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II.
OBJETIVOS
Calcular el rendimiento real de produccin de alcohol mediante fermentacin en base al sustrato utilizado. Comparar dicho rendimiento real con el ideal o estequiometrico, obteniendo la eficiencia del proceso realizado.
III.
FUNDAMENTACION TEORICA
GLUCOLISIS Es una de las rutas ms importante por su frecuencia en los seres vivos. El metabolismo de la glucosa comienza con la gluclisis, (ciclo de Embden Meyerhof) acoplada a la ruta de las pentosas. Durante la gluclisis una molcula de glucosa rinde dos molculas de cido pirvico, es decir una molcula de seis tomos de carbono se escinde en dos de tres. Se puede estructurar en 2 etapas: 1. Pasar de Glucosa a Fructosa-1,6-difosfato. 2. Pasar de Fructosa-1,6-difosfato a dihidroxiacetona y gliceraldehido. La primera fase es una fase de alteracin qumica para dejar la molcula til para la clula.
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La gluclisi es una va que transforma la glucosa en Pyruvato y, a su vez, reduce 2 NAD+ del citosol a NADH y usa 2 ADP para formar 2 ATP. La clula en cuanto puede, transforma otros monosacridos a molculas que estn en la va de la gluclisis.
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Concentracin de etanol resultante: Una de las principales limitaciones del proceso, es la resistencia de las levaduras a las concentraciones de etanol (alcohol) que se llegan a producir durante la fermentacin, algunos microorganismos como el saccharomyces cerevisiae pueden llegar a soportar hasta el 20% de concentracin en volumen. En ingeniera bioqumica estos crecimientos se definen y se modelan con las ecuaciones de crecimiento celular dadas por las ecuaciones de Tessier, Moser y de la ecuacin de Monod. Acidez del substrato: El pH es un factor limitante en el proceso de la fermentacin ya que las levaduras se encuentran afectadas claramente por el ambiente, bien sea alcalino o cido. Por regla general el funcionamiento de las levaduras est en un rango que va aproximadamente desde 3.5 a 5.5 pH. Los procesos industriales procuran mantener los niveles ptimos de acidez durante la fermentacin usualmente mediante el empleo de disoluciones tampn. Los cidos de algunas frutas (cido tartrico, mlico) limitan a veces este proceso. Concentracin de azcares: La concentracin excesiva de hidratos de carbono en forma de monosacridos y disacridos puede frenar la actividad bacteriana. De la misma forma la baja concentracin puede frenar el proceso. Las concentraciones lmite dependen del tipo de azcar as como de la levadura responsable de la fermentacin. Las concentraciones de azcares afectan a los procesos de osmosis dentro de la membrana celular.
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Contacto con el aire: Una intervencin de oxgeno (por mnima que sea) en el proceso lo detiene por completo (es el denominado Efecto Pasteur). Esta es la razn por la que los recipientes fermentadores se cierren hermticamente. La temperatura: El proceso de fermentacin es exotrmico, y las levaduras tienen un rgimen de funcionamiento en unos rangos de temperatura ptimos, se debe entender adems que las levaduras son seres mesfilos. Si se expone cualquier levadura a una temperatura cercana o superior a 55 C por un tiempo de 5 minutos se produce su muerte. La mayora cumple su misin a temperaturas de 30 C. Ritmo de crecimiento de las cepas - Durante la fermentacin las cepas crecen en nmero debido a las condiciones favorables que se presentan en el medio, esto hace que se incremente la concentracin de levaduras.
CICLO DE KREBS.
El ciclo de Krebs se desarrolla en las mitocondrias. El cido pirvico formado durante la gluclisis se convierte en acetil CoA, el cual a travs del ciclo de krebs se transforma en anhdrido carbnico. El paso de cido pirvico a acetil CoA tiene lugar en la matriz mitocondrial y es catalizado por la piruvato deshidrogenasa. El acetil CoA ahora entra en el ciclo de Krebs unindose al cido oxalactico para formar el cido ctrico, por medio de una isomerasa se transforma en isoctrico, el cual por medio de una descarboxilasa da lugar al alfa-cetoglutrico, este paso supone la liberacin de anhdrido carbnico y NADH.
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Figura 2.
