermentacin se puede hacer a partir de tres puntos de vista o esferas diferentes (Figura 1):

Esto depende de la capacidad natural que tiene el microorganismo para adaptarse a estas nuevas condiciones y de la batera enzimtica ya sea basal o codificada en su informacin gentica para asimilar diversos sustratos. Entre las ventajas de esta alternativa de mejora estn la estabilidad gentica del microorganismo y el bajo costo investigacin, pero entre sus desventajas estn el tiempo de investigacin que se requiere, productividades no muy altas, las materias primas generalmente se tienen que someter a pretratamientos para que los sustratos sean asimilables. Esfera 2. Microorganismos modificados genticamente: La modificacin gentica es una tcnica que permite darle habilidades a los microorganismos que originalmente no las tena. Puede ser para darle a un microorganismos que produce el producto deseado la capacidad de asimilar un sustrato determinado, o a un microorganismo que asimila un sustrato determinado se le da la capacidad de producir un producto deseado, o para aumentar la productividad de un microorganismo especfico. Todo esto en el marco de buscar un bioproceso consolidado (CBP) donde se disminuyan el nmero de unidades de pretratamiento y se haga una conversin directa del sustrato. Con el organismo modificado, se reexaminan las condiciones del cultivo para lograr nuevamente la mxima productividad. Por lo tanto los programas de desarrollo involucran una continua modificacin gentica del microorganismo, seguida por una readaptacin del medio de cultivo a los nuevos requerimientos, mejoras de las condiciones de operacin y tambin de los procesos de extraccin y purificacin. Entre las ventajas de esta alternativa de mejora estn mayores rendimientos a producto, uso de sustratos ms econmicos, disminucin de pretratamientos para las materias primas (CBP); pero entre sus desventajas estn la inestabilidad gentica y altos costos de investigacin y desarrollo tecnolgico que requiere. Esfera 3. Diseo del bioreactor: Esta esfera analiza cmo desde estrategias de alimentacin, recirculaciones e integracin de procesos por ejemplo la sacarificacin y cofermentacin simultneas, separacin in situ de un metabolito inhibitorio (sistema reaccin separacin) permiten mejorar los procesos fermentativos, los rendimientos y productividades sin necesidad de recurrir a aislamiento y seleccin de microorganismos nativos o a modificaciones genticas. Entre las ventajas de esta alternativa de mejora estn el bajo costo tecnolgico y de investigacin, se pueden lograr sistemas eficientes sin modificaciones genticas de los microorganismos (estabilidad gentica), optimizacin consumo de sustrato, aplicable para microorganismos nativos y modificados genticamente. Sin embargo las restricciones estn dadas por el microorganismo mismo y sus habilidades de conversin. Caso de estudio: Produccin de PHB Uno de los procesos microbiolgicos industriales ms interesantes estudiado en los ltimos aos es la produccin del biopolmero polihidroxibutirato (PHB).

Figura 1. Alternativas de mejora de procesos fermentativos Esfera 1. Microorganismos nativos: Se pueden mejorar los procesos mediante adaptaciones inducidas a nuevos sustratos (preferiblemente de menor precio que los tradicionales para aumentar la viabilidad econmica de los procesos), optimizacin de las condiciones fisicoqumicas de la fermentacin (como temperatura, pH, aireacin, concentracin del medio de cultivo) y pretratamientos a la materia prima para liberar compuestos asimilables por los microorganismos.

El PHB es un biopolister producido generalmente por microorganismos sometidos a estrs nutricional (un exceso en la fuente de carbono y una restriccin en la fuente de nitrgeno, fsforo, azufre u oxgeno) que tiene propiedades fsicas y qumicas tales que lo hacen un sustituto de plsticos sintticos como el polietileno y polipropileno, con la ventaja de ser biodegradable y biocompatible. Sin embargo, sus altos costos de produccin lo hacen en la actualidad poco competitivo. Los costos de produccin del PHB depende principalmente de la materia prima (sustratos utilizados) y del consumo energtico en su proceso de produccin. La produccin a gran escala de PHB actualmente utiliza sustratos como glucosa, fructosa o sacarosa. Esto hace que los costos por sustrato puedan representar hasta el 50% del costo total de produccin del PHB [2]. Una forma de mejorar este proceso y aumentar su viabilidad econmica es la bsqueda de sustratos ms baratos. Diversos microorganismos, ya sean nativos o modificados genticamente, tienen la habilidad de asimilar los residuos agroindustriales. El lactosuero al ser rico en azcares (lactosa, glucosa, galactosa) es un sustrato interesante para la produccin de PHB. Por medio de este estudio se han recopilado datos propios y de la literatura para realizar un anlisis de criterios de seleccin de alternativas tecnolgicas para el aumento de la viabilidad econmica de la produccin de PHB con el uso de sustratos ms econmicos como el lactosuero. METODOLOGA Este trabajo se hace con el fin de analizar desde la ingeniera de procesos criterios de seleccin de alternativas tecnolgicas para optimizacin de procesos fermentativos, en este caso la bsqueda de sustratos ms econmicos. Para ello se estudia un caso especfico: la produccin de PHB. Se realiz una mejora en la produccin de PHB con microorganismos nativos: Bacillus megaterium y Cupuravidus nector, desarrollando la primera esfera de mejora de procesos que es la de adaptacin de microorganismos nativos a sustratos ms econmicos como el lactosuero. Estos resultados se comparan con microorganismos que han sido modificados genticamente para asimilar el lactosuero como sustrato (esfera 2) y con casos en los que los procesos se han mejorado con el diseo de estrategias de fermentacin (esfera 3).
Tipo de mejora