El acetil-CoA reacciona con una molcula de oxalacetato (4 carbonos) para formar citrato (6 carbonos), mediante una reaccin de condensacin. A travs de una serie de reacciones el citrato se convierte de nuevo en oxalacetato. El ciclo consume netamente 1 acetil-CoA y produce 2 CO2. Tambin consume 2 NAD+ y 1 FAD, produciendo 3 NADH y 3 H+ y 1 FADH+. El resultado de un ciclo es (por piruvato): 1 GTP, 3 NADH, 1 FADH2, 2CO2 cada molcula de
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Cada molcula de glucosa produce (va gluclisis) dos molculas de piruvato, que a su vez producen dos acetilQuiroz Lozada, Melany del Pilar Alvarado Rivera, Jos Antonio | Ingeniera Agroindustrial
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Figura 3. Proceso de fermentacin En la fermentacin alcohlica, el cido pirvico de la gliclisis pierde un carbono en la forma de bixido de carbono para formas acetaldehdo, el cual es reducido a alcohol etlico, el NADH se convierte en NAD+ (es oxidado). Esta es la fermentacin que ocurre normalmente en las levaduras. Como en la fermentacin del cido lctico, la fermentacin alcohlica permite a la gliclisis continuar y asegurar que el NADH regresa a su estado oxidado (NAD+). La energa neta ganada en la fermentacin es de 2 molculas/glucosa de ATP. En ambas fermentaciones (lctica y alcohlica), todo el NADH producido en la gliclisis es consumido en la fermentacin, por lo tanto no hay produccin neta de NADH, y ningn NADH entra a la CTE y forma ATP. RESPIRACION: La reaccin siguiente: qumica global de la respiracin es la
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IV.
MATERIALES
MATERIALES Y METODOS
Levadura simple Agua destilada Sacarosa INSTRUMENTOS Vasos de precipitacin Balones de vidrio Balanza analtica Potencimetro Refractmetro
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V.
RESULTADOS Y DISCUSION
No todos los datos respectivos fueron tomados pero al ser referenciales no alteran nuestros resultados, los mismos datos que se muestran a continuacin: Tabla 1. Datos obtenidos con soluciones de sacarosa para hallar produccin de alcohol mediante levadura.
DIAS Da 1 (inicial) Da 2 Da 3 Da 4 Da 5 Da 6 Da 7 Da 8 (final) SOLUCION 10 Bx Bx REALES pH PESO (g) 10 5,3 300,6 ----293,3 ----------------286,2 ----285,8 ----285,6 2,8 --285,4 SOLUCION 20 Bx Bx REALES pH PESO (g) 19,7 5,45 300,1 ----292,6 ----------------278,4 ----274,9 ----273,2 7,1 --271,9 10
Los datos en lneas punteadas no se tomaron por ser fin de semana o no hubo instrumento disponible, de los Bx solo se requiri el inicial y final de cada solucin por lo que tenemos los datos necesarios para nuestros clculos.
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Y el de la respiracin seria: Donde lo ideal sera que toda el azcar de la solucin se transforme en alcohol se tiene el rendimiento ideal que seria:
Luego:
El rendimiento real viene de la misma proporcin entre alcohol producido y sacarosa consumida, pero como las soluciones tuvieron ciertos grados Bx al ltimo da, se asume que no todo el azcar fue consumida por lo que se hallo el rendimiento real en base a los siguientes clculos:
Y
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Tambin se tiene:
( ( Luego:
) )
( (
) )
Adems, de la reaccin inicial de glucosa y productos: 180 g glucosa ---- 88 g Dixido de carbono X ---------------- A
Donde nos interesa hallar el valor de X, que seria la glucosa consumida en el proceso de fermentacin y no el Y que seria de respiracin: X = 19.3000195 g de glucosa consumida por la fermentacin.
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Luego, X seria: X = 34.0245649 g de glucosa consumida por la fermentacin. Despus de esto hallamos el rendimiento real del proceso: ( )
10 Bx -> ( )
20 Bx ->
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La temperatura ptima para la formacin de alcohol se estima en el rango de 32 C a 35 C (Navarro et al, 1986). El xito de una buena fermentacin depende de la eficacia del tratamiento preliminar: concentracin del azcar, pH y temperatura ptimos; la adicin de sustancias nutritivas al mosto, contaminacin por otros microorganismos, empleo de un organismo resistente a altas concentraciones de alcohol, mantenimiento de condiciones anaerobias y la inmediata destilacin del producto fermentado (Prescott y Cecil, 1992).