RESULTADOS Y DISCUSIN En la Tabla 1 se pueden ver las comparaciones entre las diferentes esferas para mejorar un proceso fermentativo. En la esfera 1 de mejora de procesos se pudieron adaptar microorganismos nativos a un sustrato ms econmico como el lactosuero para la produccin de PHB. La ventaja que tiene es la estabilidad gentica que tienen los microorganismos nativos, y una vez adaptados el paso a seguir es la bsqueda de las condiciones ptimas de fermentacin como concentracin de sustratos, temperatura, pH, aireacin, y finalmente con el diseo de una estrategia de fermentacin (bioreactor) de tal forma que se optimice el consumo de sustrato y la produccin de PHB (esfera 3). Todo esto sin tener que utilizar la ingeniera gentica, que es una forma muy sofisticada de mejorar los procesos, pero que para pases y regiones de poco desarrollo tecnolgico, es una alternativa costosa, y que no siempre garantiza su escalado a procesos industriales por la inestabilidad gentica de los microorganismos modificados.
REF ERE NCIAS [1] Cardona C. A; Orrego C. E. Avances investigativos en la produccin de biocombustibles. Manizales, Caldas, Colombia, junio de 2009. [2]. Nath, A., Dixit, M., Bandiya, A., Chavda, S., Desai, A.J., 2008. Enhanced PHB production and scale up studies using cheese whey in fed batch culture of Methylobacterium sp. ZP24. Bioresource Technology. 99, 5749 5755. [3]. Anastasia A. Pantazaki, Christos P. Papaneophytou, Agathi G. Pritsa, Maria Liakopoulou-Kyriakides, Dimitrios A. Kyriakidis. Production of polyhydroxyalkanoates from whey by Thermus thermophilus HB8. Process Biochemistry 44 (2009), 847-853. [4]. Martin Koller, Rodolfo Bona, Emo Chiellini, Elizabeth Grillo Fernandes, Predrag Horvat, Christoph Kutscher, Paula Hesse, Gerhart Braunegg. Polyhydroxyalkanoate production from whey by Pseudomonas hydrogenovora. Bioresource Technology 99 (2008) 57495755. [5]. S.Y. Lee, A.P.J. Middelberg, Y.K. Lee. Poly(3-hydroxybutyrate) production from whey using recombinant Escherichia coli. Biotechnology Letters 19 10331035. (1997), [6]. H. H. Wong, S. Y. Lee. Poly-(3-hydroxybutyrate) production from whey by high-density cultivation of recombinant Escherichia coli. Appl Microbiol Biotechnol (1998) 50: 30-33. [7]. Beom Soo Kim. (2000). Production of poly(3-hydroxybutyrate) from inexpensive substrates. Enzyme and Microbial Technology 27 774 777. [8]. Woo Suk Ahn, Si Jae Park & Sang Yup Lee. Production of poly(3- hydroxybutyrate) from whey by cell recyclefed-batch culture of recombinant Escherichia coli. Biotechnology Letters 23: 235240, 2001.

Microorganismo

Tipo de mejora

Acumulacin max de PHB

Productivid ad (g*l -1 *h-1 )

Referencia

Bacillus megaterium Cupriavidus necator

NATIVOS

Thermus thermophilus HB8

Pseudomona hydrogenovora
MODIFICACIN GENTICA

Escherichia coli recombinante Escherichia coli GCSC 6576 Escherichia coli

Adaptacin a nuevo sustrato: lactosuero Adaptacin a nuevo sustrato: lactosuero Optimizacin del medio formulado: concentracin de fosfato. Evaluacin de las fuentes de carbono: glucosa y galactosa Adquiere habilidad de sintetizar PHB (genes de Alcaligenes eutrophus) Recombinado con genes de Ralstonia eutropha Limitacin de oxgeno Sin limitacin de oxgeno Forma de alimentacin al reactor Reciclo de clulas usando memebranas

40% 45% 35.6%

0.1 -

Este trabajo Este trabajo [3]

42% 81%

0.18 2.1

[4] [5]

80%

1.4

[6]

80% 50% 64%

0.48 0.90 1.18

[7]

Methylobacterium sp. ZP24

ESTRATEGIA DE FERMENTACIN

[2]

Escherichia coli GCSC4401

87%

4.6

[8]

Tabla 1. Comparaciones entre las diferentes esferas de mejora de un proceso fermentativo par a la produccin de PHB a partir de sustratos ms econmicos como el lactosuero