VI.
CONCLUSIONES
Se logr hacer la medida respectiva de grados Brix y masa de las soluciones con las cuales se trabaj obteniendo el rendimiento terico o estequiomtrico, a su vez comparndolo con el rendimiento real basado tambin en calculo, obtenindose una eficiencia de 83.083% y 81.186% entre ambos rendimientos para cada solucin respectivamente. Nuestro rendimiento real se diferencia un tanto con el ideal por lo que se concluye que falto un mayor tiempo de proceso fermentativo para que dicha eficiencia se acerque al 100%.
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altamente
azucarados. Doctoral. de
Complutense Ciencias
Biolgicas,
Departamento
Gmez, S. 2007. Capacidad fermentativa de cepas de Saccharomyces Cerevisiae nativas de la regin productora de mezcal de Durango. XII Congreso Nacional de Biotecnologa y Bioingeniera. Mxico.
Navarro,
A.
1986.
Produccin
de
etanol
por
fermentacin con alta concentracin levaduras. Revista Argentina de Microbiologa 18 (1): 7-11.
capacidad fermentativa en la produccin de etanol a partir de pulpa de excedentes de pltano Musa (AAB Simmonds) en el Revista 40-47. departamento de de Crdoba, Colombia. Universidad Colombiana Biotecnologa.
Prescott
Cate,
Samuel,
Cecil
Gordon,
Dunn.
1992.
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Ya hemos estudiado la capacidad fermentativa de la levadura, mediante clculos estequiometricos de lo que se debera producir, no siendo este rendimiento tan alto por diversos factores, en la presente prctica se trabaj con una de las soluciones fermentadas mediante destilacin y densimetra de tal forma que se halle la cantidad de alcohol producido en dicha solucin, a su vez que podamos comparar esta cantidad con lo calculado en la primera practica para ver que tanto se asemejan nuestros resultados.
II.
OBJETIVOS
Determinar mediante densimetra el contenido alcohlico de la solucin fermentada, a su vez que se tome como referencia la temperatura de la misma. Determinar mediante el mismo mtodo el contenido alcohlico del destilado de la muestra, apoyndose en tablas hidroalcoholicas. Comparar resultados con los de la prctica anterior.
III.
MATERIALES
MATERIALES Y METODOS
inicial
fermentada
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METODOLOGIA DE TRABAJO De la solucin de sacarosa fermentada se hall mediante tablas hidroalcoholicas, la cantidad de alcohol presente en dicho mosto mediante densidad y temperatura, adems de tomar el dato de grados Gay Lussac mediante el uso del alcoholmetro. Esta solucin se pas al equipo de destilacin, donde se obtuvo alcohol, luego se enraso en una fiola a 100 ml de esta solucin se volvi a tomar dichos datos, comparando con los valores de la tabla hidroalcoholica. Adems de comparar dicha cantidad con el alcohol producido estequiometricamente de la prctica anterior.
IV.
RESULTADOS Y DISCUSION
Los datos con los que se trabaj fueron los siguientes: Tabla 1. Datos bsicos de mosto utilizado y destilado para determinar contenido alcohlico
Como podemos observar, lo que nos muestra el alcoholmetro es un valor muy alto para lo que nos seala la tabla, estos valores se hallaron mediante interpolacin utilizando como base la temperatura y densidad de la solucin (Anexo 1). De aqu notamos que hay una diferencia profunda entre dicho rendimiento obtenido mediante destilacin y el obtenido
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Luego podemos inferir que la diferencia de resultados entre el alcoholmetro y la tabla se debe a que la solucin no es una muestra especfica de agua y alcohol si tambin presenta otras sustancias orgnicas las cuales hacen que se obtenga resultados errneos, lo cual hizo aumentar la densidad que no es baja, como es la caracterstica del alcohol, de aqu que haya equilibrio entre dicha densidad y la del azcar hacindola parecida a la del agua, por tanto al comparar estas densidades con la tablas nos arrojan contenidos alcohlicos diferentes a los encontrados en los clculos estequiometricos de la prctica anterior
V.
CONCLUSIONES
Se encontraron valores inferiores a los encontrados por el mtodo estequiometrico. Se pudo observar que hubo diferencia en los clculos de contenido alcohlico.
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